肥満症の薬物療法に対する反応性を予測するための方法
減量用医薬品によって誘導される哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝の調節のためのバイオマーカーとしてＴＲＬ Ｖ６を使用するための方法。そのバイオマーカーは、個々の患者が、所定の減量用医薬品に対して好ましく反応するかどうかを決定するために使用され得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００７年１２月１９日に出願された米国仮出願番号第６１／０１４８８１号の優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
多数の生理系が、体重およびエネルギー恒常性の調節に関与し、これらの系は多数の複雑なフィードバック機構を介して相互に関連する。この複雑性は、薬物療法の影響を受けやすい治療標的の多様性を引き起こすが、複雑な相互調節もまた、肥満症および過体重の効果的な薬学的処置の開発を、困難で時間がかかるものにしている。
【０００３】
さらに、いったん一般に効果的な薬理作用のある物質が肥満症および／または過体重の処置のために見出されると、個体間の遺伝的および／または生理学的差異が、患者母集団内の有効性における大きな分散を生じさせ得る；すなわち、個体の生理機能に基づいて治療薬に対して反応する患者であるかまたは反応しない患者であるという患者の部分母集団の傾向が存在する。結果として、所定の個体が所定の薬物療法に対して十分反応するかどうかを、長期の治療過程の前に予測することは困難である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ある化合物が、治療的減量に対する長期の臨床試験の前に、体重および／またはエネルギー恒常性に対して所望の生理学的効果を有するかどうかを決定する方法を有することは大きな価値があり得る。また、個々の患者が、特定の減量用医薬品の治療効果に好ましく反応するかどうかを、好ましくはその薬剤での治療過程の開始前にあらかじめ決めるための方法を有することも大きな価値がある。本発明は、バイオマーカーならびに医薬品が哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節する能力、まわり回ってその薬剤の肥満症および／または過体重の処置のための起こり得る生理学的利益の指標となるものを試験するためにそのバイオマーカー使用するための方法、システム、およびコンピュータプラグラム製品を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの態様において、Ｖ６サブクラスの大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子（ＴＲＬ Ｖ６）の濃度の変化が、減量用医薬品によって誘導された哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝の調節についてのバイオマーカーとして使用できることが見出された。具体的には、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝の調節を介する肥満症または過体重の処置に好適な医薬品は、被験体哺乳動物のＴＲＬ Ｖ６濃度の減少を生じるだろう。そのようなものとして、本発明の１つの実施形態は、減量用医薬品でのヒトにおける肥満症または過体重のための処置に対する反応性を予測する方法であって、ヒトにおいて、医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、医薬品の存在下での脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含む方法を提供する。さらなる実施形態は、医薬品が、５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から独立して選択される任意の１種の化合物または２種以上の化合物の任意の組み合わせである場合を含む。
【０００６】
本発明の別の態様において、個々の患者が所定の減量用医薬品に対して好ましく反応するかどうかを決定するための方法、すなわち、薬剤が患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少を生じるかどうかを決定することによって、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする個々の患者が所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかまたは反応しない患者であるかを予測するための方法が提供される。本発明のこの態様の種々の実施形態において、減量用医薬品は、５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から独立して選択される任意の１種の化合物または２種以上の化合物の任意の組み合わせである。
【０００７】
本発明のこの態様の別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、１回分の減量用医薬品を、患者に脂肪負荷を施すことと併せて患者に投与し、次いで、医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含み、ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【０００８】
本発明のこの態様の別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）患者に第二脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
４）第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）第一脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、第二脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；
