特定の投薬計画およびプロトコールを使用してＣＤ２０抗体により多発性硬化症（ＭＳ）を処置する方法を説明する。このような方法において使用するための製造物も説明する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の投与計画およびプロトコールを使用して被験体における多発性硬化症（ＭＳ）を処置するための方法およびこのような使用のための指示を伴う製造物に関する。
【０００２】
発明の背景
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性および脱髄変性疾患である。それは、合衆国の約３００，０００人の人々を罹病させている世界的な疾患であり；それは若い成人の疾患であり、７０％〜８０％は２０〜４０歳で発症する（Anderson et al. Ann Neurology 31 (3): 333-6 (1992); Noonan et al. Neurology 58: 136-8 (2002)）。ＭＳは、臨床的経過、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）スキャン評価および生検および剖検物質の病理分析に基づく不均一な障害である（Lucchinetti et al. Ann Neurol 47: 707-17 (2000)）。この疾患は、脊髄、脳幹、脳神経、小脳、大脳および認知症候群を含む欠損（deficits）の多数の可能な組合せにおいて現れる。進行性障害（progressive disability）は、特に２５年の見通しが含まれるとき、ＭＳを有する大部分の患者の宿命である。ＭＳ患者の半分は疾患発症から１５年以内に歩行するのに杖を必要とする。ＭＳは、若い成人および中年の成人における神経学的障害の主要な原因であり、そして過去１０年間まで、有益な処置は知られていない。ＭＳは診断するのが困難である。その理由は、ＭＲＩスキャン、誘発電位および脳脊髄液（ＣＳＦ）の研究からなるいくつかの技術的進歩を含む高度に体系化された診断基準を発展させた非特異的臨床所見の故である。すべての診断基準は、異なる時間に起こりそして感染、血管障害または自己免疫疾患などの他の病因により説明されない中枢白質における散在した病変の一般的原理に頼っている（McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001）。ＭＳは疾患の４つのパターンを有する：再発−寛解ＭＳ（ＲＲＭＳ；発症時の症例の８０％〜８５％）、一次進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ；発症時に１０％〜１５％）、進行性再発ＭＳ（ＰＲＭＳ；発症時に５％）および二次進行性ＭＳ（ＳＰＭＳ）（Kremenchutzky et al. Brain 122 (Pt 10): 1941-50 (1999); Confavreux et al. N Engl J Med 343 (20): 1430-8 (2000)）。ＲＲＭＳを有する患者の見積もられた５０％は、１０年でＳＰＭＳに進展し、そしてＲＲＭＳ患者の９０％までが最終的にＳＰＭＳに進展するであろう（Weinshenker et al. Brain 112 (Pt 1): 133-46 (1989）。
【０００３】
現在４つのクラスの６つの薬物がＲＲＭＳの処置のために合衆国で認可されており、これに対してＰＰＭＳについては薬物は認可されていない。ＲＲＭＳ処置は、下記のものを含む：インターフェロンクラス、ＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）およびＡＶＯＮＥＸ（登録商標））およびＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））；酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））、ポリペプチド；ナタリズマブ（natalizumab）（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））；およびミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、細胞毒性作用物質（cytotoxic agents）を含む。コルチコステロイド、メトトレキセート、シクロホスファミド、アザチオプリンおよび静脈内（ＩＶ）免疫グロブリンを含む他の薬物が、さまざまな程度の成功を伴い使用された。現在認可されている処置の利益は、２つの最近のメタアナリシスにより示唆されるとおりＲＲＭＳにおける再発率および障害の防止について相対的に中程度である（〜３０％）（Filippini et al. Lancet 361: 545-52 (2003)）。
【０００４】
他の臨床的研究は、腫瘍壊死因子α阻害剤および変化したペプチドリガンドを含む、ＭＳにおける他の免疫修飾剤（immunomodulatory agents）を評価したが、これらはＭＳを改善するよりはむしろ悪化させた（Lenercept Multiple Sclerosis Study Group and the University of British Columbia MS/MRI Neurology 53: 457-65 (1999); Bielekova et al. Nat Med 2000; 6: 1167-75 (2000), erratum appears in Nat Med 6: 1412 (2000)）。
【０００５】
ＭＳ病態生理学の主要な見解は、炎症が主としてＣＤ４^＋Ｔｈ１ Ｔ細胞により媒介されることを確信した。ＩＦＮ−βおよび酢酸グラチラマーなどのこの理論に基づく治療アプローチは障害の増悪または蓄積の発生を減少させるが、完全には防止しない。
【０００６】
ヒトＭＳにおける体液性成分の存在は、ＭＳの診断基準において、ＣＳＦオリゴクローナルバンドの包含および増加した鞘内ＩｇＧ合成により証明されるとおり、１０年間に暗黙の内に認められてきた（Siden A . J Neurol 221: 39-51 (1979); McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001); Anderson et al. Eur J Neurol 9: 243-51 (2002); O'Connor, P. Neurology 59: S1-33 (2002)）。オリゴクローナルバンドの存在、増加した遊離Ｌ鎖および増加した鞘内ＩｇＭ合成は、ＭＳ疾患活性と相関しておりそしてより重度の結果の予測材料であることができる（Rudick et al. Mult Scler 1: 150-5 (1995); Zeman et al. Acta Cytol 45: 51-9 (2001); Izquierdo et al. Acta Neurol Scand 105: 158-63 (2002); Wolinsky J.J Neurol Sci 206: 145-52 (2003); Villar et al. Ann Neurol 53: 222-6 (2003)）。
【０００７】
抗ミエリン抗体（ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）およびミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）が、進行性および再発型のＭＳを有する患者の血清において検出された（Reindl et al. Brain 122: 2047-56 (1999); Egg et al. Mult Scler 7 (5): 285-9 (2001)）。抗ミエリン抗体は、ＭＳ患者のＣＳＦにおいても検出された（Reindl et al. Brain 122: 2047-56 (1999); Egg et al. Mult Scler 7 (5): 285-9 (2001); Andersson et al. Eur J Neurol 9: 243-51 (2002)）。抗ガングリオシド抗体または抗ニューロフィラメント抗体などの追加の型の抗体がＭＳを有する患者で観察された（Meta et al. Mult Scler 5: 379-88 (1999); Sadatipour et al. Ann Neurol 44: 980-3 (1998)）。最近の報告は、血清抗ＭＯＧ抗体および抗ＭＢＰ抗体の存在は、臨床的に孤立した脱髄事象から明白なＲＲＭＳへの進行の強い予測材料であることを示した（Berger et al. N Engl J Med 349: 139-45 (2003)）。再燃を経験することについて調整された危険率（adjusted hazard ratio）は、両抗体について血清ボジティブである患者で７６．５でありそして抗ＭＯＧについてのみ血清ポジティブである患者では３１．６であった。
【０００８】
国際病理協会は、ミエリンに結合した抗体がＭＳを有する大多数の患者に存在し、ＭＳ病変に見出される形質細胞およびＢ細胞も、ＭＳにおける体液性役割に対する追加の証拠を与えることを見出した（Prineas and Wright, Lab Invest 38: 409-21 (1978); Esiri M.Neuropathol Appl Neurobio l6: 9-21 (1980); Genain et al. Nat Med 5: 170-5 (1999); Lucchinetti et al. Ann Neurol 47: 707-17 (2000); Wingerchuk et al.Lab Invest 81: 263-81 (2001)）。Ｂ細胞はＭＳを有する患者のＣＳＦにおいて検出可能であり、そしてＢ細胞の相対的に高い割合の存在はより重度の障害進行を予測することができる（Cepok et al. Brain 124 (Pt 11): 2169-76 (2001)）。
【０００９】
ＲＲＭＳまたは眼球クローヌス−ミオクローヌス症候群を有する被験体において、リツキシマブ（Rituximab）は、すべての被験体において末梢Ｂ細胞を激減させそしてある患者においてはＣＳＦ Ｂ細胞の数を減少させると報告されている（Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl1)PO5.128: A395 (2003); Cross et al. "Preliminary Results from a Phase II Trial of Rituximab in MS" (abstract) Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis ACTRIMS20-1 (October, 2003))。Cree et al. "Tolerabolity and Effects of Rituximab" Anti-CD20 Antibody "in Neuromyelitis Optica and Rapidly Worsening Multiple Sclerosis" Meeting of the Am.Acad.Neurol. (April,2004)も参照。
【００１０】
ＣＤ２０抗体およびそれによる治療
リンパ球は、造血のプロセス期間中に骨髄で産生される多くのタイプの白血球の１つである。２つの主要なリンパ球の集団：Ｂリンパ球（Ｂ細胞）およびＴリンパ球（Ｔ細胞）がある。本発明では特に関心のあるリンパ球はＢ細胞である。
【００１１】
Ｂ細胞は、骨髄内で成熟しそして骨髄を去ってそれらの細胞表面に抗原結合性抗体を発現する。ナイーブＢ細胞が、その膜結合型抗体に対して特異的な抗原に最初に遭遇すると、細胞は急速に分裂し始め、そしてその子孫は記憶Ｂ細胞および「形質細胞」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。記憶Ｂ細胞はより長い寿命を有しそして元の親細胞と同じ特異性を有する膜結合型抗体を発現し続ける。形質細胞は、膜結合型抗体を産生しないが、その代わりに分泌されうる形態で抗体を産生する。分泌された抗体は体液性免疫の主要なエフェクター分子である。
【００１２】
ＣＤ２０抗原（ヒトＢリンパ球拘束性分化抗原、Ｂｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢリンパ球および成熟Ｂリンパ球上に位置した約３５kDの分子量を有する疎水性膜貫通型タンパク質である（Valentine et al.J.Biol. Chem.264 (19): 11282-11287 (1989); およびEinfeld et al. EMBO J.7 (3): 711-717 (1988)）。この抗原は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％よりも多くにおいても発現されるが（Anderson et al.Blood63 (6): 1424-1433 (1984)）、しかし造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞または他の正常な組織上には見出されない（Tedder et al. J.Immmunol. 135 (2): 973-979 (1985)）。ＣＤ２０は、細胞サイクル開始および分化のための活性化プロセスにおける早期段階（１つまたは複数）を調節し（Tedder et al., supra）そして場合によりカルシウムイオンチャンネルとして機能する（Tedder et al. J. Cell. Biochem. 14D: 195 (1990)）。
【００１３】
Ｂ細胞リンパ腫におけるＣＤ２０の発現を考えれば、この抗原は、このようなリンパ腫の「ターゲティング」のための候補として役立つことができる。本質的に、このようなターゲティングは、下記のように一般化することができる：Ｂ細胞のＣＤ２０表面抗原に特異的な抗体を患者に投与する。これらの抗ＣＤ２０抗体は、正常なＢ細胞および悪性Ｂ細胞の両方の（うわべは）ＣＤ２０抗原に特異的に結合し；ＣＤ２０表面抗原に結合した抗体は腫瘍Ｂ細胞（neoplastic B cells）の破壊および減少をもたらすことができる。さらに、腫瘍を破壊するための潜在力を有する化学作用物質または放射性標識を、該作用物質が腫瘍Ｂ細胞に特異的に「送達される」ように抗ＣＤ２０抗体にコンジュケートさせることができる。このアプローチにもかかわらず、第一の目標は、腫瘍を破壊することであり；この特異的アプローチは利用される特定の抗ＣＤ２０抗体により決定されることができ、従って、ＣＤ２０抗原をターゲティングするための利用可能なアプローチは相当変わることができる。
【００１４】
リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標））抗体は、ＣＤ２０抗原に対して指向させた遺伝子工学的に作成されたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは、1998年4月7日に発行されたUS Patent No. 5,736,137において「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれる抗体である（Anderson et al.）。ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、再発したまたは難治性の低悪性度または濾胞性ＣＤ２０ポジティブＢ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者の処置のために適用される。インビトロ作用機構の研究は、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）がヒト補体に結合しそして補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）によりリンパ球Ｂ細胞系を溶解させることを証明した（Reff et al. Blood 83 (2): 435-445 (1994)）。さらに、それは抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいて有意な活性を有する。もっと最近では、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、トリチウム化チミジン組み込みアッセイにおいて、抗増殖効果を有しそして直接アポトーシスを誘導することが示されたが、他の抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体は示さなかった（Maloney et al. Blood 88 (10): 637a (1996)）。ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）と化学療法と毒素間の協力作用も実験で観察された。特に、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は薬物耐性ヒトＢ細胞リンパ腫細胞系をドキソルビシン、ＣＤＤＰ、ＶＰ−１６、ジフテリア毒素およびリシン（ricin）の細胞毒性作用に対して感作させる（Demidem et al. Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12 (3): 177-186 (1997)）。インビボ症状発現前の研究は、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、多分補体および細胞媒介プロセスにより、カニクイザルの末梢血、リンパ節および骨髄からＢ細胞を減少させることを示した（Reff et al. Blood 83 (2): 435-445 (1994)）。
【００１５】
リツキシマブは、再発したまたは難治性の低悪性度または濾胞性ＣＤ２０^＋Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する患者を、４用量として１週間に３７５mg/ｍ²の用量で処置することについて１９９７年１１月に合衆国で認可された。２００１年４月に、食品医薬品協会（ＦＡＤ）は、低悪性度ＮＨＬの処置のための追加の請求を認可した：再処置（１週間に４用量として）および追加の投薬計画（１週間に８用量として）。単独療法としてまたは免疫抑制剤もしくは化学療法薬物との組合せにおいてリツキシマブへの３００，０００人より多くの患者の暴露があった。患者は、２年までの間維持治療としてやはりリツキシマブで処置された（Hainsworth et al. J Clin Oncol 21: 1746-51 (2003); Hainsworth et al. J Clin Oncol 20: 4261-7 (2002)）。
【００１６】
リツキシマブは、Ｂ細胞および自己抗体が疾患病態生理学において役割を果たすと思われる多様な非悪性自己免疫障害においても研究された（Edwards et al. Biochem Soc Trans 30: 824-8 (2002)）。リツキシマブは、慢性関節リウマチ（ＲＡ）（Leandro et al. Ann Rheum Dis.61-: 883-8 (2002); Emery et al Arthritis Rheum 48 (9): S439 (2003)；ループス (Eisenberg R. Arthritis Res Ther 5: 157-9 (2003); Leandro et al. Arthritis Rheum 46: 2673-7 (2002))、免疫血小板減少症（D'Arena et al. Leuk Lymphoma 44: 561-2 (2003)）、自己免疫貧血（Zaja et al. Haematologica 87: 189-95 (2002) (erratum appears in Haematologica 87: 336 (2002)）、自己免疫神経障害（Pestronk et al. J Neurol Neurosurg Psychiatry 74: 485-9 (2003)）、腫瘍外性眼球クローヌス−ミオクローヌス症候群（Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl1)PO5.128: A395 (2003)）および再発−寛解多発性硬化症（ＲＲＭＳ）（Cross et al. (abstract)Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis 20-1 (2003)）の兆候および症状を潜在的に軽減することが報告された。
【００１７】
フェーズＩＩの研究（ＷＡ１６２９１）が慢性関節リウマチ（ＲＡ）を有する患者において行われ、リツキシマブの安全および有効性に関する４８週の追跡データを与えた（Emery et al. Arthritis Rheum 48 (9): S439 (2003); Szczepanski et al. Arthritis Rheum 48 (9): S121 (2003)）。総計１６１人の患者を、４つの処置アームに一様に無作為化した：メトトレキセート、リツキシマブ単独、リツキシマブ＋メトトレキセート、リツキシマブ＋シクロホスファミド（ＣＴＸ）。リツキシマブの処置計画では、１日目および１５日目に静脈内に１ｇ投与された。ＲＡを有する大部分の患者におけるリツキシマブの注入は、大部分の患者により十分に許容され、患者の３６％はそれらの最初の注入期間中に少なくとも１つの有害な事象を経験している（プラシボを受け取る患者の３０％と比較して）。全体として、大多数の有害な事象は、重症度において軽〜中程度であると考えられそしてすべての処置グループにわたりよくバランスしていた。４８週における４つのアームにわたり総計１９人の重度の有害な事象があり、これはリツキシマブ／ＣＴＸグループにおいては僅かにより高い頻度であった。感染の発生率は、すべてのグループにわたりよくバランスしていた。このＲＡ患者集団における重い感染症の平均率は、４．６６／１００患者−年であり、これは、地域社会をベースとする疫学的研究で報告されたＲＡ患者における入院を必用とする感染の率（９．５７／１００患者−年）より低い（Doran et al. Arthritis Rheum 46: 2287-93 (2002)）。
【００１８】
自己免疫神経障害（Pestronk et al. J Neurol Neurosurg Psychiatry 74: 485-9 (2003)）、眼球クローヌス／ミオクローヌス症候群（Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl1)PO5.128: A395 (2003)）およびＲＲＭＳ（Cross et al. Preliminary results from a phase II trial of Rituximab in MS (abstract) Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis 20-1 (2003)）を含む神経学的障害を有する少数の患者におけるリツキシマブの報告された安全性プロフィルは、腫瘍学またはＲＡにおいて報告されたそれと同様であった。ＲＲＭＳを有する被験体におけるインターフェロンβ（ＩＦＮ−β）または酢酸グラチラマーと組み合わせたリツキシマブの進行中の研究者支援の治験（ＩＳＴ）において、１０人の処置された被験体のうち１人は、リツキシマブの最初の注入の後に中程度の熱および悪寒を経験した後夜通し観察のために病院に入院し、そして他の９人は、なんらの報告される有害な事象なしに４注入計画を完了した。
【００１９】
ＣＤ２０抗体に関する特許および特許刊行物は、US Patent Nos. 5,776,456、5,736,137、 5,843,439、 6,399,061および 6,682,734、ならびにUS2002/0197255、US2003/0021781、US2003/0082172、US2003/0095963、US2003/0147885 (Anderson et al.); US Patent No. 6,455,043、US2003/0026804およびWO2000/09160 (Grillo-Lopez,A); WO2000/27428 (Grillo - Lopez and White); WO2000/27433およびUS2004/0213784 (Grillo - Lopez and Leonard); WO2000/44788 (Braslawsky et al.); WO2001/10462 (Rastetter, W.); WO01/10461 (Rastetter and White); WO2001/10460 (White and Grillo-Lopez); US2001/0018041、US2003/018092、WO2001/34194 (Hanna and Hariharan); US2002/0006404およびWO2002/04021 (Hanna and Hariharan); US2002/0012665およびWO2001/74388 (Hanna,N.); US2002/0058029 (Hanna, N.); US2003/0103971 (Hariharan and Hanna); US2002/0009444およびWO2001/80884 (Grillo-Lopez,A.); WO2001/97858 (White, C.); US2002/0128488 およびWO2002/34790 (Reff, M.); WO2002/060955 (Braslawsky et al.); WO2002/096948 (Braslawsky et al.); WO2002/079255 (Reff and Davies); US Patent No. 6,171,586およびWO1998/56418 (Lam et al.); WO1998/58964 (Raju, S.); WO1999/22764 (Raju, S.); WO1999/51642、US Patent No. 6,194,551、US Patent No. 6,242,195、US Patent No. 6,528,624およびUS Patent No. 6,538,124 (Idusogie et al.); WO2000/42072 (Presta, L.); WO2000/67796 (Curd et al.); WO2001/03734 (Grillo-Lopez et al.); US2002/0004587およびWO2001/77342 (Miller and Presta); US2002/0197256 (Grewal, I.); US2003/0157108 (Presta, L.); WO04/056312 (Lowman et al.); US2004/0202658およびWO2004/091657 (Benyunes,K.); WO2005/000351 (Chan, A.); US2005/0032130A1 (Beresini et al.); US2005/0053602A1 (Brunetta,P.); US Patent Nos.6,565,827、6,090,365、6,287,537、6,015,542、5,843,398および5,595,721, (Kaminski et al.); US Patent Nos.5,500,362、5,677,180、5,721,108、6,120,767および6,652,852 (Robinson et al.); US Patent No. 6,410,391 (Raubitschek et al.); US Patent No. 6,224,866およびWO00/20864 (Barbera-Guillem, E.); WO2001/13945 (Barbera-Guillem, E.); US2005/0079174A1 (Barbera-Guillem et al.); WO2000/67795 (Goldenberg); US2003/0133930およびWO2000/74718 (Goldenberg and Hansen); US2003/0219433およびWO2003/68821 (Hansen et al.); WO2004/058298 (Goldenberg and Hansen); WO2000/76542 (Golay et al.); WO2001/72333 (Wolin and Rosenblatt); US Patent No. 6,368,596 (Ghetie et al.); US Patent No. 6,306,393およびUS2002/0041847 (Goldenberg, D.); US2003/0026801 (Weiner and Hartmann); WO2002/102312 (Engleman, E.); US2003/0068664 (Albitar et al.); WO2003/002607 (Leung, S.); WO2003/049694、US2002/0009427およびUS2003/0185796 (Wolin et al.); WO2003/061694 (Sing and Siegall); US2003/0219818 (Bohen et al.); US2003/0219433およびWO2003/068821 (Hansen et al.); US2003/0219818 (Bohen et al.); US2002/0136719 (Shenoy et al.); WO2004/032828 (Wahl et al.)およびWO2002/56910 (Haydon-Ledbetter)を含む。US Patent No. 5,849,898およびEP 330,191 (Seed et al.); EP332,865,A2 (Meyer and Weiss); US Patent No. 4,861,579 (Meyer et al.); US2001/0056066 (Bugelski et al.); WO1995/03770 (Bhat et al.); US2003/0219433A1 (Hansen et al.); WO2004/035607 (Teeling et al.); US2004/0093621 (Shitara et al.); WO2004/103404 (Watkins et al.); WO2005/000901 (Tedder et al.); US2005/0025764 (Watkins et al.); WO2005/016969およびUS2005/0069545 A1 (Carr et al.); WO2005/014618 (Chang et al.)も参照。これらのあるものはとりわけ多発性硬化症の処置を含む。
【００２０】
リツキシマブによる治療に関する刊行物は、Perotta and Abuel "Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to Rituximab" Abstract # 3360 Blood 10 (1) (part1-2): p.88B (1998); Stashi et al. "Rituximab chimeric anti-CD20 monoclonal antibody treatment for adults with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura" Blood 98 (4): 952-957 (2001); Matthews, R. "Medical Heretics" New Scientist (7 April, 2001); Leandro et al. "Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion" Ann Rheum Dis 61: 833-888 (2002); Leandro et al. "Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response. Arthritis and Rheumatism 44 (9): S370 (2001); Leandro et al. "An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus", Arthritis & Rheumatism 46 (1): 2673-2677 (2002); Edwards and Cambridge "Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes" Rhematology 40: 205-211 (2001); Edwards et al. "B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders" Biochem. Soc. Trans. 30 (4): 824-828 (2002); Edwards et al. "Efficacy and safety of Rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46 (9): S197 (2002); Levine and Pestronk "IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using Rituximab" Neurology 52: 1701-1704 (1999); Devita et al. "Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis" Arthritis & Rheum 46: 2029-2033 (2002); Hidashida et al. "Treatment of DMARD-Refractory rheumatoid arthritis with Rituximab." Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA2002; Tuscano,J. "Successful treatment of Infliximab-refractory rheumatoid arthritis with Rituximab" Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; new Orleans, LA2002; Specks et al. "Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy" Arthritis and Rheumatism 44 (12): 2836-2840 (2001); Anolik et al., "B lymphocyte Depletion in the Treatment of Systemic Lupus (SLE): PhaseI/II Trial of Rituximab (RITUXAN (登録商標)) in SLE" Arthritis And Rheumatism 46 (9), S289-S289 Abstract 717 (October, 2002), and Albert et al., "A Phase I Trial of Rituximab (Anti-CD20)for Treatment of Systemic Lupus Erythematosus" Arthritis And Rheumatism 48 (12): 3659-3659, Abstract LB9 (December,2003); Martin and Chan "Pathogenic Roles of B cells in Human Autoimmunity: Insights from the Clinic" Immunity 20: 517-527 (2004)。
