改良タンパク質発現系
本発明は、栄養要求性選択マーカーを利用する組換えポリペプチドの産生のための改良発現系を提供する。さらに、本発明は、改良された発現調節による宿主細胞における改良された組換えタンパク質産生法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞へ回復させる少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を含む細菌発現系で使用するための、栄養要求性シュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項２】
シュードモナスが蛍光菌である、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項４】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項５】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項６】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項７】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１に記載の細胞。
【請求項８】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項１１】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項７に記載の細胞。
【請求項１２】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１４】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１５】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が、配列番号１および配列番号３からなる群から選択される核酸を含む、請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１７】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１９】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１に記載の細胞。
【請求項２１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項２０に記載の細胞。
【請求項２２】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項２２に記載の細胞。
【請求項２４】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項２５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】
ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
改変がｌａｃＩ遺伝子の少なくとも１つの染色体挿入を含み、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、細菌発現系で使用するための遺伝子改変シュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項２９】
前記シュードモナスが蛍光菌である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３２】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３３】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３５】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む核酸をさらに含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項３５に記載の細胞。
【請求項３７】
１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む核酸をさらに含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３８】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項３７に記載の細胞。
【請求項３９】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４０】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄオペレーター配列を含む核酸構築物を含む、細菌発現系で使用するためのシュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項４１】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４４】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側および５’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項４５に記載の細胞。
【請求項４７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項４５に記載の細胞。
【請求項４８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４９】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項４０に記載の細胞。
【請求項５０】
１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む核酸構築物を含む、細菌発現系で使用するためのシュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項５１】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’または３’側である、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５４】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’および３’側である、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項５５に記載の細胞。
【請求項５７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項５５に記載の細胞。
【請求項５８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５９】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項６０】
組換えポリペプチドを産生するプロセスであって：
ａ．少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するために、遺伝子改変されたシュードモナス（Pseudomonad）細胞において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現させる工程と；
ｂ．原栄養能を栄養要求性細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸を発現させる工程と；
ｃ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を培養する工程と；
を含むプロセス。
【請求項６１】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６２】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６４】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６５】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６７】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項６８】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項６７に記載のプロセス。
【請求項６９】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載のプロセス。
【請求項７０】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項７１】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項７０に記載のプロセス。
【請求項７２】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載のプロセス。
【請求項７３】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７４】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含む、請求項７３に記載のプロセス。
【請求項７５】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７６】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項７５に記載のプロセス。
【請求項７７】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７８】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が核酸からなる群から選択される配列番号６および配列番号９を含む、請求項７７に記載のプロセス。
【請求項７９】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項７９に記載のプロセス。
【請求項８１】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項８１に記載のプロセス。
【請求項８３】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８４】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項８３に記載のプロセス。
【請求項８５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項８４に記載のプロセス。
【請求項８６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項８５に記載のプロセス。
【請求項８７】
ｌａｃＩ遺伝子の少なくとも１つの染色体挿入を含むシュードモナス（Pseudomonad）において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、プロセス。
【請求項８８】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項８９】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９１】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９２】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項９１に記載のプロセス。
【請求項９３】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９４】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９５】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９４に記載のプロセス。
【請求項９６】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９７】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項９６に記載のプロセス。
【請求項９８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９７に記載のプロセス。
【請求項９９】
シュードモナス（Pseudomonad）細胞において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、核酸が少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列をさらに含み、ｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、プロセス。
