精製トコフェロールの製造方法
【課題】経時的な着色が抑制された精製トコフェロールの効率的な製造方法を提供する。
【解決手段】原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
【解決手段】原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製されたトコフェロールの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トコフェロール類はその優れた生理活性や抗酸化作用により、医薬品、健康食品、化粧品、飼料などの成分として広く使用されている。トコフェロールは、その抗酸化作用により、活性酸素が引き起こす種々の疾患の予防、改善に有効であると考えられている。また、トコフェロールの生理活性としては、抗酸化作用に基づく老化防止活性などの他、抗不妊活性、抗筋萎縮活性、抗溶血活性などが知られている。また、トコフェロールはその抗酸化作用により、食品や化粧品の抗酸化剤としても広く使用されている。
天然トコフェロールは、大豆や菜種などの植物油脂中に含まれており、これらの油脂から抽出することにより製造される。また、合成トコフェロールは、例えば、トリメチルハイドロキノンとフィトール、イソフィトール、又はフィチールハライドとの縮合反応によって得られる。
しかし、これらの方法で得られる市販のトコフェロールは着色性不純物を含んでいるため、経時的に着色度合いが強くなり易い。従って、トコフェロールの効率的な精製方法が求められている。
トコフェロールの脱色を目的とする精製法として、例えば、特許文献１は、α−トコフェロールアセテートを含む反応生成物を特定温度・時間条件の蒸留に供して低沸点物を除去した後、１９０℃以下で蒸留する方法を開示している。また、特許文献２は、亜鉛、鉄、スズの１種以上と、微量の酸の存在下で処理して脱色する方法を開示している。しかし、これらの方法では、着色性不純物を十分に除去することができない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開昭５１−１０００８１号
【特許文献２】特開昭４９−８００７４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、経時的な着色が抑制された精製トコフェロールの効率的な製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は上記課題を解決するために研究を重ね、以下の知見を得た。
(i) 精製方法としては、シリカゲルや活性炭などを用いて不純物を吸着する方法、特定溶媒への分配を利用して抽出により不純物を除去する方法、蒸留法などがあるが、蒸留法により精製したトコフェロールは、製造直後の着色が少なく、かつ経時的な着色度度合いの増大も少ない。
(ii) 蒸留法でトコフェロールを精製すると、却って、酸性物質が増加する。
(iii) 最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留することにより、酸性物質の増加を抑えつつ、着色度合い及びその経時的な増大が抑制された精製トコフェロールが得られる。
【０００６】
本発明は、上記知見に基づき完成されたものであり、以下の精製トコフェロールの製造方法等を提供する。
項１． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
項２． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、項１に記載の方法。
項３． 液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ精製トコフェロール１ｇ中に含まれる酸性物質が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下である精製トコフェロールを得る、項１又は２に記載の方法。
項４． 原料トコフェロールとして、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロール純度が８０％以上のものを用いる、項１〜３のいずれかに記載の方法。
項５． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質の増加を抑制しつつトコフェロールを精製する方法。
