【課題】ポリペプチドの成長因子、それらを製造する方法、それらをコードするポリヌクレオチド、それらに対する抗体、およびそれらを使用する方法が開示される。
【解決手段】ポリヌクレオチドは、配列番号２の残基46〜163または配列番号２の残基２35〜345に対して少なくとも90％同一であるアミノ酸セグメントを含んでなる。ポリペプチドのマルチマーがまた開示される。ポリペプチド、マルチマーのタンパク質、およびポリヌクレオチドは、細胞および組織の発生の研究および調節において、細胞培地の成分として、および診断剤として使用することができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２または配列番号43のタンパク質のエピトープ担持部分を含んでなる少なくとも15のアミノ酸残基の単離されたポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドが下記の配列：
（ａ） 配列番号２の残基４６〜１６３；および
（ｂ） 配列番号２の残基２３５〜３４５；
から成る群から選択される配列に対して少なくとも９０％同一であるセグメントを含んでなる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ペプチドが下記のペプチド：
配列番号２の残基１５〜１６３；
配列番号２の残基４６〜１６３；
配列番号２の残基１５〜１７０；
配列番号２の残基４６〜１７０；
配列番号２の残基１５〜２３４；
配列番号２の残基４６〜２３４；
配列番号２の残基１５〜２２９アミド；
配列番号２の残基１５〜２３０；
配列番号２の残基１５〜３４５；
配列番号２の残基４６〜３４５；
配列番号２の残基１６４〜３４５；
配列番号２の残基２３５〜３４５；および
配列番号２の残基２２６〜３４５；
から成る群から選択される、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
式Ｒ１ｘ−Ｒ２ｙ−Ｒ３ｚ：
〔式中、
Ｒ１は配列番号２の残基４６〜１６３に対して少なくとも９０％同一である１００〜１２０残基長さのポリペプチドを含んでなり、そして配列番号２の残基１０４〜１２４に対応する配列モチーフＣ［ＫＲ］Ｙ［ＤＮＥ］［ＷＹＦ］Ｘ｛１１，１５｝Ｇ［ＫＲ］［ＷＹＦ］Ｃ（配列番号４）を含んでなり、
Ｒ２は配列番号２の残基１６４〜２３４に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、
Ｒ３は配列番号２の残基２３５〜３４５に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、そして配列番号２の残基２５０、２８０、２８４、２９６、３３５、および３３７に対応する位置におけるシステイン残基；配列番号２の残基２８２に対応する位置におけるグリシン残基；および配列番号２の残基２５０〜３３７に対応する配列モチーフＣＸ｛１８，３３｝ＣＸＧＸＣＸ｛６，３３｝ＣＸ｛２０，４０｝ＣＸＣ（配列番号３）を含んでなり、そして
ｘ、ｙ、およびｚの各々は独立して０または１であり、ただしｘおよびｚの少なくとも１つは１であり、そして
ｘおよびｚの各々が１である場合、ｙは１である〕
のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項５】
ｘ＝１である、請求項４に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項６】
Ｒ１が配列番号２の残基４６〜１６３を含んでなる、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項７】
Ｒ１が配列番号２の残基１８〜１６３に対して少なくとも９０％同一である、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項８】
ｙ＝１である、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項９】
ｚ＝１である、請求項８に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１０】
前記ペプチドが配列番号２の残基４６〜２２９、配列番号２の残基１６４〜３４５、または配列番号２の残基４６〜３４５を含んでなる、請求項４に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１１】
ｚ＝１である、請求項４に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
Ｒ３が配列番号２の残基２３５〜３４５を含んでなる、請求項１１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１３】
ｙ＝１である、請求項１１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
