有機溶剤分解菌及びそれを用いた有機溶剤の分解処理方法
【課題】１種の微生物で芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤、アルコール系溶剤等の多種の溶剤を効率的に分解することができる有機溶剤分解菌を提供すること。
【解決手段】ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物、ならびにそれを芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることからなる有機溶剤の分解処理方法。
【解決手段】ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物、ならびにそれを芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることからなる有機溶剤の分解処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は有機溶剤分解菌及びそれを用いた有機溶剤の分解処理方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、炭化水素類などの化合物に対する微生物の分解作用については、環境汚染防止の観点から多くの研究がなされており、例えば、芳香族化合物を微生物分解する場合には、芳香族化合物を直接培地中に懸濁させ微生物分解させるか、あるいは僅かの芳香族化合物を溶媒に溶かして微生物分解させる方法が採用されている。しかしながら、前者の方法では、芳香族化合物が溶解しないために微生物との接触が不十分で分解効率が悪く、また、後者の場合では、芳香族化合物との接触はよくなるが、有機溶媒に対する抵抗性がないために微生物の反応性が抑制され分解効率が極めて低くるという問題がある。
【０００３】
そこで、特許文献１では、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの有機溶媒中でもこれらに対する耐性を有する微生物を用いて、石油中に多く含まれる難分解性の多環芳香族炭化水素を効率的に分解することが開示されている。
【０００４】
一方、塗装プラント等のような種々の有機溶剤が混在している環境下においては、アルコール類、ケトン類、エーテル類、エステル類、有機酸類等が発生するため、例えば、特許文献２や特許文献３には、これらを含有する水性廃液の処理方法として、これらを効率よく分解する微生物が開示されている。また、特許文献４には、化学工場、塗装工場等から発生するトルエン、キシレン、メチルエチルケトン等の混合有機溶剤を含有する悪臭ガスを、トルエン分解能を有する微生物、キシレン分解能を有する微生物、メチルエチルケトン分解能を有する微生物及び／又はメチルエチルケトン分解能を有する微生物を組合せて用いることによって、効率よく分解する方法が開示されている。
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載の微生物では、アルコール類やエステル類などの溶剤を分解することはできず、また、特許文献２や特許文献３に記載の微生物でも、芳香族炭化水素までは分解することはできず、さらに、種々の有機溶剤が混在している場合には、特許文献４のように、一度に複数種の微生物を使用する必要があり、生育状態が変化してしまったり、設備が大掛かりになったりする等の不具合がある。
【０００６】
【特許文献１】特開平７−１５５１７５号公報
【特許文献２】特開平１０−３３１６３号公報
【特許文献３】特開２００１−２２４３６１号公報
【特許文献４】特開平１１−１５５５６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、１種の微生物で芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤、アルコール系溶剤等の多種の溶剤を効率的に分解することができる有機溶剤分解菌を提供することである。
【０００８】
本発明の目的は、また、該有機溶剤分解菌を用いた有機溶剤の分解処理方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、有機溶剤を分解する微生物を種々探索した結果、今回、神奈川県平塚市
内（関西ペイント株式会社開発センター）の土壌中から、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤を炭素源として分解資化する能力を有する特定のロドコッカス属微生物を分離、同定し、本発明を完成するに至った。そして、このロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を用いて、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることにより有機溶剤を分解処理する方法を確立した。
【００１０】
かくして、本発明は、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ
Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物を提供するものである。
【００１１】
本発明は、また、少なくとも１種の上記ロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることを特徴とする有機溶剤の分解処理方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、１種の微生物で、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤等の多種の溶剤を効率的に分解することができ、実用上極めて有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明により提供されるロドコッカス属微生物は、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）である。
【００１４】
これらの微生物は、神奈川県平塚市内（関西ペイント株式会社開発センター）の土壌中から採取、分離されたものであり、その培養は好気性細菌に用いられる一般的な培地を用いて行うことができる。
【００１５】
なお、本明細書において、培地Ａ（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ０．５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ｆｅｒｒｉｃ
