分析物の検出、定量及び増幅のための新規な組成物および方法
【課題】分析物の検出、定量及び増幅用の新規な組成物および方法を得る。
【解決手段】分析物の核酸アレイおよびライブラリーをこのような組成物および方法に有用に組入れる。ユニバーサルディテクションエレメントおよびシグナル伝達体などを使用して分析物を検出し、必要であるか所望する場合、更に定量する。ターゲット分析物の増幅もまた、本発明の組成物および方法によってもたらされる。
【解決手段】分析物の核酸アレイおよびライブラリーをこのような組成物および方法に有用に組入れる。ユニバーサルディテクションエレメントおよびシグナル伝達体などを使用して分析物を検出し、必要であるか所望する場合、更に定量する。ターゲット分析物の増幅もまた、本発明の組成物および方法によってもたらされる。
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【特許請求の範囲】
【請求項1】
ライブラリーにおける意図する複数の核酸を検出もしくは定量する方法であって、
(a)(i)意図する前記核酸に相補的な核酸のアレイであって、前記核酸が多孔質もしくは非多孔質固体支持体に直接的もしくは間接的に固定化もしくは直接的もしくは間接的に不動化される核酸のアレイと、
(ii)検出もしくは定量化しようとする意図する核酸を含む可能性のある核酸分析物のライブラリーであって、意図する前記核酸のそれぞれは少なくとも1種の内在性のユニバーサルディテクションターゲット(UDT)を含むライブラリーと、
(iii)シグナルを直接的もしくは間接的に発生するユニバーサルディテクションエレメント(UDE)とを提供し、
(b)前記ライブラリー(ii)を核酸の前記アレイ(i)とハイブリダイズさせて、意図する前記核酸が存在する場合にはハイブリッドを形成し、
(c)前記UDEを前記UDTと接触させて、前記アレイに結合した複合体を形成し、
(d)前記アレイに結合したUDEから発生するシグナルの量を検出もしくは測定することにより、前記複数の意図する核酸を検出もしくは定量する方法。
【請求項2】
前記核酸アレイがDNA、RNA、DNA類似物、RNA類似物およびPNAよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項3】
前記核酸もしくは類似物が糖部分、燐酸塩部分もしくは塩基部分のいずれか1つで改変される請求項2に記載の方法。
【請求項4】
前記多孔質固体支持体がポリアクリルアミドおよびアガロースよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項5】
前記非多孔質固体支持体がガラスもしくはプラスチックからなる請求項1に記載の方法。
【請求項6】
前記固体支持体が透過性、半透過性、遮光性又は反射性である請求項1に記載の方法。
【請求項7】
前記核酸が、化学リンカーもしくは結合アームにより前記固体支持体に間接的に固定化もしくは間接的に不動化される請求項1に記載の方法。
【請求項8】
前記分析物のライブラリーが器官、組織および細胞よりなる群から選択された生物資源から得られる請求項1に記載の方法。
【請求項9】
前記分析物がゲノムDNA、エピソームDNA、スプライスしていないRNA、mRNA、rRNA、snRNAもしくは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項10】
前記内在性のUDTが3′ポリAセグメント、5′キャップ、2次的構造、コンセンサス配列あるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項11】
前記コンセンサス配列がポリA付加のためのシグナル配列、スプライスエレメント、マルチコピーの繰返しあるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項10に記載の方法。
【請求項12】
前記UDEが核酸、核酸類似物、PNA、ポリペプチド、多糖類、合成ポリマーあるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項13】
前記UDEの直接的シグナル発生が蛍光性化合物、燐光性化合物、化学蛍光性化合物、キレート性化合物、電子高密度化合物、磁性化合物、挿入化合物、エネルギー伝達化合物および前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項14】
前記UDEの間接的シグナル発生が抗体、抗原、ハプテン、受容体、ホルモン、リガンド、酵素であって前記酵素が蛍光反応、発色性反応もしくは化学蛍光性反応である反応を触媒する酵素、および前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項15】
1回もしくはそれ以上の洗浄工程を含む請求項1に記載の方法。
【請求項1】
ライブラリーにおける意図する複数の核酸を検出もしくは定量する方法であって、
