美白剤
【課題】従来の美白剤に比べて、顕著に優れた美白作用を示す美白剤を提供すること。
【解決手段】本発明の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有する。ここで、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物は従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示す。よって、本発明の美白剤は、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤と言える。したがって、本発明の美白剤を用いることにより、従来の美白剤では美白効果を十分に実感できなかった人であっても、美白効果を得ることができる。
【解決手段】本発明の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有する。ここで、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物は従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示す。よって、本発明の美白剤は、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤と言える。したがって、本発明の美白剤を用いることにより、従来の美白剤では美白効果を十分に実感できなかった人であっても、美白効果を得ることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする美白剤およびその美白剤を含有する化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホルモン分泌の異常や紫外線曝露に起因する皮膚症状としてシミやソバカスが存在する。シミやソバカスができるメカニズムとしては、紫外線を原因として色素細胞が活性化することでメラニンが生成され、皮膚組織に沈着することが挙げられる。したがって、シミやソバカスのない美しい肌を保つには、紫外線から皮膚を防御することが大切であるが、紫外線に全く曝露されない日常生活をおくることは現実的には不可能に近いという問題がある。
【０００３】
この問題を解決するため、紫外線によるシミやソバカスの生成を緩和・軽減する美白剤が種々開発されている。例えば、大豆等より抽出したイソフラボン類を有効成分とする経口用美白剤（特許文献１）、オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．又はＨｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ L.）、トモエソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ａｓｃｙｒｏｎ Ｌ．）の抽出物の１種又は２種以上を配合することを特徴とするメラニン生成抑制剤（特許文献２）、スフィンゴ脂質を有効成分とすることを特徴とする美白剤（特許文献３）、トルメンチラ、センブリ、ジオウ、およびセイヨウハッカからなる群より選ばれる植物の抽出物の一種以上を有効成分とする美白剤（特許文献４）、主としてアントシアニン重合体を含むクランベリーの実の圧搾濾過物および／又は抽出物からなることを特徴とする美白剤（特許文献５）等が知られている。
【０００４】
上述の美白剤の中でも特に、イソフラボン類を有効成分とする美白剤が広く知られており、商品も種々販売されている。この美白剤としては、イソフラボン類を高濃度で含有する大豆等の植物抽出物を用いることが知られている。このように、大豆抽出物を用いる場合には、大豆の胚芽抽出物を用いることが望ましい。これは、大豆の胚芽部分にイソフラボン類が高濃度で含有されるためである（特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１―２６９０６６号公報
【特許文献２】特開平０９―１５７１５１号公報
【特許文献３】特開２００１―０２６５３０号公報
【特許文献４】特開平１１―２４６３８４号公報
【特許文献５】特開２００２―００３３６１号公報
【特許文献６】特開平１１−１９６８０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述のように大豆胚芽を利用した美白剤が多数開発されてきた一方で、これらの美白剤では、メラニン生成抑制作用が比較的弱いため、人によっては必ずしも十分な美白効果を得られないという問題点があった。本発明は、上述の問題点を解決するためになされたものであり、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１記載の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする、美白剤に関する。また、請求項２記載の美白剤は、請求項１記載の美白剤において、前記大豆胚芽発酵物が、メラニン生成抑制作用を有する。さらに、請求項３記載の化粧品は、請求項１または２記載の美白剤を含有する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有する。ここで、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物は従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示す。よって、本発明の美白剤は、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤と言える。したがって、本発明の美白剤を用いることにより、従来の美白剤では美白効果を十分に実感できなかった人であっても、美白効果を得ることができる。なお、本発明の形態に関しては特に限定されるものではなく、そのまま、または種々の成分を加えて、化粧品類、飲食品類または医薬品類として用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明の実施形態について説明する。なお、本発明は、後述の実施形態の記載により限定されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００１０】
