本発明は、とりわけ、少なくとも１種類の目的薬剤（例えば、免疫抑制剤）に免疫特異的に結合する抗体、かかる抗体を製造する方法、及び該抗体を用いた免疫測定法に関する。さらに、本発明は、診断免疫測定用抗体を選択する方法、及び診断免疫測定用抗原を選択する方法にも関する。本発明は、さらに、活性親薬物の主要な代謝産物の１種類以上の存在下における活性親薬物の抗体認識の改善にも関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体が少なくとも１種類の選択希釈剤に曝露されなかったとき、又は該選択希釈剤と一緒にインキュベートされなかったときに、１．９×１０^−１１Ｍ未満の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で免疫抑制剤に特異的に結合する単離抗体。
【請求項２】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
抗体が少なくとも１種類の選択希釈剤と一緒にインキュベートされるとき、該選択希釈剤に曝露されるとき、又は該選択希釈剤の存在下にあるときに、１．５２×１０^−１０Ｍ未満の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で免疫抑制剤に特異的に結合する単離抗体。
【請求項４】
選択希釈剤が、緩衝剤、塩、洗浄剤、結合競合剤、溶媒又はこれらの組合せを含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項３に記載の抗体。
【請求項６】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４３６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ ２−５７７。
【請求項７】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４３６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ ２−５７７から抽出されたＤＮＡから作製された抗体。
【請求項８】
タクロリムス１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ ２−５７７と命名された、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４３６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系によって産生されるキメラ抗体又はそのタクロリムス結合断片。
【請求項９】
タクロリムス１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ １−１１５７と命名された、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４４６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系。
【請求項１０】
タクロリムス１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ １−１１５７と命名された、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４４６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系から抽出されたＤＮＡから作製された抗体。
【請求項１１】
タクロリムス１−６０−４６ ＡＭ２ ＣＨＯ １−１１５７と命名された、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７４４６のチャイニーズハムスター卵巣細胞系によって産生されるキメラ抗体又はそのタクロリムス結合断片。
【請求項１２】
可変重ドメイン及び可変軽ドメインを有し、可変重ドメインは、重鎖相補性決定領域（「ＣＤＲ」）１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含み、可変軽ドメインは軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、
（ａ）重鎖ＣＤＲ１は、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ（配列番号２）のアミノ酸配列を有し、
（ｂ）重鎖ＣＤＲ２は、Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｘａａ_１−Ｘａａ_２−Ｘａａ_３−Ｐｈｅ（配列番号３３）の式のアミノ酸配列を有し
（式中、Ｘａａ_１は、トレオニン（Ｔｈｒ）、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_２は、チロシン（Ｔｙｒ）及びトリプトファン（Ｔｒｐ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_３は、トレオニン（Ｔｈｒ）及びバリン（Ｖａｌ）からなる群から選択される。）、
（ｃ）重鎖ＣＤＲ３は、Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（配列番号６）のアミノ酸配列を有し、
（ｄ）軽鎖ＣＤＲ１は、Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｘａａ_４−Ｘａａ_５−Ｘａａ_６−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（配列番号３４）の式のアミノ酸配列を有し
（式中、Ｘａａ_４は、グルタミン（Ｇｌｎ）、アラニン（Ａｌａ）及びグリシン（Ｇｌｙ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_５は、セリン（Ｓｅｒ）及びグリシン（Ｇｌｙ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_６は、イソロイシン（Ｉｌｅ）及びロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択される。）、
（ｅ）軽鎖ＣＤＲ２は、Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ（配列番号１１）の式のアミノ酸配列を有し、
（ｆ）軽鎖ＣＤＲ３は、Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｘａａ_７−Ｘａａ_８−Ｘａａ_９−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号３５）の式のアミノ酸配列を有し
（式中、Ｘａａ_７は、セリン（Ｓｅｒ）及びグリシン（Ｇｌｙ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_８は、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、バリン（Ｖａｌ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、リジン（Ｌｙｓ）及びセリン（Ｓｅｒ）からなる群から選択され、
Ｘａａ_９は、バリン（Ｖａｌ）、アラニン（Ａｌａ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）及びセリン（Ｓｅｒ）からなる群から選択される。）、
ただし、重鎖ＣＤＲ２においてＸａａ_１がＴｈｒであり、Ｘａａ_２がＴｙｒであり、Ｘａａ_３がＴｈｒであり、軽鎖ＣＤＲ１においてＸａａ_４がＧｌｎであり、Ｘａａ_５がＳｅｒであり、Ｘａａ_６がＩｌｅである場合、軽鎖ＣＤＲ３においてＸａａ_７がＳｅｒであり、Ｘａａ_８がＨｉｓである場合にはＸａａ_９はＶａｌ以外であり、又はＸａａ_７がＳｅｒであり、Ｘａａ_９がＶａｌである場合にはＸａａ_８はＨｉｓ以外であり、又はＸａａ_８がＨｉｓであり、Ｘａａ_９がＶａｌである場合にはＸａａ_７はＳｅｒ以外である、
タクロリムスに特異的に結合する単離抗体。
【請求項１３】
請求項１、３、７、８、１０、１１又は１２の抗体を含む、タクロリムス用診断免疫測定法。
