小麦アレルギー用減感作食品および減感作薬剤
【課題】 小麦アレルギー患者が経口摂取により寛容を獲得できる小麦アレルギー用の減感作食品および減感作薬剤を提供する。
【解決手段】 ゲル濾過ＨＰＬＣ分析によりタンパク質分解物の分子量分布をクロマトグラムの面積百分率で表したときに65%以上が分子量5000以下となるように、蛋白質を少量の抗原性が残存する低アレルゲン化小麦粉を含有する食品または薬剤による。小麦アレルギーに対して、通常の小麦粉製品を用いるよりも、安全で効率の良い減感作が可能となる。
【解決手段】 ゲル濾過ＨＰＬＣ分析によりタンパク質分解物の分子量分布をクロマトグラムの面積百分率で表したときに65%以上が分子量5000以下となるように、蛋白質を少量の抗原性が残存する低アレルゲン化小麦粉を含有する食品または薬剤による。小麦アレルギーに対して、通常の小麦粉製品を用いるよりも、安全で効率の良い減感作が可能となる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は小麦アレルギーの減感作のための食品および薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーは、様々な原因（アレルゲン）や複雑な発症機構を特徴とし、しばしば長期間の治療を伴う完治しにくい疾病である。治療方法としては薬物療法が基本的であるがこれは対症療法であり、根本的に改善させる原因療法ではない。ハウスダストやスギ花粉のような吸入型のアレルゲンを原因とするアレルギーでは原因療法としてアレルゲンを直接注射する減感作療法が行われている。しかし、この療法は痛みを伴うこと、注射のために幾度もの通院が必要なことなど患者の負担は大きい。したがって、吸入型のアレルゲンを経口摂取することで改善させる、経口減感作療法が試みられており、関連する研究報告や特許も多い。特にスギ花粉症に対してはスギ花粉を入れた飴などが花粉症を改善する効果をうたって販売されている。
【０００３】
一方、食物をアレルゲンとする食物アレルギーは乳幼児に多い疾患で、これは消化・免疫系の未発達により食物に対する寛容が不完全であることから発症すると考えられている。したがって、原因療法として、一定の期間アレルゲンである食物を摂取せず、成長に伴う自然な寛容獲得を期待する除去食療法が行われている。除去食療法では、加工食品ではアレルゲンが混入している場合があり、治療途中に過ってアレルゲンを摂食してしまうという問題が多く発生している。特に小麦アレルギーにおいては除去期間が長期化することや小麦は多くの食品に使用されていることからその危険性はさらに大きい。また、一般に除去食療法は除去期間中どの程度の寛容が獲得されているのかが不明なため、解除の際、重篤なアレルギー症状を呈する危険性もある。このように除去食療法は広く行われている治療法であるが、多くの問題を抱える治療法でもある。
【０００４】
食物アレルギーに関してもスギ花粉症で行われているような経口減感作療法が試みられている。除去食療法とは異なり、アレルゲンである食品を少しずつ食べさせて早期に寛容を獲得させることを目的とするものである。たとえば、小麦アレルギー患者に対してはうどん、卵アレルギー患者に対しては卵を用いた減感作療法が行われている。しかしながら、吸入型のスギ花粉症とは異なり、減感作されたという報告はない。したがって、経口減感作を誘導する食品の報告もない。実際、「食物アレルギー治療のための新しい試み」（Li XM, Sampson HA. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2002
Jun;2(3):273-8）（非特許文献１）の要約中には、「（抗原性が大きく残っている通常の食物による）急速の免疫療法（経口減感作）が報告されているが、いずれも維持が難しく、副反応が高い率で生じる」との記述もある〔（ ）は補足）〕。加えて、この経口減感作療法においては、投与量によっては重篤なアレルギー発症の危険性も高い。
【０００５】
このように食物アレルギーにおいても、安全かつ短期間での寛容獲得が期待できる経口減感作療法が実現すれば、患者の受ける恩恵は計り知れなく、そのような食品の開発が待ち望まれている。
食物アレルギーは食物中の蛋白がアレルゲンとなることが知られている。したがって、酵素等で蛋白質を分解し、アレルギーの発症を抑制する試みが多くなされている。既に乳、米では厚生労働省が認可したアレルギー対応食品も市販されている。これらはアレルギー患者が食べてもアレルギー発症の危険性がない製品であるが、経口減感作を誘導する食品ではない。臨床医の間においても、アレルゲン性がないものでは減感作を誘導することは出来ないと認識されている。事実、ミルクアレルギー用の粉乳は長年使用されているが、減感作が誘導されたという報告はない。また「乳清蛋白に対するTH2免疫応答への加水分解乳の摂取効果」(H.-J.Peng,S.-N.Su,J.-J.Tsai,L.-C.Tsai,H.-L.Kuo and S.-W.Kuo, Clin
Exp Allergy,34,663-670(2004))（非特許文献２）においてもミルクアレルギー用の粉乳では経口減感作が誘導されないと記載されている。
【０００６】
小麦においても、小麦アレルギー患者でも食べることが出来る小麦粉として酵素によって低アレルゲン化された小麦粉が開発されている（特許第３７２７４３８号公報：特許文献１）。この明細書には低アレルゲン化した小麦粉と小麦アレルギー患者血清との結合性がＥＬＩＳＡ法によって検出限界以下にまで低減化されていることが示されている。それ故、アレルゲンを含まない低アレルゲン化小麦粉と記載されている。しかしながら、減感作を期待させるような記述はない。
【０００７】
さらに小麦アレルギーの主要アレルゲンで小麦の主要蛋白であるグルテンを酵素分解しペプチド化した特許も出されている〔特開平１１−１１６５９６号公報（特許文献２）、特開２００１−３７４４０号公報（特許文献３）、特開２００２−２３８４６３号公報（特許文献４）〕。しかしこれらには経腸、経口栄養剤、調味料等の用途が記載されているが、減感作に関する記述はない。
【非特許文献１】「食物アレルギー治療のための新しい試み」（Li XM, Sampson HA. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2002Jun;2(3):273-8）
