核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置
本発明は、多数の微量試料を、重合酵素連鎖反応のような核酸増幅反応を行いつつ、反応中に生成される反応産物の生成を実時間でモニタリングするための核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置に関する。具体的に、本発明は、励起光と蛍光の干渉を効率的に分離するために、偏光子(Polarizer)、偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)、偏光変換器(Polarization Converting System)などを含む生化学反応の実時間モニタリング装置に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置に関し、より詳細には、多数の微量試料を、重合酵素（ポリメラーゼ）連鎖反応((Polymerase Chain Reaction, PCR)のような核酸増幅反応を行いつつ、反応中に生成される反応産物の生成を実時間でモニタリングするための核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近来、重合酵素連鎖反応を行いつつ、反応産物を実時間でモニタリングできる実時間重合酵素連鎖反応(real-time PCR)方法が開発された。この方法は、ゲル上における電気泳動が必要なく、反応サイクルの途中に増幅産物を確認することができ、定量的な結果を得ることができる利点がある方法である。このような実時間ＰＣＲのために使用される装置は、ＰＣＲ反応のための温度循環装置(thermal cycler)と反応物の実時間検出のための蛍光分析器(fluorometer)とを合体した機器である。
【０００３】
通常実時間ＰＣＲのモニタリングは、蛍光試薬を利用した蛍光検出が使用されるが、代表的には以下の方法が挙げられる。
【０００４】
1)Interchelating法であって、二本鎖ＤＮＡに結合して蛍光を示す試薬(Interchelator; 例えば、SYBR Green I, EtBrなど)を反応系に添加して、増幅と共に発色する蛍光を検出する方法であって、重合酵素反応で合成された二本鎖ＤＮＡにinterchelatorが結合すると、蛍光を表すが、この蛍光強度を検出して、定量だけではなく、増幅ＤＮＡの融解温度を測定することができる。
【０００５】
2)TaqMan（登録商標）probe法であって、5'末端を蛍光物質(FAMなど)で、3'末端をquencher物質(TAMRAなど)で修飾したオリゴヌクレオチドを添加する。アニーリング条件下でTaqManTM probe鋳型DNAと特異的に混成化するが、蛍光は、quencherにより抑制されている。拡張反応時、Taq DNA重合酵素が有した5'-> 3' エキソヌクレアーゼ(exonuclease)活性により鋳型が分解されて、captureによる抑制が解消されて表れる蛍光を検出する方法である。
【０００６】
3)Molecular Beacon法であって、両末端を蛍光物質(FAM, TAMRAなど)とquencher物質(DABCYLなど)で修飾したヘアーピン状2次構造を形成するオリゴヌクレオチド(Molecular Beacon probe)を反応に添加する。Molecular Beacon probeは、アニーリング条件下で鋳型と相補的な領域に特異的に混成化する。この際、蛍光物質とquencher物質との距離が離れて、quencher物質による抑制が解消されて表れる蛍光を検出する方法である。また、混成化しなかったMolecular Beacon probeは、2次構造を有しており、quencher物質により抑制されて蛍光を表さない。
【０００７】
従来の実時間(real-time)PCRのための装置は、図１に示したように、熱電素子(1c)、試料が入っている反応チューブ(2a)に熱を伝達するためのブロック１と、反応チューブ内部の試料に光を照射するための照射光源１１、そして試料から発光される蛍光を受光するための受光部７８から構成されている(米国登録特許第6,818,437号)。前記技術の作動原理は、チューブ内の核酸試料溶液を反応させるために、熱電素子1cを利用して冷却または加熱サイクルを反復的に行いながら、各サイクルが終わる度に照射光源１１と受光部７８を作動して、試料から発光する蛍光量を測定し、反応の程度を実時間で表示するようにする。照射光源１１は、白色光源であって、使用する蛍光プローブに合う波長の励起光を発生させるためにバンドパスフィルター(band pass filter)７を使用する。ダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６は、励起光と蛍光を分離するための素子であって、図１の場合、特定波長より低い波長は反射をして、高い波長に対しては通過させる特性を有している。もう一つのバンドパスフィルター８は、試料から出た蛍光のみを選択的に受光素子７８に伝達するためのフィルターである。その他、励起光を平行にするためにフレネルレンズ(Fresnel lens)３が使用された。
【０００８】
近来に入って様々な色の蛍光プローブを同時に使用する実時間ＰＣＲ実験が導入されている。しかしながら、従来技術の場合、使用される蛍光プローブの波長が異なる場合、ダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６を、蛍光プローブによってそれぞれ異なるものを使用しなければならない。したがって、従来技術の場合は、バンドパスフィルター７，８とダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６が一つのモジュール形態から構成され、蛍光プローブに合わせて同時に変わりつつデータを獲得した。この場合、例えば、５種類のバンドパスフィルターを使用する場合、そのバンドパスフィルターに合わせて５種類のダイクロイックビームスプリッターを使用しなければならない。
【０００９】
また、従来の技術に使用したダイクロイックビームスプリッターの場合、普通、励起光が、試料から出る蛍光に比べて約１０５倍程度明るくて、励起光と蛍光を完全に分離できない問題点があり、励起光の光路上にある光学部品による励起光の反射(reflection)光が受光部に入射されて、試料から発生する蛍光と干渉を起こすようになる。
【００１０】
励起光の反射が起こる要素としては、
