出血の治療のための組成物および方法
患者における１つ以上の出血性または潜在的に出血性の血管を診断する工程と、当該患者に、血管閉塞化合物を含む治療有効量の組成物を約０．１％〜約４５％の濃度で投与する工程と、を含む出血の治療方法が提供される。当該血管閉塞化合物は、親水特性を有するポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）を含んでいてもよい。当該組成物はまた、当該血管閉塞剤とイオン結合を形成できる１つ以上の活性剤（血流修飾因子等）を含んでいてもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は出血の治療のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）（技術的に出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）または出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｎｇ）として知られる）は、循環系からの血液の損失である。出血は、内的（血液が身体内の血管から漏れる）、または外的（血液が自然な開口部または皮膚中の裂け目から漏れる）のいずれかで生じ得る。出血は、身体内の血管が裂け、または漏れた場合に生じる。これは、身体的な外傷または非外傷性の理由（破裂動脈瘤等）から生じ得る。抗凝固療法治療、および血液凝固を伴う疾患は、出血が生じるリスクを高める可能性がある。破裂動脈瘤は、ショックまたは死さえももたらし得る、重度の内出血の原因になる可能性がある。現在の治療の選択肢は、動脈瘤を修復する手術（可能であれば）、床上安静および関連する症候を緩和する薬物療法（鎮痛剤および抗けいれん薬等）である。破裂動脈瘤を経験した全人口の約半分は、１日以内または３ヶ月以内のいずれかに死亡する。生存者のうち約５０％には、通常、生涯にわたる身体障害が残る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従って、当該技術分野において、出血を制御し、有害な事象のリスクを減少するための方法についてのニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
患者における１つ以上の出血を診断する工程と、当該患者に、血管閉塞化合物を含む治療有効量の組成物を、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％の濃度で投与する工程と、を含む出血の治療方法が提供される。局所投与のための組成物中、当該血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％であってもよく、体積あたり約１質量％〜１０質量％であってもよい。非経口投与のために、当該濃度は、体積あたり約１０質量％〜約４５質量％であってもよく、ある実施態様では、体積あたり約２０質量％〜約４０質量％であってもよい。当該血管閉塞化合物は、親水特性を有するポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）を含んでいてもよい。
【０００５】
血管閉塞化合物に加えて、当該組成物は、血流を変化させることができる１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．１質量％〜約１０質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．５質量％〜約５質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。
【０００６】
治療有効量は、患者の体重に基づいて算出できる。一般的に、投与される本発明の組成物の治療有効量は、患者の体重に基づき、患者の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｌ〜２０ｍｌの組成物の割合を使用して見積もってもよい。出血が続く場合、反復用量を投与してもよい。局所投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．０５〜約５ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約５ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約１ｍｌの組成物の範囲の低用量が要求される。非経口的に投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約２０ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約１０ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約１〜約８ｍｌの組成物の範囲の高用量が要求される可能性がある。少なくとも１つの治療有効量の本発明の組成物は、血管閉塞化合物の半減期またはそれ以下の間に投与してもよい。
【０００７】
様々な実施態様のさらなる特徴および利点について、一部は下記に記載され、一部は当該記載から明らかであるか、または様々な実施態様の実施によって知ることができる。様々な実施態様の目的および他の利点は、本願明細書および請求項で具体的に記載された要素および組み合わせによって認識でき、かつ、実現できる。
【０００８】
部分的に、実施態様の他の態様、特徴、利益および利点は、下記の記載、添付の請求項および添付の図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１ａ〜１ｆは、損傷時に投与された際の、１週間にわたる出血部位内のビオチン標識されたＰＥＧの蓄積および保持を示す。
【図２】図２ａ〜２ｆは、損傷時の異なる方法での投与後の出血部位内のビオチン標識されたＰＥＧの蓄積を示す。
【図３ａ】様々なＰＥＧ組成物の投与後の、出血部位内のＰＥＧの蓄積のデータを示す。
【図３ｂ】様々なＰＥＧ組成物の投与後の、出血部位内のＰＥＧの蓄積のデータを示す。
【図４】生理食塩水、ＰＥＧまたはＰＥＧ溶液中のマグネシウムの投与後の出血面積の範囲を示すデータを表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
図面は原寸で描かれていないことが理解されるはずである。さらに、図面中の物体間の関係は原寸通りではない可能性があり、実際はサイズについて逆の関係性を有する可能性がある。図面は、示された各物体の構造についての理解および明確さをもたらすことを意図しており、従って、いくつかの特徴は、構造についての特定の特徴を示すために誇張される可能性がある。
【００１１】
本願明細書および添付の請求項について、別段の記載がない限り、本願明細書および請求項において使用される成分の量、物質の割合または比率、反応条件を表わす全ての数および他の数値は、用語「約」によって、全ての例において修飾されるものとして理解されるはずである。従って、別段の記載がない限り、本願明細書および請求項に記載された数値パラメータは、本発明によって得ようとする所望の特性に応じて変動する可能性がある近似値である。最低限でも、そして、請求項の範囲の均討論の適用を制限することを意図することなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字の値に基づいて、通常の丸め方を適用することによって解釈されなければならない。
【００１２】
本発明の広範な範囲を示す数値範囲およびパラメータが近似値であるかに関わらず、特定の例に記載された数値は可能な限り正確に報告される。しかし、全ての数値は、各試験の測定値において認められる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含む。さらに、本願明細書に開示される全ての範囲は、これらに包含されるいずれか、および全ての部分的な範囲を含むものと理解されるはずである。例えば、「１〜１０」という範囲は、最小値１と最大値１０との間（およびこれらを含む）のうちのいずれか、および全ての部分的な範囲、すなわち、１に等しいか、もしくはこれよりも大きい最小値、および１０に等しいか、またはそれ未満の最大値を有するいずれか、および全ての部分的な範囲（例えば、５．５〜１０）を含む。
【００１３】
本願明細書および添付の請求項において使用される場合、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」には、１つの参照対象にはっきりと明示して制限されていない限り、複数形の参照対象が含まれることに注意されたい。
【００１４】
出血の治療方法が提供される。このような方法は、患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、当該患者に、血管閉塞化合物を含む治療有効量の組成物を投与する工程と、を含む。
【００１５】