【請求項１４】
免疫抑制剤に特異的に結合する単一の抗体を含む、請求項１３に記載の免疫測定法。
【請求項１５】
タクロリムスに対する追加の特異的結合パートナーを更に含む、請求項１３に記載の免疫測定法。
【請求項１６】
ａ）少なくとも１種類の選択希釈剤の存在下で、少なくとも１種類の抗体を試料と接触させる段階（該試料は、該抗体が結合すると考えられる目的エピトープを含み、該抗体は、バイオディスプレイ形式で存在する。）、
ｂ）抗体の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、分離速度定数（ｋ_ｄ）、会合速度定数（ｋ_ａ）又は機能活性を求める段階、及び
ｃ）段階ｂ）で求めた平衡解離定数、解離速度定数、会合速度定数又は機能活性に基づいて抗体を選択する段階
を含む、抗体が目的エピトープに結合する、診断免疫測定用抗体を選択する方法。
【請求項１７】
選択希釈剤が、緩衝剤、塩、洗浄剤、結合競合剤、溶媒又はこれらの組合せを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
試料が免疫抑制剤を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ａ）少なくとも１種類の選択希釈剤の存在下で、少なくとも１種類の抗体をインキュベートする段階（該抗体はバイオディスプレイ形式で存在する。）、
ｂ）前記抗体を試料と接触させる段階（該試料は、該抗体が結合すると考えられる目的エピトープを含む。）、
ｃ）抗体の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、分離速度定数（ｋ_ｄ）、会合速度定数（ｋ_ａ）又は機能活性を求める段階、及び
ｄ）段階ｃ）で求めた平衡解離定数、分離速度定数、会合速度定数又は機能活性に基づいて抗体を選択する段階
を含む、抗体が目的エピトープに結合する、診断免疫測定用抗体を選択する方法。
【請求項２１】
選択希釈剤が、緩衝剤、塩、洗浄剤、結合競合剤、溶媒又はこれらの組合せを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
試験試料が免疫抑制剤を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ａ）少なくとも１種類の選択希釈剤の存在下で、特異的結合パートナーを試料と接触させる段階（該試料は目的エピトープを含み、特異的結合パートナーは目的エピトープに結合し、該特異的結合パートナーはバイオディスプレイ形式で存在する。）、
ｂ）特異的結合パートナーの平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、分離速度定数（ｋ_ｄ）、会合速度定数（ｋ_ａ）又は機能活性を求める段階、及び
ｃ）段階ｂ）で求めた特異的結合パートナーの平衡解離定数、解離速度定数、会合速度定数又は機能活性に基づいて特異的結合パートナーを選択する段階
を含む、診断免疫測定用試験試料中の目的分析物を検出するための特異的結合パートナーを選択する方法。
【請求項２５】
選択希釈剤が、緩衝剤、塩、洗浄剤、結合競合剤、溶媒又はこれらの組合せを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
分析物が免疫抑制剤である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）酵母細胞の表面に存在する抗体を含む酵母ディスプレイライブラリーを得る段階、
（ｂ）結合競合剤の存在下で、前記酵母細胞を薬剤と接触させる段階、
（ｃ）前記結合競合剤の存在下で前記薬剤との結合を示す抗体が表面に表示された酵母細胞を特定する段階（かかる結合は、該薬剤に対する特異性が改善されたことを示す。）
を含む、酵母ディスプレイを用いて、薬剤に対する特異性が改善された抗体をスクリーニングする方法。
【請求項２９】
前記結合競合剤が過剰に存在する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬剤が免疫抑制剤を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記結合競合剤が前記免疫抑制剤の代謝産物である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫抑制剤が、シクロスポリン及びタクロリムスからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記代謝産物が、Ｍ−Ｉ、Ｍ−ＩＩ、Ｍ−ＩＩＩ、Ｍ１、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１３、Ｍ１７、Ｍ１８ Ｍ２１及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記代謝産物がＭ１７及びＭ１を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）バイオディスプレイ形式で存在する抗体を含むライブラリーを得る段階（該抗体は変異を含む。）、
（ｂ）少なくとも１種類の選択希釈剤の存在下で、前記抗体を、エピトープを含む試料と接触させる段階、及び
（ｃ）前記選択希釈剤の存在下で、変異を含まない類似の抗体の解離速度よりも低い解離速度を示す、前記バイオディスプレイ形式で存在する抗体を特定する段階（かかる低解離速度は、前記エピトープに対する親和性が改善されたことを示す。）
を含む、目的エピトープに対する親和性が改善された抗体をスクリーニングする方法。
【請求項３６】
前記抗体を前記試料及び前記選択希釈剤と接触させる段階が同時に、又は逐次的に実施される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
選択希釈剤が、緩衝剤、塩、洗浄剤、結合競合剤、溶媒又はこれらの組合せを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
試料が免疫抑制剤を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの標的、インターロイキン２α鎖遮断薬、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、コルチコステロイド又は免疫抑制代謝拮抗剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
（ａ）バイオディスプレイ形式で存在する特異的結合パートナーを含むライブラリーを得る段階（該特異的結合パートナーは変異を含む。）、
（ｂ）少なくとも１種類の選択希釈剤の存在下で、前記特異的結合パートナーを、エピトープを含む試料と接触させる段階、及び
（ｃ）前記選択希釈剤の存在下で、変異を含まない類似の特異的結合パートナーの解離速度よりも低い解離速度を示す、前記バイオディスプレイ形式で存在する特異的結合パートナーを特定する段階（かかる低解離速度は、前記エピトープに対する親和性が改善されたことを示す。）
を含む、目的エピトープに対する親和性が改善された特異的結合パートナーをスクリーニングする方法。
【請求項４１】
前記抗体を前記試料及び前記選択希釈剤と接触させる段階が同時に、又は逐次的に実施される、請求項４０に記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【公表番号】特表２００９−５３４４６６（Ｐ２００９−５３４４６６Ａ）
【公表日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０７７８７（Ｐ２００９−５０７７８７）
【出願日】平成１９年４月２４日（２００７．４．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１００７６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５４５１７
【国際公開日】平成２０年５月８日（２００８．５．８）
【出願人】（３９１００８７８８）アボット・ラボラトリーズ (650)
【氏名又は名称原語表記】ＡＢＢＯＴＴ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】