ｃｉｔｒａｔｅ ０．００２ｇ／ｌ、Ｖｉｔａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １．０ｍｌ／ｌ、Ｍｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １０．０ｍｌ／ｌ）と培地Ｂ（Ｋ２ＨＰＯ４ １．０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４ ０．５ｇ／ｌ）とを４：１の割合で混合し、滅菌処理したものを「ＢＭ液体培地」と称し、培地Ａと培地Ｂを４：１の割合で混合し、さらにＡｇｅｒを１．５％加えて滅菌処理したものを「ＢＭ寒天培地」と称する。
【００１６】
上記のＭｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎは、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．４ｇ／ｌ、Ｈ３ＰＯ４ ０．５ｇ／ｌ、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ ０．０４ｇ／ｌ、ＫＩ ０．１ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／ｌ、ＭｎＳＯ４・４〜７Ｈ２Ｏ ０．４ｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、１２Ｎ ＨＣｌ ２．０ｇ／ｌからなり、Ｖｉｔａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎは、Ｃａ−Ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ ０．４ｇ／ｌ、Ｉｎｏｓｉｔｏｌ ０．２ｇ／ｌ、Ｐ−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｎａｔｅ ０．２ｇ／ｌ、Ｐ−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｎａｔｅ ０．２ｇ／ｌ、Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎ ０．４ｇ／ｌ、Ｔｈｉａｍｉｎ ０．４ｇ／ｌ、Ｂｉｏｔｉｎ ０．００２ｇ／ｌ、Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ１２ ０．０００５ｇ／ｌ、Ｎａｉａｃｉｎ ０．４ｇ／ｌからなる。
【００１７】
また、本発明の微生物の単離、同定は以下のようにして行った。
【００１８】
培養方法：
液体培地の場合には、ねじ口試験管を用い、基質添加後、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう培養する。また、寒天培地の場合には、滅菌シャーレを用い、３０℃で培養する。
【００１９】
単離方法（段階希釈法・１００倍希釈法）：
あらかじめ用意しておいた０．８５％生理食塩水（９．９ｍＬ）に、土壌から採取した微生物を含む培養液を１００μＬ加え、原液より１０−２倍濃度に薄められた培養液を調製する。この希釈培養液を新たな生理食塩水（９．９ｍＬ）に１００μＬほど加えて、原液の１０−４倍濃度の希釈培養液を調製する。これを繰り返して１０−６倍濃度及び１０−８倍濃度の希釈培養液を調製し、ボルテックスでよく攪拌したのち、寒天培地にそれぞれの濃度の希釈培養液を１００μＬ塗沫する。
【００２０】
分析方法：
菌の生育度の測定：
タイテック株式会社製デジタル比色計（商品名：ｍｉｎｉ ｐｈｏｔｏ ５１８Ｒ）を用い、無菌コントロールを０点に調整した後、希釈培養液の菌体濁度ＯＤ６６０ ｎｍを測定する。
【００２１】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析：
ジエチルエーテル２ｍｌでサンプルを抽出し、１０μｌ容量のシリンジで摂取し、ＧＣ分析を行う。ＧＣで測定を３回行い、検量線から濃度を求め、溶剤分解能を調べる。
【００２２】
ＧＣ分析条件：
シクロヘキサノン・酢酸エチル以外の有機溶剤の場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ ２．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． １００℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
シクロヘキサノンの場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ １．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． １００℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
酢酸エチルの場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ ２．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． ８０℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
【００２３】
基質としては、プロピレングリコールプロピルエーテル（ＰＧＰＥ）を選択した。
【００２４】
１次スクリーニングは次のようにして行なった。
【００２５】
工場敷地内より採取した土壌から三段階のスクリーニングを経てＰＧＰＥを分解可能な５つの菌群サンプルを選抜した。この中から、よりよい分解活性を有している菌を取得するために、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及びＰＧＰＥ１０００ｐｐｍでの生育と分解能を検討した。その結果、１０００ｐｐｍにおいて生育が非常に高く、ほぼ完全に分解した菌群３番サンプルおよび１番サンプルを得た。
【００２６】
次に、３番サンプルおよび１番サンプルから、後記実施例に記載の方法による２次スクリーニングを行うことにより、３Ａ株および１Ｂ株を単離した。
【００２７】
これらの菌株の１６ＳｒＤＮＡをコードするＤＮＡの塩基配列の一部を決定し、部分塩基配列解析（国際塩基配列データベースＢＬＡＳＴ検索）により同定を行った。その結果、これらの菌株は、ロドコッカス属に属する微生物であることが判明し、ロドコッカスに属する公知の菌株とは有機溶剤分解能において異なる性質を示すことから、これらの菌株を新菌種と認定し、それぞれ、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂと命名した。これらの微生物は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、それぞれ、ＮＩＴＥ Ｐ−４５６及びＮＩＴＥ Ｐ−４５５なる受託番号が付与されている。
【００２８】
これらの単離微生物による有機溶剤の分解資化能を調べるため、各種有機溶剤を基質として選択し、５００ｐｐｍの各基質含有ＢＭ液体培地５ｍｌにそれぞれ上記単離菌株を植菌し、７２時間、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう培養を行なった。