ｘ＝１である、請求項１３に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号２の２８６、２８７、２９１、および２９４に対応する位置にシステインをさらに含んでなる、請求項１１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
親和標識をさらに含んでなる、請求項４〜１５のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
免疫グロブリンの定常ドメインをさらに含んでなる、請求項４〜１５のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
第２ポリペプチドに作用可能に連鎖されている第１ポリペプチドを含んでなり、前記第１ポリペプチドが式Ｒ１ｘ−Ｒ２ｙ−Ｒ３ｚ：
〔式中、
Ｒ１は配列番号２の残基４６〜１６３に対して少なくとも９０％同一である１００〜１２０残基長さのポリペプチドを含んでなり、そして配列番号２の残基１０４〜１２４に対応する配列モチーフＣ［ＫＲ］Ｙ［ＤＮＥ］［ＷＹＦ］Ｘ｛１１，１５｝Ｇ［ＫＲ］［ＷＹＦ］Ｃ（配列番号４）を含んでなり、
Ｒ２は配列番号２の残基１６４〜２３４に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、
Ｒ３は配列番号２の残基２３５〜３４５に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、そして配列番号２の残基２５０、２８０、２８４、２９６、３３５、および３３７に対応する位置におけるシステイン残基；配列番号２の残基２８２に対応する位置におけるグリシン残基；および配列番号２の残基２５０〜３３７に対応する配列モチーフＣＸ｛２５，３３｝ＣＸＧＸＣＸ｛１０，３３｝ＣＸ｛２０，４０｝ＣＸＣ（配列番号３）を含んでなり、そして
ｘ、ｙ、およびｚの各々は独立して０または１であり、ただしｘおよびｚの少なくとも１つは１であり、そして
ｘおよびｚの各々が１である場合、ｙは１である〕
により表わされるアミノ酸配列を有し、そして細胞の増殖、分化、代謝、または移動をモジュレートするタンパク質。
【請求項１９】
前記タンパク質がヘテロダイマーである、請求項１８に記載の単離されたタンパク質。
【請求項２０】
ｚが１であり、そして前記第２ポリペプチドがＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ−Ａ、およびＰＤＧＦ−Ｂから成る群から選択される、請求項１９に記載の単離されたタンパク質。
【請求項２１】
前記タンパク質がホモダイマーである、請求項１８に記載の単離されたタンパク質。
【請求項２２】
ｚ＝１である、請求項２１に記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】
前記第１および第２のポリペプチドが、配列番号２の残基２３５〜３４５を含んでなる、単離されたタンパク質。
【請求項２４】
ｘ＝１である、請求項２１に記載の単離されたタンパク質。
【請求項２５】
前記第１および第２のポリペプチドが配列番号２の残基４６〜１６３を含んでなる、単離されたタンパク質。
【請求項２６】
式Ｒ１ｘ−Ｒ２ｙ−Ｒ３ｚ：
〔式中、
Ｒ１は配列番号２の残基４６〜１６３に対して少なくとも９０％同一である１００〜１２０残基長さのポリペプチドを含んでなり、そして配列番号２の残基１０４〜１２４に対応する配列モチーフＣ［ＫＲ］Ｙ［ＤＮＥ］［ＷＹＦ］Ｘ｛１１，１５｝Ｇ［ＫＲ］［ＷＹＦ］Ｃ（配列番号４）を含んでなり、
Ｒ２は配列番号２の残基１６４〜２３４に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、
Ｒ３は配列番号２の残基２３５〜３４５に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、そして配列番号２の残基２５０、２８０、２８４、２９６、３３５、および３３７に対応する位置におけるシステイン残基；配列番号２の残基２８２に対応する位置におけるグリシン残基；および配列番号２の残基２５０〜３３７に対応する配列モチーフＣＸ｛２５，３３｝ＣＸＧＸＣＸ｛１０，３３｝ＣＸ｛２０，４０｝ＣＸＣ（配列番号３）を含んでなり、そして
ｘ、ｙ、およびｚの各々は独立して０または１であり、ただしｘおよびｚの少なくとも１つは１であり、そして
ｘおよびｚの各々が１である場合、ｙは１である〕
のアミノ酸配を含んでなるポリペプチドをコードするほぼ４ｋｂまでの長さの単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
配列番号６のヌクレオチド１〜１０３５を含んでなる、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
配列番号１のヌクレオチド１５４〜１１８８を含んでなる、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