用語「治療する」または「治療」は、１つ以上の薬剤を、患者（ヒトまたはその他）に、疾病の兆候または症候を緩和するために投与する工程を含んでもよい手順を実行することを指す。「治療する」または「治療」は、兆候または症候の完全な軽減を要求せず、治癒を要求せず、患者に対するマージナル効果のみを有する手順を特に含む。
【００１６】
用語「治療有効量」は、患者に投与した場合に、患者の症状の改善をもたらすのに十分な本発明の組成物の量を指す。改善は治癒を意味するのではなく、患者の症状におけるマージナルな変化のみ含んでもよい。これはまた、症状を阻害する、またはその進行を停止もしくは遅延させる活性剤の量を含んでいてもよい。
【００１７】
治療有効量は、患者の体重に基づいて算出できる。一般的に、投与される本発明の組成物の治療有効量は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｌ〜２０ｍｌの組成物の割合を使用して、患者の体重に基づいて見積もってもよい。出血が続く場合、反復用量を投与してもよい。局所投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．０５〜約５ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約５ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約１ｍｌの組成物の範囲の低用量が要求される。非経口的に投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約２０ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５および約１０ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約１〜約８ｍｌの組成物の範囲の高用量が要求されてもよい。
【００１８】
出血は、機械的、電気的、生物学的、または化学的な損傷によって誘導される可能性がある。出血はまた、変性状態（動脈瘤の形成等）に由来していてもよい。当該技術分野において知られ、使用される全ての診断方法を、１つ以上の出血性血管の存在を特定するために利用してもよい。出血のリスクがある血管はまた、危険因子（動脈瘤、腹部外傷、軟組織、腱、靱帯または骨の外傷、または腫瘍等）の探索によって特定してもよい。適した診断方法としては、血液試験、血圧試験、ＥＫＧ、または医用イメージング試験（Ｘ線、超音波、ＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
本発明の組成物中の血管閉塞化合物として使用するのに有用な化合物は、下記の基準を満たしてもよい；（１）親水特性を有する、（２）出血部位で蓄積し、血管封着特性を有する、ならびに（３）出血部位で少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２４時間維持される。さらに、非経口投与のために、適した血管閉塞化合物は、血管が無傷である場合に迅速に排泄され得る。
【００２０】
さらに、血管閉塞剤は、特定の条件下で細胞膜を封着または融合することができてもよい。本発明の組成物について、血管閉塞化合物の濃度は、血管閉塞化合物が、大きな膜融合効果を示すことなく膜封着効果をもたらすように選択されてもよい。例えば、分子量３３５０〜８０００Ｄａを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、体積あたり０．１質量％〜３０質量％の濃度で顕著な細胞膜封着および出血の減少を示し、体積あたり４５質量％超の濃度で顕著な膜融合特性を示す。従って、ある実施態様では、血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり４５質量％未満である。
【００２１】
この応用のために、様々な組成物は、出血部位で保持されるが血管が無傷である場合は全身循環から迅速に排泄され得る血管閉塞化合物を含む。血管閉塞化合物の全除去の速度、または半減期は、化合物の分子量および親水特性に関連する。通常は、同一の分子量については、親水性ポリマーは、より疎水性のポリマーよりも半減期が短い。さらに、親水特性を有するポリマーの半減期は、その分子量と直接的に関連し、より高い分子量のポリマーは、より長い半減期を有する。ほとんど変化せずに尿から排泄され得る親水性ポリマーは、排泄の前に何らかの変換が要求されるポリマーよりも、半減期が短い。例えば、糸球体濾過のカットオフ値は２４，０００Ｄａであるため、２４，０００Ｄａよりも重い全てのポリマーは、排泄され得る前に、ある程度まで分解される必要があり、これによってポリマーの半減期が延びる。ある実施態様では、当該血管閉塞化合物は、２時間未満、より好ましくは１時間未満の半減期を有する。このような化合物は、２４，０００Ｄａ未満の分子量を有する親水特性を有するポリマーから選択されてもよい。
【００２２】
当該血管閉塞化合物は、親水性または両親媒性ポリマーから選択されてもよい。本願明細書で使用される用語「親水性ポリマー」は、水分子への親和性や誘引を示し、鎖状および／または分岐状の構造において互いに結合する同一のサブユニット（「モノマー」）についての複数の例を含む全ての高分子を意味する。親水性ポリマー成分は、合成または自然に存在する親水性ポリマーであってもよい。
【００２３】
自然に存在する親水性の剤としては下記が挙げられるが、これらに限定されない。コラーゲンおよびその誘導体、フィブロネクチン、アルブミン、グロブリン、フィブリノーゲンおよびフィブリン等のタンパク質（コラーゲンが特に好ましい）；ポリマンヌロン酸およびポリガラクツロン酸等のカルボキシル化ポリサッカライド；アミノ化ポリサッカライド、特にグリコサミノグリカン、例えば、ヒアルロン酸、キチン、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｂ、またはＣ、硫酸ケラチン、ケラタン硫酸およびヘパリン；メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウムおよび活性化ポリサッカライド（デキストラン等）およびデンプン誘導体。
【００２４】
有用な合成親水性化合物としては下記が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアルキレンオキシド、特にポリエチレングリコールおよびポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）コポリマー（ブロックコポリマーおよびランダムコポリマー等）；グリセロール、ポリグリセロール（特に高度分岐ポリグリセロール）、ポリ（メタクリル酸ポリエチレングリコール）、ポリ（メタクリル酸グリセロール）、ポリ（アクリル酸グリセロール）、ポリ（アクリル酸ポリエチレングリコール）、ポリ（アルキルオキサゾリン）、ホスホリルコリンポリマー、ポリメタクリル酸ナトリウムおよびポリメタクリル酸カリウム、ポリアクリル酸ナトリウムおよびポリアクリル酸カリウム、ポリメタクリル酸およびポリアクリル酸、１つ以上のポリアルキレンオキシドで置換されたプロピレングリコールおよびトリメチレングリコール（例えば、モノ−、ジ−およびトリ−ポリオキシエチル化グリセロール、モノ−およびジ−ポリオキシエチル化プロピレングリコール、ならびにモノ−およびジ−ポリオキシエチル化トリメチレングリコール）等のポリオール；ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース；アクリル酸ポリマーならびにその類似体およびコポリマー（例えば、ポリアクリル酸それ自体、ポリメタクリル酸、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（アクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（メタクリル酸メチルアルキルスルホキシド）、ポリ（アクリル酸メチルアルキルスルホキシド）および上述のうちいずれかのコポリマー）、ならびに／またはさらなるアクリレート化学種（アクリル酸アミノエチル等）を含むもの、ならびにモノ−２−（アクリルオキシ）−エチルコハク酸エステル；ポリマレイン酸；ポリアクリルアミドそれ自体、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（ジメチルアクリルアミド）、およびポリ（Ｎ−イソプロピル−アクリルアミド）等のポリ（アクリルアミド）；ポリ（ビニルアルコール）等のポリ（オレフィンアルコール）；ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（Ｎ−ビニルカプロラクタム）およびそのコポリマー等のポリ（Ｎ−ビニルラクタム）；ポリ（メチルオキサゾリン）およびポリ（エチルオキサゾリン）等のポリオキサゾリン；およびポリビニルアミン。
【００２５】