1)励起光を平行にするために使用されるフレネルレンズ(Fresnel lens)３と、2)反応チューブ２ａ内の試料の蒸発を防ぐために使用される蓋２ｂまたは透明テープと、3)反応チューブ２ａ自体から生じる要素がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記の問題点を解決するために提案されたもので、光の偏光(polarizing)特性を利用し、励起光と蛍光にそれぞれ異なる方向の偏光成分を持たせて、従来技術で励起光と蛍光を分離するために使用されたダイクロイックビームスプリッターを使用することなく、励起光と蛍光とを波長に関係なく効果的に分離して、励起光の反射光が受光部に入射されることを除去することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記の目的を達成するために、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置において、光源１００から励起された励起光を偏光させる偏光変換器１０２と、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光する集光レンズ１０３と、前記集光レンズ１０３により集光された偏光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、前記光導波管１０４から伝達された面光源の偏光であって、蛍光プローブの励起特性に整合した特定波長を有する偏光のみを通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の偏光された光を偏光特性に合わせて分離する偏光ビーム分割器１０８と、前記偏光ビーム分割器１０８から特定方向に分離された偏光された励起光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射して偏光ビーム分割器１０８に伝達する表面鏡１０９と、前記表面鏡１０９により反射された蛍光が前記偏光ビーム分割器１０８に伝達されて、励起光と異なる方向の偏光成分のみが反射されて受光部１１３に伝達されて、前記偏光変換器１０２により変換された偏光と同じ成分を有するように偏光させる第１偏光子１１１と、試料から発生する蛍光を受光する受光部１１３とを含んでなることを特徴とする。
【００１３】
さらに、本発明は、偏光された励起光が反射されて受光部に入射されることを防止するために、前記偏光変換器１０２及び第１偏光子１１１と反対成分を有するように偏光させる第２偏光子１０７をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明は、前記第１偏光子１１１を通過した、偏光された励起光により発生する蛍光を、蛍光プローブの蛍光特性に合わせて特定波長の光を通過させる第２バンドパスフィルター１１２をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１５】
また、本発明は、前記光源１００と前記偏光変換器１０２との間に備えられて、紫外線及び赤外線を遮断する紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１６】
さらに、本発明は、前記試料が収容される試料容器がさらに備えられたことを特徴とする。
【００１７】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish；細菌培養皿)、スライド(slide)、フィルター(filter)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれか一つからなることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】従来技術の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した図である。
【図２】本発明の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した斜視図である。
【図３】光の偏光特性を示す図である。
【図４】偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)の偏光特性を示した図である。
【図５】非偏光光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【図６】本発明の光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
上記のように構成される本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置の好ましい実施例を、添付の図面を参照して詳細に説明する。
【００２０】
本発明は、光の偏光性質を利用し、励起光と試料から出る蛍光とを効果的に分離するための装置を提供する。
【００２１】
図２は、本発明の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した斜視図であり、図３は、光の偏光特性を示す図であり、図４は、偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)の偏光特性を示した図であって、図５は、非偏光光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真であり、図６は、本発明の光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【００２２】
図示されたように、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、光源１００から励起された励起光を偏光させる偏光変換器１０２と、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光する集光レンズ１０３と、前記集光レンズ１０３により集光された偏光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、前記光導波管１０４から伝達された偏光を通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した偏光を分離する偏光ビーム分割器１０８と、前記偏光ビーム分割器１０８から分離された特定方向のみの偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射させる表面鏡１０９と、前記表面鏡１０９により反射された蛍光を偏光させる第２偏光子１０７と、前記第２偏光子１０７から伝達された、偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光のみを通過させる第２バンドパスフィルター１１２と、前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する受光部１１３とから構成される。
【００２３】
本発明による実時間ＰＣＲのモニタリングは、本出願人が出願して公開された特許公開公報第２００６−０００９２４６号(発明の名称：生化学的反応の実時間モニタリング装置)に開示された蛍光試薬を利用した蛍光検出を利用する。
【００２４】
前記光源１００は、従来一般に使用するタングステンハロゲンランプ、ゼノン放電ランプなどの白色光源とレーザーなどの単色光源が光源として使用でき、特定レーザーの場合、自体的に偏光された光を放出する製品もある。
【００２５】
励起光を発生させる光源１００から放出された光は、平行光の性質を有して、非偏光特性を有する。この光は、図２のように、Ｓ波とＰ波成分を両方とも有している。即ち、進行する方向に対して互いに垂直であるＳ波とＰ波から構成される。
【００２６】
また、光源１００から放出された光は、可視光線の領域だけではなく、普段紫外線と赤外線の成分も有している。したがって、光学系で要らない領域である紫外線と赤外線の成分を除去するために、紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１を設けて、紫外線と赤外線の成分を除去することが好ましい。
