抗体ポリペプチドライブラリーのスクリーニングと選択された抗体ポリペプチド
本発明は、抗体ポリペプチドライブラリーのスクリーニングにおけるさらなる発展を提供する。本発明はまた、本発明の方法により取得可能である新規な単離された抗体ポリペプチドも提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと、標的リガンドの特異性に関係なく該レパートリーの機能的メンバーに結合することができる一般リガンドとに結合する機能的可変ドメインの集団を選択する方法であって、
a)該レパートリーを一般リガンドと接触させ、それに結合した機能的可変ドメインを選択する工程；および
b)選択された機能的可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する可変ドメインの集団を選択する工程、
を含み、ここで(i)可変ドメインは重鎖可変ドメインであり、一般リガンドは抗体軽鎖可変ドメインであり；または(ii)可変ドメインは軽鎖可変ドメインであり、一般リガンドは抗体重鎖可変ドメインであり；ならびに
必要に応じて、(i)において、重鎖可変ドメインはラクダ科動物の可変ドメイン(VHH)もしくはラクダ科動物の重鎖抗体(H2抗体)から誘導されたものであり；または必要に応じて、(i)および(ii)において、それぞれの可変ドメインはヒト可変ドメインであるか、もしくはヒトから誘導されたものである、前記方法。
【請求項２】
抗体ポリペプチドのレパートリーを最初に標的リガンドと接触させ、次いで一般リガンドと接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
一般リガンドが可変ドメインのレパートリーのサブセットに結合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
2個以上のサブセットを、ポリペプチドのレパートリーから選択する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
選択を、2個以上の一般リガンド、必要に応じて、2個以上の軽鎖可変ドメイン(オプション(i)について)、または2個以上の重鎖可変ドメイン(オプション(ii)について)を用いて実施する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
2個以上のサブセットを、選択後に混合して、ポリペプチドのさらなるレパートリーを作製する、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ポリペプチドの2個以上のレパートリーを一般リガンドと接触させた後、それによって得られたポリペプチドのサブセットを混合する、請求項１〜６のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと、標的リガンドの特異性に関係なく該レパートリーの機能的メンバーに結合することができる一般リガンドとに結合する機能的T細胞受容体ドメインの集団を選択する方法であって、
a)該レパートリーを一般リガンドと接触させ、それに結合した機能的T細胞受容体ドメインを選択する工程；および
b)選択された機能的T細胞受容体ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合するT細胞受容体ドメインの集団を選択する工程、
を含み、ここで、(i)T細胞受容体ドメインはVαドメインであり、一般リガンドはT細胞受容体Vβドメインであり；または(ii)T細胞ドメインはT細胞受容体Vβドメインであり、一般リガンドはT細胞受容体Vαドメインであり；ならびに
必要に応じて、(i)において、T細胞受容体Vαドメインはラクダ科動物から誘導されたラクダ科動物のドメインであり；または必要に応じて、(i)および(ii)において、それぞれT細胞受容体ドメインはヒトドメインもしくはヒトから誘導されたものである、前記方法。
【請求項９】
抗体重鎖可変ドメインの集団を請求項１に従って選択し、抗体軽鎖可変ドメインの集団を請求項１に従って選択した後、それによって得られた集団を混合する方法。
【請求項１０】
T細胞受容体Vαドメインの集団を請求項８に従って選択し、T細胞受容体Vβドメインの集団を請求項８に従って選択した後、それによって得られた集団を混合する方法。
【請求項１１】
抗体ポリペプチドの集団から少なくとも1種の抗体重鎖可変ドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体軽鎖可変ドメインと接触させること、および
b)軽鎖可変ドメインに結合する少なくとも1種の抗体重鎖可変ドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項１２】
工程a)の前に、抗体ポリペプチドを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する抗体ポリペプチドを選択し、それによって工程a)で用いられる抗体ポリペプチドの前記集団を提供する工程を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
工程b)の後に、工程b)で選択された抗体重鎖可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する重鎖可変ドメインを選択する工程を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHHからなる群に由来する、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ヒト化ラクダ科動物もしくはマウス重鎖可変ドメインまたはヒト化Nanobody(商標)である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ヒト重鎖可変ドメインである、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
軽鎖可変ドメインが、ヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒトから誘導されたものであるか、または生殖系列遺伝子配列DPK9によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する軽鎖可変ドメインである、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
軽鎖可変ドメインが、ラクダ科動物軽鎖可変ドメインであるか、またはラクダ科動物から誘導されたものである、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
工程a)中の集団をB細胞の集団により提供する、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
B細胞が末梢血リンパ球である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
B細胞を、標的抗原で免疫した動物から単離する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
B細胞を、標的抗原で免疫されていない動物から単離する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２３】
工程a)で用いられる集団を、合成的に再編成された抗体遺伝子によりコードされた抗体ポリペプチドのレパートリーにより提供する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
工程a)で用いられる集団を、前記抗体ポリペプチドを展示するバクテリオファージを含むファージディスプレイライブラリーにより提供する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
工程a)で用いられる集団が、(i)軽鎖可変ドメインと対形成していない少なくとも1個の重鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチド；および(ii)軽鎖可変ドメインと対形成した重鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチドを含む、請求項１１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
工程a)で用いられる集団が、ラクダ科動物重鎖単一可変ドメイン(VHH)またはNanobody(商標)を含む、請求項１１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
工程a)で用いられる集団が、ヒト重鎖単一可変ドメイン(VH)を含む、請求項１１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
標的抗原で免疫されたラクダ科動物から単離されたB細胞により提供されたラクダ科動物抗体ポリペプチドの集団から、少なくとも1種のラクダ科動物抗体VHHドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体軽鎖可変ドメインと接触させること、および