本願明細書で使用される用語「両親媒性ポリマー」とは、極性部分構造および非極性部分構造を生じさせる電荷の局所的な量の変化を有する全ての高分子を指す。極性部分構造は、他の極性分子構造（水分子等）への親和性または誘引（親水性）を示す一方で、非極性部分構造は、非極性分子（例えば、脂質、油、グリース、脂肪等）への親和性または誘引（親油性）を示す。適した両親媒性ポリマーとしては、ポロキサマー Ｐ−１８８、ポリエーテルエステルコポリマー（ポリエチレングリコールおよびポリブチレンテレフタラートのコポリマー、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレンオキシドのコポリマー、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのブロックコポリマー等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
両親媒性ポリマーはまた、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）として知られるポリエーテルアミンのファミリーを含む。これらのポリエーテルアミンは、ポリエーテル骨格の末端に結合した一級アミノ基を含み、この骨格は典型的にプロピレンオキシド（ＰＯ）、エチレンオキシド（ＥＯ）、またはその混合物に基づく。Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）ファミリーは、モノアミン、ジアミン、トリアミンおよび二級アミンを含む。Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）は、Ｈｕｎｔｓｍａｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（本社；テキサス州、ザ ウッドランド）から購入できる。
【００２７】
通常は、本発明の組成物中の血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％、すなわち１００ｍｌの溶液あたり約０．１〜約４５ｇの血管閉塞化合物に及んでもよい。局所投与のための組成物中、血管閉塞化合物の濃度は、好ましくは体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％、より好ましくは体積あたり約１質量％〜１０質量％である。非経口投与のために調製される組成物中では、当該濃度は、体積あたり約１０質量％〜約４５質量％または体積あたり約２０質量％〜約４０質量％であってもよい。
【００２８】
ある実施態様では、当該血管閉塞剤は、ポリエチレングリコールを含んでいてもよい。本発明の組成物中の血管閉塞化合物としての使用のためには、分子量が約１０００〜２４，０００Ｄａ、より好ましくは約１０００〜８０００Ｄａ、最も好ましくは約２，０００Ｄａ〜約４，０００ＤａであるＰＥＧが適している。異なる分子量のＰＥＧは、例えば、シグマアルドリッチ（米国、ミズーリ州、セントルイス）から得てもよい。
【００２９】
当該血管閉塞化合物に加えて、本発明の組成物は、１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。本願明細書で使用される用語「活性剤」は、血流修飾活性を有し、かつ／または血管閉塞化合物の効果を改善する化学元素または化合物を指す。ある実施態様では、当該活性剤は、失血性疾患に関連する兆候または症候を軽減する可能性がある。適した活性剤は、血流修飾剤（例えば、マグネシウム、カリウム、一酸化窒素、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、副甲状腺ホルモン、ブラジキニン分子およびそれに由来する断片等）から選択されてもよい。本発明の組成物中のこのような活性剤の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％、より好ましくは体積あたり０．１質量％〜１０質量％に及んでもよい。
【００３０】
ある実施態様では、本発明の組成物は、血管閉塞化合物および少なくとも１つの活性剤を含み、当該血管閉塞化合物と、当該少なくとも１つの活性剤との間の相互作用は、主にイオン性のものである。例えば、親水性ポリマーＰＥＧ全体は非イオン性であるが、ＰＥＧ鎖上のエーテル酸素上の電子の非共有電子対は、ポリマーに陰イオン性の特質を与え、血流修飾因子活性を有する金属イオン（マグネシウム等）に結合できる。
【００３１】
１つの実施態様では、当該活性剤は、マグネシウム化合物を含む。様々なマグネシウム塩が、マグネシウム化合物の供給源をもたらし得る。適したマグネシウム塩としては、硫酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、塩化マグネシウム、酸化マグネシウムおよび水酸化マグネシウムが挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は、例えば、シグマアルドリッチ（米国、ミズーリ州、セントルイス）から容易に購入できる。
【００３２】
本発明の組成物はまた、例えば、疾患修飾剤、神経伝達物質、神経ペプチドおよび神経受容体調節因子、抗炎症性および免疫調節剤、抗酸化剤、抗アポトーシス剤；向知性薬および成長剤、脂質の形成および輸送の調節因子、血流および血管形成の調節因子、鎮痛剤、ステロイド系抗炎症剤（副腎皮質ステロイド等）、非ステロイド系抗炎症剤（サリチル酸エステル等）、ＣＯＸ−２阻害剤、ＴＮＦα阻害剤、オピエートおよびモルヒネ様作用薬等の幅広い分類から選択される添加成分を含んでいてもよい。
【００３３】
当該血管閉塞化合物および活性剤に加えて、本発明の組成物は、１つ以上の薬理学的に許容できる担体を含んでいてもよい。本発明の組成物は、賦形剤（例えば、溶媒、結合剤、フィラー、崩壊剤、潤滑剤、懸濁剤、界面活性剤、増粘剤、緩衝剤、抗菌剤等）を含んでいてもよい。多くの異なる薬理学的に許容できる担体および賦形剤が知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；第２１版（２００５年５月１日）に開示されている。
【００３４】
非限定的な例として、米国特許出願第１１／４１８，１５３号明細書および米国特許出願第１１／４１８，１５２号明細書（これらは参照により、その全体が本願明細書に組み入れられる）に開示された組成物を使用してもよい。
【００３５】
ある実施態様では、本発明の組成物は、溶液、注射前に溶液に適した固形形態として調製してもよい。本発明の組成物は、非経口的に、好ましくは静脈内投与によって投与されてもよい。静脈内投与は、全身循環へのより直接的な、従って、より早いアクセスを与えるため、静脈内投与は、他の投与方法（腹腔内注射等）に対して、出血部位で血管閉塞剤の高い蓄積をもたらし得ることが見出された。あるいは、本発明の組成物は、血管の破裂部位に局所的に送達されてもよく、ある例では、送達は、ポンプまたは拍動装置等の装置によって補助されてもよい。
【００３６】
上述の通り、血管閉塞化合物としての使用に好ましい化合物は出血部位に蓄積し、残りの系からは迅速に除去される。このようなポリマーは、身体内での半減期が短い傾向があるため、患者に、迅速に投与する必要がある。さらに具体的には、１回分の本発明の組成物を、患者に、血管閉塞化合物の半減期またはそれ以下の間に投与することが望ましい。例えば、分子量１０００〜６０００Ｄａを有するＰＥＧの半減期は約３０〜９０分間であり、従って、このようなＰＥＧを含む１回分の本発明の組成物を９０分間以内、より好ましくは６０分間以内に投与することが望ましい。
【００３７】
以上で本発明の全般について記載した。これについては、例証によって与えられ、特段の記載がない限り本発明を制限する意図ではない下記の実施例への参照によってさらに容易に理解できるであろう。
【実施例】
【００３８】
＜方法および試験＞
オスのスプラーグドーリーラットを麻酔し、定位フレーム上に腹臥位で置いた。Ｔ９／１０椎弓切除を行い、オハイオ州立大学のインパクターで、１．５ｍｍの置換で動物を挫傷させた。
【００３９】
損傷後すぐに、生理食塩水、生理食塩水中の０．８％ マグネシウム、２０％または３０％のＰＥＧ３３５０中の０．８％ マグネシウム、ＰＥＧ３０００−ビオチン製剤中のＰＥＧ−ビオチンまたはマグネシウムを、静脈内注射（５〜７ｍｌ／ｋｇ）によって、１０〜３０分間かけて投与した。注射毎に６時間の間隔をもうけ、動物に１〜５回の注射を行った。注射バイアルの中身は、注射および分析の両方を行う研究者に知らせなかった。注射後、様々な時点で、組織を抽出し、組織学的評価（図１、２）、生体分析（図３）または機能分析（図４）のために処理した。
【００４０】
図１および２に示された組織学分析について、索を所定の時点で回収し、２０μｍの厚さに水平に切り、ビオチン分子（本例ではＰＥＧ−ビオチン）が存在すると、アビジン−ペルオキシダーゼ複合体とペルオキシダーゼ基質ＤＡＢ標識との反応が褐色を呈するＡＢＣ比色分析キットを使用して処理した。
【００４１】