【００２９】
その結果、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素系溶剤；酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶剤；メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン系溶剤；プロピレングリコールプロピルエーテルなどのエーテル系溶剤及びｎ−ブタノールなどのアルコール系溶剤に対し、高い分解能を有することが判明した。特に、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤に対し、非常に高い分解能を有することが判明した。
【００３０】
上記単離菌株による上記有機溶剤の分解はそれ自体既知の方法によって行うことができ、例えば、菌体を無機質、水分及び空気の存在下に、上記有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることにより行うことができる。菌体としては、単離生細胞、その培養物又は処理物（例えば、凍結物、凍結乾燥物など）のいずれを用いることもできる。また、これら菌体を固定化した固定化担体を用いることも可能である。
【００３１】
これら菌体の担体への固定化は、それ自体既知の方法によって行うことができ、例えば、包括法、物理的吸着法、共有結合法等が挙げられる。
【００３２】
担体としては、中空状、凹凸状、多孔質状等の形態で単位体積当たりの表面積が大きいもの或いは水を吸収して膨潤するものであって、流動性を持ち、容易に反応系から流出しない粒径及び比重を有するものが好適であり、担体形状としては、例えば、板状、繊維状、円筒状等の特殊形状、スポンジ状、粒・塊状、立方体状等いずれでもよいが、中でも、流動性と充分な表面積を確保しやすい微小な粒状体が好ましい。担体素材としては、微生物や酵素等の担体材料として従来から用いられている各種の有機・無機材料を用いることができ、例えば、粒状活性炭、破砕活性炭、木炭、ゼオライト、雲母、砂粒等の無機材料；光硬化性樹脂、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリエチレン、ポリアクリルアミド、ポリエステル、ポリプロピレン、寒天、アルギン酸、カラギーナン、セルロース、デキストラン、アガロース、イオン交換樹脂等の高分子材料；シリカゲル等の多孔質セラ
ミックス；アンスラサイト；樹脂材料に活性炭等を混入したもの等が挙げられ、これらはそれぞれ単独でもしくは２種以上組合わせて用いることができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００３４】
実施例１：３Ａ株による各種有機溶剤の分解
＜２次スクリーニング＞
三段階の１次スクリーニングを経て、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及びＰＧＰＥ１０００ｐｐｍで生育且つ分解する菌群を得た。これを１００倍希釈法により希釈し、ＰＮＰ１０００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ平板培地に接種し、３０℃で培養した。数日後、得られたコロニーを単離した。こうして得られた菌株をＰＧＰＥ２００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ培地に接種して５日間振とう培養した。１２０時間後、サンプリングを行いガスクロマトグラフフィー（ＧＣ）により分析した。その結果、生育良好でＰＧＰＥを完全に分解する能力を有する菌株３Ａを得た。さらに、高濃度（５００ｐｐｍ）のＰＧＰＥの分解能を同様にして調べたところ、生育も良好で且つ完全に分解した。また、ジプロピレングリコールブチルエーテル（ＤＰＧＢＥ）２００ｐｐｍの分解能についても同様に調べたところ、分解率は６０％ほどであった。なお、一連のＧＣ分析において、中間代謝物と思しきピークは特に検出されなかった。
【００３５】
＜分解試験＞
各種有機溶剤をＢＭ液体培地に５００ｐｐｍ添加し、これに菌株３Ａの前培養液５０μｌを加え、３日間又は１０日間培養し、その間経日的にＯＤ６６０ ｎｍおよびＧＣ測定を行い、菌の生育度と溶剤分解能を評価した。分解率の高い基質に対しては１０００ｐｐｍで、そして低い基質に対しては２００ｐｐｍで同様の操作を行った。その結果を以下に示す。
【００３６】
工業用キシレンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは１０日間で４０％分解し、２００ｐｐｍでは１０日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは殆ど上昇しなかったが、２００ｐｐｍでは最大で０．４になった。
【００３７】
トルエンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは生育及び分解能を示し、１０日間で８０％程度分解した。ＯＤ６６０
ｎｍは最大で０．６を超えた。
【００３８】
シクロヘキサノンに対する分解特性
生育度は良好であり、５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは１０日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは１．０を超えた。
【００３９】
酢酸エチルに対する分解特性
２００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍ全ての濃度において生育が見られなかったが、２００ｐｐｍ及び５００ｐｐｍでは完全に分解し、１０００ｐｐｍでも１０日間で７５％分解した。
【００４０】
ｎ−ブタノールに対する分解特性
５００ｐｐｍでは１日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．８に達し、１０００ｐｐｍでは最大で
１．０を超えた。
【００４１】
メチルエチルケトンに対する分解特性
高い生育度を示し、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍともに２日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．７を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０を超えた。
【００４２】
メチルイソブチルケトンに対する分解特性