b)軽鎖可変ドメインに結合する少なくとも1種のVHHドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項２９】
軽鎖可変ドメインがヒト軽鎖可変ドメインである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
B細胞を、それぞれ平均で1個のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
a)標的抗原を用いて抗体ポリペプチドの出発集団に対してSLAM(選択リンパ球抗体法)を実施して、標的抗原に結合する抗体ポリペプチドの集団を選択すること；および
b)請求項１１〜３０のいずれか１項に記載の方法において用いられる抗体ポリペプチドの集団として、選択された集団を用いること、
を含む方法。
【請求項３２】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインを、タンパク質部分に融合させるか、またはコンジュゲートさせる、請求項１１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記タンパク質部分を、バクテリオファージコートタンパク質、1種以上の抗体ドメイン、抗体Fcドメイン、酵素、毒素、標識およびエフェクター基から選択する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインが、IgG、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvおよびジスルフィド結合したFvから選択される抗体または抗体フラグメントの一部である、請求項１１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドが請求項１１に記載の方法により取得可能であり、該方法における軽鎖可変ドメインがヒト軽鎖可変ドメインであり、重鎖可変ドメインが非ヒト哺乳動物に由来するものである、抗体重鎖可変ドメインを含むか、またはそれからなる単離された抗体ポリペプチド。
【請求項３６】
重鎖可変ドメインが、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHHからなる群に由来する、請求項３５に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３７】
重鎖可変ドメインを、ラクダ科動物のIgGまたはラクダ科動物から誘導されたIgGの一部として提供する、請求項３６に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３８】
重鎖可変ドメインを、ヒトIgGまたはヒトから誘導されたIgGの一部として提供し、重鎖可変ドメインを、IgG中、請求項１１に記載の軽鎖可変ドメインとは異なる軽鎖可変ドメインと対形成させる、請求項３６に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３９】
医薬としての請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項４０】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項４１】
重鎖可変ドメインが、TNFα、血清アルブミン、フォン・ビルブラント因子(vWF)、IgE、インターフェロンγ、EGFR、IgE、MMP12、PDK1およびアミロイドβ(A-β)、または添付物1に列挙された標的のいずれか1つからなる群より選択される標的リガンドに結合する、請求項１１〜３４のいずれか１項に記載の方法または請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体または請求項３９もしくは４０に記載の使用。
【請求項４２】
抗体ポリペプチドの集団から少なくとも1個の抗体軽鎖可変ドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体重鎖可変ドメインと接触させること、および
b)重鎖可変ドメインに結合する少なくとも1個の抗体軽鎖可変ドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項４３】
工程a)の前に、抗体ポリペプチドを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する抗体ポリペプチドを選択し、それによって工程a)で用いられる抗体ポリペプチドの前記集団を提供する工程を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
工程b)の後に、工程b)で選択された抗体軽鎖可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する軽鎖可変ドメインを選択する工程を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
工程b)で選択された各軽鎖ドメインが、ラクダ科動物から誘導されたものである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
工程b)で選択された各軽鎖ドメインが、ヒト軽鎖可変ドメインである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
重鎖可変ドメインが、ヒト重鎖可変ドメイン；ヒトから誘導されたもの；生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する重鎖可変ドメイン；または生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされる位置44、45および47と同一である位置44、45および47を有する重鎖可変ドメインである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
重鎖可変ドメインが、ラクダ科動物重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)であるか、またはラクダ科動物から誘導されたものである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
工程a)における集団を、B細胞の集団により提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
B細胞が末梢血リンパ球である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
B細胞を、標的抗原で免疫した動物から単離する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
B細胞を、標的抗原で免疫されていない動物から単離する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５３】
工程a)で用いられる集団を、合成的に再編成された抗体遺伝子によりコードされた抗体ポリペプチドのレパートリーにより提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
工程a)で用いられる集団を、前記抗体ポリペプチドを展示するバクテリオファージを含むファージディスプレイライブラリーにより提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
工程a)で用いられる集団が、(i)重鎖可変ドメインと対形成していない少なくとも1個の軽鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチド；および(ii)重鎖可変ドメインと対形成した軽鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチドを含む、請求項４２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
工程a)で用いられる集団が、ヒト軽鎖単一可変ドメイン(VL)を含む、請求項４２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
a)標的抗原を用いて抗体ポリペプチドの出発集団に対してSLAM(選択リンパ球抗体法)を実施して、標的抗原に結合する抗体ポリペプチドの集団を選択すること；および
b)請求項４２〜５６のいずれか１項に記載の方法において用いられる抗体ポリペプチドの集団として、選択された集団を用いること、
を含む方法。
【請求項５８】
工程b)において、少なくとも1種の選択された抗体軽鎖可変ドメインを、タンパク質部分に融合させるか、またはコンジュゲートさせる、請求項４２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記タンパク質部分を、バクテリオファージコートタンパク質、1種以上の抗体ドメイン、抗体Fcドメイン、酵素、毒素、標識およびエフェクター基から選択する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインが、IgG、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvおよびジスルフィド結合したFvから選択される抗体または抗体フラグメントの一部である、請求項４２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