【非特許文献２】「乳清蛋白に対するTH2免疫応答への加水分解乳の摂取効果」(H.-J.Peng,S.-N.Su,J.-J.Tsai,L.-C.Tsai,H.-L.Kuoand S.-W.Kuo, Clin Exp Allergy,34,663-670(2004))
【特許文献１】特許第３７２７４３８号公報
【特許文献２】特開平１１−１１６５９６号公報
【特許文献３】特開２００１−３７４４０号公報
【特許文献４】特開２００２−２３８４６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、小麦アレルギー患者が経口摂取により寛容を獲得できる小麦アレルギー用の減感作食品および減感作薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
小麦アレルギー患者にとっては短期間でふつうの小麦粉製品が摂取できるようになることがもっとも望ましい。上述のように通常の小麦粉食品での減感作療法はアレルギー発症リスクが大きいだけでなく減感作が得られない。一方で、十分に低アレルゲン化されたものも減感作は得られない。
我々は、低アレルゲン化されているものの、抗原性が少し残存している小麦粉を用いることにより、アレルギー発症リスクが少なくかつ短期間の摂取で寛容が獲得されることを見いだし、経口減感作効果を持つ食品を発明するに至った。
【００１０】
かくして、本発明は、蛋白質を分解して低アレルゲン化した小麦粉を含有する小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤、特に、該低アレルゲン化小麦粉が、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析により蛋白分解物の分子量分布を面積百分率で表したとき、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上から成る、小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
小麦アレルギー治療のための経口減感作食品および減感作薬剤を提供することができる。本発明により小麦アレルギー患者が短期間で通常の小麦を食べることが出来るようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
減感作療法は感作を引き起こすもの、すなわちある程度の抗原性が保持されているほうが望ましい。アレルギー対応食品のようなアレルギー発症の危険性が低いものでは効果がない。このことから本発明では原料となる小麦粉の低アレルゲン化処理に際して抗原性を完全に分解せず特定の割合で残存させる。すなわち、低アレルゲン化小麦粉をゲル濾過ＨＰＬＣ法で分析し、その蛋白分解物の分子量分布をＨＰＬＣチャート（クロマトグラム）の面積百分率で表した場合、６５％以上が分子量５，０００以下になるように、より具体的には、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００以下が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上になるように低アレルゲン化させることにした。
【００１３】
なお、製品（食品または薬剤）の種類によっては、当該製品を製造するための加工処理により、高分子量の蛋白質が不溶化してＨＰＬＣ分析のチャートには現れないこともある。したがって、そのような場合も含めて、本発明の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤は、製品（最終製品）のゲル濾過ＨＰＬＣ分析をした場合には、分子量５，０００以下の面積百分率を１００％としたとき、分子量５００〜５，０００が４０％以下、分子量５００が６０％以上となる。
【００１４】
また、よく知られているようにＨＰＬＣ分析におけるチャートに表れる面積の大きさは、測定条件や用いる機器の違いによる相違が認められている。したがって、本願の特許請求の範囲および明細書に示されているＨＰＬＣ分析における面積百分率の値は、一般的には±３％程度の誤差を含み得るものとして理解すべきである。
【００１５】
本発明に従えば、ゲル濾過ＨＰＬＣで蛋白質分解物を分析した場合、上述したように６５％以上が分子量５，０００以下になる程度に抗原性を残存させるが、これは、後述するウサギ抗小麦抗血清を用いるＥＬＩＳＡ法による１〜５％の範囲の残存抗原性に対応している。
【００１６】
本発明の低アレルゲン化処理を行う際に用いる小麦粉は薄力粉・中力粉・強力粉をはじめとしたあらゆる小麦粉を使用することが出来る。
本発明の低アレルゲン化処理を行う際に用いる酵素は蛋白分解酵素を基本とする。蛋白分解酵素であり、既述のように、ピーク面積の６５％以上が分子量５，０００以下になるように小麦粉を分解できる酵素なら制限はないが、アクチナーゼが好ましい。また、小麦中の多糖類がアレルゲンであることも知られている。多糖類もある程度の低アレルゲン化処理を行うことが望ましいことから、本発明の低アレルゲン化処理を行う際には多糖分解酵素として、セルラーゼも併用することが好ましい。
【００１７】
本発明における小麦アレルギー用減感作食品および薬剤としては、他のアレルゲンを含まないものなら特に種類は問わないが、定量的に与えることができる形状のものが望ましい。たとえば、ケーキ、クッキー等の菓子用食品からパン、麺等の主食用食品、さらには錠剤があげられる。
【００１８】
低アレルゲン化小麦粉を用いた経口減感作食品および薬剤の設計に際して、本発明は一定量の低アレルゲン化小麦粉食品を一定の期間摂取すること、摂取量を段階的に増量することを摂取基準として構成したものである。従来の低アレルゲン化小麦粉食品の摂取では、小麦の代替えとして位置づけられており、患者が摂取できる量を摂取して与えていた。しかし、低アレルゲン化された小麦粉といえども、相当な量を摂取した場合、ショック等の重篤なアレルギー症状を引きおこすことが確認されている。安全かつ寛容の獲得を確実なものとするために、本発明の減感作食品および薬剤は、安全性が十分に補償された少量の摂取から開始し、一定期間同量を摂取した後、増量するという摂取基準に適したものとした。
【００１９】
実際の摂取では、たとえば、低アレルゲン化小麦粉を含む食品を１週間に２回、４週間以上摂取させ、その後負荷量を増加させることが望ましい。１回の負荷量は２５ｍｇから４ｇの範囲で負荷量の増加率は１．２５〜２倍の範囲が望ましい。