項６． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、原料トコフェロールの酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を除去する方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明方法によれば、酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を効率的に除去することができる。なお、酸性物質の増加には、酸性物質量の増大や、酸性物質の種類の増加などが含まれる。これにより得られるトコフェロールは、製造直後の着色が少ないとともに、長期保管しても着色し難いものとなる。また、酸性物質が多いと臭いが強くなるが、本発明方法により得られるトコフェロールは、このような問題が生じ難い。
また、本発明方法は溶媒を使用しないため、溶媒が混入する恐れがなく、食品素材として使用し易い精製トコフェロールが得られる。また、本発明方法は、簡単な装置を用いて実施できる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の精製トコフェロールの製造方法は、原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む方法である。
単蒸留
単蒸留は、常圧蒸留でもよく減圧蒸留でもよいが、トコフェロールの熱変性や熱分解を回避するために減圧蒸留が好ましい。減圧度は、約０．１〜１０ｍｍHgが好ましく、約０．２〜５ｍｍHgがより好ましく、約０．５〜３ｍｍHgがさらにより好ましい。上記範囲であれば、操作が困難になることなく、トコフェロールの変性や分解を抑制することができる。
また、単蒸留の装置は、バッチ式でも良く、連続式でもよい。
最高塔頂温度は、通常２４０℃以下、好ましくは２３０℃以下、より好ましくは２２０℃以下とすることができる。最高塔頂温度の下限値は通常１８０℃程度とすればよい。上記範囲であれば、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
また、蒸留時間は、通常２００分間以下、好ましくは１８０分間以下、より好ましくは１７０分間以下とすることができる。蒸留時間の下限値は通常８０分間程度とすればよい。上記範囲であれば、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
さらに、上記の最高塔頂温度、及び上記の蒸留時間の条件とすることにより、一層効果的に、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
【０００９】
原料トコフェロール
原料トコフェロールは、大豆油、菜種油、ゴマ油、オリーブ油などの植物油から抽出された天然トコフェロールでもよく、合成トコフェロールでもよい。通常は、市販品を使用すればよい。
トコフェロールは、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロールの何れであってもよい。また、各トコフェロールは、ｄ-体であってもよく、ｌ-体であってもよい。また、これらの２種以上の混合物であってもよい。本発明方法は、特に、δ-トコフェロール、中でもｄ-δ-トコフェロールを主成分とする原料トコフェロールの精製に好適である。
原料トコフェロールとしては、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロールの純度が８０％以上、中でも８２％以上、特に８５％以上のものが好ましい。
本発明において、トコフェロールの定量のための液体クロマトグラフィーは、定量用ｄ-δ-トコフェロール(含量９９．０％以上)を標準品に用い、第１５改正日本薬局方の一般試験法の項目に記載の方法で行う。条件は以下の通りである。
・検出器：紫外吸光光度計
・カラム：ステンレス管にポリアミンを化学結合した液体クロマトグラフィー用シリカゲルを充填する。
・移動相：ヘキサン／酢酸エステル混液
・検出波長：２９０ｎｍ
・定量用ｄ-δ-トコフェロール：ビタミンＥ定量用標準試薬、含量９９．０％以上（発売元エーザイフード・ケミカル(株)、製造元タマ生化学(株)、又はこれと同等の性質を有するもの）
また、原料トコフェロールは、滴定法により測定するとき総トコフェロール９６％以上を含み、さらにガスクロマトグラフ法により測定するとき、その総トコフェロール量の９０％以上のｄ-δ-トコフェロールを含むものが好ましい。
【００１０】
本発明において、トコフェロールの定量のための滴定は、以下の条件で行う。
被験試料約０．０５ｇを精密に量り、硫酸のエタノール液（硫酸３ｍＬにエタノールを加えて２００ｍＬにしたもの）１００ｍＬを加えて溶かした後、水２０ｍＬを加え、よくかき混ぜながら、０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸第二セリウム液で滴定する（指示薬：ジフェニルアミン試液２滴）。ただし、操作は直射日光を避け、なるべく暗所で行い、滴加速度は１０秒間に２５滴とし、滴定の終点は液の灰青色が１０秒間持続するときとする。同様の方法で空試験を行い補正する。