【００２７】
前記偏光変換器(Polarizing converting system)は、励起光を、特定な方向の極性のみを有するように変換させる役割をする。即ち、入射された非偏光ビームを一種類の極性を有するように変換させる役割をする。前記偏光変換器１０２を使用する理由は、光がＳ波とＰ波とから構成されるが、一方の極性のみを得るために他の極性を除去すると、全体光量が５０％以下に減るため、除去すべき極性の偏光成分を使用目的の偏光成分に変換して、光の使用効率を高めることができる利点があるからである。
【００２８】
前記集光レンズ１０３は、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光し、大きさの小さい光導波管(Light tunnel)１０４に変換された偏光を入射させる役割をする。
【００２９】
前記光導波管１０４は、国際特許公開番号ＷＯ ２００４/０８８２９１号に開示されたように、均一な面光源を作るための手段として使用される。
【００３０】
前記第１バンドパスフィルター１０５は、前記光導波管１０４から伝達された偏光された励起光を、蛍光プローブの励起特性に合わせて特定波長の偏光された励起光のみを通過させる役割をする。
【００３１】
本発明は、従来技術の場合、様々な種類の蛍光プローブを使用する場合、各蛍光プローブによってそれぞれ異なる種類のバンドパスフィルターを使用しなければならないが、さらに、これによってそれぞれ異なる種類のダイクロイックビームスプリッター(図１の符号６参照)を使用しなければならない問題点(例えば、バンドパスフィルターが５セットあれば、ダイクロイックビームスプリッターも５個が必要である)を改善して、ダイクロイックビームスプリッターを使用せずに蛍光と励起光を分離することができるようになる。
【００３２】
前記偏光ビーム分割器１０８は、偏光されなかった光が入射されると、一つの偏光成分を有する光と、その他の偏光成分を有する光とを互いに９０度になるように分離する特性を有した光学部品である。即ち、偏光されなかった励起光は、図２において、Ａ方向に分離される。
【００３３】
前記偏光ビーム分割器１０８は、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の励起光をそれぞれの偏光成分に分離する役割をする。
【００３４】
前記偏光ビーム分割器１０８により分離された偏光は、表面鏡１０９に伝達されて、その他の偏光は、受光部１１３の反対方向、即ち、Ａ方向に分離される。
【００３５】
本発明では、説明のために、偏光変換器１０２が非偏光ビームをＳ波に変換すると仮定する。無論、Ｐ波に変換しても、その状況に合わせて偏光子と偏光ビーム分割器の角度のみを調節すれば、同一な効果を得ることができる。
【００３６】
したがって、前記偏光ビーム分割器１０８を通じて、励起光成分の中、Ｓ波は通過されて、少量のＰ波は９０度反射されてＡ方向に入射されて、前記偏光ビーム分割器１０８を通過したＳ波成分の励起光のみが表面鏡(Surface Mirror)１０９を通じて試料に伝達される。
【００３７】
この際、前記試料が収容される試料容器がさらに備えられることが好ましい。
【００３８】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish；細菌培養皿)、スライド(slide)、フィルター(filter)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれか一つからなることが好ましく、試料を収容して測定できる試料容器であれば、いずれも使用可能である。
【００３９】
さらに、前記第１バンドパスフィルター１０５と前記偏光ビーム分割器１０８との間に試料が収容された試料容器の大きさに合わせて均一な面光源に広げる役割をする結像レンズ１０６が備えられることが好ましい。前記結像レンズ１０６は、蛍光を検出しようとする試料が入っているチューブ(プレート)に励起光が到達した時、励起光の強度が均一になるように励起光を広げる役割をする。
【００４０】
前記表面鏡１０９は、前記偏光ビーム分割器１０８から分割された偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射させて偏光ビーム分割器１０８に伝達する役割をするもので、前記表面鏡１０９は、ただ光の光路を変換させる役割をする。
【００４１】
フレネルレンズ１１０は、前記表面鏡１０９により反射された励起光を、試料の入っているチューブによく到達するように平行光にするために使用される。このように入射された励起光は、蛍光プローブを励起させて蛍光を発するようになる。試料から発生した蛍光は、再びフレネルレンズ、偏光ビーム分割器を通じて受光部に入射される。
【００４２】
前記第１偏光子１１１は、前記偏光変換器１０２により偏光された励起光が光学部品(集光レンズ１０３、光導波管１０４、結像レンズ１０６など)を通過する時、偏光特性が乱れる可能性があるため、偏光ビーム分割器１０８に励起光を入射させる前に、要らない方向の偏光成分を最大限除去するための役割をする。即ち、偏光されたＳ波成分の励起光が光路を経つつ、偏光が乱れて生じえる少量のＰ波成分を除去するための役割をする。
【００４３】
試料から発生した蛍光の場合も、非偏光の特性を有して、Ｓ波とＰ波成分を両方とも有している。このような特性の蛍光が図４のように偏光ビーム分割器１０８に入射されると、Ｐ波は反射されて受光部１１３に入って、Ｓ波は偏光ビーム分割器１０８を通過して励起光源側に入射される。第２偏光子１０７は、第１偏光子１１１と同じ種類であるが、方向を９０度回転させて、今度はＰ波のみが通過するように設けた。したがって、第２偏光子１０７は、偏光ビーム分割器１０８で完全に分離できなかったＳ波成分の光を除去する役割をする。
【００４４】
ここで、励起光が光路上で反射を起こして受光部１１３側に入射するとしても、Ｓ波特性を有するため、偏光ビーム分割器１０８を通じて再び励起光源側に入射されて、さらに第２偏光子１０７により遮断されるため、受光部１１３には入射できない特性を有する。
【００４５】
前記表面鏡１０９で反射された蛍光は、前記偏光ビーム分割器１０８に伝達されて、前記第１偏光子１１１及び前記偏光変換器１０２により変換された偏光と反対成分を有するようにして、即ち、励起光と蛍光にそれぞれ異なる極性を持たせて、励起光の干渉が蛍光に影響を与えられないようにすることにより、蛍光を効果的に分離することができるようになる。
【００４６】
このように、本発明は、励起光に対して一つの偏光成分を有するようにして、試料から出る蛍光を収集する受光部では、一つの偏光成分を除去して、その他の偏光成分のみを通過させて受光センサーに伝達すると、励起光を効果的に除去することができるようになる。
【００４７】
前記第２バンドパスフィルター１１２は、前記第２偏光子１０７から伝達された偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光を通過させる役割をする。
【００４８】
