摂食行動の修正
【課題】本発明は、哺乳動物における過剰体重の防止または治療に使用するための組成物および方法に関する。
【解決手段】組成物は、食物摂取を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方が示されるオキシントモジュリンを含む。
【解決手段】組成物は、食物摂取を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方が示されるオキシントモジュリンを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類の動物の体重減少に使用するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最も高い発生率を有するが有効な治療が欠如している疾患の１つに肥満がある。それは、生活の質を低下させるとともに他の疾患のリスクを実質的に増加させる衰弱状態である。
【０００３】
米国においては、現在、成人人口の２５％が、臨床的に肥満であると考えられている。米国の健康管理費用の４５０億ドル、すなわち年間の健康管理支出全体の８％、が肥満の直接の結果である、と推定されている。ヨーロッパにおいては、この問題は、増加しつつある。新たな取り組みなしでは、２００５年までに２０％を超えるイギリスの人口が、臨床的に肥満になるであろう、と予想されている。肥満が代謝病であるという事実は、医療専門家および保険機関によって、ますます認識されつつある。しかしながら、肥満の長期管理のための食事療法および運動と共に使用できる、有効かつ安全な薬物が不足している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、そのような薬物を提供するとともに、さらなるそのような薬物を同定しかつ開発する手段を提供することである。
【０００５】
プレプログルカゴン(Preproglucagon)は、１６０アミノ酸ポリペプチドであり、これは、プロホルモン変換酵素(convertase)−１および−２によって組織特異的な仕方で分割(cleave)されて、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢組織の両方においてさまざまな機能を有する多数の生成物を生じる。腸内およびＣＮＳ内では、プレプログルカゴン分割(cleavage)の主な翻訳後の生成物は、図２２に示すように、グルカゴン様(glucagon-like)ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、グリセンチン(glicentin)、およびオキシントモジュリン(oxyntomodulin)（ＯＸＭ）である。ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２が、食物摂取を阻害することは示されてきたが、そのような役割は、明確なペプチドＯＸＭに対してはヒトにおいては明らかにされていなかった。ヒトにおける生理活性ペプチドとしてのＯＸＭの重要性は、明らかにされていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＯＸＭペプチドが、ヒトにおける食物摂取を阻害し、体重を低減し、かつエネルギー消費を増加させることができる、また、ＯＸＭ点滴注入（infusion）が、絶食血漿グレリン（fasting plasma ghrelin）を抑制する、という我々の驚くべき観察に基づいている。
【０００７】
本発明は、哺乳動物の過剰体重の防止または治療における使用のための方法を提供し、方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。哺乳動物は、過剰体重の防止または治療の必要がありそうである。体重減少は、美容用になり得る。ＯＸＭを含む組成物は、効果的な濃度で投与されるものである。
【０００８】
本発明はまた、以下の対象の治療方法、すなわち、対象のカロリー摂取を低下させる方法、対象の食欲を低下させる方法、対象の食物摂取を低下させる方法、対象の体重の制御または治療方法、肥満の低減または防止方法、および対象のエネルギー消費を増加させる方法を提供し、特に以下の、体重増加を防止および低減すること、体重減少を誘発および促進すること、および、体格指数により測定される肥満を低減すること、のいずれか１つまたは複数を提供する。方法は、食欲、飽満、空腹、およびエネルギー消費のいずれか１つまたは複数の制御を含み、特に以下の、食欲を低減、抑制、または阻害すること、飽満および飽満の感覚を誘発、増加、増強、および促進すること、および、空腹および空腹の感覚を低減、阻害、および抑制すること、およびエネルギー消費を増加させること、のいずれか１つまたは複数を含む。方法はさらに、所望の体重、所望の体格指数、所望の容姿、および良好な健康のいずれか１つまたは複数を維持することを含む。上述した全ての方法において、ＯＸＭは、一般に末梢経路の投与によって、対象に投与される。
【０００９】
本発明はまた、対象の脂質プロフィールを改善する方法を提供する。方法は、効果量のＯＸＭを対象に投与することを含む。脂質プロフィールの改善は、限定される訳ではないが、コレステロールレベルを低減すること、トリグリセリドレベルを低減すること、およびＨＤＬコレステロールレベルを増加させることのうちの少なくとも１つを含む。ＯＸＭは、単一または分割された投与量などで、末梢的に投与できる。
【００１０】
別の実施態様においては、栄養分の有効性を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方により軽減できる状態または障害を軽減する方法が、ここに開示される。方法は、治療効果量のＯＸＭを対象に投与することを含む。
【００１１】
本発明は、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与に適した形態において、製薬上適した担体と、ＯＸＭとを含む製薬組成物を提供する。単位剤形の場合は、単位当たりの投与量は、例えば、以下に記載されるような、または以下に与えられる１ｋｇ当たり投与量に基づいて計算されるようなものとすることができる。
【００１２】
本発明はまた、上述したいずれかの治療方法のための脳に対する末梢的な経路による投与のための医薬の製造における使用のためのＯＸＭまたはそのアゴニストを含む。末梢的経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。医薬のためのＯＸＭの好ましい投与量は、以下に与えられる。
【００１３】
本発明は、哺乳動物の美容用体重減少のための方法を提供し、この方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。この環境では、体重減少は、純粋に美容用容姿の目的のためである。
【００１４】
本発明はさらに、ＯＸＭと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤との、組み合わせによる使用を提供する。他の薬剤は、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト受容体、または、ＰＹＹまたはそのアゴニスト、または他の物質であり、他の物質は、例えば、アミリン(amylin)、レプチン(leptin)、エクセンジン−４(exendin-4)、またはこれらのアゴニストなどの天然食物影響物質(naturally food influence substance)であるか、またはこれらから誘導される物質である。所望ならば、２つ以上の他の薬剤を、ＯＸＭと組み合わせて使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストを使用できる。（物質または「そのアゴニスト」への言及が、これらの物質と１つまたは複数のそれらのアゴニストとの混合物、また２つまたは３つ以上のアゴニストの混合物を含むことは、理解されるであろう）。
【００１５】
本発明の方法において、ＯＸＭは、ＯＸＭと組み合わせて使用させる任意の他の薬剤のように、所望の結果を達成するのに効果的な量で投与される。それぞれの場合、対象、一般にヒトは、太りすぎであり得るか、糖尿病であり得るか、またはこれらの両方であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】図１（図１Ａおよび図１Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮプログルカゴン誘導および関連生成物の影響の比較である。図１Ａは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１、ＯＸＭ、グルカゴン、またはグリセンチン（全て３ｎｍｏｌ）のＩＣＶ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）を例示する。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図１Ｂ】図１（図１Ａおよび図１Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮプログルカゴン誘導および関連生成物の影響の比較である。図１Ｂは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１、ＯＸＭ（両方とも１ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−４（０．０３ｎｍｏｌ）の急性ｉＰＶＮ注入後、２４ｈまでの累積食物摂取（ｇ）を例示する。１、２、および４ｈにおける全ての群について食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０１。８ｈにおけるエクセンジン−４だけについて食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図２Ａ】図２（図２Ａおよび図２Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮ ＯＸＭの影響の２つのグラフを示す。図２Ａは、ＯＸＭ（０．３、１、３、または１０ｎｍｏｌ）の急性ＩＣＶ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図２Ｂ】図２（図２Ａおよび図２Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮ ＯＸＭの影響の２つのグラフを示す。図２Ｂは、絶食させた動物内へのＯＸＭ（０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌ）の急性ｉＰＶＮ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図３Ａ】図３（図３Ａおよび図３Ｂ）は、暗相の開始におけるＩＣＶ ＯＸＭの影響の２つの棒グラフを示す。満腹したラットが、暗相の開始において、ＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、または食塩水のＩＣＶ注入を受けた。図３Ａは、注入後１ｈにおいて決定された食物摂取（グラム）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０／０５。
【図３Ｂ】図３（図３Ａおよび図３Ｂ）は、暗相の開始におけるＩＣＶ ＯＸＭの影響の２つの棒グラフを示す。満腹したラットが、暗相の開始においてＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、または食塩水のＩＣＶ注入を受けた。図３Ｂは、注入後１ｈにおいて決定された行動。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０／０５。
【図４Ａ】図４（図４Ａおよび図４Ｂ）は、食物摂取に対するＯＸＭおよびＧＬＰ−１影響へのエクセンジン−（９−３９）による阻害の２つの棒グラフを示す。図４Ａは、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭおよびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）のみ、の急性ＩＣＶ注入１時間後の食物摂取。食塩水対照に対して、＊＊、Ｐ＜０．００５。
【図４Ｂ】図４（図４Ａおよび図４Ｂ）は、食物摂取に対するＯＸＭおよびＧＬＰ−１影響へのエクセンジン−（９−３９）による阻害の２つの棒グラフを示す。図４Ｂは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）、ＯＸＭおよびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）のみ、の急性ｉＰＶＮ注入後の食物摂取。食塩水対照に対して、＊＊、Ｐ＜０．００５。
【図５】ＧＬＰ−１およびＯＸＭによるラット視床下部膜内の［125Ｉ］ＧＬＰ−１結合の競合のグラフ。
【図６ａ】２４時間絶食させたラットにおける、初期暗相の間に注入したＩＰ ＯＸＭ（５００μｌ食塩水中、３０、１００、および３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の累積食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する（黒四角＝食塩水、白丸＝ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、黒三角＝ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ、白三角＝ＯＸＭ ３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５。
【図６ｂ】絶食させていないラットにおける、暗相の開始前に注入したＩＰ ＯＸＭ（５００μｌ食塩水中、３０および１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の累積食物摂取に対する影響を例示する（黒四角＝食塩水、白丸＝ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、黒三角＝ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ）。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５。
【図７ａ】ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の７日間、毎日２回のＩＰ注入の累積食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図７ｂ】ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の７日間、毎日２回のＩＰ注入の体重増加（ｇ）に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図８】ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、食塩水、または陽性の対照（１時間＝ＧＬＰ−１（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）；２時間＝ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ））の３６時間絶食ラットの胃内容排出に対する影響を例示する。胃の内容物（乾燥重量）は、３０分間の摂食時間中の食物摂取のパーセンテージとして表された。食塩水に対して、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図９】２４時間絶食させたラットの弓状核内へ投与したときのＯＸＭの増加する投与量（０．０１−１．０ｎｍｏｌ）の１時間食物摂取に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図１０】ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ投与前１５分間に注入された、エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌ）または食塩水のｉＡＲＣ投与の１時間食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する。（Ｓ＝食塩水、Ｇ＝ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｏｘ＝ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｅｘ＝エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌ））。
【図１１ａ】視床下部の弓状核内における、Ａ）ＩＰ食塩水、または、Ｂ）ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、に応答するｆｏｓ様免疫反応の発現を例示する（ｘ４０倍率）。食塩水に対して、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図１１ｂ】脳幹のＮＴＳおよびＡＰにおける、Ａ）ＩＰ食塩水、Ｂ）ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または、Ｃ）ＩＰ ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）に応答するｆｏｓ様免疫反応の発現を例示する。
【図１２】ヒト対象の食物摂取に対するＯＸＭの静脈内点滴注入の影響についての研究のプロトコルを示す。目盛りは、時間（ｍｉｎ）を示す。ＯＸＭ（３．０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎ）および食塩水の点滴注入は、０〜９０分であった。ビュッフェ式食事は、７５分において提供された。
【図１３】ビュッフェ式食事におけるヒト対象により消費されたカロリーを示す。各線は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入での個々の対象により消費されたカロリーを示す。太線は、全ての志願者に対する平均カロリー摂取を示す。ＯＸＭ点滴注入での平均のカロリーの落ち込みは、１７．６±５．７％である。
【図１４】「今あなたは空腹ですか？」という質問に対するヒト対象の応答を示す視覚的アナログ目盛りである。ＯＸＭ点滴注入中に主観的空腹に有意な落ち込みがあった。空腹指数(score)は、ビュッフェ式食事の後にかなり減少した。
【図１５】ラットにおける注入後３０および９０分における絶食血漿グレリン−ＩＲに対するＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与の影響を示す。黒塗りのブロックは、食塩水対照での結果を示し、ハッチングされたブロックは、ＯＸＭでの結果を示す。
【図１６】ビュッフェ式食事におけるヒト対象により消費されたｋＪカロリーでのエネルギー摂取を示す。各線は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入での個々の対象のエネルギー摂取を示す。太線は、全ての志願者に対する平均カロリー摂取を示す。
【図１７】ビュッフェ式食事におけるエネルギー摂取、ヒト対象の累積１２および２４時間のエネルギー摂取を示す。黒塗りのブロックは、食塩水対照での結果を示し、ハッチングされたブロックは、ＯＸＭでの結果を示す。
【図１８】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後のヒト対象の相対的空腹指数を示す。
【図１９】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後のＲＩＡにより決定されたＯＸＭ様免疫反応性（ＯＬＩ）をｐｍｏｌ／Ｌで示す。
【図２０】ＯＸＭ点滴注入中の血漿試料のゲル浸透分析を示す。合成ＯＸＭと同じ位置に単一の免疫反応性ピークが溶離する。
【図２１】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後の血漿グレリンレベルの変化を示す。
【図２２】プレプログルカゴンおよびその構成要素部分を図式的に示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、予想に反して見出された、ＯＸＭペプチドが、食物摂取を阻害しかつ体重を低減することができるという驚くべき観察に基づいている。
【００１８】
本願では、「オキシントモジュリン」という用語は、「ＯＸＭ」と同じであり、以下のようなＯＸＭペプチド配列またはその類似体を含むどのような組成物にも関連する。
【００１９】
ＯＸＭ配列は、当業技術内でよく知られており、記録が残されている。本発明は、以下のＯＸＭヒト(human)配列SEQ ID NO: 1（ラット、ハムスター、およびウシ(bovine)ＯＸＭ配列と同じである）：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
Arg Asn Lys Asn Asn Ile Ala、SEQ ID NO: 1、
以下のＯＸＭアンコウ(angler fish)配列SEQ ID NO: 2：
His Ser Glu Gly Thr Phe Ser Asn Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Glu Asp Arg Lys Ala Gln
Glu Phe Val Arg Trp Leu Met Asn Asn Lys
Arg Ser Gly Val Ala Glu、SEQ ID NO: 2、
および、以下のウナギ(eel)ＯＸＭ配列SEQ ID NO: 3：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Asn Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Glu Thr Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Ser Lys
Arg Ser Gly Gly Pro Thr SEQ ID NO: 3、
を特に含む、ここに列挙される全てのシーケンスに関する。
【００２０】
本願で使用されるＯＸＭという用語は、また、上述したＯＸＭ配列のどのような類似体も含み、１位にあるヒスチジン残基は、正電荷を有する芳香族部分(aromatic moiety)またはその誘導体によって置換または維持され、好ましくは、この部分は、アミノ酸であり、より好ましくは、それは、ヒスチジン誘導体であり、上述したＯＸＭ配列内の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２個の他のアミノ酸が、１位にあるヒスチジンを除いて、任意の他の独立して選択されたアミノ酸によって独立して置換され得る。
【００２１】
配列内のいずれか１つまたは複数（２２個まで）の他のα−アミノ酸残基が、任意の他の１つのα−アミノ酸残基によって独立して置換され得る。好ましくは、ヒスチジンを除く任意のアミノ酸残基は、当業技術内でよく知られる保存的置換、すなわち、１つの疎水性アミノ酸を別のものに置き換えるなどといったアミノ酸を化学的に類似の種類の１つに置き換えることによって置換される。
【００２２】
上述したように、１から２２個のアミノ酸が置換され得る。上述した置換の選択肢に加えて、これは、アミノ酸の非必須形態、修飾形態、または異性形態によって行われ得る。例えば、１から２２個のアミノ酸は、異性形態（例えば、Ｄ−アミノ酸）、修飾アミノ酸、例えばノルアミノ酸(nor-amino acid)（ノルロイシンまたはノルバリンなど）、または非必須アミノ酸（タウリンなど）によって置換できる。さらに、１から２２個のアミノ酸は、その側鎖を介して結合された対応するまたは異なるアミノ酸（例えば、γ−結合(gamma-linked)グルタミン酸）によって置換できる。上述した各置換では、１位にあるヒスチジン残基は、変更されないか、あるいは、上述したように規定される。
【００２３】
さらに、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、１位にあるヒスチジンを除いて（または上に規定したように）、ＯＸＭ配列から除去できる。削除される残基は、任意の２、３、４、または５個の隣接残基、または全く別々の残基とすることができる。
【００２４】
ＯＸＭ配列のＣ末端は、さらなるアミノ酸残基または他の部分を付加するように修飾できる。上述したＯＸＭは、その対応する塩として供給され得る。ＯＸＭおよびその類似体の製薬上許容可能な塩の例としては、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、塩酸塩、および硫酸塩などをそれぞれ与えるメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸、塩酸、および硫酸などの鉱酸から誘導されたもの、または、有機塩基および無機塩基などの塩基から誘導されたものが挙げられる。本発明の化合物の塩を生成するのに適した無機塩基の例としては、アンモニア、リチウム、ナトリウム、カルシウム、カリウム、アルミニウム、鉄、マグネシウム、亜鉛などの水酸化物、炭酸塩、および重炭酸塩が挙げられる。また、塩は、適切な有機塩基を用いて形成され得る。本発明の化合物との製薬上許容可能な塩基付加塩(base addition salt)を形成するのに適したそのような塩基としては、毒性がなくかつ塩を形成するのに十分に強い有機塩基が挙げられる。このような有機塩基は、当業技術内でよく知られており、アルギニンおよびリシンなどのアミノ酸、モノ−、ジ−、およびトリエタノールアミン、コリンなどのモノ−、ジ−、またはトリヒドロキシアルキルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、およびトリメチルアミンなどのモノ−、ジ−、およびトリアルキルアミン、グアニジン、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、エチレンジアミン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどを含み得る。
【００２５】
塩は、当業技術内でよく知られる方法を用いる従来の仕方で調製できる。上記塩基化合物の酸付加塩は、必要な酸を含有する水性または水性アルコール溶液または他の適切な溶媒中に遊離(free)塩基化合物を溶解することによって調製できる。ＯＸＭが酸性官能基(function)を含む場合は、上記化合物の塩基塩は、上記化合物を適切な塩基と反応させることによって調製できる。酸塩または塩基塩は、直接分離できるか、または、溶液を濃縮すること、例えば蒸発によって、得ることができる。ＯＸＭは、溶媒和または水和された形態でも存在し得る。
【００２６】
本発明のＯＸＭは、脂質、糖、タンパク質、またはポリペプチドなどの１つまたは複数の群に複合化(conjugate)され得る。ＯＸＭは、これらの群に（例えば、共有結合またはイオン結合を介して）付着(attach)されることにより複合化され得るか、またはそれらと会合(associate)され得る。複合結合は、ＯＸＭがこれらの群に付着されるときは、好ましくは、Ｃ末端またはＮ末端アミノ酸を通してではない。ＯＸＭは、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体などのポリマー、セルロース、セルロース誘導体、キトサン、
アラビアゴム(acacia gum)、カラヤゴム(karaya gum)、グアールガム(guar gum)、キサンタンガム(xanthan gum)、トラガカントゴム(tragacanth)、アルギン酸、カラギーナン(carrageenan)、アガロース、フルセララン(furcellarans)、デキストラン、デンプン、デンプン誘導体、ヒアルロン酸などの多糖、ポリエステル、ポリアミド、ポリ無水物(polyanhydrides)、およびポリオルトエステル(polyortho esters)に複合化され得る。
【００２７】
ＯＸＭは、化学的に修飾できる。特に、ＯＸＭのアミノ酸側鎖、Ｎ末端、およびＣ酸末端のうちの少なくとも１つが、修飾され得る。例えば、ＯＸＭは、１つまたは複数の、アルキル化、ジスルフィド形成、金属錯体形成、アシル化、エステル化、アミド化、ニトロ化、酸を用いた処理、塩基を用いた処理、酸化、または還元を受けることができる。これらの処理を実行する方法は、当業技術内でよく知られている。特に、ＯＸＭは、低級(lower)アルキルエステル、低級アルキルアミド、低級ジアルキルアミド、酸付加塩、カルボン酸塩、またはこれらのアルカリ付加塩として提供される。特に、ＯＸＭのアミノ末端またはカルボキシル末端は、例えば、エステル化、アミド化、アシル化、酸化、または還元によって誘導され得る。特に、ＯＸＭのカルボキシル末端は、アミド部分を形成するように誘導できる。
【００２８】
ＯＸＭは、金属、特に二価金属を用いて処理できる。従って、本発明の目的のために、ＯＸＭは、１つまたは複数の以下の金属、亜鉛、カルシウム、マグネシウム、銅、マンガン、コバルト、モリブデン、または鉄の存在下に提供され得る。
【００２９】
ＯＸＭは、製薬上許容可能な担体または希釈剤と組み合わせた製薬組成物の形態で提供され得る。適切な担体および希釈剤の少なくとも一方は、当業技術内でよく知られており、製薬等級のデンプン、マンニトール、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉(talcum)、セルロース、グルコース、スクロース、（または他の糖）、炭酸マグネシウム、ゼラチン、油、アルコール、界面活性剤(detergents)、乳化剤、または水（好ましくは、滅菌したもの）を含む。組成物は、組成物の混合製剤とすることができ、あるいは、同時、別々、または逐次の使用（投与を含む）のための組み合わされた製剤とすることができる。ＯＸＭは、結晶性の固体、粉末、水溶液、懸濁液として、または油中で提供できる。
【００３０】
上述した徴候において使用するための本発明による組成物は、任意の都合のよい方法によって、例えば、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与およびそれに従って適合された組成物によって、投与され得る。
【００３１】
経口投与では、組成物は、液体または固体、例えば、溶液、シロップ、懸濁液、または乳濁液、錠剤(tablets)、カプセル、およびトローチ剤(lozenges)として処方できる。
【００３２】
液体処方は、一般に、適切な水性または非水系の１つまたは複数の液体担体中、例えば、水、エタノール、グリセリン、ポリエチレングリコール、または油中の、化合物または生理的に許容可能な塩の懸濁液または溶液から構成されるものである。また、処方は、懸濁剤(suspending agent)、防腐剤(preservative agent)、香味剤(flavouring agent)、または着色剤を含み得る。
【００３３】
錠剤の形態の組成物は、固体処方を調合するのに日常業務で使用される任意の適切な１つまたは複数の製薬担体を用いて調合できる。このような担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、および微晶質セルロースが挙げられる。
【００３４】
カプセルの形態の組成物は、日常業務のカプセル化処理を用いて調合できる。例えば、活性成分を含有する粉末、顆粒、またはペレットが、標準担体を用いて調製でき、次に、硬質(hard)ゼラチンカプセル内に充填され、代替としては、分散液(dispersion)または懸濁液が、任意の適切な１つまたは複数の製薬担体、例えば、水性ゴム、セルロース、ケイ酸塩、または油を用いて調製でき、次に、この分散液または懸濁液は、軟質(soft)ゼラチンカプセル内に充填される。
【００３５】
経口投与のための組成物は、活性成分が消化管を通る間にそれを分解(degradation)から、例えば、錠剤またはカプセル上への処方の外側被覆によって、保護するように設計され得る。
【００３６】
皮下投与のための組成物を含む通常の非経口組成物は、滅菌した水性または非水系の担体または経口的に許容可能な油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油、またはゴマ油中の化合物または生理的に許容可能な塩の溶液または懸濁液を含む。代替としては、溶液は、凍結乾燥され、次に、投与の直前に適切な溶媒を用いて元に戻され得る。
【００３７】
鼻腔または経口投与のための組成物は、エーロゾル、滴(drops)、ゲル、および粉末として都合よく処方できる。エーロゾル処方は、一般に、生理的に許容可能な水性または非水系の溶媒中の活性物質の溶液または微細な懸濁液から成り、通常は、密閉容器内の滅菌した形態で単一または複数投与量として存在しており、密閉容器は、噴霧装置と共に使用するためにカートリッジまたは詰め替えの形態をとることができる。代替としては、密閉容器は、単一投与量鼻腔吸入器などの単一投薬装置(unitary dispensing device)、または、絞り弁を備えるエーロゾルディスペンサーであって、一旦、容器の内容物が使い尽くされると処分が予定されているものとすることができる。投与量形態が、エーロゾルディスペンサーを含む場合は、製薬上許容可能な推進剤(propellant)を含むことになる。エーロゾル投与量形態は、ポンプ噴霧器の形態をとることもできる。
【００３８】
口腔または舌下投与に適した組成物は、活性成分が、糖、およびアラビアゴム、トラガカントゴム、またはゼラチンおよびグリセリンなどの担体を用いて処方される、錠剤、トローチ剤、および香錠(pastilles)を含む。
【００３９】
直腸または膣投与のための組成物は、都合よく、坐剤（カカオバターなどの従来の坐剤基剤を含む）、膣坐剤、膣錠、泡および浣腸剤の形態となる。
【００４０】
経皮投与に適した組成物としては、軟膏、ゲル、貼付剤、および粉末注入を含む注入が挙げられる。
