本発明は、新規ＣＤ４０Ｌポリペプチドおよび核酸、並びにこのようなＣＤ４０Ｌポリペプチドおよび／または核酸を含んでなる抗原提示細胞およびワクチン、および抗原提示細胞およびワクチンを作製するための関連方法を提供する。抗原提示細胞およびワクチンは免疫応答を高めるために有用である。本発明は、（ａ）シグナル化樹状細胞を産生するためにインターフェロンガンマレセプター（ＩＦＮ‐γＲ）アゴニストおよび／または腫瘍壊死因子アルファレセプター（ＴＮＦ‐αＲ）アゴニストを含んでなる第一シグナルで単離未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）をシグナリングし、そして（ｂ）ＣＣＲ７^＋成熟樹状細胞を産生するために有効量のＣＤ４０アゴニストを含んでなる第二の一過性シグナルにより該シグナル化樹状細胞をシグナリングする連続工程を含んでなる、成熟樹状細胞（ＤＣ）を作製するための方法を提供する。本発明の方法で作製された樹状細胞の富化集団も本発明により提供される。このような樹状細胞は、高い免疫刺激性と、増加したＩＬ-１２分泌および／または減少したＩＬ-１０分泌を有している。ＣＤ４０シグナリングは、ＣＤ４０Ｌをコードする外来ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡ）から翻訳されたポリペプチドの１種以上、ＣＤ４０レセプターに対するアゴニスト抗体またはＣＤ４０リガンドポリペプチドにより開始される。富化集団はＤＣへの免疫原の投与で更に修飾される。ＤＣはその細胞表面で免疫原を取込んでプロセッシングする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸残基２１‐２６１からなる、組換えＣＤ４０Ｌポリペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリペプチドを含んでなる、樹状細胞。
【請求項３】
請求項１に記載のＣＤ４０Ｌポリペプチドをコードする、組換え核酸。
【請求項４】
前記核酸がインビトロ転写ＲＮＡである、請求項３に記載の核酸。
【請求項５】
前記ＲＮＡがキャップ化および／またはポリアデニル化される、請求項４に記載の核酸。
【請求項６】
請求項４に記載の核酸を含んでなる、ワクチン。
【請求項７】
請求項４に記載の核酸を含んでなる、樹状細胞。
【請求項８】
請求項７に記載の樹状細胞を含んでなる、ワクチン。
【請求項９】
請求項３に記載の核酸を含んでなる、ベクター。
【請求項１０】
前記ベクターがｐＡＲＧ ＣＤ４０Ｌである、請求項７に記載のベクター。
【請求項１１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸残基２１‐２６１から本質的になる、組換えＣＤ４０Ｌポリペプチド。
【請求項１２】
請求項１１に記載のポリペプチドを含んでなる、樹状細胞。
【請求項１３】
請求項１１に記載のＣＤ４０Ｌポリペプチドをコードする、組換え核酸。
【請求項１４】
前記核酸がインビトロ転写ＲＮＡである、請求項１３に記載の核酸。
【請求項１５】
請求項１４に記載の核酸を含んでなる、ワクチン。
【請求項１６】
請求項１４に記載の核酸を含んでなる、樹状細胞。
【請求項１７】
請求項１６に記載の樹状細胞を含んでなる、ワクチン。
【請求項１８】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸残基２１‐２６１と少なくとも８０％配列同一性を有し、前記ポリペプチドが２３７〜２４７アミノ酸残基からなる、組換えＣＤ４０Ｌポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１８に記載のポリペプチドを含んでなる、樹状細胞。
【請求項２０】
請求項１８に記載のＣＤ４０Ｌポリペプチドをコードする、組換え核酸。
【請求項２１】
前記核酸がインビトロ転写ＲＮＡである、請求項２０に記載の核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含んでなる、ワクチン。
【請求項２３】
請求項２１に記載の核酸を含んでなる、樹状細胞。
【請求項２４】
請求項２３に記載の樹状細胞を含んでなる、ワクチン。
【請求項２５】
抗原特異的Ｔ細胞の集団からＣＤ２８^＋ＣＤ４５ＲＡ⁻メモリー／エフェクターＴ細胞の集団を優先的に誘導する、樹状細胞。
【請求項２６】
請求項２５に記載の樹状細胞を含んでなる、ワクチン。
【請求項２７】
ａ．ＩＦＮ‐γＲアゴニストシグナル化樹状細胞を産生するために、インターフェロンガンマレセプター（ＩＦＮ‐γＲ）アゴニストおよび場合によりＴＮＦ‐αＲアゴニストを含んでなる第一シグナルにより単離未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）をシグナリングし、そして
ｂ．ＣＣＲ７^＋成熟樹状細胞を産生するために有効量のＣＤ４０Ｌポリペプチドを含んでなる第二の一過性シグナルにより前記ＩＦＮ‐γＲアゴニストシグナル化樹状細胞をシグナリングする連続工程を含んでなり、
