本発明は、維持、細胞仕様、細胞決定、幹細胞運命の誘導、細胞分化、細胞脱分化、および細胞分化転換などの細胞運命の修飾因子を同定および立証する組成および方法を提供する。本発明は、レポ-タ-核酸コンストラクト、そのようなコンストラクトを含む宿主細胞、およびそのような細胞およびコンストラクトを使用した方法に関連する。本発明は、蛍光発生オリゴヌクレオチドを使用する１個または複数のレポ-タ-核酸コンストラクトを含む細胞を産生する方法に関連する。これらの方法は高処理量のスクリ-ンに関連する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸コンストラクトであって、
（ａ）ＯＲＦが細胞型関連（ＣＴＲ）プロモータと機能的に連結するレポ-タ-をコ-ド化する前記翻訳領域（ＯＲＦ）、および
（ｂ）標的配列ＲＮＡ１（「ＴＳＲ１」）をコ-ド化する塩基配列、を含むコンストラクト。
【請求項２】
標的配列ＲＮＡ２（「ＴＳＲ２」）をコ-ド化する塩基配列さらに含む請求項１に記載の核酸コンストラクト。
【請求項３】
標的配列ＲＮＡ３（「ＴＳＲ３」）をコ-ド化する塩基配列をさらに含む請求項２に記載の核酸コンストラクトであって、前記ＴＳＲ３が前記レポ-タ-と同時転写される核酸コンストラクト。
【請求項４】
前記ＣＴＲプロモータが幹細胞プロモータである請求項１、２、または３に記載の核酸コンストラクト。
【請求項５】
前記ＣＴＲプロモータが細胞内で背景レベルより上に活性化する請求項３に記載の核酸コンストラクトを有する宿主細胞。
【請求項６】
前記ＣＴＲプロモータが細胞内で背景レベルより上に活性化しない請求項３に記載の核酸コンストラクトを有する宿主細胞。
【請求項７】
前記ＣＴＲプロモータが細胞内で背景レベルより上に活性化する請求項４に記載の核酸コンストラクトを有する宿主細胞。
【請求項８】
前記ＣＴＲプロモータが細胞内で活性化しない請求項４に記載の核酸コンストラクトを有する宿主細胞。
【請求項９】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸さらに含む請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸さらに含む請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸さらに含む請求項７に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸さらに含む請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
組換え型細胞を産生する方法であって、
（ａ）請求項３に記載の核酸コンストラクトを細胞に導入するステップ、
（ｂ）ＴＳＲ１、ＴＳＲ２、およびＴＳＲ３に相補的な蛍光発生オリゴヌクレオチドを前記細胞に導入するステップ、および
（ｃ）背景レベルより上で、ＴＳＲ１およびＴＳＲ２を転写しかつＴＳＲ３を転写しない細胞を選択するステップ、
を含む方法。
【請求項１４】
組換え型細胞を産生する方法であって、
（ａ）請求項３に記載の核酸コンストラクトを細胞に導入するステップ、
（ｂ）ＴＳＲ１、ＴＳＲ２、およびＴＳＲ３に相補的な蛍光発生オリゴヌクレオチドを前記細胞に導入するステップ、および
（ｃ）背景レベルより上で、ＴＳＲ１、ＴＳＲ２、およびＴＳＲ３を転写する細胞を選択するステップ、
を含む方法。
【請求項１５】
前記ＣＴＲプロモータが幹細胞プロモータである請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
細胞型の修飾因子を同定する方法であって、
（ａ）請求項６に記載の細胞を化合物に接触させるステップ、および
（ｅ）前記レポ-タ-の活性または発現レベルを測定するステップ
を含む方法であって、；
前記化合物の非存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルのそれぞれと比較して、前記化合物の存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルが増加または減少するならば前記化合物が細胞型の修飾因子である方法。
【請求項１７】
細胞型の陽性修飾因子を同定する方法であって、
（ａ）請求項７に記載の細胞を化合物に接触させるステップ、および
（ｅ）前記レポ-タ-の活性または発現レベルを測定するステップ
を含む方法であって、
前記化合物の非存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルのそれぞれと比較して、前記化合物の存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルが増加するならば前記化合物が細胞型の陽性修飾因子である方法。
【請求項１８】
前記ＣＴＲプロモータが幹細胞プロモータである請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＴＲ因子をコ-ド化するＣＴＲ因子または組換え型核酸を前記細胞に導入するステップをさらに含む請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＴＲ因子をコ-ド化するＣＴＲ因子または組換え型核酸を前記細胞に導入するステップをさらに含む請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＴＲ因子をコ-ド化するＣＴＲ因子または組換え型核酸を前記細胞に導入するステップをさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＣＴＲプロモータが筋細胞特異的プロモータである請求項１、２、または３のいずれかに記載の核酸コンストラクト。
【請求項２３】
前記筋細胞特異的プロモータが活性化する請求項２２に記載の核酸コンストラクトを含む宿主細胞。
【請求項２４】
前記筋細胞特異的プロモータが、背景レベルより上に活性化しない請求項２２に記載の核酸コンストラクトを含む宿主細胞。
【請求項２５】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸をさらに含む請求項２３に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
ＣＴＲ因子をコ-ド化する組換え型核酸をさらに含む請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
筋細胞分化の修飾因子を同定する方法であって、：
（ａ）請求項２３に記載の宿主細胞を化合物に接触させるステップ、および
（ｅ）前記レポ-タ-の活性または発現レベルを測定するステップ
を含む方法であって、
前記化合物の非存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルのそれぞれと比較して、前記化合物の存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルが増加または減少するならば前記化合物が筋細胞分化の修飾因子である方法。
【請求項２８】
筋細胞分化の陽性修飾因子を同定する方法であって、
（ａ）請求項２４に記載の宿主細胞を化合物に接触させるステップ、および
（ｅ）前記レポ-タ-の活性または発現レベルを測定するステップ
を含む方法であって、
前記化合物の非存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルのそれぞれと比較して、前記化合物の存在下で前記レポ-タ-の活性または発現レベルが増加するならば前記化合物が筋細胞分化の陽性修飾因子である方法。
【請求項２９】
ＴＳＲ１をコ-ド化する前記塩基配列が恒常的活性型プロモータと機能的に連結する請求項１に記載の核酸コンストラクト。
【請求項３０】
ＴＳＲ１およびＴＳＲ２をコ-ド化する前記塩基配列が恒常的活性型プロモ-タと機能的に連結する請求項２または請求項３に記載の核酸コンストラクト。

【公表番号】特表２０１３−５００７２２（Ｐ２０１３−５００７２２Ａ）
【公表日】平成２５年１月１０日（２０１３．１．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２３０７２（Ｐ２０１２−５２３０７２）
【出願日】平成２２年７月３０日（２０１０．７．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４３８５２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０１４７４０
【国際公開日】平成２３年２月３日（２０１１．２．３）
【出願人】（５１１１８１５４４）クロモセル　コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】