本発明で用いられる麹菌としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｋａｗａｃｈｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓなどが挙げられる。
【００１１】
本発明で用いられる麹菌としては、特段の制限はなく、得られる発酵物の風味の良さなどから、好ましくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉが用いられる。
【００１２】
本発明で用いられる大豆の品種としては、フクユタカ、タチナガハ、ミヤギシロメ、エンレイ、リュウホウ、スズユタカ、タマホマレ、トヨコマチ、おおすず、トヨムスメなどが挙げられる。
【００１３】
本発明で用いられる大豆としては、特段の制限はなく、前述の大豆品種を１種単独または２種以上を混合して使用することができる。
【００１４】
本発明で用いられる大豆胚芽としては、特段の制限はなく、前述の大豆から常法により得られる大豆胚芽が用いられる。
【００１５】
本発明において大豆胚芽を発酵するにあたっては、特段の制限はなく、洗浄、乾燥、粉砕、蒸煮、加熱、冷却、加水、ｐＨ調製、殺菌など、常法の発酵において行われる操作を行うことができる。
【００１６】
本発明の大豆胚芽発酵物の発酵条件としては、好気条件、嫌気条件が選ばれ得る。
【００１７】
本発明の大豆胚芽発酵物の発酵時間としては、特段の制限はないが、得られる発酵物の風味の良さから２４〜７２時間、特に３６〜６０時間発酵に供されることが好ましい。
【００１８】
本発明で用いられる発酵の方法としては、特段の制限はなく、常法によるものであれば良い。
【００１９】
本発明で用いられる大豆胚芽発酵物の製造方法としては、特段の制限はなく、例えば特許第３０１４１４５号に開示される製造方法が挙げられる。
【００２０】
本発明の美白剤は、そのまま、または種々の成分を加えて、化粧品類、飲食品類または医薬品類として用いることができる。
【００２１】
上述の化粧品類としては、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工して提供することができる。また、化粧品、医薬品、医薬部外品などとして利用することができる。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、ボディシャンプー、洗顔剤、石鹸、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用することができる。
【００２２】
上述の飲食品類としては、本発明の美白剤をそのまま、または種々の栄養成分を加えて、食用に適した形態、例えば、粉末状・粒状・顆粒状・液状・ペースト状・クリーム状・タブレット状・カプセル状・カプレット状・ソフトカプセル状・錠剤状・棒状・板状・ブロック状・丸薬状・固形状・ゲル状・ゼリー状・グミ状・ウエハース状・ビスケット状・飴状・チュアブル状・シロップ状・スティック状等に成形して食品素材として提供することができる。また、水、牛乳、豆乳、果汁飲料、乳清飲料、清涼飲料、青汁、ヨーグルト等に添加して使用してもよい。
【００２３】
上述の医薬品類としては、例えば、粉末状・粒状・顆粒状・液状・タブレット状・カプセル状・カプレット状・ソフトカプセル状・錠剤状・棒状・板状・ブロック状・丸薬状等に成形して医薬品として提供することができる。
【００２４】
本発明の美白剤に含まれる大豆胚芽発酵物の配合量としては、乾燥重量として０．００００１〜５０質量％が好ましく、０．００１〜２０質量％がさらに好ましく、０．０１〜１０質量がもっとも好ましいが、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、広範囲でその配合量を適宜設定できる。
【００２５】
本発明の美白剤は、大豆胚芽発酵物の他に、次の成分を更に含有してもよい。例えば、松樹皮抽出物、ジャガイモ抽出物、葛花抽出物、チャ抽出物、チャの花抽出物、大豆抽出物、キャベツ粉末、タマネギ粉末、タマネギ発酵物、ゴマ種子抽出物、リグナン類、青汁素材（大麦若葉、甘藷若葉、アシタバ、ヨモギ、ケール等の緑葉）等の健康食品用素材を含有しても良い。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、後述の実施例に限定して解釈されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００２７】
（大豆胚芽発酵物の製造）
後述のように、大豆の胚芽を調製して麹菌により発酵させ、大豆胚芽発酵物を製造した。
【００２８】
大豆胚芽に対し、水および酢酸を添加し、１００℃で１５０分間蒸煮した。その後、大豆胚芽を３０℃に保ち３時間放冷を行った。冷却後、麹菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉを播種し、大豆胚芽に対して３５℃で４８時間製麹を行った。その後７０℃で９０分乾燥を行い、蒸気殺菌して、大豆胚芽発酵物を得た。