【００４１】
組成物は、都合よく、錠剤、カプセル、またはアンプルなどの単位剤形となる。
【００４２】
ＯＸＭは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から１２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上下の範囲の任意の組み合わせ内にある。投与量は、個別の基準で、または、たいてい７０または７５ｋｇ対象である典型的な対象を基準として計算できる。投与量は、各食事前に投与できる。
【００４３】
皮下投与では、７５ｋｇ対象を基準として計算された投与量である、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの投与量が、一般に食事前に投与され得る。
【００４４】
末梢投与のための単位剤形での製薬製剤は、上に与えられた１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されたＯＸＭの量を含む。一般に、投与量は、７０または７５ｋｇ対象を基準として計算され得る。例えば皮下投与のための組成物は、７５ｋｇ対象を基準として計算された、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの単位投与量を含むことができる。
【００４５】
ＯＸＭは、過剰の体重増加を防止する予防として使用でき、あるいは、過剰体重を減少させる治療として使用できる。
【００４６】
過剰体重は、通常は肥満であるとはいえ、哺乳動物は、過剰体重に苦しんでいることになる目的で、臨床的に肥満であるとして認定されることはない。ＯＸＭは、液体、固体、または半固体の形態となり得る。
【００４７】
今日の社会では、哺乳動物の過剰体重の防止または治療は、現実に必要とされている。好ましくは、哺乳動物は、ヒトであるとはいえ、それは、ウマ、イヌ科の動物(canine animals)（特に、飼いならされたイヌ科の動物）、ネコ科の動物(feline animals)（特に、飼いならされたネコ科の動物）などの他の哺乳類の動物、さらには、ブタ(porcine)、ウシ(bovine)、およびヒツジ(ovine)などの動物のように、肉のために生産されている哺乳動物も含み得る。本発明は、赤身肉の生産を最大にするために、そのような動物の過剰体重を防止するのに使用できる。
【００４８】
本願全体に亘って、「防止」という用語は、どのような過剰体重も、どのような程度でも緩和するどのような効果も意味する。本願全体に亘って、「治療」という用語は、どのような程度でも、過剰体重の改善を意味する。
【００４９】
ＯＸＭの適切な投与量は、限定される訳ではないが、ＯＸＭの模擬摂食後(postprandial)血清濃度をする投与量など、ＯＸＭの基底(basal)濃度より実質的に上に上昇させるような投与量を含む。従って、一実施態様においては、ＯＸＭは、カロリー摂取、食物摂取、または食欲の低減に相当する、カロリー摂取、食物摂取、または食欲における低減まで、または、ＯＸＭの摂食後レベルにより生じるエネルギー消費を増加させるように、投与される。
【００５０】
ここに開示される全ての方法では、ＯＸＭの投与量は、摂食後に観察される生理的レベルに基づくことができる。単一投与量が、毎日投与でき、あるいは、分割投与量が、使用できる（上記を参照のこと）。
【００５１】
末梢経路の投与を介して、すなわち直接に脳へという以外の経路を介して、ＯＸＭを投与するのが好ましい。このような経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。
【００５２】
本発明は、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与に適した形態において、製薬上適した担体と、ＯＸＭとを含む製薬組成物を提供する。単位剤形の場合は、単位当たりの投与量は、以上に与えられる１ｋｇ当たり投与量に基づいて計算できる。
【００５３】
本発明はまた、上述したいずれかの治療方法のための末梢的経路による投与のための医薬の製造における使用のためのＯＸＭまたはそのアゴニストを含む。末梢的経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。医薬のためのＯＸＭの好ましい投与量は、以上に与えられる。
【００５４】
本発明は、哺乳動物の美容用体重減少のための方法を提供し、この方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。この環境では、体重減少は、純粋に美容用容姿の目的のためである。
【００５５】
上に与えられる好ましい特徴の全てが、本発明のこの態様にもあてはまる。
【００５６】
この理論に拘束されずに、本発明は、哺乳類の身体への食物摂取に対する阻害剤として作用することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方を行うＯＸＭの投与による過剰体重の防止または治療を提供することが理解される。そのような食物摂取の低減とエネルギー消費の増加の一方または両方は、哺乳動物の過剰体重の防止または治療となる。本願では、「食物」という用語は、消化されるとともにカロリーの値を有する物質を含む。さらに我々は、ＯＸＭ点滴注入が、絶食血漿グレリンを抑制するということを見出した。グレリンはヒトの食欲の強力な刺激物であり、血漿グレリンの食前の上昇が食事開始の引き金であると示唆されているので、これは重要な発見である。仮説によって拘束されずに、我々は、ＯＸＭによるグレリンの通常の食前の上昇の阻害が、ＯＸＭ点滴注入が食欲を低減する一つの機構であろうと考える。
【００５７】
本発明はさらに、ＯＸＭと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤との、組み合わせによる使用を提供する。他の薬剤は、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト受容体、または、ＰＹＹまたはそのアゴニスト、または他の物質であり、他の物質は、例えば、アミリン(amylin)、レプチン(leptin)、エクセンジン−４(exendin-4)、またはこれらのアゴニストなどの天然食物影響物質(naturally food influence substance)であるか、またはこれらから誘導される物質である。所望ならば、２つ以上の他の薬剤を、ＯＸＭと組み合わせて使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストを使用できる。（物質または「そのアゴニスト」への言及が、これらの物質と１つまたは複数のそれらのアゴニストとの混合物、また２つまたは３つ以上のアゴニストの混合物を含むことは、理解されるであろう）。
【００５８】
一実施態様において、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと共に使用できる。ＯＸＭは、作用の弓状部位を有しているように思われ、一方、ＧＬＰ−１は、脳幹を介して作用する。組み合わせでの二つの薬剤の使用は、相乗効果を与えることができる。
【００５９】
ＧＬＰ−１は、ＯＸＭと同様に、プレプログルカゴンの翻訳後の生成物であり、図２２を参照のこと。最初の翻訳後の生成物は、ＧＬＰ−１（１−３７）である。ヒトＧＬＰ−１（１−３７）は、以下のアミノ酸配列、SEQ ID NO: 4：
His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly、
SEQ ID NO: 4、
を有する。
【００６０】
さらなる修飾体(modifications)は、ＧＬＰ−１（１−３６） SEQ.ID.NO: 5、およびそのアミド、ＧＬＰ−１（１−３６）ＮＨ2； ＧＬＰ−１（７−３７） SEQ.ID.NO:6； およびＧＬＰ−１（７−３６） SEQ.ID.NO:7 およびそのアミン、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、これはＧＬＰ−１ペプチドのうちで最も生物学的に活性である、を与える。「ＧＬＰ−１」という用語はここでは、上に定義した任意のＧＬＰ−１ペプチド、特に、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドとしても知られる、を意味する。用語は、任意の動物起源、特にヒトペプチドのＧＬＰ−１ペプチドを含む。
【００６１】
ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１受容体に優先的に結合しＧＬＰ−１が行うのと同じ生物学的活性を刺激するペプチド、小さな分子、または化学的化合物である。一実施態様では、ＧＬＰ−１受容体に対するアゴニストは、ＧＬＰ−１と同じかそれより大きな親和性で受容体に結合する。別の実施態様では、アゴニストは、別の受容体に結合するのに比較して、ＧＬＰ−１受容体に選択的に結合する。エクセンジン−４は、アメリカドクトカゲ(Gila monster (Heloderma suspectum))の唾液腺から単離された３９アミノ酸ペプチド(Eng J et al J Biol Chem 267:7402-7405, 1992)であり、ＧＬＰ−１受容体におけるアゴニストの一例である。エクセンジン−４から誘導されＧＬＰ−１アゴニスト活性も有する分子は、ＧＬＰ−１アゴニストのさらなる例である。ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１関連ペプチドを含み、また、プレプログルカゴンのあるいはＧＬＰ−１ペプチドまたは関連ペプチドの天然または合成の酵素のまたは化学的な処理によって得られるペプチドを含む。
【００６２】
ＧＬＰ−１アゴニストであると記載される任意の化合物は、例えば上述のようにＧＬＰ−１アゴニスト活性に対する試験が行われＧＬＰ−１アゴニストとして機能すると見出された任意の化合物が可能なように、本発明において使用され得る。スクリーニングに使用するのに適した組換えＧＬＰ−１受容体は、ＷＯ９３／１９１７５に開示されている。多くのＧＬＰ−１アゴニストが、知られており、当業技術内に記載されている。ＧＬＰ−１アゴニストを開示する公開特許明細書の例としては、以下の、ＷＯ２００２／６７９１８、ＷＯ２００２／６６４７９、ＷＯ２００２／０３９７８、ＷＯ２００１／８９５５４、ＷＯ２００１／１４３８６、ＷＯ２００１／６６１３５、ＷＯ２００１／３５９８８、ＷＯ２００１／１４３６８、ＷＯ２００１／０４１５６、ＷＯ２０００／７８３３３、ＷＯ２０００／５９８８７、ＷＯ２０００／４２０２６、ＥＰ ０９５５３１４、およびＷＯ９９／４３７０７が挙げられる。ＧＬＰ−１アゴニストの例には、Arg34, Lys26(N-ε-(γ-Glu(N-α-ヘキサデカノイル)))-GLP-1 (7-37), IP7-GLP-1 (7-37)OH がある。
【００６３】
ＯＸＭと共にＰＹＹまたはそのアゴニストを使用するのが有利になり得る。ＰＹＹは、作用の持続時間を有し、例えば、末梢的に投与されると、それが循環血液から取り除かれた後も、例えば投与後２４時間まで作用し続ける。従って、ＰＹＹは、毎日２回の投与量で、または1回の投与量でさえ、投与すると効果的である。以下によって限定されずに、ＯＸＭは、長時間持続し得ない即時の効果を有するように思われる。ＯＸＭは、毎日数回、例えば食事の前に投与され得る。短時間作用性のＯＸＭとの長時間作用性のＰＹＹの使用は、使用者の必要に対する投与処方(regime)の「微調整」を可能とする。
【００６４】
ＰＹＹは、ポルコイン(porcoine)腸からもともと単離された３６−残基ペプチドアミドである(Tatemoto et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 79:2514, 1982)。ここで使用されるような用語は、任意の種から得られたまたは由来するＰＹＹを含む。従って、ＰＹＹは、以下の配列、SEQ ID NO: 8：
Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr、SEQ ID NO: 8、
を有する、ヒト(human)の全部の長さのポリペプチド、および、例えば、ネズミ(murine)、ハムスター(hamster)、ニワトリ(chicken)、ウシ亜科(bovine)、ラット(rat)、およびイヌ(dog)を含むＰＹＹの種の変形物(variations)、を含む。一実施態様においては、ＰＹＹアゴニストは、ＮＰＹを含まない。また、ここに使用されているようなＰＹＹという用語は、ＰＹＹ3-36を含む。ＰＹＹ3-36を使用するのが有利となり得る。ＰＹＹアゴニストは、ＰＹＹに特異的に結合する受容体に結合し、ＰＹＹの効果を誘発する、任意の化合物である。一実施態様では、ＰＹＹアゴニストは、食物摂取、カロリーの摂取、または食欲に影響を及ぼすこと、および、Ｙ受容体効力検定において特異的に結合するかあるいは標識化ＰＹＹとの競合結合効力検定などにおいてＰＹＹと結合しようと競合すること、の少なくとも一方を行う化合物である。ＰＹＹアゴニストは、限定される訳ではないが、Ｙ２受容体に結合する化合物を含む。
【００６５】
ＰＹＹアゴニスト、およびＰＹＹアゴニストとして使用され得る化合物は、当業技術内に開示されている。例えば、有用なＰＹＹアゴニストとして、米国特許第５，０２６，６８５号； 米国特許第５，５７４，０１０号； 米国特許第５，６０４，２０３号； 米国特許第５，６９６，０９３号； 米国特許第６，０４６，１６７号に記載されているようなＹ２特異的ＮＰＹペプチドアゴニストが考慮されている。上述したＯＸＭの変異物(variants)および修飾体(modifications)に類似したＰＹＹの変異物および神経ペプチドＹの変異物も使用され得る。
【００６６】
所望ならば、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストの両方とともに使用できる。
【００６７】
ＯＸＭ、およびＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストの任意の組み合わせの使用は、例えば上述したように、その単独での使用に比較して、これらの任意の薬剤の効果を高めるように機能し得る。代替としてまたは追加して、２つまたは３つの薬剤を組み合わせて使用することによって、薬剤を単独に使用したときのどのような「逸散(escape)」の傾向も低減される。「逸散」という用語は、時間の経過による薬剤の効果の低減を表すのに使用される。例えば、上述した薬剤のいずれか１つを単独で使用した場合は、その効果は、時間と共に低減し得る。それに加えて他の薬剤の一方または両方を使用することによって、このような効果の低減の傾向が、低減または防止され得る。例えば、ＰＹＹは、持続効果を有し、長期間使用できる。ＰＹＹの効果が、万一低減すると思われる場合、あるいはそのようなどのような効果の低減も低減または防止するために、ＰＹＹに加えてＯＸＭを投与できる。ＧＬＰ−１も、ＯＸＭと共に、またはＯＸＭおよびＰＹＹと共に、同じ目的で使用できる。
【００６８】
所望ならば、限定される訳ではないが、付加的な食欲抑制剤などの１つまたは複数の薬剤も投与できる。付加的な食欲抑制剤の特定の非限定的な例としては、アンフェプラモン（ジエチルプロピオン）、フェンテルミン、マジンドール、および、フェニルプロパノールアミン、フェンフルラミン、デキスフェンフルラミン、フルオキセチンが挙げられる。
【００６９】
他の薬剤と組み合わせて使用するとき、ＯＸＭは、他の薬剤と同時に、または実質的に同時に、あるいは、任意の順序で逐次に、投与され得る。ＯＸＭと他の薬剤とは、単一の製薬組成物で、または別々の組成物で投与でき、またそれらは、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。全ての活性薬剤を単一の組成物で投与するのが、一般により都合がよい。しかしながら、いくつかの場合には、異なる経路で活性剤を投与するのが必要または適切になり得る。例えば、ペプチドは、特別な方法で修飾あるいは処方しない限り、一般に経口投与では安定でなく、従って、一般に非経口経路を介して投与する必要がある。いくつかのアゴニスト、例えば、ＧＬＰ−１アゴニストは、経口投与するときに安定な化学的化合物である。ＯＸＭを非経口で、また他の成分を非経口経路によって投与するのが適切になり得る。
【００７０】
本発明の好ましい態様に従うと、治療効果量のＯＸＭまたはそのアゴニストが、治療効果量のＧＬＰ−１またはそのアゴニストとＰＹＹまたはそのアゴニストとの一方または両方と共に投与される。「ＧＬＰ−１／ＰＹＹ」という用語がここでは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストとの一方または両方を意味するのに使用される。
【００７１】
ＯＸＭまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、同時に、または実質的に同時に、あるいは、任意の順序で逐次に、投与され得る。ＯＸＭまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、単一の製薬組成物で、または別々の組成物で投与でき、またそれらは、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。
【００７２】
ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとが、単一の製薬組成物で投与されることになる場合は、この組成物は、ＯＸＭまたはそのアゴニストに対して上述した任意の組成物とすることができる。組成物は、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとの同時のまたは実質的に同時の投与を可能とし得る。所望ならば、ＯＸＭと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、組成物内において、例えば、タブレットの別々の層、または、カプセル内の別々の顆粒に区分することができる。所望ならば、そのような区分は、組成物に異なる放出特性を与えて、ＯＸＭ成分と、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとの供給を異なる時間に、例えば逐次的に可能とするように、設計することができる。
【００７３】
代替として、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、別々の製薬組成物、例えば、ＯＸＭまたはそのアゴニストに対して上述した任意の製薬組成物で処方できる。このような別々の組成物は、同時に、または実質的に同時に投与でき、あるいは、それらは、任意の順序で逐次に投与できる。例えば、ＰＹＹは、毎日２回、または１回ですら投与でき、ＯＸＭは、例えば食事前に毎日数回まで投与される。
【００７４】
別々に投与する場合は、逐次であろうと、同時（または実質的に同時）であろうと、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、例えば上述したように、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。
【００７５】
上述したように組み合わせ療法で使用するとき、ＯＸＭは、単独で使用するとき末梢投与に関連して上に開示したような投与量で使用できる、すなわち、ＯＸＭは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から１２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上下の範囲の任意の組み合わせ内にある。
【００７６】
ＧＬＰ−１またはそのアゴニストは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．４ｎｍｏｌ以上、例えば０．６ｎｍｏｌ以上、例えば０．８ｎｍｏｌ以上、例えば１．０ｎｍｏｌ以上、例えば１．２ｎｍｏｌ以上、例えば１．４ｎｍｏｌ以上、例えば１．６ｎｍｏｌ以上、例えば１．８ｎｍｏｌ以上、例えば２．０ｎｍｏｌ以上、例えば２．２ｎｍｏｌ以上、例えば２．４ｎｍｏｌ以上、例えば２．６ｎｍｏｌ以上、例えば２．８ｎｍｏｌ、例えば３．０ｎｍｏｌ以上、例えば３．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり３．０ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、２．８ｎｍｏｌ以下、例えば２．６ｎｍｏｌ以下、例えば２．４ｎｍｏｌ以下、例えば２．２ｎｍｏｌ以下、例えば２．０ｎｍｏｌ以下、例えば１．８ｎｍｏｌ以下、例えば１．４ｎｍｏｌ以下、例えば１．２ｎｍｏｌ以下、例えば１．０ｎｍｏｌ以下、例えば０．８ｎｍｏｌ以下、例えば０．６ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から３．２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上部および下部の範囲の任意の組み合わせ内にある。
【００７７】
ＰＹＹまたはそのアゴニストは、ＧＬＰ−１に対して上に開示した範囲内の投与量で使用できる。さまざまな薬剤の投与量は、互いに独立し得るものであり、例えば、等モル投与量を使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストとの等モル投与量を使用できる。投与量は、個別の基準で、または、たいてい７０または７５ｋｇ対象である典型的な対象を基準として計算できる。
【００７８】
本発明のさらなる実施態様は、オキシントモジュリンと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤とを、製薬上適した担体との混合または組み合わせで、含む製薬組成物である。薬剤は、上に定義したようなものであり、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹそのアゴニストとの一方または両方である。組成物は、例えば、ＯＸＭ製薬組成物に対して上述したようなものとすることができる。ＯＸＭおよび他の薬剤の投与量は、例えば、上述したようなものである。
【００７９】
末梢投与のための単位剤形での製薬製剤は、上に与えられた１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されたＯＸＭの量を含む。一般に、投与量は、７５ｋｇ対象を基準として計算され得る。例えば皮下投与のための組成物は、７５ｋｇ対象を基準として計算された、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの単位投与量を含むことができる。
【００８０】
本発明はまた、上に開示したいずれかの方法に従う対象の治療のための医薬の製造におけるＯＸＭの使用を提供する。
【００８１】
ＯＸＭと、食物摂取を低減する別の薬剤、例えば、ＰＹＹまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方とが、ここで説明するような治療における使用のための医薬の製造に使用されるとき、医薬は、上述したように全ての成分を含む単一の製薬組成物とすることができ、または、１つの成分が、ＯＸＭを含む製薬組成物であり、残りの１つまたは複数の成分のそれぞれが、食物摂取を低減する他の１つまたは複数の薬剤を含む製薬組成物である、二成分または複数成分医薬とすることができるが、これについては上記を参照のこと。
【００８２】
医薬は、一成分医薬であろうと、二成分または複数成分医薬であろうと、一般に、その使用に関連する使用説明書と共に梱包されることになる。そのような使用説明書は、１つまたは複数の組成物の投与の時間、投与量、および経路について言及するものである。
【００８３】
他の薬剤と組み合わせて使用するときＯＸＭに関連する方法および組成物に関連する上記の好ましい特徴が、上述したような医薬の製造におけるその使用にもあてはまる。
【００８４】
本発明の全ての実施態様において、これらのための特定の投与量の型(regime)は、最終的には主治医によって決定されるものであるとともに、使用されるＯＸＭ、動物の種類、年齢、体重、症状の度合いおよび適用される治療の度合いの少なくとも一方、医薬の投与の方法、有害な反応および反対の徴候の少なくとも一方、などといった因子を考慮するものである。具体的に規定された投与量の範囲は、標準的に設計された臨床試験(clinical trials)によって決定でき、患者の進行および回復は、十分にモニタされる。
【００８５】
このような試験は、ヒトにおける初期投与量として動物における最大許容投与量の低いパーセンテージを用いる次第に増加する投与量設計を利用し得る。適切な投与量の例は、上に与えられる。
【００８６】
本発明の各態様の好ましい特徴は、必要な変更を加えて、他の態様のそれぞれと同様である。
【００８７】
本発明は、ここで以下の非限定的な実施例において単に一例として説明される。
【００８８】
実施例：
実施例１
ＯＸＭは、ＩＣＶおよびｉＰＶＮの両方で注入されたとき、絶食誘発再摂食において大幅な低減を引き起こす。
【００８９】
ペプチドおよび化学薬品：
ＧＬＰ−１、グリセンチン、グルカゴン、およびＳＰ−１は、Peninsula Laboratories, Inc. (St. Helens, UK)から購入した。ＯＸＭは、IAF BioChem Pharma (Laval, Canada)から購入した。エクセンジン−４(exendin-4)およびエクセンジン−（９−３９）は、Medical Research Council, Hemostasis Unit, Clinical Sciences Center, Hammersmith Hospital, London, UK において、３９６ＭＰＳペプチド合成装置(396 MPS peptide synthesiser) (Advanced ChemTech, Inc.)にＦ−ｍｏｃ化学(F-moc chemistry)を用いて合成され、Ｃ8カラム(Phenomex, Macclesfield, UK)上の逆相ＨＰＬＣにより精製された。正確な分子量は、質量分析法により確認された。全ての化学薬品は、特に言及しない限り、Merck & Co. (Lutterworth, Leicester, UK)から購入した。
【００９０】
動物：
大人のオスのウィスターラット(Wistar rats)(ICSM, Hammersmith Hospital)が、個々のケージ内において温度（２１−２３℃）および光（１２ｈの光、１２ｈの闇）の制御条件下で、食物(RM1 飼料(diet), Special Diet Services UK Ltd., Witham, UK)および水道水への随意(ad libitum)アクセスと共に維持された。動物は、手術からの回復後、研究の完了まで、毎日取り扱われた。実施した全ての動物の処置は、British Home Office Animals (Scientific Procedures Act 1986 (Project License PIL 90/1077)によって承認された。
【００９１】
ＩＣＶおよびｉＰＶＮカニューレ挿入および試験化合物の点滴注入(infusions)：
動物は、永久ステンレス鋼ガイドカニューレ(Plastics One, Roanoke, VA)定位固定埋め込み(stereotactically implanted)ＩＣＶ（脳室内的に(intracerebraventricularly)）またはｉＰＶＮ（視床下部室傍核内へ(into the hypothalamic paraventricular nucleus)）を有した。全ての研究は、２４ｈ絶食後、０９００−１１００ｈの間、初期明相(light phase)において実行され、食物摂取は、注入後１、２、４、８、および２４ｈにおいて測定された。
【００９２】
摂食研究プロトコル：
プログルカゴン誘導生成物および関連ペプチドの食物摂取に対する影響の比較。
【００９３】
研究１ａにおいては、ラットは、１０μｌ食塩水(saline)、ＧＬＰ−１（１３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、グルカゴン（３ｎｍｏｌ）、またはグリセンチン（３ｎｍｏｌ；ｎ＝８／群）がＩＣＶで注入された。
【００９４】
全ての研究においては、以下の配列、SEQ ID NO: 1：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
Arg Asn Lys Asn Asn Ile Ala SEQ ID NO: 1、
を有する、ヒト(human)ＯＸＭが使用された。
【００９５】
以下の配列、SEQ ID NO: 7：
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys
Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg、
SEQ ID NO: 7、
を有する、ヒト（human）ＧＬＰ−１が使用された。
【００９６】
研究１ｂにおいては、ラットは、１μ食塩水、ＧＬＰ−１（１．０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１．０ｎｍｏｌ）、グリセンチン（１．０ｎｍｏｌ）、グルカゴン（１．０ｎｍｏｌ）、またはＳＰ−１（３．０ｎｍｏｌ；ｎ＝１２−１５／群）がｉＰＶＮで注入された。エクセンジン−４は、ＩＣＶで注入されるとき、ＧＬＰ−１より強力に食物摂取を阻害する。従って、エクセンジン−４は、０．０３ｎｍｏｌの投与量においてｉＰＶＮで注入された。
【００９７】
ＯＸＭの増加する投与量の食物摂取に対する影響の調査：
研究２ａにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、またはＯＸＭ（０．３、１、３、または１０ｎｍｏｌ；ｎ＝８／群）がＩＣＶで注入された。研究２ｂにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（１．０ｎｍｏｌ）、またはＯＸＭ（０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌ；ｎ―１２−１５／群）がｉＰＶＮで注入された。ＯＸＭがＧＬＰ−１受容体を介して作用するか評価するために、ＧＬＰ−１受容体アンタゴニストエクセンジン−（９−３９）を用いた研究が行われた。
【００９８】
夜時間摂食および行動分析：
研究３． ＯＸＭが、非特異的な味覚嫌悪を介して食物摂取を阻害すること、および、それが、真の飽満因子でないこと、は可能性がある。従って、ＩＣＶカニューレが挿入されたラットは、暗相(dark phase)の開始(onset)において、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、または食塩水（ｎ＝６／群）を投与された。食物摂取は、注入後１ｈにおいて測定され（研究３ａ）、行動が評価された（研究３ｂ）。ラットは、行動得点記入表(score sheet)を用いて注入後１ｈに観察された。
【００９９】
研究４ａにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）のみ、がＩＣＶで注入された。研究４ｂにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ；ｎ＝１０−１２／群）のみ、がｉＰＶＮ注入された。
【０１００】
受容体結合アッセイ：研究５．
受容体結合アッセイが、最終体積の０．５ｍｌのラット視床下部膜（２００μｇタンパク質）、５００Ｂｑ（１００ｐＭ）［125Ｉ］ＧＬＰ−１、および指定されたような非標識競合ペプチド（ＧＬＰ−１およびＯＸＭ）の中において実行された。膜は、室温で９０分間培養された。結合および遊離放射能が、遠心分離（２分間、４℃）によって分離された。ペレット化された膜は、アッセイ緩衝液（０．５ｍｌ、氷冷(ice-cold)）で洗浄され、膜は、上述したように遠心分離された。上澄みは除去され、ペレット内の放射能が、γ線計数器を用いて計数された。特異的（飽和できる）結合が、１μｍＧＬＰ−１またはＯＸＭの存在（飽和できない結合）と不存在(結合全体)の中に結合された［125Ｉ］ＧＬＰ−１の量との間の差として計算された。全ての曲線は、三重(in triplicate)の点を用いて構成された。ＩＣ50値は、プリズム３プログラム(Prism 3 program)(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)を用いて計算された。
【０１０１】
統計：
食物摂取分析では、データは、平均±ＳＥＭとして表示される。実験群の間の統計差は、ＡＮＯＶＡによって、続いて、事後最小有意差検定(post-hoc least significant difference test)(Systat8. 0, Evanston, IL)によって決定された。行動分析では、データは、範囲と各行動の出現の中央値(median)数として表示される。群間の比較は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定(Mann-Whitney U test)(Systat 8.0)を用いて行われた。全ての場合に、Ｐ＜０．０５が、統計的に有意であると見なされた。
【０１０２】
結果：
プログルカゴン誘導生成物および関連ペプチドの食物摂取に対する影響の比較。
【０１０３】
ＩＣＶ投与．
研究１ａにおいては、ＯＸＭおよびＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）は、再 摂食を有意に低減した。この食物摂取の阻害は、注入後４ｈまで持続した（図１Ａ）。グルカゴンおよびグリセンチン（３ｎｍｏｌ）は、どの時点でも食物摂取に影響しなかった（図１Ａ）。
【０１０４】
ｉＰＶＮ投与．
研究１ｂにおいては、ＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、およびエクセンジン−４（０．０３ｎｍｏｌ）も、ｉＰＶＮで投与されたときは、再摂食を阻害した。この阻害は、ＩＣＶで注入されたときより長く注入後少なくとも８ｈ持続した（図１Ｂ）。グリセンチン、グルカゴン（１ｎｍｏｌ）、およびＳＰ−１（３ｎｍｏｌ）は、ｉＰＶＮで注入されたときは、どの時点でも食物摂取に影響しなかった。
