本発明は生物学の分野に関する。特に、それは、免疫原性の増大を提供するためのマルチエピトープ核酸及びペプチドワクチン及びかかるワクチンの設計方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープpol５６２、pol７４５、env３３２、pol５３０、pol３８８、env２４９、env３５９、pol６４０、env３３５、env１８３、env３１３、core１１７、core１９、core１８、core４１９、pol３９２、pol５３１、pol４１５、pol４７、pol４５５、core１４１、pol４２９、env２３６、pol１６６、pol５３８、core１０１、pol３５４及びcore１３７（すなわち、各々表７中の関連配列から成るＨＢＶ ＣＴＬ）をコードする核酸を含むマルチエピトープ構築体、ここで当該複数の核酸は同じ読取り枠内で互いに直接的又は間接的に接合されている；
（ｂ） （ａ）のＣＴＬエピトープ核酸に対して同じ読取り枠内で直接的又は間接的に接合された、ＨＢＶ ＣＴＬエピトープpol６６５（すなわち表７中のpol６６５エピトープ）をコードする核酸をさらに含む、（ａ）のマルチエピトープ構築体；
（ｃ） Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープpol１４９、core１８、pol５６２、pol５３８、pol４５５、env１８３、core１４１、pol６６５、env３３５、env３１３、pol３５４、pol６２９、core１９、pol１５０、pol４７、pol３８８、pol５３１及びpol６４２をコードする核酸を含むマルチエピトープ構築体、ここで当該複数の核酸は同じ読取り枠内で互いに直接的又は間接的に接合されている；
（ｄ） ＣＴＬエピトープ核酸に対し同じ読取り枠内で直接的又は間接的に接合された１又は複数のスペーサ核酸をさらに含む、（ａ）又は（ｂ）又は（ｃ）のマルチエピトープ構築体；
（ｅ） （ａ）の複数のＣＴＬエピトープ核酸の間、（ａ）及び（ｂ）のＣＴＬエピトープ核酸の間、（ａ）及び（ｂ）のＣＴＬエピトープ核酸並びに（ａ）のＣＴＬエピトープ核酸及び（ｃ）のＣＴＬエピトープ核酸の間、又は（ｃ）の複数のＣＴＬエピトープ核酸の間に１又は複数のスペーサ核酸が位置づけされている、（ｄ）のマルチエピトープ構築体；
（ｆ） スペーサ核酸が長さ１〜８残基のアミノ酸配列をコードする、（ｄ）又は（ｅ）のマルチエピトープ構築体；
（ｇ） スペーサ核酸のうち２つ以上のものが異なる（すなわち同一でない）アミノ酸配列をコードする、（ｄ）〜（ｆ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｈ） スペーサ核酸のうちの２つ以上のものがその他のスペーサ核酸によりコードされたアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列をコードする、（ｄ）〜（ｇ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｉ） スペーサ核酸のうちの２つ以上のものが同一のアミノ酸配列をコードする、（ｄ）〜（ｈ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｊ） スペーサ核酸のうちの１又は複数のものが３つ連続するアラニン（Ａｌａ）残基を含む又はこれらの残基から成るアミノ酸配列をコードする、（ｄ）〜（ｉ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｋ） ＣＴＬエピトープ核酸及び／又はスペーサ核酸に対し同じ読取り枠内で直接的又は間接的に接合されたＨＴＬエピトープをコードする１又は複数の核酸をさらに含む、（ａ）〜（ｊ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｌ） ＨＴＬエピトープがＰＡＤＲＥ（登録商標）エピトープである、（ｋ）のマルチエピトープ構築体；
（ｍ） ＨＴＬエピトープがＨＢＶ ＨＴＬエピトープである、（ｋ）のマルチエピトープ構築体；
（ｎ） （ｍ）のマルチエピトープ構築体、ここでＨＢＶ ＨＴＬエピトープはpol７７４、pol６９４、pol１４５、core５０、pol３８５、pol５２３、env３３９、pol５０１、pol４２０、pol４１２、env１８０、core１２０、pol９６、pol６１８、pol７６７、及びpol６６４から成るグループの中から選択される（すなわちＨＢＶ ＨＴＬエピトープは各々表１１内の関連する配列で構成されている）；
（ｏ） ＣＴＬエピトープとＨＴＬエピトープの間又は複数のＨＴＬエピトープの間に１又は複数のスペーサ核酸をさらに含む、（ｋ）〜（ｎ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｐ） さらに１又は複数のＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩターゲティング核酸を含む、（ａ）〜（ｏ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｑ） （Ｐ）のマルチエピトープ構築体、ここでターゲティング核酸はＩｇカッパシグナル配列、組織プラスミノーゲン活性化因子シグナル配列、インシュリンシグナル配列、小胞体シグナル配列、ＬＡＭＰ−１リソゾームターゲティング配列、ＬＡＭＰ−２リソゾームターゲティング配列、ＨＬＡ−ＤＭリソゾームターゲティング配列、ＨＬＡ−ＤＯのＨＬＡ−ＤＭ−会合配列、Ｉｇ−α細胞質ドメイン、Ｉｇ−β細胞質ドメイン、Ｉｉタンパク質、インフルエンザマトリクスタンパク質、ＨＢＶ表面抗原、ＨＢＶコア抗原及び酵母Ｔｙタンパク質から成るグループの中から選択されたターゲティング配列をコードする；
（ｒ） ＣＴＬ及び／又はＨＴＬエピトーププロセシングのために最適化されている（ａ）〜（ｑ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｓ） ＣＴＬ核酸がＣＴＬ及び／又はＨＴＬ接合部エピトープの数を最小限におさえるようにえり分けされている（ａ）〜（ｒ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｔ） ＨＴＬ核酸がＣＴＬ及び／又はＨＴＬ接合部エピトープの数を最小限におさえるようにえり分けされている、（ｋ）〜（ｓ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｕ） １又は複数の隣接アミノ酸残基をコードする１又は複数の核酸を含む、（ａ）〜（ｔ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｖ） １又は複数の隣接アミノ酸残基がＣＴＬエピトープ核酸のＣ＋１位置においてＫ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｃ及びＴから成るグループの中から選択されている、（Ｕ）のマルチエピトープ構築体；