【００２１】
発明の要約
本発明は、少なくとも部分的に、ＰＰＭＳまたはＲＲＭＳなどの多発性硬化症を有する被験体における安全で活性な処置計画を与えるＣＤ２０抗体の用量の選択を含む。
【００２２】
従って、本発明は、有効量のＣＤ２０抗体を被験体に投与して約０．５〜４グラムの最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４グラムの第２抗体暴露を与え、該第２暴露は最初の暴露から約１６〜６０週まで与えられず、そして抗体暴露の各々は１または２用量の抗体として被験体に与えられる、ことを含む被験体における多発性硬化症を処置する方法に関する。
【００２３】
さらに、本発明は、（ａ）ＣＤ２０抗体を含む容器；および（ｂ）被験体における多発性硬化症を処置するための指示を有するパッケージインサートを含み、該指示は、約０．５〜４グラムの最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４グラムの第２抗体暴露を与えるのに有効な量の抗体を被験体に投与し、該第２暴露は最初の暴露から約１６〜６０週まで行われず、そして抗体暴露の各々は１または２用量の抗体として被験体に与えられることを指示する、製造物に関する。
【００２４】
好ましい態様の詳細な説明
Ｉ．定義
「Ｂ細胞」は、骨髄内で成熟するリンパ球であり、そしてナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞またはエフェクターＢ細胞（形質細胞）を含む。本明細書でのＢ細胞は正常なまたは非悪性Ｂ細胞であることができる。
【００２５】
本明細書で「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞表面抗原」は、Ｂ細胞の表面に発現された抗原であって、それに結合する抗体でターゲティングされうるＢ細胞の表面に発現された抗原である。例示的なＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカー（記載については、The Leukocyte Antigen Facts Book, 2^nd Edition.1997,ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace & Co., New Yorkを参照のこと）を含む。他のＢ細胞表面マーカーは、ＲＰ１０５、ＦｃＲＨ２、Ｂ−ｃｅｌｌＣＲ２、ＣＣＲ６、Ｐ２Ｘ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＣＸＣＲ５、ＦＣＥＲ２、ＢＲ３、Ｂｔｉｇ、ＮＡＧ１４、ＳＬＧＣ１６２７０、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＡＴＷＤ５７８、ＦｃＲＨ３、ＩＲＴＡ１、ＦｃＲＨ６、ＢＣＭＡおよび２３９２８７を含む。本発明で特に関心のあるＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織に比較してＢ細胞上に優先的に発現され、そして前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方に発現されうる。本発明で好ましいＢ細胞表面マーカーはＣＤ２０である。
【００２６】
「ＣＤ２０」抗原または「ＣＤ２０」は、末梢血またはリンパ系器官からの９０％より多くのＢ細胞の表面に見出される約３５ｋＤの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は、正常なＢ細胞および悪性Ｂ細胞の両方に存在するが、幹細胞には発現されない。文献におけるＣＤ２０の他の名称は、「Ｂリンパ球拘束性抗原」および「Ｂｐ３５」を含む。ＣＤ２０抗原は、例えばClark et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82: 1766 (1985)に記載されている。
【００２７】
本明細書で「抗体アンタゴニスト」は、Ｂ細胞上のＢ細胞表面マーカーに結合すると、哺乳動物におけるＢ細胞を破壊するかもしくは減少させ、および／または、例えばＢ細胞により誘発される体液性応答を減少または阻止することにより、１種または複数のＢ細胞機能に干渉する抗体である。抗体アンタゴニストは、好ましくは、それにより処置された哺乳動物においてＢ細胞を激減させる（即ち、循環しているＢ細胞レベルを減少させる）ことができる。このような減少は、抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の抑制および／またはＢ細胞死の誘導（例えばアポトーシスによる）などの種々の機構により達成されうる。
【００２８】
「抗体依存性細胞性細胞毒性」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｓ）を発現する非特異的細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合された抗体を認識し、次に標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、これに対して単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991)の464頁の表３に要約されている。関心のある分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＣアッセイ、例えばUS Patent No. 5,500,362または5,821,337に記載のアッセイを行うことができる。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。替わりに、または追加的に、関心のある分子のＡＤＣＣ活性は、例えばClynes et al. PNAS (USA)95: 652-656 (1988)に開示された動物モデルなどの動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。
【００２９】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つまたは複数のＦｃＲｓを発現しそしてエフェクター機能を行う白血球である。好ましくは、この細胞は少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現しそしてＡＤＣＣエフェクター機能を行う。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞および好中球を含み；ＰＢＭＣｓおよびＮＫ細胞が好ましい。
【００３０】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表すのに使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（γ受容体）でありそしてＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらはこれらの受容体の対立遺伝子変異体および選択的にスプライシングされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体」）を含み、これらは主としてその細胞質ドメインにおいて異なる類似したアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースド活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースド抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（Daaeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997)参照）。ＦｃＲｓは、Ravetch and Kinet, Annu.Rev.Immunol 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods4: 25-34 (1994); およびde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)に概説されている。将来同定されるべきＦｃＲを含む他のＦｃＲｓは、本明細書では用語「ＦｃＲ」により包含される。この用語は、胎児への母体ＩｇＧｓの移送の責任を持つ新生児の受容体、ＦｃＲｎも含む（Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976)およびKim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)）。
【００３１】
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下に分子の標的を溶解する能力を指す。補体活性化経路は、同種抗原と複合した分子（例えば抗体）への補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始される。補体活性化を評価するために、例えばGazzano-Santoro et al., J.Immunol.Methods 202: 163 (1996)に記載のＣＤＣアッセイを行うことができる。
【００３２】
「成長抑制性」抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止または減少させる抗体である。例えば、抗体はインビトロおよび／またはインビボでのＢ細胞の増殖を防止または減少させることができる。
【００３３】
「アポトーシスを誘導する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成などの、標準アポトーシスアッセイにより決定された、例えはＢ細胞のプログラムされた細胞死を誘導する抗体である。
【００３４】
本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、そして特定的にはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体（intact antibodies）から形成された多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）および所望の生物学的活性を示す限りは抗体断片を含む。
【００３５】
「抗体断片」は、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域を含む、インタクト抗体の部分を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂およびＦｖ断片；二重特異性抗体；線状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
【００３６】
本発明の目的のために、「インタクト抗体」は、Ｈ可変ドメイン（heavy variable domains）およびＬ可変ドメイン（light variable domains）ならびにＦｃ領域を含むインタクト抗体である。
【００３７】
「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同じ軽（Ｌ）鎖よび２つの同じ重（Ｈ）鎖からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によりＨ鎖に連結されており、ジスルフィド結合の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプのＨ鎖に従って変わる。各Ｈ鎖およびＬ鎖は規則的に間隔をおいて配置された鎖内ジスルフィド橋も有する。各Ｈ鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_H）、続く多数の定常ドメインを有する。各Ｌ鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_L）およびその他端に定常ドメインを有し；Ｌ鎖の定常ドメインはＨ鎖の第１定常ドメインとアラインしており、そしてＬ鎖可変ドメインはＨ鎖の可変ドメインとアラインしている。特定のアミノ酸残基がＬ鎖可変ドメインとＨ鎖可変ドメインとの境界面を形成していると考えられる。
【００３８】
用語「可変」は、可変ドメインのある部分は抗体間で配列が大幅に異なりそしてその特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において使用される事実をいう。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体にわたり一様には分布していない。それは、Ｌ鎖可変ドメインおよびＨ鎖可変ドメインの両方において超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲｓ）と呼ばれる。ネイティブＨ鎖およびＬ鎖の可変ドメインは、各々４つのＦＲｓを含み、これらは、主に３つの超可変領域により連結されたβシート配置を採用し、３つの超可変領域はβシート構造を連結するループを形成しそしてある場合にはβシート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲｓにより相互に極めて接近して保持されており、そして他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)参照）。定常ドメインは抗体を抗原に結合することに直接には関与していないが、抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）における抗体の参加などの種々のエフェクター機能を示す。
【００３９】
抗体のパパイン消化は、各々単一の抗原結合部位を有する“Ｆａｂ”断片と呼ばれる２つの同じ抗原結合性断片と、残りの「Ｆｃ」断片であって、その名前がその容易に結晶化する能力を反映する「Ｆｃ」断片を産生する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しそして依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）₂断片を生じる。
【００４０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含有する最小抗体断片である。この領域は、堅く非共有結合会合している１つのＨ鎖可変ドメインと１つのＬ鎖可変ドメインの二量体からなる。それは、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶ_H−Ｖ_L二量体の表面における抗原結合部位を規定するこの配置にある。まとめると、６つの超可変領域は、抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかしながら、１つの可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても、全体の結合部位よりは低いアフィニティーではあるけれども、抗原を認識しそして結合する能力を有する。
【００４１】
Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖の定常ドメインとＨ鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含むＨ鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における少数の残基が加わることによりＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（１つまたは複数）が少なくとも１つの遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書における命名である。Ｆ（ａｂ’）₂抗体断片は、もともとＦａｂ’断片間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【００４２】
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「Ｌ鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明白に異なるタイプの１つに割り当てられることができる。
【００４３】
それらのＨ鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体は、異なるクラスに割り当てられることができる。５つの主要なクラスのインタクト抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、そしてこれらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２にさらに分けられうる。抗体の異なるクラスに相当するＨ鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元配置は周知されている。
【００４４】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶ_HおよびＶ_Lドメインを含み、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能とするＶ_HドメインとＶ_Lドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、Plueckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)参照。
【００４５】
用語「二重特異性抗体（diabody）」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片であって、同じポリペプチド鎖におけるＬ鎖可変ドメイン（Ｖ_L）に結合したＨ鎖可変ドメイン（Ｖ_H）を含む抗体断片（Ｖ_H−Ｖ_L）を指す。同じ鎖における２つのドメイン間でペア形成を可能とするにはあまりにも短いリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインとペアを形成しそして２つの抗原結合部位を創生するように強制される。二重特異性抗体は、例えばEP404,097; WO93/11161; およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)にさらに完全に記載されている。
【００４６】
本明細書で使用された用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、即ち、モノクローナル抗体の産生期間中に生じうる可能な変異体（このような変異体は一般に少量で存在する）を除いて、集団を構成する個々の抗体が同一であるかおよび／または同じエピトープに結合する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向させられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対して指向させられる。モノクローナル抗体は、その特異性に加えて、モノクローナル抗体が他の免疫グロブリンにより汚染されていないという点で有利である。修飾句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるままの抗体の性質を示し、そして任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとみなされるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature,256: 495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法により産生することができ、または組換えＤＮＡ法により産生することができる（例えばUS Patent No. 4,816,567参照）。「モノクローナル抗体」は、例えばClackson et al, Nature, 352: 624-628 (1991)およびMarks et al., J.Mol.Biol., 222: 581-597 (1991)に記載の技術を使用するファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【００４７】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、特に、Ｈ鎖の一部および／またはＬ鎖の一部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるかまたは相同性であるが、鎖（１つまたは複数）の残部は他の種に由来する抗体または他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるかまたは相同性である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含み、ならびにこのような抗体の断片が所望の生物学的活性を示す限りこのような抗体の断片を含む（US Patent No. 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)）。本明細書で関心のあるキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば旧世界ザル、例えば、ヒヒ、アカゲザルまたはカニクイザル）に由来する可変ドメイン抗原結合配列およびヒト定常領域配列を含む「霊長類化抗体」（"primatized" antibodies）を含む（US Patent No. 5,693,780）。
【００４８】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えばマウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。大体において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、アフィニティーおよび能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種の（ドナー抗体）の超可変領域からの残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに精密化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに相当し、そしてＦＲｓのすべてまたは実質的にすべてが、上記したＦＲ置換（１つまたは複数）を除いて、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲｓである、少なくとも１つの、典型的には少なくとも２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むであろう。ヒト化抗体は、場合により、免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域、の少なくとも一部も含むであろう。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1989); およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)を参照されたい。
【００４９】
本明細書で使用された用語「超可変領域」は、抗原結合の責任を負う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は，Ｌ鎖可変ドメインにおける「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、Ｌ鎖可変ドメインにおける残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）および８９−９７（Ｌ３）ならびにＨ鎖可変ドメインにおける３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）および９５−１０２（Ｈ３）; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)）および／または「超可変ループ」からのこれらの残基（例えば、Ｌ鎖可変ドメインにおける残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）ならびにＨ鎖可変ドメインにおける２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)）を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されたとおり超可変領域残基以外のこれらの可変ドメイン残基である。
【００５０】
「裸の抗体」は、細胞毒性部分または放射性標識などの異種分子にコンジュゲートされていない抗体（本明細書で定義されたとおりの）である。
【００５１】
ＣＤ２０抗原に結合する抗体の例は、今や「リツキシマブ」（「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」）と呼ばれる「Ｃ２Ｂ８」；IDEC Pharmaceuticals, Inc.から市販されている「Ｙ２Ｂ８」または「イブリツモマブチウキセタン（Ibritumomab Tiuxetan)」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））と命名されたイットリウム−［９０］−標識された２Ｂ８マウス抗体（US Patent No. 5,736,137; 1993年6月22日に受託番号ＨＢ１１３８８の下にＡＴＣＣに寄託された２Ｂ８）；Corixaから市販されている、場合により¹³¹Ｉで標識されて「¹³¹Ｉ−Ｂ１」または「ヨウ素Ｉ１３１ トシツモマブ」抗体（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））を発生する、「トシツモマブ（Tositumomab）」とも呼ばれるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」（US Patent No. 5,595,721も参照）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Press et al. Blood 69 (2): 584-591 (1987)および「フレームワークパッチされた（framework patched）」またはヒト化ＩＦ５を含むその変異体（WO03/002607, Leung,S; ATTC寄託 HB-96450）；マウス２Ｈ７およびキメラ２Ｈ７抗体（US Patent No. 5,677,180）；ヒト化２Ｈ７；huMax-CD20 (Genmab, Denmark, WO2004/035607)；ＡＭＥ−１３３（Applied Molecular Evolution）；Ａ２０抗体またはその変異体、例えばキメラもしくはヒト化Ａ２０抗体（それぞれ、ｃＡ２０、ｈＡ２０）またはＩＭＭＵ−１０６（US2003/0219433, Immunomedics）；US 2005/0069545A1およびWO2005/16969 (Carr et al.）における如く、場合によりＩＬ２とコンジュゲートさせた、エピトープ欠乏したＬｅｕ−１６、１Ｈ４または２Ｂ８を含む、ＣＤ２０結合性抗体；ＣＤ２２およびＣＤ２０に結合する二重特異性抗体、例えばhLL2xhA20 (WO2005/14618, Chang et al.); International Leukocyte Typing Workshopから入手可能なモノクローナル抗体L27、 G28-2、 93-1B3、 B-C1または NU-B2 (Valentine et al., In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., p. 440, Oxford University Press (1987)); 1H4 (Haisma et al. Blood 92: 184 (1998)）；抗ＣＤ２０アウリスタチンＥコンジュゲート（Seattle Genetics）；抗ＣＤ２０−ＩＬ２（EMD/Biovation/City of Hope）；抗ＣＤ２０ＭＡｂ治療（EPiCyte）；および抗ＣＤ２０抗体ＴＲＵ０１５（Trubion）。
【００５２】
本明細書において用語「リツキシマブ」または「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」は、ＣＤ２０抗原に対して指向させられそしてUS Patent No. 5,736,137において「Ｃ２Ｂ８」と命名された、遺伝子工学的に作成されたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体（ＣＤ２０に結合する能力を保持するその断片を含む）を指す。リツキシマブは、Genentechから市販されている。
【００５３】
純粋に本発明の目的で且つ特記しない限り、「ヒト化２Ｈ７」は、ヒトＣＤ２０に結合するヒト化抗体またはその抗原結合性断片を指し、該抗体はインビボで霊長類Ｂ細胞を激減させるのに有効であり、該抗体は、そのＨ鎖可変領域（Ｖ_H）において抗ヒトＣＤ２０抗体からの少なくとも配列番号１２のＣＤＲ Ｈ３配列（図１Ｂ）および実質的にヒトＨ鎖サブグループＩＩＩ（Ｖ_HＩＩＩ）のヒトコンセンサスフレームワーク（ＦＲ）残基を含む。好ましい態様では、この抗体は、配列番号１０のＨ鎖ＣＤＲ Ｈ１配列および配列番号１１のＣＤＲ Ｈ２配列をさらに含み、そしてさらに好ましくは、配列番号４のＬ鎖ＣＤＲ Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ Ｌ２配列、配列番号６のＣＤＲ Ｌ３配列および実質的にヒトＬ鎖サブグループＩ（ＶＩ）のヒトコンセンサスフレームワーク（ＦＲ）残基をさらに含み、該Ｖ_H領域はヒトＩｇＧ鎖定常領域に連結させることができ、この領域は、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３であることができる。好ましい態様では、このような抗体は、配列番号８のＶ_H配列（図１Ｂに示されたｖ１６）を含み、場合により配列番号２のＶ_L配列（図１Ａに示されたｖ１６）も含み、これは該Ｈ鎖におけるＤ５６ＡおよびＮ１００Ａのアミノ酸置換ならびにＬ鎖におけるＳ９２Ａ（ｖ９６）のアミノ酸置換を有していてもよい。好ましくは、抗体は、図２および３に示された、それぞれ、配列番号１３および１４のＬ鎖およびＨ鎖アミノ酸配列を含むインタクト抗体である。他の好ましい態様では、抗体が、図２および４に示された、それぞれ、配列番号１３および１５のＬ鎖およびＨ鎖アミノ酸配列を含む２Ｈ７．ｖ３１である。本発明における抗体は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を改良するＦｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸置換、例えばアミノ酸置換がＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａであるアミノ酸置換をさらに含むことができ、さらに好ましくは、配列番号１５のＨ鎖アミノ酸配列（図４に示された）を有する２Ｈ７．ｖ３１を含むことができる。これらの抗体のいずれも、ＣＤＣ活性を減少するＦｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含むことができ、例えば、少なくとも置換Ｋ３２２Ａを含む。US Patent No. 6,528,624B1 (Idusogie et al）参照。
【００５４】
好ましいヒト化２Ｈ７は、可変Ｌ鎖配列：
【表１】