前記受光部１１３は、前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する役割をして、蛍光プローブ(図示せず)が備えられ、試料から出る蛍光を収集するようになる。前記受光部１１３に備えられた受光レンズ１１４は、試料から発生した蛍光をイメージセンサーに像が結ばれるようにする役割をする。
【００４９】
さらに、本発明は、前記偏光変換器１０２により変換されなかった励起光を偏光させる第１偏光子１１１をさらに備えることが好ましい。前記第１偏光子１１１は、偏光された光が光学部品などを経つつ偏光特性が崩れる可能性があるため、偏光ビーム分割器１０８のビーム分離効率を高めるために、偏光ビーム分割器１０８を通過させる前に使用されるフリー偏光子であって、偏光特性を生かせる役割をする。
【００５０】
また、本発明は、前記光源１００と前記偏光変換器１０２との間に備えられ、紫外線及び赤外線を遮断する紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１をさらに含んでなることを特徴とする。
【００５１】
本発明は、光の偏光特性を利用し、励起光が、光路上の特定光学部品あるいは試料の蒸発を防ぐために使用された蓋(図１の符号２ｂ参照)または透明テープと反応チューブ(図１の符号２ａ参照)などにより反射されて受光部に入射することを防止するために、励起光と蛍光にそれぞれ異なる偏光特性を持たせて、励起光による蛍光の干渉を最小化することを特徴とする。反射された偏光光の場合もやはり同じ偏光特性を有するため、本発明では励起光と蛍光を効率的に分離することができる。
【００５２】
図５は、非偏光の励起光源と非偏光の蛍光を利用した光学系において、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。この写真の場合、中央の左右側は、蛍光プローブを含んだウェル(well)であり、中央の多数のウェル(well)にかけて明るく見えるのが反射光によるものである。
【００５３】
図６の場合は、本発明のように偏光された励起光源と偏光された蛍光を受光部で撮影したイメージである。図から分かるように、中央の下端部分の反射光が完全に消えている。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
以上説明したように、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、従来の実時間(real-time)ＰＣＲ装置の場合、励起光が、光路上に位置した光学部品(例えば、フレネルレンズあるいはガラスヒーターなど)と試料の蒸発を防ぐために使用された蓋または透明テープと反応チューブなどにより反射されて受光部に入射され、試料から発生される蛍光のみを収集することができない問題点がある。大量の試料を処理する場合、試料の容量が減って、試料から発生する蛍光の量も少なくなり、さらに問題となる。
【００５５】
励起光による干渉の問題点を改善して、本発明では、光の偏光特性を利用し、励起光と蛍光にそれぞれ異なる極性を持たせて、励起光の干渉が蛍光に影響を与えられないようにする利点を有している。また、本発明は、従来のようにダイクロイックビームスプリッターを使用することなく、バンドパスフィルターの波長及び数に係らず蛍光と励起光を分離するために、ただ一つの偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)のみを使用して蛍光を受光することができるため、多数のダイクロイックビームスプリッターを設ける必要がなく、入れ替え作業が要らないと共に、波長別にダイクロイックビームスプリッターをセッティングする機具物が不要であって、非常に経済的な利点がある。
【符号の説明】
【００５６】
１００ 光源
１０１ 紫外線及び赤外線遮断フィルター
１０２ 偏光変換器(Polarizing converting system)
１０３ 集光レンズ
１０４ 光導波管(Light tunnel)
１０５ 第１バンドパスフィルター
１０６ 結像レンズ
１０７ 第２偏光子(Polarizer)
１０８ 偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)
１０９ 表面鏡(Surface Mirror)
１１０ フレネルレンズ(Fresnel lens)
１１１ 第１偏光子(Polarizer)
１１２ 第２バンドパスフィルター
１１３ 受光部
１１４ 受光レンズ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置に関し、より詳細には、多数の微量試料を、重合酵素（ポリメラーゼ）連鎖反応((Polymerase Chain Reaction, PCR)のような核酸増幅反応を行いつつ、反応中に生成される反応産物の生成を実時間でモニタリングするための核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近来、重合酵素連鎖反応を行いつつ、反応産物を実時間でモニタリングできる実時間重合酵素連鎖反応(real-time PCR)方法が開発された。この方法は、ゲル上における電気泳動が必要なく、反応サイクルの途中に増幅産物を確認することができ、定量的な結果を得ることができる利点がある方法である。このような実時間ＰＣＲのために使用される装置は、ＰＣＲ反応のための温度循環装置(thermal cycler)と反応物の実時間検出のための蛍光分析器(fluorometer)とを合体した機器である。
【０００３】
通常実時間ＰＣＲのモニタリングは、蛍光試薬を利用した蛍光検出が使用されるが、代表的には以下の方法が挙げられる。
【０００４】
1)Interchelating法であって、二本鎖ＤＮＡに結合して蛍光を示す試薬(Interchelator; 例えば、SYBR Green I, EtBrなど)を反応系に添加して、増幅と共に発色する蛍光を検出する方法であって、重合酵素反応で合成された二本鎖ＤＮＡにinterchelatorが結合すると、蛍光を表すが、この蛍光強度を検出して、定量だけではなく、増幅ＤＮＡの融解温度を測定することができる。
【０００５】
2)TaqMan（登録商標）probe法であって、5'末端を蛍光物質(FAMなど)で、3'末端をquencher物質(TAMRAなど)で修飾したオリゴヌクレオチドを添加する。アニーリング条件下でTaqManTM probe鋳型DNAと特異的に混成化するが、蛍光は、quencherにより抑制されている。拡張反応時、Taq DNA重合酵素が有した5'-> 3' エキソヌクレアーゼ(exonuclease)活性により鋳型が分解されて、captureによる抑制が解消されて表れる蛍光を検出する方法である。
【０００６】
3)Molecular Beacon法であって、両末端を蛍光物質(FAM, TAMRAなど)とquencher物質(DABCYLなど)で修飾したヘアーピン状2次構造を形成するオリゴヌクレオチド(Molecular Beacon probe)を反応に添加する。Molecular Beacon probeは、アニーリング条件下で鋳型と相補的な領域に特異的に混成化する。この際、蛍光物質とquencher物質との距離が離れて、quencher物質による抑制が解消されて表れる蛍光を検出する方法である。また、混成化しなかったMolecular Beacon probeは、2次構造を有しており、quencher物質により抑制されて蛍光を表さない。
