経口用肌改善剤および肌改善用食品組成物
【課題】加熱したり、酸性条件下におかれた際にも分解され難く、肌改善効果を十分に発揮する経口用肌改善剤およびこれを含有する肌改善用食品組成物を提供する。
【解決手段】経口用肌改善剤は、主成分として純度が９０％以上、好ましくは９５％以上で、平均分子量が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。
【解決手段】経口用肌改善剤は、主成分として純度が９０％以上、好ましくは９５％以上で、平均分子量が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトの肌状態を改善するための経口用肌改善剤および肌改善用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類である。ヒアルロン酸の皮膚細胞中の存在量は加齢とともに減少し、それに伴い皮膚の弾力性や柔軟性が低下し、肌荒れや小皺が発生する。このため、肌の潤いを保持することや肌荒れを改善することを期待し、ヒアルロン酸を保湿剤として化粧料に配合し、これを皮膚に塗布することが従来より行われている。
【０００３】
しかし、人間の皮膚には、本来的に外的要因から身体を保護する作用、つまり生体防御作用が備わっているために、高分子量のヒアルロン酸自体が皮膚の表皮を通り抜けて真皮組織まで到達するのは難しいと考えられる。つまり、ヒアルロン酸含有化粧料は主にヒアルロン酸を皮膚に塗布したときの「保湿効果」を利用しているのが殆どで、皮膚の内部にまで作用するような本質的な肌荒れ改善効果が得られていないというのが現状である。
【０００４】
そこで、本出願人は、ヒアルロン酸を含有することを特徴とする経口用肌改善剤に関する発明を行い、既に特許出願している（特許文献１）。上記のヒアルロン酸を使用することにより、経口摂取した際に優れた肌改善効果を発揮させるとともに、保存安定性に優れた経口用肌改善剤を得ることができる。
【０００５】
しかしながら、ヒアルロン酸および／またはその塩は、加熱や酸性条件下では低分子化しやすいため、経口摂取した際の体内での挙動によっては、期待した肌改善効果が得られない場合があった。
【特許文献１】特開２００２−３５６４３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、加熱や酸性条件下においても低分子化し難いヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤ならびに肌改善用食品を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、ヒアルロン酸および／またはその塩について鋭意研究を重ねた結果、特定の平均粒子径を有するヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤が、意外にも、加熱や酸性条件下においても安定であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）平均分子量が２０万以上であって、平均粒子径が５０〜５００μｍである、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤。
（２）（１）の経口用肌改善剤を含有する肌改善用食品組成物、
である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤は、加熱や酸性条件下においても、ヒアルロン酸および／またはその塩が低分子化することなく、長期間安定に分子量を保つことができ、経口摂取した際に期待される肌改善効果を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下本発明を説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」、「部」は「質量部」を意味する。
【００１０】
本発明における「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類をいう。また、「ヒアルロン酸の塩」としては、特に限定されないが、食品または薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
【００１１】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は２０万以上であり、好ましくは５０万〜１５０万であり、より好ましくは７５万〜１２０万である。ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量が上記範囲外の場合、該ヒアルロン酸および／またはその塩を経口摂取することによる肌改善効果が小さいおそれがあり、好ましくない。
【００１２】
また、本発明で使用する精製ヒアルロン酸の平均分子量は下記の方法に求めた値として定義される。
【００１３】
約０．０５ｇの精製ヒアルロン酸を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液およびこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液および０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１法 毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３））に代入し、平均分子量を算出する（T.C.
Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,:B.B.A., 42, 476-485(1960)）。
【００１４】
ヒアルロン酸および／またはその塩は、動物等の天然物（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液などの生体組織など）から抽出されたものでもよく、または、微生物もしくは動物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的もしくは酵素的に合成されたものなどいずれも使用することができる。
【００１５】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩は、市販品を使用することができるが、例えば、以下の製造法１および２に従って製造することもできる。
【００１６】
１．１．製造法１（鶏冠からの抽出） 鶏冠に加熱処理を施す。加熱処理方法、加熱温度、時間は、鶏冠中の蛋白質が変性したり、酵素が失活したりする範囲内であれば、特に制限がなく、熱水による加熱法を採用する場合は、６０〜１００℃の熱水中に原料を浸漬するとよい。
【００１７】
次に、加熱処理した鶏冠をペースト化し、塩酸、硫酸等の酸剤、または水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ剤を添加し酸処理またはアルカリ処理してヒアルロン酸を低分子化し、処理後のヒアルロン酸の平均分子量を調整する。調整方法としては、酸剤あるいはアルカリ剤の濃度、添加量および処理時間等を適宜組み合わせて、処理後のヒアルロン酸が所望の分子量となるようにすればよいが、アルカリ処理による方法がヒアルロン酸の分子量をコントロールし易く好ましい。
【００１８】
次に、分子量を調整した原料に蛋白分解酵素を添加して、プロテアーゼ処理する。使用する蛋白分解酵素は、市販しているものであれば種類を問わず使用することができ、例えば、ペプシン、トリプシン、パパイン、プロメリン等が挙げられる。
【００１９】
最後に、得られたプロテアーゼ処理物からヒアルロン酸を分取して、粗製のヒアルロン酸を得た後、このヒアルロン酸を精製することにより純度９０％以上のヒアルロン酸が得られる。
【００２０】
ここで、ヒアルロン酸の分取・精製は、常法に従って行うことができる。例えば、まず、プロテアーゼ処理した原料を濾過して固形物を除去して、粗製のヒアルロン酸を含有した濾液を得る。なお、濾過に先立ち、脱臭・脱色や一部の蛋白分解物を除去する目的で、プロテアーゼ処理物に活性炭を添加し処理してもよい。そして得られた濾液に食塩を溶解させた後、エタノールを添加してヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物を分取する。その後、この沈殿物にエタノール濃度約８０〜９５容量％の含水エタノールを添加し、ホモゲナイザーで洗浄し、沈殿物を分取する。この含水エタノールによる洗浄を２〜１０回程度繰り返し、分取した沈殿物を乾燥することで、製造例１のヒアルロン酸を得ることができる。
【００２１】
１．２．製造法２（微生物発酵法）
ヒアルロン酸産出ストレプトコッカス属の微生物（Streptococcus Zoopidemicus）の培養液に活性炭を添加して脱臭・脱色処理を行った後、濾過処理する。得られた濾液に食塩を溶解させた後、エタノールを添加してヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物を分取する。その後、この沈殿物にエタノール濃度約８０〜９５容量％の含水エタノールを添加し、ホモゲナイザーで洗浄し、沈殿物を分取する。この含水エタノールによる洗浄を２〜１０回程度繰り返し、分取した沈殿物を乾燥することで、製造例２のヒアルロン酸を得ることができる。
【００２２】
なお、本発明において使用するヒアルロン酸の純度は、食品で使用できるレベルであればよく、好ましくは９０％以上であればよく、より好ましくは９５％以上であればよい。この純度は乾物換算で１００％よりヒアルロン酸以外の不純物を除いた値として定義される。ここで、不純物としては、蛋白分解物、脂肪分（粗脂肪）、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。具体的に鶏冠を原料とするヒアルロン酸の純度は、以下式（４）で求めることができる。
【００２３】
式（４）中、蛋白分解物（％）はＬｏｗｒｙ法により求めた値であり、粗脂肪（％）は新・食品分析法（光琳（株）発行）「第１章一般成分および関連成分、１−４脂質、１−４−２エーテル抽出法」により求めた値であり、また、コンドロイチン硫酸（％）は、以下に説明する方法により得た値である。
【００２４】
まず、ヒアルロン酸を乾燥し、その５０ｍｇを精密に量り、精製水を加えて溶かし、正確に１００ｍＬとして試験溶液とし、その試験溶液４ｍＬを試験管にとり、０．５ｍｏｌ／Ｌ濃度の硫酸１ｍＬを加えて混和し、水浴中で１０分間加熱し、その後冷却して得られた溶液に０．０４ｍｏｌ／Ｌ濃度の臭化セチルトリメチルアンモニウムを０．２ｍＬ加えて混和し、室温で１時間放置し、層長１０ｍｍ、波長６６０ｎｍにおける吸光度を測定する。
【００２５】
次に、得られた吸光度データをコンドロイチン硫酸の検量線に適用して精製ヒアルロン酸中のコンドロイチン硫酸量（％）を求める。ここで、その検量線は、クジラ軟骨由来のコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩（ＳＧ（Special Grade）、生化学工業株式会社製）を乾燥（減圧、五酸化リン、６０℃、５時間）させたものを精密に量り、精製水を加えて溶かし、１ｍＬ中に１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇのコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩を含む溶液をそれぞれ調製し、それぞれの溶液４ｍＬについて、０．５ｍｏｌ／Ｌ濃度の硫酸１ｍＬを加えて混和した後、０．０４ｍｏｌ／Ｌ濃度の臭化セチルトリメチルアンモニウムを０．２ｍＬ加えて混和し、室温で１時間放置した後、同様に吸光度を測定し、その吸光度を縦軸に、対応するコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩溶液（μｇ／ｍＬ）を横軸にプロットすることによって作成したものである。