ポリペプチドが請求項４２に記載の方法により取得可能であり、該方法における重鎖可変ドメインがヒト重鎖可変ドメインであり、軽鎖可変ドメインが非ヒト哺乳動物に由来するものである、抗体軽鎖可変ドメインを含むか、またはそれからなる単離された抗体ポリペプチド。
【請求項６２】
軽鎖可変ドメインがラクダ科動物に由来するものである、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６３】
軽鎖可変ドメインを、ラクダ科動物のIgGまたはラクダ科動物から誘導されたIgGの一部として提供する、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６４】
軽鎖可変ドメインを、ヒトIgGまたはヒトから誘導されたIgGの一部として提供し、軽鎖可変ドメインがIgG中で請求項４２に記載の重鎖可変ドメインと異なる重鎖可変ドメインと対形成させる、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６５】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載のポリペプチドの可変ドメインのCDR3と比較してCDR3突然変異を有する、請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの誘導体。
【請求項６６】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの親和性成熟により産生された抗体ポリペプチド誘導体。
【請求項６７】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドまたは請求項６５もしくは６７に記載の誘導体に連結された半減期延長部分を含むポリペプチドであって、該部分がPEG；抗体定常ドメイン；抗体Fc領域；アルブミンもしくはその断片；アルブミン、アルブミン断片に結合するペプチドもしくは抗体フラグメント；新生児Fc受容体；トランスフェリン；またはトランスフェリン受容体から選択される、前記ポリペプチド。
【請求項６８】
医薬としての請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項６９】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項７０】
軽鎖可変ドメインまたは抗体ポリペプチドの可変ドメインが、TNFα、血清アルブミン、フォン・ビルブラント因子(vWF)、IgE、インターフェロンγ、EGFR、IgE、MMP12、PDK1およびアミロイドβ(A-β)、または添付物1に列挙された標的のいずれか1つからなる群より選択される標的リガンドに結合する、請求項４２〜６６のいずれか１項に記載の方法または請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体または請求項６８もしくは６９に記載の使用。
【請求項７１】
選択された可変ドメインの突然変異体または誘導体を作製する工程を含む、請求項１、１１または４２に記載の方法。
【請求項７２】
B細胞集団を、それぞれ単一のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項１９〜２２および４９〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
B細胞集団を、それぞれ平均で1個のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項１９〜２２および４９〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
単一可変ドメインおよびIgGを含む抗体ポリペプチドの集団中の抗体単一可変ドメインからIgGを分離する方法であって、
a)該集団を一般リガンドと接触させること、および
b)一般リガンドに結合するサブ集団を選択し、それによって単一可変ドメインからIgGを分離すること、
を含み、一般リガンドが抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに対する結合特異性を有する、前記方法。
【請求項７５】
一般リガンドを、プロテインL、プロテインLドメイン、もしくは軽鎖可変ドメインに結合するプロテインLの誘導体；プロテインG、プロテインGのドメイン、もしくはCH1に結合するプロテインGの誘導体；抗体および抗体フラグメント、アフィボディ、LDL受容体ドメインならびにEGFドメインから選択する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
一般リガンドを、dAb、Nanobody(商標)、scFv、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvまたはジスルフィド結合したFvから選択する、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
可変ドメインがヒト単一可変ドメインであり、IgGがヒトIgGである、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
一般リガンドが、1 mM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
一般リガンドが、1μM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
一般リガンドが、100 nM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
ラクダ科動物のVHHドメインおよびIgGを含む抗体ポリペプチドの集団中のIgGからラクダ科動物のVHH単一可変ドメインを分離する方法であって、
a)該集団を一般リガンドと接触させること、および
b)一般リガンドに結合するサブ集団を選択し、それによってIgGから単一可変ドメインを分離すること、
を含み、一般リガンドが(i)VHHに対する結合特異性を有するが、VHに対する結合特異性を有さず；または(ii)重鎖抗体(H2)ヒンジに対する結合特異性を有する、前記方法。
【請求項８２】
一般リガンドを、抗体軽鎖可変ドメイン、抗体および抗体フラグメントから選択する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
一般リガンドを、dAb、Nanobody(商標)、scFv、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvまたはジスルフィド結合したFvから選択する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
一般リガンドが、1 mM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
一般リガンドが、1μM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
一般リガンドが、100 nM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
抗体ポリペプチド集団をB細胞により提供する、請求項７４〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
可変ドメインがラクダ科動物のVHHであり、IgGがラクダ科動物のIgGである、請求項７４〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
可変ドメインをラクダ科動物の重鎖(H2)抗体により提供する、請求項７４〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
一般リガンドを標識するか、またはタグ付けする、請求項７４〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
一般リガンドが添付物2a)、c)、d)またはe)から選択される抗体可変ドメインである、請求項１〜７および１１〜９０のいずれか１項に記載の方法、抗体ポリペプチド、誘導体または使用。
【請求項９２】
抗体ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと一般リガンドに結合する単一可変ドメインを選択する方法であって、
a)該レパートリーを標的リガンドと接触させ、それに結合した単一可変ドメインを選択する工程；および
b)選択された可変ドメインを一般リガンドと接触させ、一般リガンドに結合する可変ドメインを選択する工程、
を含み、一般リガンドが添付物2c)またはe)から選択される抗体可変ドメインであり；ならびに
(i)選択された可変ドメインが重鎖可変ドメインである場合、一般リガンドが軽鎖可変ドメインであるか、または(ii)選択された可変ドメインが軽鎖可変ドメインである場合、一般リガンドが重鎖可変ドメインである、前記方法。