以下、本発明をさらに具体的に説明するため、実施例を示すが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例１】
【００２０】
（低アレルゲン化小麦粉の製造）
特許第３７２７４３８号公報（特許文献１）に記載の実施例３に準じ、低アレルゲン化小麦粉を製造した。小麦粉に対して、重量比０．７５％のセルラーゼＴ「アマノ」４（アマノエンザイム）を重量比０．６の水に溶解して、添加した。これを５０℃で、１時間撹拌した。次いでアクチナーゼ（科研ファルマ）を添加するが、使用した小麦粉によって添加量を変更した。すなわち、薄力粉（８％蛋白）では０．０３５％、中力粉（１０％蛋白）では０．０４１％、強力粉（１２％蛋白）では０．０５３％とした。アクチナーゼ添加後、５０℃で４時間撹拌し、バッター状の低アレルゲン化小麦粉を得た。特許第３７２７４３８号の請求項４ではアクチナーゼの添加量は小麦粉に対して０．１％〜１０％と記載されているが、本特許ではアレルゲン性を残存させるため０．１％未満とした。
【００２１】
このようにして製造した低アレルゲン化小麦粉の分子量分布をゲル濾過ＨＰＬＣ法により分析した。試験方法は以下のようであった。低アレルゲン化小麦粉を移動相で５０倍希釈し、２，０００ｘｇ、１分、遠心した。上清をとり、０．５μｍのフィルターで濾過し濾液を得、試料とした。分析条件は以下のようであった。
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００SWＸＬ、移動相：０．１％トリフロロ酢酸／４５％アセトニトリル、流速：０．５ｍｌ／分、検出：２１０ｎｍ、試料：２０μｌ。分子量マーカーとしてインシュリン（ＭＷ．５，７５０）、インシュリンＢ鎖（ＭＷ．３，４９６）インシュリンＢ鎖フラグメント２２―３０（ＭＷ．１０８６）、トリプトファン（ＭＷ．２０４）を用い、分子量と溶出時間の関係を求め、分子量５，０００、分子量５００の溶出時間を求めた。
【００２２】
このようにして得られたクロマトグラムを図１に示した。また、このときの分子量分布をピーク面積の面積百分率で表した結果を表１に示した。低アレルゲン化前は小麦粉の種類に限らず、ピークは分子量５，０００以上のものが大半を占めていた。一方、低アレルゲン化後は小麦粉の種類に限らず分子量５，０００以上のピークが全体の約３０％に低下しており、分子量５，０００以下のピークが全体の約７０％を占めていた。このうち分子量５００〜５，０００のピークが約２５％、分子量５００以下のピークが約４５％であった。
【００２３】
【表１】
【００２４】
参考までに、ミルクアレルギー用の粉乳であるニューＭＡ−１（森永乳業（株））を同様に分析した結果を図２に示した。ミルクアレルギー用粉乳はアレルギーの発症はないものの、減感作が期待されないものである。本実施例とは異なり、ミルクアレルギー用粉乳は蛋白が高度に分解されており、分子量５００以下のピークが９７％を占めていた。
これら低アレルゲン化小麦粉の残存抗原性をウサギ抗小麦抗血清を用いたＥＬＩＳＡ法によって測定した。ウサギ抗小麦抗血清は小麦蛋白をウサギに注射して得た。ＥＬＩＳＡは以下のようにして行った。低アレルゲン化小麦粉および原料小麦粉の４Ｍ尿素抽出液を１０倍ずつ階段希釈し、９６穴マイクロタイタープレートに添加した。３５℃で１時間放置した後、プレートを水で洗浄し、２％牛血清アルブミンでブロッキングした。３５℃、１時間後にプレートを水で洗浄し、ウサギ抗小麦抗血清を３５℃、２時間反応させた。０．０２％ツイーン８０を含むＰＢＳ（−）でプレートを洗浄した後、アルカリフォスファターゼ標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体を３５℃、１時間反応させた。０．０２％ツイーン８０を含むＰＢＳ（−）でプレートを洗浄した後、ｐ−ニトロフェニルリン酸で発色させ、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。残存抗原性は原料小麦粉の吸光度より求めた検量線をもとに同じ吸光度を示す低アレルゲン化小麦粉の濃度を算出することにより求めた。
【００２５】
結果は表２に示したが、残存抗原性は１．９％〜３．０％であり、ある程度抗原性が残存していることが明らかとなった。一般的なミルクアレルギー用の粉乳が０．０００１％以下に低アレルゲン化されていることと比較した場合、明らかに残存抗原性が高いことが確認された。
【００２６】
【表２】
【００２７】
薄力粉を原料とした低アレルゲン化小麦粉について、小麦アレルギーの重症患者、軽症患者から取った血清との反応性をみたＥＬＩＳＡの結果を表３に示した。特許第３７２７４３８号の実施例３では小麦アレルギー患者の血清を用いたＥＬＩＳＡでは抗原性が検出限界以下となっていたが、本発明では重症患者、軽症患者ともに検出限界以下ではなく反応性が確認された。しかし低アレルゲン化していない小麦粉よりは反応性が低いものであった。
【００２８】
【表３】
【００２９】
以上のように、本発明による低アレルゲン化小麦粉はアレルギー発症の可能性が低下しているものの減感作が期待されない程の低アレルゲン化はされていないことが確認された。
【実施例２】
【００３０】
（カップケーキ）
薄力粉を原料に特許第３７２７４３８号にしたがって作製したバッター状の低アレルゲン化小麦粉３２０ｇ、グラニュー糖７９．２ｇ、食塩０．８ｇをあわせ、湯浴上で水分を４０ｇ蒸発させた。水３０ｇに溶解した重曹２ｇ、水１０ｇに溶解したクエン酸１ｇを加え、生地とした。生地４ｇをアルミカップに入れ、８分間蒸し、カップケーキを製作した。このカップケーキには低アレルゲン化小麦粉として２ｇが含まれていた。ゲル濾過ＨＰＬＣの移動相を用いてカップケーキより抽出液を調製し、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析を行った。得られたクロマトグラムを図３に示した。
【００３１】
分子量５，０００以下のピークの形状は低アレルゲン化薄力粉と同様であった。一方、分子量５，０００以上のピークはカップケーキの加工処理により、移動相に対して不溶性になったと考えられた。分子量５，０００以下のピーク面積を１００％とした場合、分子量５００〜５，０００、分子量５００以下の面積比を表４に示した。カップケーキ抽出液と低アレルゲン化薄力粉との間に大きな差は認められなかった。低アレルゲン化小麦粉を加工したカップケーキにおいて分子量５，０００以下のピークは抽出可能な状態で存在していることが確認された。また、このような操作によって加工品中の低アレルゲン化小麦粉の存在を確認することが出来た。