【０００７】
従来の実時間(real-time)PCRのための装置は、図１に示したように、熱電素子(1c)、試料が入っている反応チューブ(2a)に熱を伝達するためのブロック１と、反応チューブ内部の試料に光を照射するための照射光源１１、そして試料から発光される蛍光を受光するための受光部７８から構成されている(米国登録特許第6,818,437号)。前記技術の作動原理は、チューブ内の核酸試料溶液を反応させるために、熱電素子1cを利用して冷却または加熱サイクルを反復的に行いながら、各サイクルが終わる度に照射光源１１と受光部７８を作動して、試料から発光する蛍光量を測定し、反応の程度を実時間で表示するようにする。照射光源１１は、白色光源であって、使用する蛍光プローブに合う波長の励起光を発生させるためにバンドパスフィルター(band pass filter)７を使用する。ダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６は、励起光と蛍光を分離するための素子であって、図１の場合、特定波長より低い波長は反射をして、高い波長に対しては通過させる特性を有している。もう一つのバンドパスフィルター８は、試料から出た蛍光のみを選択的に受光素子７８に伝達するためのフィルターである。その他、励起光を平行にするためにフレネルレンズ(Fresnel lens)３が使用された。
【０００８】
近来に入って様々な色の蛍光プローブを同時に使用する実時間ＰＣＲ実験が導入されている。しかしながら、従来技術の場合、使用される蛍光プローブの波長が異なる場合、ダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６を、蛍光プローブによってそれぞれ異なるものを使用しなければならない。したがって、従来技術の場合は、バンドパスフィルター７，８とダイクロイックビームスプリッター(dichroic beam splitter)６が一つのモジュール形態から構成され、蛍光プローブに合わせて同時に変わりつつデータを獲得した。この場合、例えば、５種類のバンドパスフィルターを使用する場合、そのバンドパスフィルターに合わせて５種類のダイクロイックビームスプリッターを使用しなければならない。
【０００９】
また、従来の技術に使用したダイクロイックビームスプリッターの場合、普通、励起光が、試料から出る蛍光に比べて約１０５倍程度明るくて、励起光と蛍光を完全に分離できない問題点があり、励起光の光路上にある光学部品による励起光の反射(reflection)光が受光部に入射されて、試料から発生する蛍光と干渉を起こすようになる。
【００１０】
励起光の反射が起こる要素としては、
1)励起光を平行にするために使用されるフレネルレンズ(Fresnel lens)３と、2)反応チューブ２ａ内の試料の蒸発を防ぐために使用される蓋２ｂまたは透明テープと、3)反応チューブ２ａ自体から生じる要素がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記の問題点を解決するために提案されたもので、光の偏光(polarizing)特性を利用し、励起光と蛍光にそれぞれ異なる方向の偏光成分を持たせて、従来技術で励起光と蛍光を分離するために使用されたダイクロイックビームスプリッターを使用することなく、励起光と蛍光とを波長に関係なく効果的に分離して、励起光の反射光が受光部に入射されることを除去することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記の目的を達成するために、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置において、光源１００から励起された励起光を偏光させる偏光変換器１０２と、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光する集光レンズ１０３と、前記集光レンズ１０３により集光された偏光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、前記光導波管１０４から伝達された面光源の偏光であって、蛍光プローブの励起特性に整合した特定波長を有する偏光のみを通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の偏光された光を偏光特性に合わせて分離する偏光ビーム分割器１０８と、前記偏光ビーム分割器１０８から特定方向に分離された偏光された励起光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射して偏光ビーム分割器１０８に伝達する表面鏡１０９と、前記表面鏡１０９により反射された蛍光が前記偏光ビーム分割器１０８に伝達されて、励起光と異なる方向の偏光成分のみが反射されて受光部１１３に伝達されて、前記偏光変換器１０２により変換された偏光と同じ成分を有するように偏光させる第１偏光子１１１と、試料から発生する蛍光を受光する受光部１１３とを含んでなることを特徴とする。
【００１３】
さらに、本発明は、偏光された励起光が反射されて受光部に入射されることを防止するために、前記偏光変換器１０２及び第１偏光子１１１と反対成分を有するように偏光させる第２偏光子１０７をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明は、前記第１偏光子１１１を通過した、偏光された励起光により発生する蛍光を、蛍光プローブの蛍光特性に合わせて特定波長の光を通過させる第２バンドパスフィルター１１２をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１５】
また、本発明は、前記光源１００と前記偏光変換器１０２との間に備えられて、紫外線及び赤外線を遮断する紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１をさらに含んでなることを特徴とする。
【００１６】
さらに、本発明は、前記試料が収容される試料容器がさらに備えられたことを特徴とする。
【００１７】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish；細菌培養皿)、スライド(slide)、フィルター(filter)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれか一つからなることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】従来技術の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した図である。
【図２】本発明の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した斜視図である。
【図３】光の偏光特性を示す図である。
【図４】偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)の偏光特性を示した図である。