【請求項１００】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０１】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０２】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０３】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０４】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１０５に記載のプロセス。
【請求項１０７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１０５に記載のプロセス。
【請求項１０８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０９】
シュードモナス（Pseudomonad）において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、プロセス。
【請求項１１０】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１１】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’または３’側である、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’および３’側である、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１４】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１５】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１７】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１８】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１９】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が細胞にｌａｃＩ遺伝子を染色体的に挿入することによって遺伝子改変され、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、工程と；
ｂ．細胞に組換えポリペプチドをコードする核酸に作動可能に結合されたＬａｃＩタンパク質プロモーターを含む核酸構築物を導入する工程と；
を含むプロセス。
【請求項１２０】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２２】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２３】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２４】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１２３に記載のプロセス。
【請求項１２５】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１２３に記載のプロセス。
【請求項１２６】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１２８】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１２９】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１３０】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１３１】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１３２】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１３１に記載のプロセス。
【請求項１３３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１３２に記載のプロセス。
【請求項１３４】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程と；
ｂ．核酸構築物であって：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．少なくとも１つのｌａｃＯｉｄオペレーター配列と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
を含むプロセス。
【請求項１３５】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３９】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４０】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１３９に記載のプロセス。
【請求項１４１】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１３９に記載のプロセス。
【請求項１４２】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４４】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程と；
ｂ．核酸構築物であって：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．１つを超えるｌａｃオペレーター配列と；
を含むプロセス。
【請求項１４５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１４６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側である、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側である、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４９】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５０】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１４９に記載のプロセス。
【請求項１５１】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１４９に記載のプロセス。
【請求項１５２】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５３】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５４】
抗生物質の非存在下での組換えポリペプチドの産生のプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を誘導するように遺伝子改変され、それにより栄養要求性細胞を産生する、工程であって；
ｂ．細胞に：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
ｃ．組換えポリペプチドおよび原栄養能回復ポリペプチドを細胞内で発現させる工程と；
ｄ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を増殖させる工程と；
を含むプロセス。
【請求項１５５】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５６】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５７】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５８】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５９】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１５８に記載のプロセス。
【請求項１６０】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１６１】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６２】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１６１に記載のプロセス。
【請求項１６３】
酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６４】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６５】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１６４に記載のプロセス。
【請求項１６６】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１６４に記載のプロセス。
【請求項１６７】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１６８】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が、配列番号１および配列番号３からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６７に記載のプロセス。
【請求項１６９】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７０】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６９に記載のプロセス。
【請求項１７１】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７２】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１７１に記載のプロセス。
【請求項１７３】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７４】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１７３に記載のプロセス。
【請求項１７５】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７６】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７７】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側であり、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側である、請求項１７６に記載のプロセス。
【請求項１７８】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１７７に記載のプロセス。
【請求項１７９】
選択の間に栄養共生阻害が最小限に抑えられる抗生物質の非存在下での組換えポリペプチドの産生のプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を誘導するように遺伝子改変され、それにより栄養要求性細胞を産生する、工程であって；
ｂ．細胞に：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
ｃ．組換えポリペプチドおよび原栄養能回復ポリペプチドを細胞内で発現させる工程と；
ｄ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を増殖させる工程と；
を含むプロセス。
【請求項１８０】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８１】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８２】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８３】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８４】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１８３に記載のプロセス。
【請求項１８５】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８６】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１８７】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１８６に記載のプロセス。