【０１０５】
ＯＸＭの増加する投与量の食物摂取に対する影響。
【０１０６】
ＩＣＶ投与．
研究２ａにおいては、ＩＣＶで注入されたときは、ＯＸＭは、投与量に依存した仕方で再摂食を低減し、注入後１、２、および４ｈにおいて，３ｎｍｏｌの投与量で最大効果に到達した（図２Ａ）。
【０１０７】
ｉＰＶＮ投与．
研究２ｂにおいては、食物摂取は、ｉＰＶＮで注入されたＧＬＰ−１およびＯＸＭ（両方とも１ｎｍｏｌ）によって、注入後８ｈまで有意に低減された（図２Ｂ）。
【０１０８】
暗相の開始におけるＩＣＶカニューレ挿入満腹(sated)ラットにおけるＯＸＭの影響：
暗相は、ラットの自然な摂食時間である。従って、このような時間において非絶食動物における推定飽満(putative satiety)因子の影響を評価することは、より生理的な影響を表すであろう。
【０１０９】
ＯＸＭの食物摂取に対する影響．
研究３ａにおいては、初期暗相において注入されるとき、ＧＬＰ−１およびＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）の両方とも、注入後１ｈにおいて食塩水処置動物の食物摂取に比較して有意に食物摂取を低減した［図３Ａ］。
【０１１０】
ＯＸＭのＩＣＶ注入後の行動の観察．
初期暗相におけるＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）のＩＣＶ投与は、摂食エピソード(episodes)（研究３ａ）における有意な低減、および、後ろ足で立つ(rearing)行動の増加（研究３ｂ）となった［図３Ｂ］。毛づくろい(grooming)、静止(still)、項垂れ(head down)、穴掘り(burrowing)、または移動(locomotion)エピソードには変化はなかった。
【０１１１】
ＯＸＭがＧＬＰ−１Ｒを介して作用するか評価するために、ＧＬＰ−１Ｒアンタゴニスト、エクセンジン−（９−３９）を用いる研究が行われた。
【０１１２】
ＩＣＶ投与．研究４．
ＧＬＰ−１受容体アンタゴニストエクセンジン−（９−３９）のＧＬＰ−１との１０：１（アンタゴニスト／アゴニスト）の割合でのＩＣＶ共投与(coadministration)は、ＧＬＰ−１の食欲抑制効果を阻害した［図４Ａ］。さらに、エクセンジン−（９−３９）のＯＸＭとの共投与は、ＯＸＭの食欲抑制効果の減衰となった［図４Ａ］。
【０１１３】
ｉＰＶＮ投与．
同様に、ｉＰＶＮで投与されたときは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭの両方の食欲抑制効果は、エクセンジン−（９−３９）と共注入(coinjected)されるときに阻害される［図４Ｂ］。
【０１１４】
受容体結合アッセイ．研究５．
ラット視床下部膜組織標本(preparations)内におけるＧＬＰ−１のＧＬＰ受容体に対する親和性（ＩＣ50）は、０．１６ｎＭであった（図５）。同じ膜組織標本内におけるＯＸＭのＧＬＰ−１受容体に対する親和性は、８．２ｎＭであった（図５）が、これは、ＧＬＰ−１の親和性よりほぼ２桁弱い大きさである。
【０１１５】
検討．
ＯＸＭは、ＩＣＶおよびｉＰＶＮの両方で注入されるとき、絶食誘発再摂食の大幅な低下を引き起こす。この効果は、注入後８ｈまで（ｉＰＶＮ）または４ｈまで（ＩＣＶ）持続された。ＯＸＭの効果は、等モル投与量においてＩＣＶおよびｉＰＶＮで投与されるとき、ＧＬＰ−１の効果とほぼ同じ大きさおよび時間経過である。さらに、ＯＸＭは、暗相の開始における非絶食ラットにおける食物摂取を阻害し、この時、これらのラットは、嫌悪行動の徴候を示さなかった。
【０１１６】
胃粘膜内にはＯＸＭ特異的結合部位(site)があることが示唆された。しかしながら、そのような結合部位は、ＣＮＳ内では同定されなかった。従って、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭが摂食研究において類似の強さを有するので、視床下部ＧＬＰ−ＩＲを介してその効果を媒介することが、提案された。ＯＸＭは、ＧＬＰ−ＩＲに対するナノモル親和性（ＩＣ50＝８．２ｎＭ）を有することが示された。この親和性は、ＧＬＰ−１の親和性（ＩＣ50＝０．１６ｎＭ）よりほぼ２桁弱い大きさである。しかもなお、ＧＬＰ−１Ｒに対するこの低減された親和性にもかかわらず、ＯＸＭは、同じ大きさまで食物摂取を低減する。これに対する１つの説明は、ＯＸＭが、視床下部内のＧＬＰ−１Ｒおよびそれ自体の受容体の両方を通して作用し得るであろうということである。従って、ＯＸＭは、ＧＬＰ−ＩＲに対するそのより低い親和性にもかかわらず、ＧＬＰ−１の応答に匹敵する応答を顕在化し得るのであろう。
【０１１７】
エクセンジン−（９−３９）、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストエクセンジン−４の断片(fragment)は、ＧＬＰ−１Ｒにおける強力で選択的なアンタゴニストである。ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）が共注入されるとき、ＧＬＰ−１の食欲抑制作用は、阻害される。ＯＸＭがエクセンジン−（９−３９）と共注入されるとき、ＯＸＭの食欲抑制効果も完全に阻害される。これは、ＯＸＭがＧＬＰ−１Ｒを介してその効果を媒介するという主張に説得力を加えるものであろう。
【０１１８】
我々は、絶食ラットにおける急性ＩＣＶ注入後のグリセンチンおよびグルカゴンの影響を調べた。これらのペプチドの投与後に、絶食誘発食物摂取に対する影響は、見られなかった。さらに、これらのペプチドが、ｉＰＶＮで投与されたときに、これらのペプチドの影響はなかった。ＳＰ−１、ＯＸＭの推定最小活性構造、がｉＰＶＮで注入されたとき、食物摂取の阻害は観察されなかった。従って、ＯＸＭに見られる効果は、特異的である。
【０１１９】
実施例２
ＯＸＭの末梢投与も、食物摂取および体重増加を低減する。
【０１２０】
ペプチドおよび化学薬品：
ＯＸＭは、IAF BioChem Pharma (Laval, Canada)から購入した。ＧＬＰ−１は、Peninsula Laboratories Inc. (St. Helens, UK)から購入した。エクセンジン（９−３９）は、Medical Research Council, Hemostasis Unit, Clinical Sciences Centre, Hammersmith Hospital, London, UK において、３９６ＭＰＳペプチド合成装置(396 MPS peptide synthesizer) (Advanced ChemTech Inc., Louisville, KY)にＦ−ｍｏｃ化学(F-moc chemistry)を用いて合成され、０．１％トリフルオロ酢酸上へのアセトニトリルの勾配(gradient)を用いてＣ8カラム(Phenomex, Macclesfield, UK)上の逆相ＨＰＬＣにより精製された。正確な分子量は、質量分析法により確認された。全ての化学薬品は、特に言及しない限り、Merck Eurolab Ltd. (Lutterworth, Leicestershire, UK)から購入した。
【０１２１】
動物：
大人のオスのウィスターラット（１８０−２００ｇ）が、個々のケージ内において温度（２１−２３℃）および光（１２ｈの光、１２ｈの闇）の制御条件下で、標準ラット食餌(standard rat chow)(RM1 飼料(diet), Special Diet Services UK Ltd., Witham, Essex, UK)および水への随意アクセスと共に維持された。実施した全ての動物の処置は、British Home Office Animals (Scientific Procedures) Act 1986 (Project Licenses PPL: 90/1077,70/5281 and 70/5516)によって承認された。
【０１２２】
弓状核内カニューレ挿入：
動物は、ブレグマ(bregma)に対して３．３ｍｍ後方かつ０．３ｍｍ側方であって頭蓋の外側表面の９．０ｍｍ下方に位置するカニューレを使用するカニューレ挿入プロトコルを用いて、視床下部の弓状核内へ定位固定埋め込みされた永久留置(indwelling)一側性(unilateral)ステンレス鋼ガイドカニューレ(Plastics One, Roanoke, VA)を有した。
【０１２３】
腹膜内（ＩＰ）注入：
全てのＩＰ注入は、１ｍｌ注射器および２５ゲージ(gauge)針を用いて供給された。注入の最大体積は、５００μｌであり、個々の動物の体重に従って調節された。全てのペプチドは、食塩水に溶解した。
【０１２４】
これらの研究においては、上の第１５および１６頁において与えられる配列を有するヒトＯＸＭおよびヒトＧＬＰ−１が、使用された。
【０１２５】
生体内(in vivo)プロトコル：
１．ＯＸＭの末梢投与の、絶食動物における食物摂取に対する投与量応答影響の調査：
動物は、研究の前に２４時間絶食させた。初期明相(light phase)の間（０９．００−１０．００ｈｒ）に、ラットには、５００μｌの体積で、食塩水、ＧＬＰ−１（陽性の対照として、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）、またはＯＸＭ（１０−３００ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）（ｎ＝１２毎群）の単一ＩＰ注入が与えられた。注入後、動物は、それらの元(home)のケージに戻され、前もって重量測定された量の食餌が与えられた。食物摂取は、注入後１、２、４、８、および２４時間において測定された。
【０１２６】
２．ＯＸＭの末梢投与の、暗相中の非絶食動物における食物摂取に対する影響の調査：
暗相は、ラットにとって「通常(normal)」の摂食時間である。従って、この時間における食物摂食のどのような阻害も、絶食後の再摂食に対する変化よりも生理的であると見なすことができた。動物は、消灯(lights out)前（１８．００−１９．００ｈｒ）に、食塩水、またはＯＸＭ（３−１００ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）（ｎ＝１２毎群）の単一ＩＰ注入を受けた。食物摂取は、消灯後１、２、４、８、および１２時間において測定された。
【０１２７】
３．ＯＸＭの繰り返しＩＰ注入の影響：
４５匹の動物たちは、体重により無作為に次の３つの群（ｎ＝１５毎群）：１）食塩水処置で、食物への随意アクセスの群、２）ＯＸＭ処置（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重毎注入−投与量は前の投与量応答実験に基づく）で、食物への随意アクセスの群、３）食塩水処置であるが、食物は、ＯＸＭ処置群の平均明および暗相食物摂取に制限した群、に分けた。動物は、７日間、毎日２回（０７．００および１８．００ｈｒ）、注入された。食物摂取（ｇ）、体重（ｇ）、および水摂取（ｍｌ）が、毎日測定された。８日目に、動物は、断頭により殺された。精巣上体白色脂肪組織(epididymal white adipose tissue)（ＷＡＴ）および肩甲骨間褐色脂肪組織(interscapular brown adipose tissue)（ＢＡＴ）が、除去され、体脂肪過多症の評価として重量測定された。
【０１２８】
４．ＯＸＭの末梢投与の、胃内容排出(gastric emptying)に対する影響の調査：
動物は、胃を確実に空にするように３６時間絶食させた。初期明相の間（０９：００−１０：００）に、前もって重量測定された量の標準ラット食餌が３０分間許可された。この後、食物は、除去され、再び重量測定された。次に、動物は、食塩水、ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）、またはＣＣＫ−８（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）が、ＩＰ注入された。次に、ラットは、前の摂食研究において用いたのと同じ時間：摂食後１、２、４、または８時間、において殺された（ｎ＝１２毎群毎時点）。ＣＣＫ−８群は、２時間の時点のみにおける実験のための陽性の対照として使用された。動物は、二酸化炭素窒息により殺された。開腹が迅速に行われ、胃が露出された。幽門接合部(pyloric junction)が、結紮され(2.0 Mersilk, Johnson & Johnson, Belgium)、次に、胃−食道接合部(gastro-oesophogeal junction)の結紮が続き、胃が除去された。次に、胃内容物が、除去され、前もって重量測定された計量用舟形容器に置かれ、４８時間の空気乾燥に掛けられた。乾燥した後、内容物は、重量測定され、次に、ラット毎に胃内に残留する半時間再摂食時間中に消化された食餌のパーセンテージが、以下の式：
％胃内残留食物＝（胃内容物の乾燥重量／消化された食物の重量）×１００、
を用いて計算された。
【０１２９】
５．弓状内ＯＸＭの増加する投与量の影響の調査：
弓状内（ＡＲＣ内(Intra-ARC)(iARC)）カニューレ挿入ラット（ｎ＝１２−１５毎群）が、重量により無作為に６つの群に分けられた。初期明相の間（０９００−１０００）に、２４時間絶食ラットが、食塩水、ＯＸＭ（０．０１、０．０３、０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌｅｓ）のｉＡＲＣ注入を受けた。食物摂取が、注入後１、２、４、８、および２４時間において測定された。
【０１３０】
６．末梢的に投与されたＯＸＭが直接、弓状核ＧＬＰ−１受容体を介して作用するかの調査：
弓状核内へカニューレ挿入されたラットが、無作為に６つの群（ｎ＝１０−１２毎群）に分けられた。初期明相の間（０９００−１０００）に、２４時間絶食ラットが、食塩水、またはエクセンジン9-39（５ｎｍｏｌｅｓ）のｉＡＲＣ注入を受け、その後、１５分間後に、食塩水、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇ体重）、またはＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇ毎体重）のＩＰ注入を受けた。注入の詳細は、以下の表１に記載される。
【０１３１】
【表１】
【０１３２】
免疫組織化学(immunohistochemistry)：
ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ注入９０分間後に、ラットは、末期的に麻酔(terminally anaesthetized)され、０．１Ｍリン酸塩緩衝食塩水(phosphate buffered saline)（ＰＢＳ）、次に、４％ＰＢ−ホルマリン（ＰＢＦ）が、心臓を通して灌流(transcardially perfused)された。脳は、除去され、ＰＢＦ内で一夜、後固定(post-fixed)され、次に、一夜、ＰＢ−スクロース（２０％ｗ／ｖ）に移された。脳および脳幹の４０μｍ冠状切片が、凍結ミクロトーム上で切断され、アビチン−ビオチン−ペルオキシダーゼ法(avitin-biotin-peroxidase method)によりｆｏｓ様(fos-like)免疫反応性（ＦＬＩ）に対して染色された。次に、切片は、ポリ−Ｌ−リシン被覆スライドガラスに載せられ、増加する濃度のエタノール（５０−１００％）中で脱水され、キシレン中で脱脂(delipidated)され、ＤＰＸ試料接着物質(mountant)を用いてカバーガラスで覆った。スライドガラスは、光学顕微鏡(Nikon Eclipse E-800)を用いてＦＬＩ陽性核が検査され、画像が、顕微画像装置(microimager)(Xillix Microlmager)を用いて撮影された。視床下部および脳幹内のＦＬＩ陽性核の数は、実験群に対しては予備知識のない(blinded)研究チームとは独立したメンバーにより計数された。切片毎のＦＬＩ陽性核平均数が、計算され、各動物に対して整数で表示された。
【０１３３】
視床下部外植片静止培養(hypothalamic explant static incubation)：
静止培養システムが使用された。オスのウィスターラットが、断頭により殺され、脳全体が直ちに除去された。脳は、腹面(ventral surface)を最も上にして載せられ、振動ミクロトーム(Microfield Scientific Ltd. , Dartmouth, UK)内に置かれた。１．７ｍｍの薄片が、基底(basal)視床下部から取られ、ウィルス環(Circle of Willis)に対して側方に閉塞されて、９５％Ｏ2および５％ＣＯ2と平衡に保たれた１ｍｌの人工脳脊髄液を含む室(chambers)内で培養された。視床下部薄片は、内側視索前野(medial pre-optic area)、ＰＶＮ(室傍視床下部核(paraventricular hypothalamic nucleus))、背内側核(dorsomedial nucleus)、腹内側核(ventromedial nucleus)、外側視床下部(lateral hypothalamus)、およびＡＲＣを含む。管は、３７℃に維持された水浴中の乗せ台(platform)上に置かれた。最初の２時間の平衡時間後に、各外植片は、試験時間に掛けられる前に、６００μｌのａＣＳＦ内で４５分間（基底時間）、培養された。ＯＸＭ、１００ｎＭが、ＧＬＰ−１受容体に対するそのＩＣ50の濃度の１０倍の濃度を表す投与量として使用された。組織の生存率は、５６ｍＭ ＫＣｌを含有するａＣＳＦへの最後の４５分間の曝露によって確認された。各実験時間の最後においては、ａＣＳＦは、除去され、ラジオイムノアッセイによるαＭＳＨ免疫反応性の測定まで、−２０℃において貯蔵された。
【０１３４】
αＭＳＨ−ＩＲを測定するためのラジオイムノアッセイ：
αＭＳＨは、Chemicon International Inc.からの抗体を使用して発現された組織内(in-house)ラジオイムノアッセイを用いて測定された。
【０１３５】
統計分析：
ＩＰおよびｉＡＲＣ摂食研究からのデータは、事後ＬＳＤ（最小有意差）検定を用いるＡＮＯＶＡにより分析された。異なる処置群からの脂肪体(fat pad)重量が、不対(unpaired)ｔ検定を用いて分析された。視床下部外植片培養研究からのデータは、各外植片がそれ自体の基底時間と比較され、対(paired)ｔ検定により分析された。全ての場合に、Ｐ＜０．０５が、統計的に有意であると見なされた。
【０１３６】
結果：
１．絶食動物におけるＯＸＭの末梢投与の影響：
ＯＸＭ（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、および３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）の腹膜内投与は、食塩水対照と比較して、注入後１時間における２４時間絶食動物の再摂食において有意な阻害を引き起こした（１時間：食塩水、６．３±０．２ｇに対して、ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ、５．４±０．２ｇ（Ｐ＜０．０５）、３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、４．５±０．２ｇ（Ｐ＜０．０５））。１００ｎｍｏｌ／ｋｇにより引き起こされた食物摂取の低減は、注入後８時間まで持続された。しかしながら、ＯＸＭの最大投与量（３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）は、注入後２４時間、食物摂取を有意に阻害し続けた（８時間：食塩水、１７．５±０．７ｇに対して、ＯＸＭ、３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、９．５±０．６ｇ；Ｐ＜０．０５）（図６ａ）。３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１０ｎｍｏｌ／ｋｇは、調査されたどの時点でも食物摂取を変化させなかった。
【０１３７】
２．ＯＸＭの末梢投与の、非絶食動物における暗相中の食物摂取に対する影響：
ＯＸＭ、３および１０ｎｍｏｌ／ｋｇは、調査されたどの時点でも、暗相の直前に注入された夜間摂食(nocturnally feeding)ラットにおいて食物摂取に影響しなかった。しかしながら、ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇは、注入後２時間まで食物摂取を有意に阻害した（２時間：食塩水、５．８±０．４ｇに対して、ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、４．５±０．４ｇ；Ｐ＜０．０５）。食物摂取は、注入後４時間、低減されたが、これは、有意ではなかった。ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇは、暗相の全体を通して食物摂取を有意に阻害した（８時間：食塩水、１６．９±０．５ｇに対して、ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、１４．１±０．８ｇ；Ｐ＜０．０５）（図６ｂ）。
【０１３８】
３．ＯＸＭの繰り返しＩＰ投与の影響：
ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）の７日間、毎日２回のＩＰ注入は、食塩処置対照動物に比較して、累積日毎(cumulative daily)の食物摂取における有意な低減を引き起こした（累積食物摂取７日目：食塩水、１８０±４．３ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、１６８±４．６ｇ；Ｐ＜０．０１）（図７ａ）。さらに、ＯＸＭ処置動物は、食塩水対照よりゆっくりと有意に体重が増加した（累積体重増加７日目：食塩水、３７．６±１．９ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、２１．０±１．５ｇ；Ｐ＜０．００５）。また、食物制限「対飼育(pair fed)」動物は、同じ食物摂取を受けているにもかかわらず、ＯＸＭ処置動物ほどゆっくりとは体重が増加しなかった（７日目：対飼育、３３．５±２．０ｇ；食塩水（随意摂食）に対して、Ｐ＝ＮＳ、ＯＸＭに対して、Ｐ＜０．０５）（図７ｂ）。さらに、長期に亘るＯＸＭは、食塩水注入対飼育動物には見られない、脂肪過多症の低減を引き起こした（表２）。水摂取は、実験の１日目および２日目でＯＸＭ処置動物において有意に低減した（１日目：食塩水、２８．１±１．３３ｍｌに対して、ＯＸＭ、２４．１±１．２８ｍｌ；Ｐ＜０．０５）。その後の日々においては、食塩水処置動物に比較して毎日の水摂取に増加はなかった（３−６日目）。しかしながら、７日目まで、食塩水およびＯＸＭ処置群の間には水摂取に差はなかった（図示せず）。「対飼育(pair fed)」ラットとＯＸＭ処置ラットとの間の体重差は、２つの群が同じ量の食物を食べているので、増加したエネルギー消費に起因する。
【０１３９】
【表２】
【０１４０】
表２は、７日間、毎日２回の食塩水またはＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与の、食物制限および随意摂食ラットにおける、精巣上体ＷＡＴおよび肩甲骨間ＢＡＴの重量に対する影響。
【０１４１】
４．ＯＸＭの食欲抑制効果に対する遅延(delayed)胃内容排出の役割：
食物が３６時間絶食させたラットに与えられた１時間後では、ＧＬＰ−１処置動物の胃の内容物の乾燥重量（３０分間の摂食時間中に消費された食物のパーセンテージとして）は、食塩水処置動物のものより有意に大きかった（１時間：食塩水、６５．８±１．６ｇに対して、ＧＬＰ−１、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、７６．９±２．７ｇ；Ｐ＜０．０１）が、これは、ＧＬＰ−１が胃内容排出において有意な低減を引き起こしたことを示唆する。ＯＸＭ処置動物の胃の内容物は、食塩水処置対照のものより多量であったが、これは、統計的に有意ではなかった（１時間：食塩水 ６５．８±１．６ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、７２．０±１．４ｇ；Ｐ＝０．０７）。摂食後２時間では、ＯＸＭは、食塩水処置動物に比較して、胃の内容物に影響しなかった。しかしながら、この時点での陽性の対照、ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）が注入された動物は、有意により多量の胃内容物を有していた（２時間：食塩水、３８．５ｇに対して、ＣＣＫ、１５ｎｍｏｌ／ｋｇ、６４．７±６．４ｇ；Ｐ＜０．０１）が、これは、ＣＣＫが、胃内容排出の速度において有意な低減を引き起こしたことを示唆する。摂食後４または８時間においては、食塩水処置動物に比較して、胃の内容物に対するＯＸＭの影響はなかった（図８）。
【０１４２】
５．弓状核内注入ＯＸＭの増加する投与量の影響の調査：
食物摂取は、２４時間絶食後の再摂食の１時間目の間に、ｉＡＲＣで投与されたＯＸＭの全ての投与量（０．０１ｎｍｏｌｅｓを除く）によって有意に阻害された（１時間：全て、食塩水、７．７±０．２ｇに対して、ＯＸＭ ０．０３ｎｍｏｌｅｓ、６．１±０．５ｇ（Ｐ＜０．０５）；０．１ｎｍｏｌｅｓ、５．６±０．４ｇ（Ｐ＜０．０５）；０．３ｎｍｏｌｅｓ、５．１±０．６ｇ（Ｐ＜０．０１）；１．０ｎｍｏｌｅ、３．６±０．５ｇ（Ｐ＜０．００５））（図９）。ＯＸＭ０．３および１．０ｎｍｏｌｅｓは、注入後８時間まで食物摂食を有意に阻害し続けた。注入後２４時間では、食物摂取は、ＯＸＭ１．０ｎモｍｏｌｅｓにより阻害されたが、これは、有意ではなかった（２４時間：食塩水、４０．８±１．６ｇに対して、ＯＸＭ、１．０ｎｍｏｌｅ、３７．８±３．０ｇ；Ｐ＝ＮＳ）。
【０１４３】
６．末梢的に投与されたＯＸＭが、弓状核ＧＬＰ−１受容体を介して作用するかの調査：
ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）およびＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）の両方の腹膜内投与は、暗相内への１時間の食物摂取の有意な低減を引き起こした（１時間：食塩水、９．２±０．３ｇに対して、ＧＬＰ−１、５．０±０．６ｇ、ＯＸＭ、５．１±０．４ｇ）。しかしながら、ＯＸＭのＩＰ投与により引き起こされた食欲不振は、ＡＲＣ内へ直接注入されたＧＬＰ−１受容体アンタゴニスト、エクセンジン９−３９（３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）の前投与により阻害された（表３および図１０）。ＩＰ ＧＬＰ−１による食物摂取の阻害は、エクセンジン９−３９の前ｉＡＲＣ投与によっては影響されなかった。
【０１４４】
【表３】
【０１４５】
表３は、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ投与の１５分間前に注入されたエクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌｅｓ）または食塩水のｉＡＲＣ投与の１時間食物摂取（ｇ）に対する影響（Ｓ＝食塩水、Ｇ＝ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｏｘ＝ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｅｘ＝エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌｅｓ））。
【０１４６】
７．応答ＩＰ ＯＸＭにおける視床下部内のＦＬＩ発現のマッピング：
ＩＰ ＯＸＭ投与（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）後、ＦＬＩの濃厚(dense)な染色が、ほとんどもっぱら視床下部弓状核内において見出された（図１１ａ）。他の視床下部核（ＰＶＮ（室傍視床下部核）、ＤＭＨ（背内側視床下部核(dorsomedial hypothalamic nucleus)）、ＶＭＨ（腹内側視床下部核）(ventromedial hypothalamic nucleus)）は、特異的ｃ−ｆｏｓ染色を示さなかった。
【０１４７】
脳幹においては、ＩＰ ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）は、最も著しくは、ＮＴＳ（孤束核(nucleus tractus solitarius)）および最後野(area postrema)において、ＦＬＩの濃厚な染色を引き起こした（図６ｂ）。しかしながら、ＩＰ 食塩水およびＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のどちらも、調査された同じ脳幹核内においてｃ−ｆｏｓ発現の特異的増加は引き起こさなかった（図１１ｂ）。
【０１４８】
８．ＯＸＭと共に培養されたときの視床下部外植片からのα−ＭＳＨ放出の変化：
視床下部外植片とＯＸＭ（１００ｎＭ）を培養することは、基底放出に比較して、α−ＭＳＨの放出において有意な増加を引き起こした（α−ＭＳＨ：２．６±０．５ｆｍｏｌ／外植片に対して、ＯＸＭ、１００ｎＭ、４．１±０．６ｆｍｏｌ／外植片；Ｐ＜０．００５）。外植片生存率が、５６ｍＭ ＫＣｌと共に培養することにより評価され、生存率は、外植片の＞８０％において確認された。生存可能でない外植片は、分析から除外された。
【０１４９】
検討．
ＯＸＭの末梢投与は、ラットにおいて食物摂取の低減を引き起こす。これは、明相における絶食に続き、夜間の摂食相の間に見られた。食欲抑制効果は、強力であり、２４時間までの長さの時間、持続された。ＯＸＭの７日間、毎日２回のＩＰ投与は、過耐性なしで、食塩水で処置されたものに比較して、毎日の食物摂取における低減を引き起こした。ＯＸＭで処置された動物は、２群とも同一の毎日のカロリーの摂取を受けているにもかかわらず、対飼育動物よりも体重増加が有意に少なかった。ＯＸＭの腹膜内投与は、水摂取を全く一過性で低減したとはいえ、これは持続されず、このことは、体重増加速度の低下が、脱水に起因しなかったことを示唆する。
【０１５０】
長期に亘る研究の結論では、精巣上体ＷＡＴおよび肩甲骨間ＢＡＴが、除去され、重量計量された。ＯＸＭ処置動物の全ての脂肪体の重量には、同一の食物摂取にもかかわらず、対飼育動物に比較して低減があったことが見出された。従って、末梢ＯＸＭ投与も、他の代謝パラメータに影響していると思われる。
【０１５１】
飽満に対する主要な誘因は、脳幹活性化につながる迷走神経媒介機構(vagally-mediated mechanism)を介する遅延された胃内容排出である。ＧＬＰ−１およびＯＸＭの両方が、齧歯類およびヒトにおける胃内容排出の強力な阻害物質であり、ＧＬＰ−１の場合は、これが、ＧＬＰ−１が飽満を促進する支配的な機構であると考えられる。我々は、ＯＸＭが、同じ仕方で作用しており、胃内容排出に対するその影響が、持続された食欲抑制の原因であったとの仮説を立てた。しかしながら、ＯＸＭの末梢投与は、食物の再導入後の第１の時間における胃内容排出のわずかな遅延につながるが、これは有意ではなく、影響は一時的であった。これは、ＯＸＭがゆっくりと胃内容排出を行うが、食物摂取の強固でかつ持続された阻害の原因とはなりそうにないことを示唆した。
【０１５２】
我々は、ＯＸＭの末梢投与が、ほとんどもっぱらＡＲＣ内においてＦＬＩを増加させることをここに報告する。さらに、我々は、ＯＸＭと共に視床下部外植片を培養することによって、視床下部外植片からのＰＯＭＣ（プロ−オピオメラノコルチン）誘導生成物、αＭＳＨの放出の有意な増加が生じたことを見出した。ＩＰ ＯＸＭは、迷走神経媒介情報を統合する際に重要であると知られている領域、ＮＴＳおよびＡＰ内におけるＦＬＩの発現に影響しなかったが、これは、ＯＸＭがこれらの経路を介して作用していないとの考えをさらに強化する。
【０１５３】
脳幹内の核は、ＧＬＰ−１作用の一次部位であり、情報は、次に、視床下部ＰＶＮへと中継され、そこで、その食欲抑制効果が、媒介される、と考えられる。ＯＸＭのＡＲＣ内への直接注入は、非常に低い投与量においてでさえ、食物摂取の強固でかつ持続された阻害を引き起こしたが、これは、ＡＲＣがＯＸＭの作用部位であるとの仮説をさらに支持する。ＯＸＭの末梢投与により引き起こされる食欲抑制効果は、ＡＲＣ内へのエクセンジン９−３９の前投与により阻害された。しかしながら、興味深いことには、末梢的に投与されたＧＬＰ−１の食欲抑制作用は阻害されなかった。この発見は、ＯＸＭがＡＲＣ内のＧＬＰ−１受容体を介して作用していることを強く示している。さらに、それは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭの作用を媒介する別個の経路を同定した。
【０１５４】
総合すると、これらのデータは、ＯＸＭが食物摂取および体重維持の長期および短期の両方の調節において潜在的に重要であることを示す。胃内容排出の遅延および脳幹核の活性化を含む「従来の」飽満経路を介する食欲の低減よりは、循環ＯＸＭは、核内のＰＯＭＣ（プロ−オピオメラノコルチン）ニューロンを潜在的に活性化させることにより、ＡＲＣとの直接相互作用を介して、その食欲抑制効果を媒介している。従って、ＯＸＭは、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療または防止に有用であり得るとともに、さらには、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための新規な標的となる。
【０１５５】
実施例３
ＯＸＭ点滴注入のヒト対象の食物摂取に対する影響の調査。
【０１５６】
方法：
研究１．