生育は良好であり、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍ共に２日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．７を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０を超えた。
【００４３】
酢酸ブチルに対する分解特性
２００ｐｐｍでは１日間で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解したが生育は見られなかった。１０００ｐｐｍでは、１０日間で９０％の基質の分解が見られたが、生育は見られなかった。
【００４４】
実施例２：１Ｂ株による各種有機溶剤の分解
＜２次スクリーニング＞
三段階の１次スクリーニングを経て、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍで生育且つ分解する菌群を得た。これを１００倍希釈法により希釈し、ＰＮＰ１０００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ平板培地に接種し、３０℃で培養した。数日後、得られたコロニーを単離した。こうして得られた菌株をＰＧＰＥ２００ｍｇ／Ｌ含むＢＭ培地に接種して５日間振とう培養した。１２０時間後、サンプリングを行いガスクロマトグラフフィー（ＧＣ）により分析した。その結果、生育良好でＰＧＰＥを完全に分解する能力を有する菌株１Ｂを得た。さらに高濃度（５００ｐｐｍ）のＰＧＰＥの分解能を調べたところ、生育も良好で且つ９０％程度分解した。また、ジプロピレングリコールブチルエーテル（ＤＰＧＢＥ）２００ｐｐｍは２０％ほど分解した。なお、一連のＧＣ分析において中間代謝物と思しきピークは特に検出されなかった。
【００４５】
＜分解試験＞
工場由来の各種有機溶剤をＢＭ液体培地に５００ｐｐｍ添加し、これに菌株１Ｂの前培養液５０μｌを加え、３日間又は１０日間培養した。その間経日的にＯＤ６６０ ｎｍおよびＧＣ測定を行い、菌の生育度と溶剤分解能を評価した。分解率の高い基質に対しては１０００ｐｐｍで、そして低い基質に対しては２００ｐｐｍで同様の操作を行った。その結果を以下に示す。
【００４６】
工業用キシレンに対する分解特性
２００ｐｐｍでは４日で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で約０．４だった。
【００４７】
トルエンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは良好に生育し、完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．８だった。
【００４８】
シクロヘキサノンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは良好に生育し、５日間で完全に分解した。１０００ｐｐｍでは高い生育度を示し、１０日間でほぼ完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００４９】
酢酸エチルに対する分解特性
全ての濃度で生育は見られなかったが、２００ｐｐｍ及び５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでも５日間で８０〜９０％の分解が見られた。
【００５０】
ｎ−ブタノールに対する分解特性
５００ｐｐｍは１日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍは７日間で完全に分解し、どちらの濃度でもＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．６を超えた。
【００５１】
メチルエチルケトンに対する分解特性
高い生育度を示し、５００ｐｐｍでは２日間で、そして１０００ｐｐｍは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００５２】
メチルイソブチルケトンに対する分解特性
生育は良好であり、５００ｐｐｍでは２日間で、そして１０００ｐｐｍは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．８に達し、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００５３】
酢酸ブチルに対する分解特性
全ての濃度で生育は見られなかったが、２００ｐｐｍでは１日で完全に分解し、５００ｐｐｍでは３日で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは３日間で６０％分解した。
【００５４】
イソブタノールの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．３であった。
【００５５】
酢酸イソブチルの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。
【００５６】
酢酸−３−メトキシブチルの分解特性
２００ｐｐｍでは顕著なＯＤ６６０ ｎｍの増加は見られなかったが、１日目で完全に分解した。
【００５７】
プロピレングリコールモノメチルプロピオネートの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．３を超えた。
【００５８】
２−ブトキシエタノールの分解特性
２００ｐｐｍではＯＤ６６０ ｎｍの顕著な増加は見られなかったが、５日間で基質をほとんど分解した。
【００５９】
１−メトキシ−２−プロパノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で８０％分解し、Ｄ６６０ ｎｍは最大で０．４に達した。
【００６０】
メタノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で８０％分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．２を超えた。
【００６１】
イソプロパノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は有機溶剤分解菌及びそれを用いた有機溶剤の分解処理方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、炭化水素類などの化合物に対する微生物の分解作用については、環境汚染防止の観点から多くの研究がなされており、例えば、芳香族化合物を微生物分解する場合には、芳香族化合物を直接培地中に懸濁させ微生物分解させるか、あるいは僅かの芳香族化合物を溶媒に溶かして微生物分解させる方法が採用されている。しかしながら、前者の方法では、芳香族化合物が溶解しないために微生物との接触が不十分で分解効率が悪く、また、後者の場合では、芳香族化合物との接触はよくなるが、有機溶媒に対する抵抗性がないために微生物の反応性が抑制され分解効率が極めて低くるという問題がある。