【請求項９３】
抗体ポリペプチドのレパートリーが重鎖可変ドメインのレパートリーであり、一般リガンドが軽鎖可変ドメインである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
抗体ポリペプチドのレパートリーが軽鎖可変ドメインのレパートリーであり、一般リガンドが重鎖可変ドメインである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
選択された可変ドメインの突然変異体または誘導体を作製する工程を含む、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
一般リガンドが、選択された可変ドメインと同じ標的リガンド種に結合する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９７】
一般リガンドが、選択された可変ドメインと異なる標的リガンド種に結合する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
選択された可変ドメインを、一般リガンドと同一である抗体可変ドメインまたはその誘導体と組み合わせて、標的リガンド結合特異性を有する生成物を作製することを含む、請求項９２〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
標的リガンドに結合する添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの重鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドであり、それによって、標的リガンドおよび重鎖可変ドメインに結合する軽鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換すること、
を含む前記方法。
【請求項１００】
添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの多特異的誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの重鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドと異なる標的リガンドであり、それによって、異なる標的リガンドおよび重鎖可変ドメインに結合する軽鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換し、それによって多特異的生成物を作製すること、
を含む前記方法。
【請求項１０１】
標的リガンドに結合する添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの軽鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドであり、それによって、標的リガンドおよび軽鎖可変ドメインに結合する重鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換すること、
を含む前記方法。
【請求項１０２】
添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの多特異的誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの軽鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドと異なる標的リガンドであり、それによって、異なる標的リガンドおよび軽鎖可変ドメインに結合する重鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換し、それによって多特異的生成物を作製すること、
を含む前記方法。
【請求項１０３】
重鎖可変ドメインを、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHH；ヒト化ラクダ科動物もしくはマウス重鎖可変ドメイン；ヒト化Nanobody(商標)；ヒト重鎖可変ドメイン；ヒトから誘導された重鎖可変ドメイン；生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する重鎖可変ドメイン；または生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされる位置44、45および47と同一である位置44、45および47を有する重鎖可変ドメインからなる群より選択する、請求項１００〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
軽鎖可変ドメインを、ヒト軽鎖可変ドメイン；ヒトから誘導された軽鎖可変ドメイン；生殖系列遺伝子配列DPK9によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する軽鎖可変ドメイン；ラクダ科動物軽鎖可変ドメイン；ラクダ科動物から誘導された軽鎖可変ドメイン；およびヒト化ラクダ科動物もしくはマウス軽鎖可変ドメインから選択する、請求項９９または１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
a)選択された可変ドメインが重鎖可変ドメインであり、抗体もしくはフラグメントの各重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換するか、またはb)選択された可変ドメインが軽鎖可変ドメインであり、抗体もしくはフラグメントの各軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換する、請求項９９〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法により取得可能な誘導体。
【請求項１０７】
請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法により取得可能である、Panorex(商標)、Rituxin(商標)、Zevalin(商標)、Mylotarg(商標)、Campath(商標)、Herceptin(商標)、ReoPro(商標)、Synagis(商標)、Xolair(商標)、Remicade(商標)、Simulect(商標)、OKT3(商標)、Orthoclone(商標)、Zenapax(商標)、Humira(商標)、Bexxar(商標)、Raptiva(商標)、Antegren(商標)、Erbitux(商標)およびAvastin(商標)から選択される抗体または抗体フラグメントの誘導体。
【請求項１０８】
一般リガンドが、Panorex(商標)、Rituxin(商標)、Zevalin(商標)、Mylotarg(商標)、Campath(商標)、Herceptin(商標)、ReoPro(商標)、Synagis(商標)、Xolair(商標)、Remicade(商標)、Simulect(商標)、OKT3(商標)、Orthoclone(商標)、Zenapax(商標)、Humira(商標)、Bexxar(商標)、Raptiva(商標)、Antegren(商標)、Erbitux(商標)およびAvastin(商標)から選択される抗体もしくは抗体フラグメントに由来する抗体可変ドメインまたは該抗体もしくは抗体フラグメントにより結合した標的リガンドに結合する同一の可変ドメインもしくはその誘導体である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０９】
請求項１０８に記載の方法により取得可能である、標的リガンド結合特異性を有する生成物。
【請求項１１０】
医薬としての請求項１０６〜１０７および１０９のいずれか１項に記載の誘導体または生成物の使用。
【請求項１１１】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項１０６〜１０７および１０９のいずれか１項に記載の誘導体または生成物の使用。
【請求項１１２】
症状が添付物2c)(i)中の抗体もしくは抗体フラグメントについて列挙された症状である、ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項１０６または１０９に記載の誘導体または生成物の使用。
【請求項１】
抗体ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと、標的リガンドの特異性に関係なく該レパートリーの機能的メンバーに結合することができる一般リガンドとに結合する機能的可変ドメインの集団を選択する方法であって、
a)該レパートリーを一般リガンドと接触させ、それに結合した機能的可変ドメインを選択する工程；および
b)選択された機能的可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する可変ドメインの集団を選択する工程、
を含み、ここで(i)可変ドメインは重鎖可変ドメインであり、一般リガンドは抗体軽鎖可変ドメインであり；または(ii)可変ドメインは軽鎖可変ドメインであり、一般リガンドは抗体重鎖可変ドメインであり；ならびに