および可変Ｈ鎖配列：
【表２】


を含むインタクト抗体または抗体断片である。
【００５５】
ヒト化２Ｈ７抗体がインタクト抗体であるときは、好ましくはそれはＬ鎖アミノ酸配列：
【表３】


およびＨ鎖アミノ酸配列：
【表４】


またはＨ鎖アミノ酸配列：
【表５】


を含む。
【００５６】
本発明の好ましい態様では、２Ｈ７バージョン１６に基づく変異体の可変領域は、下表に示されるアミノ酸置換の位置を除いてｖ１６のアミノ酸配列を有するであろう。特記しない限り、２Ｈ７変異体は、ｖ１６のＬ鎖と同じＬ鎖を有するであろう。
【表６】

【００５７】
「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から同定されそして分離されおよび／または回収された抗体である。その天然の環境の汚染物成分は、抗体の診断的使用または治療的使用を妨害する物質であり、そして酵素、ホルモンおよび他のタンパク質溶質または非タンパク質溶質を含むことができる。好ましい態様では、抗体は、（１）Lowry法により決定される抗体９５重量％より高く、最も好ましくは９９重量％より高く、（２）スピニングカップシークエネーター（spinning cup sequenator）の使用によりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を使用する還元または非還元条件下にＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製されるであろう。単離された抗体は、インサイチューで組換え細胞内に抗体を含む。何故ならば、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分は存在しないからである。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも１つの精製段階により調製されるであろう。
【００５８】
本明細書において「被験体」はヒト被験体である。一般に、被験体は、多発性硬化症の処置のために選ばれるのにふさわしい。本発明における目的のために、このような選ばれるのにふさわしい被験体は、多発性硬化症の１つまたは複数の兆候、症状または他の指標を経験しつつあるまたは経験したことがあるまたは経験しそうな被験体；例えば、新規に診断されようと（「新規に発症した」ＭＳを有すると）、以前に新たな再発または再燃を有すると診断されようと、以前に診断されそして寛解等にあろうと、多発性硬化症と診断された被験体；および／または多発性硬化症を発生する危険がある被験体である。多発性硬化症に罹患しているまたは罹患する危険にある被験体は、場合により、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）および／またはＭＳ病変（１つまたは複数）におけるＣＤ２０ポジティブＢ細胞の高められたレベルについてスクリーニングされた被験体としておよび／または自己抗体を検出するためのアッセイを使用ことについてスクリーニングされ、定性的に評価されそして好ましくは定量的に評価される被験体として同定されうる。多発性硬化症と関連した例示的なこのような自己抗体は、抗ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、抗ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、抗ガングリオシドおよび／または抗ニューロフィラメント抗体を含む。このような自己抗体は、被験体の血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）及び／又はＭＳ病変において検出されうる。本明細書において「高められた」自己抗体またはＢ細胞レベル（１つまたは複数）は、ＭＳのない個体におけるレベル（１つまたは複数）を有意に超えるこのような自己抗体またはＢ細胞のレベル（１つまたは複数）を意味する。
【００５９】
本明細書における被験体の「処置」は、治療処置および予防または防止手段の両方を指す。処置を必用としている被験体は、すでに多発性硬化症を有する被験体および多発性硬化症が防止されるべき被験体を含む。従って、被験体は多発性硬化症を有すると診断されていてもよく、または多発性硬化症の素質があるかもしくは多発性硬化症にかかりやすくてもよい。
【００６０】
ＭＳの「症状」は、被験体により経験されそしてＭＳを示す、任意の病的現象（morbid phenomenon）または構造、機能または感覚における正常からの逸脱である。
【００６１】
「多発性硬化症」は、ミエリンの進行性破壊により特徴付けられる中枢神経系の慢性のそしてしばしば機能障害疾患（disabling disease）を指す。ＭＳの４つの国際的に認められた形態、即ち、一次進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）、再発−寛解多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次進行性多発性硬化症（ＳＰＭＳ）および進行性再発多発性硬化症（ＰＲＭＳ）がある。
【００６２】
「一次進行性多発性硬化症」または「ＰＰＭＳ」は、再発と寛解が全然重ならないで疾患がその発症から徐々に進行することにより特徴付けられる。疾患の活性が安定化する（leveling off）期間があってもよく、そして良好なおよび悪い日または週があってもよい。ＰＰＭＳは、発症が典型的には３０代後期または４０代早期にあり、男性は女性と同じように発生しそうであり、そして初期疾患活性はしばしば脊椎にありそして脳にはないという点でＲＲＭＳおよびＳＰＭＳと異なる。ＰＰＭＳは、しばしば脳に移行するが、ＲＲＭＳまたはＳＰＭＳよりは脳区域の損傷が少ないようであり；例えば、ＰＰＭＳを有する人々は、認知問題を生じることがより少ないようである。ＰＰＭＳは、ＭＲＩスキャンにおける炎症性（ガドリニウム増強）病変を示すことが最も少ないようであるＭＳのサブタイプである。疾患の一次進行性形態は、多発性硬化症を有するすべての人々の１０〜１５％を罹患させる。ＰＰＭＳは、McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001）における基準に従って定義されうる。本明細書において処置されたＰＰＭＳを有する被験体は、通常、ＰＰＭＳの可能性のある診断または明白な診断を有する被験体である。
【００６３】
「再発−寛解多発性硬化症」または「ＲＲＭＳ」は、再発（再燃としても知られている）により特徴付けられ、この再発期間中は新たな症状が現れることがありそして古い症状が再び現れたり悪化することがある。再発に続いて、寛解の期間があり、この寛解期間中は、ヒトは再発中に獲得した欠損（deficits）から完全にまたは部分的に回復する。再発は、数日間、数週間または数ヶ月続くことがあり、そして回復はゆっくりおよび徐々に起こるかまたは殆ど即座に起こることがある。ＭＳを有する大多数の人々は最初ＲＲＭＳと診断される。これは典型的には、診断はより早期にまたは後で知られるとしても、彼らは２０代または３０代にあるときである。男性よりも２倍多くの女性がこのサブタイプのＭＳにかかる。再発期間中、中枢神経系（ＣＮＳ）の白質領域における神経線維（ニューロン）のまわりの保護絶縁鞘は、身体の自身の免疫系により炎症性応答において損傷されうる。これは、ＣＮＳのどの区域が損傷されるかに依存して相当変わる多様な神経学的症候を引き起こす。再発の直後、炎症性応答は消え（dies down）、そしてＣＮＳにおける特定のタイプのグリア細胞（オリゴデンドロサイトと呼ばれる）が、再髄鞘形成（remyelination）、即ち、軸索のまわりのミエリン鞘を修復することができるプロセスを支持する。寛解の原因となりうるのはこの再髄鞘形成である。ＲＲＭＳを有する患者の約５０％が疾患発症から１０年以内にＳＰＭＳに転換する。３０年後、この数字は９０％に上昇する。いずれかの時点で、再発−寛解型の疾患はＭＳを有するすべての人々の約５５％になる。
【００６４】
「二次進行性多発性硬化症」または「ＳＰＭＳ」は、再発および僅かな寛解および停滞期状態（plateaux）が重なりまたは重ならないで臨床神経学的損傷の定常的進行により特徴付けられる。ＳＰＭＳを発生するヒトは、２〜４０年以上のいずれかの期間持続していてもよい以前に経験したＲＲＭＳの期間を有するであろう。いかなる重なった再発および寛解も時間がたつとしだいに消えていく傾向がある。疾患の二次進行性相の発症から、機能障害が始まって、ＲＲＭＳ期間中に進行するよりもはるかに速く進行する。しかしこの進行はある個体では依然として極めてゆっくりしていることもある。１０年後、ＲＲＭＳを有する人々の５０％はＳＰＭＳを発生するであろう。２５〜３０年までに、その数字は９０％に上昇するであろう。ＳＰＭＳは、ＲＲＭＳにおけるよりも低いレベルの炎症性病変形成と関連している傾向があるが、疾患の全体的苦しみは増大し続ける。いずれかの時点で、ＳＰＭＳは多発性硬化症を有するすべての人々の約３０％に達する。
【００６５】
「ＰＲＭＳ」で表される「進行性再発多発性硬化症」は、再発と寛解が重なり合った臨床神経学的損傷の定常的な進行により特徴付けられる。再発の直後有意な回復があるが、再発の間に徐々に悪化する症候がある。ＰＲＭＳは多発性硬化症を有する人々の約５％に達する。ある神経学者は、ＰＲＭＳはＰＰＭＳの変異体であると考えている。
【００６６】
表現「有効量」は、多発性硬化症を予防、軽減または処置するために有効な抗体（または他の薬物）の量を指す。このような有効量は、一般に、ＭＳの兆候、症状または他の指標の改善、例えば再発率の減少、機能障害の防止、脳ＭＲＩ病変の数および／または容積の減少、時間を計った２５フィート歩行（timed 25-foot walk）の改善、疾患進行への時間の延長（例えば、拡大障害状態尺度（Expanded Disability Status Scale）、ＥＤＳＳを使用して）等をもたらすであろう。
【００６７】
「抗体暴露」は、本明細書においては約１〜２０日の期間にわたり投与される１つまたは複数の用量で抗体と接触させることまたは抗体に暴露することを指す。用量は、この暴露期間にわたり１回でまたは一定のもしくは不規則な時間間隔で与えられうる。最初の抗体暴露と後の（例えば第２または第３）抗体暴露は、本明細書で詳細に述べられたとおり互いに時間的に分離される。
【００６８】
補助的治療について本明細書で使用される用語「免疫抑制剤」は、本発明で処置されるべき哺乳動物の免疫系を抑制または遮断するように作用する物質を指す。これは、サイトカイン産生を抑制し、自己抗原発現をダウンレギュレーションするかもしくは抑制し、またはＭＨＣ抗原を遮断する（mask）物質を含むであろう。このような作用物質の例は、２−アミノ−６−アリール−５−置換されたピリミジン（US Patent No. 4,665,077を参照のこと）；非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤｓ）；ガンシクロビル、タクロリムス、グルココルチコイド、例えばコルチゾールもしくはアルドステロン、抗炎症剤、例えばシクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、もしくはロイコトリエン受容体アンタゴニスト；プリンアンタゴニスト、例えばアザチオプリンもしくはミコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）；アルキル化剤、例えばシクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（US Patent No. 4,120,649に記載のとおりＭＨＣ抗原を遮断する）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；ステロイド、例えばコルチコステロイドもしくはグルココルチコステロイドまたはグルココルチコイドアナログ、例えばプレドニソン、メチルプレドニソロンおよびデキサメタゾン；ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、例えばメトトレキセート（経口または皮下）；ヒドロキシクロロキン；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト（これは抗インターフェロンα抗体、抗インターフェロンβ抗体もしくは抗インターフェロンγ抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体（インフリキシマブまたはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−αイムノアヘシン（anti-TNF-alpha-immunoahesin）（エタネルセプト）、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン２抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体を含む）；抗ＬＦＡ−１抗体（これは抗ＣＤ１１ａおよび抗ＣＤ１８抗体を含む）；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３抗体もしくは抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（90年7月26日に公開されたWO90/08187）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主からのＲＮＡもしくはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Cohen et al., US Patent No. 5,114,721）；Ｔ細胞受容体断片（Offner et al., Science, 251: 430-432 (1991); WO90/11294; Ianeway, Nature, 341: 482 (1989); およびWO91/01133)；およびＴ細胞受容体抗体（EP340,109）、例えばＴ１０Ｂ９を含む。
【００６９】
本明細書で使用される用語「細胞毒性作用物質」は、細胞の機能を抑制または妨害するおよび／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例えばＡｒ²¹¹、Ｉ¹³¹、Ｉ¹²⁵、Ｙ⁹⁰、Ｒｅ¹⁸⁶、Ｒｅ¹⁸⁸、Ｓｍ¹⁵³、Ｂｉ²¹²、Ｐ³²およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤および毒素、例えば小分子毒素または、バクテリア、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素またはその断片を含むことを意図する。
【００７０】
「化学療法剤」は、癌の処置において有用な化合物である。化学療法剤の例は、アルキル化剤、例えばチオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ（benzodopa）、カルボクオン（carboquone）、メツレドーパ（meturedopa）およびウレドーパ（uredopa）；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（methylamelamines）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミンを含む）；アセトゲニン（特にブルラタシン（bullatacin）およびブルラタシノン（bullatacinone））；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（callystatin）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９および ＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン（eleutherobin）；パンクラチスタチン；サルコジクチイン（sarcodictyin）；スポンジスタチン（spongistatin）；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベムビチン（novembichin）、フェンエステリン（phenesterine）、プレドニムスチン（prednimustine）、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロスウレア（nitrosureas）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチン；抗生剤、例えばエネジイン抗生剤（例えばカリチェアミシン、特にカリチェアミシンγ１ＩおよびカリチェアミシンωＩ１（例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994）参照）；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連したクロモプロテインエネジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシン、、例えばミトマイシンＣ、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、プロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（tubercidin）、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン：抗アドレナール（anti-adrenals）、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補給剤、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デホファミン（defofamine）；デメコルシン（demecolcine）；ジアジクオン（diaziquone）；エルフォルニチン（elfornithine）；酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（“Ａｒａ−Ｃ”）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）パクリタキセルのクレモホールを含まないアルブミン処理された（albumin-engineered）ナノ粒子配合物（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金アナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ（xeloda）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体を含む。
【００７１】
腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するように作用する抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン（ＮＯＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８；オナプリストンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮトレミフェンを含む抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭｓ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲステロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エクセメスタン、ホルメスタニエ（formestanie）、ファドロゾール（fadrozole）、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾールおよびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール；および抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異所細胞増殖（abherant cell proliferation）に関与するシグナリング経路における遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばＰＫＣ−α、ＲＡ１ｆおよびＨ−Ｒａｓ；ワクチン、例えば遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼＩ阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体もこの定義に含まれる。
【００７２】
用語「サイトカイン」は、細胞間メデイエータとして他の細胞に対して作用する１つの細胞集団により放出されるタンパク質の一般的用語である。このようなサイトカインの例はリンホカイン、モノカイン；インターロイキン（ＩＬｓ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；ならびにＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で使用される用語サイトカインは、天然のソースまたは組換え細胞培養物からのタンパク質、ならびに合成により産生される小分子化合物およびその薬学的に許容される誘導体および塩を含む、ネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な同等物を含む。
【００７３】
用語「ホルモン」は、一般に管を有する腺器官により分泌されるポリペプチドホルモンを指す。例えば成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン；アクチビン；ミュラー管抑制物質；およびトロンボポイエチンはホルモンに含まれる。本明細書で使用された用語ホルモンは、天然のソースまたは組換え細胞培養物からのタンパク質、ならびに合成により産生される小分子化合物およびその薬学的に許容される誘導体および塩を含む、ネイティブ配列ホルモンの生物学的に活性な同等物を含む。
【００７４】
用語「成長因子」は、成長を促進するタンパク質を指し、そして例えば肝成長因子；繊維芽細胞成長因子；血管上皮成長因子；神経成長因子、例えばＮＧＦ−β；血小板由来の成長因子；トランホーミング増殖因子（ＴＧＦｓ）、例えばＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン−α、−βおよび−γ；ならびにコロニ−刺激因子（ＣＳＦｓ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）を含む。本明細書で使用される、用語成長因子は、天然ソースからまたは組換え細胞培養物からのタンパク質、ならびに合成により産生される小分子化合物およびその薬学的に許容される誘導体および塩を含む、ネイティブ配列成長因子の生物学的に活性な同等物を含む。
【００７５】
用語「インテグリン」は、細胞が細胞外マトリックスに結合および応答することを可能としそして傷治癒、細胞分化、腫瘍細胞のホーミングおよびアポトーシスなどの種々の細胞機能に関与する受容体タンパク質を指す。それらは、細胞−細胞外マトリックス相互作用および細胞−細胞相互作用に関与する細胞接着受容体の大きなファミリーの一部である。機能的インテグリンは、非共有結合的に結合している、αおよびβと呼ばれる２つの膜貫通糖タンパク質サブユニットからなる。αサブユニットは、βサブユニットと同様に、すべて互いにある相同性を共有する。受容体は、常に１つのα鎖と１つのβ鎖を含有する。例は、α６β１、α３β１、α７β１、ＬＦＡ−１、α４インテグリン等を含む。本明細書で使用された用語インテグリンは、天然ソースからまたは組換え細胞培養物からのタンパク質、ならびに合成により産生される小分子化合物およびその薬学的に許容される誘導体および塩を含む、ネイティブ配列インテグリンの生物学的に活性な同等物を含む。
【００７６】
本明細書において「インテグリンアンタゴニストまたは抗体」の例は、ＬＦＡ−１抗体、例えばGenentechから市販されているエファリズマブ（Efalizumab）（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））；α４インテグリン抗体、例えばBiogenから入手可能なナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））；ジアザサイクリックフェニルアラニン誘導体（WO2003/89410）；フェニルアラニン誘導体（WO2003/70709、WO2002/28830、WO2002/16329およびWO2003/53926）；フェニルプロピオン酸誘導体（WO2003/10135）；エナミン誘導体（WO2001/79173）；プロパン酸誘導体（WO2000/37444）；アルカン酸誘導体（WO2000/32575）；置換されたフェニル誘導体（US Patent Nos.6,677,339および 6,348,463）；芳香族アミン誘導体（US Patent No. 6,369,229）；およびＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド（US2002/0042368）、αｖβ３インテグリンに対する抗体（EP 633945）；アザ橋かけされた二環式アミノ酸誘導体（WO2002/02556）等を含む。
【００７７】
本発明の目的のために、「腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）」は、Pennica et al., Nature, 312: 721 (1984)またはAggarwal et al., JBC, 260: 2345 (1985)に記載のアミノ酸配列を含むヒトＴＮＦ−α分子を指す。
【００７８】
本明細書における「ＴＮＦ−α阻害剤」は、一般にＴＮＦ−αに結合しそしてその活性を中和することにより、ＴＮＦ−αの生物学的機能をある程度阻害する作用物質である。本明細書で特に意図されるＴＮＦ阻害剤の例は、エタネルセプト（Etanercept）（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））を含む。
【００７９】
「疾患修飾抗リウマチ薬物」または「ＤＭＡＲＤｓ」の例は、ヒドロキシクロロキン、サルファサラジン、メトトレキセート、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ（＋経口および皮下メトロトレキセート）、アザチオプリン、Ｄ−ペニシラミン、金（経口）、金（筋肉内）、ミノサイクリン、シクロスポリン、ブドウ球菌タンパク質Ａ免疫吸着（それらの塩および誘導体を含む）などを含む。
【００８０】
「非ステロイド抗炎症性薬物」または「ＮＳＡＩＤｓ」は、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、トルメチン（それらの塩または誘導体を含む）などを含む。
【００８１】
「コルチコステロイド」は、天然に存在するコルチコステロイドの効果を模倣するかまたは増大させるステロイドの一般的化学構造を有するいくつかの合成のまたは天然に存在する物質のいずれかを指す。合成コルチコステロイドの例は、プレドニソン、プレドニソロン（メチルプレドニソロンを含む）、デキサメタゾン、グルチコルチコイドおよびβメタゾンを含む。
【００８２】
「パッケージインサート」は、適応、使用、用量、投与、禁忌、パッケージされる製造物と組み合わされるべき他の治療製造物および／またはこのような治療製造物の使用に関する警告等に関する情報を含有する治療製造物の市販パッケージに普通に含まれる指示を指すために使用される。
【００８３】
II．治療
本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する有効量の抗体（好ましくはＣＤ２０抗体）を多発性硬化症に罹患している被験体に投与することを含む、多発性硬化症に罹患している被験体における多発性硬化症を処置する方法を提供する。本発明において処置されるべきＭＳは、一次進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）、再発−寛解多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次進行性多発性硬化症（ＳＰＭＳ）および進行性再発多発性硬化症（ＰＲＭＳ）を含むが、ＰＰＭＳまたはＲＲＭＳの治療は本発明では好ましい態様である。
【００８４】
好ましい投薬プロトコールに従えば、この方法は、有効量のＣＤ２０抗体を多発性硬化症被験体に投与して、約０．５〜４グラム（好ましくは約１．５〜２．５グラム）の最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４グラム（好ましくは約１．５〜２．５グラム）の第二抗体暴露を与え、第二抗体暴露は、最初の抗体暴露から約１６〜６０週間まで与えられない、ことを含む。本発明の目的で、第二抗体暴露は、被験体が最初の抗体暴露の後ＣＤ２０抗体で処理される次の回であり、最初の暴露と第二の暴露との間に入るＣＤ２０抗体処理または暴露はない。
【００８５】