【００３２】
【表４】
【実施例３】
【００３３】
（ゲル様食品）
本実施例において得られたカップケーキの生地を水で２倍希釈し、低アレルゲン化小麦粉として２５〜８００ｍｇ含むようにプラスチック製の容器に入れた。３分間沸騰水中で煮沸し、ゲル様食品を製作した。
【実施例４】
【００３４】
（錠剤１）
バッター状の低アレルゲン化薄力粉１６ｇ（薄力粉として１０ｇ）、グラニュー糖４ｇ、デキストリン６６ｇを合わせ、少量の水を添加し、均一に混和した。これを加熱して澱粉を糊化させた後、凍結乾燥し、乾燥物を破砕した。破砕物は打錠器を用いて２００ｍｇに打錠した。これは一錠中に２５ｍｇの低アレルゲン化薄力粉を含有し、重症の小麦アレルギー患者が最初の摂取に適するものであった。また、２錠で５０ｍｇ摂取、４錠で１００ｍｇ摂取に適するものであった。
【実施例５】
【００３５】
（錠剤２）
バッター状の低アレルゲン化薄力粉１６ｇ（薄力粉として１０ｇ）、グラニュー糖４ｇ、デキストリン６ｇを合わせ、少量の水を添加し、均一に混和した。これを加熱して澱粉を糊化させた後、凍結乾燥し、乾燥物を破砕した。破砕物は打錠器を用いて４００ｍｇに打錠した。これは一錠中に２００ｍｇの低アレルゲン化薄力粉を含有し、重症の小麦アレルギー患者が摂取量を増加した時の２００ｍｇ摂取に適するものであった。また、２錠で４００ｍｇ摂取、４錠で８００ｍｇ摂取に適するものであった。
【実施例６】
【００３６】
（試験例１）
減感作療法：低アレルゲン化小麦粉として２５ｍｇを含有するゲル様食品を重症小麦アレルギー患者に対し、１週間に２回、４週間食べさせた。次いで５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、４００ｍｇ、８００ｍｇと増量させながら同様にたべさせた。さらにカップケーキを１／２個（低アレルゲン化小麦粉として１ｇ含有）、１個、２個と増量させながら同様に食べさせた。最後に市販のうどんを食べさせた。
臨床的所見：
表５に結果を示した。被験者４名は重症の小麦アレルギー患者であり、試験開始時はごく微量の小麦粉でもアレルギー症状が出ていたが、試験終了時は全員がうどんを食べられるようになっていた。開始時の２５ｍｇ摂取ではアレルギー症状はなかった。
【００３７】
【表５】
【００３８】
生化学的所見：
図４に結果を示した。試験開始時と試験終了時の小麦に対する血中ＩｇＥ量をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩｇＥはアレルギーを引き起こすもっとも重要な因子であることが知られているが、被験者４名中全員のＩｇＥ量が低下し、臨床的所見を裏付ける結果であった。
結論：
ゲル様食品、カップケーキは減感作食品であり、試験例１はそれらを用いた減感作療法として有効であった。重症小麦アレルギー患者には２５ｍｇからの摂取が安全かつ有効であった。
【実施例７】
【００３９】
（試験例２）
減感作療法：
実施例１のカップケーキを１／４個（低アレルゲン化小麦粉として０．５ｇを含有）軽症小麦アレルギー患者に対し、１週間に２回、４週間食べさせた。次いで１／２個、１個、２個と増量させながら同様にたべさせた。最後に市販のうどんを食べさせた。
臨床的所見：
表６に結果を示した。被験者４名は軽症の小麦アレルギー患者であり、試験開始時は少量のうどんでもアレルギー症状が出ていたが、試験終了時は全員がうどんを食べられるようになっていた。
【００４０】
【表６】
【００４１】
生化学的所見：
図５に結果を示した。試験開始時と試験終了時の小麦に対する血中ＩｇＥ量をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩｇＥはアレルギーを引き起こすもっとも重要な因子であることが知られているが、被験者４名中３名のＩｇＥ量が低下していた。この結果は臨床的所見を支持する結果であった。
結論：
カップケーキは減感作食品であり、試験例２はそれを用いた減感作療法として有効であった。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】本発明において用いられる各種小麦粉の低アレルゲン化前後のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】参考のために示す、ミルクアレルギー用粉乳のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３】本発明の１例であるカップケーキの抽出液のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図４】本発明のゲル様食品を用いて実施した試験における重症患者の減感作の状況を例示するグラフである。
【図５】本発明のカップケーキを用いて実施した試験における軽症患者の減感作の状況を例示するグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は小麦アレルギーの減感作のための食品および薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーは、様々な原因（アレルゲン）や複雑な発症機構を特徴とし、しばしば長期間の治療を伴う完治しにくい疾病である。治療方法としては薬物療法が基本的であるがこれは対症療法であり、根本的に改善させる原因療法ではない。ハウスダストやスギ花粉のような吸入型のアレルゲンを原因とするアレルギーでは原因療法としてアレルゲンを直接注射する減感作療法が行われている。しかし、この療法は痛みを伴うこと、注射のために幾度もの通院が必要なことなど患者の負担は大きい。したがって、吸入型のアレルゲンを経口摂取することで改善させる、経口減感作療法が試みられており、関連する研究報告や特許も多い。特にスギ花粉症に対してはスギ花粉を入れた飴などが花粉症を改善する効果をうたって販売されている。
【０００３】