図３に示された生体分析のために、出血部位を含む（または含まない）組織を回収した。ラット血漿中のＰＥＧの組織濃度を、検証された高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法を使用して、陽イオンエレクトロスプレーイオン化法で測定した。組織ホモジネートを遠心分離した後、各試料からの上清画分を、分析前に、エバポレーションによって濃縮し、移動層Ａで再構成した。試料をＴｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ カラムを使用して、ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析で分析した。ＰＥＧのピーク面積および較正標準の理論上の濃度は、原点を除いて二次関数に合わせた。
【００４２】
下記に、損傷部位での出血の程度についての機能分析または評価の方法を記載する。損傷から７２時間後、動物を断頭し、出血部位を中心に脊髄の１５ｍｍの分節を回収し、凍結し、厚さ２０μｍで低温切片を作成した。索あたり１１切片（損傷の中央および吻側および尾側から４００μｍ、８００μｍ、１６００μｍ、２８００μｍおよび３２００μｍの区分）を分析のために選択した。スライドにカバースリップを載せ、５倍の対物レンズで、ライカの光学顕微鏡を使用して、脊髄のカラー画像を得た。赤のチャネル（組織への出血を示す）をグレースケールの画像上でキャプチャし、強度の閾値を全ての画像にわたって２３０に設定し、全体的に一貫させた。脊髄を、下部で捉えられた硬膜および血液を除いて、緑の輪で囲った。赤で表わされ、かつ緑の輪で囲われた重複した信号を、Ｓｉｇｍａ Ｓｃａｎ中のツールバーからのＩｍａｇｅについてＯｖｅｒｌａｙ Ｍａｔｈ機能を使用して、青でハイライトし、青の信号の全面積を出血の範囲として測定した。
【００４３】
＜結果＞
（１）単回の非経口投与後、ＰＥＧは出血部位に蓄積し、優先的に保持される。
図１について、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の非経口投与後のＤＡＢ組織染色は、ビオチン標識されたＰＥＧが損傷部位の上部または下部の脊髄領域における目に見える蓄積はなしに、出血部位に優先的に蓄積することを示した。ＰＥＧは、出血部位で、投与後２時間以内に検出でき（図１ａ）、ＰＥＧシグナルは投与後２４時間にわたって増加し（図１ｂ）、投与後７日までに大半が消失した（図１ｃ）。非特異的なＤＡＢ染色は、生理食塩水で処理された動物の脊髄においては見られなかった（図１ｄ〜ｆ）。
【００４４】
（２）出血部位でのＰＥＧ蓄積は、投与方法によって影響される。
図２について、ＤＡＢ組織染色は、ビオチン標識されたＰＥＧの有意に高い蓄積および保持は、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の単回の腹腔内注射（図２ｂ〜ｃ）に対して、単回の静脈内注射（図２ｅ〜ｆ）の２４時間後に達成されたことを示す。しかし、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の静脈内注射または腹腔内注射の２時間後に、ビオチン標識されたＰＥＧシグナルについて、出血部位で認められた明白な相違はなかった（図２ａおよび２ｄ）。
【００４５】
（３）２０％および３０％のＰＥＧ溶液の組成物は、出血部位で、単回または反復静脈内注射後に、ＰＥＧの同様の蓄積をもたらす。
ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を使用したＰＥＧ脊髄組織レベルの定量的評価は、２０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムの１回の静脈内注射後に出血部位でＰＥＧが優先的に蓄積し、注射３時間後には、非損傷部位（３１５ｎｇ／ｍｌ）に対して、出血部位で認められたＰＥＧ組織レベルは９３６ｎｇ／ｍｌであることを示す。２０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムを５回注射した後（各注射毎に６時間の間隔をもうけた）、ＰＥＧ組織レベルは、最後の注射から３時間後には非損傷部位で５９５ｎｇ／ｍｌであったのに対し、出血部位で４０２５ｎｇ／ｍｌに達した。同様に、３０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムの単回の静脈内投与後、注射から３時間後には非損傷部位で５１９ｎｇ／ｍｌであったのに対し、１４３０ｎｇ／ｍｌのＰＥＧ組織レベルが出血部位で認められた。３０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムを５回注射した後（各注射毎に６時間の間隔をもうけた）、ＰＥＧ組織レベルは、最後の注射から３時間後には非損傷部位で５２６ｎｇ／ｍｌであったのに対し、出血部位で３８９１ｎｇ／ｍｌに達した。
【００４６】
ＰＥＧの静脈内投与は、損傷部位での出血の範囲を減少させた。ＰＥＧ製剤へのマグネシウムの添加は、出血のシグナルをさらに減少させた。
【００４７】
損傷部位の中心部から３．２ｍｍ２を覆う領域内の出血のシグナルの定量的形態計測分析
ラットにおけるＳＣＩ後の生理食塩水処理は、０．７９ｍｍ２の面積のサイズ中に検出される出血をもたらす。出血面積の範囲は、ＰＥＧ溶液の静脈内投与後に０．４７ｍｍ２まで減少し、ＰＥＧ溶液中のマグネシウムの静脈内投与後に０．２５ｍｍ２までさらに減少した。
【００４８】
本発明は、特定の実施態様を参照して記載されたが、これらの実施態様は本発明の原理および応用を説明するものでしかないことが理解されるはずである。従って、説明した実施態様に多数の改変を行ってもよく、請求項によって定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく他の組み合わせを考案してもよいことが理解されるはずである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は出血の治療のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）（技術的に出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）または出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｎｇ）として知られる）は、循環系からの血液の損失である。出血は、内的（血液が身体内の血管から漏れる）、または外的（血液が自然な開口部または皮膚中の裂け目から漏れる）のいずれかで生じ得る。出血は、身体内の血管が裂け、または漏れた場合に生じる。これは、身体的な外傷または非外傷性の理由（破裂動脈瘤等）から生じ得る。抗凝固療法治療、および血液凝固を伴う疾患は、出血が生じるリスクを高める可能性がある。破裂動脈瘤は、ショックまたは死さえももたらし得る、重度の内出血の原因になる可能性がある。現在の治療の選択肢は、動脈瘤を修復する手術（可能であれば）、床上安静および関連する症候を緩和する薬物療法（鎮痛剤および抗けいれん薬等）である。破裂動脈瘤を経験した全人口の約半分は、１日以内または３ヶ月以内のいずれかに死亡する。生存者のうち約５０％には、通常、生涯にわたる身体障害が残る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従って、当該技術分野において、出血を制御し、有害な事象のリスクを減少するための方法についてのニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
患者における１つ以上の出血を診断する工程と、当該患者に、血管閉塞化合物を含む治療有効量の組成物を、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％の濃度で投与する工程と、を含む出血の治療方法が提供される。局所投与のための組成物中、当該血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％であってもよく、体積あたり約１質量％〜１０質量％であってもよい。非経口投与のために、当該濃度は、体積あたり約１０質量％〜約４５質量％であってもよく、ある実施態様では、体積あたり約２０質量％〜約４０質量％であってもよい。当該血管閉塞化合物は、親水特性を有するポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）を含んでいてもよい。
【０００５】
血管閉塞化合物に加えて、当該組成物は、血流を変化させることができる１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．１質量％〜約１０質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。ある実施態様では、当該活性剤は、体積あたり約０．５質量％〜約５質量％の濃度で存在するマグネシウム塩（Ｍｇ）を含む。
【０００６】