最初の抗体暴露と第二または次の抗体暴露との間の間隔は、最初の抗体暴露の第１用量または第２用量から測定することができるが、好ましくは最初の抗体暴露の第１用量から測定することができる。
【００８６】
本発明における好ましい態様では、抗体暴露は約２４週もしくは６ヶ月離れているかまたは約４８週もしくは１２ヶ月離れている。
【００８７】
１つの態様では、第二抗体暴露は、最初の暴露から約２０〜３０週まで与えられず、場合により次いで約０．５〜４グラム（好ましくは約１．５〜２．５グラム）の第三抗体暴露が与えられ、第三抗体暴露は最初の抗体暴露から約４６〜６０週（好ましくは約４６〜５４週）まで行われず、次いで好ましくはさらなる抗体暴露は最初の抗体暴露から少なくとも約７０〜７５週まで与えられない。
【００８８】
別の態様では、第二抗体暴露は最初の暴露から約４６〜６０週まで与えられず、そして次の抗体暴露は、もしあるとすれば、前の抗体暴露から約４６〜６０週まで与えられない。
【００８９】
本発明における任意の１つまたは複数の抗体暴露は、単一用量の抗体としてまたは２つの別々の用量の抗体として（即ち第１用量および第２用量を構成する）、被験体に与えられることができる。各抗体暴露のために使用される用量の特定の数（１であろうが２であろうが）は、例えば、処置されるＭＳのタイプ、使用される抗体のタイプ、第２の医薬が使用されるかどうかおよびどのタイプの第２の医薬が使用されるか、ならびに投与の方法および頻度に依存する。２つの別々の用量が投与される場合には、第２用量は第１の用量が投与されたときから約３〜１７日、さらに好ましくは約６〜１６日、最も好ましくは約１３〜１６日に投与されるのが好ましい。２つの別々の用量が投与される場合には、抗体の第１および第２用量は、好ましくは約０．５〜１．５グラム、さらに好ましくは約０．７５〜１．３グラムである。
【００９０】
１つの態様では、被験体は、抗体の少なくとも約３回のまたは少なくとも４回の暴露、例えば約３〜６０回、さらに特定的には約３〜４０回、最も特定的には約３〜２０回の暴露を与えられる。好ましくは、このような暴露は約２４週もしくは６ヶ月、または４８週もしくは１２ヶ月の間隔で行なわれる。１つの態様では、各抗体暴露は単一用量の抗体として与えられる。別の態様では、各抗体暴露は、２つの別々の用量の抗体として与えられる。しかしながら、すべてではない抗体暴露が、単一用量としてまたは２つの別々の用量として与えられる必要がある。
【００９１】
抗体は、裸の抗体であることができ、または他の分子、例えば細胞毒性作用物質、例えば放射性化合物とコンジュゲートを形成していてもよい。本発明における好ましい抗体は、リツキシマブ、ヒト化２Ｈ７（例えば配列番号２および８における可変ドメイン配列を含む）または配列番号２３および２４における可変ドメイン配列を含むヒト化２Ｈ７、またはｈｕＭＡＸ−ＣＤ２０（Genmab）である。
【００９２】
１つの態様では、被験体は、多発性硬化症を処置するために、薬物（１つまたは複数）、例えば免疫抑制剤（１つまたは複数）により前もって決して処置されておらず、および／またはＢ細胞表面マーカーに対する抗体により前もって決して処置されていない（例えばＣＤ２０抗体により前もって決して処置されない）。
【００９３】
抗体は、非経口的、局所的、皮下、腹腔内、肺内、鼻内および／または病巣内投与を含む適当な手段により投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与を含む。鞘内投与も意図される（例えばＣＤ２０抗体の鞘内送達に関してはUS Patent Appln No. 2002/0009444, Grillo-Lopez, A 参照）。さらに、抗体は、パルス注入、例えば抗体の減退性用量（declining doses）により適当に投与することができる。好ましくは、投薬は、静脈内に、皮下にまたは鞘内に、最も好ましくは静脈内注入（１つまたは複数）により与えられる。
【００９４】
ＣＤ２０抗体は多発性硬化症を処置するために被験体に投与される唯一の薬物であることができるが、場合により第２医薬、例えば細胞毒性作用物質、化学療法剤、免疫抑制剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニストまたは抗体、成長因子、ホルモン、インテグリン、インテグリンアンタゴニストもしくは抗体（例えば、ＬＦＡ−１抗体、例えばGenentechから市販されているエファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））またはBiogenから入手可能なナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））等を、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体と共に（例えばＣＤ２０抗体と共に）投与してもよい。
【００９５】
組合せ治療の好ましい態様では、抗体は、インターフェロンクラス薬物、例えばＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）およびＡＶＯＮＥＸ（登録商標））またはＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））；オリゴペプチド、例えば酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））；細胞毒性作用物質、例えばミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））；メトトレキセート、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン；静脈内免疫グロブリン（γグロブリン）；リンパ球欠乏化治療（例えば、ミトキサントロン、シクロホスファミド、カムパス（Campath）、抗ＣＤ４、クラドリビン、全身照射、骨髄移植）；全身性コルチコステロイド治療を含むコルチコステロイド（例えばメチルプレドニソロン、プレドニソン、デキサメタゾンまたはグルコルチコイド）；非リンパ球欠乏化免疫抑制治療（例えばマイコフェノレートモフェティル（ＭＭＦ）またはシクロスポリン）；セリバスタチン（ＢＡＹＣＯＬ（登録商標））、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標））、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標））、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標））、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標））；シムバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標））を含む「スタチン」クラスのコレステロール低下薬物；エストラジオール；テストステロン（場合により高められた投与量で；Stuve et al. Neurology 8: 290-301 (2002)）；ホルモン置換治療；二次またはＭＳに関する症状（例えば、けい直、失禁、痛み、疲労）のための処置；ＴＮＦ阻害剤；疾患改変抗リウマチ薬物（ＤＭＡＲＤ）；非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；プラズマフェレーシス；レボチロキシン；シクロスポリンＡ；ソマトスタチンアナログ；サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト；代謝拮抗物質；免疫抑制剤；リハビリテーション手術；放射性ヨウ素；甲状腺摘出術；他のＢ細胞表面アンタゴニスト／抗体；等と組み合わされる。
第２医薬は、ＣＤ２０抗体の最初の暴露および／または後の暴露と共に投与され、このような組み合わせた投与は別々の処方剤（separate formulations）もしくは単一の医薬処方剤（single pharmaceutical formulation）を使用する共投与、およびいずれかの順序での連続的投与（consecutive administration）であって、その際好ましくは時間間隔があるが、両（またはすべての）有効作用物質が同時にそれらの生物学的活性を及ぼす、連続的投与を含む。
【００９６】
被験体への抗体の投与の他に、本願は、遺伝子治療による抗体の投与を意図する。抗体をコードする核酸のこのような投与は、「有効量」の抗体を投与する発現により包含される。例えば細胞内抗体を発生させるための遺伝子治療の使用に関しては、1996年3月14日に公開されたWO96/07321参照。
【００９７】
被験体の細胞に核酸（場合によりベクターに含まれた）を入れるための２つの主要なアプローチがあり、即ちインビボおよびエクスビボである。インビボ送達のために、核酸は通常抗体が必要とされる部位で直接被験体に注射される。エクスビボ処置のためには、被験体の細胞を取り出し、核酸をこれらの単離された細胞に導入し、そして修飾された細胞を被験体に直接投与するか、または例えば被験体に移植される多孔性膜内にカプセル化する（US Patent Nos. 4,892,538および5,283,187参照）。核酸を生きている細胞に導入するための多様な技術がある。この技術は、核酸をインビトロで培養された細胞に導入するかまたは意図する宿主の細胞にインビボで導入するかどうかに依存して変わる。インビボで哺乳動物細胞への核酸の導入のために適当な技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法等の使用を含む。遺伝子のエクスビボ送達のために普通に使用されるベクターはレトロウイルスである。
【００９８】
最近の好ましいインビボ核酸導入技術は、ウイルスベクター（例えばアデノウイルス、Ｉ型単純ヘルペスウイルスまたはアデノ随伴ウイルス）および脂質をベースとするシステム（遺伝子の脂質媒介導入のために有用な脂質は、例えばDOTMA、DOPEおよびDC-Cholである）によるトランスフェクションを含む。ある状況では、核酸ソースに、標的細胞を標的化する作用物質、例えば細胞表面膜タンパク質または標的細胞に対して特異的な抗体、標的細胞上の受容体に対するリガンド等を与えることが望ましい。リポソームが使用される場合には、エンドサイトーシスと関連した細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質を、例えば特定の細胞型を指向するキャプシドタンパク質またはその断片、環化におけるインターナリゼーションを受けるタンパク質のための抗体および細胞内局在化を標的化しそして細胞内半減期を高めるタンパク質を、標的化するためおよび／または取り込みを促進するために使用することができる。受容体媒介エンドサイトーシスの技術は、例えばWu et al., J.Biol. Chem.262: 4429-4432 (1987）；およびWagner et al., Proc. Natl.Acad.Sci.USA 87: 3410-3414 (1990）に記載されている。最近知られた遺伝子標識および遺伝子治療プロトコールの概観については、Anderson et al., Science 256: 808-813 (1992）参照。WO93/25673およびそれに引用された文献も参照されたい。
【００９９】
ＩＩＩ 抗体の産生
本発明の方法および製造物は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体、特にＣＤ２０に結合する抗体を使用するかまたは含む。従って、このような抗体を発生させるための方法をここに説明する。
【０１００】
抗体の産生、またはスクリーニングのために使用されるべきＢ細胞表面マーカーは、例えば、所望のエピトープを含有するマーカーまたはその一部の可溶性形態であることができる。替わりにまたは追加的に、それらの細胞表面にマーカーを発現する細胞を使用して抗体を発生させまたはスクリーニングすることができる。抗体を発生させるのに有用なＢ細胞表面マーカーの他の形態は当業者には明らかであろう。
【０１０１】
本発明に従って使用される抗体の産生のための例示的技術についての説明は下記のとおりである。
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、適切な抗原およびアジュバントの多重皮下（ＳＣ）または腹腔内（ｉｐ）注射により動物において生じさせられる。それは、二官能性作用物質または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介するコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ₂、またはＲ¹Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ¹は異なるアルキル基である）を使用して、免疫されるべき種において免疫原性であるタンパク質、例えばスカシ貝ヘモシアニン（keyhole limpet hemocyanin）、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤に適切な抗原をコンジュゲートさせるのに有用でありうる。
【０１０２】
動物を、抗原、免疫原性コンジュゲートまたは誘導体に対して、例えば１００μgまたは５μgの該タンパク質またはコンジュゲート（それぞれ、ウサギまたはマウスについて）を３容積の完全フロイントアジュバントと組合せそしてその溶液を多重部位で皮内に注射することにより、免疫感作させる。１ヶ月後に、動物を、完全フロイントアジュバント中の最初の量の１／５〜１／１０の量のペプチドまたはコンジュゲートで多重部位での皮下注射によりブーストする。７〜１４日後に、動物を出血させそして血清を抗体力価についてアッセイする。力価が停滞状態（plateaus）に達するまで動物をブーストする。好ましくは、動物を、同じ抗原のコンジュゲートであって、しかし異なるタンパク質におよび／または異なる架橋試薬によりコンジュゲートされたコンジュゲートでブーストする。コンジュゲートは、タンパク質融合物として組換え細胞培養において作成することもできる。免疫応答を増強するためにみょうばんなどの凝集剤も適当に使用する。
【０１０３】
（ii）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団から得られる、即ち、集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の製造期間中に生じる可能な変異体（このような変異体は一般に少量存在する）を除いては、同一でありおよび／または同じエピトープに結合する。従って、修飾語「モノクローナル」は、別個の抗体またはポリクローナル抗体の混合物ではないという抗体の性質を示す。
【０１０４】
例えば、モノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975)により記載されたハイブリドーマ法を使用して作成することができ、または組換えＤＮＡ法により作成することができる（US Patent No. 4,816,567）。
【０１０５】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターを、上記に記載のとおりに免疫感作させて、免疫感作のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することができるリンパ球を誘発させる。または、リンパ球をインビトロで免疫感作させることができる。次いでリンパ球を、適当な融合剤、例えばポリエチレングリコールを使用してミエローマ細胞に融合させてハイブリドーマ細胞を形成する（Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,pp.59-103 (Academic Press, 1986）。
【０１０６】
このようにして作成されたハイブリドーマ細胞を、融合されなかった親ミエローマ細胞の成長または増殖を阻害する１種または複数の物質を好ましくは含有する適当な培養培地中に播種しそして成長させる。例えば、親ミエローマ細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いているならば、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的にはヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含むであろう（ＨＡＴ培地）。これらの物質はＨＧＰＲＴ欠失細胞の成長を阻止する。
【０１０７】
好ましいミエローマ細胞は、有効に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの産生を支持しそしてＨＡＴ培地などの培地に感受性であるミエローマ細胞である。これらの中でも、好ましいミエローマ細胞系は、マウスミエローマ細胞系、例えば、Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USAから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するマウスミエローマ細胞系ならびにAmerican Type Culture Collection, Rockville, Maryland USAから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系も、ヒトモノクローナル抗体の産生のために記載されている（Kozbor, J. Immunol., 133.3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Deckker, Inc., New York, 1987)）。
【０１０８】
ハイブリドーマ細胞を増殖させる培養培地は、抗原に対して指向されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈殿により又はインビトロ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合イムノアブソーベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）により決定される。
【０１０９】
モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、例えばMunson et al., Anad. Biochem., 107: 220 (1980）のスキャッチャード分析により決定されうる。
【０１１０】
所望の特異性、アフィニティーおよび／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によりサブクローニングしそして標準方法により増殖させることができる（Goding, Monoclonal Antibodies: Principle and Practice,pp.59-103 (Academic Press, 1986)）。この目的に適当な培養培地は、例えばＤ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。
【０１１１】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、培養培地、腹水または血清から、慣用の免疫グロブリン精製手順、例えばプロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーにより適当に分離される。
【０１１２】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣用の手順（例えば、マウス抗体のＨ鎖およびＬ鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）を使用して容易に単離されそして配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましいソースとして役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置することができ、発現ベクターは次いで宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、類人サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の場合には免疫グロブリンタンパク質を産生しないミエローマ細胞中にトランスフェクションして、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を達成することができる。抗体をコードするＤＮＡのバクテリアにおける組換え発現に関する概説論文は、Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5: 256-262 (1993)およびPlueckthum, Immunol. Revs., 130: 151-188 (1992)を含む。
【０１１３】
さらなる態様では、McCafferty et al., Nature, 348: 552-554 (1990)に記載の技術を使用して抗体ファージライブラリーから抗体又は抗体断片を単離することができる。Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)およびMarks et al., J.Mol.Biol., 222: 581-597 (1991)は、それぞれ、ファージライブラリーを使用するマウスおよびヒト抗体の単離を記載している。その後の刊行物は、鎖シャッフリング（Marks et al., Bio/Technology,10: 779-783 (1992)）ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてのコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21: 2265-2266 (1996)）による高アフィニティー（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生を記載している。かくして、これらの技術はモノクローナル抗体の単離のための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に替わる実用的な代替方法である。
【０１１４】
ＤＮＡは、例えば相同性マウス配列の代わりにヒトＨ鎖およびＬ鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより（US Patent No. 4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 81: 6851 (1984)）、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてまたは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合により結合させることにより、修飾することもできる。
【０１１５】
典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに置換され又はそれらは抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに置換されて、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位および異なる抗原に対する特異性を有する他の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を創り出す。
【０１１６】
（iii）ヒト化抗体
非ヒト抗体をヒトに適合させるための方法は、当技術分野において記載されている。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトであるソースからそれに導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「輸入」残基（"import" residues）と呼ばれ、これは典型的には「輸入」可変ドメインから取られる。ヒト適合化は、本質的に、ヒト抗体の対応する配列の代わりに超可変領域配列を置き換えることにより、Winterおよび共同研究者の方法 (Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature,332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)）に従って行うことができる。従って、このような「ヒト化」抗体は、インタクトヒト可変ドメインより実質的に少ない配列が非ヒト種からの対応する配列により置換されている、キメラ抗体である（US Patent No. 4,816,567）。実際に、ヒト化抗体は、典型的には、ある超可変領域残基及び場合によりいくらかのＦＲ残基がげっ歯類抗体における類似部位からの残基により置換されているヒト抗体である。
【０１１７】
ヒト化抗体を作成するために使用されるべきＬ鎖及びＨ鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少させるのに非常に重要である。いわゆる「最善に適合した（"best-fit"）方法に従えば、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列の全体ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類の配列に最も近似したヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として受け入れられる（Sims et al., J.Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia et al., J.Mol. Biol., 196: 901) (1987)）。他の方法は、Ｌ鎖又はＨ鎖可変領域の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用することができる（Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992); Presta et al., J.Immunol., 151: 2623 (1993)）。
【０１１８】
抗体が、抗原に対する高いアフィニティーおよび他の有利な生物学的性質を保持してヒトに適合されることはさらに重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従えば、ヒト化抗体は、親のそしてヒトに適合した配列の三次元モデルを使用して、親配列および種々の概念のヒトに適合した産物の分析方法により作成される。三次元免疫グロブリンモデルは普通に入手可能でありそして当業者に熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の有望な（probable）三次元コンホーメーション構造を図解しそしてディスプレーするコンピュータープログラムが入手可能である。これらのディスプレーの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の見込みのある役割（likely role）の分析、即ち、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能とする。この方法では、ＦＲ残基は、所望の抗体特性、例えば、標的抗原（１種または複数）に対する増加したアフィニティーが達成されるように、レシピエントおよび輸入配列から選択されそして組み合わされることができる。一般に、超可変領域残基は、抗原結合に影響を与えることに直接且つ最も実質的に関与している。
【０１１９】
（iv）ヒト抗体
ヒトへの適合に替わるものとして、ヒト抗体を発生させることができる。例えば、免疫感作されると、内在性免疫グロブリン産生の不存在下に完全なレパートリーのヒト抗体を産生することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を作成することが今や可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異体マウスにおける抗体Ｈ鎖連結領域（Ｊ_H）遺伝子のホモ接合性欠失（homozygous deletion）が内在性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖細胞系突然変異体マウスへのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレーの導入は、抗原チャレンジするとヒト抗体の産生をもたらすであろう。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7: 33 (1993); およびUS Patent Nos.5,591,669、5,589,369および5,545,807を参照されたい。
【０１２０】