６）ＴＲＬ Ｖ６反応の相対的減少に基づいて、減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、そしてＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【０００９】
本発明のこの態様のさらに別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）患者に脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
２）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を、減量用医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較すること；
４）比較する工程に基づいて、減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、そして標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【００１０】
別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）患者に第二脂肪負荷を施すとともに、１回分の医薬品を患者に投与すること；
４）第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；および
６）決定する工程に基づいて、患者が反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する方法が提供される。
【００１１】
別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）患者に脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
２）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）脂肪負荷に対する患者のＶ６反応を、減量用医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する標準的なＶ６反応と比較すること；および
４）比較する工程に基づいて、患者がその減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、標準的なＶ６反応と比較した患者のＶ６反応の有意な減少は、患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する方法が提供される。
【００１２】
本発明の別の態様において、医薬品の哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝に作用する能力を決定するための方法であって、偽薬関連反応と比較して脂肪負荷および／または高脂肪食に応じた哺乳動物におけるＴＲＬ Ｖ６濃度の減少を測定することを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様は、減量用医薬品に対して好ましく反応する患者の可能性を評価するための方法に向けられる。その方法は：（ａ）少なくとも１つは患者への減量用医薬品の投与と併せて採取される、患者からの少なくとも２つのインビトロサンプルにおいてＴＲＬ Ｖ６のレベルを測定すること；（ｂ）減量剤に関連するＴＲＬ Ｖ６レベルの減少が存在するかどうかを電子的に特定すること；（ｃ）および特定する工程に基づいて、減量用医薬品に対して好ましく反応する患者の可能性を評価することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、例示的なトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子亜画分（サブクラス）についての脂質メチル基ＮＭＲシグナルのグラフである。
【図２】図２は、本発明の実施形態によるＮＭＲシステムの概略図である。
【図３】図３は、本発明の実施形態による例示的なデータ処理システムの概略図である。
【図４】図４は、本発明の実施形態による例示的なデータ処理システムの概略図である。
【図５】図５は、本発明の実施形態による例示的なＴＲＬ Ｖ６評価の患者試験報告書の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下で本発明の実施形態が示され、本発明は、より完全に説明されるだろう。しかしながら、本発明は様々な形式で具体化され得、本明細書中に記載される実施形態に限定されるものとしてみなされるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全であり、そして当業者に本発明の範囲を完全に伝達することができるように提供される。図面において、類似の番号は全体にわたって類似の要素を示し、一部の構成要素、線、および特徴の厚み、大きさ、および寸法は、明確にするために誇張され得る。図中に示されるか、または特許請求の範囲において列挙される操作および／または工程の順序は、そうでないことが示されない限り表示された順序に限定されることを意図しない。図中の破線は、使用される場合、そのような示された特徴、操作、または工程がそうでないことが示されない限り任意選択的であることを示す。
【００１６】