【０００３】
そこで、特許文献１では、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの有機溶媒中でもこれらに対する耐性を有する微生物を用いて、石油中に多く含まれる難分解性の多環芳香族炭化水素を効率的に分解することが開示されている。
【０００４】
一方、塗装プラント等のような種々の有機溶剤が混在している環境下においては、アルコール類、ケトン類、エーテル類、エステル類、有機酸類等が発生するため、例えば、特許文献２や特許文献３には、これらを含有する水性廃液の処理方法として、これらを効率よく分解する微生物が開示されている。また、特許文献４には、化学工場、塗装工場等から発生するトルエン、キシレン、メチルエチルケトン等の混合有機溶剤を含有する悪臭ガスを、トルエン分解能を有する微生物、キシレン分解能を有する微生物、メチルエチルケトン分解能を有する微生物及び／又はメチルエチルケトン分解能を有する微生物を組合せて用いることによって、効率よく分解する方法が開示されている。
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載の微生物では、アルコール類やエステル類などの溶剤を分解することはできず、また、特許文献２や特許文献３に記載の微生物でも、芳香族炭化水素までは分解することはできず、さらに、種々の有機溶剤が混在している場合には、特許文献４のように、一度に複数種の微生物を使用する必要があり、生育状態が変化してしまったり、設備が大掛かりになったりする等の不具合がある。
【０００６】
【特許文献１】特開平７−１５５１７５号公報
【特許文献２】特開平１０−３３１６３号公報
【特許文献３】特開２００１−２２４３６１号公報
【特許文献４】特開平１１−１５５５６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、１種の微生物で芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤、アルコール系溶剤等の多種の溶剤を効率的に分解することができる有機溶剤分解菌を提供することである。
【０００８】
本発明の目的は、また、該有機溶剤分解菌を用いた有機溶剤の分解処理方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、有機溶剤を分解する微生物を種々探索した結果、今回、神奈川県平塚市
内（関西ペイント株式会社開発センター）の土壌中から、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤を炭素源として分解資化する能力を有する特定のロドコッカス属微生物を分離、同定し、本発明を完成するに至った。そして、このロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を用いて、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることにより有機溶剤を分解処理する方法を確立した。
【００１０】
かくして、本発明は、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ
Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物を提供するものである。
【００１１】
本発明は、また、少なくとも１種の上記ロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることを特徴とする有機溶剤の分解処理方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、１種の微生物で、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤等の多種の溶剤を効率的に分解することができ、実用上極めて有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明により提供されるロドコッカス属微生物は、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）である。
【００１４】
これらの微生物は、神奈川県平塚市内（関西ペイント株式会社開発センター）の土壌中から採取、分離されたものであり、その培養は好気性細菌に用いられる一般的な培地を用いて行うことができる。
【００１５】
なお、本明細書において、培地Ａ（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ０．５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ｆｅｒｒｉｃ
ｃｉｔｒａｔｅ ０．００２ｇ／ｌ、Ｖｉｔａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １．０ｍｌ／ｌ、Ｍｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １０．０ｍｌ／ｌ）と培地Ｂ（Ｋ２ＨＰＯ４ １．０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４ ０．５ｇ／ｌ）とを４：１の割合で混合し、滅菌処理したものを「ＢＭ液体培地」と称し、培地Ａと培地Ｂを４：１の割合で混合し、さらにＡｇｅｒを１．５％加えて滅菌処理したものを「ＢＭ寒天培地」と称する。
【００１６】
上記のＭｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎは、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．４ｇ／ｌ、Ｈ３ＰＯ４ ０．５ｇ／ｌ、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ ０．０４ｇ／ｌ、ＫＩ ０．１ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／ｌ、ＭｎＳＯ４・４〜７Ｈ２Ｏ ０．４ｇ／ｌ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、ＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ ０．１ｇ／ｌ、１２Ｎ ＨＣｌ ２．０ｇ／ｌからなり、Ｖｉｔａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎは、Ｃａ−Ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ ０．４ｇ／ｌ、Ｉｎｏｓｉｔｏｌ ０．２ｇ／ｌ、Ｐ−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｎａｔｅ ０．２ｇ／ｌ、Ｐ−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｎａｔｅ ０．２ｇ／ｌ、Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎ ０．４ｇ／ｌ、Ｔｈｉａｍｉｎ ０．４ｇ／ｌ、Ｂｉｏｔｉｎ ０．００２ｇ／ｌ、Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ１２ ０．０００５ｇ／ｌ、Ｎａｉａｃｉｎ ０．４ｇ／ｌからなる。