または、ファージディスプレー技術（McCafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990)）は、免疫感作されていないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗体断片を産生するために使用することができる。この技術に従えば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３またはｆｄのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングし（cloned in-frame）、そしてファージ粒子の表面に機能的抗体断片としてディスプレーされる。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的性質に基づく選択は、これらの性質を示す抗体をコードする遺伝子の選択ももたらす。従って、ファージは、Ｂ細胞の性質のいくらかを模倣する。ファージディスプレーは種々のフォーマットで行うことができ；それらの概説については、例えば、Johnson, Kevin S and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3: 564-571 (1993)を参照されたい。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかのソースをファージディスプレーのために使用することができる。Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)は、免疫感作されたマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様なアレーを単離した。Marks et al., J. Mol. Biol.222: 581-597 (1991)またはGriffith et al., EMBO J. 12: 725-734 (1993)により記載された技術に従って、免疫感作されていないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築することができそして抗原（自己抗原を含む）の多様なアレーに対する抗体を、本質的に単離することができる。US Patent No. 5,565,332および5,573,905も参照されたい。
【０１２１】
ヒト抗体はインビトロで活性化されたＢ細胞により発生させることもできる（US Patents 5,567,610および 5,229,275参照）。
【０１２２】
（ｖ） 抗体断片
抗体断片の産生のために種々の技術が開発された。伝統的には、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化により誘導された（例えば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992)およびBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)参照）。しかしながら、これらの断片は、今や組換え宿主細胞により直接産生されうる。例えば、抗体断片は、上記した抗体ファージライブラリーから単離することができる。または、Ｆａｂ’−ＳＨ断片はＥ．ｃｏｌｉから直接回収することができ、そして化学的にカップリングさせてＦ（ａｂ’）₂ 断片を形成することができる（Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)）。他のアプローチに従えば、Ｆ（ａｂ’）₂ 断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体断片を産生するための他の技術は当業者には明らかであろう。他の態様では、えり抜きの抗体は一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。WO93/16185; US Patent No. 5,571,894; およびUS Patent No. 5,587,458参照。抗体断片は、例えばUS Patent No. 5,641,870に記載の「線状抗体」であることもできる。このような線状抗体断片は単一特異性又は二重特異性であることができる。
【０１２３】
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープに結合することができる。他のこのような抗体は、Ｂ細胞表面マーカーに結合することができ、そしてさらに第２の異なるＢ細胞表面マーカーに結合することができる。または、抗Ｂ細胞表面マーカー結合アーム（anti-B cell surface marker binding arm）を、白血球上のトリガリング分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えばＣＤ２もしくはＣＤ３）、またはＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わせて、細胞防御機構をＢ細胞に集中させることができる。二重特異性抗体を使用して細胞毒性作用物質をＢ細胞に局在させることもできる。これらの抗体は、Ｂ細胞表面マーカー結合アームおよび細胞毒性作用物質（例えばサポリン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセートまたは放射性同位元素ハプテン）に結合するアームを有する。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片（例えばＦ（ａｂ’）₂ 二重特異性抗体）として調製されうる。
【０１２４】
二重特異性抗体を製造するための方法は当技術分野で知られている。完全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの免疫グロブリンＨ鎖−Ｌ鎖ペアーの共発現に基づいており、その際２つの鎖は異なる特異性を有している（Millstein et al., Nature, 305: 537-539 (1983)）。免疫グロブリンＨ鎖及びＬ鎖の無作為の取り合わせのゆえに、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、そのうちの唯１種が正しい二重特異性構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー段階によりなされる正しい分子の精製は、どちらかといえば厄介であり、そして産物の収率は低い。同様な手順がWO93/08829およびTraunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991)に開示されている。
【０１２５】
異なるアプローチに従えば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。融合は、好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリンＨ鎖定常ドメインとの融合である。融合体の少なくとも１つに存在する、Ｌ鎖結合のために必用な部位を含有する第１Ｈ鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリンＨ鎖融合物及び所望により免疫グロブリンＬ鎖をコードするＤＮＡｓを別々の発現ベクターに挿入しそして適当な宿主生物に共トランスフェクションする。これは、構築において使用される３つのポリペプチド鎖の等しくない割合が最適収率を与える態様において、３つのポリペプチド断片の相互の割合を調節するのに大きな融通性を与える。しかしながら、等しい割合の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い収率をもたらすとき又は割合が特別な意味を持たないとき、１つの発現ベクターに２つまたはすべての３つのポリペプチド鎖のためのコード配列を挿入することが可能である。
【０１２６】
このアプローチの好ましい態様では、二重特異性抗体は、１つのアームにおける第１結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリンＨ鎖および他のアームにおけるハイブリッド免疫グロブリンＨ鎖−Ｌ鎖ペア（第２結合特異性を与える）からなる。この非対称性構造は、望まない免疫グロブリン鎖の組み合わせから所望の二重特異性化合物の分離を促進することが見出された。何故ならば、二重特異性分子の半分のみに免疫グロブリンＬ鎖が存在することは容易な分離方法を与えるからである。このアプローチはWO94/04690に開示されている。二重特異性抗体を発生させることの更なる詳細については、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986)を参照されたい。
【０１２７】
US Patent No. 5,731,168に記載の他のアプローチに従えば、抗体分子のペアの間の界面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の百分率を最大にするために操作することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣ_H３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの１つまたは複数の小さなアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きいアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えばアラニンまたはトレオニン）で置き換えることにより、第２抗体分子の界面に、大きな側鎖（１つまたは複数）と同じまたは同様なサイズの補償「空洞」（compensatory "cavities"）が創り出される。これは、ホモ二量体などの他の望まれない最終産物を超えるヘテロ二量体の収率を増加させる機構を与える。
【０１２８】
二重特異性抗体は、架橋した抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の１つはアビジンにカップリングさせることができ、他方の抗体はビオチンにカップリングさせることができる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を望まない細胞に標的化するために提唱され（US Patent No. 4,676,980）、そしてＨＩＶ感染の処置のために提唱された（WO91/00360 、WO92/200373および EP03089）。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の便利な架橋法を使用して作成することができる。適当な架橋剤は、多数の架橋技術と共に、当技術分野で周知されておりそしてUS Patent No. 4,676,980に開示されている。
【０１２９】
抗体断片から二重特異性抗体を発生させる技術も文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は化学結合を使用して調製することができる。Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)は、インタクト抗体をタンパク質分解により開裂してＦ（ａｂ’）₂断片を発生させる方法を記載している。これらの断片を、ジチオール複合化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下に還元して近接ジチオールを安定化させそして分子間ジスルフィド形成を防止する。次いで発生したＦａｂ’断片をチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転換する。次いでＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つをメルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’−チオールに再転換し、そして等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して二重特異性抗体を形成させる。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための作用物質として使用することができる。
【０１３０】
組換え細胞培養物から直接二重特異性抗体断片を作成しそして単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して産生された。Kostelny et al., J. Immunol., 148 (5): 1547-1533 (1992)。FosおよびJunタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは遺伝子融合により２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結させた。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元して一量体を形成を形成し、次いで再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成する。この方法は、抗体ホモ二量体の産生のために利用することもできる。Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により記載された「二重特異性抗体（diabody）」技術は、二重特異性抗体断片を作成するための別の機構を与えた。断片を、同じ鎖上の２つのドメイン間でペアの形成を可能とするにはあまりにも短すぎるリンカーによりＬ鎖可変ドメイン（Ｖ_L）に連結されたＨ鎖可変ドメイン（Ｖ_H）を含む。従って、１つの断片のＶ_HおよびＶ_Lドメインは、他の断片の相補性Ｖ_LおよびＶ_Hドメインとペアを形成するように強制され、それにより２つの抗原結合部位を形成する。単一鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用による二重特異性抗体断片を作成するための他のストラテジーも報告されている。Gruber et al., J. Immunol., 152: 5368 (1994)参照。
【０１３１】
２より多くの結合価を有する抗体が意図される。例えば、三重特異的抗体を作成することができる。Tutt et al., J.Immunol. 147: 60 (1991)。
【０１３２】
IV 抗体のコンジュゲートおよび他の修飾
本明細書において方法で使用される抗体または製造物に含まれる抗体は、場合により細胞毒性作用物質にコンジュゲートされる。例えば、抗体は、WO2004/032828に記載のとおりの薬物にコンジュゲートさせることができる。
【０１３３】
このような抗体−細胞毒性作用物質コンジュゲートの発生に有用な化学療法剤は上記した。
【０１３４】
抗体と１種または複数の小分子毒素、例えばカリチェアミシン、メイタンシン（US Patent No. 5,208,020）、トリコテン（trichothene）およびＣＣ１０６５とのコンジュゲートも本発明において意図される。本発明の１つの態様では、抗体を１つまたは複数のメイタンシン分子にコンジュゲートさせる（例えば抗体分子当たり約１〜約１０個のメイタンシン分子）。メイタンシンは、例えば、Ｍａｙ−ＳＳ−Ｍｅに転換することができ、これをＭａｙ−ＳＨ３に還元しそして修飾された抗体と反応させて（Chari et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)）メイタンシノイド−抗体コンジュゲートを発生させることができる。
【０１３５】
または、抗体を１つまたは複数のカリチェアミシン分子にコンジュゲートさせる。カリチェアミシンファミリーの抗生物質は、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることができる。使用することができるカリチェアミシンの構造的アナログは、γ₁^Ｉ、α₂^Ｉ、α₃^Ｉ、Ｎ−アセチル−γ₁^Ｉ、ＰＳＡＧおよびθ^Ｉ₁を含むが、それらに限定されるわけではない（Hinman et al. Cancer Research 53: 3336-3342 (1993)およびLode et al. Cancer Research 53: 2925-2928 (1998)）。
【０１３６】
使用することができる酵素的に活性な毒素およびその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（Pseudomonas aeruginosaからの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、Aleurites fordiiプロテイン、ジアンシンプロテイン（dianthin proteins）、Phytolaca americanaプロテイン（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、momordica charantia阻害剤、クルシン、クロチン（crotin)、sapaonaria officinalis阻害剤、ゲロニン（gelonin）、ミトゲリン（mitogellin）、レストリクトシン（restrictocin）、フェノマイシン（phenomycin）、エノマイシン（enomycin）、およびトリコテセン類（tricothecenes）を含む。例えば、１９９３年１０月２８日に公開されたWO93/21232参照。
【０１３７】
本発明は、核酸分解活性（nucleolytic activity）を有する化合物（例えばリボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮアーゼ）とコンジュゲートした抗体をさらに意図する。
【０１３８】
放射性コンジュゲートした抗体（radioconjugated antibodies）の産生のための種々の放射性同位元素が利用可能である。例は、Ａｔ²¹¹、Ｉ¹³¹、Ｉ¹²⁵、Ｙ⁹⁰、Ｒｅ¹⁸⁶、Ｒｅ¹⁸⁸、Ｓｍ¹⁵³、Ｂｉ²¹²、Ｐ³²およびＬｕの放射性同位元素を含む。
【０１３９】
抗体と細胞毒性作用物質とのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えばグルタレルデヒド（glutareldehyde））、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えばビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトリレン ２，６−ジイソシアネート）およびビス−活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作成することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al. Science 238: 1098 (1987)に記載されたように調製することができる。炭素１４標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミノペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体に対する放射性ヌクレオチドのコンジュゲーションのための例示的キレート剤である。WO94/11026参照。リンカーは、細胞における細胞毒性薬物の放出を容易にする「開裂可能なリンカー」であることができる。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Chari et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)）を使用することができる。
【０１４０】
または、抗体と細胞毒性作用物質を含む融合タンパク質を、例えば組換え技術またはペプチド合成により作成することができる。
【０１４１】
さらに他の態様では、抗体−受容体コンジュゲートを被験体に投与し、次いで結合しなかったコンジュゲートを清浄化剤を使用して循環から除去し、次いで細胞毒性作用物質（例えば放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートされる「リガンド」（例えばアビジン）を投与する、腫瘍予備ターゲティングにおいて利用するために、抗体を「受容体（例えばストレプトアビジン）にコンジュゲートさせることができる。
【０１４２】
本発明の抗体は、プロドラッグ（例えばペプチジル化学療法剤、WO81/01145参照）を活性な抗癌薬物に転換するプロドラッグ活性化酵素とコンジュゲートさせることもできる。例えばWO88/07378およびUS Patent No. 4,975,278参照。
【０１４３】
このようなコンジュゲートの酵素成分は、プロドラッグをそのより活性な細胞毒性形態に転換するようにプロドラッグに作用することができる任意の酵素を含む。
【０１４４】
本発明の方法において有用な酵素は、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物（free drugs）に転換するために有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用なアリールスルファターゼ；無毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬物、５−フルオロウラシルに転換するために有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用なプロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、ズブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えばカテプシンＢおよびＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを転換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に転換するために有用な炭水化物開裂酵素、例えばβ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に転換するために有用なβ−ラクタマーゼ；およびそれぞれフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基でペニシリンのアミン窒素において誘導体化された薬物を遊離薬物に転換するために有用なペニシリンアミダーゼ、例えばペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼを含むが、それらに限定されるわけではない。または、「アブザイム」としても当技術分野で知られている、酵素活性を有する抗体を使用して本発明のプロドラッグを遊離活性薬物に転換させることができる（Massey, Nature 328: 457-458 (1987)。抗体−アブザイムコンジュゲートは、腫瘍細胞集団へのアブザイムの送達について本明細書で記載されたようにして調製することができる。
【０１４５】
本発明の酵素は、当技術分野で周知の技術により、例えば上記したヘテロ二官能性架橋試薬の使用により抗体に共有結合させることができる。または、本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部分に結合させた本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質は、当技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる（例えばNeuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984)参照）。
【０１４６】
本発明において抗体の他の修飾が意図される。例えば、抗体を、種々の非タンパク質ポリマーの１つ、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーに結合させることができる。１つまたは複数のＰＥＧ分子に結合させた抗体断片、例えばＦａｂ’は、本発明の特に好ましい態様である。
【０１４７】
本明細書で開示された抗体は、リポソームとして処方されてもよい。抗体を含有するリポソームは当技術分野で知られた方法、例えば、Epstein et al., Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); US Patent Nos.4,485,045および4,544,545; ならびに1997年10月23日に公開されたWO97/38731に記載の方法により調製される。高められた循環時間を有するリポソームは、US Patent No. 5,013,556に開示されている。
【０１４８】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ−誘導体化されたホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物により逆相蒸発法により発生させることができる。リポソームは、規定されたポアサイズのフィルターを通して押し出されて所望の直径を有するリポソームを生じる。本発明の抗体のＦａｂ’断片は、ジスルフィド交換反応によりMartin et al. J.Biol.Chem.257: 286-288 (1982)に記載されたとおりリポソームにコンジュゲートさせることができる。化学療法剤が場合によりリポソーム内に含有される。Gabizon et al. J.National Cancer Inst. 81 (19)1484 (1989)参照。
【０１４９】
抗体のアミノ酸配列修飾（１つまたは複数）が意図される。例えば、抗体の結合アフィニティーおよび／または他の生物学的性質を改良することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異体は、適切なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することによりまたはペプチド合成により調製される。このような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内残基からの欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内残基への挿入および／または抗体のアミノ酸配列内残基の置換を含む。欠失、挿入および置換の任意の組合せは、最終構築物が所望の特性を有するという条件下に、最終構築物に達するようになされる。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置を変えることなどの、抗体の翻訳後のプロセスを変えることもある。
【０１５０】
突然変異誘発のための好ましい位置である抗体のある残基または領域の同定のための有用な方法は、Cunningham and Wells Science, 244: 1081-1085 (1989)により記載された「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。ここでは、残基又は標的残基のグループを同定し（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕなどの帯電した残基）そして中性の又は負に帯電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）により置換してアミノ酸の抗原との相互作用に影響を与える。置換に対する機能的感受性を証明するこれらのアミノ酸位置は、次いでさらなるもしくは他の変異体を置換の部位に、または置換の部位に対して、導入することにより精密化される。従って、アミノ酸配列変異を導入するための部位は予備決定されるが、突然変異自体の性質は予備決定される必要はない。例えば、与えられた部位における突然変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム突然変異誘発を標的コドンまたは領域で行い、そして発現された抗体変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０１５１】
アミノ酸配列挿入は、長さにおいて１残基から１００または１００より多くの残基を含有するポリペプチドまで長さが変動するアミノ末端および／またはカルボキシ末端融合ならびに、単一または多重アミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合された抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端またはＣ末端への酵素の融合または抗体の血清半減期を増加するポリペプチドの融合を含む。
【０１５２】
他のタイプの変異体は、アミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、異なる残基により置換された抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。抗体（１つまたは複数）の置換突然変異誘発のための最大の関心のある部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ変化も意図される。保存性置換は、「好ましい置換」の題目の下に表１に示される。このような置換が生物学的活性の変化をもたらすならば、表１において「例示的置換」と命名されたまたはアミノ酸クラスに関してさらに下記するごとき、より多く実質的な変化を導入することができそして産物をスクリーニングすることができる。
【０１５３】
【表７】