【００２９】
（実施例１：メラニン生成抑制作用の確認）
後述のように、大豆胚芽発酵物または大豆胚芽抽出物を添加した試験培地を用いてＢ１６メラノーマ細胞を培養し、それらを添加していない試験培地を用いて培養した場合と比較することにより、メラニン生成抑制作用を測定した。
【００３０】
（試験培地の調製）
テオフィリン（シグマ製）を１３３．４ｍＭとなるようにＤＭＳＯ（和光純薬工業株式会社製）で溶解した。さらに、通常培地（１０％ウシ胎児血清含有Ｄ−ＭＥＭ：シグマ製）で２００倍に希釈して、試験培地とした。
【００３１】
（被験物質の調製）
実施例については、大豆胚芽発酵物を、０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解し、０．２μｍのフィルターで滅菌濾過し、０．５％ＤＭＳＯ含有培地にて各添加濃度まで希釈したものを試験に用いた。比較例については、市販の大豆胚芽抽出物を、０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解し、０．２μｍのフィルターで滅菌濾過し、０．５％ＤＭＳＯ含有培地にて添加濃度まで希釈したものを試験に用いた。なお、陰性コントロールとしては、試験培地のみを０．２μｍのフィルターで濾過滅菌したものを試験に用いた。
【００３２】
（Ｂ１６メラノーマ細胞の調製）
凍結Ｂ１６メラノーマ細胞（ＲＣＢ１２８３：独立行政法人理化学研究所）を、通常培地（１０％ウシ胎児血清含有Ｄ−ＭＥＭ：シグマ製）により培養し、６ウェルプレートに播種後、さらに２４時間、培養した。各ウェルプレートより培地を除去後、被験物質を含んだ０．５％ＤＭＳＯ含有培地を各ウェルプレートに１．５ｍＬ／ｗｅｌｌ添加し、さらに、試験培地を各ウェルプレートに１．５ｍＬ／ｗｅｌｌ添加して３日間培養した。
【００３３】
３日間培養後、６ウェルプレートから細胞培養上清を除去し、２ｍＬのリン酸緩衝液（ＰＢＳ（−）：ＴＡＫＡＲＡ ＢＩＯ製）で細胞を１回洗浄後、Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（シグマ製）をその細胞に添加した。その後、室温で４〜５分処理後、前述の細胞に１０％ウシ胎児血清含有ＰＢＳ（−）を添加してトリプシンの中和を行った。その後、ピペッティングにて細胞の剥離を行い、細胞を回収した。
【００３４】
回収した細胞を２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上清を除去した後、細胞に１ｍＬのＰＢＳ（−）を添加し懸濁させた。懸濁液から５０μｌを抽出し、細胞数を計測した。残りの細胞は同様の遠心分離を行い、上清を完全に除去した。
【００３５】
抽出した細胞に１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を２５０μｌで添加し、それを、６５℃の恒温槽で６０分間加温後、振盪し完全に可溶化させた。それにより生成された細胞溶解液を、９６ウェルプレートへ２００μｌ／ｗｅｌｌで移し、マイクロプレートリーダー（サーモ製）にて４９０ｎｍの吸光度を測定することで、メラニン生成抑制作用の測定を行った。
【００３６】
（メラニン生成抑制作用の測定）
測定結果について、細胞数による補正を行い、次の式によってメラニン生成の阻害率を求めた。
【００３７】
阻害率（％）＝１００−(被験物質の吸光度／陰性コントロールの吸光度)×１００
【００３８】
実施例および比較例におけるメラニン生成の阻害率の結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
表１に示す通り、大豆胚芽発酵物（実施例１〜４）は、従来の美白剤である大豆胚芽抽出物（比較例１）に比べて、顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示すことが明らかとなった。
【００４１】
（実施例２：チロシナーゼ活性阻害試験）
後述のように、チロシナーゼおよび基質を含む溶液に大豆胚芽発酵物を添加してインキュベートし、大豆胚芽発酵物を添加せずにインキュベートした場合と比較することにより、チロシナーゼ活性阻害を測定した。
【００４２】
（チロシナーゼ活性阻害の確認）
ＤＭＳＯ（和光純薬工業株式会社製）の濃度を１％に調製した、１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて大豆胚芽発酵物の濃度を調製し、サンプル溶液とした。
【００４３】
酵素溶液の調製は以下のように行った。即ち、チロシナーゼ（マッシュルーム由来、ＣＡＬＺＹＭＥ製）を１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて５５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬとなるように調製して、酵素溶液とした。
【００４４】
基質溶液の調製は以下のように行った。即ち、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液（和光純薬工業株式会社製）を１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて０．３ｍｇ／ｍＬとなるように調製して、基質溶液とした。
【００４５】
被験溶液の調製は以下のように行った。即ち、９６ウェルプレートに前述の調製したサンプル溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液をウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（サーモ製）で測定した。
