アデノウイルスベクター及びそのようなベクターの生産を提供する。特に、アデノウイルスベクターの効率的ターゲッティングのためのファイバーシャフト修飾が提供される。ファイバーシャフト修飾は、他の修飾、例えば、ファイバーノブ及び／又はペントン修飾と、完全に機能破壊された（脱ターゲッティングされた）アデノウイルスベクターを生産するために組み合わせてもよい。脱ターゲッティングされたアデノウイルスベクターの増殖のためのスケールアップの方法がまた提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾されたアデノウイルスキャプシドタンパク質であって、
その修飾されていないスキャプシドタンパク質は、ヘパリンサルフェートプロテオグリカン（ＨＳＰ）に結合し、そして
該修飾されたキャプシドタンパク質は突然変異を含み、それによりヘパリンサルフェートプロテオグリカン（ＨＳＰ）への結合が変更されている、修飾されたアデノウイルスキャプシドタンパク質。
【請求項２】
ファィバータンパク質である請求項１記載の修飾されたタンパク質。
【請求項３】
修飾されたファィバータンパク質の結合が、修飾されていないタンパク質に比べて削除されているか又は減少させられている請求項２記載のキャプシドタンパク質。
【請求項４】
修飾されたファィバータンパク質の結合が、修飾されていないタンパク質に比べて削除されているか又は減少させられている請求項２記載の修飾されたタンパク質。
【請求項５】
アミノ酸の挿入、欠失又は置換を含む請求項３記載の修飾されたタンパク質。
【請求項６】
突然変異がＨＳＰに結合するモチーフを変更し、それによりＨＳＰ相互作用が変更される請求項２記載の修飾されたタンパク質。
【請求項７】
モチーフがＢＢＸＢ又はＢＢＢＸＸＢであって、Ｂは、塩基性アミノ酸でありそしてＸは任意のアミノ酸である、請求項６記載の修飾されたタンパク質。
【請求項８】
モチーフがコンセンサス配列ＫＫＴＫを含む、請求項７記載の修飾されたタンパク質。
【請求項９】
ファィバーが、修飾されたＡｄ５又はＡｄ２ファィバーである、請求項２記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１０】
少なくとも２つの異なるアデノウイルスからのファィバータンパク質の一部を含むキメラファィバータンパク質である請求項２記載の修飾タンパク質であって、
シャフト又はその一部が、第１アデノウイルスからのものであり、それにより、得られるファィバーはＨＳＰに結合しないか、又は修飾されていないファィバータンパク質に比べて減少した親和性でＨＳＰに結合し、
該第１アデノウイルスからのシャフト又はその一部は、ＨＳＰに結合しないか、又は第２アデノウイルスに比べて減少した親和性でＨＳＰに結合し、
第２アデノウイルスはＨＳＰに結合し、そして
該一部は、得られたタンパク質のＨＳＰ結合を変更するのに十分な部分を含む、
請求項２記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１１】
修飾されたファィバータンパク質のＨＳＰへの結合が、修飾されていないタンパク質に比べて削除されているか又は減少させられている、請求項１０記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１２】
ファィバータンパク質の残部は、第２アデノウイルスからのものである、請求項１０記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１３】
更に、ＨＳＰに加えて１つ又はそれ以上の細胞表面タンパク質と得られたファィバーとの相互作用を減少させるか又は削除する１つ又はそれ以上の更なる修飾を含む請求項２、３，１０及び１１のいずれか１項記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１４】
更にリガンドを含み、それにより得られたファィバーは該リガンドの受容体に結合する、請求項１３記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１５】
リガンドがノブ領域に含まれる請求項１４記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１６】
リガンドは挿入されているか又は該リガンドはファィバーの一部と置き換わっており、それにより得られたファィバーは該リガンドの受容体に結合する、請求項１４記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１７】
ＨＳＰに対する親和性が、少なくとも、５倍、１０倍及び１００倍の減少の中から選ばれる量減少させられている、請求項１１記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１８】
第１アデノウイルスがサブグループＢ、Ｄ又はＦからなる群より選ばれ、そして第２アデノウイルスがサブグループＣである、請求項１１記載の修飾されたタンパク質。
【請求項１９】
第１アデノウイルスがＡｄ３、Ａｄ３５、Ａｄ７、Ａｄ１１、Ａｄ１６、Ａｄ２１、Ａｄ３４、Ａｄ４０、Ａｄ４１及びＡｄ４６からなる群より選ばれる、請求項１０記載の修飾されたタンパク質。
【請求項２０】
第２アデノウイルスがＡｄ５又はＡｄ２である、請求項１８記載の修飾されたタンパク質。
【請求項２１】
第２アデノウイルスがＡｄ５又はＡｄ２である、請求項１９記載の修飾されたタンパク質。
【請求項２２】
配列番号５２、５４、５６、５８、６２、６６、７０及び７２のいずれかに記載のアミノ酸の配列、又は
配列番号５２、５４、５６、５８、６２、６６、７０及び７２のいずれかに記載のアミノ酸の配列と９０％の配列同一性を有するアミノ酸の配列、又は
配列番号５２、５４、５６、５８、６２、６６、７０及び７２のいずれかに記載のアミノ酸の配列をコードするヌクレオチドの配列に、高いストリンジェンシーの条件下に少なくともその長さのおよそ７０％にハイブリダイズするヌクレオチドの配列によりコードされたアミノ酸の配列、
を含むファィバータンパク質からなる群より選ばれる、請求項１記載の修飾されたタンパク質。