当業者によって理解されるように、本発明のいくつかの実施形態は、装置、方法、コンピュータプログラム製品、および／またはデータ処理システムまたはシグナル処理システムとして具体化され得る。したがって、特定の方法実施形態は、ソフトウェア限定を必要とせず、一方、特定の他の実施形態は、完全にソフトウェア実施形態の形態をとり得るか、またはソフトウェア態様およびハードウェア態様を組み合わせる実施形態の形態をとり得る。さらに、本発明の特定の実施形態は、媒体中に具体化されたコンピュータ使用可能プログラムコードを有するコンピュータ使用可能記憶媒体上のコンピュータプログラム製品の形態をとり得る。ハードディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、光学式記憶デバイス、または磁気記憶デバイスを含む、任意の好適なコンピュータ読み取り可能媒体が利用され得る。
【００１７】
コンピュータ使用可能またはコンピュータ読み取り可能媒体は、限定されないが、電子、磁気、光学、超電導磁気、赤外線、または半導体のシステム、装置、デバイス、または伝搬媒体であり得る。コンピュータ読み取り可能媒体のより具体的な例（限定的な列挙）は、以下のものを含み得る：１本以上のワイヤを有する電気的接続、携帯用フロッピー（登録商標）ディスク、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、読み取り専用メモリ（ＲＯＭ）、消去可能・プログラム可能読み取り専用メモリ（ＥＰＲＯＭまたはフラッシュメモリ）、光ファイバー、および携帯用コンパクトディスク読み取り専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）。コンピュータ使用可能またはコンピュータ読み取り可能媒体は、プログラムが印刷された紙または別の好適な媒体であることも可能であり、そのプログラムが例えば、紙または他の媒体の光走査を介して電子的に捕捉され、次いで、もし必要であれば好適な様式でコンパイルされ、解釈され、またはそうでない場合処理され、次いで、コンピュータメモリに保存されることができる。
【００１８】
本発明の操作を実行するためのコンピュータプログラムコードは、Ｊａｖａ（登録商標）７、Ｓｍａｌｌｔａｌｋ、Ｐｙｔｈｏｎ、Ｌａｂｖｉｅｗ、Ｃ＋＋、またはＶｉｓｕａｌＢａｓｉｃのようなオブジェクト指向のプログラム言語で書かれ得る。しかしながら、本発明の操作を実行するためのプログラムコードはまた、「Ｃ」プログラミング言語またはアセンブリ言語でさえあるような、従来の手続き型プログラミング言語でも書かれ得る。プログラムコードは、完全にユーザのコンピュータ上で、部分的にユーザのコンピュータ上で、独立したソフトウェアパッケージとして、部分的にユーザのコンピュータ上でかつ部分的にリモートコンピュータ上で、または完全にリモートコンピュータ上で実行し得る。後者の状況において、リモートコンピュータは、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）または広域ネットワーク（ＷＡＮ）を介してユーザのコンピュータに接続され得、さもなければ接続は、（例えば、インターネットサービスプロバイダを使用するインターネットを介して）外部コンピュータへとなされ得る。
【００１９】
本明細書中で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り複数形も同様に含むことが意図される。本明細書中で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および／または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が、記載される特徴、完全体（ｉｎｔｅｇｅｒ）、工程、操作、要素、および／または構成要素の存在を特定するが、１つ以上の他の特徴、完全体、工程、操作、要素、構成要素、および／またはそれらの群の存在または追加を排除しないことがさらに理解されるだろう。本明細書中で使用される場合、用語「および／または」は、１つ以上の、関連して列挙された項目の任意のかつ全ての組み合わせを含む。
【００２０】
他のように定義されない限り、本明細書中で使用される（技術的用語および科学的用語を含む）全ての用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。一般的に使用される辞書に定義されるような用語は、関連する分野および本出願の文脈におけるそれらの意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書中に明確にそのように定義されない限り理想的な意味または過度に改まった意味で解釈されるべきではないことがさらに理解されるだろう。
【００２１】
本出願の目的のために、以下の用語は、そうでないことが具体的に述べられない限り、以下の意味を有するだろう。
【００２２】
用語「ＢＭＩ」は、ボディマス指数を意味し、それは、身長の二乗で除した個体の体重である（ｋｇ／ｍ２）。
【００２３】
用語「絶食状態」は、食物またはカロリーを含有する飲料無しの約６時間より長い期間の後の個体の生理学的状態を意味する。この状態において、個体の胃内容排出は達成され、そしてトリグリセリドは基礎レベルである。
【００２４】
用語「過体重」は、所定の個体について最適な体重よりも著しく重い状態を意味する。定義は大きく異なり得るが、一般的な目的のために、約２５〜約２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する患者は、過体重であると考えられるだろう（Ｄｏｎａｔｏ，ＰｉＳｕｎｙｅｒら、１９９８）。本発明は、現在のＢＭＩ基準によって述べられるような過体重の正確な定義によって影響されず、全てのそのような定義は、等価であると考えられるべきである。
【００２５】
用語「肥満症」は、重篤な過体重である状態または重篤な過度の体重を有することを意味する。定義は大きく異なり得るが、一般的な目的のために、３０．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する患者は、肥満であると考えられるだろう（Ｄｏｎａｔｏ，ＰｉＳｕｎｙｅｒら、１９９８）。本発明は、現在のＢＭＩ基準によって述べられるような肥満症の正確な定義によって影響されず、全てのそのような定義は、等価であると考えられるべきである。
【００２６】