必要に応じて、(i)において、重鎖可変ドメインはラクダ科動物の可変ドメイン(VHH)もしくはラクダ科動物の重鎖抗体(H2抗体)から誘導されたものであり；または必要に応じて、(i)および(ii)において、それぞれの可変ドメインはヒト可変ドメインであるか、もしくはヒトから誘導されたものである、前記方法。
【請求項２】
抗体ポリペプチドのレパートリーを最初に標的リガンドと接触させ、次いで一般リガンドと接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
一般リガンドが可変ドメインのレパートリーのサブセットに結合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
2個以上のサブセットを、ポリペプチドのレパートリーから選択する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
選択を、2個以上の一般リガンド、必要に応じて、2個以上の軽鎖可変ドメイン(オプション(i)について)、または2個以上の重鎖可変ドメイン(オプション(ii)について)を用いて実施する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
2個以上のサブセットを、選択後に混合して、ポリペプチドのさらなるレパートリーを作製する、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ポリペプチドの2個以上のレパートリーを一般リガンドと接触させた後、それによって得られたポリペプチドのサブセットを混合する、請求項１〜６のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと、標的リガンドの特異性に関係なく該レパートリーの機能的メンバーに結合することができる一般リガンドとに結合する機能的T細胞受容体ドメインの集団を選択する方法であって、
a)該レパートリーを一般リガンドと接触させ、それに結合した機能的T細胞受容体ドメインを選択する工程；および
b)選択された機能的T細胞受容体ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合するT細胞受容体ドメインの集団を選択する工程、
を含み、ここで、(i)T細胞受容体ドメインはVαドメインであり、一般リガンドはT細胞受容体Vβドメインであり；または(ii)T細胞ドメインはT細胞受容体Vβドメインであり、一般リガンドはT細胞受容体Vαドメインであり；ならびに
必要に応じて、(i)において、T細胞受容体Vαドメインはラクダ科動物から誘導されたラクダ科動物のドメインであり；または必要に応じて、(i)および(ii)において、それぞれT細胞受容体ドメインはヒトドメインもしくはヒトから誘導されたものである、前記方法。
【請求項９】
抗体重鎖可変ドメインの集団を請求項１に従って選択し、抗体軽鎖可変ドメインの集団を請求項１に従って選択した後、それによって得られた集団を混合する方法。
【請求項１０】
T細胞受容体Vαドメインの集団を請求項８に従って選択し、T細胞受容体Vβドメインの集団を請求項８に従って選択した後、それによって得られた集団を混合する方法。
【請求項１１】
抗体ポリペプチドの集団から少なくとも1種の抗体重鎖可変ドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体軽鎖可変ドメインと接触させること、および
b)軽鎖可変ドメインに結合する少なくとも1種の抗体重鎖可変ドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項１２】
工程a)の前に、抗体ポリペプチドを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する抗体ポリペプチドを選択し、それによって工程a)で用いられる抗体ポリペプチドの前記集団を提供する工程を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
工程b)の後に、工程b)で選択された抗体重鎖可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する重鎖可変ドメインを選択する工程を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHHからなる群に由来する、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ヒト化ラクダ科動物もしくはマウス重鎖可変ドメインまたはヒト化Nanobody(商標)である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
工程b)で選択された各重鎖ドメインが、ヒト重鎖可変ドメインである、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
軽鎖可変ドメインが、ヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒトから誘導されたものであるか、または生殖系列遺伝子配列DPK9によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する軽鎖可変ドメインである、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
軽鎖可変ドメインが、ラクダ科動物軽鎖可変ドメインであるか、またはラクダ科動物から誘導されたものである、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
工程a)中の集団をB細胞の集団により提供する、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
B細胞が末梢血リンパ球である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
B細胞を、標的抗原で免疫した動物から単離する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
B細胞を、標的抗原で免疫されていない動物から単離する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２３】
工程a)で用いられる集団を、合成的に再編成された抗体遺伝子によりコードされた抗体ポリペプチドのレパートリーにより提供する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
工程a)で用いられる集団を、前記抗体ポリペプチドを展示するバクテリオファージを含むファージディスプレイライブラリーにより提供する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
工程a)で用いられる集団が、(i)軽鎖可変ドメインと対形成していない少なくとも1個の重鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチド；および(ii)軽鎖可変ドメインと対形成した重鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチドを含む、請求項１１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
工程a)で用いられる集団が、ラクダ科動物重鎖単一可変ドメイン(VHH)またはNanobody(商標)を含む、請求項１１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
工程a)で用いられる集団が、ヒト重鎖単一可変ドメイン(VH)を含む、請求項１１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
標的抗原で免疫されたラクダ科動物から単離されたB細胞により提供されたラクダ科動物抗体ポリペプチドの集団から、少なくとも1種のラクダ科動物抗体VHHドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体軽鎖可変ドメインと接触させること、および
b)軽鎖可変ドメインに結合する少なくとも1種のVHHドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項２９】
軽鎖可変ドメインがヒト軽鎖可変ドメインである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
B細胞を、それぞれ平均で1個のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
a)標的抗原を用いて抗体ポリペプチドの出発集団に対してSLAM(選択リンパ球抗体法)を実施して、標的抗原に結合する抗体ポリペプチドの集団を選択すること；および
b)請求項１１〜３０のいずれか１項に記載の方法において用いられる抗体ポリペプチドの集団として、選択された集団を用いること、
を含む方法。