【００２６】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩の平均粒子径は、５０〜５００μｍである。平均粒子径が上記範囲以下の場合は、ヒアルロン酸および／またはその塩が不安定化する場合がある。また、ヒアルロン酸および／またはその塩の平均粒子径が上記範囲以上に大きい場合は、経口摂取した際に、体内で溶解し難い場合がある。なお、平均粒子径の測定方法は、一般的に知られたレーザー回折式測定法や、動的光散乱式測定法等を挙げることができる。
【００２７】
上記のヒアルロン酸および／またはその塩の粒子径の調整方法は、特に限定されるものではない。例えば、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液を、噴霧乾燥、凍結乾燥等により乾燥処理を施した後、必要に応じて粉砕を行う方法等が挙げられる。
【００２８】
本発明の一実施形態に係る食品組成物は、本発明の経口用肌改善剤を含有する。すなわち、本発明の肌改善効果を有する食品組成物は、平均粒子径が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含む。
【００２９】
上記食品組成物の態様は、平均粒子径が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含むものであれば特に限定されるものではないが、例えば、乾燥食品、カプセル状等のサプリメント類等の一般食品全般、生理機能を表現することを許可された特定保健用食品全般を挙げることができる。サプリメントを調製する場合、種々の食品素材または飲料品素材を添加することによって、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、カプセル状などの形態の食品製剤とすることができる。また、この食品製剤には、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤などを適宜添加してもよい。さらに、その他の肌改善成分を含むこともできる。
【００３０】
次に、本発明を実施例、比較例および試験例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３１】
［実施例］
平均粒子径が異なる、平均分子量８０万のヒアルロン酸からなる粉末（ヒアルロン酸の純度９７％）を使用して、人工胃液中での溶解速度を評価した。具体的には、平均分子量８０万のヒアルロン酸を篩い分けして表１に記載の各平均粒子径を有するヒアルロン酸を調製した。
【００３２】
平均分子量８０万のヒアルロン酸を使用して、篩い分けは、篩１（６５メッシュ（目開き２０８μｍ））、篩２（１５０メッシュ（目開き１０４μｍ））、篩３（２５０メッシュ（目開き６１μｍ））の篩を用いた。
【００３３】
篩１を通過したが篩２を通過しなかった粒子を試験例１の粉末とし、篩２を通過したが篩３を通過しなかった粒子を試験例２の粉末とし、篩１を通過しなかった粒子を試験例３の粉末とし、篩３を通過した粒子を比較試験例１の粉末とした。
【００３４】
各ヒアルロン酸０．３ｇを人工胃液（ｐＨ１．２のＮａＣｌ０．２％水溶液）１００ｍＬに加え、同時に攪拌を行い、目視で完全溶解するまでの時間（溶解時間）を測定した。試験例１〜３および比較試験例１のヒアルロン酸からなる粉末の溶解時間を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】
以上の結果から、比較試験例１（平均粒子径５０μｍ未満）のヒアルロン酸に対して、試験例１〜３のヒアルロン酸（平均粒子径５０〜５００μｍ）の胃液中への溶解性が低いことがわかる。さらに、試験例１および３のヒアルロン酸（平均粒子径８０〜５００μｍ）の溶解性がより低く、試験例３のヒアルロン酸（平均粒子径２００〜５００μｍ）の溶解性がさらに低い。このことから、平均粒子径５０〜５００μｍである試験例１〜３のヒアルロン酸は、平均粒子径５０μｍ未満である比較試験例１のヒアルロン酸と比べて胃液中での加水分解を受けにくく、低分子化されにくいことがわかる。
【００３７】
以上により、平均粒子径５０〜５００μｍ、なかでも平均粒子径２００〜５００μｍである平均分子量８０万のヒアルロン酸は胃液による加水分解を受けにくく、低分子化されにくいことがわかる。すなわち、経口摂取した際に体内で低分子化が起こり難く、特に効果的に肌を改善することができる。
【００３８】
［配合例１］
試験例１のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。配合例１のソフトカプセルは、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例１のヒアルロン酸 ２０％
オリーブ油 ５０％
ミツロウ １０％
中鎖脂肪酸トリグリセリド １０％
乳化剤 １０％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【００３９】
［配合例２］
試験例２のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、下記の配合の錠剤を製した。配合例２の錠剤は、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例２のヒアルロン酸 ２５％
乳糖 ２４％
結晶セルロース ２０％
トウモロコシデンプン １５％
デキストリン １０％