【図５】非偏光光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【図６】本発明の光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
上記のように構成される本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置の好ましい実施例を、添付の図面を参照して詳細に説明する。
【００２０】
本発明は、光の偏光性質を利用し、励起光と試料から出る蛍光とを効果的に分離するための装置を提供する。
【００２１】
図２は、本発明の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置を示した斜視図であり、図３は、光の偏光特性を示す図であり、図４は、偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)の偏光特性を示した図であって、図５は、非偏光光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真であり、図６は、本発明の光学系を使用した場合、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。
【００２２】
図示されたように、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、光源１００から励起された励起光を偏光させる偏光変換器１０２と、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光する集光レンズ１０３と、前記集光レンズ１０３により集光された偏光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、前記光導波管１０４から伝達された偏光を通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した偏光を分離する偏光ビーム分割器１０８と、前記偏光ビーム分割器１０８から分離された特定方向のみの偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射させる表面鏡１０９と、前記表面鏡１０９により反射された蛍光を偏光させる第２偏光子１０７と、前記第２偏光子１０７から伝達された、偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光のみを通過させる第２バンドパスフィルター１１２と、前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する受光部１１３とから構成される。
【００２３】
本発明による実時間ＰＣＲのモニタリングは、本出願人が出願して公開された特許公開公報第２００６−０００９２４６号(発明の名称：生化学的反応の実時間モニタリング装置)に開示された蛍光試薬を利用した蛍光検出を利用する。
【００２４】
前記光源１００は、従来一般に使用するタングステンハロゲンランプ、ゼノン放電ランプなどの白色光源とレーザーなどの単色光源が光源として使用でき、特定レーザーの場合、自体的に偏光された光を放出する製品もある。
【００２５】
励起光を発生させる光源１００から放出された光は、平行光の性質を有して、非偏光特性を有する。この光は、図２のように、Ｓ波とＰ波成分を両方とも有している。即ち、進行する方向に対して互いに垂直であるＳ波とＰ波から構成される。
【００２６】
また、光源１００から放出された光は、可視光線の領域だけではなく、普段紫外線と赤外線の成分も有している。したがって、光学系で要らない領域である紫外線と赤外線の成分を除去するために、紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１を設けて、紫外線と赤外線の成分を除去することが好ましい。
【００２７】
前記偏光変換器(Polarizing converting system)は、励起光を、特定な方向の極性のみを有するように変換させる役割をする。即ち、入射された非偏光ビームを一種類の極性を有するように変換させる役割をする。前記偏光変換器１０２を使用する理由は、光がＳ波とＰ波とから構成されるが、一方の極性のみを得るために他の極性を除去すると、全体光量が５０％以下に減るため、除去すべき極性の偏光成分を使用目的の偏光成分に変換して、光の使用効率を高めることができる利点があるからである。
【００２８】
前記集光レンズ１０３は、前記偏光変換器１０２から変換された偏光を集光し、大きさの小さい光導波管(Light tunnel)１０４に変換された偏光を入射させる役割をする。
【００２９】
前記光導波管１０４は、国際特許公開番号ＷＯ ２００４/０８８２９１号に開示されたように、均一な面光源を作るための手段として使用される。
【００３０】
前記第１バンドパスフィルター１０５は、前記光導波管１０４から伝達された偏光された励起光を、蛍光プローブの励起特性に合わせて特定波長の偏光された励起光のみを通過させる役割をする。
【００３１】
本発明は、従来技術の場合、様々な種類の蛍光プローブを使用する場合、各蛍光プローブによってそれぞれ異なる種類のバンドパスフィルターを使用しなければならないが、さらに、これによってそれぞれ異なる種類のダイクロイックビームスプリッター(図１の符号６参照)を使用しなければならない問題点(例えば、バンドパスフィルターが５セットあれば、ダイクロイックビームスプリッターも５個が必要である)を改善して、ダイクロイックビームスプリッターを使用せずに蛍光と励起光を分離することができるようになる。
【００３２】
前記偏光ビーム分割器１０８は、偏光されなかった光が入射されると、一つの偏光成分を有する光と、その他の偏光成分を有する光とを互いに９０度になるように分離する特性を有した光学部品である。即ち、偏光されなかった励起光は、図２において、Ａ方向に分離される。
【００３３】
前記偏光ビーム分割器１０８は、前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の励起光をそれぞれの偏光成分に分離する役割をする。
【００３４】
前記偏光ビーム分割器１０８により分離された偏光は、表面鏡１０９に伝達されて、その他の偏光は、受光部１１３の反対方向、即ち、Ａ方向に分離される。
【００３５】
本発明では、説明のために、偏光変換器１０２が非偏光ビームをＳ波に変換すると仮定する。無論、Ｐ波に変換しても、その状況に合わせて偏光子と偏光ビーム分割器の角度のみを調節すれば、同一な効果を得ることができる。
【００３６】
したがって、前記偏光ビーム分割器１０８を通じて、励起光成分の中、Ｓ波は通過されて、少量のＰ波は９０度反射されてＡ方向に入射されて、前記偏光ビーム分割器１０８を通過したＳ波成分の励起光のみが表面鏡(Surface Mirror)１０９を通じて試料に伝達される。
【００３７】
この際、前記試料が収容される試料容器がさらに備えられることが好ましい。
【００３８】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish；細菌培養皿)、スライド(slide)、フィルター(filter)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれか一つからなることが好ましく、試料を収容して測定できる試料容器であれば、いずれも使用可能である。