【請求項３２】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインを、タンパク質部分に融合させるか、またはコンジュゲートさせる、請求項１１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記タンパク質部分を、バクテリオファージコートタンパク質、1種以上の抗体ドメイン、抗体Fcドメイン、酵素、毒素、標識およびエフェクター基から選択する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインが、IgG、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvおよびジスルフィド結合したFvから選択される抗体または抗体フラグメントの一部である、請求項１１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドが請求項１１に記載の方法により取得可能であり、該方法における軽鎖可変ドメインがヒト軽鎖可変ドメインであり、重鎖可変ドメインが非ヒト哺乳動物に由来するものである、抗体重鎖可変ドメインを含むか、またはそれからなる単離された抗体ポリペプチド。
【請求項３６】
重鎖可変ドメインが、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHHからなる群に由来する、請求項３５に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３７】
重鎖可変ドメインを、ラクダ科動物のIgGまたはラクダ科動物から誘導されたIgGの一部として提供する、請求項３６に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３８】
重鎖可変ドメインを、ヒトIgGまたはヒトから誘導されたIgGの一部として提供し、重鎖可変ドメインを、IgG中、請求項１１に記載の軽鎖可変ドメインとは異なる軽鎖可変ドメインと対形成させる、請求項３６に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項３９】
医薬としての請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項４０】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項４１】
重鎖可変ドメインが、TNFα、血清アルブミン、フォン・ビルブラント因子(vWF)、IgE、インターフェロンγ、EGFR、IgE、MMP12、PDK1およびアミロイドβ(A-β)、または添付物1に列挙された標的のいずれか1つからなる群より選択される標的リガンドに結合する、請求項１１〜３４のいずれか１項に記載の方法または請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の抗体または請求項３９もしくは４０に記載の使用。
【請求項４２】
抗体ポリペプチドの集団から少なくとも1個の抗体軽鎖可変ドメインを選択する方法であって、
a)該集団を抗体重鎖可変ドメインと接触させること、および
b)重鎖可変ドメインに結合する少なくとも1個の抗体軽鎖可変ドメインを選択すること、
を含む前記方法。
【請求項４３】
工程a)の前に、抗体ポリペプチドを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する抗体ポリペプチドを選択し、それによって工程a)で用いられる抗体ポリペプチドの前記集団を提供する工程を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
工程b)の後に、工程b)で選択された抗体軽鎖可変ドメインを標的リガンドと接触させ、標的リガンドに結合する軽鎖可変ドメインを選択する工程を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
工程b)で選択された各軽鎖ドメインが、ラクダ科動物から誘導されたものである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
工程b)で選択された各軽鎖ドメインが、ヒト軽鎖可変ドメインである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
重鎖可変ドメインが、ヒト重鎖可変ドメイン；ヒトから誘導されたもの；生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する重鎖可変ドメイン；または生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされる位置44、45および47と同一である位置44、45および47を有する重鎖可変ドメインである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
重鎖可変ドメインが、ラクダ科動物重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)であるか、またはラクダ科動物から誘導されたものである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
工程a)における集団を、B細胞の集団により提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
B細胞が末梢血リンパ球である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
B細胞を、標的抗原で免疫した動物から単離する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
B細胞を、標的抗原で免疫されていない動物から単離する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５３】
工程a)で用いられる集団を、合成的に再編成された抗体遺伝子によりコードされた抗体ポリペプチドのレパートリーにより提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
工程a)で用いられる集団を、前記抗体ポリペプチドを展示するバクテリオファージを含むファージディスプレイライブラリーにより提供する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
工程a)で用いられる集団が、(i)重鎖可変ドメインと対形成していない少なくとも1個の軽鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチド；および(ii)重鎖可変ドメインと対形成した軽鎖可変ドメインをそれぞれ含む抗体ポリペプチドを含む、請求項４２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
工程a)で用いられる集団が、ヒト軽鎖単一可変ドメイン(VL)を含む、請求項４２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
a)標的抗原を用いて抗体ポリペプチドの出発集団に対してSLAM(選択リンパ球抗体法)を実施して、標的抗原に結合する抗体ポリペプチドの集団を選択すること；および
b)請求項４２〜５６のいずれか１項に記載の方法において用いられる抗体ポリペプチドの集団として、選択された集団を用いること、
を含む方法。
【請求項５８】
工程b)において、少なくとも1種の選択された抗体軽鎖可変ドメインを、タンパク質部分に融合させるか、またはコンジュゲートさせる、請求項４２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記タンパク質部分を、バクテリオファージコートタンパク質、1種以上の抗体ドメイン、抗体Fcドメイン、酵素、毒素、標識およびエフェクター基から選択する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
工程b)において、少なくとも1個の選択された抗体重鎖可変ドメインが、IgG、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvおよびジスルフィド結合したFvから選択される抗体または抗体フラグメントの一部である、請求項４２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
ポリペプチドが請求項４２に記載の方法により取得可能であり、該方法における重鎖可変ドメインがヒト重鎖可変ドメインであり、軽鎖可変ドメインが非ヒト哺乳動物に由来するものである、抗体軽鎖可変ドメインを含むか、またはそれからなる単離された抗体ポリペプチド。
【請求項６２】
軽鎖可変ドメインがラクダ科動物に由来するものである、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６３】
軽鎖可変ドメインを、ラクダ科動物のIgGまたはラクダ科動物から誘導されたIgGの一部として提供する、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６４】
軽鎖可変ドメインを、ヒトIgGまたはヒトから誘導されたIgGの一部として提供し、軽鎖可変ドメインがIgG中で請求項４２に記載の重鎖可変ドメインと異なる重鎖可変ドメインと対形成させる、請求項６１に記載の抗体ポリペプチド。
