ＲａｃからＳＯＤなどのＧＴＰアーゼの結合を変化させることによって、ＲＯＳを抑制する薬剤を特定する方法と、該方法によって特定される薬剤と、神経細胞変性疾患を抑制または治療するために、ＲＯＳを抑制する化合物を使用する方法とを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＴＰアーゼのＳＯＤへの結合を抑制する１つ以上の薬剤を検出または判断する方法であって、
ａ）ＧＴＰアーゼのＳＯＤへの結合を可能にする条件下で、１つ以上の薬剤、単離されたＧＴＰアーゼ、およびＳＯＤタンパク質を接触させるステップと、
ｂ）前記１つ以上の薬剤が、前記単離されたＧＴＰアーゼの前記ＳＯＤタンパク質への結合を抑制するかどうかを検出または判断するステップと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記単離されたＧＴＰアーゼまたは前記ＳＯＤタンパク質は固定化される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記単離されたＧＴＰアーゼは、組み換えＧＴＰアーゼである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記単離されたＧＴＰアーゼは、ＲａｃまたはＲｈｏＡである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記単離されたＲａｃタンパク質は、ＴＶＦＤＮＹＳＡＮＶＭＶＤＧＫＰＶＮＬＧＬＷＤＴＡＧＧＥＤＹＤＲＬＲＰＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＳＯＤタンパク質は、組み換えＳＯＤタンパク質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＳＯＤタンパク質は、単離されたＳＯＤタンパク質である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記単離されたＳＯＤタンパク質は、融合タンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記単離されたＳＯＤタンパク質は標識化される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＯＤタンパク質は、前記ＧＴＰアーゼとの結合を増強させる野生型ＳＯＤに対する置換を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
１つ以上の薬剤が結合を抑制するかどうかを特定するために、抗体が採用される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記単離されたＧＴＰアーゼは、融合タンパク質である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記単離されたＧＴＰアーゼは標識化される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記標識はフルオロフォアである、請求項９または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つ以上の薬剤は、前記ＳＯＤタンパク質より前に前記単離されたＧＴＰアーゼと接触する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
薬剤のライブラリは、前記単離されたＧＴＰアーゼおよび前記ＳＯＤタンパク質と接触する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
ＧＴＰアーゼのＳＯＤへの結合を抑制する１つ以上の薬剤を特定する方法であって、
ａ）１つ以上の薬剤とＧＴＰアーゼおよびＳＯＤタンパク質を含む試料とを含む混合物を提供するステップと、
ｂ）前記ＧＴＰアーゼの前記ＳＯＤへの結合を可能にする条件に前記混合物を晒すステップと、
ｃ）前記１つ以上の薬剤が、前記ＧＴＰアーゼの前記ＳＯＤタンパク質への結合を抑制するかどうかを特定するステップと、
を含む、方法。
【請求項１８】
前記試料は溶解細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記試料は膜画分を含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記試料は、Ｎｏｘを含む単離されたエンドソームまたはエンドソーム膜を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｎｏｘは、Ｎｏｘ１またはＮｏｘ２である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記試料は無傷細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＧＴＰアーゼは、融合タンパク質である、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＧＴＰアーゼは標識化される、請求項１７〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＧＴＰアーゼは、ＲａｃまたはＲｈｏＡである、請求項１７〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＳＯＤタンパク質は、融合タンパク質である、請求項１７〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＳＯＤタンパク質は標識化される、請求項１７〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記Ｒａｃタンパク質は、Ｒａｃ１またはＲａｃ２である、請求項４または２５に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法によって特定される、１つ以上の薬剤。
【請求項３０】
ＳＯＤを結合する単離されたペプチドであって、前記ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも９０％の同一性を有し、前記ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（全長のＲａｃ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基１から１７７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（全長のＲａｃ２）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（全長のＲｈｏＡ）ではない、単離されたペプチド。
【請求項３１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む、請求項３０に記載の単離されたペプチド。
【請求項３２】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基１から８８に対応する残基を含む、請求項３０に記載の単離されたペプチド。
【請求項３３】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基１から１１６に対応する残基を含む、請求項３０に記載の単離されたペプチド。
【請求項３４】
融合タンパク質を得るために異種ペプチドに融合する、請求項３０〜３３のいずれか１項に記載の単離されたペプチド。
【請求項３５】
固定化される、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
【請求項３６】
ＳＯＤ結合領域を含むＧＴＰアーゼを含む融合タンパク質と、ＧＴＰアーゼ結合領域を含むＳＯＤを含む融合タンパク質、またはそれらの組み合わせを含む、キット。
【請求項３７】
前記ＧＴＰアーゼまたは前記ＳＯＤは、前記融合タンパク質を固定化するのに適したペプチドまたはタンパク質に融合する、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
前記ＧＴＰアーゼまたは前記ＳＯＤは、蛍光タンパク質に融合する、請求項３６または３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記融合タンパク質は、請求項３４に記載の融合タンパク質である、請求項３６に記載のキット。
【請求項４０】
前記ＧＴＰアーゼは、ＲｈｏまたはＲａｃである、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４１】
哺乳類における神経細胞変性疾患を抑制または治療する方法であって、それを必要としている哺乳類に、有効量のＮＡＤＰＨオキシダーゼの阻害剤を含む組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４２】
前記阻害剤は、式（Ｉ）の化合物である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患はＡＬＳである、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記組成物は植物抽出物を含む、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記植物はピクロルヒザ植物である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記阻害剤は、ＳＯＤのＧＴＰアーゼへの結合を抑制する、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記哺乳類はヒトである、請求項４１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記阻害剤はｐ４７ｐｈｏｘを抑制する、請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記阻害剤は経口投与される、請求項４１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記投与は連日投与である、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の方法。

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図８Ｄ】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２ＣＡ】

【図１２ＣＢ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１４Ｄ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１５Ｄ】

【図１５Ｅ】

【図１５Ｆ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｃ】

【図１７Ｄ】

【図１７Ｅ】

【図１７Ｆ】

【図１８】

【図１９】

【図１７Ｂ】

【公表番号】特表２００９−５２１９２８（Ｐ２００９−５２１９２８Ａ）
【公表日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４８７２３（Ｐ２００８−５４８７２３）
【出願日】平成１８年１２月２８日（２００６．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４９４２４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７９１４１
【国際公開日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【出願人】（５０８１９７５３８）ユニバーシテイ・オブ・アイオワ・リサーチ・フアウンデーシヨン (2)
【Ｆターム（参考）】