【０１５４】
抗体の生物学的性質における実質的な修飾は、（ａ）例えばシートまたはらせん状コンホメーションとして、置換の区域におけるポリペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖のかさばりを維持することに関するその効果において有意に異なる置換を選ぶことにより達成される。アミノ酸は、それらの側鎖の性質の類似性に従って分類することができる（A.L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)）：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
または、天然に存在する残基は、共通の側鎖性質に基づいてグループに分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｎ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１５５】
非保存性置換は、これらのクラスの１つのメンバーを他のクラスで置き換えることを含むであろう。
【０１５６】
抗体の適切なコンホメーションを維持することに関与していない任意のシステイン残基を、一般にセリンで置換して分子の酸化安定性を改良しそして異常な架橋を防止することもできる。反対に、システイン結合（１つまたは複数）を抗体に付加してその安定性を改良する（特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合に）ことができる。
【０１５７】
特に好ましいタイプの置換変異体は、親抗体の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる発展のために選択された得られる変異体（１つまたは複数）は、変異体を発生させる親抗体に比較して生物学的性質を改良したであろう。このような置換変異体を発生させるための便利な方法は、ファージディスプレーを使用するアフィニティー成熟である。簡単に言えば、いくつかの超可変領域部位（例えば６〜７部位）を突然変異させて各部位におけるすべての可能なアミノ置換を発生させる。このようにして発生させた抗体変異体を、各粒子内にパーケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物として繊維状ファージ粒子から一価方式でディスプレーする。ファージディスプレーされた変異体を、次いで本明細書に開示されたとおりそれらの生物学的活性（例えば結合アフィニティー）についてスクリーニングする。修飾のための候補超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。替わりにまたは追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と抗原との接触点を同定することは有益でありうる。このような接触残基および隣接残基は、本明細書で詳細に述べた技術に従う置換の候補である。このような変異体が発生すると、変異体のパネルを本明細書に記載のとおりのスクリーニングに供し、そして１つまたは複数の適切なアッセイにおいて優れた性質を有する抗体を選択してさらに発展させることができる。
【０１５８】
抗体の他のタイプのアミノ酸変異体は、抗体の元のグリコシル化パターンを変える。このような変化は、抗体に見出される１つまたは複数の炭水化物部分を欠失させることおよび／または抗体に存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位を加えることを含む。
【０１５９】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的にはＮ−結合であるか又はＯ−結合である。Ｎ−結合されたとは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素による結合のための認識配列である。従って、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を創り出す。Ｏ−結合したグリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も普通にはセリンまたはトレオニンへの糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの１つの結合を指す。但し５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを使用することもできる。
【０１６０】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列が１つまたは複数の上記したトリペプチド配列を含有するようにアミノ酸配列を変えることにより便利に達成される（Ｎ−結合したグリコシル化部位の場合）。この変化は、元の抗体の配列への１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、又は元の抗体に対する１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基による置換によってもなされうる（Ｏ−結合したグリコシル化部位の場合）。
【０１６１】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合した炭水化物を変えることができる。例えば、抗体のＦｃ領域に結合したフコースを欠いている成熟した炭水化物構造を有する抗体は、US Patent Appl No. US2003/0157108 A1, Presta, L に記載されている。ＣＤ２０抗体組成に関してはUS2004/0093621 A1 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合した炭水化物におけるバイセクティングＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）（bisecting N-acetylglucosamine (GlcNAc)）を有する抗体は、WO03/011878, Jean-Mairet et al. and US Patent No. 6,602,684, Umana et al.に言及されている。抗体のＦｃ領域に結合したオリゴ糖における少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体は、WO97/30087, Patel et al.に報告されている。抗体のＦｃ領域に結合した変化した炭水化物を有する抗体に関してはWO98/58964 (Raju, S.)および WO99/22764 (Raju, S.）も参照。
【０１６２】
本発明における好ましいグリコシル化変異体は、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造がフコースを欠いているＦｃ領域を含む。このような変異体は改良されたＡＤＣＣ機能を有する。場合により、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改良するＦｃ領域における１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３および／または３３４（残基のＥｕ番号付け）における置換を含む。「脱フコシル化された」または「フコースを欠失した」抗体に関連する刊行物の例は、US Pat Appl. No. US2003/0157108 A1, Presta, L; WO00/61739A1; WO01/29246A1; US2003/0115614A1; US2002/0164328A1; US2004/0093621A1; US2004/0132140A1; US2004/0110704A1; US2004/0110282A1; US2004/0109865A1; WO03/085119A1; WO03/084570A1; WO2005/035778; WO2005/035586（フコシル化のＲＮＡ阻害（ＲＮＡｉ）を記載する）；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); Yamane Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)を含む。脱フコシル化された抗体を産生する細胞系の例は、タンパク質フコシル化に欠けているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); US Pat Appl No US 2003/0157108 A1,Presta, L; および WO2004/056312 A1, Adams et al., 特に実施例１１における）、ならびにノックアウト細胞系、例えばα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)）を含む。
【０１６３】
抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当技術分野に知られている種々の方法により調製される。これらの方法は、天然のソースからの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合に）またはオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的な）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、ならびに抗体の以前に調製された変異体又は非変異体バージョンのカセット突然変異誘発を含むが、それらに限定されるわけではない。
【０１６４】
例えば、抗体の抗原依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を増強するように、エフェクター機能に関して本発明の抗体を修飾することが望ましいことがありうる。これは、抗体抗体のＦｃ領域に１つまたは複数アミノ酸置換を導入することにより達成されうる。替わりにまたは追加的に、システイン残基（１つまたは複数）をＦｃ領域に導入することができ、それによりこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能とする。このようにして発生させたホモ二量体抗体は、改良されたインターナリゼーション能力および／または増加した補体媒介細胞死滅および抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有することができる。Caron et al., J.Exp med. 176: 1191-1195 (1992)およびShopes, B.J.Immunol. 148: 2918-2922 (1992)参照。増強された抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体は、Wolff et al. Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)に記載されたとおりヘテロ二官能性架橋リンカーを使用して調製することもできる。または、二重Ｆｃ領域を有し、それにより増強された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有することができる抗体を工学的に作ることができる。Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)参照。
【０１６５】
WO00/42072 (Presta,L.)は、抗体がそのＦｃ領域にアミノ酸置換を含む、ヒトエフェクター細胞の存在下に改良されたＡＤＣＣ機能を有する抗体を記載している。好ましくは、改良されたＡＤＣＣを有する抗体は、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３および／または３３４に置換を含む。好ましくは、変化したＦｃ領域は、これらの位置の１つ、２つまたは３つに置換を含むかまたは置換からなるヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。
【０１６６】
変化したＣ１ｑ結合および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を有する抗体は、WO99/51642, US Patent No. 6,194,551B1, US Patent No. 6,242,195B1; US Patent No. 6,528,624B1およびUS Patent No. 6,538,124 (Idusogie et al.）に記載されている。抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３および／または３３４の１つまたは複数の位置にアミノ酸置換を含む。
【０１６７】
抗体の血清半減期を増加させるために、例えばUS Patent 5,739,277に記載されたとおり抗体（特に抗体断片）にサルベージ受容体結合エピトープを組み込むことができる。本明細書で使用された、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる責任を持つＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ₂、ＩｇＧ₃またはＩｇＧ₄）のＦｃ領域のエピトープを指す。そのＦｃ領域に置換を有しそして増加した血清半減期を有する抗体は、WO00/42072 (Presta, L.）にも記載されている。
【０１６８】
３個または３個より多くの（好ましくは４つの）機能的抗原結合部位を有する工学的に作られた抗体も意図される（US Appln No. US2002/0004587 A1, Miller et al.）。
【０１６９】
ｖ．医薬処方
本発明に従って使用される抗体の治療処方剤は、所望の純度を有する抗体を場合により使用する薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences 16^th edition, Osol, A. Ed. (1980)）と混合することにより、凍結乾燥された処方剤又は水溶液剤の形態で保存用に調製される。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒性でありそして緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０より少ない残基）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシン；単糖類、二糖類およびグルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成性対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；および／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【０１７０】
例示的抗ＣＤ２０抗体処方剤はWO98/56418に記載されている。この刊行物は、４０mg/mLリツキシマブ、２５mMアセテート、１５０mMトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、０．０２％ポリソルベート２０を含み、２〜８℃で２年保存の最小寿命を有するpH５．０の液体多重用量処方剤を記載している。関心のある他の抗ＣＤ２０処方剤は、９．０mg/mL塩化ナトリウム、７．３５mg/mL無水クエン酸ナトリウム、０．７mg/mLポリソルベート８０および注射用の無菌水pH６．５中の１０mg/mLリツキシマブを含む。
【０１７１】
皮下投与に適合した凍結乾燥された処方剤はUS Patent No. 6,267,958 (Andya et al)に記載されている。このような凍結乾燥された処方剤は、適当な希釈剤により高タンパク質濃度に再構成することができ、そして再構成された処方剤は本発明で処置されるべき哺乳動物に皮下投与されうる。
【０１７２】
該抗体のまたは抗体の結晶化された形態も意図する。例えば、US2002/0136719A1 (Shenoy et al)参照。
【０１７３】
本発明における処方剤は、処置されるべき特定の適用のために必要な１種より多くの活性化合物、好ましくは互いに不利に影響を与えない相補的活性を有する活性化合物を含有することもできる。例えば、細胞毒性作用物質；化学療法剤；免疫抑制剤；サイトカイン；サイトカインアンタゴニストもしくは抗体；成長因子；ホルモン；インテグリン；インテグリンアンタゴニストもしくは抗体（例えばＬＦＡ−１抗体、例えばGenentechから市販のエファリズマブ（efalizumab）／ＲＡＰＴＩＶＡまたはα４インテグリン抗体、例えばBiogenから入手可能なナタリズマブ（natalizumab）／ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））；インターフェロンクラス薬物、例えばＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）およびＡＶＯＮＥＸ（登録商標）またはＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）；オリゴペプチド、例えば酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）；細胞毒性作用物質、例えばミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、メトトレキセート、シクロホスファミド、クロラムブシルまたはアザチオプリン；静脈内免疫グロブリン（γグロブリン）；リンパ球欠乏化薬物（例えばミトキサントロン、シクロホスファミド、カムパス（Campath）、抗ＣＤ４、またはクラドリビン）；非リンパ球欠乏化免疫抑制薬物（例えばミコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）またはシクロスポリン）；「スタチン」クラスのコレステロール低下薬物；エストラジオール；テストステロン；ホルモン置換治療；二次症状またはＭＳに関連した症候（例えばけい直、失禁、痛み、疲れ）を処置する薬物；ＴＮＦ阻害剤；疾患改変抗リウマチ薬物（ＤＭＡＲＤ）；非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニソロン、プレドニソン、デキサメタゾンまたはグルコルチコイド）；レボチロキシン；シクロスポリンＡ；ソマトスタチンアナログ；サイトカインアンタゴニスト；代謝拮抗物質；免疫抑制剤；インテグリンアンタゴニストもしくは抗体（例えばＬＦＡ−１抗体、例えばエファリズマブもしくはα４インテグリン抗体、例えばナタリズマブ）；または他のＢ細胞表面アンタゴニスト／抗体；等を処方剤中にさらに与えることは望ましいことでありうる。このような他の作用物質のタイプおよび有効量は、例えば処方剤中に存在する抗体の量、処置されるべき多発性硬化症のタイプおよび被験体の臨床的パラメータに依存する。これらは、一般に先に使用されたのと同じ投薬量および投与経路でまたは前に使用された投薬量の約１〜９９％で使用される。
【０１７４】
有効成分は、例えばコアセルベーション技術によりまたは界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達システム（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルション中に閉じ込める（entrapped）こともできる。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16^th edition, Osol, A. Ed. (1980)）に開示されている。
【０１７５】
徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の適当な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含み、該マトリックスは成形された物品、例えばフイルムまたはマイクロカプセルの形態にある。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（US Patent No. 3,773,919）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（登録商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフェア）およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
【０１７６】
インビトロ投与のために使用されるべき処方剤は無菌でなければならない。これは無菌濾過膜を通す濾過により容易に達成される。
【０１７７】
ＶＩ．製造物
本発明の他の態様では、上記した多発性硬化症の処置のために有用な物質を含有する製造物が提供される。好ましくは、製造物は：（ａ）容器内にＢ細胞表面マーカーに結合する抗体（例えばＣＤ２０抗体）および薬学的に許容されうる担体または希釈剤を含む組成物を含む容器；および（ｂ）多発性硬化症に罹患している被験体に該組成物を投与して、約０．５〜４グラムの最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４の第二抗体暴露を与え、第二抗体暴露を最初の抗体暴露から約１６〜６０週まで与えない、指示；またはＰＰＭＳに罹患している被験体に組成物を投与するための指示を有するパッケージインサートを含む。
【０１７８】
製造物は、容器、および該容器上のまたは該容器と関連したラベルまたはパッケージインサートを含む。適当な容器は、例えばボトル、バイアル、注射器等を含む。容器は、種々の材料、例えばガラスまたはプラスチックから形成されうる。容器は、多発性硬化症を処置するために有効な組成物を保持し又は含有し、そして無菌の出入り口を有することができる（例えば、容器は皮下注射針により穿刺可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであることができる）。組成物中の少なくとも１種の有効作用物質は抗体である。ラベルまたはパッケージインサートは、与えられるべき抗体および任意の他の薬物の投薬量および間隔に関する特定の手引きにより多発性硬化症に罹患している被験体において多発性硬化症を処置するために組成物を使用することを指示する。製造物は、薬学的に許容されうる希釈剤緩衝剤、例えば注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液を含む第２容器をさらに含むことができる。製造物は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針および注射器を含む商業的およびユーザーの観点から望ましい他の物質をさらに含むことができる。