【００１７】
また、本発明の微生物の単離、同定は以下のようにして行った。
【００１８】
培養方法：
液体培地の場合には、ねじ口試験管を用い、基質添加後、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう培養する。また、寒天培地の場合には、滅菌シャーレを用い、３０℃で培養する。
【００１９】
単離方法（段階希釈法・１００倍希釈法）：
あらかじめ用意しておいた０．８５％生理食塩水（９．９ｍＬ）に、土壌から採取した微生物を含む培養液を１００μＬ加え、原液より１０−２倍濃度に薄められた培養液を調製する。この希釈培養液を新たな生理食塩水（９．９ｍＬ）に１００μＬほど加えて、原液の１０−４倍濃度の希釈培養液を調製する。これを繰り返して１０−６倍濃度及び１０−８倍濃度の希釈培養液を調製し、ボルテックスでよく攪拌したのち、寒天培地にそれぞれの濃度の希釈培養液を１００μＬ塗沫する。
【００２０】
分析方法：
菌の生育度の測定：
タイテック株式会社製デジタル比色計（商品名：ｍｉｎｉ ｐｈｏｔｏ ５１８Ｒ）を用い、無菌コントロールを０点に調整した後、希釈培養液の菌体濁度ＯＤ６６０ ｎｍを測定する。
【００２１】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析：
ジエチルエーテル２ｍｌでサンプルを抽出し、１０μｌ容量のシリンジで摂取し、ＧＣ分析を行う。ＧＣで測定を３回行い、検量線から濃度を求め、溶剤分解能を調べる。
【００２２】
ＧＣ分析条件：
シクロヘキサノン・酢酸エチル以外の有機溶剤の場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ ２．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． １００℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
シクロヘキサノンの場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ １．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． １００℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
酢酸エチルの場合
Ｃｏｌｕｍｎ Ｐａｃｋｉｎｇ ＰＥＧ ２０Ｍ−ＰＴ Ｕｎｉｐｏｒｔ Ｂ
Ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｚｅ ２．６ｍｍ×２ｍ
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ４０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｎ２ ｇａｓ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐ． １８０℃
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ． ８０℃
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＦＩＤ
【００２３】
基質としては、プロピレングリコールプロピルエーテル（ＰＧＰＥ）を選択した。
【００２４】
１次スクリーニングは次のようにして行なった。
【００２５】
工場敷地内より採取した土壌から三段階のスクリーニングを経てＰＧＰＥを分解可能な５つの菌群サンプルを選抜した。この中から、よりよい分解活性を有している菌を取得するために、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及びＰＧＰＥ１０００ｐｐｍでの生育と分解能を検討した。その結果、１０００ｐｐｍにおいて生育が非常に高く、ほぼ完全に分解した菌群３番サンプルおよび１番サンプルを得た。
【００２６】
次に、３番サンプルおよび１番サンプルから、後記実施例に記載の方法による２次スクリーニングを行うことにより、３Ａ株および１Ｂ株を単離した。
【００２７】
これらの菌株の１６ＳｒＤＮＡをコードするＤＮＡの塩基配列の一部を決定し、部分塩基配列解析（国際塩基配列データベースＢＬＡＳＴ検索）により同定を行った。その結果、これらの菌株は、ロドコッカス属に属する微生物であることが判明し、ロドコッカスに属する公知の菌株とは有機溶剤分解能において異なる性質を示すことから、これらの菌株を新菌種と認定し、それぞれ、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂと命名した。これらの微生物は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、それぞれ、ＮＩＴＥ Ｐ−４５６及びＮＩＴＥ Ｐ−４５５なる受託番号が付与されている。
【００２８】
これらの単離微生物による有機溶剤の分解資化能を調べるため、各種有機溶剤を基質として選択し、５００ｐｐｍの各基質含有ＢＭ液体培地５ｍｌにそれぞれ上記単離菌株を植菌し、７２時間、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう培養を行なった。
【００２９】
その結果、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素系溶剤；酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶剤；メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン系溶剤；プロピレングリコールプロピルエーテルなどのエーテル系溶剤及びｎ−ブタノールなどのアルコール系溶剤に対し、高い分解能を有することが判明した。特に、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤に対し、非常に高い分解能を有することが判明した。
【００３０】