（ｗ） ＨＢＶ ＣＴＬ核酸が図２７Ａに示されている順序で接合されている、（ａ）〜（ｖ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｘ） ＨＢＶ ＨＴＬ 核酸が図２８Ａに示されている順序で接合されている、（ｎ）〜（ｗ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｙ） ＨＢＶ ＣＴＬ核酸が図３４に示されている順序で接合されている、（ｃ）〜（ｖ）又は（ｘ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｚ） 図２４Ｂ又は表１３、１４、１８又は１９に示されているアミノ酸配列を含むか又はそれらで構成されているペプチドをコードする、（ａ）〜（ｘ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ａａ） 表１３のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜１２４８、表１４のヌクレオチド配列の＋１〜１０３２、図２４Ｃの内のヌクレオチド配列、表１８内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜２２９２、及び表１９のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜２２３２から成るグループの中から選択された核酸配列を含む（ｚ）のマルチエピトープ構築体；
（ｂｂ） 表２３又は２４に示されたアミノ酸配列を含むか又はそれらで構成されているペプチドをコードする（ｃ）〜（ｖ）又は（ｘ）又は（ｙ）又は（ｚ）のいずれかのマルチエピトープ構築体；
（ｃｃ） 表２３内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜６１８、又は表２４内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜６５７から成るグループの中から選択された核酸配列を含んで成る（ｂｂ）のマルチエピトープ構築体；
（ｄｄ） （ａ）〜（ｃｃ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及び１又は複数の調節配列；
（ｅｅ） （ａ）〜（ｄｄ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及び１又は複数のＩＲＥＳ；
（ｆｆ） （ａ）〜（ｅｅ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及び１又は複数のプロモータ；
（ｇｇ） （ａ）〜（ｆｆ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及び１又は複数のＣＭＶプロモータ；
（ｈｈ） （ａ）〜（ｇｇ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及び２つ以上のＣＭＶプロモータ；
（ｉｉ） （ａ）〜（ｈｈ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、及びベクター；
（ｊｊ） ベクターが発現ベクターである（ｉｉ）のマルチエピトープ構築体；
（ｋｋ） 図２９Ａ（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）内に示されたマルチエピトープ構築体の構造を有する、（ａ）〜（ｊｊ）のいずれかのマルチエピトープ構築体、を含んで成るポリヌクレオチド。
【請求項２】
２つのマルチエピトープ構築体を含むポリヌクレオチドにおいて、第１のマルチエピトープ構築体が（ａ）〜（ｋｋ）のいずれかの中のＨＢＶマルチエピトープ構築体を含み、第２のマルチエピトープ構築体が（ｎ）にあるＨＢＶ ＨＴＬエピトープを含み、第１及び第２のマルチエピトープ構築体が直接接合されておらずかつ／又は同じ枠内で接合されていないポリヌクレオチド。
【請求項３】
第１及び第２のマルチエピトープ構築体が調節配列に作用可能式にリンクされている、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
第１及び第２のマルチエピトープ構築体が、少なくとも１つのプロモータ及び少なくとも１つのＩＲＥＳ、１つのプロモータ及び１つのＩＲＥＳ、２つのプロモータ又は２つ以上のプロモータ及び／又はＩＲＥＳから成るグループの中から選択された少なくとも１つの調節配列に作用可能式にリンクされている、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
プロモータがＣＭＶプロモータである、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
２つのマルチエピトープ構築体が図２９Ａ（ｉ）又は（ｉｉ）に示された構造を有する、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
第２のマルチエピトープ構築体が、図２４Ｃ又は表１４に示されたアミノ酸配列を含むか又はそれらで構成されているペプチドをコードする、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
第２のマルチエピトープ構築体が図２４Ｃ内のヌクレオチド配列及び表１４のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜１０３２の中から選択された核酸配列を含んで成る、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
表１３内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜１２４８、表１８内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜２２９２、表１９内のヌクレオチド配列のヌクレオチド＋１〜２２３２、表２３のヌクレオチド＋１〜６１８、及び表２４のヌクレオチド＋１〜６５７から成るグループの中から選択された核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１１】
図２９Ａ（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）中に示されているベクターの構造をもつ、請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項１３】
図２４Ｂ又は表１３、１４、１８、１９、２３又は２４中に示されているアミノ酸配列から成るグループの中から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド又は請求項１０又は１１に記載のベクター又は請求項１２又は１３に記載のポリペプチド、又はそれらの組合せを含んで成る組成物。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド又は請求項１０又は１１に記載のベクター又は請求項１２又は１３に記載のポリペプチドを含む細胞。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１０又は１１に記載のベクター、請求項１２又は１３に記載のポリペプチド、請求項１４に記載の組成物又は請求項１５に記載の細胞を、それを必要としている個体に対し投与する段階を含む、該個体の体内でＢ型肝炎（ＨＢＶ）に対する免疫応答を誘発する方法。
【請求項１７】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１０又は１１に記載のベクター、請求項１２又は１３に記載のポリペプチド、請求項１４に記載の組成物又は請求項１５に記載の細胞を作る方法。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図１０】