乳化剤 ５％
二酸化ケイ素 １％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【００４０】
［配合例３］
試験例３のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、下記の配合の散剤（顆粒剤）を製した。配合例３の散剤は、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例３のヒアルロン酸 １０％
乳糖 ６０％
トウモロコシデンプン ２５％
ヒプロメロース ５％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤は、加熱や酸性条件下でも低分子化が起こりにくいことから、経口摂取した際に十分な肌改善効果を発揮することができる。また、本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤を、食品に配合して使用することが可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトの肌状態を改善するための経口用肌改善剤および肌改善用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類である。ヒアルロン酸の皮膚細胞中の存在量は加齢とともに減少し、それに伴い皮膚の弾力性や柔軟性が低下し、肌荒れや小皺が発生する。このため、肌の潤いを保持することや肌荒れを改善することを期待し、ヒアルロン酸を保湿剤として化粧料に配合し、これを皮膚に塗布することが従来より行われている。
【０００３】
しかし、人間の皮膚には、本来的に外的要因から身体を保護する作用、つまり生体防御作用が備わっているために、高分子量のヒアルロン酸自体が皮膚の表皮を通り抜けて真皮組織まで到達するのは難しいと考えられる。つまり、ヒアルロン酸含有化粧料は主にヒアルロン酸を皮膚に塗布したときの「保湿効果」を利用しているのが殆どで、皮膚の内部にまで作用するような本質的な肌荒れ改善効果が得られていないというのが現状である。
【０００４】
そこで、本出願人は、ヒアルロン酸を含有することを特徴とする経口用肌改善剤に関する発明を行い、既に特許出願している（特許文献１）。上記のヒアルロン酸を使用することにより、経口摂取した際に優れた肌改善効果を発揮させるとともに、保存安定性に優れた経口用肌改善剤を得ることができる。
【０００５】
しかしながら、ヒアルロン酸および／またはその塩は、加熱や酸性条件下では低分子化しやすいため、経口摂取した際の体内での挙動によっては、期待した肌改善効果が得られない場合があった。
【特許文献１】特開２００２−３５６４３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、加熱や酸性条件下においても低分子化し難いヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤ならびに肌改善用食品を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、ヒアルロン酸および／またはその塩について鋭意研究を重ねた結果、特定の平均粒子径を有するヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤が、意外にも、加熱や酸性条件下においても安定であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）平均分子量が２０万以上であって、平均粒子径が５０〜５００μｍである、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤。
（２）（１）の経口用肌改善剤を含有する肌改善用食品組成物、
である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤は、加熱や酸性条件下においても、ヒアルロン酸および／またはその塩が低分子化することなく、長期間安定に分子量を保つことができ、経口摂取した際に期待される肌改善効果を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下本発明を説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」、「部」は「質量部」を意味する。
【００１０】
本発明における「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類をいう。また、「ヒアルロン酸の塩」としては、特に限定されないが、食品または薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
【００１１】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量は２０万以上であり、好ましくは５０万〜１５０万であり、より好ましくは７５万〜１２０万である。ヒアルロン酸および／またはその塩の平均分子量が上記範囲外の場合、該ヒアルロン酸および／またはその塩を経口摂取することによる肌改善効果が小さいおそれがあり、好ましくない。
【００１２】
また、本発明で使用する精製ヒアルロン酸の平均分子量は下記の方法に求めた値として定義される。
【００１３】
約０．０５ｇの精製ヒアルロン酸を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液およびこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液および０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１法 毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３））に代入し、平均分子量を算出する（T.C.