【００４６】
被験溶液ｂｌａｎｋの調製は以下のように行った。即ち、９６ウェルプレートにサンプル溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液に代えて１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４７】
対照溶液の調製は以下のように行った。９６ウェルプレートに１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４８】
対照溶液ｂｌａｎｋの調製は以下のように行った。９６ウェルプレートに１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４９】
チロシナーゼ活性阻害は次の式から求められる阻害率で表した。
阻害率（％）＝[１００−[（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）]×１００]
Ａ：被験溶液の４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｂ：被験溶液ｂｌａｎｋの４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｃ：対照溶液の４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｄ：対照溶液ｂｌａｎｋの４７５ｎｍにおける吸光度。
【００５０】
実施例におけるチロシナーゼ活性の阻害率の結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２に示す通り、大豆胚芽発酵物（実施例５〜７）は、メラニン生成抑制作用に加えて、チロシナーゼ活性阻害作用も有することが明らかとなった。
【００５３】
以上より、麹菌による発酵した大豆胚芽発酵物は、従来の美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示し、さらにチロシナーゼ活性阻害作用も有することが明らかとなった。よって、麹菌による大豆胚芽発酵物は、美白剤として優れた効果を有することが期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明の美白剤は、従来の美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示し、さらにチロシナーゼ活性阻害作用を示す。よって、これらの作用を目的とした化粧品類、飲食品類または医薬品類に本発明の美白剤を利用することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする美白剤およびその美白剤を含有する化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホルモン分泌の異常や紫外線曝露に起因する皮膚症状としてシミやソバカスが存在する。シミやソバカスができるメカニズムとしては、紫外線を原因として色素細胞が活性化することでメラニンが生成され、皮膚組織に沈着することが挙げられる。したがって、シミやソバカスのない美しい肌を保つには、紫外線から皮膚を防御することが大切であるが、紫外線に全く曝露されない日常生活をおくることは現実的には不可能に近いという問題がある。
【０００３】
この問題を解決するため、紫外線によるシミやソバカスの生成を緩和・軽減する美白剤が種々開発されている。例えば、大豆等より抽出したイソフラボン類を有効成分とする経口用美白剤（特許文献１）、オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ．又はＨｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ L.）、トモエソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ａｓｃｙｒｏｎ Ｌ．）の抽出物の１種又は２種以上を配合することを特徴とするメラニン生成抑制剤（特許文献２）、スフィンゴ脂質を有効成分とすることを特徴とする美白剤（特許文献３）、トルメンチラ、センブリ、ジオウ、およびセイヨウハッカからなる群より選ばれる植物の抽出物の一種以上を有効成分とする美白剤（特許文献４）、主としてアントシアニン重合体を含むクランベリーの実の圧搾濾過物および／又は抽出物からなることを特徴とする美白剤（特許文献５）等が知られている。
【０００４】
上述の美白剤の中でも特に、イソフラボン類を有効成分とする美白剤が広く知られており、商品も種々販売されている。この美白剤としては、イソフラボン類を高濃度で含有する大豆等の植物抽出物を用いることが知られている。このように、大豆抽出物を用いる場合には、大豆の胚芽抽出物を用いることが望ましい。これは、大豆の胚芽部分にイソフラボン類が高濃度で含有されるためである（特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１―２６９０６６号公報
【特許文献２】特開平０９―１５７１５１号公報
【特許文献３】特開２００１―０２６５３０号公報
【特許文献４】特開平１１―２４６３８４号公報
【特許文献５】特開２００２―００３３６１号公報