【請求項１８８】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１８９】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１９０】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１８９に記載のプロセス。
【請求項１９１】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１８９に記載のプロセス。
【請求項１９２】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９３】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸含む、請求項１９２に記載のプロセス。
【請求項１９４】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９５】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１９４に記載のプロセス。
【請求項１９６】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９７】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１９６に記載のプロセス。
【請求項１９８】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９９】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１９８に記載のプロセス。
【請求項２００】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１９９に記載のプロセス。
【請求項２０１】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項２０２】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項２０１に記載のプロセス。
【請求項２０３】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項２０２に記載のプロセス。
【請求項２０４】
配列番号１または３からなる群から選択される核酸配列を含む、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）ｐｙｒＦ遺伝子、またはｐｙｒＦ遺伝子を用いてハイブリダイズする核酸。
【請求項２０５】
前記核酸が配列番号１の配列を含む、請求項２０４に記載の遺伝子。
【請求項２０６】
前記核酸が配列番号３の配列を含む、請求項２０４に記載の遺伝子。
【請求項２０７】
配列番号６または８からなる群から選択される核酸配列を含む、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）ｐｒｏＣ遺伝子、またはｐｒｏＣ遺伝子を用いてハイブリダイズする核酸。
【請求項２０８】
前記核酸が配列番号６の配列を含む、請求項２０７に記載の遺伝子。
【請求項２０９】
前記核酸が配列番号８の配列を含む、請求項２０７に記載の遺伝子。
【請求項２１０】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）から単離されたｐｙｒＦ遺伝子をコードする核酸と；
を含む核酸構築物。
【請求項２１１】
前記ｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１の核酸配列を含む、請求項２１０に記載の構築物。
【請求項２１２】
前記ｐｙｒＦ遺伝子が配列番号３の核酸配列を含む、請求項２１０に記載の構築物。
【請求項２１３】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）から単離されたｐｒｏＣ遺伝子をコードする核酸と；
を含む核酸構築物。
【請求項２１４】
前記ｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６の配列を含む、請求項２１３に記載の構築物。
【請求項２１５】
前記ｐｒｏＣ遺伝子が配列番号８の配列を含む、請求項２１３に記載の構築物。
【請求項１】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞へ回復させる少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を含む細菌発現系で使用するための、栄養要求性シュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項２】
シュードモナスが蛍光菌である、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項４】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項５】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項６】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１に記載の細胞。
【請求項７】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１に記載の細胞。
【請求項８】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項１１】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項７に記載の細胞。
【請求項１２】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１４】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１５】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が、配列番号１および配列番号３からなる群から選択される核酸を含む、請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１７】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１９】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１に記載の細胞。
【請求項２１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項２０に記載の細胞。
【請求項２２】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項２２に記載の細胞。
【請求項２４】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項２５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】
ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
改変がｌａｃＩ遺伝子の少なくとも１つの染色体挿入を含み、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、細菌発現系で使用するための遺伝子改変シュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項２９】
前記シュードモナスが蛍光菌である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３２】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３３】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３５】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む核酸をさらに含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項３５に記載の細胞。
【請求項３７】
１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む核酸をさらに含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３８】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項３７に記載の細胞。
【請求項３９】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４０】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄオペレーター配列を含む核酸構築物を含む、細菌発現系で使用するためのシュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項４１】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４４】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側および５’側に位置する、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項４５に記載の細胞。
【請求項４７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項４５に記載の細胞。
【請求項４８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４９】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項４０に記載の細胞。
【請求項５０】
１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む核酸構築物を含む、細菌発現系で使用するためのシュードモナス（Pseudomonad）細胞。
【請求項５１】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’または３’側である、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５４】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’および３’側である、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項５５に記載の細胞。
【請求項５７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項５５に記載の細胞。
【請求項５８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５９】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項５０に記載の細胞。
【請求項６０】
組換えポリペプチドを産生するプロセスであって：
ａ．少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するために、遺伝子改変されたシュードモナス（Pseudomonad）細胞において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現させる工程と；
ｂ．原栄養能を栄養要求性細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸を発現させる工程と；
ｃ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を培養する工程と；
を含むプロセス。
【請求項６１】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６２】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６４】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６５】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６７】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項６８】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項６７に記載のプロセス。
【請求項６９】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載のプロセス。
【請求項７０】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項７１】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項７０に記載のプロセス。