Laurent, M. Ryan, A. Pietruszkiewicz,:B.B.A., 42, 476-485(1960)）。
【００１４】
ヒアルロン酸および／またはその塩は、動物等の天然物（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液などの生体組織など）から抽出されたものでもよく、または、微生物もしくは動物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的もしくは酵素的に合成されたものなどいずれも使用することができる。
【００１５】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩は、市販品を使用することができるが、例えば、以下の製造法１および２に従って製造することもできる。
【００１６】
１．１．製造法１（鶏冠からの抽出） 鶏冠に加熱処理を施す。加熱処理方法、加熱温度、時間は、鶏冠中の蛋白質が変性したり、酵素が失活したりする範囲内であれば、特に制限がなく、熱水による加熱法を採用する場合は、６０〜１００℃の熱水中に原料を浸漬するとよい。
【００１７】
次に、加熱処理した鶏冠をペースト化し、塩酸、硫酸等の酸剤、または水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ剤を添加し酸処理またはアルカリ処理してヒアルロン酸を低分子化し、処理後のヒアルロン酸の平均分子量を調整する。調整方法としては、酸剤あるいはアルカリ剤の濃度、添加量および処理時間等を適宜組み合わせて、処理後のヒアルロン酸が所望の分子量となるようにすればよいが、アルカリ処理による方法がヒアルロン酸の分子量をコントロールし易く好ましい。
【００１８】
次に、分子量を調整した原料に蛋白分解酵素を添加して、プロテアーゼ処理する。使用する蛋白分解酵素は、市販しているものであれば種類を問わず使用することができ、例えば、ペプシン、トリプシン、パパイン、プロメリン等が挙げられる。
【００１９】
最後に、得られたプロテアーゼ処理物からヒアルロン酸を分取して、粗製のヒアルロン酸を得た後、このヒアルロン酸を精製することにより純度９０％以上のヒアルロン酸が得られる。
【００２０】
ここで、ヒアルロン酸の分取・精製は、常法に従って行うことができる。例えば、まず、プロテアーゼ処理した原料を濾過して固形物を除去して、粗製のヒアルロン酸を含有した濾液を得る。なお、濾過に先立ち、脱臭・脱色や一部の蛋白分解物を除去する目的で、プロテアーゼ処理物に活性炭を添加し処理してもよい。そして得られた濾液に食塩を溶解させた後、エタノールを添加してヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物を分取する。その後、この沈殿物にエタノール濃度約８０〜９５容量％の含水エタノールを添加し、ホモゲナイザーで洗浄し、沈殿物を分取する。この含水エタノールによる洗浄を２〜１０回程度繰り返し、分取した沈殿物を乾燥することで、製造例１のヒアルロン酸を得ることができる。
【００２１】
１．２．製造法２（微生物発酵法）
ヒアルロン酸産出ストレプトコッカス属の微生物（Streptococcus Zoopidemicus）の培養液に活性炭を添加して脱臭・脱色処理を行った後、濾過処理する。得られた濾液に食塩を溶解させた後、エタノールを添加してヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物を分取する。その後、この沈殿物にエタノール濃度約８０〜９５容量％の含水エタノールを添加し、ホモゲナイザーで洗浄し、沈殿物を分取する。この含水エタノールによる洗浄を２〜１０回程度繰り返し、分取した沈殿物を乾燥することで、製造例２のヒアルロン酸を得ることができる。
【００２２】
なお、本発明において使用するヒアルロン酸の純度は、食品で使用できるレベルであればよく、好ましくは９０％以上であればよく、より好ましくは９５％以上であればよい。この純度は乾物換算で１００％よりヒアルロン酸以外の不純物を除いた値として定義される。ここで、不純物としては、蛋白分解物、脂肪分（粗脂肪）、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。具体的に鶏冠を原料とするヒアルロン酸の純度は、以下式（４）で求めることができる。
【００２３】
式（４）中、蛋白分解物（％）はＬｏｗｒｙ法により求めた値であり、粗脂肪（％）は新・食品分析法（光琳（株）発行）「第１章一般成分および関連成分、１−４脂質、１−４−２エーテル抽出法」により求めた値であり、また、コンドロイチン硫酸（％）は、以下に説明する方法により得た値である。
【００２４】