配列番号４２のヌクレオチド１０４９〜２０８３を含んでなる、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
下記の作用可能に連鎖された因子：
転写プロモーター；
請求項２７に記載のＤＮＡポリヌクレオチド；および
転写ターミネーター；
を含んでなる発現ベクター。
【請求項３２】
ＤＮＡポリヌクレオチドに作用可能に連鎖された分泌シグナル配列をさらに含んでなる、請求項３１に記載の発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３１または３２に記載の発現ベクターが導入されており、ＤＮＡセグメントによりコードされるポリペプチドを発現する、培養された細胞。
【請求項３４】
薬学上許容されるビヒクルと組み合わせて請求項１８〜２５のいずれか一項に記載のタンパク質を含んでなる組成物。
【請求項３５】
請求項３１または３２に記載の発現ベクターが導入された細胞を培養し、これにより前記細胞はＤＮＡセグメントによりコードされるポリペプチドを発現し；そして
発現されたタンパク質を回収する、
ことを含んでなる、タンパク質を製造する方法。
【請求項３６】
請求項４に記載のポリペプチドのエピトープに特異的に結合する抗体。
【請求項３７】
モノクローナル抗体である、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
一本鎖抗体である、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３９】
リポーター分子に作用可能に連鎖された請求項３６〜３８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４０】
患者から遺伝的試料を採取し、
上記遺伝的試料を配列番号１または配列番号１の相補体の少なくとも１４の隣接ヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドと、前記ポリヌクレオチドが相補的ポリヌクレオチド配列に対してハイブリダイズする条件下に、インキュベートして第１反応生成物を生成し；そして
前記第１反応生成物を対照反応生成物と比較し、ここで前記第１反応生成物と前記第２反応生成物との間の差が患者における遺伝的異常を示す；
ことを含んでなる、患者において遺伝的異常を検出する方法。
【請求項４１】
繊維芽細胞または平滑筋細胞に有効量の請求項１８〜２５のいずれか一項に記載のタンパク質を適用することを含んでなる、前記細胞の成長を刺激する方法。
【請求項４２】
細胞表面のＰＤＧＦアルファレセプターを含んでなる細胞を請求項２〜２５のいずれか一項に記載のポリペプチドまたはタンパク質に対して暴露し、これによりポリペプチドまたはタンパク質をレセプターに結合させかつレセプターを活性化することを含んでなる、細胞表面のＰＤＧＦアルファレセプターを活性化する方法。
【請求項４３】
請求項２〜２５のいずれか一項に記載のポリペプチドまたはタンパク質が細胞表面のＰＤＧＦアルファレセプターに結合するのを阻害する化合物に、細胞表面のＰＤＧＦアルファレセプターを含んでなる細胞を暴露することを含んでなる、ＰＤＧＦアルファレセプター仲介細胞プロセスを阻害する方法。
【請求項４４】
有効量のｚｖｅｇｆ３アンタゴニストを哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物におけるｚｖｅｇｆ３活性を阻害する方法。
【請求項４５】
アンタゴニストが、抗体、レセプター、リガンド結合性レセプターフラグメント、またはレセプターＩｇＧ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
請求項２６に記載の単離されたポリヌクレオチドの補体である、単離された、アンチセンスポリヌクレオチド。
【請求項４７】
作用可能に連鎖された転写プロモーターおよびターミネーター配列をさらに含んでなる、請求項４６に記載のアンチセンスポリヌクレオチド。
【請求項４８】
細胞に請求項４７に記載のアンチセンスポリヌクレオチドを投与することを含んでなる、細胞においてｚｖｅｇｆ３の産生を阻害する方法。

【図１−１】

【図１−２】

【図１−３】

【図１−４】

【図１−５】

【図１−６】

【図１−７】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【公開番号】特開２０１１−５２００９（Ｐ２０１１−５２００９Ａ）
【公開日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１０−２５４４８９（Ｐ２０１０−２５４４８９）
【出願日】平成２２年１１月１５日（２０１０．１１．１５）
【分割の表示】特願２０００−５８６９０８（Ｐ２０００−５８６９０８）の分割
【原出願日】平成１１年１２月７日（１９９９．１２．７）
【出願人】（５０５２２２６４６）ザイモジェネティクス，　インコーポレイテッド (72)
【Ｆターム（参考）】