０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸第二セリウム液の１ｍＬは、トコフェロールの分子量をＣ２７Ｈ４６Ｏ２としたときの２．０１３２ｍｇに相当する。従って、この比率を用いて、被験試料中の総トコフェロール量を算出する。
【００１１】
また、本発明において、トコフェロールの定量のためのガスクロマトグラフィーは、医薬部外品原料規格のｄ−δ−トコフェロールの項目の定量法（２）の方法に従い行う。具体的には、以下の条件で行う。
被験試料約０．１８ｇを精密に量り、無水酢酸１ｍＬ及びピリジン３ｍＬを加え、水浴上で３０分間加熱し、放冷する。冷後、ヘキサンを加えて１００ｍＬとする。その液５ｍＬをとり、ｎ−ドトリアコンタン０．２ｇをとり、ヘキサンを加えて溶かし１０００ｍＬとした内部標準溶液５ｍＬを加えて試料溶液とする。この試料溶液につき、次の条件でガスクロマトグラフ法により試験を行う。
・カラム：内径４ｍｍ、長さ２．４ｍのガラス製の管にメチルシリコーンを125〜150μｍのガスクロマトグラフ用ケイソウ土担体に５％の割合で被覆したものを充填する。
・カラム温度：２７５〜２８５℃の一定温度
・キャリアーガス：窒素
・流量：内標準物質の保持時間が２３〜２７分になるように調整する。
・注入量：３〜５μＬの一定量
さらに、面積百分率法により、以下の式に従い総トコフェロール中のｄ−δ−トコフェロールの比率を求める。
総トコフェロール中のｄ−δ−トコフェロールの量（％）
＝Ｓδ÷（Ｓｎ＋Ｓδ）×１００
Ｓδ：ｄ−δ−トコフェロールの面積
Ｓｎ：ｄ−δ−トコフェロール以外のトコフェロールの総面積
また、原料トコフェロールとしては、予め、シリカゲル、活性炭などで不純物を吸着除去したものや、（酢酸エチル、トルエン及びヘキサン）などの溶媒を用いて不純物を抽出除去したものを用いることもできる。
【００１２】
精製トコフェロール
上記説明した本発明方法により、上記条件の液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ酸性物質がトコフェロール１ｇ中に、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下のトコフェロールを得ることができる。酸性物質量は実施例に記載の方法で測定できる。
本発明は、原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／若しくは蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質量を増大させずにトコフェロールを精製する方法、又は、原料トコフェロールの酸性物質量を増大させずに、着色性不純物を除去する方法も包含する。
【実施例】
【００１３】
以下、本発明を実施例を挙げてより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（１）精製法の検討
ｄ-δ-トコフェロール（（Lot No.６１０２）；タマ生化学株式会社製 ｄ-δ-トコフェロール含量87.9％）を、以下の各方法で精製した。
(a)減圧蒸留法
ｄ-δ-トコフェロールを、外温２６０〜２７０℃で減圧蒸留し、２１０〜２２３℃/２７０Pa(約２ｍｍＨｇ)の留分として淡黄色オイルを得た。
(b) シリカゲルカラムクロマトグラフィー法
富士シリシア株式会社製シリカゲルPSQ60AB ４５ｇをn-ヘキサンに懸濁し、直径２５mmのカラム管に充填した。ｄ-δ-トコフェロール ５ｇを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：２０の混合溶媒１０ｍLに溶解し、カラムクロマトグラフィーに供した。酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１５の混合溶媒で溶出し、黄褐色のオイルを４．３ｇ得た(収率８７．８%)。
(c)シリカゲルスラッジ法
ｄ-δ-トコフェロール ５．５ｇを酢酸エチル ２０ｍLに溶解した。シリカゲル６０N, １１ｇを加え室温で３０分撹拌して吸引ろ過した。残渣は酢酸エチル ２０ｍLで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮し、黄褐色のオイルを５．３８ｇ得た(収率９７．８２%)。
(d)抽出法
ｄ-δ-トコフェロール ６．３ｇをトルエン ３０ｍLに溶解し、有機層を５%重曹水、１M 塩酸水、５%重曹水、水、２０%塩化ナトリウム水の順で洗浄した。有機層は無水硫酸ナトリウムで脱水した後、ろ過し、ろ液を減圧濃縮して黄褐色のオイルを６．０５ｇ得た(収率９６．０３%)。
(e)活性炭カラム法