一方、食物をアレルゲンとする食物アレルギーは乳幼児に多い疾患で、これは消化・免疫系の未発達により食物に対する寛容が不完全であることから発症すると考えられている。したがって、原因療法として、一定の期間アレルゲンである食物を摂取せず、成長に伴う自然な寛容獲得を期待する除去食療法が行われている。除去食療法では、加工食品ではアレルゲンが混入している場合があり、治療途中に過ってアレルゲンを摂食してしまうという問題が多く発生している。特に小麦アレルギーにおいては除去期間が長期化することや小麦は多くの食品に使用されていることからその危険性はさらに大きい。また、一般に除去食療法は除去期間中どの程度の寛容が獲得されているのかが不明なため、解除の際、重篤なアレルギー症状を呈する危険性もある。このように除去食療法は広く行われている治療法であるが、多くの問題を抱える治療法でもある。
【０００４】
食物アレルギーに関してもスギ花粉症で行われているような経口減感作療法が試みられている。除去食療法とは異なり、アレルゲンである食品を少しずつ食べさせて早期に寛容を獲得させることを目的とするものである。たとえば、小麦アレルギー患者に対してはうどん、卵アレルギー患者に対しては卵を用いた減感作療法が行われている。しかしながら、吸入型のスギ花粉症とは異なり、減感作されたという報告はない。したがって、経口減感作を誘導する食品の報告もない。実際、「食物アレルギー治療のための新しい試み」（Li XM, Sampson HA. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2002
Jun;2(3):273-8）（非特許文献１）の要約中には、「（抗原性が大きく残っている通常の食物による）急速の免疫療法（経口減感作）が報告されているが、いずれも維持が難しく、副反応が高い率で生じる」との記述もある〔（ ）は補足）〕。加えて、この経口減感作療法においては、投与量によっては重篤なアレルギー発症の危険性も高い。
【０００５】
このように食物アレルギーにおいても、安全かつ短期間での寛容獲得が期待できる経口減感作療法が実現すれば、患者の受ける恩恵は計り知れなく、そのような食品の開発が待ち望まれている。
食物アレルギーは食物中の蛋白がアレルゲンとなることが知られている。したがって、酵素等で蛋白質を分解し、アレルギーの発症を抑制する試みが多くなされている。既に乳、米では厚生労働省が認可したアレルギー対応食品も市販されている。これらはアレルギー患者が食べてもアレルギー発症の危険性がない製品であるが、経口減感作を誘導する食品ではない。臨床医の間においても、アレルゲン性がないものでは減感作を誘導することは出来ないと認識されている。事実、ミルクアレルギー用の粉乳は長年使用されているが、減感作が誘導されたという報告はない。また「乳清蛋白に対するTH2免疫応答への加水分解乳の摂取効果」(H.-J.Peng,S.-N.Su,J.-J.Tsai,L.-C.Tsai,H.-L.Kuo and S.-W.Kuo, Clin
Exp Allergy,34,663-670(2004))（非特許文献２）においてもミルクアレルギー用の粉乳では経口減感作が誘導されないと記載されている。
【０００６】
小麦においても、小麦アレルギー患者でも食べることが出来る小麦粉として酵素によって低アレルゲン化された小麦粉が開発されている（特許第３７２７４３８号公報：特許文献１）。この明細書には低アレルゲン化した小麦粉と小麦アレルギー患者血清との結合性がＥＬＩＳＡ法によって検出限界以下にまで低減化されていることが示されている。それ故、アレルゲンを含まない低アレルゲン化小麦粉と記載されている。しかしながら、減感作を期待させるような記述はない。
【０００７】
さらに小麦アレルギーの主要アレルゲンで小麦の主要蛋白であるグルテンを酵素分解しペプチド化した特許も出されている〔特開平１１−１１６５９６号公報（特許文献２）、特開２００１−３７４４０号公報（特許文献３）、特開２００２−２３８４６３号公報（特許文献４）〕。しかしこれらには経腸、経口栄養剤、調味料等の用途が記載されているが、減感作に関する記述はない。
【非特許文献１】「食物アレルギー治療のための新しい試み」（Li XM, Sampson HA. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2002Jun;2(3):273-8）
【非特許文献２】「乳清蛋白に対するTH2免疫応答への加水分解乳の摂取効果」(H.-J.Peng,S.-N.Su,J.-J.Tsai,L.-C.Tsai,H.-L.Kuoand S.-W.Kuo, Clin Exp Allergy,34,663-670(2004))
【特許文献１】特許第３７２７４３８号公報
【特許文献２】特開平１１−１１６５９６号公報
【特許文献３】特開２００１−３７４４０号公報
【特許文献４】特開２００２−２３８４６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、小麦アレルギー患者が経口摂取により寛容を獲得できる小麦アレルギー用の減感作食品および減感作薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
小麦アレルギー患者にとっては短期間でふつうの小麦粉製品が摂取できるようになることがもっとも望ましい。上述のように通常の小麦粉食品での減感作療法はアレルギー発症リスクが大きいだけでなく減感作が得られない。一方で、十分に低アレルゲン化されたものも減感作は得られない。
我々は、低アレルゲン化されているものの、抗原性が少し残存している小麦粉を用いることにより、アレルギー発症リスクが少なくかつ短期間の摂取で寛容が獲得されることを見いだし、経口減感作効果を持つ食品を発明するに至った。
【００１０】
かくして、本発明は、蛋白質を分解して低アレルゲン化した小麦粉を含有する小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤、特に、該低アレルゲン化小麦粉が、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析により蛋白分解物の分子量分布を面積百分率で表したとき、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上から成る、小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
小麦アレルギー治療のための経口減感作食品および減感作薬剤を提供することができる。本発明により小麦アレルギー患者が短期間で通常の小麦を食べることが出来るようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