治療有効量は、患者の体重に基づいて算出できる。一般的に、投与される本発明の組成物の治療有効量は、患者の体重に基づき、患者の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｌ〜２０ｍｌの組成物の割合を使用して見積もってもよい。出血が続く場合、反復用量を投与してもよい。局所投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．０５〜約５ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約５ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約１ｍｌの組成物の範囲の低用量が要求される。非経口的に投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約２０ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約１０ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約１〜約８ｍｌの組成物の範囲の高用量が要求される可能性がある。少なくとも１つの治療有効量の本発明の組成物は、血管閉塞化合物の半減期またはそれ以下の間に投与してもよい。
【０００７】
様々な実施態様のさらなる特徴および利点について、一部は下記に記載され、一部は当該記載から明らかであるか、または様々な実施態様の実施によって知ることができる。様々な実施態様の目的および他の利点は、本願明細書および請求項で具体的に記載された要素および組み合わせによって認識でき、かつ、実現できる。
【０００８】
部分的に、実施態様の他の態様、特徴、利益および利点は、下記の記載、添付の請求項および添付の図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１ａ〜１ｆは、損傷時に投与された際の、１週間にわたる出血部位内のビオチン標識されたＰＥＧの蓄積および保持を示す。
【図２】図２ａ〜２ｆは、損傷時の異なる方法での投与後の出血部位内のビオチン標識されたＰＥＧの蓄積を示す。
【図３ａ】様々なＰＥＧ組成物の投与後の、出血部位内のＰＥＧの蓄積のデータを示す。
【図３ｂ】様々なＰＥＧ組成物の投与後の、出血部位内のＰＥＧの蓄積のデータを示す。
【図４】生理食塩水、ＰＥＧまたはＰＥＧ溶液中のマグネシウムの投与後の出血面積の範囲を示すデータを表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
図面は原寸で描かれていないことが理解されるはずである。さらに、図面中の物体間の関係は原寸通りではない可能性があり、実際はサイズについて逆の関係性を有する可能性がある。図面は、示された各物体の構造についての理解および明確さをもたらすことを意図しており、従って、いくつかの特徴は、構造についての特定の特徴を示すために誇張される可能性がある。
【００１１】
本願明細書および添付の請求項について、別段の記載がない限り、本願明細書および請求項において使用される成分の量、物質の割合または比率、反応条件を表わす全ての数および他の数値は、用語「約」によって、全ての例において修飾されるものとして理解されるはずである。従って、別段の記載がない限り、本願明細書および請求項に記載された数値パラメータは、本発明によって得ようとする所望の特性に応じて変動する可能性がある近似値である。最低限でも、そして、請求項の範囲の均討論の適用を制限することを意図することなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字の値に基づいて、通常の丸め方を適用することによって解釈されなければならない。
【００１２】
本発明の広範な範囲を示す数値範囲およびパラメータが近似値であるかに関わらず、特定の例に記載された数値は可能な限り正確に報告される。しかし、全ての数値は、各試験の測定値において認められる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含む。さらに、本願明細書に開示される全ての範囲は、これらに包含されるいずれか、および全ての部分的な範囲を含むものと理解されるはずである。例えば、「１〜１０」という範囲は、最小値１と最大値１０との間（およびこれらを含む）のうちのいずれか、および全ての部分的な範囲、すなわち、１に等しいか、もしくはこれよりも大きい最小値、および１０に等しいか、またはそれ未満の最大値を有するいずれか、および全ての部分的な範囲（例えば、５．５〜１０）を含む。
【００１３】
本願明細書および添付の請求項において使用される場合、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」には、１つの参照対象にはっきりと明示して制限されていない限り、複数形の参照対象が含まれることに注意されたい。
【００１４】
出血の治療方法が提供される。このような方法は、患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、当該患者に、血管閉塞化合物を含む治療有効量の組成物を投与する工程と、を含む。
【００１５】
用語「治療する」または「治療」は、１つ以上の薬剤を、患者（ヒトまたはその他）に、疾病の兆候または症候を緩和するために投与する工程を含んでもよい手順を実行することを指す。「治療する」または「治療」は、兆候または症候の完全な軽減を要求せず、治癒を要求せず、患者に対するマージナル効果のみを有する手順を特に含む。
【００１６】
用語「治療有効量」は、患者に投与した場合に、患者の症状の改善をもたらすのに十分な本発明の組成物の量を指す。改善は治癒を意味するのではなく、患者の症状におけるマージナルな変化のみ含んでもよい。これはまた、症状を阻害する、またはその進行を停止もしくは遅延させる活性剤の量を含んでいてもよい。
【００１７】
治療有効量は、患者の体重に基づいて算出できる。一般的に、投与される本発明の組成物の治療有効量は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｌ〜２０ｍｌの組成物の割合を使用して、患者の体重に基づいて見積もってもよい。出血が続く場合、反復用量を投与してもよい。局所投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．０５〜約５ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約５ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約０．１〜約１ｍｌの組成物の範囲の低用量が要求される。非経口的に投与する場合、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５〜約２０ｍｌの組成物、患者の体重（ｋｇ）あたり約０．５および約１０ｍｌの組成物または患者の体重（ｋｇ）あたり約１〜約８ｍｌの組成物の範囲の高用量が要求されてもよい。
【００１８】
出血は、機械的、電気的、生物学的、または化学的な損傷によって誘導される可能性がある。出血はまた、変性状態（動脈瘤の形成等）に由来していてもよい。当該技術分野において知られ、使用される全ての診断方法を、１つ以上の出血性血管の存在を特定するために利用してもよい。出血のリスクがある血管はまた、危険因子（動脈瘤、腹部外傷、軟組織、腱、靱帯または骨の外傷、または腫瘍等）の探索によって特定してもよい。適した診断方法としては、血液試験、血圧試験、ＥＫＧ、または医用イメージング試験（Ｘ線、超音波、ＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
本発明の組成物中の血管閉塞化合物として使用するのに有用な化合物は、下記の基準を満たしてもよい；（１）親水特性を有する、（２）出血部位で蓄積し、血管封着特性を有する、ならびに（３）出血部位で少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２４時間維持される。さらに、非経口投与のために、適した血管閉塞化合物は、血管が無傷である場合に迅速に排泄され得る。
【００２０】
さらに、血管閉塞剤は、特定の条件下で細胞膜を封着または融合することができてもよい。本発明の組成物について、血管閉塞化合物の濃度は、血管閉塞化合物が、大きな膜融合効果を示すことなく膜封着効果をもたらすように選択されてもよい。例えば、分子量３３５０〜８０００Ｄａを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、体積あたり０．１質量％〜３０質量％の濃度で顕著な細胞膜封着および出血の減少を示し、体積あたり４５質量％超の濃度で顕著な膜融合特性を示す。従って、ある実施態様では、血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり４５質量％未満である。
【００２１】