クロマトグラム用活性炭素２０gを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０の混合溶媒に懸濁し、直径２５mmのカラム管に充填した。ｄ-δ-トコフェロール １０ｇを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０の混合溶媒１０ｍLに溶解し、カラムクロマトグラフィーに供した。酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０で溶出し、黄褐色のオイルを９．１７ｇ得た(収率９１．７%)。
【００１４】
精製前の原料ｄ-δ-トコフェロール、及び上記(a)〜(e)の各方法で精製した直後の精製ｄ-δ-トコフェロールについて、定量用ｄ-δ-トコフェロール(含量９９．０％以上)を標準品に用い、第１５改正日本薬局方の一般試験法の項目に記載の液体クロマトグラフィーにより純度を測定した。液体クロマトグラフィー条件は以下の通りである。
・カラム：ステンレス管にポリアミンを化学結合した液体クロマトグラフィー用シリカゲルを充填したもの。
・移動相：ヘキサン／酢酸エステル混液
・流量：ｄ-α-トコフェロールの保持時間が約２０分になるように調整する
・検出器：紫外吸光光度計
・検出波長：２９０ｎｍ
・定量用ｄ-δ-トコフェロール：ビタミンE定量用標準試薬、含量９９．０％以上（発売元エーザイフード・ケミカル(株)、製造元タマ生化学(株)）
また、目視により、製造直後の色、及び５０℃で１週間保管した後の色を観察した。
結果を以下の表１に示す。
【００１５】
【表１】
表１より、減圧蒸留で精製することにより、最も高純度で、かつ着色の少ないδ-トコフェロールが得られたことが分かる。また、減圧蒸留により、得られたδ−トコフェロールは５０℃の高温下で保管した後にも、わずかに着色が強くなったにすぎず、長期保管しても着色度合いが強くならないことが示された。
【００１６】
（２）減圧蒸留の条件の検討
上記(a)の減圧蒸留条件、及び(a)において塔頂温度、及び蒸留時間を種々変化させた条件で、それぞれ減圧蒸留を行い、蒸留前後の酸性物質（滴定液消費量）を測定し、その増加量を評価した。
＜酸性物質量の測定方法＞
被験試料１０ｇをとり、無水エタノール及びエーテルの等容量混液５０ｍLを加えて溶かし、０．１mol／L水酸化ナトリウム液で滴定して、その消費量を測定する。（指示薬：フェノールフタレイン試液３滴）
【００１７】
結果を、以下の表２に示す。
【表２】
【００１８】
表２から明らかなように、塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の実施例１〜５で精製したδ−トコフェロールは、塔頂温度２４０℃超、及び蒸留時間２００分間超の比較例１、２で精製したδ−トコフェロールに比べて、酸性物質の増加量が少なかった。
また、塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の実施例１及び２で精製したδ−トコフェロールは、塔頂温度２４０℃以下（蒸留時間２００分間超）の実施例３、４で精製したδ−トコフェロール、及び蒸留時間２００分間以下（蒸留時間２００分間超）の実施例５で精製したδ−トコフェロールに比べて、酸性物質の増加量が少なかった。
【産業上の利用可能性】
【００１９】
本発明方法は、単蒸留という簡単な方法で、酸性物質の増加を抑制しつつ、トコフェロールの着色性不純物を効率的に除去することができる。これにより得られるトコフェロールは、製造直後の着色が少ないとともに、長期保管しても着色し難いものとなる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製されたトコフェロールの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トコフェロール類はその優れた生理活性や抗酸化作用により、医薬品、健康食品、化粧品、飼料などの成分として広く使用されている。トコフェロールは、その抗酸化作用により、活性酸素が引き起こす種々の疾患の予防、改善に有効であると考えられている。また、トコフェロールの生理活性としては、抗酸化作用に基づく老化防止活性などの他、抗不妊活性、抗筋萎縮活性、抗溶血活性などが知られている。また、トコフェロールはその抗酸化作用により、食品や化粧品の抗酸化剤としても広く使用されている。
天然トコフェロールは、大豆や菜種などの植物油脂中に含まれており、これらの油脂から抽出することにより製造される。また、合成トコフェロールは、例えば、トリメチルハイドロキノンとフィトール、イソフィトール、又はフィチールハライドとの縮合反応によって得られる。
しかし、これらの方法で得られる市販のトコフェロールは着色性不純物を含んでいるため、経時的に着色度合いが強くなり易い。従って、トコフェロールの効率的な精製方法が求められている。