【請求項６５】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載のポリペプチドの可変ドメインのCDR3と比較してCDR3突然変異を有する、請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの誘導体。
【請求項６６】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの親和性成熟により産生された抗体ポリペプチド誘導体。
【請求項６７】
請求項３５〜３８および６１〜６４のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドまたは請求項６５もしくは６７に記載の誘導体に連結された半減期延長部分を含むポリペプチドであって、該部分がPEG；抗体定常ドメイン；抗体Fc領域；アルブミンもしくはその断片；アルブミン、アルブミン断片に結合するペプチドもしくは抗体フラグメント；新生児Fc受容体；トランスフェリン；またはトランスフェリン受容体から選択される、前記ポリペプチド。
【請求項６８】
医薬としての請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項６９】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体ポリペプチドの使用。
【請求項７０】
軽鎖可変ドメインまたは抗体ポリペプチドの可変ドメインが、TNFα、血清アルブミン、フォン・ビルブラント因子(vWF)、IgE、インターフェロンγ、EGFR、IgE、MMP12、PDK1およびアミロイドβ(A-β)、または添付物1に列挙された標的のいずれか1つからなる群より選択される標的リガンドに結合する、請求項４２〜６６のいずれか１項に記載の方法または請求項６１〜６７のいずれか１項に記載の抗体または請求項６８もしくは６９に記載の使用。
【請求項７１】
選択された可変ドメインの突然変異体または誘導体を作製する工程を含む、請求項１、１１または４２に記載の方法。
【請求項７２】
B細胞集団を、それぞれ単一のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項１９〜２２および４９〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
B細胞集団を、それぞれ平均で1個のB細胞型を含む複数のウェルまたは容器中で提供する、請求項１９〜２２および４９〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
単一可変ドメインおよびIgGを含む抗体ポリペプチドの集団中の抗体単一可変ドメインからIgGを分離する方法であって、
a)該集団を一般リガンドと接触させること、および
b)一般リガンドに結合するサブ集団を選択し、それによって単一可変ドメインからIgGを分離すること、
を含み、一般リガンドが抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに対する結合特異性を有する、前記方法。
【請求項７５】
一般リガンドを、プロテインL、プロテインLドメイン、もしくは軽鎖可変ドメインに結合するプロテインLの誘導体；プロテインG、プロテインGのドメイン、もしくはCH1に結合するプロテインGの誘導体；抗体および抗体フラグメント、アフィボディ、LDL受容体ドメインならびにEGFドメインから選択する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
一般リガンドを、dAb、Nanobody(商標)、scFv、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvまたはジスルフィド結合したFvから選択する、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
可変ドメインがヒト単一可変ドメインであり、IgGがヒトIgGである、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
一般リガンドが、1 mM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
一般リガンドが、1μM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
一般リガンドが、100 nM以下の親和性で抗体CH1ドメイン、軽鎖定常ドメイン(CL)、IgGヒンジまたは抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
ラクダ科動物のVHHドメインおよびIgGを含む抗体ポリペプチドの集団中のIgGからラクダ科動物のVHH単一可変ドメインを分離する方法であって、
a)該集団を一般リガンドと接触させること、および
b)一般リガンドに結合するサブ集団を選択し、それによってIgGから単一可変ドメインを分離すること、
を含み、一般リガンドが(i)VHHに対する結合特異性を有するが、VHに対する結合特異性を有さず；または(ii)重鎖抗体(H2)ヒンジに対する結合特異性を有する、前記方法。
【請求項８２】
一般リガンドを、抗体軽鎖可変ドメイン、抗体および抗体フラグメントから選択する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
一般リガンドを、dAb、Nanobody(商標)、scFv、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv、Fvまたはジスルフィド結合したFvから選択する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
一般リガンドが、1 mM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
一般リガンドが、1μM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
一般リガンドが、100 nM以下の親和性でVHHまたは重鎖抗体(H2)ヒンジに結合する、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
抗体ポリペプチド集団をB細胞により提供する、請求項７４〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
可変ドメインがラクダ科動物のVHHであり、IgGがラクダ科動物のIgGである、請求項７４〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
可変ドメインをラクダ科動物の重鎖(H2)抗体により提供する、請求項７４〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
一般リガンドを標識するか、またはタグ付けする、請求項７４〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
一般リガンドが添付物2a)、c)、d)またはe)から選択される抗体可変ドメインである、請求項１〜７および１１〜９０のいずれか１項に記載の方法、抗体ポリペプチド、誘導体または使用。
【請求項９２】
抗体ポリペプチドのレパートリーから、標的リガンドと一般リガンドに結合する単一可変ドメインを選択する方法であって、
a)該レパートリーを標的リガンドと接触させ、それに結合した単一可変ドメインを選択する工程；および
b)選択された可変ドメインを一般リガンドと接触させ、一般リガンドに結合する可変ドメインを選択する工程、
を含み、一般リガンドが添付物2c)またはe)から選択される抗体可変ドメインであり；ならびに
(i)選択された可変ドメインが重鎖可変ドメインである場合、一般リガンドが軽鎖可変ドメインであるか、または(ii)選択された可変ドメインが軽鎖可変ドメインである場合、一般リガンドが重鎖可変ドメインである、前記方法。
【請求項９３】
抗体ポリペプチドのレパートリーが重鎖可変ドメインのレパートリーであり、一般リガンドが軽鎖可変ドメインである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
抗体ポリペプチドのレパートリーが軽鎖可変ドメインのレパートリーであり、一般リガンドが重鎖可変ドメインである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
選択された可変ドメインの突然変異体または誘導体を作製する工程を含む、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
一般リガンドが、選択された可変ドメインと同じ標的リガンド種に結合する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９７】
一般リガンドが、選択された可変ドメインと異なる標的リガンド種に結合する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