【０１７９】
場合により、本発明における製造物は、処置のための抗体以外の作用物質を含む容器をさらに含み、そしてこのような作用物質による哺乳動物の処置に関する指示をさらに含み、このような作用物質は、好ましくは、化学療法剤もしくは免疫抑制剤、インターフェロンクラス薬物、例えばＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）およびＡＶＯＮＥＸ（登録商標）またはＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））；オリゴペプチド、例えば酢酸グラチチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））；細胞毒性作用物質、例えばミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、メトトレキセート、シクロホスファミド、クロラムブシルまたはアザチオプリン；静脈内免疫グロブリン（γグロブリン）；リンパ球欠乏化薬物（例えばミトキサントロン、シクロホスファミド、カムパス（Campath）、抗ＣＤ４、またはクラドリビン）；非リンパ球欠乏化免疫抑制薬物（例えばミコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）またはシクロスポリン）；「スタチン」クラスのコレステロール低下薬物；エストラジオール；ホルモン置換療法；二次またはＭＳに関連した症状（例えばけい直、失禁、痛み、疲れ）を処置する薬物；ＴＮＦ阻害剤；疾患改変抗リウマチ薬物（ＤＭＡＲＤ）；非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニソロン、プレドニソン、デキサメタゾンまたはグルコルチコイド）；レボチロキシン；シクロスポリンＡ；ソマトスタチンアナログ；サイトカインもしくはサイトカイン受容体アンタゴニスト；代謝拮抗物質；免疫抑制剤；インテグリンアンタゴニストもしくは抗体（例えばＬＦＡ−１抗体、例えばエファリズマブもしくはα４インテグリン抗体、例えばナタリズマブ）；および他のＢ細胞表面マーカー抗体；等である。
【０１８０】
本発明のさらなる詳細は、下記の非限定的実施例により説明される。明細書におけるすべての引用文献の開示は明白に参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８１】
実施例１
一次進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）の処置
McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001)により定義されたＰＰＭＳの診断を有する被験体を、この実施例においてＣＤ２０抗体で処置する。
【０１８２】
Genentechから市販されているリツキシマブを、９．０mg/mL塩化ナトリウム、０．７mg/mLポリソルベート８０、７．３５mg/mL無水クエン酸ナトリウムおよび注射用無菌水（pH６．５）中に無菌産物としてＩＶ投与するために処方する。
【０１８３】
最初のコースの処置は、１日目と１５日目の各々に投与された１ｇ静脈内（ＩＶ）リツキシマブの用量からなる。被験体は、アセトアミノフェン（１ｇ）およびジフェンヒドラミンＨＣＬ（５０mg）または同等物を、各注入の開始の３０〜６０分前に口により受け取る。
【０１８４】
その後のコースの処置は、２４週（１６９日目）、４８週（３３７日）および７２週（５０５日）に開始して行われるであろう。その後のコ−スの処置の第２注入は、最初の注入の１４±１日後であろう。
【０１８５】
最初の再発を経験する被験体は、ＩＶまたは経口コルチコステロイドにより救助処置を受けることができる。全身性コルチコステロイドを、ＭＳ再発に対して適切な処置の曝露又は期間を超えない投与計画を使用して投与されうる。再発は下記のすべてとして定義される：
●少なくとも２４時間続く神経学的異常の急性出現
●熱、感染、外傷、付随する薬剤処理（concomitant medications）または他の病因に帰することができない変化
●下記のＦＳ尺度：錐体、脳神経、小脳、知覚、視覚、歩行の１つにおける最小１ポイントの変化を含む盲検研究者による検査における他覚的変化を伴う事象。
【０１８６】
コルチコステロイドの下記の投与計画を使用することができる：３日間毎日の１ｇＩＶメチルプレドニソロン、続く５日間毎日の６０mgプレドニソンおよびその後各日に１０mg増分だけ減少させる。ＩＶメチルプレドニソロンが入手可能でないならば、３日間毎日の１５０mgＩＶデキサメタゾンで代替することができる。コルチコステロイドの唯一のコースは増悪に対して投与されるべきである。その後の免疫学的研究およびＭＲＩスキャンはコルチコステロイド投与計画の完了の少なくとも４週間後に得られるべきである。コルチコステロイド吸入器（経口および鼻）または動脈内注射を使用することができる。
【０１８７】
場合によりＣＤ２０抗体と組み合わされるべき追加の処置はＩＦＮ−β、酢酸グラチラマー、メトトレキセート、シクロホスファミドまたはミトキサントロンを含む。
【０１８８】
主効果アウトカム評価基準（primary efficacy outcome measure）は、確認された疾患進行に対する時間である。疾患進行は、変化が他の病因（例えば熱、併発した病気、ＭＳ再発もしくは再燃、または付随する薬剤処理）に帰することはできない場合について、もしベースラインＥＤＳＳが２．０〜５．５ポイント（両数字も含む）であるならば、ベースライン拡大障害状態尺度（Expanded Disability Status Scale）（ＥＤＳＳ）（Kurtzke J. Neurology 33 (11): 1444-52 (1983)）から≧１．０ポイントの増加として定義され、又はベースラインＥＤＳＳが≧５．５ポイント（この数字を含む）であるならば、≧０．５ポイントの増加として定義される。疾患進行の確認は、最初の進行の少なくとも１２週（８４日）後である規則的にスケジュールされた診察において行うことができる。
【０１８９】
副効果アウトカム評価基準は、：
−脳ＭＲＩスキャンにおけるＴ２病変の全容積のベースラインから９６週までの変化、
−脳ＭＲＩスキャンにおける脳容積のベースラインから９６週までの変化、
場合により以下の内任意の１つまたは複数の改善：
−多発性硬化症機能的複合尺度（Multiple Sclerosis Functional Composite Scale (MSFCS)）、
−ＥＤＳＳ、
−ＥＤＳＳを使用して決定された９６週における確認された疾患進行を有する被験体の割合、
−９ホールペグ試験（9-Hole Peg Test）（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された上肢機能（upper extremity function）、
−２５フート歩行時間（Timed 25-Foot Walk）（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された歩行、
−定速聴覚連続加算検査（Paced Auditory Serial Addition Test）（３秒のみ；ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された認知、
−ＭＲＩスキャンにおける脳Ｔ２病変の全容積（４８週および１２２週）、
−ＭＲＩスキャンにおける脳Ｔ１病変の全容積、
−ＭＲＩスキャンにおける頚部脊髄の横断面積、
−ＭＲＩスキャンにおける脳容積（４８週および１２２週）、
を含む。
【０１９０】
本明細書に記載されたリツキシマブで処理された被験体は、上記アウトカム評価基準の任意の１つまたは複数に従うＰＰＭＳの兆候、症状または他の指標の改善を示すであろう。
【０１９１】
実施例２
再発−寛解多発性硬化症の処置
McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001)により定義されたＲＲＭＳを有する被験体を、この実施例でＣＤ２０抗体で処置し、抗体曝露は約６ヶ月離れている。
【０１９２】
Genentechから市販されているリツキシマブを、９．０mg/mL塩化ナトリウム、０．７mg/mLポリソルベート８０、７．３５mg/mL無水クエン酸ナトリウムおよび注射用無菌水（pH６．５）中に無菌産物としてＩＶ投与するために処方する。
【０１９３】
最初のコースの処置は、１日目と１５日目の各々に投与された１ｇ静脈内（ＩＶ）リツキシマブの用量からなる。被験体は、アセトアミノフェン（１ｇ）およびジフェンヒドラミンＨＣＬ（５０mg）または同等物を、各注入の開始の３０〜６０分前に口により受け取る。
【０１９４】
その後のコースの処置は、２４週（１６９日）、４８週（３３７日）および７２週（５０５日）に開始して行われるであろう。その後のコ−スの処置の第２注入は、最初の注入の１４±１日後であろう。
【０１９５】
好ましくは、リツキシマブはＲＲＭＳを処置するために投与される唯一の作用物質である。しかしながら、被験体は、場合によりＩＶまたは経口コルチコステロイド、ＩＦＮ−β、酢酸グラチラマー、メトトレキセート、シクロホスファミドまたはミトキサントロンを受け取ることができる。
【０１９６】
最初の再発を経験する被験体はＩＶまたは経口コルチコステロイドによる救助処置を受けることができる。全身性コルチコステロイドは、ＭＳ再発に対して適切な曝露または処置の期間を超えない投与計画を使用して投与されうる。この実施例における再発は：
少なくとも３０日間相対的に安定なもしくは改善している神経学的状態にあった被験体において４８時間より長く続くＭＳと合致した新しいもしくは反復した神経学的症状の出現として定義される。神経学的症状の変化は、ＥＤＳＳで少なくとも半段階の増加、または適切な機能系スコア（ＦＳＳ）の１つにおける２ポイントの増加又は適切なＦＳＳの２つまたは２つより多くにおける１ポイントの増加と合致した他覚的な神経学的悪化を伴わなければならない。変化は、検査している研究者により証明されなければならずそして選択されたＦＳ尺度（例えば、錐体、歩行、小脳、脳幹、感覚または視覚）に影響を与えなければならない。症状は、≧２４時間持続しなければならずそして混乱させる臨床的因子（例えば熱、感染、損傷（injury）、付随する薬物投与に対する有害な反応）に帰することができないものであるべきである。発作性症状（例えば緊張性痙攣）の単一エピソードは再発ではなくて、少なくとも２４時間にわたる発作性症候が多数回起こる新たな発症は、もし新たな対応する他覚的発現が伴っているならば、再発であることができる。臨床的検査、疲労、気分変化、または膀胱もしくは腸促迫（urgency）もしくは失禁に関する変化を伴わない感覚症状は、再発を証明するのには十分ではないであろう。
【０１９７】
主効果アウトカム評価基準は、ガドリニウム増強病変のＭＲＩエンドポイント、または確認された疾患進行に対する時間（ベースライン拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）から≧１．０ポイントの増加として定義された；Kurtzke J. Neurology 33 (11): 1444-52 (1983)）である。首効果エンドポイントは、１２，１６，２０および２４週における脳の逐次ＭＲＩスキャンで観察されたガドリニウム増強Ｔ１病変の総数であることができる。
【０１９８】
副効果アウトカム評価基準は、再発の頻度；脳ＭＲＩスキャンにおけるＴ２病変の全容積のベースラインから９６週までの変化（例えば、スクリーニングから２４週および３６週までの脳のＭＲＡスキャンにおけるＴ２病変の全容積の変化）；脳ＭＲＩスキャンにおける脳容積のベースラインから９６週までの変化；多発性硬化症機能複合尺度（Multiple Sclerosis Functional Composite Scale）（ＭＳＦＣＳ）およびその副尺度；９ホールペグ試験（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された上肢機能；２５フート歩行時間（Timed 25-Foot Walk）（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された歩行、定速聴覚連続加算検査（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された認知；多発性硬化症クオリティーオブライフ−５４（ＭＳＱＯＬ−５４）質問表；ＭＲＩスキャンにおける脳Ｔ１病変の全容積（例えば、２０、２８および３６週における脳の逐次ＭＲＡスキャンで観察されるガドリニウム増強Ｔ１病変の総数）；ＭＲＩスキャンにおける頚部脊髄の横断面積；２４週まで（即ち０〜２４週）および３６週まで（即ち０〜３６週）に再発する被験体の割合；２４および３６週における組み合わせた特徴的活性評価基準（Combined Unique Activity Measure）を含む。
【０１９９】
上記したリツキシマブで処置された患者は、上記アウトカム評価基準の任意の１つまたは複数における改善を示すであろう。
【０２００】
実施例３
再発−寛解多発性硬化症の処置
McDonald et al. Ann Neurol 50: 121-7 (2001）により定義されたＲＲＭＳを有する被験体を本発明においてＣＤ２０抗体で処置する。この実施例では、抗体暴露は約１年離れている。
【０２０１】
Genentechから市販されているリツキシマブを、９．０mg/mL塩化ナトリウム、０．７mg/mLポリソルベート８０、７．３５mg/mL無水クエン酸ナトリウムおよび注射用無菌水（pH６．５）中に無菌産物としてＩＶ投与用に処方する。
【０２０２】
最初のコースの処置は、１日目と１５日目の各々に投与された１ｇ静脈内（ＩＶ）リツキシマブの用量からなる。被験体は、アセトアミノフェン（１ｇ）およびジフェンヒドラミンＨＣＬ（５０mg）または同等物を、各注入の開始の３０〜６０分前に口により受け取る。
【０２０３】
その後のコースの処置は、４８週および９６週に開始して行われるであろう。その後のコ−スの処置の第２注入は、最初の注入の１４±１日後であろう。
【０２０４】
好ましくは、リツキシマブはＲＲＭＳを処置するために投与される唯一の作用物質である。しかしながら、被験体は、場合によりＩＶまたは経口コルチコステロイド、ＩＦＮ−β、酢酸グラチラマー、メトトレキセート、シクロホスファミドまたはミトキサントロンを受け取ることができる。
【０２０５】
最初の再発を経験する被験体はＩＶまたは経口コルチコステロイドによる救助処置を受けることができる。全身性コルチコステロイドは、ＭＳ再発に対して適切な曝露または処置の期間を超えない投与計画を使用して投与されうる。この実施例における再発は：少なくとも３０日間相対的に安定なもしくは改善している神経学的状態にあった被験体において４８時間より長く続くＭＳと合致した新しいもしくは反復した神経学的症状の出現として定義される。神経学的症状の変化は、ＥＤＳＳで少なくとも半段階の増加、または適切な機能系スコア（ＦＳＳ）の１つにおける２ポイントの増加又は適切なＦＳＳの２つまたは２つより多くにおける１ポイントの増加と合致した他覚的な神経学的悪化を伴わなければならない。変化は、検査している研究者により証明されなければならずそして選択されたＦＳ尺度（例えば、錐体、歩行、小脳、脳幹、感覚または視覚）に影響を与えなければならない。症状は、≧２４時間持続しなければならずそして混乱させる臨床的因子（例えば熱、感染、損傷、付随する薬物投与に対する有害な反応）に帰することができないものであるべきである。発作性症候（例えば緊張性痙攣）の単一エピソードは再発ではなくて、少なくとも２４時間にわたる発作性症状が多数回起こる新たな発症は、もし新たな対応する他覚的発現が伴っているならば、再発であることができる。臨床的検査における変化、疲労、気分変化、または膀胱もしくは腸促迫もしくは失禁を伴わない感覚症状は、再発を証明するのには十分ではないであろう。
【０２０６】
主効果アウトカム評価基準は、ガドリニウム増強病変のＭＲＩエンドポイント、または確認された疾患進行に対する時間（ベースライン拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）から≧１．０ポイントの増加として定義された；Kurtzke J. Neurology 33 (11): 1444-52 (1983)）である。主効果エンドポイントは、１２，１６，２０および２４週における脳の逐次ＭＲＩスキャンで観察されたガドリニウム増強Ｔ１病変の総数であることができる。
【０２０７】
副効果アウトカム評価基準は、再発の頻度；脳ＭＲＩスキャンにおけるＴ２病変の全容積のベースラインから９６週までの変化（例えば、スクリーニングから２４週および３６週までの脳のＭＲＡスキャンにおけるＴ２病変の全容積の変化）；脳ＭＲＩスキャンにおける脳容積のベースラインから９６週までの変化；多発性硬化症機能複合尺度（ＭＳＦＣＳ）およびその副尺度；９ホールペグ試験（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された上肢機能；２５フート歩行時間（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された歩行；定速聴覚連続加算検査（ＭＳＦＣＳの副尺度）により測定された認知；多発性硬化症クオリティーオブライフ−５４（ＭＳＱＯＬ−５４）質問表；ＭＲＩスキャンにおける脳Ｔ１病変の全容積（例えば、２０、２８および３６週における脳の逐次ＭＲＡスキャンで観察されるガドリニウム増強Ｔ１病変の総数）；ＭＲＩスキャンにおける頚部脊髄の横断面積；２４週まで（即ち０〜２４週）および３６週まで（即ち０〜３６週）に再発する被験体の割合；２４および３６週における組み合わせた特徴的活性評価基準を含む。
【０２０８】
上記したリツキシマブで処置された患者は、上記アウトカム評価基準の任意の１つまたは複数における改善を示すであろう。
【０２０９】
実施例４
ヒト化２Ｈ７変異体
この実施例は、本明細書で開示された方法で使用するためのヒト化２Ｈ７抗体変異体を説明する。ヒト化２Ｈ７抗体は、好ましくは、下記のＣＤＲ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つを含む：
ＣＤＲ Ｌ１配列ＲＡＳＳＳＶＳＹＸＨ（式中ＸはＭまたはＬ（配列番号１８）である）、例えば配列番号４（図１Ａ）、
配列番号５のＣＤＲ Ｌ２配列（図１Ａ）、
ＣＤＲ Ｌ３配列ＱＱＷＸＦＮＰＰＴ（式中ＸはＳまたはＡ（配列番号１９）である）、例えば配列番号６（図１Ａ）、
配列番号１０のＣＤＲ Ｈ１配列（図１Ｂ）、
ＡＩＹＰＧＮＧＸＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（式中ＸはＤまたはＡ（配列番号２０）である）のＣＤＲ Ｈ２配列、例えば配列番号１１（図１Ｂ）、および
ＶＶＹＹＳＸＸＹＷＹＦＤＶ（式中、位置６のＸはＮ、Ａ、Ｙ、ＷまたはＤでありそして位置７のＸはＳまたはＲ（配列番号２１）である）のＣＤＲ Ｈ３配列、例えば配列番号１２（図１Ｂ）。
【０２１０】
上記ＣＤＲ配列は、実質的にヒトＬ鎖κサブグループＩ（Ｖ_L６Ｉ）のヒトコンセンサスＦＲ残基、および実質的にヒトＨ鎖サブグループＩＩＩ（Ｖ_HＩＩＩ）のヒトコンセンサスＦＲ残基などのヒト可変Ｌおよび可変Ｈフレームワーク配列内に一般に存在する。ＷＯ２００４／０５６３１２（Lowman et al.）も参照。
【０２１１】
可変Ｈ領域は、ヒトＩｇＧ鎖定常領域に連結させることができ、該領域は例えば、ネイティブ配列および変異体定常領域を含むＩｇＧ１またはＩｇＧ３であることができる。
【０２１２】
好ましい態様では、このような抗体は、配列番号８の可変Ｈドメイン配列（図１Ｂに示されたｖ１６）を含み、場合により配列番号２の可変Ｌドメイン配列（図１Ａに示された ｖ１６）も含み、そして場合により可変Ｈドメインにおける位置５６、１００および／または１００ａにおける１つまたは複数のアミノ酸置換、例えばＤ５６Ａ、Ｎ１００Ａ、Ｎ１００Ｙ、および／またはＳ１００ａＲ、および可変Ｌドメインにおける位置３２および／または９２における１つまたは複数のアミノ酸置換、例えばＭ３２Ｌおよび／またはＳ９２Ａを含む。好ましくは、抗体は配列番号１３または１６のＬ鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１７、２２または２５のＨ鎖アミノ酸配列を含むインタクト抗体である。
【０２１３】
好ましいヒト化２Ｈ７抗体はオクレリズマブ（ocrelizumab）（Genentech）である。
【０２１４】
本発明における抗体は、Ｆｃ領域にＡＤＣＣ活性を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含むことができ、例えばアミノ酸置換が位置２９８、３３３および３３４にあるアミノ酸置換、好ましくはＨ鎖残基のＥｕ番号付けを使用して、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３ＡおよびＫ３３４Ａであるアミノ酸置換をさらに含むことができる。US Patent No. 6,737,056B1, Prestaも参照。
【０２１５】
これらの抗体のいずれもＦｃ領域にＦｃＲｎ結合または血清半減期を改良する少なくとも１つの置換を含むことができ、例えば、Ｈ鎖位置４３４における置換、例えばＮ４３４Ｗを含むことができる。US Patent No. 6,737,056B1,Prestaも参照。
【０２１６】
これらの抗体のいずれもＦｃ領域にＣＤＣ活性を増加させる少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含むことができ、例えば、位置３２６における少なくとも１つの置換、好ましくはＫ３２６ＡまたはＫ３２６Ｗを含むことができる。US Patent No. 6,528,624B1 (Idusogie et al)も参照。
【０２１７】
いくらかの好ましいヒト化２Ｈ７変異体は、配列番号２の可変Ｌドメインおよび配列番号８の可変Ｈドメインを含む変異体（これらはＦｃ領域（もし存在すれば）に置換を伴うかまたは伴わない変異体を含む）、ならびに配列番号８における変化Ｎ１００Ａ；またはＤ５６ＡおよびＮ１００Ａ；またはＤ５６Ａ、Ｎ１００ＹおよびＳ１００ａＲを有する可変Ｈドメイン、および配列番号２における変化Ｍ３２Ｌ；またはＳ９２Ａ；またはＭ３２ＬおよびＳ９２Ａを有する可変Ｌドメインを含む変異体である。
【０２１８】
２Ｈ７．ｖ１６の可変ＨドメインにおけるＭ３４は、抗体安定性の潜在的ソースとして同定されそして置換のための他の潜在的候補である。
【０２１９】
本発明のいくらかの種々の好ましい態様の要約において、２Ｈ７．ｖ１６に基づく変異体の可変領域は、下表に示されるアミノ酸置換の位置を除いてｖ１６のアミノ酸配列を含む。特記しない限り、２Ｈ７変異体はｖ１６のＬ鎖と同じＬ鎖を有するであろう。
【０２２０】
【表８】