トコフェロールの脱色を目的とする精製法として、例えば、特許文献１は、α−トコフェロールアセテートを含む反応生成物を特定温度・時間条件の蒸留に供して低沸点物を除去した後、１９０℃以下で蒸留する方法を開示している。また、特許文献２は、亜鉛、鉄、スズの１種以上と、微量の酸の存在下で処理して脱色する方法を開示している。しかし、これらの方法では、着色性不純物を十分に除去することができない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開昭５１−１０００８１号
【特許文献２】特開昭４９−８００７４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、経時的な着色が抑制された精製トコフェロールの効率的な製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は上記課題を解決するために研究を重ね、以下の知見を得た。
(i) 精製方法としては、シリカゲルや活性炭などを用いて不純物を吸着する方法、特定溶媒への分配を利用して抽出により不純物を除去する方法、蒸留法などがあるが、蒸留法により精製したトコフェロールは、製造直後の着色が少なく、かつ経時的な着色度度合いの増大も少ない。
(ii) 蒸留法でトコフェロールを精製すると、却って、酸性物質が増加する。
(iii) 最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留することにより、酸性物質の増加を抑えつつ、着色度合い及びその経時的な増大が抑制された精製トコフェロールが得られる。
【０００６】
本発明は、上記知見に基づき完成されたものであり、以下の精製トコフェロールの製造方法等を提供する。
項１． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
項２． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、項１に記載の方法。
項３． 液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ精製トコフェロール１ｇ中に含まれる酸性物質が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下である精製トコフェロールを得る、項１又は２に記載の方法。
項４． 原料トコフェロールとして、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロール純度が８０％以上のものを用いる、項１〜３のいずれかに記載の方法。
項５． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質の増加を抑制しつつトコフェロールを精製する方法。
項６． 原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、原料トコフェロールの酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を除去する方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明方法によれば、酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を効率的に除去することができる。なお、酸性物質の増加には、酸性物質量の増大や、酸性物質の種類の増加などが含まれる。これにより得られるトコフェロールは、製造直後の着色が少ないとともに、長期保管しても着色し難いものとなる。また、酸性物質が多いと臭いが強くなるが、本発明方法により得られるトコフェロールは、このような問題が生じ難い。
また、本発明方法は溶媒を使用しないため、溶媒が混入する恐れがなく、食品素材として使用し易い精製トコフェロールが得られる。また、本発明方法は、簡単な装置を用いて実施できる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の精製トコフェロールの製造方法は、原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む方法である。
単蒸留
単蒸留は、常圧蒸留でもよく減圧蒸留でもよいが、トコフェロールの熱変性や熱分解を回避するために減圧蒸留が好ましい。減圧度は、約０．１〜１０ｍｍHgが好ましく、約０．２〜５ｍｍHgがより好ましく、約０．５〜３ｍｍHgがさらにより好ましい。上記範囲であれば、操作が困難になることなく、トコフェロールの変性や分解を抑制することができる。
また、単蒸留の装置は、バッチ式でも良く、連続式でもよい。
最高塔頂温度は、通常２４０℃以下、好ましくは２３０℃以下、より好ましくは２２０℃以下とすることができる。最高塔頂温度の下限値は通常１８０℃程度とすればよい。上記範囲であれば、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