【請求項７２】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載のプロセス。
【請求項７３】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７４】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含む、請求項７３に記載のプロセス。
【請求項７５】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７６】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項７５に記載のプロセス。
【請求項７７】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項７８】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が核酸からなる群から選択される配列番号６および配列番号９を含む、請求項７７に記載のプロセス。
【請求項７９】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項７９に記載のプロセス。
【請求項８１】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項８１に記載のプロセス。
【請求項８３】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項８４】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項８３に記載のプロセス。
【請求項８５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項８４に記載のプロセス。
【請求項８６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項８５に記載のプロセス。
【請求項８７】
ｌａｃＩ遺伝子の少なくとも１つの染色体挿入を含むシュードモナス（Pseudomonad）において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、プロセス。
【請求項８８】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項８９】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９０】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９１】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９２】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項９１に記載のプロセス。
【請求項９３】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９４】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９５】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９４に記載のプロセス。
【請求項９６】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む、請求項８７に記載のプロセス。
【請求項９７】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項９６に記載のプロセス。
【請求項９８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９７に記載のプロセス。
【請求項９９】
シュードモナス（Pseudomonad）細胞において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、核酸が少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列をさらに含み、ｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、プロセス。
【請求項１００】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０１】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０２】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０３】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０４】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０５】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１０５に記載のプロセス。
【請求項１０７】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１０５に記載のプロセス。
【請求項１０８】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項９９に記載のプロセス。
【請求項１０９】
シュードモナス（Pseudomonad）において組換えポリペプチドをコードする核酸を発現する工程を含む、組換えポリペプチドを産生するためのプロセスであって、核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、プロセス。
【請求項１１０】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１１】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１２】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’または３’側である、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’および３’側である、請求項１１０に記載のプロセス。
【請求項１１４】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１５】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１６】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１１４に記載のプロセス。
【請求項１１７】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１８】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１０９に記載のプロセス。
【請求項１１９】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が細胞にｌａｃＩ遺伝子を染色体的に挿入することによって遺伝子改変され、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、工程と；
ｂ．細胞に組換えポリペプチドをコードする核酸に作動可能に結合されたＬａｃＩタンパク質プロモーターを含む核酸構築物を導入する工程と；
を含むプロセス。
【請求項１２０】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２１】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２２】
前記ｌａｃＩ遺伝子がレバンスクラーゼ位置に挿入される、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２３】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２４】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１２３に記載のプロセス。
【請求項１２５】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１２３に記載のプロセス。
【請求項１２６】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列を含む、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１２７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１２８】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１２９】
少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１３０】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項１２６に記載のプロセス。
【請求項１３１】
前記組換えポリペプチドをコードする核酸が１つを超えるｌａｃオペレーター配列を含む、請求項１１９に記載のプロセス。
【請求項１３２】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１３１に記載のプロセス。
【請求項１３３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１３２に記載のプロセス。
【請求項１３４】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程と；
ｂ．核酸構築物であって：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．少なくとも１つのｌａｃＯｉｄオペレーター配列と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
を含むプロセス。
【請求項１３５】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの５’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側に位置する、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１３９】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４０】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１３９に記載のプロセス。
【請求項１４１】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１３９に記載のプロセス。
【請求項１４２】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４３】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１３４に記載のプロセス。
【請求項１４４】
宿主細胞における組換えポリペプチドの発現を調節するプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程と；
ｂ．核酸構築物であって：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．１つを超えるｌａｃオペレーター配列と；
を含むプロセス。
【請求項１４５】
少なくとも１つのｌａｃオペレーターがｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１４６】
前記ｌａｃＯｉｄ配列が配列番号１４および配列番号５９からなる群から選択される、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４７】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側である、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４８】
前記ｌａｃＯｉｄ配列がプロモーターの３’および５’側である、請求項１４５に記載のプロセス。
【請求項１４９】
前記細胞が細胞内で少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を産生するようにさらに改変されている、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５０】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣからなる群から選択される遺伝子への改変によって産生される、請求項１４９に記載のプロセス。
【請求項１５１】
前記栄養要求株がｐｙｒＦおよびｐｒｏＣ遺伝子の両方への改変によって産生される、請求項１４９に記載のプロセス。
【請求項１５２】
