優性の機能獲得型遺伝子によって引き起こされる疾患は、1つの突然変異体と1つのその遺伝子の野生型コピーを有するヘテロ接合体に生じる。野生型遺伝子がしばしば重要な機能を果たす一方、突然変異遺伝子は毒性を有するので、あらゆる治療方法は、野生型遺伝子の発現を維持しつつ、突然変異を選択的に阻害するものでなければならない。本発明は、ＲＮＡｉを用いて、共発現する野生型対立遺伝子の発現を保存しつつ、突然変異対立遺伝子の発現を特異的に阻害するための方法、優性の機能獲得型遺伝子突然変異に関連する疾患の治療方法を含む。本発明は、突然変異を選択的に抑制するが野生型に対してはしない、遺伝型筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を引き起こす銅亜鉛スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ１）遺伝子の発現を抑制する、小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）および小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む。本発明はさらに、有効性と特異性を高め、ＲＮＡｉを媒介する、非対称のｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡをさらに提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｓｈＲＮＡがＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介する能力を高めるための方法であって、
（ｉ）少なくとも２１ヌクレオチド長のアンチセンスステム部分と、センスステム部分とを含む二本鎖ステムを含むｓｈＲＮＡを提供するステップと；
（ｉｉ）前記ｓｈＲＮＡがＲＮＡｉを媒介する能力を高めるように、前記ステムの非対称性高めるステップと；
を含む、方法。
【請求項２】
前記非対称性は、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対と、センス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力を弱めることによって高められる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間のＧ：Ｃ塩基対が、アンチセンス鎖部分の３’末端とセンス鎖部分の５’末端との間より少ないために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間に、少なくとも１つのミスマッチの塩基対があるために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ミスマッチの塩基対は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ミスマッチの塩基対は、Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｕからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記ミスマッチの塩基対は、Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｔからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間に、少なくとも１つのゆらぎ塩基対があるために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記ゆらぎ塩基対は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ゆらぎ塩基対はＧ：Ｕである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ゆらぎ塩基対はＧ：Ｔである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
希少ヌクレオチドを含む少なくとも１つの塩基対によって、前記塩基対の力は弱められる、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記希少ヌクレオチドは、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記希少ヌクレオチドは、イノシン（Ｉ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記塩基対は、Ｉ：Ａ、Ｉ：Ｕ、およびＩ：Ｃからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
修飾されたヌクレオチドを含む少なくとも１つの塩基対のために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記修飾されたヌクレオチドは、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記修飾されたヌクレオチドは、２−アミノ−Ｇ、２−アミノ−Ａ、２，６−ジアミノ−Ｇ、および２，６−ジアミノ−Ａからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｓｈＲＮＡは、機能獲得型の突然変異対立遺伝子に標的化される、請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも２１ヌクレオチド長のアンチセンスステム部分と、センスステム部分とを含む二本鎖ステムを含む非対称ｓｈＲＮＡであって、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対が、センス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力より弱い、非対称ｓｈＲＮＡ。
【請求項２１】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間のＧ：Ｃ塩基対が、アンチセンス鎖部分の３’末端とセンス鎖部分の５’末端との間より少ないために、前記塩基対の力は弱められ、
前記非対称性は、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対と、センス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力を弱めることによって高められる、請求項２０に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２２】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間に、少なくとも１つのミスマッチの塩基対があるために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２１に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２３】
前記ミスマッチの塩基対は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項２２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２４】
前記ミスマッチの塩基対は、Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｕからなる群から選択される、請求項２２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２５】