また、蒸留時間は、通常２００分間以下、好ましくは１８０分間以下、より好ましくは１７０分間以下とすることができる。蒸留時間の下限値は通常８０分間程度とすればよい。上記範囲であれば、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
さらに、上記の最高塔頂温度、及び上記の蒸留時間の条件とすることにより、一層効果的に、酸性物質、及び着色性不純物の少ない精製トコフェロールが得られる。
【０００９】
原料トコフェロール
原料トコフェロールは、大豆油、菜種油、ゴマ油、オリーブ油などの植物油から抽出された天然トコフェロールでもよく、合成トコフェロールでもよい。通常は、市販品を使用すればよい。
トコフェロールは、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロールの何れであってもよい。また、各トコフェロールは、ｄ-体であってもよく、ｌ-体であってもよい。また、これらの２種以上の混合物であってもよい。本発明方法は、特に、δ-トコフェロール、中でもｄ-δ-トコフェロールを主成分とする原料トコフェロールの精製に好適である。
原料トコフェロールとしては、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロールの純度が８０％以上、中でも８２％以上、特に８５％以上のものが好ましい。
本発明において、トコフェロールの定量のための液体クロマトグラフィーは、定量用ｄ-δ-トコフェロール(含量９９．０％以上)を標準品に用い、第１５改正日本薬局方の一般試験法の項目に記載の方法で行う。条件は以下の通りである。
・検出器：紫外吸光光度計
・カラム：ステンレス管にポリアミンを化学結合した液体クロマトグラフィー用シリカゲルを充填する。
・移動相：ヘキサン／酢酸エステル混液
・検出波長：２９０ｎｍ
・定量用ｄ-δ-トコフェロール：ビタミンＥ定量用標準試薬、含量９９．０％以上（発売元エーザイフード・ケミカル(株)、製造元タマ生化学(株)、又はこれと同等の性質を有するもの）
また、原料トコフェロールは、滴定法により測定するとき総トコフェロール９６％以上を含み、さらにガスクロマトグラフ法により測定するとき、その総トコフェロール量の９０％以上のｄ-δ-トコフェロールを含むものが好ましい。
【００１０】
本発明において、トコフェロールの定量のための滴定は、以下の条件で行う。
被験試料約０．０５ｇを精密に量り、硫酸のエタノール液（硫酸３ｍＬにエタノールを加えて２００ｍＬにしたもの）１００ｍＬを加えて溶かした後、水２０ｍＬを加え、よくかき混ぜながら、０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸第二セリウム液で滴定する（指示薬：ジフェニルアミン試液２滴）。ただし、操作は直射日光を避け、なるべく暗所で行い、滴加速度は１０秒間に２５滴とし、滴定の終点は液の灰青色が１０秒間持続するときとする。同様の方法で空試験を行い補正する。
０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸第二セリウム液の１ｍＬは、トコフェロールの分子量をＣ２７Ｈ４６Ｏ２としたときの２．０１３２ｍｇに相当する。従って、この比率を用いて、被験試料中の総トコフェロール量を算出する。
【００１１】
また、本発明において、トコフェロールの定量のためのガスクロマトグラフィーは、医薬部外品原料規格のｄ−δ−トコフェロールの項目の定量法（２）の方法に従い行う。具体的には、以下の条件で行う。
被験試料約０．１８ｇを精密に量り、無水酢酸１ｍＬ及びピリジン３ｍＬを加え、水浴上で３０分間加熱し、放冷する。冷後、ヘキサンを加えて１００ｍＬとする。その液５ｍＬをとり、ｎ−ドトリアコンタン０．２ｇをとり、ヘキサンを加えて溶かし１０００ｍＬとした内部標準溶液５ｍＬを加えて試料溶液とする。この試料溶液につき、次の条件でガスクロマトグラフ法により試験を行う。
・カラム：内径４ｍｍ、長さ２．４ｍのガラス製の管にメチルシリコーンを125〜150μｍのガスクロマトグラフ用ケイソウ土担体に５％の割合で被覆したものを充填する。
・カラム温度：２７５〜２８５℃の一定温度
・キャリアーガス：窒素
・流量：内標準物質の保持時間が２３〜２７分になるように調整する。
・注入量：３〜５μＬの一定量
さらに、面積百分率法により、以下の式に従い総トコフェロール中のｄ−δ−トコフェロールの比率を求める。
総トコフェロール中のｄ−δ−トコフェロールの量（％）
＝Ｓδ÷（Ｓｎ＋Ｓδ）×１００
Ｓδ：ｄ−δ−トコフェロールの面積
Ｓｎ：ｄ−δ−トコフェロール以外のトコフェロールの総面積
また、原料トコフェロールとしては、予め、シリカゲル、活性炭などで不純物を吸着除去したものや、（酢酸エチル、トルエン及びヘキサン）などの溶媒を用いて不純物を抽出除去したものを用いることもできる。
【００１２】
精製トコフェロール