【請求項２３】
請求項１〜１２及び１４〜２２のいずれか１項記載の修飾されたタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項２４】
請求項１３記載の修飾されたタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項２５】
ベクターを含む請求項２３記載の核酸分子。
【請求項２６】
ベクターを含む請求項２４記載の核酸分子。
【請求項２７】
アデノウイルスベクターである請求項２５記載の核酸分子。
【請求項２８】
アデノウイルスベクターである請求項２６記載の核酸分子。
【請求項２９】
サブグループＢ、Ｃ又はＤのアデノウイルスからのアデノウイルスベクターである、請求項２７記載のベクター。
【請求項３０】
サブグループＢ、Ｃ又はＤのアデノウイルスからのアデノウイルスベクターである、請求項２８記載のベクター。
【請求項３１】
請求項２３記載の核酸分子を含む細胞。
【請求項３２】
請求項２４記載の核酸分子を含む細胞。
【請求項３３】
真核細胞である請求項３１記載の細胞。
【請求項３４】
真核細胞である請求項３２記載の細胞。
【請求項３５】
細胞が真核細胞であり、そして
パッケージング細胞である細胞である、
請求項２７記載の核酸分子を含む細胞。
【請求項３６】
細胞が真核細胞であり、そして
パッケージング細胞である細胞である、
請求項２８記載の核酸分子を含む細胞。
【請求項３７】
請求項１〜１２及び１４〜２２のいずれか１項記載の修飾されたタンパク質を含み、それによりＨＳＰへのウイルス粒子の結合が、修飾されていないファィバーを発現する粒子に比べて変更されているアデノウイルス粒子。
【請求項３８】
請求項１３記載の修飾されたタンパク質を含み、それによりＨＳＰへのウイルス粒子の結合が、修飾されていないファィバーを発現する粒子に比べて変更されているアデノウイルス粒子。
【請求項３９】
ファィバーに対する天然の受容体がコクサッキーアデノウイルス受容体（ＣＡＲ）である、請求項３７記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４０】
キャプシドのＣＡＲ結合領域における突然変異を更に含む、請求項３９記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４１】
キャプシドのα_vインテグリン結合領域における突然変異を更に含み、それによりインテグリンへの結合が削除されているか又は減少させられている、請求項３９記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４２】
キャプシドのα_vインテグリン結合領域における突然変異を更に含み、それによりインテグリンへの結合が削除されているか又は減少させられている、請求項４０記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４３】
修飾されたキャプシドのＣＡＲ結合領域がファィバーノブにある、請求項３９記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４４】
ファィバーノブ修飾がＡＢループ又はＣＤループにある、請求項４３記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４５】
ファィバーノブ修飾がＫＯ１及びＫＯ１２からなる群より選ばれる、請求項４４記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４６】
アデノウイルスが、サブグループＣ、Ｄ又はＦのアデノウイルスである、請求項３９記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４７】
サブグループＣのウイルスがＡｄ２又はＡｄ５であり、サブグループＤのウイルスがＡｄ６であり、そしてサブグループＦのウイルスがＡｄ４１である、請求項４６記載のアデノウイルス粒子。
【請求項４８】
初期世代アデノウイルスベクター、ガットレスアデノウイルスベクター又は複製条件付きアデノウイルスベクターである、請求項２７記載のアデノウイルスベクター。
【請求項４９】
初期世代アデノウイルスベクター、ガットレスアデノウイルスベクター又は複製条件付きアデノウイルスベクターである、請求項２８記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５０】
複製条件付きアデノウイルスベクターが殺腫瘍アデノウイルスベクターである、請求項４８記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５１】
複製条件付きアデノウイルスベクターが殺腫瘍アデノウイルスベクターである、請求項４９記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５２】
異種核酸を含む請求項２７記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５３】
異種核酸を含む請求項２８記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５４】
異種核酸がポリペプチドをコードする、請求項５２記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５５】
異種核酸がポリペプチドをコードする、請求項５３記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５６】
異種核酸が調節核酸を含むか又はコードする、請求項５２記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５７】
異種核酸が調節核酸を含むか又はコードする、請求項５３記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５８】