この応用のために、様々な組成物は、出血部位で保持されるが血管が無傷である場合は全身循環から迅速に排泄され得る血管閉塞化合物を含む。血管閉塞化合物の全除去の速度、または半減期は、化合物の分子量および親水特性に関連する。通常は、同一の分子量については、親水性ポリマーは、より疎水性のポリマーよりも半減期が短い。さらに、親水特性を有するポリマーの半減期は、その分子量と直接的に関連し、より高い分子量のポリマーは、より長い半減期を有する。ほとんど変化せずに尿から排泄され得る親水性ポリマーは、排泄の前に何らかの変換が要求されるポリマーよりも、半減期が短い。例えば、糸球体濾過のカットオフ値は２４，０００Ｄａであるため、２４，０００Ｄａよりも重い全てのポリマーは、排泄され得る前に、ある程度まで分解される必要があり、これによってポリマーの半減期が延びる。ある実施態様では、当該血管閉塞化合物は、２時間未満、より好ましくは１時間未満の半減期を有する。このような化合物は、２４，０００Ｄａ未満の分子量を有する親水特性を有するポリマーから選択されてもよい。
【００２２】
当該血管閉塞化合物は、親水性または両親媒性ポリマーから選択されてもよい。本願明細書で使用される用語「親水性ポリマー」は、水分子への親和性や誘引を示し、鎖状および／または分岐状の構造において互いに結合する同一のサブユニット（「モノマー」）についての複数の例を含む全ての高分子を意味する。親水性ポリマー成分は、合成または自然に存在する親水性ポリマーであってもよい。
【００２３】
自然に存在する親水性の剤としては下記が挙げられるが、これらに限定されない。コラーゲンおよびその誘導体、フィブロネクチン、アルブミン、グロブリン、フィブリノーゲンおよびフィブリン等のタンパク質（コラーゲンが特に好ましい）；ポリマンヌロン酸およびポリガラクツロン酸等のカルボキシル化ポリサッカライド；アミノ化ポリサッカライド、特にグリコサミノグリカン、例えば、ヒアルロン酸、キチン、コンドロイチン硫酸Ａ、Ｂ、またはＣ、硫酸ケラチン、ケラタン硫酸およびヘパリン；メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウムおよび活性化ポリサッカライド（デキストラン等）およびデンプン誘導体。
【００２４】
有用な合成親水性化合物としては下記が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアルキレンオキシド、特にポリエチレングリコールおよびポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）コポリマー（ブロックコポリマーおよびランダムコポリマー等）；グリセロール、ポリグリセロール（特に高度分岐ポリグリセロール）、ポリ（メタクリル酸ポリエチレングリコール）、ポリ（メタクリル酸グリセロール）、ポリ（アクリル酸グリセロール）、ポリ（アクリル酸ポリエチレングリコール）、ポリ（アルキルオキサゾリン）、ホスホリルコリンポリマー、ポリメタクリル酸ナトリウムおよびポリメタクリル酸カリウム、ポリアクリル酸ナトリウムおよびポリアクリル酸カリウム、ポリメタクリル酸およびポリアクリル酸、１つ以上のポリアルキレンオキシドで置換されたプロピレングリコールおよびトリメチレングリコール（例えば、モノ−、ジ−およびトリ−ポリオキシエチル化グリセロール、モノ−およびジ−ポリオキシエチル化プロピレングリコール、ならびにモノ−およびジ−ポリオキシエチル化トリメチレングリコール）等のポリオール；ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース；アクリル酸ポリマーならびにその類似体およびコポリマー（例えば、ポリアクリル酸それ自体、ポリメタクリル酸、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（アクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（メタクリル酸メチルアルキルスルホキシド）、ポリ（アクリル酸メチルアルキルスルホキシド）および上述のうちいずれかのコポリマー）、ならびに／またはさらなるアクリレート化学種（アクリル酸アミノエチル等）を含むもの、ならびにモノ−２−（アクリルオキシ）−エチルコハク酸エステル；ポリマレイン酸；ポリアクリルアミドそれ自体、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（ジメチルアクリルアミド）、およびポリ（Ｎ−イソプロピル−アクリルアミド）等のポリ（アクリルアミド）；ポリ（ビニルアルコール）等のポリ（オレフィンアルコール）；ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（Ｎ−ビニルカプロラクタム）およびそのコポリマー等のポリ（Ｎ−ビニルラクタム）；ポリ（メチルオキサゾリン）およびポリ（エチルオキサゾリン）等のポリオキサゾリン；およびポリビニルアミン。
【００２５】
本願明細書で使用される用語「両親媒性ポリマー」とは、極性部分構造および非極性部分構造を生じさせる電荷の局所的な量の変化を有する全ての高分子を指す。極性部分構造は、他の極性分子構造（水分子等）への親和性または誘引（親水性）を示す一方で、非極性部分構造は、非極性分子（例えば、脂質、油、グリース、脂肪等）への親和性または誘引（親油性）を示す。適した両親媒性ポリマーとしては、ポロキサマー Ｐ−１８８、ポリエーテルエステルコポリマー（ポリエチレングリコールおよびポリブチレンテレフタラートのコポリマー、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレンオキシドのコポリマー、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのブロックコポリマー等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
両親媒性ポリマーはまた、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）として知られるポリエーテルアミンのファミリーを含む。これらのポリエーテルアミンは、ポリエーテル骨格の末端に結合した一級アミノ基を含み、この骨格は典型的にプロピレンオキシド（ＰＯ）、エチレンオキシド（ＥＯ）、またはその混合物に基づく。Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）ファミリーは、モノアミン、ジアミン、トリアミンおよび二級アミンを含む。Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（登録商標）は、Ｈｕｎｔｓｍａｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（本社；テキサス州、ザ ウッドランド）から購入できる。
【００２７】
通常は、本発明の組成物中の血管閉塞化合物の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％、すなわち１００ｍｌの溶液あたり約０．１〜約４５ｇの血管閉塞化合物に及んでもよい。局所投与のための組成物中、血管閉塞化合物の濃度は、好ましくは体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％、より好ましくは体積あたり約１質量％〜１０質量％である。非経口投与のために調製される組成物中では、当該濃度は、体積あたり約１０質量％〜約４５質量％または体積あたり約２０質量％〜約４０質量％であってもよい。
【００２８】
ある実施態様では、当該血管閉塞剤は、ポリエチレングリコールを含んでいてもよい。本発明の組成物中の血管閉塞化合物としての使用のためには、分子量が約１０００〜２４，０００Ｄａ、より好ましくは約１０００〜８０００Ｄａ、最も好ましくは約２，０００Ｄａ〜約４，０００ＤａであるＰＥＧが適している。異なる分子量のＰＥＧは、例えば、シグマアルドリッチ（米国、ミズーリ州、セントルイス）から得てもよい。
【００２９】
当該血管閉塞化合物に加えて、本発明の組成物は、１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。本願明細書で使用される用語「活性剤」は、血流修飾活性を有し、かつ／または血管閉塞化合物の効果を改善する化学元素または化合物を指す。ある実施態様では、当該活性剤は、失血性疾患に関連する兆候または症候を軽減する可能性がある。適した活性剤は、血流修飾剤（例えば、マグネシウム、カリウム、一酸化窒素、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、副甲状腺ホルモン、ブラジキニン分子およびそれに由来する断片等）から選択されてもよい。本発明の組成物中のこのような活性剤の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％、より好ましくは体積あたり０．１質量％〜１０質量％に及んでもよい。
【００３０】