(a)(i)意図する前記核酸に相補的な核酸のアレイであって、前記核酸が多孔質もしくは非多孔質固体支持体に直接的もしくは間接的に固定化もしくは直接的もしくは間接的に不動化される核酸のアレイと、
(ii)検出もしくは定量化しようとする意図する核酸を含む可能性のある核酸分析物のライブラリーであって、意図する前記核酸のそれぞれは少なくとも1種の内在性のユニバーサルディテクションターゲット(UDT)を含むライブラリーと、
(iii)シグナルを直接的もしくは間接的に発生するユニバーサルディテクションエレメント(UDE)とを提供し、
(b)前記ライブラリー(ii)を核酸の前記アレイ(i)とハイブリダイズさせて、意図する前記核酸が存在する場合にはハイブリッドを形成し、
(c)前記UDEを前記UDTと接触させて、前記アレイに結合した複合体を形成し、
(d)前記アレイに結合したUDEから発生するシグナルの量を検出もしくは測定することにより、前記複数の意図する核酸を検出もしくは定量する方法。
【請求項2】
前記核酸アレイがDNA、RNA、DNA類似物、RNA類似物およびPNAよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項3】
前記核酸もしくは類似物が糖部分、燐酸塩部分もしくは塩基部分のいずれか1つで改変される請求項2に記載の方法。
【請求項4】
前記多孔質固体支持体がポリアクリルアミドおよびアガロースよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項5】
前記非多孔質固体支持体がガラスもしくはプラスチックからなる請求項1に記載の方法。
【請求項6】
前記固体支持体が透過性、半透過性、遮光性又は反射性である請求項1に記載の方法。
【請求項7】
前記核酸が、化学リンカーもしくは結合アームにより前記固体支持体に間接的に固定化もしくは間接的に不動化される請求項1に記載の方法。
【請求項8】
前記分析物のライブラリーが器官、組織および細胞よりなる群から選択された生物資源から得られる請求項1に記載の方法。
【請求項9】
前記分析物がゲノムDNA、エピソームDNA、スプライスしていないRNA、mRNA、rRNA、snRNAもしくは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項10】
前記内在性のUDTが3′ポリAセグメント、5′キャップ、2次的構造、コンセンサス配列あるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項11】
前記コンセンサス配列がポリA付加のためのシグナル配列、スプライスエレメント、マルチコピーの繰返しあるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項10に記載の方法。
【請求項12】
前記UDEが核酸、核酸類似物、PNA、ポリペプチド、多糖類、合成ポリマーあるいは前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項13】
前記UDEの直接的シグナル発生が蛍光性化合物、燐光性化合物、化学蛍光性化合物、キレート性化合物、電子高密度化合物、磁性化合物、挿入化合物、エネルギー伝達化合物および前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項14】
前記UDEの間接的シグナル発生が抗体、抗原、ハプテン、受容体、ホルモン、リガンド、酵素であって前記酵素が蛍光反応、発色性反応もしくは化学蛍光性反応である反応を触媒する酵素、および前記の任意の組合せよりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
【請求項15】
1回もしくはそれ以上の洗浄工程を含む請求項1に記載の方法。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【公開番号】特開2009−112317(P2009−112317A)
【公開日】平成21年5月28日(2009.5.28)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2009−50273(P2009−50273)
【出願日】平成21年3月4日(2009.3.4)
【分割の表示】特願2002−192771(P2002−192771)の分割
【原出願日】平成14年7月1日(2002.7.1)
【出願人】(502237353)エンゾー ライフ サイエンセズ インコーポレイテッド (3)
【Fターム(参考)】
【公開日】平成21年5月28日(2009.5.28)
【国際特許分類】
【出願日】平成21年3月4日(2009.3.4)
【分割の表示】特願2002−192771(P2002−192771)の分割
【原出願日】平成14年7月1日(2002.7.1)
【出願人】(502237353)エンゾー ライフ サイエンセズ インコーポレイテッド (3)
【Fターム(参考)】
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