【図１１Ａ】


【図１２】

【図１３Ａ】




【図１４Ａ】

【図１４Ｂ−１】

【図１４Ｂ−２】

【図１４Ｂ−３】

【図１５】

【図１６】

【図１７】















【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図１９Ｄ】

【図１９Ｅ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２０Ｃ】



【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２１Ｃ】


【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】



【図２３Ｂ】


【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】


【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】


【図２７Ｂ】

【図２８Ａ】

【図２８Ｂ】


【図２９Ｂ】

【図３０】

【図３１】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３４】

【図３５Ａ−１】

【図３５Ａ−２】

【図３５Ａ−３】

【図３５Ａ−４】

【図３５Ａ−５】

【図３５Ａ−６】

【図３５Ｂ−１】

【図３５Ｂ−２】

【図３５Ｃ−１】

【図３５Ｃ−２】

【図３５Ｄ】

【図３５Ｅ】

【図３６】

【図３７Ａ】

【図３７Ｂ】

【図３８】

【図３９】

【公表番号】特表２００６−５０１８２７（Ｐ２００６−５０１８２７Ａ）
【公表日】平成１８年１月１９日（２００６．１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５４２０７１（Ｐ２００４−５４２０７１）
【出願日】平成１５年１０月３日（２００３．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３１３０３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３１２１０
【国際公開日】平成１６年４月１５日（２００４．４．１５）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
ＵＮＩＸ
マッキントッシュ
【出願人】（５００５２１０３８）エピミューン　インコーポレイテッド (5)
【出願人】（５００２８４５８０）ジェネンコー・インターナショナル・インク (67)
【Ｆターム（参考）】