【課題】ｔＲＮＡスプライシング経路における１以上の構成要素の活性をモジュレートする化合物のスクリーニング及び同定方法を提供する。
【解決手段】ｔＲＮＡスプライシングエンドヌクレアーゼ及び／又はｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性をモジュレートする化合物のスクリーニング及び同定方法。動物界のｔＲＮＡスプライシングエンドヌクレアーゼ及び／又は動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼを阻害する化合物を同定するためのアッセイ。真菌のｔＲＮＡスプライシングエンドヌクレアーゼ及び／又は真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼを阻害する化合物を同定するためのアッセイ。癌及び／又は真菌感染症を治療及び／又は予防するために有用な医薬品のリードを同定するために、化合物ライブラリーをハイスループットでスクリーニングするための簡便な高感度アッセイ。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、真菌無細胞抽出物または精製された真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップ；
（ｂ）半分子のライゲーションを測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下のシグナルと比較して、ライゲーションした半分子の増大が検出される場合に、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物が同定されるステップ
を含む、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物の同定方法。
【請求項２】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、真菌無細胞抽出物または精製された真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップであって、ｔＲＮＡ分子の一方の集団の末端がフルオロフォアで標識されており、他方がクエンチャーで標識されているステップ；
（ｂ）半分子の蛍光を測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下のシグナルと比較して、蛍光シグナルの増大が検出可能な場合に、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物が同定されるステップ
を含む、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物の同定方法。
【請求項３】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、真菌無細胞抽出物または精製された真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップであって、ｔＲＮＡ分子の一方の集団の末端が蛍光アクセプター部分で標識されており、他方が蛍光ドナー部分で標識されている、上記ステップ；
（ｂ）半分子の蛍光を測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下の蛍光発光と比較して、蛍光ドナー部分の波長における蛍光アクセプター部分の蛍光発光の低減が検出される場合に、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物が同定されるステップ
を含む、真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗真菌化合物の同定方法。
【請求項４】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、動物界の無細胞抽出物または精製された動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップ；
（ｂ）半分子のライゲーションを測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下のシグナルと比較して、ライゲーションした半分子の増大が検出される場合に、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物が同定されるステップ
を含む、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物の同定方法。
【請求項５】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、動物界の無細胞抽出物または精製された動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップであって、ｔＲＮＡ分子の一方の集団の末端がフルオロフォアで標識されており、他方がクエンチャーで標識されている、上記ステップ；
（ｂ）半分子の蛍光を測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下のシグナルと比較して、蛍光シグナルの増大が検出可能な場合に、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物が同定されるステップ
を含む、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物の同定方法。
【請求項６】
（ａ）５’ｔＲＮＡ半分子の集団および３’ｔＲＮＡ半分子の集団を、動物界の無細胞抽出物または精製された動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼおよび化合物または化合物ライブラリのメンバーと接触させるステップであって、ｔＲＮＡ分子の一方の集団の末端が蛍光アクセプター部分で標識されており、他方が蛍光ドナー部分で標識されている、上記ステップ；
（ｂ）半分子の蛍光を測定するステップであって、前記化合物の非存在下または陰性対照の存在下の蛍光発光と比較して、蛍光ドナー部分の波長における蛍光アクセプター部分の蛍光発光の低減が検出される場合に、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物が同定されるステップ
を含む、動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性を阻害または低減する抗増殖性化合物の同定方法。
【請求項７】
ｔＲＮＡスプライシングリガーゼの活性をモジュレートする化合物の構造を決定するステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記無細胞抽出物が酵母の無細胞抽出物である、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項９】
前記無細胞抽出物が哺乳動物の無細胞抽出物である、請求項４、５または６に記載の方法。
【請求項１０】
前記無細胞抽出物がヒトの無細胞抽出物である、請求項４、５または６に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物がペプトイド；ランダムバイオオリゴマー；ヒダントイン、ベンゾジアゼピンおよびジペプチドなどのダイバーソマー（Diversomer）；ビニル性ポリペプチド；非ペプチド性ペプチド模倣体；オリゴカルバメート；ペプチジルホスホネート；ペプチド核酸ライブラリ；抗体ライブラリ；炭水化物ライブラリ；ならびに有機小分子ライブラリを含むコンビナトリアル化合物ライブラリから選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記有機小分子ライブラリがベンゾジアゼピン、イソプレノイド、チアゾリジノン、メタチアザノン、ピロリジン、モルホリノ化合物、またはジアゼピンジオンのライブラリである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ｔＲＮＡスプライシングエンドヌクレアーゼの活性をモジュレートする化合物の構造を決定するステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物の構造を質量分析、ＮＭＲ、振動分光分析、またはＸ線結晶構造解析によって決定する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が前記真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼと直接結合する、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が前記真菌のｔＲＮＡスプライシングリガーゼと直接結合する、請求項４、５または６に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が基質に結合する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１、２または３に記載の方法によって同定される化合物もしくは製薬上許容されるその塩を有効量で投与することを含む、真菌感染症もしくはその症状の治療、予防または寛解方法。
【請求項１９】
前記真菌感染症が酵母感染症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項４、５または６に記載の方法によって同定される化合物もしくは製薬上許容されるその塩を有効量で対象に投与することを含む、増殖性疾患もしくはその症状の治療、管理または寛解方法。
【請求項２１】
前記増殖性疾患が癌、乾癬または肺線維症である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
動物界のｔＲＮＡスプライシングリガーゼに対する化合物の効果を評価するステップをさらに含む、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物の細胞毒性を決定するステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物の細胞増殖抑制活性を決定するステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象がヒトである、請求項１８または２０に記載の方法。

【図１】

【図２】

【公開番号】特開２０１２−１１０３３７（Ｐ２０１２−１１０３３７Ａ）
【公開日】平成２４年６月１４日（２０１２．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１３６１９（Ｐ２０１２−１３６１９）
【出願日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【分割の表示】特願２００６−５０９４３７（Ｐ２００６−５０９４３７）の分割
【原出願日】平成１６年３月２６日（２００４．３．２６）
【出願人】（５０３３６９７０５）ピーティーシー　セラピューティクス，インコーポレーテッド (31)
【Ｆターム（参考）】