減感作療法は感作を引き起こすもの、すなわちある程度の抗原性が保持されているほうが望ましい。アレルギー対応食品のようなアレルギー発症の危険性が低いものでは効果がない。このことから本発明では原料となる小麦粉の低アレルゲン化処理に際して抗原性を完全に分解せず特定の割合で残存させる。すなわち、低アレルゲン化小麦粉をゲル濾過ＨＰＬＣ法で分析し、その蛋白分解物の分子量分布をＨＰＬＣチャート（クロマトグラム）の面積百分率で表した場合、６５％以上が分子量５，０００以下になるように、より具体的には、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００以下が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上になるように低アレルゲン化させることにした。
【００１３】
なお、製品（食品または薬剤）の種類によっては、当該製品を製造するための加工処理により、高分子量の蛋白質が不溶化してＨＰＬＣ分析のチャートには現れないこともある。したがって、そのような場合も含めて、本発明の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤は、製品（最終製品）のゲル濾過ＨＰＬＣ分析をした場合には、分子量５，０００以下の面積百分率を１００％としたとき、分子量５００〜５，０００が４０％以下、分子量５００が６０％以上となる。
【００１４】
また、よく知られているようにＨＰＬＣ分析におけるチャートに表れる面積の大きさは、測定条件や用いる機器の違いによる相違が認められている。したがって、本願の特許請求の範囲および明細書に示されているＨＰＬＣ分析における面積百分率の値は、一般的には±３％程度の誤差を含み得るものとして理解すべきである。
【００１５】
本発明に従えば、ゲル濾過ＨＰＬＣで蛋白質分解物を分析した場合、上述したように６５％以上が分子量５，０００以下になる程度に抗原性を残存させるが、これは、後述するウサギ抗小麦抗血清を用いるＥＬＩＳＡ法による１〜５％の範囲の残存抗原性に対応している。
【００１６】
本発明の低アレルゲン化処理を行う際に用いる小麦粉は薄力粉・中力粉・強力粉をはじめとしたあらゆる小麦粉を使用することが出来る。
本発明の低アレルゲン化処理を行う際に用いる酵素は蛋白分解酵素を基本とする。蛋白分解酵素であり、既述のように、ピーク面積の６５％以上が分子量５，０００以下になるように小麦粉を分解できる酵素なら制限はないが、アクチナーゼが好ましい。また、小麦中の多糖類がアレルゲンであることも知られている。多糖類もある程度の低アレルゲン化処理を行うことが望ましいことから、本発明の低アレルゲン化処理を行う際には多糖分解酵素として、セルラーゼも併用することが好ましい。
【００１７】
本発明における小麦アレルギー用減感作食品および薬剤としては、他のアレルゲンを含まないものなら特に種類は問わないが、定量的に与えることができる形状のものが望ましい。たとえば、ケーキ、クッキー等の菓子用食品からパン、麺等の主食用食品、さらには錠剤があげられる。
【００１８】
低アレルゲン化小麦粉を用いた経口減感作食品および薬剤の設計に際して、本発明は一定量の低アレルゲン化小麦粉食品を一定の期間摂取すること、摂取量を段階的に増量することを摂取基準として構成したものである。従来の低アレルゲン化小麦粉食品の摂取では、小麦の代替えとして位置づけられており、患者が摂取できる量を摂取して与えていた。しかし、低アレルゲン化された小麦粉といえども、相当な量を摂取した場合、ショック等の重篤なアレルギー症状を引きおこすことが確認されている。安全かつ寛容の獲得を確実なものとするために、本発明の減感作食品および薬剤は、安全性が十分に補償された少量の摂取から開始し、一定期間同量を摂取した後、増量するという摂取基準に適したものとした。
【００１９】
実際の摂取では、たとえば、低アレルゲン化小麦粉を含む食品を１週間に２回、４週間以上摂取させ、その後負荷量を増加させることが望ましい。１回の負荷量は２５ｍｇから４ｇの範囲で負荷量の増加率は１．２５〜２倍の範囲が望ましい。
以下、本発明をさらに具体的に説明するため、実施例を示すが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例１】
【００２０】
（低アレルゲン化小麦粉の製造）
特許第３７２７４３８号公報（特許文献１）に記載の実施例３に準じ、低アレルゲン化小麦粉を製造した。小麦粉に対して、重量比０．７５％のセルラーゼＴ「アマノ」４（アマノエンザイム）を重量比０．６の水に溶解して、添加した。これを５０℃で、１時間撹拌した。次いでアクチナーゼ（科研ファルマ）を添加するが、使用した小麦粉によって添加量を変更した。すなわち、薄力粉（８％蛋白）では０．０３５％、中力粉（１０％蛋白）では０．０４１％、強力粉（１２％蛋白）では０．０５３％とした。アクチナーゼ添加後、５０℃で４時間撹拌し、バッター状の低アレルゲン化小麦粉を得た。特許第３７２７４３８号の請求項４ではアクチナーゼの添加量は小麦粉に対して０．１％〜１０％と記載されているが、本特許ではアレルゲン性を残存させるため０．１％未満とした。
【００２１】
このようにして製造した低アレルゲン化小麦粉の分子量分布をゲル濾過ＨＰＬＣ法により分析した。試験方法は以下のようであった。低アレルゲン化小麦粉を移動相で５０倍希釈し、２，０００ｘｇ、１分、遠心した。上清をとり、０．５μｍのフィルターで濾過し濾液を得、試料とした。分析条件は以下のようであった。
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００SWＸＬ、移動相：０．１％トリフロロ酢酸／４５％アセトニトリル、流速：０．５ｍｌ／分、検出：２１０ｎｍ、試料：２０μｌ。分子量マーカーとしてインシュリン（ＭＷ．５，７５０）、インシュリンＢ鎖（ＭＷ．３，４９６）インシュリンＢ鎖フラグメント２２―３０（ＭＷ．１０８６）、トリプトファン（ＭＷ．２０４）を用い、分子量と溶出時間の関係を求め、分子量５，０００、分子量５００の溶出時間を求めた。
【００２２】