研究設計は、二重盲式プラシーボ対照交差であったが、これについては図１２を参照のこと。１３人の健康な志願者（年齢 ２７±２歳； ＢＭＩ ２５．３±０．７ｋｇ-2）が、任意の順序で、≧１週間隔てて、ＯＸＭ（３．０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎ）の９０分間の点滴注入と、食塩水の点滴注入とを受けた。ＯＸＭはヘマクセル(haemaccel)（体積で５％）含有する食塩水に溶解して、注射器および管への吸着を低減した。志願者は、各点滴注入前の３日間およびその後の２４時間、食事日誌に完成させた。対象は、各点滴注入の前の日々に類似の食物に従うように指示された。彼らは、各点滴注入前の夜に同一の食事（彼らの選択による）を消費し、９ｐｍから絶食した。
【０１５７】
各研究日に、静脈内カニューレが、腕静脈内へ両側に挿入されたが、一方は、点滴注入の投与のためであり、他方は、血液採取のために使用された。対象には、心臓モニターが取り付けられ、１５分間毎に血圧が測定された。血液試料が、５，０００カリクレイン阻害物質単位(Kallikrein Inhibitor Units)（０．２ｍｌ）のアプロチニン(aprotinin)（トラシロル、バイエル (Trasylol, Bayer)）を含むリチウム−ヘパリン管（リップ社、英国(LIP LTD, UK)）内に、３０分間毎に収集され、氷上で貯蔵された。遠心分離後、血漿は、すぐに分離され、分析まで−７０℃で貯蔵された。
【０１５８】
点滴注入の終了１５分前に、対象には、全ての食欲が満たされることができるほどかつ対象が彼ら自身の食物摂取を評価できないほど過剰に提供されるビュッフェ式食事が提供された。選択肢は、チキンカレー、あっさりと茹でたライス、フルーツサラダ、および、さまざまなミニチョコレートバーおよび、フルーツ風味の甘いものお菓子から成っていた。水は、自由に入手できた。食物摂取は、食事の前後に食物および水の重量を軽量することにより計算した。
【０１５９】
ビュッフェ式食事後の２４時間の食物摂取が、食事日誌に記録され、エネルギー摂取は、ダイエットプランプログラム(Dietplan program)（フォレストフィールドソフトウェア社、ウェストサセックス、英国(Forestfield Software LTD, West Sussex, UK)）の助けを借りて計算された。
【０１６０】
３０分間毎に対象は、空腹、飽満、満腹感、予想食物消費、および悪心を評価する視覚的アナログ目盛り(visual analogue scales)（ＶＡＳ）を完成させた。これらは、最も陽性および陰性の評価を示す文言が各端部に記載された１００ｍｍの目盛りから成っていた。
【０１６１】
研究２．
８人の健康な絶食した志願者が、ビュッフェ食事前３０分に１００ｎｍｏｌから２５０ｎｍｏｌ（標準食塩水中）の投与量でＯＸＭを皮下投与された以外は、研究１についてと同じプロトコルに従った。
【０１６２】
結果：
研究１．
ＯＸＭ点滴注入は、ビュッフェ式食事において消費されたカロリーの有意な落ち込みとなった（１９２±５９ｋｃａｌ； １７．６±５．７％）。１２／１３対象が、ＯＸＭ点滴注入で消費されたカロリーの低下を示したが、図１３を参照のこと。ＯＸＭ点滴注入は、主観的空腹指数(scores)の有意な落ち込みを伴ったが、図１４（ＶＡＳ「今あなたは空腹ですか？」６０分間Ｐ＜０．０５）を参照のこと。ＯＸＭ点滴注入の有害な影響はなかった。特に、吐き気(sickness)（悪心）の感情に対するＯＸＭの影響はなかった（ＶＡＳ「今あなたはどのていど吐き気を感じますか？」７５分間Ｐ＝０．８)。影響は、迅速であるように思われる。
【０１６３】
研究２．
得られた結果は、表４に示す。
【０１６４】
【表４】
【０１６５】
検討．
ヒト対象に対するＯＸＭの非経口投与が、消費されたカロリーの低下と、望ましくない副作用なし特に吐き気（悪心）の感情なしに空腹の主観的感覚の有意な低減と、になるという実証は、哺乳動物の肥満などの過剰体重の治療または防止におけるＯＸＭの利用、および、哺乳動物の肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための新規な標的としてのＯＸＭの利用、の確認となる。
【０１６６】
実施例４
ＯＸＭのＩＰ投与後の血漿ＯＸＭ免疫反応性(immunoreactivity)（ＩＲ）およびグレリン(ghrelin)免疫反応性ＩＲ（グレリン−ＩＲ）レベルの調査。
【０１６７】
方法：
ＯＸＭまたは食塩水を、絶食させたラットに投与して、ＩＰ ＯＸＭ後の血漿ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリンＩＲレベルを調査した。血漿ＯＸＭ−ＩＲレベルは、先に説明したアッセイを用いて測定したが、エンテログルカゴン(enteroglucagon)（すなわち、Ｎ−末端延長ＯＸＭ(N-terminally elongated OXM)も測定する(Ghatei MA, Uttenthal LO, Christofides ND, Bryant MG, Bloom SR 1983 J Clin Endocrinol Metab 57:488-495)。ＯＸＭ−ＩＲアッセイは、５．７％のアッセイ内偏差(intra-assay variation)で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。グレリンラジオイムノアッセイ(English PJ, Ghatei MA, Malik IA, Bloom SR, Wilding JP 2002 J Clin Endocrinol Metab 87:2984)は、オクタノイルおよびデス−オクタノイル(des-octanoyl)グレリンの両方（全グレリン）を測定した。それは、任意の既知の胃腸または膵臓ペプチドホルモンと交差反応しなかったが、９．５％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。
【０１６８】
ラット（ｎ＝１０毎群）には、明相の開始において、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）または食塩水が、ＩＰ注入された。ラットは、ＩＰ注入後３０分および９０分に断頭され、動脈幹(trunk)血液が収集された。全ての血漿が収集され、ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリン−ＩＲが定量されるまで、−２０Ｃにおいて凍結された。注入後の期間全体の間、ラットは、絶食させたままであった。ＯＸＭの時点と投与量は、前の摂食研究を参照することにより選択された。
【０１６９】
消化管ホルモンの放出は、食物の含有量、特に脂肪含有量によって影響を受けることが見出された。この理由で、さらなる３つの群（ｎ＝１０）、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット、ｂ） 高脂肪ラット食餌（４５％脂肪、リサーチ飼料社(Research Diets Inc)）を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット、ｃ） 一夜絶食させ、点灯の際に、２時間、４５％高脂肪ラット食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられたラット、が調査された。ラットは、この２時間の高脂肪食事（すなわち、明相への２時間）の最後において断頭された。全ての血漿が収集され、ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリン−ＩＲが定量されるまで、−２０℃において凍結された。
【０１７０】
結果：
ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与は、注入後３０および９０分の血漿ＯＸＭ−ＩＲを増加させた（３０分血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水 ６１．８±８．９、 ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ４４８．９±１８４．４、 ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ ９９７．１±２３５．４。 ９０−分血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水 ４７．５±４．５、 ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ １５０．６±５２．５、 ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ １０７．８±２５．０）。
【０１７１】
血漿ＯＸＭ−ＩＲレベルは、３つの付加的な群、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ５１．９±５．８）、ｂ） 高脂肪ラット食餌を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ２２０．２±２２．２）、ｃ） 一夜絶食させ、点灯の際に、２時間、高脂肪食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられたラットは、２時間の高脂肪食事の最後において断頭された（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ２５４．０±３２．７）、において決定された。
【０１７２】
ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与は、注入後３０分および９０分の絶食血漿グレリン−ＩＲを有意に低下させた（３０分血漿グレリン ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水、１０５６．９±６４．０、 ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ８６７．４±４２．０（ｐ＜０．０１）、 ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ ８６０．０±４７．５（ｐ＜０．０２）。９０分血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水、１０５５．２±５２．５、 ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ８８６．９±３６．３（ｐ＜０．０１）、 ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ ９００．０±５２．９（Ｐ＜０．０５）、図１５を参照のこと。
【０１７３】
血漿グレリン−ＩＲレベルは、３つの付加的な群、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット（血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： １０６６．１±８０．９）、ｂ） 高脂肪ラット食餌を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット（血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ６１１．３±１６．９）、ｃ） 一夜絶食させたラットは、点灯の際に、２時間、高脂肪食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられ、２時間の高脂肪食事の最後において断頭された（血漿グレリン ｐｍｏｌ／Ｌ： ６４８．９±５７．３）、において決定された。
【０１７４】
実施例５
ＯＸＭ点滴注入のヒト対象に対する影響の調査。
【０１７５】
方法：
研究設計．
研究設計は、実施例３におけるのと同様であった。対象は、ｔ225まで研究室に留まっていた。彼らは、翌朝０９：００までＶＡＳを完成し続け、ビュッフェ式食事後２４時間（翌日１３：００まで）日誌に食物摂取を記録した。食事日誌は、研究およびエネルギー摂取に対しては予備知識のない(blinded)栄養士によって分析され、ダイエットプランプログラム(Dietplan program)（フォレストフィールドソフトウェア社、ウェストサセックス、英国(Forestfield Software LTD, West Sussex, UK)）の助けを借りて計算された。
【０１７６】
血漿ホルモン測定．
全ての試料は、アッセイ間(inter-assay)偏差を除去するように一つのアッセイ内においてかつ二重に定量された。血漿ＯＬＩ、膵臓グルカゴン、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１(glucagon-like peptide-1)（ＧＬＰ−１）、およびグレリン(ghrelin)が、確立された組織内(in-house)ＲＩＡｓを用いて測定された。ＯＬＩアッセイ(Ghatei MA, Uttenthal LO, Christofides ND, Bryant MG, Bloom SR 1983 J Clin Endocrinol Metab 57:488-495)が、５．７％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＰＹＹアッセイ(Adrian TE, Savage AP, Sagor GR, Allen JM, Bacarese-Hamilton AJ, Tatemoto K, Polak JM, Bloom SR 1985 Gastroenterology 89:494-499)が、５．８％のアッセイ内偏差で２ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＰＹＹ抗体が、ＰＹＹのＣ末端に対して特異的であり、ヒトＰＹＹ３−３６と十分に交差反応した。インスリンアッセイ(Kreymann B, Williams G, Ghatei MA, Bloom SR 1987 Lancet 2:1300-1304)が、５．４％のアッセイ内偏差で６ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＧＬＰ−１アッセイ(Kreymann B, Williams G, Ghatei MA, Bloom SR 1987 Lancet 2:1300-1304)が、６．１％のアッセイ内偏差で８ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＧＬＰ−１抗体が、アミド化されたＧＬＰ−１に対して特異的であり、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（１−３６）、およびＧＬＰ−１（７−３７）と交差反応しなかった。グレリンアッセイ(English PJ, Ghatei MA, Malik IA, Bloom SR, Wilding JP 2002 J Clin Endocrinol Metab 87:298)が、９．５％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。血漿レプチン(leptin)が、リンコリサーチ社（ミズーリ州、米国）(Linco Research (Missouri, USA))のヒトレプチンＲＩＡキット(human leptin RIA kit)を用いて測定された。
【０１７７】
結果：
１．ＯＸＭ点滴注入のエネルギー摂取に対する影響：
ＯＸＭ点滴注入は、１９．３±５．６％だけビュッフェ式食事におけるエネルギー消費を有意に低下させた（低減対食塩水： ２２０±６０ｋｃａｌ、Ｐ＜０．０１）。研究した１３対象のうち１２が、ＯＸＭ点滴注入でエネルギー摂取の低下を示した（図１７）。１対象において応答がないことの明らかな原因はなかった。ＯＸＭ点滴注入は、１１．３±６．２％だけ累積１２時間エネルギー摂取を有意に低減した（低減対食塩水： ３６５±１５９ ｋｃａｌ、Ｐ＜０．０５）（図３）。累積２４時間エネルギー消費は、有意には変わらなかった（食塩水 ３０４３±３６６ｋｃａｌ、 ＯＸＭ ２７６８±２９７ｋｃａｌ）。ＯＸＭは、ビュッフェ式食事におけるまたはその後の累積１２時間および２４時間食物摂取における多量栄養素(macronutrients)から得られるカロリーの割合も、水の消費も変更しなかった。
【０１７８】
２．ＯＸＭ点滴注入の食欲および嗜好性に対する影響：
食塩水の点滴注入の間、空腹に対する視覚的アナログ指数(visual analogue scores)は、絶食期間の全体を通して有意には変わらなかったが（図１８）、一方、ＯＸＭ点滴注入は、空腹の有意な落ち込みを生じた（漸増のＡＵＣｔ0からｔ75： 食塩水 ＋２７３±１２８ｍｍ．ｍｉｎ、 ＯＸＭ マイナス３７４±１８５ｍｍ．ｍｉｎ、Ｐ＜０．０５））。ビュッフェ式食事後の空腹の低下は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入の日々において同様であり、空腹指数は、その後同様のままであった。食事の時間の長さは、ＯＸＭにより有意に低減した（食塩水 １９．２±１．３ｍｉｎ、 ＯＸＭ １５．１±１．８ｍｉｎ、 Ｐ＜０．０５）。飽満、予想食物消費、悪心、および嗜好性に対する視覚的アナログ指数に対するＯＸＭの影響はなかった（データは図示せず）。
【０１７９】
３．ＯＸＭ様免疫反応性(OXM-like immunoreactivity)（ＯＬＩ）の血漿レベル：
ＯＸＭの点滴注入は、血漿ＯＬＩを、６２±５ｐｍｏｌ／Ｌからｔ60におけるピークの９０７±３２ｐｍｏｌ／Ｌに上昇させた（図１９）。比較として、食塩水点滴注入の日において、ビュッフェ式の消費は、１９５分において、１５１±１８ｐｍｏｌ／Ｌのピークの食後ＯＬＩレベルとなった。ＯＸＭ点滴注入の間の血漿試料のゲル浸透分析（図２０）は、合成ＯＸＭと同じ位置（Ｋav＝０．６）に溶離する単一の免疫反応性ピークを示した。従って、元のままの(intact)全部の長さのＯＸＭが、主な循環形態であった。
【０１８０】
４．ＯＸＭ点滴注入の血漿グレリンに対する影響：
食塩水点滴注入の間、血漿グレリンレベルは、絶食期間の全体を通して増加し（ｔ0 ４６１±３２ｐｍｏｌ／Ｌ、 ｔ75 ４８４±３５ｐｍｏｌ／Ｌ）、食事後低下した。（ｔ225 ３５７±２８ｐｍｏｌ／Ｌ）。しかしながら、ＯＸＭの点滴注入の間、グレリンの絶食レベルは、食事の前に低下し（ｔ0 ４８２±３３ｐｍｏｌ／Ｌ、 ｔ75 ４３５±３５ｐｍｏｌ／Ｌ）、グレリンのさらなる食事後低減があった（ｔ225 ３５６±３１ｐｍｏｌ／Ｌ）。従って、ビュッフェ式食事の前の血漿グレリンは、食塩水に日介してＯＸＭ点滴注入により有意に低減した（ｔ0からｔ75のグレリンの平均変化： 食塩水 ＋２４±１０ｐｍｏｌ／Ｌ、 ＯＸＭ マイナス４７±１１ｐｍｏｌ／Ｌ、 Ｐ＜０．０００１）（図２１）。ＯＸＭ点滴注入に起因するプラズマグレリンの抑制は、対応する食塩水点滴注入の日におけるグレリンの４４±１０％の食後の低下を示す（平均食後低下１５５±１９ｐｍｏｌ／Ｌ）。
【０１８１】
５．ＯＸＭ点滴注入の血漿ホルモンレベルに対する影響：
ＰＹＹ、インスリン、膵臓グルカゴン、ＧＬＰ−１、またはレプチン（表１）の絶食血漿レベルに対するＯＸＭ点滴注入の有意の影響はなかった。女性対象のレプチンの血漿濃度は、先に報告されているように男性よりは高かった。
【０１８２】
検討．
我々は、ＯＸＭの全身投与が、健康なヒト対象の食物摂取を有意に低減するということを実証した。ＯＸＭの静脈内点滴注入は、１９％だけビュッフェ式食事におけるカロリー摂取を低減し、累積エネルギー摂取は、点滴注入後１２時間において低下した。食物摂取のよりいっそう小さな変化は、長期間持続される場合、体重減少となるであろう。しかしながら、累積２４時間エネルギー摂取に対するＯＸＭの有意な影響はなかった。我々の研究は、ＯＸＭがエネルギー消費を増加させ得ることを示している。ＯＸＭは、その可能性のある治療上の使用の観点から重要である食事の楽しみに影響を及ぼさなかった。
【０１８３】
グレリンは、ヒトの食欲の強力な刺激剤であり(Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR 2001 Ghrelin enhances appetite and increases food intake in humans. J Clin Endocrinol Metab 86:5992)、血漿グレリンの食前の上昇は、食事開始の引き金であると示唆されている(Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K, Wisse BE, Weigle DS 2001 血漿グレリンレベルの食前上昇は、ヒトの食事開始の役割を示唆する．Diabetes 50:1714-1719)。従って、ＯＸＭ点滴注入が絶食血漿グレリンを抑制するという我々の新規な発見は、潜在的に重要である。ＯＸＭによるグレリンの通常の食前の上昇の阻害は、ＯＸＭ点滴注入が食欲を低減する一つの機構となりそうである。この発見はまた、グレリンレベルが食後に低減されるほとんど知られていない機構に光を当てることができる。齧歯類において、絶食は、血漿グレリンを増加させ、一方、水でないグルコースの経口摂取は、グレリン分泌を低下させるが、これは、血漿グレリンの抑制が胃の拡張でなく栄養分の摂取に関連することを示唆している。従って、栄養分の摂取に応答して放出されるＯＸＭは、血漿グレリンの通常の食後の阻害に寄与し得る。循環するグレリン全体の割合だけが、生物学的に活性なオクタノイル化された形態であると考えられる。食物消費およびＯＸＭ点滴注入の影響は、この活性グレリンのレベルを主に低減することとなり得る。
【０１８４】
ヒトの胃内容排出(gastric emptying)を阻害するＯＸＭの静脈内点滴注入が示された。胃内容排出の抑制は、満腹感の感覚を生じることにより飽満に寄与し得る増加された胃の拡張となり得る。現在の研究において、空腹指数は、胃の拡張が重要でありそうもないときの絶食状態においてＯＸＭによって有意に低減された。従って、食事前の期間における食欲の低減は、胃内容排出に対するＯＸＭの影響から生じそうである。ＯＸＭの食欲抑制(anorectic)効果は、ＰＹＹおよびレプチンの放出の刺激によって媒介されるように思われないが、その理由は、これらのホルモンの濃度がＯＸＭ点滴注入によって影響を受けないからである。
【０１８５】
我々は、ヒトにおいて、上昇したＯＸＭ循環レベルの食欲抑制効果を実証した。ＯＸＭの点滴注入は、熱帯性スプルーに見られるとともに病的飽満のための空腸回腸バイパス手術の後に見られる上昇した濃度に比較され得るＯＬＩの循環レベルを生成する。従って、ＯＸＭは、これらの条件で観察される食欲の喪失および体重減少に寄与し得る。我々は、ＯＸＭのより低い食後濃度が、通常の個人における食欲の生理的低減に寄与し得ると、また、ＯＸＭの外因的な(exogenous)投与が、肥満における食物摂取を低減することとエネルギー摂取を増加させることの一方または両方を行う可能性を有すると、考える。
【０１８６】
総合すると、これらのデータは、ＯＸＭが食物摂取、エネルギー消費、および体重維持の長期および短期の両方の調節において潜在的に重要であることを示す。従って、ＯＸＭは、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療または防止に有用であり得るとともに、さらには、哺乳動物、特にヒトにおける肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための標的となる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類の動物の体重減少に使用するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最も高い発生率を有するが有効な治療が欠如している疾患の１つに肥満がある。それは、生活の質を低下させるとともに他の疾患のリスクを実質的に増加させる衰弱状態である。
【０００３】
米国においては、現在、成人人口の２５％が、臨床的に肥満であると考えられている。米国の健康管理費用の４５０億ドル、すなわち年間の健康管理支出全体の８％、が肥満の直接の結果である、と推定されている。ヨーロッパにおいては、この問題は、増加しつつある。新たな取り組みなしでは、２００５年までに２０％を超えるイギリスの人口が、臨床的に肥満になるであろう、と予想されている。肥満が代謝病であるという事実は、医療専門家および保険機関によって、ますます認識されつつある。しかしながら、肥満の長期管理のための食事療法および運動と共に使用できる、有効かつ安全な薬物が不足している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、そのような薬物を提供するとともに、さらなるそのような薬物を同定しかつ開発する手段を提供することである。
【０００５】
プレプログルカゴン(Preproglucagon)は、１６０アミノ酸ポリペプチドであり、これは、プロホルモン変換酵素(convertase)−１および−２によって組織特異的な仕方で分割(cleave)されて、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢組織の両方においてさまざまな機能を有する多数の生成物を生じる。腸内およびＣＮＳ内では、プレプログルカゴン分割(cleavage)の主な翻訳後の生成物は、図２２に示すように、グルカゴン様(glucagon-like)ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、グリセンチン(glicentin)、およびオキシントモジュリン(oxyntomodulin)（ＯＸＭ）である。ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２が、食物摂取を阻害することは示されてきたが、そのような役割は、明確なペプチドＯＸＭに対してはヒトにおいては明らかにされていなかった。ヒトにおける生理活性ペプチドとしてのＯＸＭの重要性は、明らかにされていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＯＸＭペプチドが、ヒトにおける食物摂取を阻害し、体重を低減し、かつエネルギー消費を増加させることができる、また、ＯＸＭ点滴注入（infusion）が、絶食血漿グレリン（fasting plasma ghrelin）を抑制する、という我々の驚くべき観察に基づいている。
【０００７】
本発明は、哺乳動物の過剰体重の防止または治療における使用のための方法を提供し、方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。哺乳動物は、過剰体重の防止または治療の必要がありそうである。体重減少は、美容用になり得る。ＯＸＭを含む組成物は、効果的な濃度で投与されるものである。
【０００８】
本発明はまた、以下の対象の治療方法、すなわち、対象のカロリー摂取を低下させる方法、対象の食欲を低下させる方法、対象の食物摂取を低下させる方法、対象の体重の制御または治療方法、肥満の低減または防止方法、および対象のエネルギー消費を増加させる方法を提供し、特に以下の、体重増加を防止および低減すること、体重減少を誘発および促進すること、および、体格指数により測定される肥満を低減すること、のいずれか１つまたは複数を提供する。方法は、食欲、飽満、空腹、およびエネルギー消費のいずれか１つまたは複数の制御を含み、特に以下の、食欲を低減、抑制、または阻害すること、飽満および飽満の感覚を誘発、増加、増強、および促進すること、および、空腹および空腹の感覚を低減、阻害、および抑制すること、およびエネルギー消費を増加させること、のいずれか１つまたは複数を含む。方法はさらに、所望の体重、所望の体格指数、所望の容姿、および良好な健康のいずれか１つまたは複数を維持することを含む。上述した全ての方法において、ＯＸＭは、一般に末梢経路の投与によって、対象に投与される。
【０００９】
本発明はまた、対象の脂質プロフィールを改善する方法を提供する。方法は、効果量のＯＸＭを対象に投与することを含む。脂質プロフィールの改善は、限定される訳ではないが、コレステロールレベルを低減すること、トリグリセリドレベルを低減すること、およびＨＤＬコレステロールレベルを増加させることのうちの少なくとも１つを含む。ＯＸＭは、単一または分割された投与量などで、末梢的に投与できる。
【００１０】
別の実施態様においては、栄養分の有効性を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方により軽減できる状態または障害を軽減する方法が、ここに開示される。方法は、治療効果量のＯＸＭを対象に投与することを含む。
【００１１】
本発明は、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与に適した形態において、製薬上適した担体と、ＯＸＭとを含む製薬組成物を提供する。単位剤形の場合は、単位当たりの投与量は、例えば、以下に記載されるような、または以下に与えられる１ｋｇ当たり投与量に基づいて計算されるようなものとすることができる。
【００１２】
本発明はまた、上述したいずれかの治療方法のための脳に対する末梢的な経路による投与のための医薬の製造における使用のためのＯＸＭまたはそのアゴニストを含む。末梢的経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。医薬のためのＯＸＭの好ましい投与量は、以下に与えられる。
【００１３】
本発明は、哺乳動物の美容用体重減少のための方法を提供し、この方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。この環境では、体重減少は、純粋に美容用容姿の目的のためである。
【００１４】
本発明はさらに、ＯＸＭと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤との、組み合わせによる使用を提供する。他の薬剤は、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト受容体、または、ＰＹＹまたはそのアゴニスト、または他の物質であり、他の物質は、例えば、アミリン(amylin)、レプチン(leptin)、エクセンジン−４(exendin-4)、またはこれらのアゴニストなどの天然食物影響物質(naturally food influence substance)であるか、またはこれらから誘導される物質である。所望ならば、２つ以上の他の薬剤を、ＯＸＭと組み合わせて使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストを使用できる。（物質または「そのアゴニスト」への言及が、これらの物質と１つまたは複数のそれらのアゴニストとの混合物、また２つまたは３つ以上のアゴニストの混合物を含むことは、理解されるであろう）。
【００１５】
本発明の方法において、ＯＸＭは、ＯＸＭと組み合わせて使用させる任意の他の薬剤のように、所望の結果を達成するのに効果的な量で投与される。それぞれの場合、対象、一般にヒトは、太りすぎであり得るか、糖尿病であり得るか、またはこれらの両方であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】図１（図１Ａおよび図１Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮプログルカゴン誘導および関連生成物の影響の比較である。図１Ａは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１、ＯＸＭ、グルカゴン、またはグリセンチン（全て３ｎｍｏｌ）のＩＣＶ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）を例示する。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図１Ｂ】図１（図１Ａおよび図１Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮプログルカゴン誘導および関連生成物の影響の比較である。図１Ｂは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１、ＯＸＭ（両方とも１ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−４（０．０３ｎｍｏｌ）の急性ｉＰＶＮ注入後、２４ｈまでの累積食物摂取（ｇ）を例示する。１、２、および４ｈにおける全ての群について食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０１。８ｈにおけるエクセンジン−４だけについて食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図２Ａ】図２（図２Ａおよび図２Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮ ＯＸＭの影響の２つのグラフを示す。図２Ａは、ＯＸＭ（０．３、１、３、または１０ｎｍｏｌ）の急性ＩＣＶ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図２Ｂ】図２（図２Ａおよび図２Ｂ）は、絶食させたラットにおける食物摂取に対するＩＣＶおよびｉＰＶＮ ＯＸＭの影響の２つのグラフを示す。図２Ｂは、絶食させた動物内へのＯＸＭ（０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌ）の急性ｉＰＶＮ注入後、８ｈまでの累積食物摂取（ｇ）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０．０５。
【図３Ａ】図３（図３Ａおよび図３Ｂ）は、暗相の開始におけるＩＣＶ ＯＸＭの影響の２つの棒グラフを示す。満腹したラットが、暗相の開始において、ＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、または食塩水のＩＣＶ注入を受けた。図３Ａは、注入後１ｈにおいて決定された食物摂取（グラム）。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０／０５。