前記細胞がｌａｃＩ遺伝子の染色体挿入を含有し、ｌａｃＩ遺伝子が完全または切断Ｐｌａｃ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５３】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１４４に記載のプロセス。
【請求項１５４】
抗生物質の非存在下での組換えポリペプチドの産生のプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を誘導するように遺伝子改変され、それにより栄養要求性細胞を産生する、工程であって；
ｂ．細胞に：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
ｃ．組換えポリペプチドおよび原栄養能回復ポリペプチドを細胞内で発現させる工程と；
ｄ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を増殖させる工程と；
を含むプロセス。
【請求項１５５】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５６】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５７】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５８】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１５９】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１５８に記載のプロセス。
【請求項１６０】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１６１】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６２】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１６１に記載のプロセス。
【請求項１６３】
酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６４】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項１６０に記載のプロセス。
【請求項１６５】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１６４に記載のプロセス。
【請求項１６６】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１６４に記載のプロセス。
【請求項１６７】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１６８】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が、配列番号１および配列番号３からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６７に記載のプロセス。
【請求項１６９】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７０】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１６９に記載のプロセス。
【請求項１７１】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７２】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１７１に記載のプロセス。
【請求項１７３】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７４】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１７３に記載のプロセス。
【請求項１７５】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７６】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１５４に記載のプロセス。
【請求項１７７】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側であり、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側である、請求項１７６に記載のプロセス。
【請求項１７８】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項１７７に記載のプロセス。
【請求項１７９】
選択の間に栄養共生阻害が最小限に抑えられる抗生物質の非存在下での組換えポリペプチドの産生のプロセスであって：
ａ．シュードモナス（Pseudomonad）細胞を選択する工程であって、細胞が少なくとも１つの代謝産物に対する栄養要求株を誘導するように遺伝子改変され、それにより栄養要求性細胞を産生する、工程であって；
ｂ．細胞に：
ｉ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｉｉ．原栄養能を栄養要求性宿主細胞に回復させるポリペプチドをコードする核酸と；
を含む核酸構築物を導入する工程と；
ｃ．組換えポリペプチドおよび原栄養能回復ポリペプチドを細胞内で発現させる工程と；
ｄ．栄養要求性代謝産物の欠乏した培地上で細胞を増殖させる工程と；
を含むプロセス。
【請求項１８０】
前記シュードモナス（Pseudomonad）が蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８１】
前記細胞がウラシルに対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８２】
前記細胞がプロリンに対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８３】
前記栄養要求性細胞が１つを超える代謝産物に対して栄養要求性である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８４】
前記細胞がウラシルおよびプロリンに対して栄養要求性である、請求項１８３に記載のプロセス。
【請求項１８５】
前記原栄養能回復ポリペプチドが細胞生存に必要な代謝産物の生合成で活性な酵素である、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１８６】
前記酵素がオロトジン−５’−ホスフェートデカルボキシラーゼである、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１８７】
前記酵素が配列番号１および３からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１８６に記載のプロセス。
【請求項１８８】
前記酵素が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１８９】
前記酵素がΔ1−ピロリン−５−カルボキシラートレダクターゼである、請求項１８５に記載のプロセス。
【請求項１９０】
前記酵素が配列番号６および８からなる群から選択される核酸配列によってコードされる、請求項１８９に記載のプロセス。
【請求項１９１】
前記酵素が配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１８９に記載のプロセス。
【請求項１９２】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９３】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸含む、請求項１９２に記載のプロセス。
【請求項１９４】
前記栄養要求性細胞がｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９５】
前記無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号８からなる群から選択される核酸を含む、請求項１９４に記載のプロセス。
【請求項１９６】
前記栄養要求性細胞がｐｙｒＦ遺伝子およびｐｒｏＣ遺伝子を無効にすることによって産生される、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９７】
前記無効にされたｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１および３からなる群から選択される核酸を含み、無効にされたｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６および配列番号９からなる群から選択される核酸を含む、請求項１９６に記載のプロセス。
【請求項１９８】
前記細胞がＰｌａｃＩ−ｌａｃＩ−ｌａｃＺＹＡオペロンの一部として以外の染色体ｌａｃＩインサートも含有する、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項１９９】
前記ｌａｃＩ遺伝子がｌａｃＩ、ｌａｃＩQ、およびｌａｃＩQ1からなる群から選択される、請求項１９８に記載のプロセス。
【請求項２００】
前記核酸構築物が少なくとも１つのｌａｃＯｉｄ配列をさらに含む、請求項１９９に記載のプロセス。
【請求項２０１】
前記核酸構築物が１つを超えるｌａｃオペレーター配列をさらに含む、請求項１７９に記載のプロセス。
【請求項２０２】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの５’側に位置し、少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がプロモーターの３’側に位置する、請求項２０１に記載のプロセス。
【請求項２０３】
少なくとも１つのｌａｃオペレーター配列がｌａｃＯｉｄ配列である、請求項２０２に記載のプロセス。
【請求項２０４】
配列番号１または３からなる群から選択される核酸配列を含む、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）ｐｙｒＦ遺伝子、またはｐｙｒＦ遺伝子を用いてハイブリダイズする核酸。
【請求項２０５】
前記核酸が配列番号１の配列を含む、請求項２０４に記載の遺伝子。
【請求項２０６】
前記核酸が配列番号３の配列を含む、請求項２０４に記載の遺伝子。
【請求項２０７】
配列番号６または８からなる群から選択される核酸配列を含む、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）ｐｒｏＣ遺伝子、またはｐｒｏＣ遺伝子を用いてハイブリダイズする核酸。
【請求項２０８】
前記核酸が配列番号６の配列を含む、請求項２０７に記載の遺伝子。
【請求項２０９】
前記核酸が配列番号８の配列を含む、請求項２０７に記載の遺伝子。
【請求項２１０】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）から単離されたｐｙｒＦ遺伝子をコードする核酸と；
を含む核酸構築物。
【請求項２１１】
前記ｐｙｒＦ遺伝子が配列番号１の核酸配列を含む、請求項２１０に記載の構築物。
【請求項２１２】
前記ｐｙｒＦ遺伝子が配列番号３の核酸配列を含む、請求項２１０に記載の構築物。
【請求項２１３】
ａ．組換えポリペプチドをコードする核酸と；
ｂ．蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）から単離されたｐｒｏＣ遺伝子をコードする核酸と；
を含む核酸構築物。
【請求項２１４】
前記ｐｒｏＣ遺伝子が配列番号６の配列を含む、請求項２１３に記載の構築物。
【請求項２１５】
前記ｐｒｏＣ遺伝子が配列番号８の配列を含む、請求項２１３に記載の構築物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２００７−５１１２３８（Ｐ２００７−５１１２３８Ａ）
【公表日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４１４２２（Ｐ２００６−５４１４２２）
【出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３８８８４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５２１５１
【国際公開日】平成１７年６月９日（２００５．６．９）
【出願人】（５０２１４１０５０）ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド (1,383)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３８８８４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５２１５１
【国際公開日】平成１７年６月９日（２００５．６．９）
【出願人】（５０２１４１０５０）ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド (1,383)
【Ｆターム（参考）】
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