上記説明した本発明方法により、上記条件の液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ酸性物質がトコフェロール１ｇ中に、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下のトコフェロールを得ることができる。酸性物質量は実施例に記載の方法で測定できる。
本発明は、原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／若しくは蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質量を増大させずにトコフェロールを精製する方法、又は、原料トコフェロールの酸性物質量を増大させずに、着色性不純物を除去する方法も包含する。
【実施例】
【００１３】
以下、本発明を実施例を挙げてより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（１）精製法の検討
ｄ-δ-トコフェロール（（Lot No.６１０２）；タマ生化学株式会社製 ｄ-δ-トコフェロール含量87.9％）を、以下の各方法で精製した。
(a)減圧蒸留法
ｄ-δ-トコフェロールを、外温２６０〜２７０℃で減圧蒸留し、２１０〜２２３℃/２７０Pa(約２ｍｍＨｇ)の留分として淡黄色オイルを得た。
(b) シリカゲルカラムクロマトグラフィー法
富士シリシア株式会社製シリカゲルPSQ60AB ４５ｇをn-ヘキサンに懸濁し、直径２５mmのカラム管に充填した。ｄ-δ-トコフェロール ５ｇを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：２０の混合溶媒１０ｍLに溶解し、カラムクロマトグラフィーに供した。酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１５の混合溶媒で溶出し、黄褐色のオイルを４．３ｇ得た(収率８７．８%)。
(c)シリカゲルスラッジ法
ｄ-δ-トコフェロール ５．５ｇを酢酸エチル ２０ｍLに溶解した。シリカゲル６０N, １１ｇを加え室温で３０分撹拌して吸引ろ過した。残渣は酢酸エチル ２０ｍLで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮し、黄褐色のオイルを５．３８ｇ得た(収率９７．８２%)。
(d)抽出法
ｄ-δ-トコフェロール ６．３ｇをトルエン ３０ｍLに溶解し、有機層を５%重曹水、１M 塩酸水、５%重曹水、水、２０%塩化ナトリウム水の順で洗浄した。有機層は無水硫酸ナトリウムで脱水した後、ろ過し、ろ液を減圧濃縮して黄褐色のオイルを６．０５ｇ得た(収率９６．０３%)。
(e)活性炭カラム法
クロマトグラム用活性炭素２０gを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０の混合溶媒に懸濁し、直径２５mmのカラム管に充填した。ｄ-δ-トコフェロール １０ｇを酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０の混合溶媒１０ｍLに溶解し、カラムクロマトグラフィーに供した。酢酸エチル：n-ヘキサン=１：１０で溶出し、黄褐色のオイルを９．１７ｇ得た(収率９１．７%)。
【００１４】
精製前の原料ｄ-δ-トコフェロール、及び上記(a)〜(e)の各方法で精製した直後の精製ｄ-δ-トコフェロールについて、定量用ｄ-δ-トコフェロール(含量９９．０％以上)を標準品に用い、第１５改正日本薬局方の一般試験法の項目に記載の液体クロマトグラフィーにより純度を測定した。液体クロマトグラフィー条件は以下の通りである。
・カラム：ステンレス管にポリアミンを化学結合した液体クロマトグラフィー用シリカゲルを充填したもの。
・移動相：ヘキサン／酢酸エステル混液
・流量：ｄ-α-トコフェロールの保持時間が約２０分になるように調整する
・検出器：紫外吸光光度計
・検出波長：２９０ｎｍ
・定量用ｄ-δ-トコフェロール：ビタミンE定量用標準試薬、含量９９．０％以上（発売元エーザイフード・ケミカル(株)、製造元タマ生化学(株)）
また、目視により、製造直後の色、及び５０℃で１週間保管した後の色を観察した。
結果を以下の表１に示す。
【００１５】
【表１】
表１より、減圧蒸留で精製することにより、最も高純度で、かつ着色の少ないδ-トコフェロールが得られたことが分かる。また、減圧蒸留により、得られたδ−トコフェロールは５０℃の高温下で保管した後にも、わずかに着色が強くなったにすぎず、長期保管しても着色度合いが強くならないことが示された。
【００１６】
（２）減圧蒸留の条件の検討
上記(a)の減圧蒸留条件、及び(a)において塔頂温度、及び蒸留時間を種々変化させた条件で、それぞれ減圧蒸留を行い、蒸留前後の酸性物質（滴定液消費量）を測定し、その増加量を評価した。