【図３Ｂ】図３（図３Ａおよび図３Ｂ）は、暗相の開始におけるＩＣＶ ＯＸＭの影響の２つの棒グラフを示す。満腹したラットが、暗相の開始においてＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、または食塩水のＩＣＶ注入を受けた。図３Ｂは、注入後１ｈにおいて決定された行動。食塩水対照に対して、＊、Ｐ＜０／０５。
【図４Ａ】図４（図４Ａおよび図４Ｂ）は、食物摂取に対するＯＸＭおよびＧＬＰ−１影響へのエクセンジン−（９−３９）による阻害の２つの棒グラフを示す。図４Ａは、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭおよびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）のみ、の急性ＩＣＶ注入１時間後の食物摂取。食塩水対照に対して、＊＊、Ｐ＜０．００５。
【図４Ｂ】図４（図４Ａおよび図４Ｂ）は、食物摂取に対するＯＸＭおよびＧＬＰ−１影響へのエクセンジン−（９−３９）による阻害の２つの棒グラフを示す。図４Ｂは、絶食させた動物内へのＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）、ＯＸＭおよびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）のみ、の急性ｉＰＶＮ注入後の食物摂取。食塩水対照に対して、＊＊、Ｐ＜０．００５。
【図５】ＧＬＰ−１およびＯＸＭによるラット視床下部膜内の［125Ｉ］ＧＬＰ−１結合の競合のグラフ。
【図６ａ】２４時間絶食させたラットにおける、初期暗相の間に注入したＩＰ ＯＸＭ（５００μｌ食塩水中、３０、１００、および３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の累積食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する（黒四角＝食塩水、白丸＝ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、黒三角＝ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ、白三角＝ＯＸＭ ３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５。
【図６ｂ】絶食させていないラットにおける、暗相の開始前に注入したＩＰ ＯＸＭ（５００μｌ食塩水中、３０および１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の累積食物摂取に対する影響を例示する（黒四角＝食塩水、白丸＝ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、黒三角＝ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ）。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５。
【図７ａ】ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の７日間、毎日２回のＩＰ注入の累積食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図７ｂ】ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水の７日間、毎日２回のＩＰ注入の体重増加（ｇ）に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図８】ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、食塩水、または陽性の対照（１時間＝ＧＬＰ−１（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）；２時間＝ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ））の３６時間絶食ラットの胃内容排出に対する影響を例示する。胃の内容物（乾燥重量）は、３０分間の摂食時間中の食物摂取のパーセンテージとして表された。食塩水に対して、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図９】２４時間絶食させたラットの弓状核内へ投与したときのＯＸＭの増加する投与量（０．０１−１．０ｎｍｏｌ）の１時間食物摂取に対する影響を例示する。食塩水に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図１０】ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ投与前１５分間に注入された、エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌ）または食塩水のｉＡＲＣ投与の１時間食物摂取（ｇ）に対する影響を例示する。（Ｓ＝食塩水、Ｇ＝ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｏｘ＝ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｅｘ＝エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌ））。
【図１１ａ】視床下部の弓状核内における、Ａ）ＩＰ食塩水、または、Ｂ）ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、に応答するｆｏｓ様免疫反応の発現を例示する（ｘ４０倍率）。食塩水に対して、＊＊＊Ｐ＜０．００５。
【図１１ｂ】脳幹のＮＴＳおよびＡＰにおける、Ａ）ＩＰ食塩水、Ｂ）ＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または、Ｃ）ＩＰ ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）に応答するｆｏｓ様免疫反応の発現を例示する。
【図１２】ヒト対象の食物摂取に対するＯＸＭの静脈内点滴注入の影響についての研究のプロトコルを示す。目盛りは、時間（ｍｉｎ）を示す。ＯＸＭ（３．０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎ）および食塩水の点滴注入は、０〜９０分であった。ビュッフェ式食事は、７５分において提供された。
【図１３】ビュッフェ式食事におけるヒト対象により消費されたカロリーを示す。各線は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入での個々の対象により消費されたカロリーを示す。太線は、全ての志願者に対する平均カロリー摂取を示す。ＯＸＭ点滴注入での平均のカロリーの落ち込みは、１７．６±５．７％である。
【図１４】「今あなたは空腹ですか？」という質問に対するヒト対象の応答を示す視覚的アナログ目盛りである。ＯＸＭ点滴注入中に主観的空腹に有意な落ち込みがあった。空腹指数(score)は、ビュッフェ式食事の後にかなり減少した。
【図１５】ラットにおける注入後３０および９０分における絶食血漿グレリン−ＩＲに対するＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与の影響を示す。黒塗りのブロックは、食塩水対照での結果を示し、ハッチングされたブロックは、ＯＸＭでの結果を示す。
【図１６】ビュッフェ式食事におけるヒト対象により消費されたｋＪカロリーでのエネルギー摂取を示す。各線は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入での個々の対象のエネルギー摂取を示す。太線は、全ての志願者に対する平均カロリー摂取を示す。
【図１７】ビュッフェ式食事におけるエネルギー摂取、ヒト対象の累積１２および２４時間のエネルギー摂取を示す。黒塗りのブロックは、食塩水対照での結果を示し、ハッチングされたブロックは、ＯＸＭでの結果を示す。
【図１８】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後のヒト対象の相対的空腹指数を示す。
【図１９】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後のＲＩＡにより決定されたＯＸＭ様免疫反応性（ＯＬＩ）をｐｍｏｌ／Ｌで示す。
【図２０】ＯＸＭ点滴注入中の血漿試料のゲル浸透分析を示す。合成ＯＸＭと同じ位置に単一の免疫反応性ピークが溶離する。
【図２１】示された期間におけるＯＸＭまたは食塩水対照の点滴注入での、絶食期間中または食事後の血漿グレリンレベルの変化を示す。
【図２２】プレプログルカゴンおよびその構成要素部分を図式的に示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、予想に反して見出された、ＯＸＭペプチドが、食物摂取を阻害しかつ体重を低減することができるという驚くべき観察に基づいている。
【００１８】
本願では、「オキシントモジュリン」という用語は、「ＯＸＭ」と同じであり、以下のようなＯＸＭペプチド配列またはその類似体を含むどのような組成物にも関連する。
【００１９】
ＯＸＭ配列は、当業技術内でよく知られており、記録が残されている。本発明は、以下のＯＸＭヒト(human)配列SEQ ID NO: 1（ラット、ハムスター、およびウシ(bovine)ＯＸＭ配列と同じである）：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
Arg Asn Lys Asn Asn Ile Ala、SEQ ID NO: 1、
以下のＯＸＭアンコウ(angler fish)配列SEQ ID NO: 2：
His Ser Glu Gly Thr Phe Ser Asn Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Glu Asp Arg Lys Ala Gln
Glu Phe Val Arg Trp Leu Met Asn Asn Lys
Arg Ser Gly Val Ala Glu、SEQ ID NO: 2、
および、以下のウナギ(eel)ＯＸＭ配列SEQ ID NO: 3：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Asn Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Glu Thr Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Ser Lys
Arg Ser Gly Gly Pro Thr SEQ ID NO: 3、
を特に含む、ここに列挙される全てのシーケンスに関する。
【００２０】
本願で使用されるＯＸＭという用語は、また、上述したＯＸＭ配列のどのような類似体も含み、１位にあるヒスチジン残基は、正電荷を有する芳香族部分(aromatic moiety)またはその誘導体によって置換または維持され、好ましくは、この部分は、アミノ酸であり、より好ましくは、それは、ヒスチジン誘導体であり、上述したＯＸＭ配列内の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２個の他のアミノ酸が、１位にあるヒスチジンを除いて、任意の他の独立して選択されたアミノ酸によって独立して置換され得る。
【００２１】
配列内のいずれか１つまたは複数（２２個まで）の他のα−アミノ酸残基が、任意の他の１つのα−アミノ酸残基によって独立して置換され得る。好ましくは、ヒスチジンを除く任意のアミノ酸残基は、当業技術内でよく知られる保存的置換、すなわち、１つの疎水性アミノ酸を別のものに置き換えるなどといったアミノ酸を化学的に類似の種類の１つに置き換えることによって置換される。
【００２２】
上述したように、１から２２個のアミノ酸が置換され得る。上述した置換の選択肢に加えて、これは、アミノ酸の非必須形態、修飾形態、または異性形態によって行われ得る。例えば、１から２２個のアミノ酸は、異性形態（例えば、Ｄ−アミノ酸）、修飾アミノ酸、例えばノルアミノ酸(nor-amino acid)（ノルロイシンまたはノルバリンなど）、または非必須アミノ酸（タウリンなど）によって置換できる。さらに、１から２２個のアミノ酸は、その側鎖を介して結合された対応するまたは異なるアミノ酸（例えば、γ−結合(gamma-linked)グルタミン酸）によって置換できる。上述した各置換では、１位にあるヒスチジン残基は、変更されないか、あるいは、上述したように規定される。
【００２３】
さらに、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、１位にあるヒスチジンを除いて（または上に規定したように）、ＯＸＭ配列から除去できる。削除される残基は、任意の２、３、４、または５個の隣接残基、または全く別々の残基とすることができる。
【００２４】
ＯＸＭ配列のＣ末端は、さらなるアミノ酸残基または他の部分を付加するように修飾できる。上述したＯＸＭは、その対応する塩として供給され得る。ＯＸＭおよびその類似体の製薬上許容可能な塩の例としては、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、塩酸塩、および硫酸塩などをそれぞれ与えるメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸、塩酸、および硫酸などの鉱酸から誘導されたもの、または、有機塩基および無機塩基などの塩基から誘導されたものが挙げられる。本発明の化合物の塩を生成するのに適した無機塩基の例としては、アンモニア、リチウム、ナトリウム、カルシウム、カリウム、アルミニウム、鉄、マグネシウム、亜鉛などの水酸化物、炭酸塩、および重炭酸塩が挙げられる。また、塩は、適切な有機塩基を用いて形成され得る。本発明の化合物との製薬上許容可能な塩基付加塩(base addition salt)を形成するのに適したそのような塩基としては、毒性がなくかつ塩を形成するのに十分に強い有機塩基が挙げられる。このような有機塩基は、当業技術内でよく知られており、アルギニンおよびリシンなどのアミノ酸、モノ−、ジ−、およびトリエタノールアミン、コリンなどのモノ−、ジ−、またはトリヒドロキシアルキルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、およびトリメチルアミンなどのモノ−、ジ−、およびトリアルキルアミン、グアニジン、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、エチレンジアミン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどを含み得る。
【００２５】
塩は、当業技術内でよく知られる方法を用いる従来の仕方で調製できる。上記塩基化合物の酸付加塩は、必要な酸を含有する水性または水性アルコール溶液または他の適切な溶媒中に遊離(free)塩基化合物を溶解することによって調製できる。ＯＸＭが酸性官能基(function)を含む場合は、上記化合物の塩基塩は、上記化合物を適切な塩基と反応させることによって調製できる。酸塩または塩基塩は、直接分離できるか、または、溶液を濃縮すること、例えば蒸発によって、得ることができる。ＯＸＭは、溶媒和または水和された形態でも存在し得る。
【００２６】
本発明のＯＸＭは、脂質、糖、タンパク質、またはポリペプチドなどの１つまたは複数の群に複合化(conjugate)され得る。ＯＸＭは、これらの群に（例えば、共有結合またはイオン結合を介して）付着(attach)されることにより複合化され得るか、またはそれらと会合(associate)され得る。複合結合は、ＯＸＭがこれらの群に付着されるときは、好ましくは、Ｃ末端またはＮ末端アミノ酸を通してではない。ＯＸＭは、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体などのポリマー、セルロース、セルロース誘導体、キトサン、
アラビアゴム(acacia gum)、カラヤゴム(karaya gum)、グアールガム(guar gum)、キサンタンガム(xanthan gum)、トラガカントゴム(tragacanth)、アルギン酸、カラギーナン(carrageenan)、アガロース、フルセララン(furcellarans)、デキストラン、デンプン、デンプン誘導体、ヒアルロン酸などの多糖、ポリエステル、ポリアミド、ポリ無水物(polyanhydrides)、およびポリオルトエステル(polyortho esters)に複合化され得る。
【００２７】
ＯＸＭは、化学的に修飾できる。特に、ＯＸＭのアミノ酸側鎖、Ｎ末端、およびＣ酸末端のうちの少なくとも１つが、修飾され得る。例えば、ＯＸＭは、１つまたは複数の、アルキル化、ジスルフィド形成、金属錯体形成、アシル化、エステル化、アミド化、ニトロ化、酸を用いた処理、塩基を用いた処理、酸化、または還元を受けることができる。これらの処理を実行する方法は、当業技術内でよく知られている。特に、ＯＸＭは、低級(lower)アルキルエステル、低級アルキルアミド、低級ジアルキルアミド、酸付加塩、カルボン酸塩、またはこれらのアルカリ付加塩として提供される。特に、ＯＸＭのアミノ末端またはカルボキシル末端は、例えば、エステル化、アミド化、アシル化、酸化、または還元によって誘導され得る。特に、ＯＸＭのカルボキシル末端は、アミド部分を形成するように誘導できる。
【００２８】
ＯＸＭは、金属、特に二価金属を用いて処理できる。従って、本発明の目的のために、ＯＸＭは、１つまたは複数の以下の金属、亜鉛、カルシウム、マグネシウム、銅、マンガン、コバルト、モリブデン、または鉄の存在下に提供され得る。
【００２９】
ＯＸＭは、製薬上許容可能な担体または希釈剤と組み合わせた製薬組成物の形態で提供され得る。適切な担体および希釈剤の少なくとも一方は、当業技術内でよく知られており、製薬等級のデンプン、マンニトール、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉(talcum)、セルロース、グルコース、スクロース、（または他の糖）、炭酸マグネシウム、ゼラチン、油、アルコール、界面活性剤(detergents)、乳化剤、または水（好ましくは、滅菌したもの）を含む。組成物は、組成物の混合製剤とすることができ、あるいは、同時、別々、または逐次の使用（投与を含む）のための組み合わされた製剤とすることができる。ＯＸＭは、結晶性の固体、粉末、水溶液、懸濁液として、または油中で提供できる。
【００３０】
上述した徴候において使用するための本発明による組成物は、任意の都合のよい方法によって、例えば、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与およびそれに従って適合された組成物によって、投与され得る。
【００３１】
経口投与では、組成物は、液体または固体、例えば、溶液、シロップ、懸濁液、または乳濁液、錠剤(tablets)、カプセル、およびトローチ剤(lozenges)として処方できる。
【００３２】
液体処方は、一般に、適切な水性または非水系の１つまたは複数の液体担体中、例えば、水、エタノール、グリセリン、ポリエチレングリコール、または油中の、化合物または生理的に許容可能な塩の懸濁液または溶液から構成されるものである。また、処方は、懸濁剤(suspending agent)、防腐剤(preservative agent)、香味剤(flavouring agent)、または着色剤を含み得る。
【００３３】
錠剤の形態の組成物は、固体処方を調合するのに日常業務で使用される任意の適切な１つまたは複数の製薬担体を用いて調合できる。このような担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、および微晶質セルロースが挙げられる。
【００３４】
カプセルの形態の組成物は、日常業務のカプセル化処理を用いて調合できる。例えば、活性成分を含有する粉末、顆粒、またはペレットが、標準担体を用いて調製でき、次に、硬質(hard)ゼラチンカプセル内に充填され、代替としては、分散液(dispersion)または懸濁液が、任意の適切な１つまたは複数の製薬担体、例えば、水性ゴム、セルロース、ケイ酸塩、または油を用いて調製でき、次に、この分散液または懸濁液は、軟質(soft)ゼラチンカプセル内に充填される。
【００３５】
経口投与のための組成物は、活性成分が消化管を通る間にそれを分解(degradation)から、例えば、錠剤またはカプセル上への処方の外側被覆によって、保護するように設計され得る。
【００３６】
皮下投与のための組成物を含む通常の非経口組成物は、滅菌した水性または非水系の担体または経口的に許容可能な油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油、またはゴマ油中の化合物または生理的に許容可能な塩の溶液または懸濁液を含む。代替としては、溶液は、凍結乾燥され、次に、投与の直前に適切な溶媒を用いて元に戻され得る。
【００３７】
鼻腔または経口投与のための組成物は、エーロゾル、滴(drops)、ゲル、および粉末として都合よく処方できる。エーロゾル処方は、一般に、生理的に許容可能な水性または非水系の溶媒中の活性物質の溶液または微細な懸濁液から成り、通常は、密閉容器内の滅菌した形態で単一または複数投与量として存在しており、密閉容器は、噴霧装置と共に使用するためにカートリッジまたは詰め替えの形態をとることができる。代替としては、密閉容器は、単一投与量鼻腔吸入器などの単一投薬装置(unitary dispensing device)、または、絞り弁を備えるエーロゾルディスペンサーであって、一旦、容器の内容物が使い尽くされると処分が予定されているものとすることができる。投与量形態が、エーロゾルディスペンサーを含む場合は、製薬上許容可能な推進剤(propellant)を含むことになる。エーロゾル投与量形態は、ポンプ噴霧器の形態をとることもできる。
【００３８】
口腔または舌下投与に適した組成物は、活性成分が、糖、およびアラビアゴム、トラガカントゴム、またはゼラチンおよびグリセリンなどの担体を用いて処方される、錠剤、トローチ剤、および香錠(pastilles)を含む。
【００３９】
直腸または膣投与のための組成物は、都合よく、坐剤（カカオバターなどの従来の坐剤基剤を含む）、膣坐剤、膣錠、泡および浣腸剤の形態となる。
【００４０】
経皮投与に適した組成物としては、軟膏、ゲル、貼付剤、および粉末注入を含む注入が挙げられる。
【００４１】
組成物は、都合よく、錠剤、カプセル、またはアンプルなどの単位剤形となる。
【００４２】
ＯＸＭは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から１２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上下の範囲の任意の組み合わせ内にある。投与量は、個別の基準で、または、たいてい７０または７５ｋｇ対象である典型的な対象を基準として計算できる。投与量は、各食事前に投与できる。
【００４３】
皮下投与では、７５ｋｇ対象を基準として計算された投与量である、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの投与量が、一般に食事前に投与され得る。
【００４４】
末梢投与のための単位剤形での製薬製剤は、上に与えられた１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されたＯＸＭの量を含む。一般に、投与量は、７０または７５ｋｇ対象を基準として計算され得る。例えば皮下投与のための組成物は、７５ｋｇ対象を基準として計算された、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの単位投与量を含むことができる。
【００４５】
ＯＸＭは、過剰の体重増加を防止する予防として使用でき、あるいは、過剰体重を減少させる治療として使用できる。
【００４６】
過剰体重は、通常は肥満であるとはいえ、哺乳動物は、過剰体重に苦しんでいることになる目的で、臨床的に肥満であるとして認定されることはない。ＯＸＭは、液体、固体、または半固体の形態となり得る。
【００４７】
今日の社会では、哺乳動物の過剰体重の防止または治療は、現実に必要とされている。好ましくは、哺乳動物は、ヒトであるとはいえ、それは、ウマ、イヌ科の動物(canine animals)（特に、飼いならされたイヌ科の動物）、ネコ科の動物(feline animals)（特に、飼いならされたネコ科の動物）などの他の哺乳類の動物、さらには、ブタ(porcine)、ウシ(bovine)、およびヒツジ(ovine)などの動物のように、肉のために生産されている哺乳動物も含み得る。本発明は、赤身肉の生産を最大にするために、そのような動物の過剰体重を防止するのに使用できる。
【００４８】
本願全体に亘って、「防止」という用語は、どのような過剰体重も、どのような程度でも緩和するどのような効果も意味する。本願全体に亘って、「治療」という用語は、どのような程度でも、過剰体重の改善を意味する。
【００４９】
ＯＸＭの適切な投与量は、限定される訳ではないが、ＯＸＭの模擬摂食後(postprandial)血清濃度をする投与量など、ＯＸＭの基底(basal)濃度より実質的に上に上昇させるような投与量を含む。従って、一実施態様においては、ＯＸＭは、カロリー摂取、食物摂取、または食欲の低減に相当する、カロリー摂取、食物摂取、または食欲における低減まで、または、ＯＸＭの摂食後レベルにより生じるエネルギー消費を増加させるように、投与される。
【００５０】
ここに開示される全ての方法では、ＯＸＭの投与量は、摂食後に観察される生理的レベルに基づくことができる。単一投与量が、毎日投与でき、あるいは、分割投与量が、使用できる（上記を参照のこと）。
【００５１】
末梢経路の投与を介して、すなわち直接に脳へという以外の経路を介して、ＯＸＭを投与するのが好ましい。このような経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。
【００５２】
本発明は、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔(buccal)、舌下、鼻腔(nasal)、皮下または経皮の投与に適した形態において、製薬上適した担体と、ＯＸＭとを含む製薬組成物を提供する。単位剤形の場合は、単位当たりの投与量は、以上に与えられる１ｋｇ当たり投与量に基づいて計算できる。
【００５３】
本発明はまた、上述したいずれかの治療方法のための末梢的経路による投与のための医薬の製造における使用のためのＯＸＭまたはそのアゴニストを含む。末梢的経路の例としては、吸入による投与を含め、経口、直腸、非経口例えば静脈内、筋肉内、または腹腔内、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、皮下または経皮の投与が挙げられる。医薬のためのＯＸＭの好ましい投与量は、以上に与えられる。
【００５４】
本発明は、哺乳動物の美容用体重減少のための方法を提供し、この方法は、ＯＸＭを含む組成物を哺乳動物に投与することを含む。この環境では、体重減少は、純粋に美容用容姿の目的のためである。
【００５５】
上に与えられる好ましい特徴の全てが、本発明のこの態様にもあてはまる。
【００５６】
この理論に拘束されずに、本発明は、哺乳類の身体への食物摂取に対する阻害剤として作用することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方を行うＯＸＭの投与による過剰体重の防止または治療を提供することが理解される。そのような食物摂取の低減とエネルギー消費の増加の一方または両方は、哺乳動物の過剰体重の防止または治療となる。本願では、「食物」という用語は、消化されるとともにカロリーの値を有する物質を含む。さらに我々は、ＯＸＭ点滴注入が、絶食血漿グレリンを抑制するということを見出した。グレリンはヒトの食欲の強力な刺激物であり、血漿グレリンの食前の上昇が食事開始の引き金であると示唆されているので、これは重要な発見である。仮説によって拘束されずに、我々は、ＯＸＭによるグレリンの通常の食前の上昇の阻害が、ＯＸＭ点滴注入が食欲を低減する一つの機構であろうと考える。
【００５７】
本発明はさらに、ＯＸＭと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤との、組み合わせによる使用を提供する。他の薬剤は、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト受容体、または、ＰＹＹまたはそのアゴニスト、または他の物質であり、他の物質は、例えば、アミリン(amylin)、レプチン(leptin)、エクセンジン−４(exendin-4)、またはこれらのアゴニストなどの天然食物影響物質(naturally food influence substance)であるか、またはこれらから誘導される物質である。所望ならば、２つ以上の他の薬剤を、ＯＸＭと組み合わせて使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストを使用できる。（物質または「そのアゴニスト」への言及が、これらの物質と１つまたは複数のそれらのアゴニストとの混合物、また２つまたは３つ以上のアゴニストの混合物を含むことは、理解されるであろう）。
【００５８】
一実施態様において、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと共に使用できる。ＯＸＭは、作用の弓状部位を有しているように思われ、一方、ＧＬＰ−１は、脳幹を介して作用する。組み合わせでの二つの薬剤の使用は、相乗効果を与えることができる。
【００５９】
ＧＬＰ−１は、ＯＸＭと同様に、プレプログルカゴンの翻訳後の生成物であり、図２２を参照のこと。最初の翻訳後の生成物は、ＧＬＰ−１（１−３７）である。ヒトＧＬＰ−１（１−３７）は、以下のアミノ酸配列、SEQ ID NO: 4：
His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly、
SEQ ID NO: 4、
を有する。
【００６０】
さらなる修飾体(modifications)は、ＧＬＰ−１（１−３６） SEQ.ID.NO: 5、およびそのアミド、ＧＬＰ−１（１−３６）ＮＨ2； ＧＬＰ−１（７−３７） SEQ.ID.NO:6； およびＧＬＰ−１（７−３６） SEQ.ID.NO:7 およびそのアミン、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、これはＧＬＰ−１ペプチドのうちで最も生物学的に活性である、を与える。「ＧＬＰ−１」という用語はここでは、上に定義した任意のＧＬＰ−１ペプチド、特に、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドとしても知られる、を意味する。用語は、任意の動物起源、特にヒトペプチドのＧＬＰ−１ペプチドを含む。
【００６１】
ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１受容体に優先的に結合しＧＬＰ−１が行うのと同じ生物学的活性を刺激するペプチド、小さな分子、または化学的化合物である。一実施態様では、ＧＬＰ−１受容体に対するアゴニストは、ＧＬＰ−１と同じかそれより大きな親和性で受容体に結合する。別の実施態様では、アゴニストは、別の受容体に結合するのに比較して、ＧＬＰ−１受容体に選択的に結合する。エクセンジン−４は、アメリカドクトカゲ(Gila monster (Heloderma suspectum))の唾液腺から単離された３９アミノ酸ペプチド(Eng J et al J Biol Chem 267:7402-7405, 1992)であり、ＧＬＰ−１受容体におけるアゴニストの一例である。エクセンジン−４から誘導されＧＬＰ−１アゴニスト活性も有する分子は、ＧＬＰ−１アゴニストのさらなる例である。ＧＬＰ−１アゴニストは、ＧＬＰ−１関連ペプチドを含み、また、プレプログルカゴンのあるいはＧＬＰ−１ペプチドまたは関連ペプチドの天然または合成の酵素のまたは化学的な処理によって得られるペプチドを含む。
【００６２】
ＧＬＰ−１アゴニストであると記載される任意の化合物は、例えば上述のようにＧＬＰ−１アゴニスト活性に対する試験が行われＧＬＰ−１アゴニストとして機能すると見出された任意の化合物が可能なように、本発明において使用され得る。スクリーニングに使用するのに適した組換えＧＬＰ−１受容体は、ＷＯ９３／１９１７５に開示されている。多くのＧＬＰ−１アゴニストが、知られており、当業技術内に記載されている。ＧＬＰ−１アゴニストを開示する公開特許明細書の例としては、以下の、ＷＯ２００２／６７９１８、ＷＯ２００２／６６４７９、ＷＯ２００２／０３９７８、ＷＯ２００１／８９５５４、ＷＯ２００１／１４３８６、ＷＯ２００１／６６１３５、ＷＯ２００１／３５９８８、ＷＯ２００１／１４３６８、ＷＯ２００１／０４１５６、ＷＯ２０００／７８３３３、ＷＯ２０００／５９８８７、ＷＯ２０００／４２０２６、ＥＰ ０９５５３１４、およびＷＯ９９／４３７０７が挙げられる。ＧＬＰ−１アゴニストの例には、Arg34, Lys26(N-ε-(γ-Glu(N-α-ヘキサデカノイル)))-GLP-1 (7-37), IP7-GLP-1 (7-37)OH がある。
【００６３】
ＯＸＭと共にＰＹＹまたはそのアゴニストを使用するのが有利になり得る。ＰＹＹは、作用の持続時間を有し、例えば、末梢的に投与されると、それが循環血液から取り除かれた後も、例えば投与後２４時間まで作用し続ける。従って、ＰＹＹは、毎日２回の投与量で、または1回の投与量でさえ、投与すると効果的である。以下によって限定されずに、ＯＸＭは、長時間持続し得ない即時の効果を有するように思われる。ＯＸＭは、毎日数回、例えば食事の前に投与され得る。短時間作用性のＯＸＭとの長時間作用性のＰＹＹの使用は、使用者の必要に対する投与処方(regime)の「微調整」を可能とする。
【００６４】