ある実施態様では、本発明の組成物は、血管閉塞化合物および少なくとも１つの活性剤を含み、当該血管閉塞化合物と、当該少なくとも１つの活性剤との間の相互作用は、主にイオン性のものである。例えば、親水性ポリマーＰＥＧ全体は非イオン性であるが、ＰＥＧ鎖上のエーテル酸素上の電子の非共有電子対は、ポリマーに陰イオン性の特質を与え、血流修飾因子活性を有する金属イオン（マグネシウム等）に結合できる。
【００３１】
１つの実施態様では、当該活性剤は、マグネシウム化合物を含む。様々なマグネシウム塩が、マグネシウム化合物の供給源をもたらし得る。適したマグネシウム塩としては、硫酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、塩化マグネシウム、酸化マグネシウムおよび水酸化マグネシウムが挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は、例えば、シグマアルドリッチ（米国、ミズーリ州、セントルイス）から容易に購入できる。
【００３２】
本発明の組成物はまた、例えば、疾患修飾剤、神経伝達物質、神経ペプチドおよび神経受容体調節因子、抗炎症性および免疫調節剤、抗酸化剤、抗アポトーシス剤；向知性薬および成長剤、脂質の形成および輸送の調節因子、血流および血管形成の調節因子、鎮痛剤、ステロイド系抗炎症剤（副腎皮質ステロイド等）、非ステロイド系抗炎症剤（サリチル酸エステル等）、ＣＯＸ−２阻害剤、ＴＮＦα阻害剤、オピエートおよびモルヒネ様作用薬等の幅広い分類から選択される添加成分を含んでいてもよい。
【００３３】
当該血管閉塞化合物および活性剤に加えて、本発明の組成物は、１つ以上の薬理学的に許容できる担体を含んでいてもよい。本発明の組成物は、賦形剤（例えば、溶媒、結合剤、フィラー、崩壊剤、潤滑剤、懸濁剤、界面活性剤、増粘剤、緩衝剤、抗菌剤等）を含んでいてもよい。多くの異なる薬理学的に許容できる担体および賦形剤が知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；第２１版（２００５年５月１日）に開示されている。
【００３４】
非限定的な例として、米国特許出願第１１／４１８，１５３号明細書および米国特許出願第１１／４１８，１５２号明細書（これらは参照により、その全体が本願明細書に組み入れられる）に開示された組成物を使用してもよい。
【００３５】
ある実施態様では、本発明の組成物は、溶液、注射前に溶液に適した固形形態として調製してもよい。本発明の組成物は、非経口的に、好ましくは静脈内投与によって投与されてもよい。静脈内投与は、全身循環へのより直接的な、従って、より早いアクセスを与えるため、静脈内投与は、他の投与方法（腹腔内注射等）に対して、出血部位で血管閉塞剤の高い蓄積をもたらし得ることが見出された。あるいは、本発明の組成物は、血管の破裂部位に局所的に送達されてもよく、ある例では、送達は、ポンプまたは拍動装置等の装置によって補助されてもよい。
【００３６】
上述の通り、血管閉塞化合物としての使用に好ましい化合物は出血部位に蓄積し、残りの系からは迅速に除去される。このようなポリマーは、身体内での半減期が短い傾向があるため、患者に、迅速に投与する必要がある。さらに具体的には、１回分の本発明の組成物を、患者に、血管閉塞化合物の半減期またはそれ以下の間に投与することが望ましい。例えば、分子量１０００〜６０００Ｄａを有するＰＥＧの半減期は約３０〜９０分間であり、従って、このようなＰＥＧを含む１回分の本発明の組成物を９０分間以内、より好ましくは６０分間以内に投与することが望ましい。
【００３７】
以上で本発明の全般について記載した。これについては、例証によって与えられ、特段の記載がない限り本発明を制限する意図ではない下記の実施例への参照によってさらに容易に理解できるであろう。
【実施例】
【００３８】
＜方法および試験＞
オスのスプラーグドーリーラットを麻酔し、定位フレーム上に腹臥位で置いた。Ｔ９／１０椎弓切除を行い、オハイオ州立大学のインパクターで、１．５ｍｍの置換で動物を挫傷させた。
【００３９】
損傷後すぐに、生理食塩水、生理食塩水中の０．８％ マグネシウム、２０％または３０％のＰＥＧ３３５０中の０．８％ マグネシウム、ＰＥＧ３０００−ビオチン製剤中のＰＥＧ−ビオチンまたはマグネシウムを、静脈内注射（５〜７ｍｌ／ｋｇ）によって、１０〜３０分間かけて投与した。注射毎に６時間の間隔をもうけ、動物に１〜５回の注射を行った。注射バイアルの中身は、注射および分析の両方を行う研究者に知らせなかった。注射後、様々な時点で、組織を抽出し、組織学的評価（図１、２）、生体分析（図３）または機能分析（図４）のために処理した。
【００４０】
図１および２に示された組織学分析について、索を所定の時点で回収し、２０μｍの厚さに水平に切り、ビオチン分子（本例ではＰＥＧ−ビオチン）が存在すると、アビジン−ペルオキシダーゼ複合体とペルオキシダーゼ基質ＤＡＢ標識との反応が褐色を呈するＡＢＣ比色分析キットを使用して処理した。
【００４１】
図３に示された生体分析のために、出血部位を含む（または含まない）組織を回収した。ラット血漿中のＰＥＧの組織濃度を、検証された高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法を使用して、陽イオンエレクトロスプレーイオン化法で測定した。組織ホモジネートを遠心分離した後、各試料からの上清画分を、分析前に、エバポレーションによって濃縮し、移動層Ａで再構成した。試料をＴｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ カラムを使用して、ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析で分析した。ＰＥＧのピーク面積および較正標準の理論上の濃度は、原点を除いて二次関数に合わせた。
【００４２】
下記に、損傷部位での出血の程度についての機能分析または評価の方法を記載する。損傷から７２時間後、動物を断頭し、出血部位を中心に脊髄の１５ｍｍの分節を回収し、凍結し、厚さ２０μｍで低温切片を作成した。索あたり１１切片（損傷の中央および吻側および尾側から４００μｍ、８００μｍ、１６００μｍ、２８００μｍおよび３２００μｍの区分）を分析のために選択した。スライドにカバースリップを載せ、５倍の対物レンズで、ライカの光学顕微鏡を使用して、脊髄のカラー画像を得た。赤のチャネル（組織への出血を示す）をグレースケールの画像上でキャプチャし、強度の閾値を全ての画像にわたって２３０に設定し、全体的に一貫させた。脊髄を、下部で捉えられた硬膜および血液を除いて、緑の輪で囲った。赤で表わされ、かつ緑の輪で囲われた重複した信号を、Ｓｉｇｍａ Ｓｃａｎ中のツールバーからのＩｍａｇｅについてＯｖｅｒｌａｙ Ｍａｔｈ機能を使用して、青でハイライトし、青の信号の全面積を出血の範囲として測定した。
【００４３】
＜結果＞
（１）単回の非経口投与後、ＰＥＧは出血部位に蓄積し、優先的に保持される。
図１について、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の非経口投与後のＤＡＢ組織染色は、ビオチン標識されたＰＥＧが損傷部位の上部または下部の脊髄領域における目に見える蓄積はなしに、出血部位に優先的に蓄積することを示した。ＰＥＧは、出血部位で、投与後２時間以内に検出でき（図１ａ）、ＰＥＧシグナルは投与後２４時間にわたって増加し（図１ｂ）、投与後７日までに大半が消失した（図１ｃ）。非特異的なＤＡＢ染色は、生理食塩水で処理された動物の脊髄においては見られなかった（図１ｄ〜ｆ）。
【００４４】
（２）出血部位でのＰＥＧ蓄積は、投与方法によって影響される。
図２について、ＤＡＢ組織染色は、ビオチン標識されたＰＥＧの有意に高い蓄積および保持は、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の単回の腹腔内注射（図２ｂ〜ｃ）に対して、単回の静脈内注射（図２ｅ〜ｆ）の２４時間後に達成されたことを示す。しかし、ビオチン標識されたＰＥＧ溶液の静脈内注射または腹腔内注射の２時間後に、ビオチン標識されたＰＥＧシグナルについて、出血部位で認められた明白な相違はなかった（図２ａおよび２ｄ）。
【００４５】
（３）２０％および３０％のＰＥＧ溶液の組成物は、出血部位で、単回または反復静脈内注射後に、ＰＥＧの同様の蓄積をもたらす。
ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を使用したＰＥＧ脊髄組織レベルの定量的評価は、２０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムの１回の静脈内注射後に出血部位でＰＥＧが優先的に蓄積し、注射３時間後には、非損傷部位（３１５ｎｇ／ｍｌ）に対して、出血部位で認められたＰＥＧ組織レベルは９３６ｎｇ／ｍｌであることを示す。２０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムを５回注射した後（各注射毎に６時間の間隔をもうけた）、ＰＥＧ組織レベルは、最後の注射から３時間後には非損傷部位で５９５ｎｇ／ｍｌであったのに対し、出血部位で４０２５ｎｇ／ｍｌに達した。同様に、３０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムの単回の静脈内投与後、注射から３時間後には非損傷部位で５１９ｎｇ／ｍｌであったのに対し、１４３０ｎｇ／ｍｌのＰＥＧ組織レベルが出血部位で認められた。３０％ ＰＥＧ３３５０溶液中のマグネシウムを５回注射した後（各注射毎に６時間の間隔をもうけた）、ＰＥＧ組織レベルは、最後の注射から３時間後には非損傷部位で５２６ｎｇ／ｍｌであったのに対し、出血部位で３８９１ｎｇ／ｍｌに達した。