まず、ヒアルロン酸を乾燥し、その５０ｍｇを精密に量り、精製水を加えて溶かし、正確に１００ｍＬとして試験溶液とし、その試験溶液４ｍＬを試験管にとり、０．５ｍｏｌ／Ｌ濃度の硫酸１ｍＬを加えて混和し、水浴中で１０分間加熱し、その後冷却して得られた溶液に０．０４ｍｏｌ／Ｌ濃度の臭化セチルトリメチルアンモニウムを０．２ｍＬ加えて混和し、室温で１時間放置し、層長１０ｍｍ、波長６６０ｎｍにおける吸光度を測定する。
【００２５】
次に、得られた吸光度データをコンドロイチン硫酸の検量線に適用して精製ヒアルロン酸中のコンドロイチン硫酸量（％）を求める。ここで、その検量線は、クジラ軟骨由来のコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩（ＳＧ（Special Grade）、生化学工業株式会社製）を乾燥（減圧、五酸化リン、６０℃、５時間）させたものを精密に量り、精製水を加えて溶かし、１ｍＬ中に１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇのコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩を含む溶液をそれぞれ調製し、それぞれの溶液４ｍＬについて、０．５ｍｏｌ／Ｌ濃度の硫酸１ｍＬを加えて混和した後、０．０４ｍｏｌ／Ｌ濃度の臭化セチルトリメチルアンモニウムを０．２ｍＬ加えて混和し、室温で１時間放置した後、同様に吸光度を測定し、その吸光度を縦軸に、対応するコンドロイチン硫酸Ａナトリウム塩溶液（μｇ／ｍＬ）を横軸にプロットすることによって作成したものである。
【００２６】
本発明の経口用肌改善剤に含有されるヒアルロン酸および／またはその塩の平均粒子径は、５０〜５００μｍである。平均粒子径が上記範囲以下の場合は、ヒアルロン酸および／またはその塩が不安定化する場合がある。また、ヒアルロン酸および／またはその塩の平均粒子径が上記範囲以上に大きい場合は、経口摂取した際に、体内で溶解し難い場合がある。なお、平均粒子径の測定方法は、一般的に知られたレーザー回折式測定法や、動的光散乱式測定法等を挙げることができる。
【００２７】
上記のヒアルロン酸および／またはその塩の粒子径の調整方法は、特に限定されるものではない。例えば、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する溶液を、噴霧乾燥、凍結乾燥等により乾燥処理を施した後、必要に応じて粉砕を行う方法等が挙げられる。
【００２８】
本発明の一実施形態に係る食品組成物は、本発明の経口用肌改善剤を含有する。すなわち、本発明の肌改善効果を有する食品組成物は、平均粒子径が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含む。
【００２９】
上記食品組成物の態様は、平均粒子径が２０万以上であり、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含むものであれば特に限定されるものではないが、例えば、乾燥食品、カプセル状等のサプリメント類等の一般食品全般、生理機能を表現することを許可された特定保健用食品全般を挙げることができる。サプリメントを調製する場合、種々の食品素材または飲料品素材を添加することによって、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、カプセル状などの形態の食品製剤とすることができる。また、この食品製剤には、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤などを適宜添加してもよい。さらに、その他の肌改善成分を含むこともできる。
【００３０】
次に、本発明を実施例、比較例および試験例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３１】
［実施例］
平均粒子径が異なる、平均分子量８０万のヒアルロン酸からなる粉末（ヒアルロン酸の純度９７％）を使用して、人工胃液中での溶解速度を評価した。具体的には、平均分子量８０万のヒアルロン酸を篩い分けして表１に記載の各平均粒子径を有するヒアルロン酸を調製した。
【００３２】
平均分子量８０万のヒアルロン酸を使用して、篩い分けは、篩１（６５メッシュ（目開き２０８μｍ））、篩２（１５０メッシュ（目開き１０４μｍ））、篩３（２５０メッシュ（目開き６１μｍ））の篩を用いた。
【００３３】
篩１を通過したが篩２を通過しなかった粒子を試験例１の粉末とし、篩２を通過したが篩３を通過しなかった粒子を試験例２の粉末とし、篩１を通過しなかった粒子を試験例３の粉末とし、篩３を通過した粒子を比較試験例１の粉末とした。
【００３４】