上記単離菌株による上記有機溶剤の分解はそれ自体既知の方法によって行うことができ、例えば、菌体を無機質、水分及び空気の存在下に、上記有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることにより行うことができる。菌体としては、単離生細胞、その培養物又は処理物（例えば、凍結物、凍結乾燥物など）のいずれを用いることもできる。また、これら菌体を固定化した固定化担体を用いることも可能である。
【００３１】
これら菌体の担体への固定化は、それ自体既知の方法によって行うことができ、例えば、包括法、物理的吸着法、共有結合法等が挙げられる。
【００３２】
担体としては、中空状、凹凸状、多孔質状等の形態で単位体積当たりの表面積が大きいもの或いは水を吸収して膨潤するものであって、流動性を持ち、容易に反応系から流出しない粒径及び比重を有するものが好適であり、担体形状としては、例えば、板状、繊維状、円筒状等の特殊形状、スポンジ状、粒・塊状、立方体状等いずれでもよいが、中でも、流動性と充分な表面積を確保しやすい微小な粒状体が好ましい。担体素材としては、微生物や酵素等の担体材料として従来から用いられている各種の有機・無機材料を用いることができ、例えば、粒状活性炭、破砕活性炭、木炭、ゼオライト、雲母、砂粒等の無機材料；光硬化性樹脂、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリエチレン、ポリアクリルアミド、ポリエステル、ポリプロピレン、寒天、アルギン酸、カラギーナン、セルロース、デキストラン、アガロース、イオン交換樹脂等の高分子材料；シリカゲル等の多孔質セラ
ミックス；アンスラサイト；樹脂材料に活性炭等を混入したもの等が挙げられ、これらはそれぞれ単独でもしくは２種以上組合わせて用いることができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００３４】
実施例１：３Ａ株による各種有機溶剤の分解
＜２次スクリーニング＞
三段階の１次スクリーニングを経て、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及びＰＧＰＥ１０００ｐｐｍで生育且つ分解する菌群を得た。これを１００倍希釈法により希釈し、ＰＮＰ１０００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ平板培地に接種し、３０℃で培養した。数日後、得られたコロニーを単離した。こうして得られた菌株をＰＧＰＥ２００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ培地に接種して５日間振とう培養した。１２０時間後、サンプリングを行いガスクロマトグラフフィー（ＧＣ）により分析した。その結果、生育良好でＰＧＰＥを完全に分解する能力を有する菌株３Ａを得た。さらに、高濃度（５００ｐｐｍ）のＰＧＰＥの分解能を同様にして調べたところ、生育も良好で且つ完全に分解した。また、ジプロピレングリコールブチルエーテル（ＤＰＧＢＥ）２００ｐｐｍの分解能についても同様に調べたところ、分解率は６０％ほどであった。なお、一連のＧＣ分析において、中間代謝物と思しきピークは特に検出されなかった。
【００３５】
＜分解試験＞
各種有機溶剤をＢＭ液体培地に５００ｐｐｍ添加し、これに菌株３Ａの前培養液５０μｌを加え、３日間又は１０日間培養し、その間経日的にＯＤ６６０ ｎｍおよびＧＣ測定を行い、菌の生育度と溶剤分解能を評価した。分解率の高い基質に対しては１０００ｐｐｍで、そして低い基質に対しては２００ｐｐｍで同様の操作を行った。その結果を以下に示す。
【００３６】
工業用キシレンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは１０日間で４０％分解し、２００ｐｐｍでは１０日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは殆ど上昇しなかったが、２００ｐｐｍでは最大で０．４になった。
【００３７】
トルエンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは生育及び分解能を示し、１０日間で８０％程度分解した。ＯＤ６６０
ｎｍは最大で０．６を超えた。
【００３８】
シクロヘキサノンに対する分解特性
生育度は良好であり、５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは１０日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは１．０を超えた。
【００３９】
酢酸エチルに対する分解特性
２００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍ全ての濃度において生育が見られなかったが、２００ｐｐｍ及び５００ｐｐｍでは完全に分解し、１０００ｐｐｍでも１０日間で７５％分解した。
【００４０】
ｎ−ブタノールに対する分解特性
５００ｐｐｍでは１日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．８に達し、１０００ｐｐｍでは最大で
１．０を超えた。
【００４１】
メチルエチルケトンに対する分解特性
高い生育度を示し、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍともに２日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．７を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０を超えた。
【００４２】
メチルイソブチルケトンに対する分解特性
生育は良好であり、５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍ共に２日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．７を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０を超えた。
【００４３】
酢酸ブチルに対する分解特性
２００ｐｐｍでは１日間で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解したが生育は見られなかった。１０００ｐｐｍでは、１０日間で９０％の基質の分解が見られたが、生育は見られなかった。
【００４４】
実施例２：１Ｂ株による各種有機溶剤の分解
＜２次スクリーニング＞
三段階の１次スクリーニングを経て、ＰＧＰＥ５００ｐｐｍ及び１０００ｐｐｍで生育且つ分解する菌群を得た。これを１００倍希釈法により希釈し、ＰＮＰ１０００ｍｇ／Ｌを含むＢＭ平板培地に接種し、３０℃で培養した。数日後、得られたコロニーを単離した。こうして得られた菌株をＰＧＰＥ２００ｍｇ／Ｌ含むＢＭ培地に接種して５日間振とう培養した。１２０時間後、サンプリングを行いガスクロマトグラフフィー（ＧＣ）により分析した。その結果、生育良好でＰＧＰＥを完全に分解する能力を有する菌株１Ｂを得た。さらに高濃度（５００ｐｐｍ）のＰＧＰＥの分解能を調べたところ、生育も良好で且つ９０％程度分解した。また、ジプロピレングリコールブチルエーテル（ＤＰＧＢＥ）２００ｐｐｍは２０％ほど分解した。なお、一連のＧＣ分析において中間代謝物と思しきピークは特に検出されなかった。