選択された可変ドメインを、一般リガンドと同一である抗体可変ドメインまたはその誘導体と組み合わせて、標的リガンド結合特異性を有する生成物を作製することを含む、請求項９２〜９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
標的リガンドに結合する添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの重鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドであり、それによって、標的リガンドおよび重鎖可変ドメインに結合する軽鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換すること、
を含む前記方法。
【請求項１００】
添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの多特異的誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの重鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドと異なる標的リガンドであり、それによって、異なる標的リガンドおよび重鎖可変ドメインに結合する軽鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換し、それによって多特異的生成物を作製すること、
を含む前記方法。
【請求項１０１】
標的リガンドに結合する添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの軽鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドであり、それによって、標的リガンドおよび軽鎖可変ドメインに結合する重鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換すること、
を含む前記方法。
【請求項１０２】
添付物2c)(i)〜(iv)のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントの多特異的誘導体を作製する方法であって、
a)該抗体もしくはフラグメントの軽鎖可変ドメインまたは請求項９４に記載の方法における一般リガンドと同一の可変ドメインを使用し、工程a)で用いられる標的リガンドが抗体もしくはフラグメントが結合する標的リガンドと異なる標的リガンドであり、それによって、異なる標的リガンドおよび軽鎖可変ドメインに結合する重鎖単一可変ドメインを選択すること；ならびに
b)抗体もしくはフラグメントの少なくとも1個の重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換し、それによって多特異的生成物を作製すること、
を含む前記方法。
【請求項１０３】
重鎖可変ドメインを、ラクダ科動物から誘導された重鎖可変ドメイン；VHHドメイン；Nanobody(商標)；位置44にグリシンを有するVHH；位置45にロイシンを有するVHH；位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置45にロイシンを有するVHH；位置44にグリシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置45にロイシンを有し、位置47にトリプトファンを有するVHH；位置44にグリシン、位置45にロイシンおよび位置47にトリプトファンを有するVHH；位置103にトリプトファンまたはアルギニンを有するVHH；ヒト化ラクダ科動物もしくはマウス重鎖可変ドメイン；ヒト化Nanobody(商標)；ヒト重鎖可変ドメイン；ヒトから誘導された重鎖可変ドメイン；生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する重鎖可変ドメイン；または生殖系列遺伝子配列DP47によりコードされる位置44、45および47と同一である位置44、45および47を有する重鎖可変ドメインからなる群より選択する、請求項１００〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
軽鎖可変ドメインを、ヒト軽鎖可変ドメイン；ヒトから誘導された軽鎖可変ドメイン；生殖系列遺伝子配列DPK9によりコードされるFW2と同一であるFW2配列を有する軽鎖可変ドメイン；ラクダ科動物軽鎖可変ドメイン；ラクダ科動物から誘導された軽鎖可変ドメイン；およびヒト化ラクダ科動物もしくはマウス軽鎖可変ドメインから選択する、請求項９９または１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
a)選択された可変ドメインが重鎖可変ドメインであり、抗体もしくはフラグメントの各重鎖可変ドメインを、選択された重鎖可変ドメイン；同一の重鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換するか、またはb)選択された可変ドメインが軽鎖可変ドメインであり、抗体もしくはフラグメントの各軽鎖可変ドメインを、選択された軽鎖可変ドメイン；同一の軽鎖可変ドメインもしくはその誘導体と置換する、請求項９９〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法により取得可能な誘導体。
【請求項１０７】
請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法により取得可能である、Panorex(商標)、Rituxin(商標)、Zevalin(商標)、Mylotarg(商標)、Campath(商標)、Herceptin(商標)、ReoPro(商標)、Synagis(商標)、Xolair(商標)、Remicade(商標)、Simulect(商標)、OKT3(商標)、Orthoclone(商標)、Zenapax(商標)、Humira(商標)、Bexxar(商標)、Raptiva(商標)、Antegren(商標)、Erbitux(商標)およびAvastin(商標)から選択される抗体または抗体フラグメントの誘導体。
【請求項１０８】
一般リガンドが、Panorex(商標)、Rituxin(商標)、Zevalin(商標)、Mylotarg(商標)、Campath(商標)、Herceptin(商標)、ReoPro(商標)、Synagis(商標)、Xolair(商標)、Remicade(商標)、Simulect(商標)、OKT3(商標)、Orthoclone(商標)、Zenapax(商標)、Humira(商標)、Bexxar(商標)、Raptiva(商標)、Antegren(商標)、Erbitux(商標)およびAvastin(商標)から選択される抗体もしくは抗体フラグメントに由来する抗体可変ドメインまたは該抗体もしくは抗体フラグメントにより結合した標的リガンドに結合する同一の可変ドメインもしくはその誘導体である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０９】
請求項１０８に記載の方法により取得可能である、標的リガンド結合特異性を有する生成物。
【請求項１１０】
医薬としての請求項１０６〜１０７および１０９のいずれか１項に記載の誘導体または生成物の使用。
【請求項１１１】
ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項１０６〜１０７および１０９のいずれか１項に記載の誘導体または生成物の使用。
【請求項１１２】
症状が添付物2c)(i)中の抗体もしくは抗体フラグメントについて列挙された症状である、ヒトにおける疾患または症状の治療および／または予防のための請求項１０６または１０９に記載の誘導体または生成物の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【図２】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【公表番号】特表２００９−５１１８９２（Ｐ２００９−５１１８９２Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３５０９４（Ｐ２００８−５３５０９４）
【出願日】平成１８年１０月１１日（２００６．１０．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３７８１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２８０９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月１１日（２００６．１０．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３７８１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２８０９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】
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