【特許文献６】特開平１１−１９６８０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述のように大豆胚芽を利用した美白剤が多数開発されてきた一方で、これらの美白剤では、メラニン生成抑制作用が比較的弱いため、人によっては必ずしも十分な美白効果を得られないという問題点があった。本発明は、上述の問題点を解決するためになされたものであり、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１記載の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする、美白剤に関する。また、請求項２記載の美白剤は、請求項１記載の美白剤において、前記大豆胚芽発酵物が、メラニン生成抑制作用を有する。さらに、請求項３記載の化粧品は、請求項１または２記載の美白剤を含有する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の美白剤は、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有する。ここで、麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物は従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示す。よって、本発明の美白剤は、従来の大豆胚芽を利用した美白剤に比べて顕著に優れた美白効果を示す美白剤と言える。したがって、本発明の美白剤を用いることにより、従来の美白剤では美白効果を十分に実感できなかった人であっても、美白効果を得ることができる。なお、本発明の形態に関しては特に限定されるものではなく、そのまま、または種々の成分を加えて、化粧品類、飲食品類または医薬品類として用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明の実施形態について説明する。なお、本発明は、後述の実施形態の記載により限定されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００１０】
本発明で用いられる麹菌としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｋａｗａｃｈｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓなどが挙げられる。
【００１１】
本発明で用いられる麹菌としては、特段の制限はなく、得られる発酵物の風味の良さなどから、好ましくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉが用いられる。
【００１２】
本発明で用いられる大豆の品種としては、フクユタカ、タチナガハ、ミヤギシロメ、エンレイ、リュウホウ、スズユタカ、タマホマレ、トヨコマチ、おおすず、トヨムスメなどが挙げられる。
【００１３】
本発明で用いられる大豆としては、特段の制限はなく、前述の大豆品種を１種単独または２種以上を混合して使用することができる。
【００１４】
本発明で用いられる大豆胚芽としては、特段の制限はなく、前述の大豆から常法により得られる大豆胚芽が用いられる。
【００１５】
本発明において大豆胚芽を発酵するにあたっては、特段の制限はなく、洗浄、乾燥、粉砕、蒸煮、加熱、冷却、加水、ｐＨ調製、殺菌など、常法の発酵において行われる操作を行うことができる。
【００１６】
本発明の大豆胚芽発酵物の発酵条件としては、好気条件、嫌気条件が選ばれ得る。
【００１７】
本発明の大豆胚芽発酵物の発酵時間としては、特段の制限はないが、得られる発酵物の風味の良さから２４〜７２時間、特に３６〜６０時間発酵に供されることが好ましい。
【００１８】
本発明で用いられる発酵の方法としては、特段の制限はなく、常法によるものであれば良い。
【００１９】
本発明で用いられる大豆胚芽発酵物の製造方法としては、特段の制限はなく、例えば特許第３０１４１４５号に開示される製造方法が挙げられる。
【００２０】
本発明の美白剤は、そのまま、または種々の成分を加えて、化粧品類、飲食品類または医薬品類として用いることができる。
【００２１】
上述の化粧品類としては、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工して提供することができる。また、化粧品、医薬品、医薬部外品などとして利用することができる。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、ボディシャンプー、洗顔剤、石鹸、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用することができる。
【００２２】
上述の飲食品類としては、本発明の美白剤をそのまま、または種々の栄養成分を加えて、食用に適した形態、例えば、粉末状・粒状・顆粒状・液状・ペースト状・クリーム状・タブレット状・カプセル状・カプレット状・ソフトカプセル状・錠剤状・棒状・板状・ブロック状・丸薬状・固形状・ゲル状・ゼリー状・グミ状・ウエハース状・ビスケット状・飴状・チュアブル状・シロップ状・スティック状等に成形して食品素材として提供することができる。また、水、牛乳、豆乳、果汁飲料、乳清飲料、清涼飲料、青汁、ヨーグルト等に添加して使用してもよい。
【００２３】
上述の医薬品類としては、例えば、粉末状・粒状・顆粒状・液状・タブレット状・カプセル状・カプレット状・ソフトカプセル状・錠剤状・棒状・板状・ブロック状・丸薬状等に成形して医薬品として提供することができる。
【００２４】
本発明の美白剤に含まれる大豆胚芽発酵物の配合量としては、乾燥重量として０．００００１〜５０質量％が好ましく、０．００１〜２０質量％がさらに好ましく、０．０１〜１０質量がもっとも好ましいが、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、広範囲でその配合量を適宜設定できる。
【００２５】