前記ミスマッチの塩基対は、Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｔからなる群から選択される、請求項２２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２６】
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間に、少なくとも１つのゆらぎ塩基対があるために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２１に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２７】
前記ゆらぎ塩基対は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項２６に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２８】
前記ゆらぎ塩基対はＧ：Ｕである、請求項２６に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項２９】
前記ゆらぎ塩基対はＧ：Ｔである、請求項２６に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３０】
希少ヌクレオチドを含む少なくとも１つの塩基対によって、前記塩基対の力は弱められる、請求項２１に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３１】
前記希少ヌクレオチドは、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項３０に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３２】
前記希少ヌクレオチドは、イノシン（Ｉ）である、請求項３０に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３３】
前記塩基対は、Ｉ：Ａ、Ｉ：Ｕ、およびＩ：Ｃからなる群から選択される、請求項３０に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３４】
修飾されたヌクレオチドを含む少なくとも１つの塩基対のために、前記塩基対の力は弱められる、請求項２１に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３５】
前記修飾されたヌクレオチドは、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている、請求項３４に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３６】
前記修飾されたヌクレオチドは、２−アミノ−Ｇ、２−アミノ−Ａ、２，６−ジアミノ−Ｇ、および２，６−ジアミノ−Ａからなる群から選択される、請求項３４に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３７】
前記ｓｈＲＮＡは、機能獲得型の突然変異対立遺伝子に標的化される、請求項２１乃至３６のいずれかに記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３８】
前記対立遺伝子は、優性の機能獲得型突然変異に関連する障害と相関している、請求項３７に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項３９】
前記障害が、筋萎縮性側策硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、およびパーキンソン病からなる群から選択される、請求項３８に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４０】
前記疾患が、筋萎縮性側策硬化症である、請求項３９に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４１】
前記対立遺伝子は、ＳＯＤ１である、請求項４０に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４２】
前記突然変異対立遺伝子は、点突然変異である、請求項４１に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４３】
前記点突然変異は、グアニン：シトシン突然変異である、請求項４２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４４】
前記突然変異はＧ２５６Ｃである、請求項４２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４５】
前記突然変異はＧ２８１Ｃである、請求項４２に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４６】
前記ｓｈＲＮＡは、Ｓ１−２１、Ｓ２−２１、Ｓ３−２１、およびＳ４−２１からなる群から選択される、図１４に記載の配列を含む、ｓｈＲＮＡ。
【請求項４７】
前記ｓｈＲＮＡがＳ３−２１である、請求項４６に記載のｓｈＲＮＡ。
【請求項４８】
請求項２１乃至４７のいずれかに記載のｓｈＲＮＡを含む、ｓｈＲＮＡの細胞への移行を促進するために作られた、組成物。
【請求項４９】
請求項２１乃至４８のいずれかに記載のｓｈＲＮＡをコードする、作製物。
【請求項５０】
請求項２１乃至４８のいずれかに記載のｓｈＲＮＡを含む、薬学的組成物。
【請求項５１】
遺伝子の少なくとも２つの異なる対立遺伝子を含む標的対立遺伝子の細胞中での発現を阻害する方法であって、前記方法は、該細胞に請求項２１乃至４８のいずれかに記載のｓｈＲＮＡを導入するステップを含む、方法。
【請求項５２】
前記ｓｈＲＮＡは、前記細胞中で作製物から発現される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞を前記ｓｈＲＮＡに接触させることによって、前記ｓｈＲＮＡは前記細胞に導入する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
優性の機能獲得型突然変異の存在に相関した障害に罹患している被検体を治療する方法であって、前記方法は、前記被験体に対して、治療的有効量の、請求項３７に記載のｓｈＲＮＡ、または前記ｓｈＲＮＡをコードする作製物を投与するステップを含む、方法。
【請求項５５】
前記障害が、筋萎縮性側策硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、およびパーキンソン病からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記疾患が、筋萎縮性側策硬化症である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対立遺伝子は、ＳＯＤ１である、請求項５６に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【公表番号】特表２００９−５０９５４８（Ｐ２００９−５０９５４８Ａ）
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３３７８５（Ｐ２００８−５３３７８５）
【出願日】平成１８年１０月２日（２００６．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３８７０４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４４３６２
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（３９９０９３８６９）ユニバーシティー　オブ　マサチューセッツ (19)
【Ｆターム（参考）】