ＰＹＹは、ポルコイン(porcoine)腸からもともと単離された３６−残基ペプチドアミドである(Tatemoto et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 79:2514, 1982)。ここで使用されるような用語は、任意の種から得られたまたは由来するＰＹＹを含む。従って、ＰＹＹは、以下の配列、SEQ ID NO: 8：
Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr、SEQ ID NO: 8、
を有する、ヒト(human)の全部の長さのポリペプチド、および、例えば、ネズミ(murine)、ハムスター(hamster)、ニワトリ(chicken)、ウシ亜科(bovine)、ラット(rat)、およびイヌ(dog)を含むＰＹＹの種の変形物(variations)、を含む。一実施態様においては、ＰＹＹアゴニストは、ＮＰＹを含まない。また、ここに使用されているようなＰＹＹという用語は、ＰＹＹ3-36を含む。ＰＹＹ3-36を使用するのが有利となり得る。ＰＹＹアゴニストは、ＰＹＹに特異的に結合する受容体に結合し、ＰＹＹの効果を誘発する、任意の化合物である。一実施態様では、ＰＹＹアゴニストは、食物摂取、カロリーの摂取、または食欲に影響を及ぼすこと、および、Ｙ受容体効力検定において特異的に結合するかあるいは標識化ＰＹＹとの競合結合効力検定などにおいてＰＹＹと結合しようと競合すること、の少なくとも一方を行う化合物である。ＰＹＹアゴニストは、限定される訳ではないが、Ｙ２受容体に結合する化合物を含む。
【００６５】
ＰＹＹアゴニスト、およびＰＹＹアゴニストとして使用され得る化合物は、当業技術内に開示されている。例えば、有用なＰＹＹアゴニストとして、米国特許第５，０２６，６８５号； 米国特許第５，５７４，０１０号； 米国特許第５，６０４，２０３号； 米国特許第５，６９６，０９３号； 米国特許第６，０４６，１６７号に記載されているようなＹ２特異的ＮＰＹペプチドアゴニストが考慮されている。上述したＯＸＭの変異物(variants)および修飾体(modifications)に類似したＰＹＹの変異物および神経ペプチドＹの変異物も使用され得る。
【００６６】
所望ならば、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストの両方とともに使用できる。
【００６７】
ＯＸＭ、およびＧＬＰ−１またはそのアゴニスト、およびＰＹＹまたはそのアゴニストの任意の組み合わせの使用は、例えば上述したように、その単独での使用に比較して、これらの任意の薬剤の効果を高めるように機能し得る。代替としてまたは追加して、２つまたは３つの薬剤を組み合わせて使用することによって、薬剤を単独に使用したときのどのような「逸散(escape)」の傾向も低減される。「逸散」という用語は、時間の経過による薬剤の効果の低減を表すのに使用される。例えば、上述した薬剤のいずれか１つを単独で使用した場合は、その効果は、時間と共に低減し得る。それに加えて他の薬剤の一方または両方を使用することによって、このような効果の低減の傾向が、低減または防止され得る。例えば、ＰＹＹは、持続効果を有し、長期間使用できる。ＰＹＹの効果が、万一低減すると思われる場合、あるいはそのようなどのような効果の低減も低減または防止するために、ＰＹＹに加えてＯＸＭを投与できる。ＧＬＰ−１も、ＯＸＭと共に、またはＯＸＭおよびＰＹＹと共に、同じ目的で使用できる。
【００６８】
所望ならば、限定される訳ではないが、付加的な食欲抑制剤などの１つまたは複数の薬剤も投与できる。付加的な食欲抑制剤の特定の非限定的な例としては、アンフェプラモン（ジエチルプロピオン）、フェンテルミン、マジンドール、および、フェニルプロパノールアミン、フェンフルラミン、デキスフェンフルラミン、フルオキセチンが挙げられる。
【００６９】
他の薬剤と組み合わせて使用するとき、ＯＸＭは、他の薬剤と同時に、または実質的に同時に、あるいは、任意の順序で逐次に、投与され得る。ＯＸＭと他の薬剤とは、単一の製薬組成物で、または別々の組成物で投与でき、またそれらは、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。全ての活性薬剤を単一の組成物で投与するのが、一般により都合がよい。しかしながら、いくつかの場合には、異なる経路で活性剤を投与するのが必要または適切になり得る。例えば、ペプチドは、特別な方法で修飾あるいは処方しない限り、一般に経口投与では安定でなく、従って、一般に非経口経路を介して投与する必要がある。いくつかのアゴニスト、例えば、ＧＬＰ−１アゴニストは、経口投与するときに安定な化学的化合物である。ＯＸＭを非経口で、また他の成分を非経口経路によって投与するのが適切になり得る。
【００７０】
本発明の好ましい態様に従うと、治療効果量のＯＸＭまたはそのアゴニストが、治療効果量のＧＬＰ−１またはそのアゴニストとＰＹＹまたはそのアゴニストとの一方または両方と共に投与される。「ＧＬＰ−１／ＰＹＹ」という用語がここでは、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストとの一方または両方を意味するのに使用される。
【００７１】
ＯＸＭまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、同時に、または実質的に同時に、あるいは、任意の順序で逐次に、投与され得る。ＯＸＭまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、単一の製薬組成物で、または別々の組成物で投与でき、またそれらは、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。
【００７２】
ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとが、単一の製薬組成物で投与されることになる場合は、この組成物は、ＯＸＭまたはそのアゴニストに対して上述した任意の組成物とすることができる。組成物は、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとの同時のまたは実質的に同時の投与を可能とし得る。所望ならば、ＯＸＭと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、組成物内において、例えば、タブレットの別々の層、または、カプセル内の別々の顆粒に区分することができる。所望ならば、そのような区分は、組成物に異なる放出特性を与えて、ＯＸＭ成分と、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとの供給を異なる時間に、例えば逐次的に可能とするように、設計することができる。
【００７３】
代替として、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、別々の製薬組成物、例えば、ＯＸＭまたはそのアゴニストに対して上述した任意の製薬組成物で処方できる。このような別々の組成物は、同時に、または実質的に同時に投与でき、あるいは、それらは、任意の順序で逐次に投与できる。例えば、ＰＹＹは、毎日２回、または１回ですら投与でき、ＯＸＭは、例えば食事前に毎日数回まで投与される。
【００７４】
別々に投与する場合は、逐次であろうと、同時（または実質的に同時）であろうと、ＯＸＭまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１／ＰＹＹとは、例えば上述したように、同じ経路によってあるいは異なる経路によって投与できる。
【００７５】
上述したように組み合わせ療法で使用するとき、ＯＸＭは、単独で使用するとき末梢投与に関連して上に開示したような投与量で使用できる、すなわち、ＯＸＭは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から１２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上下の範囲の任意の組み合わせ内にある。
【００７６】
ＧＬＰ−１またはそのアゴニストは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．４ｎｍｏｌ以上、例えば０．６ｎｍｏｌ以上、例えば０．８ｎｍｏｌ以上、例えば１．０ｎｍｏｌ以上、例えば１．２ｎｍｏｌ以上、例えば１．４ｎｍｏｌ以上、例えば１．６ｎｍｏｌ以上、例えば１．８ｎｍｏｌ以上、例えば２．０ｎｍｏｌ以上、例えば２．２ｎｍｏｌ以上、例えば２．４ｎｍｏｌ以上、例えば２．６ｎｍｏｌ以上、例えば２．８ｎｍｏｌ、例えば３．０ｎｍｏｌ以上、例えば３．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与できる。使用される量は、体重１ｋｇ当たり３．０ｎｍｏｌ以下、例えば、体重１ｋｇ当たり、２．８ｎｍｏｌ以下、例えば２．６ｎｍｏｌ以下、例えば２．４ｎｍｏｌ以下、例えば２．２ｎｍｏｌ以下、例えば２．０ｎｍｏｌ以下、例えば１．８ｎｍｏｌ以下、例えば１．４ｎｍｏｌ以下、例えば１．２ｎｍｏｌ以下、例えば１．０ｎｍｏｌ以下、例えば０．８ｎｍｏｌ以下、例えば０．６ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下とすることができる。投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり０．１から３．２ｎｍｏｌの範囲内、例えば、上に与えられた上部および下部の範囲の任意の組み合わせ内にある。
【００７７】
ＰＹＹまたはそのアゴニストは、ＧＬＰ−１に対して上に開示した範囲内の投与量で使用できる。さまざまな薬剤の投与量は、互いに独立し得るものであり、例えば、等モル投与量を使用でき、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹまたはそのアゴニストとの等モル投与量を使用できる。投与量は、個別の基準で、または、たいてい７０または７５ｋｇ対象である典型的な対象を基準として計算できる。
【００７８】
本発明のさらなる実施態様は、オキシントモジュリンと、任意の仕方で体重と食物摂取の一方または両方に対する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤、例えば、以下の効果すなわち、哺乳動物特にヒトの、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有する薬剤とを、製薬上適した担体との混合または組み合わせで、含む製薬組成物である。薬剤は、上に定義したようなものであり、例えば、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストと、ＰＹＹそのアゴニストとの一方または両方である。組成物は、例えば、ＯＸＭ製薬組成物に対して上述したようなものとすることができる。ＯＸＭおよび他の薬剤の投与量は、例えば、上述したようなものである。
【００７９】
末梢投与のための単位剤形での製薬製剤は、上に与えられた１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されたＯＸＭの量を含む。一般に、投与量は、７５ｋｇ対象を基準として計算され得る。例えば皮下投与のための組成物は、７５ｋｇ対象を基準として計算された、１００ｎｍｏｌから５００ｎｍｏｌすなわち約０．５ｍｇから約２ｍｇの範囲内のＯＸＭの単位投与量を含むことができる。
【００８０】
本発明はまた、上に開示したいずれかの方法に従う対象の治療のための医薬の製造におけるＯＸＭの使用を提供する。
【００８１】
ＯＸＭと、食物摂取を低減する別の薬剤、例えば、ＰＹＹまたはそのアゴニストとＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方とが、ここで説明するような治療における使用のための医薬の製造に使用されるとき、医薬は、上述したように全ての成分を含む単一の製薬組成物とすることができ、または、１つの成分が、ＯＸＭを含む製薬組成物であり、残りの１つまたは複数の成分のそれぞれが、食物摂取を低減する他の１つまたは複数の薬剤を含む製薬組成物である、二成分または複数成分医薬とすることができるが、これについては上記を参照のこと。
【００８２】
医薬は、一成分医薬であろうと、二成分または複数成分医薬であろうと、一般に、その使用に関連する使用説明書と共に梱包されることになる。そのような使用説明書は、１つまたは複数の組成物の投与の時間、投与量、および経路について言及するものである。
【００８３】
他の薬剤と組み合わせて使用するときＯＸＭに関連する方法および組成物に関連する上記の好ましい特徴が、上述したような医薬の製造におけるその使用にもあてはまる。
【００８４】
本発明の全ての実施態様において、これらのための特定の投与量の型(regime)は、最終的には主治医によって決定されるものであるとともに、使用されるＯＸＭ、動物の種類、年齢、体重、症状の度合いおよび適用される治療の度合いの少なくとも一方、医薬の投与の方法、有害な反応および反対の徴候の少なくとも一方、などといった因子を考慮するものである。具体的に規定された投与量の範囲は、標準的に設計された臨床試験(clinical trials)によって決定でき、患者の進行および回復は、十分にモニタされる。
【００８５】
このような試験は、ヒトにおける初期投与量として動物における最大許容投与量の低いパーセンテージを用いる次第に増加する投与量設計を利用し得る。適切な投与量の例は、上に与えられる。
【００８６】
本発明の各態様の好ましい特徴は、必要な変更を加えて、他の態様のそれぞれと同様である。
【００８７】
本発明は、ここで以下の非限定的な実施例において単に一例として説明される。
【００８８】
実施例：
実施例１
ＯＸＭは、ＩＣＶおよびｉＰＶＮの両方で注入されたとき、絶食誘発再摂食において大幅な低減を引き起こす。
【００８９】
ペプチドおよび化学薬品：
ＧＬＰ−１、グリセンチン、グルカゴン、およびＳＰ−１は、Peninsula Laboratories, Inc. (St. Helens, UK)から購入した。ＯＸＭは、IAF BioChem Pharma (Laval, Canada)から購入した。エクセンジン−４(exendin-4)およびエクセンジン−（９−３９）は、Medical Research Council, Hemostasis Unit, Clinical Sciences Center, Hammersmith Hospital, London, UK において、３９６ＭＰＳペプチド合成装置(396 MPS peptide synthesiser) (Advanced ChemTech, Inc.)にＦ−ｍｏｃ化学(F-moc chemistry)を用いて合成され、Ｃ8カラム(Phenomex, Macclesfield, UK)上の逆相ＨＰＬＣにより精製された。正確な分子量は、質量分析法により確認された。全ての化学薬品は、特に言及しない限り、Merck & Co. (Lutterworth, Leicester, UK)から購入した。
【００９０】
動物：
大人のオスのウィスターラット(Wistar rats)(ICSM, Hammersmith Hospital)が、個々のケージ内において温度（２１−２３℃）および光（１２ｈの光、１２ｈの闇）の制御条件下で、食物(RM1 飼料(diet), Special Diet Services UK Ltd., Witham, UK)および水道水への随意(ad libitum)アクセスと共に維持された。動物は、手術からの回復後、研究の完了まで、毎日取り扱われた。実施した全ての動物の処置は、British Home Office Animals (Scientific Procedures Act 1986 (Project License PIL 90/1077)によって承認された。
【００９１】
ＩＣＶおよびｉＰＶＮカニューレ挿入および試験化合物の点滴注入(infusions)：
動物は、永久ステンレス鋼ガイドカニューレ(Plastics One, Roanoke, VA)定位固定埋め込み(stereotactically implanted)ＩＣＶ（脳室内的に(intracerebraventricularly)）またはｉＰＶＮ（視床下部室傍核内へ(into the hypothalamic paraventricular nucleus)）を有した。全ての研究は、２４ｈ絶食後、０９００−１１００ｈの間、初期明相(light phase)において実行され、食物摂取は、注入後１、２、４、８、および２４ｈにおいて測定された。
【００９２】
摂食研究プロトコル：
プログルカゴン誘導生成物および関連ペプチドの食物摂取に対する影響の比較。
【００９３】
研究１ａにおいては、ラットは、１０μｌ食塩水(saline)、ＧＬＰ−１（１３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、グルカゴン（３ｎｍｏｌ）、またはグリセンチン（３ｎｍｏｌ；ｎ＝８／群）がＩＣＶで注入された。
【００９４】
全ての研究においては、以下の配列、SEQ ID NO: 1：
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr
Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln
Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
Arg Asn Lys Asn Asn Ile Ala SEQ ID NO: 1、
を有する、ヒト(human)ＯＸＭが使用された。
【００９５】
以下の配列、SEQ ID NO: 7：
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys
Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg、
SEQ ID NO: 7、
を有する、ヒト（human）ＧＬＰ−１が使用された。
【００９６】
研究１ｂにおいては、ラットは、１μ食塩水、ＧＬＰ−１（１．０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１．０ｎｍｏｌ）、グリセンチン（１．０ｎｍｏｌ）、グルカゴン（１．０ｎｍｏｌ）、またはＳＰ−１（３．０ｎｍｏｌ；ｎ＝１２−１５／群）がｉＰＶＮで注入された。エクセンジン−４は、ＩＣＶで注入されるとき、ＧＬＰ−１より強力に食物摂取を阻害する。従って、エクセンジン−４は、０．０３ｎｍｏｌの投与量においてｉＰＶＮで注入された。
【００９７】
ＯＸＭの増加する投与量の食物摂取に対する影響の調査：
研究２ａにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、またはＯＸＭ（０．３、１、３、または１０ｎｍｏｌ；ｎ＝８／群）がＩＣＶで注入された。研究２ｂにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（１．０ｎｍｏｌ）、またはＯＸＭ（０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌ；ｎ―１２−１５／群）がｉＰＶＮで注入された。ＯＸＭがＧＬＰ−１受容体を介して作用するか評価するために、ＧＬＰ−１受容体アンタゴニストエクセンジン−（９−３９）を用いた研究が行われた。
【００９８】
夜時間摂食および行動分析：
研究３． ＯＸＭが、非特異的な味覚嫌悪を介して食物摂取を阻害すること、および、それが、真の飽満因子でないこと、は可能性がある。従って、ＩＣＶカニューレが挿入されたラットは、暗相(dark phase)の開始(onset)において、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、または食塩水（ｎ＝６／群）を投与された。食物摂取は、注入後１ｈにおいて測定され（研究３ａ）、行動が評価された（研究３ｂ）。ラットは、行動得点記入表(score sheet)を用いて注入後１ｈに観察された。
【００９９】
研究４ａにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（３０ｎｍｏｌ）のみ、がＩＣＶで注入された。研究４ｂにおいては、ラットは、食塩水、ＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）、ＧＬＰ−１（１ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）、ＯＸＭ（１ｎｍｏｌ）およびエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ）、またはエクセンジン−（９−３９）（１０ｎｍｏｌ；ｎ＝１０−１２／群）のみ、がｉＰＶＮ注入された。
【０１００】
受容体結合アッセイ：研究５．
受容体結合アッセイが、最終体積の０．５ｍｌのラット視床下部膜（２００μｇタンパク質）、５００Ｂｑ（１００ｐＭ）［125Ｉ］ＧＬＰ−１、および指定されたような非標識競合ペプチド（ＧＬＰ−１およびＯＸＭ）の中において実行された。膜は、室温で９０分間培養された。結合および遊離放射能が、遠心分離（２分間、４℃）によって分離された。ペレット化された膜は、アッセイ緩衝液（０．５ｍｌ、氷冷(ice-cold)）で洗浄され、膜は、上述したように遠心分離された。上澄みは除去され、ペレット内の放射能が、γ線計数器を用いて計数された。特異的（飽和できる）結合が、１μｍＧＬＰ−１またはＯＸＭの存在（飽和できない結合）と不存在(結合全体)の中に結合された［125Ｉ］ＧＬＰ−１の量との間の差として計算された。全ての曲線は、三重(in triplicate)の点を用いて構成された。ＩＣ50値は、プリズム３プログラム(Prism 3 program)(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)を用いて計算された。
【０１０１】
統計：
食物摂取分析では、データは、平均±ＳＥＭとして表示される。実験群の間の統計差は、ＡＮＯＶＡによって、続いて、事後最小有意差検定(post-hoc least significant difference test)(Systat8. 0, Evanston, IL)によって決定された。行動分析では、データは、範囲と各行動の出現の中央値(median)数として表示される。群間の比較は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定(Mann-Whitney U test)(Systat 8.0)を用いて行われた。全ての場合に、Ｐ＜０．０５が、統計的に有意であると見なされた。
【０１０２】
結果：
プログルカゴン誘導生成物および関連ペプチドの食物摂取に対する影響の比較。
【０１０３】
ＩＣＶ投与．
研究１ａにおいては、ＯＸＭおよびＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）は、再 摂食を有意に低減した。この食物摂取の阻害は、注入後４ｈまで持続した（図１Ａ）。グルカゴンおよびグリセンチン（３ｎｍｏｌ）は、どの時点でも食物摂取に影響しなかった（図１Ａ）。
【０１０４】
ｉＰＶＮ投与．
研究１ｂにおいては、ＯＸＭ、ＧＬＰ−１（３ｎｍｏｌ）、およびエクセンジン−４（０．０３ｎｍｏｌ）も、ｉＰＶＮで投与されたときは、再摂食を阻害した。この阻害は、ＩＣＶで注入されたときより長く注入後少なくとも８ｈ持続した（図１Ｂ）。グリセンチン、グルカゴン（１ｎｍｏｌ）、およびＳＰ−１（３ｎｍｏｌ）は、ｉＰＶＮで注入されたときは、どの時点でも食物摂取に影響しなかった。
【０１０５】
ＯＸＭの増加する投与量の食物摂取に対する影響。
【０１０６】
ＩＣＶ投与．
研究２ａにおいては、ＩＣＶで注入されたときは、ＯＸＭは、投与量に依存した仕方で再摂食を低減し、注入後１、２、および４ｈにおいて，３ｎｍｏｌの投与量で最大効果に到達した（図２Ａ）。
【０１０７】
ｉＰＶＮ投与．
研究２ｂにおいては、食物摂取は、ｉＰＶＮで注入されたＧＬＰ−１およびＯＸＭ（両方とも１ｎｍｏｌ）によって、注入後８ｈまで有意に低減された（図２Ｂ）。
【０１０８】
暗相の開始におけるＩＣＶカニューレ挿入満腹(sated)ラットにおけるＯＸＭの影響：
暗相は、ラットの自然な摂食時間である。従って、このような時間において非絶食動物における推定飽満(putative satiety)因子の影響を評価することは、より生理的な影響を表すであろう。
【０１０９】
ＯＸＭの食物摂取に対する影響．
研究３ａにおいては、初期暗相において注入されるとき、ＧＬＰ−１およびＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）の両方とも、注入後１ｈにおいて食塩水処置動物の食物摂取に比較して有意に食物摂取を低減した［図３Ａ］。
【０１１０】
ＯＸＭのＩＣＶ注入後の行動の観察．
初期暗相におけるＯＸＭ（３ｎｍｏｌ）のＩＣＶ投与は、摂食エピソード(episodes)（研究３ａ）における有意な低減、および、後ろ足で立つ(rearing)行動の増加（研究３ｂ）となった［図３Ｂ］。毛づくろい(grooming)、静止(still)、項垂れ(head down)、穴掘り(burrowing)、または移動(locomotion)エピソードには変化はなかった。
【０１１１】
ＯＸＭがＧＬＰ−１Ｒを介して作用するか評価するために、ＧＬＰ−１Ｒアンタゴニスト、エクセンジン−（９−３９）を用いる研究が行われた。
【０１１２】
ＩＣＶ投与．研究４．
ＧＬＰ−１受容体アンタゴニストエクセンジン−（９−３９）のＧＬＰ−１との１０：１（アンタゴニスト／アゴニスト）の割合でのＩＣＶ共投与(coadministration)は、ＧＬＰ−１の食欲抑制効果を阻害した［図４Ａ］。さらに、エクセンジン−（９−３９）のＯＸＭとの共投与は、ＯＸＭの食欲抑制効果の減衰となった［図４Ａ］。
【０１１３】
ｉＰＶＮ投与．
同様に、ｉＰＶＮで投与されたときは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭの両方の食欲抑制効果は、エクセンジン−（９−３９）と共注入(coinjected)されるときに阻害される［図４Ｂ］。
【０１１４】
受容体結合アッセイ．研究５．
ラット視床下部膜組織標本(preparations)内におけるＧＬＰ−１のＧＬＰ受容体に対する親和性（ＩＣ50）は、０．１６ｎＭであった（図５）。同じ膜組織標本内におけるＯＸＭのＧＬＰ−１受容体に対する親和性は、８．２ｎＭであった（図５）が、これは、ＧＬＰ−１の親和性よりほぼ２桁弱い大きさである。
【０１１５】
検討．
ＯＸＭは、ＩＣＶおよびｉＰＶＮの両方で注入されるとき、絶食誘発再摂食の大幅な低下を引き起こす。この効果は、注入後８ｈまで（ｉＰＶＮ）または４ｈまで（ＩＣＶ）持続された。ＯＸＭの効果は、等モル投与量においてＩＣＶおよびｉＰＶＮで投与されるとき、ＧＬＰ−１の効果とほぼ同じ大きさおよび時間経過である。さらに、ＯＸＭは、暗相の開始における非絶食ラットにおける食物摂取を阻害し、この時、これらのラットは、嫌悪行動の徴候を示さなかった。
【０１１６】
胃粘膜内にはＯＸＭ特異的結合部位(site)があることが示唆された。しかしながら、そのような結合部位は、ＣＮＳ内では同定されなかった。従って、ＯＸＭは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭが摂食研究において類似の強さを有するので、視床下部ＧＬＰ−ＩＲを介してその効果を媒介することが、提案された。ＯＸＭは、ＧＬＰ−ＩＲに対するナノモル親和性（ＩＣ50＝８．２ｎＭ）を有することが示された。この親和性は、ＧＬＰ−１の親和性（ＩＣ50＝０．１６ｎＭ）よりほぼ２桁弱い大きさである。しかもなお、ＧＬＰ−１Ｒに対するこの低減された親和性にもかかわらず、ＯＸＭは、同じ大きさまで食物摂取を低減する。これに対する１つの説明は、ＯＸＭが、視床下部内のＧＬＰ−１Ｒおよびそれ自体の受容体の両方を通して作用し得るであろうということである。従って、ＯＸＭは、ＧＬＰ−ＩＲに対するそのより低い親和性にもかかわらず、ＧＬＰ−１の応答に匹敵する応答を顕在化し得るのであろう。
【０１１７】
エクセンジン−（９−３９）、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストエクセンジン−４の断片(fragment)は、ＧＬＰ−１Ｒにおける強力で選択的なアンタゴニストである。ＧＬＰ−１およびエクセンジン−（９−３９）が共注入されるとき、ＧＬＰ−１の食欲抑制作用は、阻害される。ＯＸＭがエクセンジン−（９−３９）と共注入されるとき、ＯＸＭの食欲抑制効果も完全に阻害される。これは、ＯＸＭがＧＬＰ−１Ｒを介してその効果を媒介するという主張に説得力を加えるものであろう。
【０１１８】
我々は、絶食ラットにおける急性ＩＣＶ注入後のグリセンチンおよびグルカゴンの影響を調べた。これらのペプチドの投与後に、絶食誘発食物摂取に対する影響は、見られなかった。さらに、これらのペプチドが、ｉＰＶＮで投与されたときに、これらのペプチドの影響はなかった。ＳＰ−１、ＯＸＭの推定最小活性構造、がｉＰＶＮで注入されたとき、食物摂取の阻害は観察されなかった。従って、ＯＸＭに見られる効果は、特異的である。
【０１１９】
実施例２
ＯＸＭの末梢投与も、食物摂取および体重増加を低減する。
【０１２０】
ペプチドおよび化学薬品：
ＯＸＭは、IAF BioChem Pharma (Laval, Canada)から購入した。ＧＬＰ−１は、Peninsula Laboratories Inc. (St. Helens, UK)から購入した。エクセンジン（９−３９）は、Medical Research Council, Hemostasis Unit, Clinical Sciences Centre, Hammersmith Hospital, London, UK において、３９６ＭＰＳペプチド合成装置(396 MPS peptide synthesizer) (Advanced ChemTech Inc., Louisville, KY)にＦ−ｍｏｃ化学(F-moc chemistry)を用いて合成され、０．１％トリフルオロ酢酸上へのアセトニトリルの勾配(gradient)を用いてＣ8カラム(Phenomex, Macclesfield, UK)上の逆相ＨＰＬＣにより精製された。正確な分子量は、質量分析法により確認された。全ての化学薬品は、特に言及しない限り、Merck Eurolab Ltd. (Lutterworth, Leicestershire, UK)から購入した。
【０１２１】
動物：
大人のオスのウィスターラット（１８０−２００ｇ）が、個々のケージ内において温度（２１−２３℃）および光（１２ｈの光、１２ｈの闇）の制御条件下で、標準ラット食餌(standard rat chow)(RM1 飼料(diet), Special Diet Services UK Ltd., Witham, Essex, UK)および水への随意アクセスと共に維持された。実施した全ての動物の処置は、British Home Office Animals (Scientific Procedures) Act 1986 (Project Licenses PPL: 90/1077,70/5281 and 70/5516)によって承認された。
【０１２２】
弓状核内カニューレ挿入：
動物は、ブレグマ(bregma)に対して３．３ｍｍ後方かつ０．３ｍｍ側方であって頭蓋の外側表面の９．０ｍｍ下方に位置するカニューレを使用するカニューレ挿入プロトコルを用いて、視床下部の弓状核内へ定位固定埋め込みされた永久留置(indwelling)一側性(unilateral)ステンレス鋼ガイドカニューレ(Plastics One, Roanoke, VA)を有した。
【０１２３】
腹膜内（ＩＰ）注入：
全てのＩＰ注入は、１ｍｌ注射器および２５ゲージ(gauge)針を用いて供給された。注入の最大体積は、５００μｌであり、個々の動物の体重に従って調節された。全てのペプチドは、食塩水に溶解した。
【０１２４】
これらの研究においては、上の第１５および１６頁において与えられる配列を有するヒトＯＸＭおよびヒトＧＬＰ−１が、使用された。
【０１２５】
生体内(in vivo)プロトコル：
１．ＯＸＭの末梢投与の、絶食動物における食物摂取に対する投与量応答影響の調査：
動物は、研究の前に２４時間絶食させた。初期明相(light phase)の間（０９．００−１０．００ｈｒ）に、ラットには、５００μｌの体積で、食塩水、ＧＬＰ−１（陽性の対照として、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）、またはＯＸＭ（１０−３００ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）（ｎ＝１２毎群）の単一ＩＰ注入が与えられた。注入後、動物は、それらの元(home)のケージに戻され、前もって重量測定された量の食餌が与えられた。食物摂取は、注入後１、２、４、８、および２４時間において測定された。
【０１２６】
２．ＯＸＭの末梢投与の、暗相中の非絶食動物における食物摂取に対する影響の調査：
暗相は、ラットにとって「通常(normal)」の摂食時間である。従って、この時間における食物摂食のどのような阻害も、絶食後の再摂食に対する変化よりも生理的であると見なすことができた。動物は、消灯(lights out)前（１８．００−１９．００ｈｒ）に、食塩水、またはＯＸＭ（３−１００ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）（ｎ＝１２毎群）の単一ＩＰ注入を受けた。食物摂取は、消灯後１、２、４、８、および１２時間において測定された。
【０１２７】
３．ＯＸＭの繰り返しＩＰ注入の影響：