本発明の美白剤は、大豆胚芽発酵物の他に、次の成分を更に含有してもよい。例えば、松樹皮抽出物、ジャガイモ抽出物、葛花抽出物、チャ抽出物、チャの花抽出物、大豆抽出物、キャベツ粉末、タマネギ粉末、タマネギ発酵物、ゴマ種子抽出物、リグナン類、青汁素材（大麦若葉、甘藷若葉、アシタバ、ヨモギ、ケール等の緑葉）等の健康食品用素材を含有しても良い。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、後述の実施例に限定して解釈されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００２７】
（大豆胚芽発酵物の製造）
後述のように、大豆の胚芽を調製して麹菌により発酵させ、大豆胚芽発酵物を製造した。
【００２８】
大豆胚芽に対し、水および酢酸を添加し、１００℃で１５０分間蒸煮した。その後、大豆胚芽を３０℃に保ち３時間放冷を行った。冷却後、麹菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉを播種し、大豆胚芽に対して３５℃で４８時間製麹を行った。その後７０℃で９０分乾燥を行い、蒸気殺菌して、大豆胚芽発酵物を得た。
【００２９】
（実施例１：メラニン生成抑制作用の確認）
後述のように、大豆胚芽発酵物または大豆胚芽抽出物を添加した試験培地を用いてＢ１６メラノーマ細胞を培養し、それらを添加していない試験培地を用いて培養した場合と比較することにより、メラニン生成抑制作用を測定した。
【００３０】
（試験培地の調製）
テオフィリン（シグマ製）を１３３．４ｍＭとなるようにＤＭＳＯ（和光純薬工業株式会社製）で溶解した。さらに、通常培地（１０％ウシ胎児血清含有Ｄ−ＭＥＭ：シグマ製）で２００倍に希釈して、試験培地とした。
【００３１】
（被験物質の調製）
実施例については、大豆胚芽発酵物を、０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解し、０．２μｍのフィルターで滅菌濾過し、０．５％ＤＭＳＯ含有培地にて各添加濃度まで希釈したものを試験に用いた。比較例については、市販の大豆胚芽抽出物を、０．５％ＤＭＳＯ含有培地に溶解し、０．２μｍのフィルターで滅菌濾過し、０．５％ＤＭＳＯ含有培地にて添加濃度まで希釈したものを試験に用いた。なお、陰性コントロールとしては、試験培地のみを０．２μｍのフィルターで濾過滅菌したものを試験に用いた。
【００３２】
（Ｂ１６メラノーマ細胞の調製）
凍結Ｂ１６メラノーマ細胞（ＲＣＢ１２８３：独立行政法人理化学研究所）を、通常培地（１０％ウシ胎児血清含有Ｄ−ＭＥＭ：シグマ製）により培養し、６ウェルプレートに播種後、さらに２４時間、培養した。各ウェルプレートより培地を除去後、被験物質を含んだ０．５％ＤＭＳＯ含有培地を各ウェルプレートに１．５ｍＬ／ｗｅｌｌ添加し、さらに、試験培地を各ウェルプレートに１．５ｍＬ／ｗｅｌｌ添加して３日間培養した。
【００３３】
３日間培養後、６ウェルプレートから細胞培養上清を除去し、２ｍＬのリン酸緩衝液（ＰＢＳ（−）：ＴＡＫＡＲＡ ＢＩＯ製）で細胞を１回洗浄後、Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（シグマ製）をその細胞に添加した。その後、室温で４〜５分処理後、前述の細胞に１０％ウシ胎児血清含有ＰＢＳ（−）を添加してトリプシンの中和を行った。その後、ピペッティングにて細胞の剥離を行い、細胞を回収した。
【００３４】
回収した細胞を２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上清を除去した後、細胞に１ｍＬのＰＢＳ（−）を添加し懸濁させた。懸濁液から５０μｌを抽出し、細胞数を計測した。残りの細胞は同様の遠心分離を行い、上清を完全に除去した。
【００３５】
抽出した細胞に１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／１Ｎ ＮａＯＨ水溶液を２５０μｌで添加し、それを、６５℃の恒温槽で６０分間加温後、振盪し完全に可溶化させた。それにより生成された細胞溶解液を、９６ウェルプレートへ２００μｌ／ｗｅｌｌで移し、マイクロプレートリーダー（サーモ製）にて４９０ｎｍの吸光度を測定することで、メラニン生成抑制作用の測定を行った。
【００３６】
（メラニン生成抑制作用の測定）
測定結果について、細胞数による補正を行い、次の式によってメラニン生成の阻害率を求めた。
【００３７】
阻害率（％）＝１００−(被験物質の吸光度／陰性コントロールの吸光度)×１００
【００３８】
実施例および比較例におけるメラニン生成の阻害率の結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
表１に示す通り、大豆胚芽発酵物（実施例１〜４）は、従来の美白剤である大豆胚芽抽出物（比較例１）に比べて、顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示すことが明らかとなった。
【００４１】
（実施例２：チロシナーゼ活性阻害試験）
後述のように、チロシナーゼおよび基質を含む溶液に大豆胚芽発酵物を添加してインキュベートし、大豆胚芽発酵物を添加せずにインキュベートした場合と比較することにより、チロシナーゼ活性阻害を測定した。
【００４２】
（チロシナーゼ活性阻害の確認）
ＤＭＳＯ（和光純薬工業株式会社製）の濃度を１％に調製した、１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて大豆胚芽発酵物の濃度を調製し、サンプル溶液とした。
【００４３】