【０２２１】
１つの好ましいヒト化２Ｈ７は、２Ｈ７．ｖ１６可変Ｌドメイン配列：
【表９】


および２Ｈ７．ｖ１６可変Ｈドメイン配列：
【表１０】


を含む。
【０２２２】
ヒト化２Ｈ７．ｖ１６抗体がインタクト抗体である場合には、それはＬ鎖アミノ酸配列：
【表１１】


および配列番号１４のＨ鎖アミノ酸配列または；
【表１２】


を含むことができる。
【０２２３】
他の好ましいヒト化２Ｈ７抗体は、２Ｈ７．ｖ５１１可変Ｌドメイン配列：
【表１３】


および２Ｈ７．ｖ５１１可変Ｈドメイン配列：
【表１４】


を含む。
【０２２４】
ヒト化２Ｈ７．ｖ５１１抗体がインタクト抗体である場合には、それは、Ｌ鎖アミノ酸配列：
【表１５】


および配列番号１７のＨ鎖アミノ酸配列または：
【表１６】


を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【０２２５】
【図１Ａ】マウス２Ｈ７（配列番号１）、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異体（配列番号２）およびヒトκＬ鎖サブグループＩ（配列番号３）の各々のＬ鎖可変ドメイン（Ｖ_L）のアミノ酸配列を比較する配列アラインメントである。２Ｈ７およびｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶ_LのＣＤＲｓは下記のとおりである：ＣＤＲ１（配列番号４）、ＣＤＲ２（配列番号５）およびＣＤＲ３（配列番号６）。
【図１Ｂ】マウス２Ｈ７（配列番号７）、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異体（配列番号８）およびＨ鎖サブグループＩＩＩのヒトコンセンサス配列（配列番号９）の各々のＨ鎖可変ドメイン（Ｖ_H）のアミノ酸配列を比較する配列アラインメントである。２Ｈ７およびｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶ_HのＣＤＲｓは下記のとおりである：ＣＤＲ１（配列番号１０）、ＣＤＲ２（配列番号１１）およびＣＤＲ３（配列番号１２）。 図１Ａおよび図１Ｂにおいて、各鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、括弧内に囲まれており、示されたとおり、フレームワーク領域ＦＲ１−ＦＲ４によりフランキングされている。２Ｈ７はマウス２Ｈ７抗体を指す。２つの列の間の星印は、２つの配列間で異なっている位置を示す。残基番号付けは、Kabat et al. Sequences of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従っており、挿入はａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｅとして示されている。
【図２】成熟２Ｈ７．ｖ１６ Ｌ鎖（配列番号１３）のアミノ酸配列を示す。
【図３】成熟２Ｈ７．ｖ１６ Ｈ鎖（配列番号１４）のアミノ酸配列を示す。
【図４】成熟２Ｈ７．ｖ３１ Ｈ鎖（配列番号１５）のアミノ酸配列を示す。２Ｈ７．ｖ３１のＬ鎖は２Ｈ７．ｖ１６の Ｌ鎖と同じである。
【図５】成熟２Ｈ７．ｖ１６および２Ｈ７．ｖ５１１ Ｌ鎖（それぞれ配列番号１３および１６）のアラインメントを示し、Ｋａｂａｔ可変ドメイン残基番号付けおよびＥｕ定常ドメイン残基番号付けによる。
【図６】成熟２Ｈ７．ｖ１６および２Ｈ７．ｖ５１１ Ｈ鎖（それぞれ配列番号１４および１７）のアラインメントを示し、Ｋａｂａｔ可変ドメイン残基番号付けおよびＥｕ定常ドメイン残基番号付けによる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のＣＤ２０抗体を被験体に投与して約０．５〜４グラムの最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４グラムの第２抗体暴露を与え、第２抗体暴露は最初の抗体暴露から約１６〜６０週まで与えられず、そして抗体暴露の各々は１または２用量の抗体として被験体に与えられる、ことを含む被験体における多発性硬化症を処置する方法。
【請求項２】
最初の抗体暴露から約２０〜３０週まで第二抗体暴露を与えない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
最初の抗体暴露および第二抗体暴露を、各々約１．５〜２．５グラムの量で与える、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
有効量のＣＤ２０抗体を被験体に投与して約０．５〜４グラムの第３抗体暴露を与え、第３抗体暴露は最初の抗体暴露から約４０〜６０週まで行わない、ことをさらに含む、請求項２〜３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項５】
第三抗体暴露を、約１．５〜２．５グラムの量で与える、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
最初の抗体暴露から約４６〜５４週まで第三抗体暴露を与えない、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
さらなる抗体曝露を、最初の抗体暴露から少なくとも約７０〜７５週まで与えない、請求項４〜６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８】
最初の抗体暴露から約４６〜６０週まで第二抗体暴露を与えない、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
抗体暴露の各々を１用量の抗体として被験体に与える、請求項１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１０】
抗体暴露の各々を２用量の抗体として被験体に与え、該２用量は第１用量と第２用量を構成する、請求項１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１１】
第１用量が投与された時から約３〜１７日に、第２用量を投与する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
第１用量が投与された時から約６〜１６日に、第２用量を投与する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第１用量が投与された時から約１３〜１６日に、第２用量を投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第１用量の抗体および第２用量の抗体が各々約０．５〜１．５グラムである、請求項１０〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１５】
第１用量の抗体および第２用量の抗体が各々約０．７５〜１．３グラムである、請求項１０〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１６】
３回又は３回より多くの抗体暴露を被験体に対して行う、請求項１〜１５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１７】
４回又は４回より多くの抗体暴露を被験体に対して行う、請求項１〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１８】
第２医薬を最初の抗体暴露又は後の抗体暴露と共に投与し、ＣＤ２０抗体が第１医薬である、請求項１〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１９】
第２医薬が、インターフェロン、酢酸グラチラマー、細胞毒性作用物質、化学療法剤、ミトキサントロン、メトトレキセート、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、γグロブリン、カムパス（Campath）、抗ＣＤ４、クラドリビン、コルチコステロイド、ミコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）、シクロスポリン、スタチンクラスのコレステロール低下薬物、エストラジオール、テストステロン、ホルモン置換薬物、ＴＮＦ阻害剤、疾患改変抗リウマチ薬物（ＤＭＡＲＤ）、非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマトスタチン（somatastatin）アナログ、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、代謝拮抗物質、免疫抑制剤、インテグリンアンタゴニストもしくは抗体、ＬＦＡ−１抗体、エファリズマブ、α４インテグリン抗体、ナタリズマブおよび他のＢ細胞表面マーカー抗体からなる群より選ばれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
多発性硬化症が再発−寛解多発性硬化症（ＲＲＭＳ）である、請求項１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２１】
多発性硬化症が一次進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）である、請求項１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２２】
被験体はＣＤ２０抗体により決して前もって処置されていない、請求項１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２３】
抗体が裸の抗体である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２４】
抗体が他の分子とコンジュゲートしている、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２５】
他の分子が細胞毒性作用物質である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
抗体を静脈内に投与する、請求項１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２７】
抗体を、各抗体暴露のために静脈内に投与する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
抗体を皮下に投与する、請求項１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２９】
抗体を鞘内に投与する、請求項１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３０】
ＣＤ２０抗体が、多発性硬化症を処置するために被験体に投与される唯一の医薬である、請求項１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３１】
抗体がリツキシマブである、請求項１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３２】
抗体が、配列番号２および８における可変ドメイン配列を含むヒト化２Ｈ７である、請求項１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３３】
抗体が、配列番号２３および２４における可変ドメイン配列を含むヒト化２Ｈ７である、請求項１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３４】
被験体が、高められた抗ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、抗ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、抗ガングリオシドおよび／または抗ニューロフィラメント抗体レベル（１つまたは複数）を有する、請求項１〜３４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３５】
高められたレベルのＢ細胞が、被験体の脳脊髄液（ＣＳＦ）、多発性硬化症病変または血清中に存在する、請求項１〜３４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３６】
（ａ）ＣＤ２０抗体を含む容器、および
（ｂ）被験体の多発性硬化症を処置するための指示を有するパッケージインサートであって、該指示は、約０．５〜４グラムの最初の抗体暴露を与え、次いで約０．５〜４グラムの第２抗体暴露を与えるのに有効な量の抗体を被験体に投与し、最初の抗体暴露から約１６〜６０週まで第２抗体暴露を行わず、そして抗体暴露の各々は１または２用量の抗体として被験体に与えられることを指示している、パッケージインサート、
を含む製造物。
【請求項３７】
第２医薬を含む容器をさらに含み、ＣＤ２０抗体が第１医薬であり、そして第２医薬により被験体を処置するためのパッケージインサートにおける指示をさらに含む、請求項３６に記載の製造物。
【請求項３８】
第２医薬が、インターフェロン、酢酸グラチラマー、細胞毒性作用物質、化学療法剤、ミトキサントロン、メトトレキセート、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、γグロブリン、カムパス（Campath）、抗ＣＤ４、クラドリビン、コルチコステロイド、ミコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）、シクロスポリン、スタチンクラスのコレステロール低下薬物、エストラジオール、テストステロン、ホルモン置換薬物、ＴＮＦ阻害剤、疾患改変抗リウマチ薬物（ＤＭＡＲＤ）、非ステロイド抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマトスタチン（somatastatin）アナログ、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、代謝拮抗物質、免疫抑制剤、および他のＢ細胞表面マーカー抗体からなる群より選ばれる、請求項３７に記載の製造物。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【公表番号】特表２００８−５０１７１２（Ｐ２００８−５０１７１２Ａ）
【公表日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１５６３７（Ｐ２００７−５１５６３７）
【出願日】平成１７年６月２日（２００５．６．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９６４１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１７９７８
【国際公開日】平成１７年１２月１５日（２００５．１２．１５）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】