【００４５】
＜分解試験＞
工場由来の各種有機溶剤をＢＭ液体培地に５００ｐｐｍ添加し、これに菌株１Ｂの前培養液５０μｌを加え、３日間又は１０日間培養した。その間経日的にＯＤ６６０ ｎｍおよびＧＣ測定を行い、菌の生育度と溶剤分解能を評価した。分解率の高い基質に対しては１０００ｐｐｍで、そして低い基質に対しては２００ｐｐｍで同様の操作を行った。その結果を以下に示す。
【００４６】
工業用キシレンに対する分解特性
２００ｐｐｍでは４日で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で約０．４だった。
【００４７】
トルエンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは良好に生育し、完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．８だった。
【００４８】
シクロヘキサノンに対する分解特性
５００ｐｐｍでは良好に生育し、５日間で完全に分解した。１０００ｐｐｍでは高い生育度を示し、１０日間でほぼ完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００４９】
酢酸エチルに対する分解特性
全ての濃度で生育は見られなかったが、２００ｐｐｍ及び５００ｐｐｍでは３日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍでも５日間で８０〜９０％の分解が見られた。
【００５０】
ｎ−ブタノールに対する分解特性
５００ｐｐｍは１日間で完全に分解し、１０００ｐｐｍは７日間で完全に分解し、どちらの濃度でもＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．６を超えた。
【００５１】
メチルエチルケトンに対する分解特性
高い生育度を示し、５００ｐｐｍでは２日間で、そして１０００ｐｐｍは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．６を超え、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００５２】
メチルイソブチルケトンに対する分解特性
生育は良好であり、５００ｐｐｍでは２日間で、そして１０００ｐｐｍは４日間で完全に分解した。ＯＤ６６０ ｎｍは５００ｐｐｍでは最大で０．８に達し、１０００ｐｐｍでは最大で１．０に達した。
【００５３】
酢酸ブチルに対する分解特性
全ての濃度で生育は見られなかったが、２００ｐｐｍでは１日で完全に分解し、５００ｐｐｍでは３日で完全に分解し、１０００ｐｐｍでは３日間で６０％分解した。
【００５４】
イソブタノールの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．３であった。
【００５５】
酢酸イソブチルの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。
【００５６】
酢酸−３−メトキシブチルの分解特性
２００ｐｐｍでは顕著なＯＤ６６０ ｎｍの増加は見られなかったが、１日目で完全に分解した。
【００５７】
プロピレングリコールモノメチルプロピオネートの分解特性
２００ｐｐｍでは１日目で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．３を超えた。
【００５８】
２−ブトキシエタノールの分解特性
２００ｐｐｍではＯＤ６６０ ｎｍの顕著な増加は見られなかったが、５日間で基質をほとんど分解した。
【００５９】
１−メトキシ−２−プロパノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で８０％分解し、Ｄ６６０ ｎｍは最大で０．４に達した。
【００６０】
メタノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で８０％分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．２を超えた。
【００６１】
イソプロパノールの分解特性
２００ｐｐｍでは２日間で完全に分解し、ＯＤ６６０ ｎｍは最大で０．４を超えた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物。
【請求項２】
請求項１に記載の少なくとも１種のロドコッカス属微生物を担持又は固定化させてなる担体。
【請求項３】
請求項１に記載の少なくとも１種のロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることを特徴とする有機溶剤の分解処理方法。
【請求項１】
ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．３Ａ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５６）及びロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．１Ｂ（ＮＩＴＥ Ｐ−４５５）より選ばれるロドコッカス属微生物。
【請求項２】
請求項１に記載の少なくとも１種のロドコッカス属微生物を担持又は固定化させてなる担体。
【請求項３】
請求項１に記載の少なくとも１種のロドコッカス属微生物、その培養物又は処理物を、芳香族炭化水素系溶剤、エステル系溶剤、ケトン系溶剤、エーテル系溶剤及びアルコール系溶剤から選ばれる少なくとも１種の有機溶剤又はそれを含有する液体もしくは気体と接触させることを特徴とする有機溶剤の分解処理方法。
【公開番号】特開２０１０−１３０９４９（Ｐ２０１０−１３０９４９Ａ）
【公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３０９９５５（Ｐ２００８−３０９９５５）
【出願日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【出願人】（０００００１４０９）関西ペイント株式会社 (815)
【出願人】（５０４１５０４６１）国立大学法人鳥取大学 (271)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【出願人】（０００００１４０９）関西ペイント株式会社 (815)
【出願人】（５０４１５０４６１）国立大学法人鳥取大学 (271)
【Ｆターム（参考）】
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