酵素溶液の調製は以下のように行った。即ち、チロシナーゼ（マッシュルーム由来、ＣＡＬＺＹＭＥ製）を１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて５５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬとなるように調製して、酵素溶液とした。
【００４４】
基質溶液の調製は以下のように行った。即ち、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液（和光純薬工業株式会社製）を１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて０．３ｍｇ／ｍＬとなるように調製して、基質溶液とした。
【００４５】
被験溶液の調製は以下のように行った。即ち、９６ウェルプレートに前述の調製したサンプル溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液をウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（サーモ製）で測定した。
【００４６】
被験溶液ｂｌａｎｋの調製は以下のように行った。即ち、９６ウェルプレートにサンプル溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液に代えて１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４７】
対照溶液の調製は以下のように行った。９６ウェルプレートに１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４８】
対照溶液ｂｌａｎｋの調製は以下のように行った。９６ウェルプレートに１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を１００μｌ／ｗｅｌｌで添加した。その後、酵素溶液を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で１０分間インキュベートを行った。さらに、１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を、ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌで添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４９】
チロシナーゼ活性阻害は次の式から求められる阻害率で表した。
阻害率（％）＝[１００−[（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）]×１００]
Ａ：被験溶液の４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｂ：被験溶液ｂｌａｎｋの４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｃ：対照溶液の４７５ｎｍにおける吸光度。
Ｄ：対照溶液ｂｌａｎｋの４７５ｎｍにおける吸光度。
【００５０】
実施例におけるチロシナーゼ活性の阻害率の結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
【００５２】
表２に示す通り、大豆胚芽発酵物（実施例５〜７）は、メラニン生成抑制作用に加えて、チロシナーゼ活性阻害作用も有することが明らかとなった。
【００５３】
以上より、麹菌による発酵した大豆胚芽発酵物は、従来の美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示し、さらにチロシナーゼ活性阻害作用も有することが明らかとなった。よって、麹菌による大豆胚芽発酵物は、美白剤として優れた効果を有することが期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明の美白剤は、従来の美白剤に比べて顕著に優れたメラニン生成抑制作用を示し、さらにチロシナーゼ活性阻害作用を示す。よって、これらの作用を目的とした化粧品類、飲食品類または医薬品類に本発明の美白剤を利用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする、美白剤。
【請求項２】
前記大豆胚芽発酵物が、メラニン生成抑制作用を有することを特徴とする、請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の美白剤を含有することを特徴とする、化粧品。
【請求項１】
麹菌により大豆の胚芽を発酵させた大豆胚芽発酵物を含有することを特徴とする、美白剤。
【請求項２】
前記大豆胚芽発酵物が、メラニン生成抑制作用を有することを特徴とする、請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の美白剤を含有することを特徴とする、化粧品。
【公開番号】特開２０１１−２３１０３０（Ｐ２０１１−２３１０３０Ａ）
【公開日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１０１０３１（Ｐ２０１０−１０１０３１）
【出願日】平成２２年４月２６日（２０１０．４．２６）
【出願人】（３９８０２８５０３）株式会社東洋新薬 (182)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月２６日（２０１０．４．２６）
【出願人】（３９８０２８５０３）株式会社東洋新薬 (182)
【Ｆターム（参考）】
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