各ヒアルロン酸０．３ｇを人工胃液（ｐＨ１．２のＮａＣｌ０．２％水溶液）１００ｍＬに加え、同時に攪拌を行い、目視で完全溶解するまでの時間（溶解時間）を測定した。試験例１〜３および比較試験例１のヒアルロン酸からなる粉末の溶解時間を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】
以上の結果から、比較試験例１（平均粒子径５０μｍ未満）のヒアルロン酸に対して、試験例１〜３のヒアルロン酸（平均粒子径５０〜５００μｍ）の胃液中への溶解性が低いことがわかる。さらに、試験例１および３のヒアルロン酸（平均粒子径８０〜５００μｍ）の溶解性がより低く、試験例３のヒアルロン酸（平均粒子径２００〜５００μｍ）の溶解性がさらに低い。このことから、平均粒子径５０〜５００μｍである試験例１〜３のヒアルロン酸は、平均粒子径５０μｍ未満である比較試験例１のヒアルロン酸と比べて胃液中での加水分解を受けにくく、低分子化されにくいことがわかる。
【００３７】
以上により、平均粒子径５０〜５００μｍ、なかでも平均粒子径２００〜５００μｍである平均分子量８０万のヒアルロン酸は胃液による加水分解を受けにくく、低分子化されにくいことがわかる。すなわち、経口摂取した際に体内で低分子化が起こり難く、特に効果的に肌を改善することができる。
【００３８】
［配合例１］
試験例１のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。配合例１のソフトカプセルは、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例１のヒアルロン酸 ２０％
オリーブ油 ５０％
ミツロウ １０％
中鎖脂肪酸トリグリセリド １０％
乳化剤 １０％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【００３９】
［配合例２］
試験例２のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、下記の配合の錠剤を製した。配合例２の錠剤は、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例２のヒアルロン酸 ２５％
乳糖 ２４％
結晶セルロース ２０％
トウモロコシデンプン １５％
デキストリン １０％
乳化剤 ５％
二酸化ケイ素 １％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【００４０】
［配合例３］
試験例３のヒアルロン酸（経口用肌改善剤）を用いて、下記の配合の散剤（顆粒剤）を製した。配合例３の散剤は、肌改善効果に優れていた。
＜配合割合＞
試験例３のヒアルロン酸 １０％
乳糖 ６０％
トウモロコシデンプン ２５％
ヒプロメロース ５％
――――――――――――――――――――
計 １００％
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤は、加熱や酸性条件下でも低分子化が起こりにくいことから、経口摂取した際に十分な肌改善効果を発揮することができる。また、本発明のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する経口用肌改善剤を、食品に配合して使用することが可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均分子量が２０万以上であって、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含有する、経口用肌改善剤。
【請求項２】
請求項１記載の経口用肌改善剤を含有する肌改善用食品組成物。
【請求項１】
平均分子量が２０万以上であって、平均粒子径が５０〜５００μｍであるヒアルロン酸および／またはその塩を含有する、経口用肌改善剤。
【請求項２】
請求項１記載の経口用肌改善剤を含有する肌改善用食品組成物。
【公開番号】特開２０１１−６３５２６（Ｐ２０１１−６３５２６Ａ）
【公開日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２１３９６１（Ｐ２００９−２１３９６１）
【出願日】平成２１年９月１６日（２００９．９．１６）
【出願人】（０００００１４２１）キユーピー株式会社 (657)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１６日（２００９．９．１６）
【出願人】（０００００１４２１）キユーピー株式会社 (657)
【Ｆターム（参考）】
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