ここで、ＣＤ４０ＬポリペプチドがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸残基２１‐２６１から本質的になり、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸残基２１‐２６１と少なくとも８０％配列同一性を有するポリペプチドである、
成熟樹状細胞（ＤＣ）を作製するための方法。
【請求項２８】
前記ＣＤ４０Ｌタンパク質が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のｃＤＮＡ、またはコドン縮重により異なるバリアントに対応するＲＮＡによりコードされ、前記ＲＮＡが場合によりキャップ化および／またはポリアデニル化される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記樹状細胞が、ＣＤ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡによりトランスフェクトされる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記樹状細胞がトランスフェクションの時点において成熟したものである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｉＤＣおよび／または前記シグナル化ＤＣをＰＧＥ_２と接触させることを更に含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
工程（ａ）および（ｂ）が、前記細胞をＧＭ-ＣＳＦおよびＩＬ-４またはＩＬ-１３の少なくとも一方と接触させることを更に含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
工程（ａ）における細胞がＴＮＦ‐αと接触させる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
工程（ａ）における細胞をＰＧＥ_２と接触させることを更に含んでなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＩＦＮ‐γＲアゴニストがＩＦＮ‐γである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
第一シグナルがＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α、およびＰＧＥ_２を含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
第一シグナルがＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α、およびＰＧＥ_２を含んでなり、並びに工程（ｂ）が前記ＣＤ４０ＬポリペプチドをコードするＲＮＡにより前記樹状細胞をトランスフェクトすることを含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
ガラクトシルセラミド、グリコシルセラミド、ガラクトフラノシルセラミド、アラビノピラノシルセラミド、α‐Ｃ‐ガラクトシルセラミド、およびα‐Ｓ‐ガラクトシルセラミドからなる群より選択される化合物と、未成熟樹状細胞および／またはＩＦＮ‐γＲアゴニストシグナル化樹状細胞および／またはＣＣＲ７^＋成熟樹状細胞とを接触させることを更に含んでなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
前記化合物がガラクトシルセラミドである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ガラクトシルセラミドが（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）‐１‐Ｏ‐（α‐Ｄ‐ガラクトピラノシル）‐２‐（Ｎ‐ヘキサコサノイルアミノ）‐１，３，４‐オクタデカントリオール（ＫＲＮ７０００）である、請求項３９に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３５Ｃ】

【図３６Ａ】

【図３６Ｂ】

【図３６Ｃ】

【公表番号】特表２００９−５３３０２５（Ｐ２００９−５３３０２５Ａ）
【公表日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０４３４６（Ｐ２００９−５０４３４６）
【出願日】平成１９年４月６日（２００７．４．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００８７３４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１７６８２
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０５１８２９１５）アルゴス　セラピューティクス，インコーポレイティド (8)
【出願人】（３０７０２３１２２）キリンファーマ株式会社 (11)
【Ｆターム（参考）】