４５匹の動物たちは、体重により無作為に次の３つの群（ｎ＝１５毎群）：１）食塩水処置で、食物への随意アクセスの群、２）ＯＸＭ処置（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重毎注入−投与量は前の投与量応答実験に基づく）で、食物への随意アクセスの群、３）食塩水処置であるが、食物は、ＯＸＭ処置群の平均明および暗相食物摂取に制限した群、に分けた。動物は、７日間、毎日２回（０７．００および１８．００ｈｒ）、注入された。食物摂取（ｇ）、体重（ｇ）、および水摂取（ｍｌ）が、毎日測定された。８日目に、動物は、断頭により殺された。精巣上体白色脂肪組織(epididymal white adipose tissue)（ＷＡＴ）および肩甲骨間褐色脂肪組織(interscapular brown adipose tissue)（ＢＡＴ）が、除去され、体脂肪過多症の評価として重量測定された。
【０１２８】
４．ＯＸＭの末梢投与の、胃内容排出(gastric emptying)に対する影響の調査：
動物は、胃を確実に空にするように３６時間絶食させた。初期明相の間（０９：００−１０：００）に、前もって重量測定された量の標準ラット食餌が３０分間許可された。この後、食物は、除去され、再び重量測定された。次に、動物は、食塩水、ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）、またはＣＣＫ−８（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）が、ＩＰ注入された。次に、ラットは、前の摂食研究において用いたのと同じ時間：摂食後１、２、４、または８時間、において殺された（ｎ＝１２毎群毎時点）。ＣＣＫ−８群は、２時間の時点のみにおける実験のための陽性の対照として使用された。動物は、二酸化炭素窒息により殺された。開腹が迅速に行われ、胃が露出された。幽門接合部(pyloric junction)が、結紮され(2.0 Mersilk, Johnson & Johnson, Belgium)、次に、胃−食道接合部(gastro-oesophogeal junction)の結紮が続き、胃が除去された。次に、胃内容物が、除去され、前もって重量測定された計量用舟形容器に置かれ、４８時間の空気乾燥に掛けられた。乾燥した後、内容物は、重量測定され、次に、ラット毎に胃内に残留する半時間再摂食時間中に消化された食餌のパーセンテージが、以下の式：
％胃内残留食物＝（胃内容物の乾燥重量／消化された食物の重量）×１００、
を用いて計算された。
【０１２９】
５．弓状内ＯＸＭの増加する投与量の影響の調査：
弓状内（ＡＲＣ内(Intra-ARC)(iARC)）カニューレ挿入ラット（ｎ＝１２−１５毎群）が、重量により無作為に６つの群に分けられた。初期明相の間（０９００−１０００）に、２４時間絶食ラットが、食塩水、ＯＸＭ（０．０１、０．０３、０．１、０．３、または１．０ｎｍｏｌｅｓ）のｉＡＲＣ注入を受けた。食物摂取が、注入後１、２、４、８、および２４時間において測定された。
【０１３０】
６．末梢的に投与されたＯＸＭが直接、弓状核ＧＬＰ−１受容体を介して作用するかの調査：
弓状核内へカニューレ挿入されたラットが、無作為に６つの群（ｎ＝１０−１２毎群）に分けられた。初期明相の間（０９００−１０００）に、２４時間絶食ラットが、食塩水、またはエクセンジン9-39（５ｎｍｏｌｅｓ）のｉＡＲＣ注入を受け、その後、１５分間後に、食塩水、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇ体重）、またはＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇ毎体重）のＩＰ注入を受けた。注入の詳細は、以下の表１に記載される。
【０１３１】
【表１】
【０１３２】
免疫組織化学(immunohistochemistry)：
ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ注入９０分間後に、ラットは、末期的に麻酔(terminally anaesthetized)され、０．１Ｍリン酸塩緩衝食塩水(phosphate buffered saline)（ＰＢＳ）、次に、４％ＰＢ−ホルマリン（ＰＢＦ）が、心臓を通して灌流(transcardially perfused)された。脳は、除去され、ＰＢＦ内で一夜、後固定(post-fixed)され、次に、一夜、ＰＢ−スクロース（２０％ｗ／ｖ）に移された。脳および脳幹の４０μｍ冠状切片が、凍結ミクロトーム上で切断され、アビチン−ビオチン−ペルオキシダーゼ法(avitin-biotin-peroxidase method)によりｆｏｓ様(fos-like)免疫反応性（ＦＬＩ）に対して染色された。次に、切片は、ポリ−Ｌ−リシン被覆スライドガラスに載せられ、増加する濃度のエタノール（５０−１００％）中で脱水され、キシレン中で脱脂(delipidated)され、ＤＰＸ試料接着物質(mountant)を用いてカバーガラスで覆った。スライドガラスは、光学顕微鏡(Nikon Eclipse E-800)を用いてＦＬＩ陽性核が検査され、画像が、顕微画像装置(microimager)(Xillix Microlmager)を用いて撮影された。視床下部および脳幹内のＦＬＩ陽性核の数は、実験群に対しては予備知識のない(blinded)研究チームとは独立したメンバーにより計数された。切片毎のＦＬＩ陽性核平均数が、計算され、各動物に対して整数で表示された。
【０１３３】
視床下部外植片静止培養(hypothalamic explant static incubation)：
静止培養システムが使用された。オスのウィスターラットが、断頭により殺され、脳全体が直ちに除去された。脳は、腹面(ventral surface)を最も上にして載せられ、振動ミクロトーム(Microfield Scientific Ltd. , Dartmouth, UK)内に置かれた。１．７ｍｍの薄片が、基底(basal)視床下部から取られ、ウィルス環(Circle of Willis)に対して側方に閉塞されて、９５％Ｏ2および５％ＣＯ2と平衡に保たれた１ｍｌの人工脳脊髄液を含む室(chambers)内で培養された。視床下部薄片は、内側視索前野(medial pre-optic area)、ＰＶＮ(室傍視床下部核(paraventricular hypothalamic nucleus))、背内側核(dorsomedial nucleus)、腹内側核(ventromedial nucleus)、外側視床下部(lateral hypothalamus)、およびＡＲＣを含む。管は、３７℃に維持された水浴中の乗せ台(platform)上に置かれた。最初の２時間の平衡時間後に、各外植片は、試験時間に掛けられる前に、６００μｌのａＣＳＦ内で４５分間（基底時間）、培養された。ＯＸＭ、１００ｎＭが、ＧＬＰ−１受容体に対するそのＩＣ50の濃度の１０倍の濃度を表す投与量として使用された。組織の生存率は、５６ｍＭ ＫＣｌを含有するａＣＳＦへの最後の４５分間の曝露によって確認された。各実験時間の最後においては、ａＣＳＦは、除去され、ラジオイムノアッセイによるαＭＳＨ免疫反応性の測定まで、−２０℃において貯蔵された。
【０１３４】
αＭＳＨ−ＩＲを測定するためのラジオイムノアッセイ：
αＭＳＨは、Chemicon International Inc.からの抗体を使用して発現された組織内(in-house)ラジオイムノアッセイを用いて測定された。
【０１３５】
統計分析：
ＩＰおよびｉＡＲＣ摂食研究からのデータは、事後ＬＳＤ（最小有意差）検定を用いるＡＮＯＶＡにより分析された。異なる処置群からの脂肪体(fat pad)重量が、不対(unpaired)ｔ検定を用いて分析された。視床下部外植片培養研究からのデータは、各外植片がそれ自体の基底時間と比較され、対(paired)ｔ検定により分析された。全ての場合に、Ｐ＜０．０５が、統計的に有意であると見なされた。
【０１３６】
結果：
１．絶食動物におけるＯＸＭの末梢投与の影響：
ＯＸＭ（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、および３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）の腹膜内投与は、食塩水対照と比較して、注入後１時間における２４時間絶食動物の再摂食において有意な阻害を引き起こした（１時間：食塩水、６．３±０．２ｇに対して、ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ、５．４±０．２ｇ（Ｐ＜０．０５）、３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、４．５±０．２ｇ（Ｐ＜０．０５））。１００ｎｍｏｌ／ｋｇにより引き起こされた食物摂取の低減は、注入後８時間まで持続された。しかしながら、ＯＸＭの最大投与量（３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）は、注入後２４時間、食物摂取を有意に阻害し続けた（８時間：食塩水、１７．５±０．７ｇに対して、ＯＸＭ、３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、９．５±０．６ｇ；Ｐ＜０．０５）（図６ａ）。３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１０ｎｍｏｌ／ｋｇは、調査されたどの時点でも食物摂取を変化させなかった。
【０１３７】
２．ＯＸＭの末梢投与の、非絶食動物における暗相中の食物摂取に対する影響：
ＯＸＭ、３および１０ｎｍｏｌ／ｋｇは、調査されたどの時点でも、暗相の直前に注入された夜間摂食(nocturnally feeding)ラットにおいて食物摂取に影響しなかった。しかしながら、ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇは、注入後２時間まで食物摂取を有意に阻害した（２時間：食塩水、５．８±０．４ｇに対して、ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、４．５±０．４ｇ；Ｐ＜０．０５）。食物摂取は、注入後４時間、低減されたが、これは、有意ではなかった。ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇは、暗相の全体を通して食物摂取を有意に阻害した（８時間：食塩水、１６．９±０．５ｇに対して、ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、１４．１±０．８ｇ；Ｐ＜０．０５）（図６ｂ）。
【０１３８】
３．ＯＸＭの繰り返しＩＰ投与の影響：
ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）の７日間、毎日２回のＩＰ注入は、食塩処置対照動物に比較して、累積日毎(cumulative daily)の食物摂取における有意な低減を引き起こした（累積食物摂取７日目：食塩水、１８０±４．３ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、１６８±４．６ｇ；Ｐ＜０．０１）（図７ａ）。さらに、ＯＸＭ処置動物は、食塩水対照よりゆっくりと有意に体重が増加した（累積体重増加７日目：食塩水、３７．６±１．９ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、２１．０±１．５ｇ；Ｐ＜０．００５）。また、食物制限「対飼育(pair fed)」動物は、同じ食物摂取を受けているにもかかわらず、ＯＸＭ処置動物ほどゆっくりとは体重が増加しなかった（７日目：対飼育、３３．５±２．０ｇ；食塩水（随意摂食）に対して、Ｐ＝ＮＳ、ＯＸＭに対して、Ｐ＜０．０５）（図７ｂ）。さらに、長期に亘るＯＸＭは、食塩水注入対飼育動物には見られない、脂肪過多症の低減を引き起こした（表２）。水摂取は、実験の１日目および２日目でＯＸＭ処置動物において有意に低減した（１日目：食塩水、２８．１±１．３３ｍｌに対して、ＯＸＭ、２４．１±１．２８ｍｌ；Ｐ＜０．０５）。その後の日々においては、食塩水処置動物に比較して毎日の水摂取に増加はなかった（３−６日目）。しかしながら、７日目まで、食塩水およびＯＸＭ処置群の間には水摂取に差はなかった（図示せず）。「対飼育(pair fed)」ラットとＯＸＭ処置ラットとの間の体重差は、２つの群が同じ量の食物を食べているので、増加したエネルギー消費に起因する。
【０１３９】
【表２】
【０１４０】
表２は、７日間、毎日２回の食塩水またはＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与の、食物制限および随意摂食ラットにおける、精巣上体ＷＡＴおよび肩甲骨間ＢＡＴの重量に対する影響。
【０１４１】
４．ＯＸＭの食欲抑制効果に対する遅延(delayed)胃内容排出の役割：
食物が３６時間絶食させたラットに与えられた１時間後では、ＧＬＰ−１処置動物の胃の内容物の乾燥重量（３０分間の摂食時間中に消費された食物のパーセンテージとして）は、食塩水処置動物のものより有意に大きかった（１時間：食塩水、６５．８±１．６ｇに対して、ＧＬＰ−１、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、７６．９±２．７ｇ；Ｐ＜０．０１）が、これは、ＧＬＰ−１が胃内容排出において有意な低減を引き起こしたことを示唆する。ＯＸＭ処置動物の胃の内容物は、食塩水処置対照のものより多量であったが、これは、統計的に有意ではなかった（１時間：食塩水 ６５．８±１．６ｇに対して、ＯＸＭ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、７２．０±１．４ｇ；Ｐ＝０．０７）。摂食後２時間では、ＯＸＭは、食塩水処置動物に比較して、胃の内容物に影響しなかった。しかしながら、この時点での陽性の対照、ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）が注入された動物は、有意により多量の胃内容物を有していた（２時間：食塩水、３８．５ｇに対して、ＣＣＫ、１５ｎｍｏｌ／ｋｇ、６４．７±６．４ｇ；Ｐ＜０．０１）が、これは、ＣＣＫが、胃内容排出の速度において有意な低減を引き起こしたことを示唆する。摂食後４または８時間においては、食塩水処置動物に比較して、胃の内容物に対するＯＸＭの影響はなかった（図８）。
【０１４２】
５．弓状核内注入ＯＸＭの増加する投与量の影響の調査：
食物摂取は、２４時間絶食後の再摂食の１時間目の間に、ｉＡＲＣで投与されたＯＸＭの全ての投与量（０．０１ｎｍｏｌｅｓを除く）によって有意に阻害された（１時間：全て、食塩水、７．７±０．２ｇに対して、ＯＸＭ ０．０３ｎｍｏｌｅｓ、６．１±０．５ｇ（Ｐ＜０．０５）；０．１ｎｍｏｌｅｓ、５．６±０．４ｇ（Ｐ＜０．０５）；０．３ｎｍｏｌｅｓ、５．１±０．６ｇ（Ｐ＜０．０１）；１．０ｎｍｏｌｅ、３．６±０．５ｇ（Ｐ＜０．００５））（図９）。ＯＸＭ０．３および１．０ｎｍｏｌｅｓは、注入後８時間まで食物摂食を有意に阻害し続けた。注入後２４時間では、食物摂取は、ＯＸＭ１．０ｎモｍｏｌｅｓにより阻害されたが、これは、有意ではなかった（２４時間：食塩水、４０．８±１．６ｇに対して、ＯＸＭ、１．０ｎｍｏｌｅ、３７．８±３．０ｇ；Ｐ＝ＮＳ）。
【０１４３】
６．末梢的に投与されたＯＸＭが、弓状核ＧＬＰ−１受容体を介して作用するかの調査：
ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）およびＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）の両方の腹膜内投与は、暗相内への１時間の食物摂取の有意な低減を引き起こした（１時間：食塩水、９．２±０．３ｇに対して、ＧＬＰ−１、５．０±０．６ｇ、ＯＸＭ、５．１±０．４ｇ）。しかしながら、ＯＸＭのＩＰ投与により引き起こされた食欲不振は、ＡＲＣ内へ直接注入されたＧＬＰ−１受容体アンタゴニスト、エクセンジン９−３９（３００ｎｍｏｌ／ｋｇ）の前投与により阻害された（表３および図１０）。ＩＰ ＧＬＰ−１による食物摂取の阻害は、エクセンジン９−３９の前ｉＡＲＣ投与によっては影響されなかった。
【０１４４】
【表３】
【０１４５】
表３は、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、または食塩水のＩＰ投与の１５分間前に注入されたエクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌｅｓ）または食塩水のｉＡＲＣ投与の１時間食物摂取（ｇ）に対する影響（Ｓ＝食塩水、Ｇ＝ＧＬＰ−１（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｏｘ＝ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）、Ｅｘ＝エクセンジン９−３９（５ｎｍｏｌｅｓ））。
【０１４６】
７．応答ＩＰ ＯＸＭにおける視床下部内のＦＬＩ発現のマッピング：
ＩＰ ＯＸＭ投与（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）後、ＦＬＩの濃厚(dense)な染色が、ほとんどもっぱら視床下部弓状核内において見出された（図１１ａ）。他の視床下部核（ＰＶＮ（室傍視床下部核）、ＤＭＨ（背内側視床下部核(dorsomedial hypothalamic nucleus)）、ＶＭＨ（腹内側視床下部核）(ventromedial hypothalamic nucleus)）は、特異的ｃ−ｆｏｓ染色を示さなかった。
【０１４７】
脳幹においては、ＩＰ ＣＣＫ（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）は、最も著しくは、ＮＴＳ（孤束核(nucleus tractus solitarius)）および最後野(area postrema)において、ＦＬＩの濃厚な染色を引き起こした（図６ｂ）。しかしながら、ＩＰ 食塩水およびＩＰ ＯＸＭ（５０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のどちらも、調査された同じ脳幹核内においてｃ−ｆｏｓ発現の特異的増加は引き起こさなかった（図１１ｂ）。
【０１４８】
８．ＯＸＭと共に培養されたときの視床下部外植片からのα−ＭＳＨ放出の変化：
視床下部外植片とＯＸＭ（１００ｎＭ）を培養することは、基底放出に比較して、α−ＭＳＨの放出において有意な増加を引き起こした（α−ＭＳＨ：２．６±０．５ｆｍｏｌ／外植片に対して、ＯＸＭ、１００ｎＭ、４．１±０．６ｆｍｏｌ／外植片；Ｐ＜０．００５）。外植片生存率が、５６ｍＭ ＫＣｌと共に培養することにより評価され、生存率は、外植片の＞８０％において確認された。生存可能でない外植片は、分析から除外された。
【０１４９】
検討．
ＯＸＭの末梢投与は、ラットにおいて食物摂取の低減を引き起こす。これは、明相における絶食に続き、夜間の摂食相の間に見られた。食欲抑制効果は、強力であり、２４時間までの長さの時間、持続された。ＯＸＭの７日間、毎日２回のＩＰ投与は、過耐性なしで、食塩水で処置されたものに比較して、毎日の食物摂取における低減を引き起こした。ＯＸＭで処置された動物は、２群とも同一の毎日のカロリーの摂取を受けているにもかかわらず、対飼育動物よりも体重増加が有意に少なかった。ＯＸＭの腹膜内投与は、水摂取を全く一過性で低減したとはいえ、これは持続されず、このことは、体重増加速度の低下が、脱水に起因しなかったことを示唆する。
【０１５０】
長期に亘る研究の結論では、精巣上体ＷＡＴおよび肩甲骨間ＢＡＴが、除去され、重量計量された。ＯＸＭ処置動物の全ての脂肪体の重量には、同一の食物摂取にもかかわらず、対飼育動物に比較して低減があったことが見出された。従って、末梢ＯＸＭ投与も、他の代謝パラメータに影響していると思われる。
【０１５１】
飽満に対する主要な誘因は、脳幹活性化につながる迷走神経媒介機構(vagally-mediated mechanism)を介する遅延された胃内容排出である。ＧＬＰ−１およびＯＸＭの両方が、齧歯類およびヒトにおける胃内容排出の強力な阻害物質であり、ＧＬＰ−１の場合は、これが、ＧＬＰ−１が飽満を促進する支配的な機構であると考えられる。我々は、ＯＸＭが、同じ仕方で作用しており、胃内容排出に対するその影響が、持続された食欲抑制の原因であったとの仮説を立てた。しかしながら、ＯＸＭの末梢投与は、食物の再導入後の第１の時間における胃内容排出のわずかな遅延につながるが、これは有意ではなく、影響は一時的であった。これは、ＯＸＭがゆっくりと胃内容排出を行うが、食物摂取の強固でかつ持続された阻害の原因とはなりそうにないことを示唆した。
【０１５２】
我々は、ＯＸＭの末梢投与が、ほとんどもっぱらＡＲＣ内においてＦＬＩを増加させることをここに報告する。さらに、我々は、ＯＸＭと共に視床下部外植片を培養することによって、視床下部外植片からのＰＯＭＣ（プロ−オピオメラノコルチン）誘導生成物、αＭＳＨの放出の有意な増加が生じたことを見出した。ＩＰ ＯＸＭは、迷走神経媒介情報を統合する際に重要であると知られている領域、ＮＴＳおよびＡＰ内におけるＦＬＩの発現に影響しなかったが、これは、ＯＸＭがこれらの経路を介して作用していないとの考えをさらに強化する。
【０１５３】
脳幹内の核は、ＧＬＰ−１作用の一次部位であり、情報は、次に、視床下部ＰＶＮへと中継され、そこで、その食欲抑制効果が、媒介される、と考えられる。ＯＸＭのＡＲＣ内への直接注入は、非常に低い投与量においてでさえ、食物摂取の強固でかつ持続された阻害を引き起こしたが、これは、ＡＲＣがＯＸＭの作用部位であるとの仮説をさらに支持する。ＯＸＭの末梢投与により引き起こされる食欲抑制効果は、ＡＲＣ内へのエクセンジン９−３９の前投与により阻害された。しかしながら、興味深いことには、末梢的に投与されたＧＬＰ−１の食欲抑制作用は阻害されなかった。この発見は、ＯＸＭがＡＲＣ内のＧＬＰ−１受容体を介して作用していることを強く示している。さらに、それは、ＧＬＰ−１およびＯＸＭの作用を媒介する別個の経路を同定した。
【０１５４】
総合すると、これらのデータは、ＯＸＭが食物摂取および体重維持の長期および短期の両方の調節において潜在的に重要であることを示す。胃内容排出の遅延および脳幹核の活性化を含む「従来の」飽満経路を介する食欲の低減よりは、循環ＯＸＭは、核内のＰＯＭＣ（プロ−オピオメラノコルチン）ニューロンを潜在的に活性化させることにより、ＡＲＣとの直接相互作用を介して、その食欲抑制効果を媒介している。従って、ＯＸＭは、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療または防止に有用であり得るとともに、さらには、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための新規な標的となる。
【０１５５】
実施例３
ＯＸＭ点滴注入のヒト対象の食物摂取に対する影響の調査。
【０１５６】
方法：
研究１．
研究設計は、二重盲式プラシーボ対照交差であったが、これについては図１２を参照のこと。１３人の健康な志願者（年齢 ２７±２歳； ＢＭＩ ２５．３±０．７ｋｇ-2）が、任意の順序で、≧１週間隔てて、ＯＸＭ（３．０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎ）の９０分間の点滴注入と、食塩水の点滴注入とを受けた。ＯＸＭはヘマクセル(haemaccel)（体積で５％）含有する食塩水に溶解して、注射器および管への吸着を低減した。志願者は、各点滴注入前の３日間およびその後の２４時間、食事日誌に完成させた。対象は、各点滴注入の前の日々に類似の食物に従うように指示された。彼らは、各点滴注入前の夜に同一の食事（彼らの選択による）を消費し、９ｐｍから絶食した。
【０１５７】
各研究日に、静脈内カニューレが、腕静脈内へ両側に挿入されたが、一方は、点滴注入の投与のためであり、他方は、血液採取のために使用された。対象には、心臓モニターが取り付けられ、１５分間毎に血圧が測定された。血液試料が、５，０００カリクレイン阻害物質単位(Kallikrein Inhibitor Units)（０．２ｍｌ）のアプロチニン(aprotinin)（トラシロル、バイエル (Trasylol, Bayer)）を含むリチウム−ヘパリン管（リップ社、英国(LIP LTD, UK)）内に、３０分間毎に収集され、氷上で貯蔵された。遠心分離後、血漿は、すぐに分離され、分析まで−７０℃で貯蔵された。
【０１５８】
点滴注入の終了１５分前に、対象には、全ての食欲が満たされることができるほどかつ対象が彼ら自身の食物摂取を評価できないほど過剰に提供されるビュッフェ式食事が提供された。選択肢は、チキンカレー、あっさりと茹でたライス、フルーツサラダ、および、さまざまなミニチョコレートバーおよび、フルーツ風味の甘いものお菓子から成っていた。水は、自由に入手できた。食物摂取は、食事の前後に食物および水の重量を軽量することにより計算した。
【０１５９】
ビュッフェ式食事後の２４時間の食物摂取が、食事日誌に記録され、エネルギー摂取は、ダイエットプランプログラム(Dietplan program)（フォレストフィールドソフトウェア社、ウェストサセックス、英国(Forestfield Software LTD, West Sussex, UK)）の助けを借りて計算された。
【０１６０】
３０分間毎に対象は、空腹、飽満、満腹感、予想食物消費、および悪心を評価する視覚的アナログ目盛り(visual analogue scales)（ＶＡＳ）を完成させた。これらは、最も陽性および陰性の評価を示す文言が各端部に記載された１００ｍｍの目盛りから成っていた。
【０１６１】
研究２．
８人の健康な絶食した志願者が、ビュッフェ食事前３０分に１００ｎｍｏｌから２５０ｎｍｏｌ（標準食塩水中）の投与量でＯＸＭを皮下投与された以外は、研究１についてと同じプロトコルに従った。
【０１６２】
結果：
研究１．
ＯＸＭ点滴注入は、ビュッフェ式食事において消費されたカロリーの有意な落ち込みとなった（１９２±５９ｋｃａｌ； １７．６±５．７％）。１２／１３対象が、ＯＸＭ点滴注入で消費されたカロリーの低下を示したが、図１３を参照のこと。ＯＸＭ点滴注入は、主観的空腹指数(scores)の有意な落ち込みを伴ったが、図１４（ＶＡＳ「今あなたは空腹ですか？」６０分間Ｐ＜０．０５）を参照のこと。ＯＸＭ点滴注入の有害な影響はなかった。特に、吐き気(sickness)（悪心）の感情に対するＯＸＭの影響はなかった（ＶＡＳ「今あなたはどのていど吐き気を感じますか？」７５分間Ｐ＝０．８)。影響は、迅速であるように思われる。
【０１６３】
研究２．
得られた結果は、表４に示す。
【０１６４】
【表４】
【０１６５】
検討．
ヒト対象に対するＯＸＭの非経口投与が、消費されたカロリーの低下と、望ましくない副作用なし特に吐き気（悪心）の感情なしに空腹の主観的感覚の有意な低減と、になるという実証は、哺乳動物の肥満などの過剰体重の治療または防止におけるＯＸＭの利用、および、哺乳動物の肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための新規な標的としてのＯＸＭの利用、の確認となる。
【０１６６】
実施例４
ＯＸＭのＩＰ投与後の血漿ＯＸＭ免疫反応性(immunoreactivity)（ＩＲ）およびグレリン(ghrelin)免疫反応性ＩＲ（グレリン−ＩＲ）レベルの調査。
【０１６７】
方法：
ＯＸＭまたは食塩水を、絶食させたラットに投与して、ＩＰ ＯＸＭ後の血漿ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリンＩＲレベルを調査した。血漿ＯＸＭ−ＩＲレベルは、先に説明したアッセイを用いて測定したが、エンテログルカゴン(enteroglucagon)（すなわち、Ｎ−末端延長ＯＸＭ(N-terminally elongated OXM)も測定する(Ghatei MA, Uttenthal LO, Christofides ND, Bryant MG, Bloom SR 1983 J Clin Endocrinol Metab 57:488-495)。ＯＸＭ−ＩＲアッセイは、５．７％のアッセイ内偏差(intra-assay variation)で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。グレリンラジオイムノアッセイ(English PJ, Ghatei MA, Malik IA, Bloom SR, Wilding JP 2002 J Clin Endocrinol Metab 87:2984)は、オクタノイルおよびデス−オクタノイル(des-octanoyl)グレリンの両方（全グレリン）を測定した。それは、任意の既知の胃腸または膵臓ペプチドホルモンと交差反応しなかったが、９．５％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。
【０１６８】
ラット（ｎ＝１０毎群）には、明相の開始において、ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）または食塩水が、ＩＰ注入された。ラットは、ＩＰ注入後３０分および９０分に断頭され、動脈幹(trunk)血液が収集された。全ての血漿が収集され、ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリン−ＩＲが定量されるまで、−２０Ｃにおいて凍結された。注入後の期間全体の間、ラットは、絶食させたままであった。ＯＸＭの時点と投与量は、前の摂食研究を参照することにより選択された。
【０１６９】
消化管ホルモンの放出は、食物の含有量、特に脂肪含有量によって影響を受けることが見出された。この理由で、さらなる３つの群（ｎ＝１０）、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット、ｂ） 高脂肪ラット食餌（４５％脂肪、リサーチ飼料社(Research Diets Inc)）を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット、ｃ） 一夜絶食させ、点灯の際に、２時間、４５％高脂肪ラット食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられたラット、が調査された。ラットは、この２時間の高脂肪食事（すなわち、明相への２時間）の最後において断頭された。全ての血漿が収集され、ＯＸＭ−ＩＲおよびグレリン−ＩＲが定量されるまで、−２０℃において凍結された。
【０１７０】
結果：
ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与は、注入後３０および９０分の血漿ＯＸＭ−ＩＲを増加させた（３０分血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水 ６１．８±８．９、 ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ４４８．９±１８４．４、 ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ ９９７．１±２３５．４。 ９０−分血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水 ４７．５±４．５、 ＯＸＭ ３０ｎｍｏｌ／ｋｇ １５０．６±５２．５、 ＯＸＭ １００ｎｍｏｌ／ｋｇ １０７．８±２５．０）。
【０１７１】
血漿ＯＸＭ−ＩＲレベルは、３つの付加的な群、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ５１．９±５．８）、ｂ） 高脂肪ラット食餌を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ２２０．２±２２．２）、ｃ） 一夜絶食させ、点灯の際に、２時間、高脂肪食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられたラットは、２時間の高脂肪食事の最後において断頭された（血漿ＯＸＭ−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ２５４．０±３２．７）、において決定された。
【０１７２】
ＯＸＭ（３０ｎｍｏｌ／ｋｇおよび１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＩＰ投与は、注入後３０分および９０分の絶食血漿グレリン−ＩＲを有意に低下させた（３０分血漿グレリン ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水、１０５６．９±６４．０、 ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ８６７．４±４２．０（ｐ＜０．０１）、 ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ ８６０．０±４７．５（ｐ＜０．０２）。９０分血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： 食塩水、１０５５．２±５２．５、 ＯＸＭ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ ８８６．９±３６．３（ｐ＜０．０１）、 ＯＸＭ、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ ９００．０±５２．９（Ｐ＜０．０５）、図１５を参照のこと。
【０１７３】
血漿グレリン−ＩＲレベルは、３つの付加的な群、すなわち、ａ） 一夜絶食させ、明相の開始に殺したラット（血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： １０６６．１±８０．９）、ｂ） 高脂肪ラット食餌を一夜摂食させ、明相の開始において断頭したラット（血漿グレリン−ＩＲ ｐｍｏｌ／Ｌ： ６１１．３±１６．９）、ｃ） 一夜絶食させたラットは、点灯の際に、２時間、高脂肪食餌への随意(ad libitum)アクセスが与えられ、２時間の高脂肪食事の最後において断頭された（血漿グレリン ｐｍｏｌ／Ｌ： ６４８．９±５７．３）、において決定された。
【０１７４】
実施例５
ＯＸＭ点滴注入のヒト対象に対する影響の調査。
【０１７５】
方法：
研究設計．