【００３９】
さらに、前記第１バンドパスフィルター１０５と前記偏光ビーム分割器１０８との間に試料が収容された試料容器の大きさに合わせて均一な面光源に広げる役割をする結像レンズ１０６が備えられることが好ましい。前記結像レンズ１０６は、蛍光を検出しようとする試料が入っているチューブ(プレート)に励起光が到達した時、励起光の強度が均一になるように励起光を広げる役割をする。
【００４０】
前記表面鏡１０９は、前記偏光ビーム分割器１０８から分割された偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射させて偏光ビーム分割器１０８に伝達する役割をするもので、前記表面鏡１０９は、ただ光の光路を変換させる役割をする。
【００４１】
フレネルレンズ１１０は、前記表面鏡１０９により反射された励起光を、試料の入っているチューブによく到達するように平行光にするために使用される。このように入射された励起光は、蛍光プローブを励起させて蛍光を発するようになる。試料から発生した蛍光は、再びフレネルレンズ、偏光ビーム分割器を通じて受光部に入射される。
【００４２】
前記第１偏光子１１１は、前記偏光変換器１０２により偏光された励起光が光学部品(集光レンズ１０３、光導波管１０４、結像レンズ１０６など)を通過する時、偏光特性が乱れる可能性があるため、偏光ビーム分割器１０８に励起光を入射させる前に、要らない方向の偏光成分を最大限除去するための役割をする。即ち、偏光されたＳ波成分の励起光が光路を経つつ、偏光が乱れて生じえる少量のＰ波成分を除去するための役割をする。
【００４３】
試料から発生した蛍光の場合も、非偏光の特性を有して、Ｓ波とＰ波成分を両方とも有している。このような特性の蛍光が図４のように偏光ビーム分割器１０８に入射されると、Ｐ波は反射されて受光部１１３に入って、Ｓ波は偏光ビーム分割器１０８を通過して励起光源側に入射される。第２偏光子１０７は、第１偏光子１１１と同じ種類であるが、方向を９０度回転させて、今度はＰ波のみが通過するように設けた。したがって、第２偏光子１０７は、偏光ビーム分割器１０８で完全に分離できなかったＳ波成分の光を除去する役割をする。
【００４４】
ここで、励起光が光路上で反射を起こして受光部１１３側に入射するとしても、Ｓ波特性を有するため、偏光ビーム分割器１０８を通じて再び励起光源側に入射されて、さらに第２偏光子１０７により遮断されるため、受光部１１３には入射できない特性を有する。
【００４５】
前記表面鏡１０９で反射された蛍光は、前記偏光ビーム分割器１０８に伝達されて、前記第１偏光子１１１及び前記偏光変換器１０２により変換された偏光と反対成分を有するようにして、即ち、励起光と蛍光にそれぞれ異なる極性を持たせて、励起光の干渉が蛍光に影響を与えられないようにすることにより、蛍光を効果的に分離することができるようになる。
【００４６】
このように、本発明は、励起光に対して一つの偏光成分を有するようにして、試料から出る蛍光を収集する受光部では、一つの偏光成分を除去して、その他の偏光成分のみを通過させて受光センサーに伝達すると、励起光を効果的に除去することができるようになる。
【００４７】
前記第２バンドパスフィルター１１２は、前記第２偏光子１０７から伝達された偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光を通過させる役割をする。
【００４８】
前記受光部１１３は、前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する役割をして、蛍光プローブ(図示せず)が備えられ、試料から出る蛍光を収集するようになる。前記受光部１１３に備えられた受光レンズ１１４は、試料から発生した蛍光をイメージセンサーに像が結ばれるようにする役割をする。
【００４９】
さらに、本発明は、前記偏光変換器１０２により変換されなかった励起光を偏光させる第１偏光子１１１をさらに備えることが好ましい。前記第１偏光子１１１は、偏光された光が光学部品などを経つつ偏光特性が崩れる可能性があるため、偏光ビーム分割器１０８のビーム分離効率を高めるために、偏光ビーム分割器１０８を通過させる前に使用されるフリー偏光子であって、偏光特性を生かせる役割をする。
【００５０】
また、本発明は、前記光源１００と前記偏光変換器１０２との間に備えられ、紫外線及び赤外線を遮断する紫外線及び赤外線遮断フィルター１０１をさらに含んでなることを特徴とする。
【００５１】
本発明は、光の偏光特性を利用し、励起光が、光路上の特定光学部品あるいは試料の蒸発を防ぐために使用された蓋(図１の符号２ｂ参照)または透明テープと反応チューブ(図１の符号２ａ参照)などにより反射されて受光部に入射することを防止するために、励起光と蛍光にそれぞれ異なる偏光特性を持たせて、励起光による蛍光の干渉を最小化することを特徴とする。反射された偏光光の場合もやはり同じ偏光特性を有するため、本発明では励起光と蛍光を効率的に分離することができる。
【００５２】
図５は、非偏光の励起光源と非偏光の蛍光を利用した光学系において、受光部で反応チューブ(プレート)を撮影した写真である。この写真の場合、中央の左右側は、蛍光プローブを含んだウェル(well)であり、中央の多数のウェル(well)にかけて明るく見えるのが反射光によるものである。
【００５３】
図６の場合は、本発明のように偏光された励起光源と偏光された蛍光を受光部で撮影したイメージである。図から分かるように、中央の下端部分の反射光が完全に消えている。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
以上説明したように、本発明による核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置は、従来の実時間(real-time)ＰＣＲ装置の場合、励起光が、光路上に位置した光学部品(例えば、フレネルレンズあるいはガラスヒーターなど)と試料の蒸発を防ぐために使用された蓋または透明テープと反応チューブなどにより反射されて受光部に入射され、試料から発生される蛍光のみを収集することができない問題点がある。大量の試料を処理する場合、試料の容量が減って、試料から発生する蛍光の量も少なくなり、さらに問題となる。
【００５５】
励起光による干渉の問題点を改善して、本発明では、光の偏光特性を利用し、励起光と蛍光にそれぞれ異なる極性を持たせて、励起光の干渉が蛍光に影響を与えられないようにする利点を有している。また、本発明は、従来のようにダイクロイックビームスプリッターを使用することなく、バンドパスフィルターの波長及び数に係らず蛍光と励起光を分離するために、ただ一つの偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)のみを使用して蛍光を受光することができるため、多数のダイクロイックビームスプリッターを設ける必要がなく、入れ替え作業が要らないと共に、波長別にダイクロイックビームスプリッターをセッティングする機具物が不要であって、非常に経済的な利点がある。
【符号の説明】
【００５６】
１００ 光源
１０１ 紫外線及び赤外線遮断フィルター
１０２ 偏光変換器(Polarizing converting system)