【００４６】
ＰＥＧの静脈内投与は、損傷部位での出血の範囲を減少させた。ＰＥＧ製剤へのマグネシウムの添加は、出血のシグナルをさらに減少させた。
【００４７】
損傷部位の中心部から３．２ｍｍ２を覆う領域内の出血のシグナルの定量的形態計測分析
ラットにおけるＳＣＩ後の生理食塩水処理は、０．７９ｍｍ２の面積のサイズ中に検出される出血をもたらす。出血面積の範囲は、ＰＥＧ溶液の静脈内投与後に０．４７ｍｍ２まで減少し、ＰＥＧ溶液中のマグネシウムの静脈内投与後に０．２５ｍｍ２までさらに減少した。
【００４８】
本発明は、特定の実施態様を参照して記載されたが、これらの実施態様は本発明の原理および応用を説明するものでしかないことが理解されるはずである。従って、説明した実施態様に多数の改変を行ってもよく、請求項によって定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく他の組み合わせを考案してもよいことが理解されるはずである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、
前記患者に血管閉塞化合物の製剤を投与する工程と、を含む出血の治療方法。
【請求項２】
前記製剤は、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％の前記血管閉塞化合物を含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記血管閉塞化合物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記製剤は、血流を修飾することができる活性剤をさらに含む請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記活性剤は、前記血管閉塞剤とともにイオン結合を形成できる請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記活性剤は、マグネシウムである請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記活性剤の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％である請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記製剤は、静脈内投与または局所投与される請求項１記載の方法。
【請求項９】
患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、
前記患者に、ＰＥＧおよび体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む組成物を投与する工程と、を含む出血の治療方法。
【請求項１０】
前記組成物は、患者の体重（ｋｇ）あたり少なくとも約０．１〜約１０ｍｌの組成物という投与量で投与される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記活性剤は、マグネシウムを含む化合物である請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物は、体積あたり約２０質量％〜約４５質量％のＰＥＧを含む請求項９記載の方法。
【請求項１３】
体積あたり約２０質量％〜約４５質量％のＰＥＧおよび体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む出血の治療のための組成物。
【請求項１４】
前記活性剤は、マグネシウムを含む化合物である請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む出血の治療のための組成物。
【請求項１】
患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、
前記患者に血管閉塞化合物の製剤を投与する工程と、を含む出血の治療方法。
【請求項２】
前記製剤は、体積あたり約０．１質量％〜約４５質量％の前記血管閉塞化合物を含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記血管閉塞化合物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記製剤は、血流を修飾することができる活性剤をさらに含む請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記活性剤は、前記血管閉塞剤とともにイオン結合を形成できる請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記活性剤は、マグネシウムである請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記活性剤の濃度は、体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％である請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記製剤は、静脈内投与または局所投与される請求項１記載の方法。
【請求項９】
患者における１つ以上の出血性血管を診断する工程と、
前記患者に、ＰＥＧおよび体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む組成物を投与する工程と、を含む出血の治療方法。
【請求項１０】
前記組成物は、患者の体重（ｋｇ）あたり少なくとも約０．１〜約１０ｍｌの組成物という投与量で投与される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記活性剤は、マグネシウムを含む化合物である請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物は、体積あたり約２０質量％〜約４５質量％のＰＥＧを含む請求項９記載の方法。
【請求項１３】
体積あたり約２０質量％〜約４５質量％のＰＥＧおよび体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む出血の治療のための組成物。
【請求項１４】
前記活性剤は、マグネシウムを含む化合物である請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
体積あたり約０．１質量％〜約２０質量％の活性剤を含む出血の治療のための組成物。
【図１】
【図２】
【図３ａ】
【図３ｂ】
【図４】
【図２】
【図３ａ】
【図３ｂ】
【図４】
【公表番号】特表２０１２−５２１４３８（Ｐ２０１２−５２１４３８Ａ）
【公表日】平成２４年９月１３日（２０１２．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０２１５４（Ｐ２０１２−５０２１５４）
【出願日】平成２２年３月２３日（２０１０．３．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２８２２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１１２１５
【国際公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【出願人】（５０６２９８７９２）ウォーソー・オーソペディック・インコーポレーテッド (366)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月１３日（２０１２．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月２３日（２０１０．３．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２８２２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１１２１５
【国際公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【出願人】（５０６２９８７９２）ウォーソー・オーソペディック・インコーポレーテッド (366)
【Ｆターム（参考）】
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