研究設計は、実施例３におけるのと同様であった。対象は、ｔ225まで研究室に留まっていた。彼らは、翌朝０９：００までＶＡＳを完成し続け、ビュッフェ式食事後２４時間（翌日１３：００まで）日誌に食物摂取を記録した。食事日誌は、研究およびエネルギー摂取に対しては予備知識のない(blinded)栄養士によって分析され、ダイエットプランプログラム(Dietplan program)（フォレストフィールドソフトウェア社、ウェストサセックス、英国(Forestfield Software LTD, West Sussex, UK)）の助けを借りて計算された。
【０１７６】
血漿ホルモン測定．
全ての試料は、アッセイ間(inter-assay)偏差を除去するように一つのアッセイ内においてかつ二重に定量された。血漿ＯＬＩ、膵臓グルカゴン、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１(glucagon-like peptide-1)（ＧＬＰ−１）、およびグレリン(ghrelin)が、確立された組織内(in-house)ＲＩＡｓを用いて測定された。ＯＬＩアッセイ(Ghatei MA, Uttenthal LO, Christofides ND, Bryant MG, Bloom SR 1983 J Clin Endocrinol Metab 57:488-495)が、５．７％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＰＹＹアッセイ(Adrian TE, Savage AP, Sagor GR, Allen JM, Bacarese-Hamilton AJ, Tatemoto K, Polak JM, Bloom SR 1985 Gastroenterology 89:494-499)が、５．８％のアッセイ内偏差で２ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＰＹＹ抗体が、ＰＹＹのＣ末端に対して特異的であり、ヒトＰＹＹ３−３６と十分に交差反応した。インスリンアッセイ(Kreymann B, Williams G, Ghatei MA, Bloom SR 1987 Lancet 2:1300-1304)が、５．４％のアッセイ内偏差で６ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＧＬＰ−１アッセイ(Kreymann B, Williams G, Ghatei MA, Bloom SR 1987 Lancet 2:1300-1304)が、６．１％のアッセイ内偏差で８ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。ＧＬＰ−１抗体が、アミド化されたＧＬＰ−１に対して特異的であり、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（１−３６）、およびＧＬＰ−１（７−３７）と交差反応しなかった。グレリンアッセイ(English PJ, Ghatei MA, Malik IA, Bloom SR, Wilding JP 2002 J Clin Endocrinol Metab 87:298)が、９．５％のアッセイ内偏差で１０ｐｍｏｌ／Ｌ（９５％信頼限界）の変化を検出できた。血漿レプチン(leptin)が、リンコリサーチ社（ミズーリ州、米国）(Linco Research (Missouri, USA))のヒトレプチンＲＩＡキット(human leptin RIA kit)を用いて測定された。
【０１７７】
結果：
１．ＯＸＭ点滴注入のエネルギー摂取に対する影響：
ＯＸＭ点滴注入は、１９．３±５．６％だけビュッフェ式食事におけるエネルギー消費を有意に低下させた（低減対食塩水： ２２０±６０ｋｃａｌ、Ｐ＜０．０１）。研究した１３対象のうち１２が、ＯＸＭ点滴注入でエネルギー摂取の低下を示した（図１７）。１対象において応答がないことの明らかな原因はなかった。ＯＸＭ点滴注入は、１１．３±６．２％だけ累積１２時間エネルギー摂取を有意に低減した（低減対食塩水： ３６５±１５９ ｋｃａｌ、Ｐ＜０．０５）（図３）。累積２４時間エネルギー消費は、有意には変わらなかった（食塩水 ３０４３±３６６ｋｃａｌ、 ＯＸＭ ２７６８±２９７ｋｃａｌ）。ＯＸＭは、ビュッフェ式食事におけるまたはその後の累積１２時間および２４時間食物摂取における多量栄養素(macronutrients)から得られるカロリーの割合も、水の消費も変更しなかった。
【０１７８】
２．ＯＸＭ点滴注入の食欲および嗜好性に対する影響：
食塩水の点滴注入の間、空腹に対する視覚的アナログ指数(visual analogue scores)は、絶食期間の全体を通して有意には変わらなかったが（図１８）、一方、ＯＸＭ点滴注入は、空腹の有意な落ち込みを生じた（漸増のＡＵＣｔ0からｔ75： 食塩水 ＋２７３±１２８ｍｍ．ｍｉｎ、 ＯＸＭ マイナス３７４±１８５ｍｍ．ｍｉｎ、Ｐ＜０．０５））。ビュッフェ式食事後の空腹の低下は、食塩水およびＯＸＭ点滴注入の日々において同様であり、空腹指数は、その後同様のままであった。食事の時間の長さは、ＯＸＭにより有意に低減した（食塩水 １９．２±１．３ｍｉｎ、 ＯＸＭ １５．１±１．８ｍｉｎ、 Ｐ＜０．０５）。飽満、予想食物消費、悪心、および嗜好性に対する視覚的アナログ指数に対するＯＸＭの影響はなかった（データは図示せず）。
【０１７９】
３．ＯＸＭ様免疫反応性(OXM-like immunoreactivity)（ＯＬＩ）の血漿レベル：
ＯＸＭの点滴注入は、血漿ＯＬＩを、６２±５ｐｍｏｌ／Ｌからｔ60におけるピークの９０７±３２ｐｍｏｌ／Ｌに上昇させた（図１９）。比較として、食塩水点滴注入の日において、ビュッフェ式の消費は、１９５分において、１５１±１８ｐｍｏｌ／Ｌのピークの食後ＯＬＩレベルとなった。ＯＸＭ点滴注入の間の血漿試料のゲル浸透分析（図２０）は、合成ＯＸＭと同じ位置（Ｋav＝０．６）に溶離する単一の免疫反応性ピークを示した。従って、元のままの(intact)全部の長さのＯＸＭが、主な循環形態であった。
【０１８０】
４．ＯＸＭ点滴注入の血漿グレリンに対する影響：
食塩水点滴注入の間、血漿グレリンレベルは、絶食期間の全体を通して増加し（ｔ0 ４６１±３２ｐｍｏｌ／Ｌ、 ｔ75 ４８４±３５ｐｍｏｌ／Ｌ）、食事後低下した。（ｔ225 ３５７±２８ｐｍｏｌ／Ｌ）。しかしながら、ＯＸＭの点滴注入の間、グレリンの絶食レベルは、食事の前に低下し（ｔ0 ４８２±３３ｐｍｏｌ／Ｌ、 ｔ75 ４３５±３５ｐｍｏｌ／Ｌ）、グレリンのさらなる食事後低減があった（ｔ225 ３５６±３１ｐｍｏｌ／Ｌ）。従って、ビュッフェ式食事の前の血漿グレリンは、食塩水に日介してＯＸＭ点滴注入により有意に低減した（ｔ0からｔ75のグレリンの平均変化： 食塩水 ＋２４±１０ｐｍｏｌ／Ｌ、 ＯＸＭ マイナス４７±１１ｐｍｏｌ／Ｌ、 Ｐ＜０．０００１）（図２１）。ＯＸＭ点滴注入に起因するプラズマグレリンの抑制は、対応する食塩水点滴注入の日におけるグレリンの４４±１０％の食後の低下を示す（平均食後低下１５５±１９ｐｍｏｌ／Ｌ）。
【０１８１】
５．ＯＸＭ点滴注入の血漿ホルモンレベルに対する影響：
ＰＹＹ、インスリン、膵臓グルカゴン、ＧＬＰ−１、またはレプチン（表１）の絶食血漿レベルに対するＯＸＭ点滴注入の有意の影響はなかった。女性対象のレプチンの血漿濃度は、先に報告されているように男性よりは高かった。
【０１８２】
検討．
我々は、ＯＸＭの全身投与が、健康なヒト対象の食物摂取を有意に低減するということを実証した。ＯＸＭの静脈内点滴注入は、１９％だけビュッフェ式食事におけるカロリー摂取を低減し、累積エネルギー摂取は、点滴注入後１２時間において低下した。食物摂取のよりいっそう小さな変化は、長期間持続される場合、体重減少となるであろう。しかしながら、累積２４時間エネルギー摂取に対するＯＸＭの有意な影響はなかった。我々の研究は、ＯＸＭがエネルギー消費を増加させ得ることを示している。ＯＸＭは、その可能性のある治療上の使用の観点から重要である食事の楽しみに影響を及ぼさなかった。
【０１８３】
グレリンは、ヒトの食欲の強力な刺激剤であり(Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR 2001 Ghrelin enhances appetite and increases food intake in humans. J Clin Endocrinol Metab 86:5992)、血漿グレリンの食前の上昇は、食事開始の引き金であると示唆されている(Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K, Wisse BE, Weigle DS 2001 血漿グレリンレベルの食前上昇は、ヒトの食事開始の役割を示唆する．Diabetes 50:1714-1719)。従って、ＯＸＭ点滴注入が絶食血漿グレリンを抑制するという我々の新規な発見は、潜在的に重要である。ＯＸＭによるグレリンの通常の食前の上昇の阻害は、ＯＸＭ点滴注入が食欲を低減する一つの機構となりそうである。この発見はまた、グレリンレベルが食後に低減されるほとんど知られていない機構に光を当てることができる。齧歯類において、絶食は、血漿グレリンを増加させ、一方、水でないグルコースの経口摂取は、グレリン分泌を低下させるが、これは、血漿グレリンの抑制が胃の拡張でなく栄養分の摂取に関連することを示唆している。従って、栄養分の摂取に応答して放出されるＯＸＭは、血漿グレリンの通常の食後の阻害に寄与し得る。循環するグレリン全体の割合だけが、生物学的に活性なオクタノイル化された形態であると考えられる。食物消費およびＯＸＭ点滴注入の影響は、この活性グレリンのレベルを主に低減することとなり得る。
【０１８４】
ヒトの胃内容排出(gastric emptying)を阻害するＯＸＭの静脈内点滴注入が示された。胃内容排出の抑制は、満腹感の感覚を生じることにより飽満に寄与し得る増加された胃の拡張となり得る。現在の研究において、空腹指数は、胃の拡張が重要でありそうもないときの絶食状態においてＯＸＭによって有意に低減された。従って、食事前の期間における食欲の低減は、胃内容排出に対するＯＸＭの影響から生じそうである。ＯＸＭの食欲抑制(anorectic)効果は、ＰＹＹおよびレプチンの放出の刺激によって媒介されるように思われないが、その理由は、これらのホルモンの濃度がＯＸＭ点滴注入によって影響を受けないからである。
【０１８５】
我々は、ヒトにおいて、上昇したＯＸＭ循環レベルの食欲抑制効果を実証した。ＯＸＭの点滴注入は、熱帯性スプルーに見られるとともに病的飽満のための空腸回腸バイパス手術の後に見られる上昇した濃度に比較され得るＯＬＩの循環レベルを生成する。従って、ＯＸＭは、これらの条件で観察される食欲の喪失および体重減少に寄与し得る。我々は、ＯＸＭのより低い食後濃度が、通常の個人における食欲の生理的低減に寄与し得ると、また、ＯＸＭの外因的な(exogenous)投与が、肥満における食物摂取を低減することとエネルギー摂取を増加させることの一方または両方を行う可能性を有すると、考える。
【０１８６】
総合すると、これらのデータは、ＯＸＭが食物摂取、エネルギー消費、および体重維持の長期および短期の両方の調節において潜在的に重要であることを示す。従って、ＯＸＭは、哺乳動物における肥満などの過剰体重の治療または防止に有用であり得るとともに、さらには、哺乳動物、特にヒトにおける肥満などの過剰体重の治療における治療薬剤の開発のための標的となる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象のカロリー摂取を低下させる方法、対象の食欲を低下させる方法、対象の食物摂取を低下させる方法、対象のエネルギー消費を増加させる方法、対象の体重制御または治療方法、または、対象の肥満の低減または防止方法。
【請求項２】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の体重増加を防止および低減する方法、対象の体重減少を誘発および促進する方法、または、体格指数により測定される肥満を低減する方法。
【請求項３】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の食欲、飽満、および空腹のいずれか１つまたは複数を制御する方法。
【請求項４】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含み、対象の飽満および飽満の感覚の一方または両方を誘発、増加、増強、または促進することを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含み、対象の空腹または空腹の感覚を低減、阻害、または抑制することを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項６】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の所望の体重、所望の体格指数、および／または所望の容姿、および良好な健康を維持する方法。
【請求項７】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の脂質プロフィールを改善する方法。
【請求項８】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、栄養分の有効性を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方により軽減できる対象の状態または障害を軽減する方法。
【請求項９】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の循環グレリンのレベルを低減する方法。
【請求項１０】
効果が、循環グレリンのレベルを低減することにより達成されることを特徴とする請求項１から９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１１】
オキシントモジュリンが、脳に対する末梢的な経路を介して投与されることを特徴とする請求項１から１０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１２】
オキシントモジュリンが、経口、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、直腸、皮下、経皮静脈内、筋肉内、または腹腔内の経路により投与されることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
オキシントモジュリンは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１から１２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１４】
オキシントモジュリンは、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、投与されることを特徴とする請求項１から１２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１５】
オキシントモジュリンは、食事前に０．５ｍｇから２ｍｇの投与量で投与されることを特徴とする請求項１から１４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１６】
オキシントモジュリンと、それぞれが体重と食物摂取の一方または両方に対内する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤とを投与することを含むことを特徴とする請求項１から１５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１７】
１つまたは複数の他の薬剤それぞれが、以下の効果すなわち、哺乳動物の、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有することを特徴とする請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項１９】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＰＹＹまたはそのアゴニストであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項２０】
他の薬剤は、ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項２１】
オキシントモジュリンと、１つまたは複数の他の薬剤とは、同時にまたは任意の順序で逐次に投与されることを特徴とする請求項１６から２０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２２】
ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方は、対象の体重１ｋｇ当たり、０．１ｎｍｏｌまたはそれを超える投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．４ｎｍｏｌ以上、例えば０．６ｎｍｏｌ以上、例えば０．８ｎｍｏｌ以上、例えば１．０ｎｍｏｌ以上、例えば１．２ｎｍｏｌ以上、例えば１．４ｎｍｏｌ以上、例えば１．６ｎｍｏｌ以上、例えば１．８ｎｍｏｌ以上、例えば２．０ｎｍｏｌ以上、例えば２．２ｎｍｏｌ以上、例えば２．４ｎｍｏｌ以上、例えば２．６ｎｍｏｌ以上、例えば２．８ｎｍｏｌ、例えば３．０ｎｍｏｌ以上、例えば３．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１６から２１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２３】
ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方は、体重１ｋｇ当たり３．０ｎｍｏｌ以下の量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、２．８ｎｍｏｌ以下、例えば２．６ｎｍｏｌ以下、例えば２．４ｎｍｏｌ以下、例えば２．２ｎｍｏｌ以下、例えば２．０ｎｍｏｌ以下、例えば１．８ｎｍｏｌ以下、例えば１．４ｎｍｏｌ以下、例えば１．２ｎｍｏｌ以下、例えば１．０ｎｍｏｌ以下、例えば０．８ｎｍｏｌ以下、例えば０．６ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下の量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１６から２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれか１つに規定された方法における使用のためのオキシントモジュリン。
【請求項２５】
請求項１から２３のいずれか１つに記載された方法における使用のための医薬の製造のためのオキシントモジュリンの使用。
【請求項２６】
製薬上適した担体との混合または組み合わせでオキシントモジュリンを含み、オキシントモジュリンの投与量が、請求項９または１０記載の１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されることを特徴とする、単位剤形の製薬組成物。
【請求項２７】
投与量当たり０．５ｍｇから２ｍｇのオキシントモジュリンを含むことを特徴とする、皮下投与に適した形態の製薬組成物。
【請求項２８】
オキシントモジュリンと、それぞれが体重と食物摂取の一方または両方に対内する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤とを含むことを特徴とする製薬組成物。
【請求項２９】
１つまたは複数の他の薬剤が、以下の効果すなわち、哺乳動物の、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有することを特徴とする請求項２８記載の製薬組成物。
【請求項３０】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３１】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＰＹＹまたはそのアゴニストであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３２】
他の薬剤は、ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３３】
単位剤形であり、ＰＹＹとＧＬＰ−１の一方または両方の投与量が、請求項２２または２３記載の通りで、７０から７５ｋｇ対象を基準として計算されることを特徴とする請求項３０から３２のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３４】
脳に対する末梢的な経路を介する投与に適した形態であることを特徴とする請求項２８から３３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３５】
経口、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、直腸、皮下、経皮静脈内、筋肉内、または腹腔内の経路による投与に適した形態であることを特徴とする請求項３４記載の組成物。
【請求項３６】
単位剤形であり、オキシントモジュリンの投与量が、請求項１０または１１記載の通りで、７０から７５ｋｇ対象を基準として計算されることを特徴とする請求項２８から３５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３７】
皮下投与に適した形態であり、オキシントモジュリンの投与量が０．５ｍｇから２ｍｇであることを特徴とする請求項３６記載の組成物。
【請求項１】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象のカロリー摂取を低下させる方法、対象の食欲を低下させる方法、対象の食物摂取を低下させる方法、対象のエネルギー消費を増加させる方法、対象の体重制御または治療方法、または、対象の肥満の低減または防止方法。
【請求項２】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の体重増加を防止および低減する方法、対象の体重減少を誘発および促進する方法、または、体格指数により測定される肥満を低減する方法。
【請求項３】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の食欲、飽満、および空腹のいずれか１つまたは複数を制御する方法。
【請求項４】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含み、対象の飽満および飽満の感覚の一方または両方を誘発、増加、増強、または促進することを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含み、対象の空腹または空腹の感覚を低減、阻害、または抑制することを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項６】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の所望の体重、所望の体格指数、および／または所望の容姿、および良好な健康を維持する方法。
【請求項７】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の脂質プロフィールを改善する方法。
【請求項８】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、栄養分の有効性を低減することとエネルギー消費を増加させることの一方または両方により軽減できる対象の状態または障害を軽減する方法。
【請求項９】
対象にオキシントモジュリンを投与することを含むことを特徴とする、対象の循環グレリンのレベルを低減する方法。
【請求項１０】
効果が、循環グレリンのレベルを低減することにより達成されることを特徴とする請求項１から９のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１１】
オキシントモジュリンが、脳に対する末梢的な経路を介して投与されることを特徴とする請求項１から１０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１２】
オキシントモジュリンが、経口、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、直腸、皮下、経皮静脈内、筋肉内、または腹腔内の経路により投与されることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
オキシントモジュリンは、対象の体重１ｋｇ当たり、例えば０．１ｎｍｏｌ以上の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．５ｎｍｏｌ以上、例えば１ｎｍｏｌ以上、例えば１．５ｎｍｏｌ以上、例えば２ｎｍｏｌ以上、例えば２．５ｎｍｏｌ以上、例えば３ｎｍｏｌ以上、例えば４ｎｍｏｌ以上、例えば５ｎｍｏｌ以上、例えば６ｎｍｏｌ以上、例えば７ｎｍｏｌ以上、例えば８ｎｍｏｌ以上、例えば９ｎｍｏｌ以上、例えば１０ｎｍｏｌ、例えば１１ｎｍｏｌ以上、例えば１２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１から１２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１４】
オキシントモジュリンは、体重１ｋｇ当たり１１ｎｍｏｌ以下の投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、１０ｎｍｏｌ以下、例えば９ｎｍｏｌ以下、例えば８ｎｍｏｌ以下、例えば７ｎｍｏｌ以下、例えば６ｎｍｏｌ以下、例えば５ｎｍｏｌ以下、例えば４ｎｍｏｌ以下、例えば３ｎｍｏｌ以下、例えば２ｎｍｏｌ以下、例えば１ｎｍｏｌ以下、例えば０．５ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、投与されることを特徴とする請求項１から１２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１５】
オキシントモジュリンは、食事前に０．５ｍｇから２ｍｇの投与量で投与されることを特徴とする請求項１から１４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１６】
オキシントモジュリンと、それぞれが体重と食物摂取の一方または両方に対内する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤とを投与することを含むことを特徴とする請求項１から１５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１７】
１つまたは複数の他の薬剤それぞれが、以下の効果すなわち、哺乳動物の、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有することを特徴とする請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項１９】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＰＹＹまたはそのアゴニストであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項２０】
他の薬剤は、ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとであることを特徴とする請求項１６または１７記載の方法。
【請求項２１】
オキシントモジュリンと、１つまたは複数の他の薬剤とは、同時にまたは任意の順序で逐次に投与されることを特徴とする請求項１６から２０のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２２】
ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方は、対象の体重１ｋｇ当たり、０．１ｎｍｏｌまたはそれを超える投与量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、０．２ｎｍｏｌ以上、例えば０．４ｎｍｏｌ以上、例えば０．６ｎｍｏｌ以上、例えば０．８ｎｍｏｌ以上、例えば１．０ｎｍｏｌ以上、例えば１．２ｎｍｏｌ以上、例えば１．４ｎｍｏｌ以上、例えば１．６ｎｍｏｌ以上、例えば１．８ｎｍｏｌ以上、例えば２．０ｎｍｏｌ以上、例えば２．２ｎｍｏｌ以上、例えば２．４ｎｍｏｌ以上、例えば２．６ｎｍｏｌ以上、例えば２．８ｎｍｏｌ、例えば３．０ｎｍｏｌ以上、例えば３．２ｎｍｏｌ以下の投与量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１６から２１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２３】
ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとの一方または両方は、体重１ｋｇ当たり３．０ｎｍｏｌ以下の量で、例えば、体重１ｋｇ当たり、２．８ｎｍｏｌ以下、例えば２．６ｎｍｏｌ以下、例えば２．４ｎｍｏｌ以下、例えば２．２ｎｍｏｌ以下、例えば２．０ｎｍｏｌ以下、例えば１．８ｎｍｏｌ以下、例えば１．４ｎｍｏｌ以下、例えば１．２ｎｍｏｌ以下、例えば１．０ｎｍｏｌ以下、例えば０．８ｎｍｏｌ以下、例えば０．６ｎｍｏｌ以下、例えば０．４ｎｍｏｌ以下、例えば０．２ｎｍｏｌ以下の量で、末梢的に投与されることを特徴とする請求項１６から２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれか１つに規定された方法における使用のためのオキシントモジュリン。
【請求項２５】
請求項１から２３のいずれか１つに記載された方法における使用のための医薬の製造のためのオキシントモジュリンの使用。
【請求項２６】
製薬上適した担体との混合または組み合わせでオキシントモジュリンを含み、オキシントモジュリンの投与量が、請求項９または１０記載の１ｋｇ当たり投与量を基準として計算されることを特徴とする、単位剤形の製薬組成物。
【請求項２７】
投与量当たり０．５ｍｇから２ｍｇのオキシントモジュリンを含むことを特徴とする、皮下投与に適した形態の製薬組成物。
【請求項２８】
オキシントモジュリンと、それぞれが体重と食物摂取の一方または両方に対内する影響を有する１つまたは複数の他の薬剤とを含むことを特徴とする製薬組成物。
【請求項２９】
１つまたは複数の他の薬剤が、以下の効果すなわち、哺乳動物の、食物摂取を低減することと空腹を低減することの一方または両方、体重を低減すること、肥満を低減または防止すること、エネルギー消費を増加させること、または栄養分の有効性を低減することのうちの１つまたは複数を有することを特徴とする請求項２８記載の製薬組成物。
【請求項３０】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３１】
他の薬剤、または他の薬剤のうちの１つが、ＰＹＹまたはそのアゴニストであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３２】
他の薬剤は、ＰＹＹまたはそのアゴニストと、ＧＬＰ−１またはそのアゴニストとであることを特徴とする請求項２８または２９記載の組成物。
【請求項３３】
単位剤形であり、ＰＹＹとＧＬＰ−１の一方または両方の投与量が、請求項２２または２３記載の通りで、７０から７５ｋｇ対象を基準として計算されることを特徴とする請求項３０から３２のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３４】
脳に対する末梢的な経路を介する投与に適した形態であることを特徴とする請求項２８から３３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３５】
経口、粘膜例えば口腔、舌下、鼻腔、直腸、皮下、経皮静脈内、筋肉内、または腹腔内の経路による投与に適した形態であることを特徴とする請求項３４記載の組成物。
【請求項３６】
単位剤形であり、オキシントモジュリンの投与量が、請求項１０または１１記載の通りで、７０から７５ｋｇ対象を基準として計算されることを特徴とする請求項２８から３５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項３７】
皮下投与に適した形態であり、オキシントモジュリンの投与量が０．５ｍｇから２ｍｇであることを特徴とする請求項３６記載の組成物。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公開番号】特開２０１１−４２６８８（Ｐ２０１１−４２６８８Ａ）
【公開日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１０−２６４５８９（Ｐ２０１０−２６４５８９）
【出願日】平成２２年１１月２９日（２０１０．１１．２９）
【分割の表示】特願２００６−５００１７６（Ｐ２００６−５００１７６）の分割
【原出願日】平成１６年１月１２日（２００４．１．１２）
【出願人】（５０５１６７５４３）インペリアル・イノベ−ションズ・リミテッド (23)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２６４５８９（Ｐ２０１０−２６４５８９）
【出願日】平成２２年１１月２９日（２０１０．１１．２９）
【分割の表示】特願２００６−５００１７６（Ｐ２００６−５００１７６）の分割
【原出願日】平成１６年１月１２日（２００４．１．１２）
【出願人】（５０５１６７５４３）インペリアル・イノベ−ションズ・リミテッド (23)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]