＜酸性物質量の測定方法＞
被験試料１０ｇをとり、無水エタノール及びエーテルの等容量混液５０ｍLを加えて溶かし、０．１mol／L水酸化ナトリウム液で滴定して、その消費量を測定する。（指示薬：フェノールフタレイン試液３滴）
【００１７】
結果を、以下の表２に示す。
【表２】
【００１８】
表２から明らかなように、塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の実施例１〜５で精製したδ−トコフェロールは、塔頂温度２４０℃超、及び蒸留時間２００分間超の比較例１、２で精製したδ−トコフェロールに比べて、酸性物質の増加量が少なかった。
また、塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の実施例１及び２で精製したδ−トコフェロールは、塔頂温度２４０℃以下（蒸留時間２００分間超）の実施例３、４で精製したδ−トコフェロール、及び蒸留時間２００分間以下（蒸留時間２００分間超）の実施例５で精製したδ−トコフェロールに比べて、酸性物質の増加量が少なかった。
【産業上の利用可能性】
【００１９】
本発明方法は、単蒸留という簡単な方法で、酸性物質の増加を抑制しつつ、トコフェロールの着色性不純物を効率的に除去することができる。これにより得られるトコフェロールは、製造直後の着色が少ないとともに、長期保管しても着色し難いものとなる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
【請求項２】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ精製トコフェロール１ｇ中に含まれる酸性物質が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下である精製トコフェロールを得る、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
原料トコフェロールとして、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロール純度が８０％以上のものを用いる、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質の増加を抑制しつつトコフェロールを精製する方法。
【請求項６】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、原料トコフェロールの酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を除去する方法。
【請求項１】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、精製トコフェロールの製造方法。
【請求項２】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
液体クロマトグラフィーにより測定される純度が９０％以上、かつ精製トコフェロール１ｇ中に含まれる酸性物質が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム液 ２ｍＬに相当する量以下である精製トコフェロールを得る、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
原料トコフェロールとして、液体クロマトグラフィーにより測定されるδ-トコフェロール純度が８０％以上のものを用いる、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、酸性物質の増加を抑制しつつトコフェロールを精製する方法。
【請求項６】
原料トコフェロールを、最高塔頂温度２４０℃以下、及び／又は蒸留時間２００分間以下の条件で単蒸留する工程を含む、原料トコフェロールの酸性物質の増加を抑制しつつ、着色性不純物を除去する方法。
【公開番号】特開２０１１−１５７３０５（Ｐ２０１１−１５７３０５Ａ）
【公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２０８０７（Ｐ２０１０−２０８０７）
【出願日】平成２２年２月２日（２０１０．２．２）
【出願人】（０００１１５９９１）ロート製薬株式会社 (366)
【出願人】（０００２３４６０５）白鳥製薬株式会社 (17)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月２日（２０１０．２．２）
【出願人】（０００１１５９９１）ロート製薬株式会社 (366)
【出願人】（０００２３４６０５）白鳥製薬株式会社 (17)
【Ｆターム（参考）】
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