このようにして得られたクロマトグラムを図１に示した。また、このときの分子量分布をピーク面積の面積百分率で表した結果を表１に示した。低アレルゲン化前は小麦粉の種類に限らず、ピークは分子量５，０００以上のものが大半を占めていた。一方、低アレルゲン化後は小麦粉の種類に限らず分子量５，０００以上のピークが全体の約３０％に低下しており、分子量５，０００以下のピークが全体の約７０％を占めていた。このうち分子量５００〜５，０００のピークが約２５％、分子量５００以下のピークが約４５％であった。
【００２３】
【表１】
【００２４】
参考までに、ミルクアレルギー用の粉乳であるニューＭＡ−１（森永乳業（株））を同様に分析した結果を図２に示した。ミルクアレルギー用粉乳はアレルギーの発症はないものの、減感作が期待されないものである。本実施例とは異なり、ミルクアレルギー用粉乳は蛋白が高度に分解されており、分子量５００以下のピークが９７％を占めていた。
これら低アレルゲン化小麦粉の残存抗原性をウサギ抗小麦抗血清を用いたＥＬＩＳＡ法によって測定した。ウサギ抗小麦抗血清は小麦蛋白をウサギに注射して得た。ＥＬＩＳＡは以下のようにして行った。低アレルゲン化小麦粉および原料小麦粉の４Ｍ尿素抽出液を１０倍ずつ階段希釈し、９６穴マイクロタイタープレートに添加した。３５℃で１時間放置した後、プレートを水で洗浄し、２％牛血清アルブミンでブロッキングした。３５℃、１時間後にプレートを水で洗浄し、ウサギ抗小麦抗血清を３５℃、２時間反応させた。０．０２％ツイーン８０を含むＰＢＳ（−）でプレートを洗浄した後、アルカリフォスファターゼ標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体を３５℃、１時間反応させた。０．０２％ツイーン８０を含むＰＢＳ（−）でプレートを洗浄した後、ｐ−ニトロフェニルリン酸で発色させ、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。残存抗原性は原料小麦粉の吸光度より求めた検量線をもとに同じ吸光度を示す低アレルゲン化小麦粉の濃度を算出することにより求めた。
【００２５】
結果は表２に示したが、残存抗原性は１．９％〜３．０％であり、ある程度抗原性が残存していることが明らかとなった。一般的なミルクアレルギー用の粉乳が０．０００１％以下に低アレルゲン化されていることと比較した場合、明らかに残存抗原性が高いことが確認された。
【００２６】
【表２】
【００２７】
薄力粉を原料とした低アレルゲン化小麦粉について、小麦アレルギーの重症患者、軽症患者から取った血清との反応性をみたＥＬＩＳＡの結果を表３に示した。特許第３７２７４３８号の実施例３では小麦アレルギー患者の血清を用いたＥＬＩＳＡでは抗原性が検出限界以下となっていたが、本発明では重症患者、軽症患者ともに検出限界以下ではなく反応性が確認された。しかし低アレルゲン化していない小麦粉よりは反応性が低いものであった。
【００２８】
【表３】
【００２９】
以上のように、本発明による低アレルゲン化小麦粉はアレルギー発症の可能性が低下しているものの減感作が期待されない程の低アレルゲン化はされていないことが確認された。
【実施例２】
【００３０】
（カップケーキ）
薄力粉を原料に特許第３７２７４３８号にしたがって作製したバッター状の低アレルゲン化小麦粉３２０ｇ、グラニュー糖７９．２ｇ、食塩０．８ｇをあわせ、湯浴上で水分を４０ｇ蒸発させた。水３０ｇに溶解した重曹２ｇ、水１０ｇに溶解したクエン酸１ｇを加え、生地とした。生地４ｇをアルミカップに入れ、８分間蒸し、カップケーキを製作した。このカップケーキには低アレルゲン化小麦粉として２ｇが含まれていた。ゲル濾過ＨＰＬＣの移動相を用いてカップケーキより抽出液を調製し、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析を行った。得られたクロマトグラムを図３に示した。
【００３１】
分子量５，０００以下のピークの形状は低アレルゲン化薄力粉と同様であった。一方、分子量５，０００以上のピークはカップケーキの加工処理により、移動相に対して不溶性になったと考えられた。分子量５，０００以下のピーク面積を１００％とした場合、分子量５００〜５，０００、分子量５００以下の面積比を表４に示した。カップケーキ抽出液と低アレルゲン化薄力粉との間に大きな差は認められなかった。低アレルゲン化小麦粉を加工したカップケーキにおいて分子量５，０００以下のピークは抽出可能な状態で存在していることが確認された。また、このような操作によって加工品中の低アレルゲン化小麦粉の存在を確認することが出来た。
【００３２】
【表４】
【実施例３】
【００３３】
（ゲル様食品）
本実施例において得られたカップケーキの生地を水で２倍希釈し、低アレルゲン化小麦粉として２５〜８００ｍｇ含むようにプラスチック製の容器に入れた。３分間沸騰水中で煮沸し、ゲル様食品を製作した。
【実施例４】
【００３４】
（錠剤１）
バッター状の低アレルゲン化薄力粉１６ｇ（薄力粉として１０ｇ）、グラニュー糖４ｇ、デキストリン６６ｇを合わせ、少量の水を添加し、均一に混和した。これを加熱して澱粉を糊化させた後、凍結乾燥し、乾燥物を破砕した。破砕物は打錠器を用いて２００ｍｇに打錠した。これは一錠中に２５ｍｇの低アレルゲン化薄力粉を含有し、重症の小麦アレルギー患者が最初の摂取に適するものであった。また、２錠で５０ｍｇ摂取、４錠で１００ｍｇ摂取に適するものであった。
【実施例５】
【００３５】
（錠剤２）
バッター状の低アレルゲン化薄力粉１６ｇ（薄力粉として１０ｇ）、グラニュー糖４ｇ、デキストリン６ｇを合わせ、少量の水を添加し、均一に混和した。これを加熱して澱粉を糊化させた後、凍結乾燥し、乾燥物を破砕した。破砕物は打錠器を用いて４００ｍｇに打錠した。これは一錠中に２００ｍｇの低アレルゲン化薄力粉を含有し、重症の小麦アレルギー患者が摂取量を増加した時の２００ｍｇ摂取に適するものであった。また、２錠で４００ｍｇ摂取、４錠で８００ｍｇ摂取に適するものであった。
【実施例６】
【００３６】
（試験例１）
減感作療法：低アレルゲン化小麦粉として２５ｍｇを含有するゲル様食品を重症小麦アレルギー患者に対し、１週間に２回、４週間食べさせた。次いで５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、４００ｍｇ、８００ｍｇと増量させながら同様にたべさせた。さらにカップケーキを１／２個（低アレルゲン化小麦粉として１ｇ含有）、１個、２個と増量させながら同様に食べさせた。最後に市販のうどんを食べさせた。
臨床的所見：