異種核酸がプロモーター又はＲＮＡを含むか又はコードする、請求項５２記載のアデノウイルスベクター。
【請求項５９】
異種核酸がプロモーター又はＲＮＡを含むか又はコードする、請求項５３記載のアデノウイルスベクター。
【請求項６０】
プロモーターが細胞又は組織特異的プロモーターである、請求項５９記載のアデノウイルスベクター。
【請求項６１】
プロモーターが複製に必須のアデノウイルスの遺伝子に作動可能的に連結されている、請求項５９記載のアデノウイルスベクター。
【請求項６２】
組織特異的プロモーターが腫瘍特異的プロモーターである請求項６０記載のアデノウイルスベクター。
【請求項６３】
ポリペプチドが治療用ポリペプチドである請求項５８記載のアデノウイルスベクター。
【請求項６４】
細胞を請求項５７記載のアデノウイルスベクターで形質導入することを含む、細胞において異種核酸を発現させる方法。
【請求項６５】
細胞が腫瘍細胞であり、
アデノウイルスベクターが殺腫瘍ベクターであり、そして
細胞を殺す、
請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
細胞が哺乳動物の細胞である請求項６４記載の方法。
【請求項６７】
細胞が霊長類の細胞である請求項６４記載の方法。
【請求項６８】
細胞がヒト細胞である請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
肝細胞上のヘパリンサルフェートプロテオグリカン（ＨＳＰｓ）へのアデノウイルス粒子の結合を減少させるか又は削除することを含む、アデノウイルス粒子による肝細胞の形質導入を減少させる方法。
【請求項７０】
脱ターゲッティングされたアデノウイルス粒子の増殖のためのスケールアップ方法であって、
アデノウイルスベクターを複製し、成熟させそしてパッケージすることができる細胞を、該細胞へのアデノウイルス粒子の侵入を生じさせる試薬の存在下に、脱ターゲッティングされたアデノウイルスベクターで感染させ、
感染させた細胞を、該アデノウイルスベクターの増加、増大及び増殖に適当な条件下に培養し、そして
得られたアデノウイルス粒子を回収する、
ことを含むスケールアップ方法。
【請求項７１】
試薬がポリカチオンである請求項７０記載の方法。
【請求項７２】
ポリカチオンが、ヘキサジメトリンブロミド、ポリエチレンイミン、プロタミンサルフェート及びポリ−Ｌ−リシンからなる群より選ばれる、請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
試薬が、アデノウイルス粒子及び細胞上の受容体に結合する二官能性タンパク質である 請求項７０記載の方法。
【請求項７４】
二官能性タンパク質が、抗ファィバー抗体−リガンド融合体、抗ファィバーＦａｂ−ＦＧＦコンジュゲート、抗ペントン抗体リガンド融合体、抗ヘキソン抗体リガンド融合体及びポリリシン−ペプチド融合体からなる群より選ばれ、リガンドが受容体に結合するリガンドである、請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
脱ターゲッティングされたアデノウイルス粒子が修飾されたキャプシドを発現し、それにより少なくとも１つの宿主細胞受容体への結合が野生型アデノウイルスに比べて減少させられているか又は削除されている、請求項７０〜７４のいずれか１項記載の方法。
【請求項７６】
アデノウイルス粒子が、１つの宿主細胞受容体との結合を削除するか又は減少させるように修飾されている、請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
アデノウイルス粒子が、２つの宿主細胞受容体との結合を削除するか又は減少させるように修飾されている、請求項７５記載の方法。
【請求項７８】
アデノウイルス粒子が、３つの宿主細胞受容体との結合を削除するか又は減少させるように修飾されている、請求項７５記載の方法。
【請求項７９】
α_vインテグリン、コクサッキー−アデノウイルス受容体（ＣＡＲ）及びヘパリンサルフェートプロテオグリカン（ＨＳＰ）の１つ又はそれ以上との相互作用を減少させ又は削除する突然変異からなる群より選ばれる１つ又はそれ以上の突然変異により該粒子が修飾されている、請求項７５記載の方法。
【請求項８０】
突然変異が、ＰＤ１、ＫＯ１、ＫＯ１２及びＳ＊からなる群より選ばれる、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
突然変異がファィバーのシャフトにある請求項２記載の修飾されたタンパク質。
【請求項８２】
ＨＳＰに対する親和性が、少なくとも、５倍、１０倍及び１００倍の減少の中から選ばれる量減少させられている、請求項３記載の修飾されたタンパク質。

【図１】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１９】

【図２０】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【公表番号】特表２００６−５００９０２（Ｐ２００６−５００９０２Ａ）
【公表日】平成１８年１月１２日（２００６．１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００３−５６２２６８（Ｐ２００３−５６２２６８）
【出願日】平成１５年１月２４日（２００３．１．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／００２２９５
【国際公開番号】ＷＯ２００３／０６２４００
【国際公開日】平成１５年７月３１日（２００３．７．３１）
【出願人】（５０４２８４５５９）ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート (3)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ　ＳＣＲＩＰＰＳ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス　アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】