１０３ 集光レンズ
１０４ 光導波管(Light tunnel)
１０５ 第１バンドパスフィルター
１０６ 結像レンズ
１０７ 第２偏光子(Polarizer)
１０８ 偏光ビーム分割器(Polarizing Beam Splitter)
１０９ 表面鏡(Surface Mirror)
１１０ フレネルレンズ(Fresnel lens)
１１１ 第１偏光子(Polarizer)
１１２ 第２バンドパスフィルター
１１３ 受光部
１１４ 受光レンズ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置であって、
光源１００から発生する励起光を集光する集光レンズ１０３と、
前記集光レンズ１０３により集光された励起光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、
前記光導波管１０４から伝達された面光源の偏光であって、蛍光プローブの励起特性に整合した特定波長を有する偏光を通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、
前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の励起光を偏光させる第１偏光子１１１と、
前記第１偏光子１１１を通過した特定波長の偏光を分離する偏光ビーム分割器１０８と、
前記偏光ビーム分割器１０８から分離された偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射して偏光ビーム分割器１０８に伝達する表面鏡１０９と、
前記表面鏡１０９により反射された蛍光を、前記偏光ビーム分割器１０８に伝達され前記第１偏光子１１１により変換された偏光と反対成分を有するように偏光させる第２偏光子１０７と、
前記第２偏光子１０７から伝達された、偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光を通過させる第２バンドパスフィルター１１２と、
前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する受光部１１３と、
を含んでなることを特徴とする、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項２】
前記第１偏光子１１１により除去される偏光成分を有する励起光を、前記第１偏光子１１１を通過できる偏光成分を有する励起光に変換する偏光変換器１０２をさらに含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項３】
前記試料が収容される試料容器をさらに備えていることを特徴とする、請求項１または２に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項４】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish)、スライド(slide)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれかからなることを特徴とする、請求項３に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項１】
核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置であって、
光源１００から発生する励起光を集光する集光レンズ１０３と、
前記集光レンズ１０３により集光された励起光を均一な面光源に変換して伝達する光導波管１０４と、
前記光導波管１０４から伝達された面光源の偏光であって、蛍光プローブの励起特性に整合した特定波長を有する偏光を通過させる第１バンドパスフィルター１０５と、
前記第１バンドパスフィルター１０５を通過した特定波長の励起光を偏光させる第１偏光子１１１と、
前記第１偏光子１１１を通過した特定波長の偏光を分離する偏光ビーム分割器１０８と、
前記偏光ビーム分割器１０８から分離された偏光を試料に伝達して、試料から発生した蛍光を反射して偏光ビーム分割器１０８に伝達する表面鏡１０９と、
前記表面鏡１０９により反射された蛍光を、前記偏光ビーム分割器１０８に伝達され前記第１偏光子１１１により変換された偏光と反対成分を有するように偏光させる第２偏光子１０７と、
前記第２偏光子１０７から伝達された、偏光された蛍光であって、前記蛍光プローブの発光特性に整合した特定波長を有する蛍光を通過させる第２バンドパスフィルター１１２と、
前記第２バンドパスフィルター１１２を通過した蛍光を受光する受光部１１３と、
を含んでなることを特徴とする、核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項２】
前記第１偏光子１１１により除去される偏光成分を有する励起光を、前記第１偏光子１１１を通過できる偏光成分を有する励起光に変換する偏光変換器１０２をさらに含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項３】
前記試料が収容される試料容器をさらに備えていることを特徴とする、請求項１または２に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【請求項４】
前記試料容器は、チューブまたは１〜１５３６個のウェルを備えたウェルプレート(well plate)、ペトリディッシュ(Petri dish)、スライド(slide)、テラサキプレート(Terasaki plate)、ＰＣＲプレート(PCR plate)から選択されるいずれかからなることを特徴とする、請求項３に記載の核酸増幅反応産物の実時間モニタリング装置。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１０−５３０７６２（Ｐ２０１０−５３０７６２Ａ）
【公表日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１４６０５（Ｐ２０１０−５１４６０５）
【出願日】平成２０年６月１７日（２００８．６．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００３４０８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００２０３４
【国際公開日】平成２０年１２月３１日（２００８．１２．３１）
【出願人】（５０２２３５７７３）バイオニア コーポレーション (14)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月１７日（２００８．６．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００３４０８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００２０３４
【国際公開日】平成２０年１２月３１日（２００８．１２．３１）
【出願人】（５０２２３５７７３）バイオニア コーポレーション (14)
【Ｆターム（参考）】
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