表５に結果を示した。被験者４名は重症の小麦アレルギー患者であり、試験開始時はごく微量の小麦粉でもアレルギー症状が出ていたが、試験終了時は全員がうどんを食べられるようになっていた。開始時の２５ｍｇ摂取ではアレルギー症状はなかった。
【００３７】
【表５】
【００３８】
生化学的所見：
図４に結果を示した。試験開始時と試験終了時の小麦に対する血中ＩｇＥ量をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩｇＥはアレルギーを引き起こすもっとも重要な因子であることが知られているが、被験者４名中全員のＩｇＥ量が低下し、臨床的所見を裏付ける結果であった。
結論：
ゲル様食品、カップケーキは減感作食品であり、試験例１はそれらを用いた減感作療法として有効であった。重症小麦アレルギー患者には２５ｍｇからの摂取が安全かつ有効であった。
【実施例７】
【００３９】
（試験例２）
減感作療法：
実施例１のカップケーキを１／４個（低アレルゲン化小麦粉として０．５ｇを含有）軽症小麦アレルギー患者に対し、１週間に２回、４週間食べさせた。次いで１／２個、１個、２個と増量させながら同様にたべさせた。最後に市販のうどんを食べさせた。
臨床的所見：
表６に結果を示した。被験者４名は軽症の小麦アレルギー患者であり、試験開始時は少量のうどんでもアレルギー症状が出ていたが、試験終了時は全員がうどんを食べられるようになっていた。
【００４０】
【表６】
【００４１】
生化学的所見：
図５に結果を示した。試験開始時と試験終了時の小麦に対する血中ＩｇＥ量をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩｇＥはアレルギーを引き起こすもっとも重要な因子であることが知られているが、被験者４名中３名のＩｇＥ量が低下していた。この結果は臨床的所見を支持する結果であった。
結論：
カップケーキは減感作食品であり、試験例２はそれを用いた減感作療法として有効であった。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】本発明において用いられる各種小麦粉の低アレルゲン化前後のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】参考のために示す、ミルクアレルギー用粉乳のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３】本発明の１例であるカップケーキの抽出液のゲル濾過ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図４】本発明のゲル様食品を用いて実施した試験における重症患者の減感作の状況を例示するグラフである。
【図５】本発明のカップケーキを用いて実施した試験における軽症患者の減感作の状況を例示するグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白質を分解して低アレルゲン化した小麦粉を含有することを特徴とする小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項２】
前記低アレルゲン化小麦粉が、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析により蛋白分解物の分子量分布を面積百分率で表したとき、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上から成るものであることを特徴とする請求項１の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項３】
製品のゲル濾過ＨＰＬＣ分析において、分子量５，０００以下の面積百分率を１００％としたとき、分子量５００〜５，０００が４０％以下、分子量５００が６０％以上であることを特徴とする請求項２の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項４】
低アレルゲン化小麦粉を２５ｍｇから２ｇ含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかの小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項１】
蛋白質を分解して低アレルゲン化した小麦粉を含有することを特徴とする小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項２】
前記低アレルゲン化小麦粉が、ゲル濾過ＨＰＬＣ分析により蛋白分解物の分子量分布を面積百分率で表したとき、分子量５，０００以上が３５％以下、分子量５００〜５，０００が３０％以下、分子量５００以下が３５％以上から成るものであることを特徴とする請求項１の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項３】
製品のゲル濾過ＨＰＬＣ分析において、分子量５，０００以下の面積百分率を１００％としたとき、分子量５００〜５，０００が４０％以下、分子量５００が６０％以上であることを特徴とする請求項２の小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【請求項４】
低アレルゲン化小麦粉を２５ｍｇから２ｇ含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかの小麦アレルギー用減感作食品または減感作薬剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００８−８１４５８（Ｐ２００８−８１４５８Ａ）
【公開日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２６４７１９（Ｐ２００６−２６４７１９）
【出願日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【出願人】（５９３１３１６１１）オーム乳業株式会社 (10)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【出願人】（５９３１３１６１１）オーム乳業株式会社 (10)
【Ｆターム（参考）】
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