用語「脂肪負荷」は、試験被験体において高脂質血症を誘導するのに十分な脂質の用量を意味し、経口脂肪負荷、脂肪含有静脈内注入、高脂肪食品、食事、高脂肪飲料などの形態をとることができる。医薬品が開発されて、脂肪負荷または疑似脂肪負荷を送達するために使用され得ることもまた企図される。
【００２７】
用語「ＴＲＬ Ｖ６」は、約９０ｎｍ〜最大約１７０ｎｍまでの直径を有する、より典型的には約１００ｎｍ〜１４０ｎｍの直径を有するＴＲＬ（トリグリセリドリッチリポタンパク質）の粒子または亜画分を示す。用語「ＴＲＬ Ｖ６」はまた、以下の表１において提供されるような推定直径に対応する、脂質メチル基ＮＭＲシグナル化学シフト（ｐｐｍ）に関しても定義されることができる。
【００２８】
用語「ＴＲＬ Ｖ５」は、約６０ｎｍ〜約８０ｎｍの直径を有する大きなＴＲＬ粒子を示す（関連するＮＭＲ化学シフトについて以下の表１を参照のこと）。
【００２９】
用語「カイロミクロン」は、ＴＲＬ Ｖ６より大きな直径を有する極めて大きなＴＲＬ粒子を示す。そのようなカイロミクロンとしては、約１７０ｎｍ〜約２６０ｎｍまでの直径を有するＴＲＬ粒子または亜画分を示す（関連するＮＭＲ化学シフトについて以下の表１を参照のこと）。ＴＲＬ Ｖ５とＴＲＬ Ｖ６との間、またはＴＲＬ Ｖ６とカイロミクロンとの間のいずれも明確な区分が存在せず、その結果、ＴＲＬ Ｖ５〜６については約８０〜９０ｎｍ、ＴＲＬ Ｖ６およびカイロミクロンについては約１４０〜１７０ｎｍの範囲で重複する、各サブグループに対する粒径の分布が存在することに注意することが重要である。
【００３０】
用語「ＴＲＬ Ｖ６反応」は、典型的には、脂肪負荷または高脂肪食の投与に反応した、患者または試験哺乳動物におけるＴＲＬ Ｖ６トリグリセリド濃度および／または粒子数の増加を意味する。ある状況下では、「Ｖ ＴＲＬ」（本出願の目的のために、ＴＲＬ Ｖ６およびＴＲＬ Ｖ５粒子サブタイプの両方を含有する極めて大きいＴＲＬのサブグループを意味するために用いられる）を、ＴＲＬ Ｖ５濃度が脂肪負荷に対する実質的な反応を示さない状況下において、ＴＲＬ Ｖ６濃度単独を測定することに代わるものとして測定することは有利であり得、その結果「Ｖ ＴＲＬ」における反応は、特定の状況においてＴＲＬ Ｖ６反応それ自身を追跡し得ることが理解されるべきである。しかしながらこれは、グループ全体（例えば、全ＶＬＤＬとして）の全ＴＲＬまたはトリグリセリド濃度（または粒子数）を測定することには当てはまらない。種々のＴＲＬの測定は、最終的にはサンプル中のトリグリセリドまたは指定されたＴＲＬの濃度を意味する濃度、または、最終的にはサンプル中のＴＲＬ粒子の濃度を意味する粒子数のいずれかとして報告され得ることに注意されるべきである。その両方が、ＴＲＬ Ｖ６反応またはその減少に関して同じ結果を与える。
【００３１】
用語「ＶＬＤＬ反応」は、脂肪負荷または高脂肪食の投与に反応する、患者または試験動物におけるグループとしてのＴＲＬサブクラスＶ１〜６の粒径の増加を意味し、その増加は、クラスとしてのＶＬＤＬ粒径のサイズ分布上のＴＲＬ Ｖ６濃度（または粒子数）の増加によって引き起こされた効果（すなわち、ＴＲＬ亜母集団であるＶ１〜Ｖ６の平均サイズの変化）である。
【００３２】
ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、測定されたＴＲＬ Ｖ６濃度（あるいは粒子数またはＶＬＤＬ粒径）の統計的に有意な減少を意味する。減少は、ＴＲＬ Ｖ６反応の変化と定義され得、それは、試験化合物または減量用医薬品の非存在下での患者の母集団において測定された時期間（ｉｎｔｅｒ−ｏｃｃａｓｉｏｎ）変位の分布の下限の少なくとも８０パーセンタイル値の信頼区間を下回る。いかなるアッセイプロトコルについても、試験化合物または減量用医薬品に対する陽性反応を決定するために選択された実際の信頼区間は、アッセイプロトコルの所望の予測値に依存するだろう。例えば、ＴＲＬ Ｖ６反応のより少ない偽陽性減少を提供することを望むアッセイプロトコルは、より高いパーセンタイル信頼区間、例えば９０パーセンタイル値、または例えば９５パーセンタイル値を選択するだろう。より少ない偽陰性を望むアッセイプロトコルについては、より低い信頼区間が好適であり得、例えば、８０パーセンタイル値のような信頼区間が好適であり得る。
【００３３】
用語「減量用医薬品」は、肥満症または過体重の処置のための使用される、または使用されるべき医薬化合物（この用語は、ペプチド、抗体などを含む）、医薬処方物、または医薬組成物を意味し、ここで、求められる治療効果は、患者における減量の促進および／または体重の減少後の体重の維持である。本明細書中で使用される減量用医薬品が、１種の、または単一の組み合わせられた薬剤としてまたは薬剤の組み合わせとして摂取され得る１種以上の活性成分の組み合わせを含み得ることが理解される。同様に、用語「減量」は、実際の減量および／または、典型的には体重の減少後の、所望の範囲内での体重の維持を示す。
【００３４】
用語「生体サンプル」は、未加工の形態および／または調製物中の、全血、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、リンパサンプル、便サンプル、組織、および／または体液を含む。しかしながら、全血または血漿の生体サンプルは、本発明の実施形態に特に好適であり得る。生体サンプルは、いかなる標的被験体にも由来することができる。本発明による被験体は、いかなる哺乳動物被験体（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスター、モルモットその他）、ブタ、霊長類、サル、および／またはウサギ）であることもできる。動物は、天然に存在するか遺伝的に操作または組換えられているかにかかわらず、そして／あるいは、実験的に変更された動物の変化、生活様式および／または食餌が変更された動物の変化、または薬物処置された動物の変化にかかわらず、実験動物または非実験動物であることができる。
【００３５】
用語「自動的」は、実質的に全てまたは全てのそのように記載された操作が、ヒト操作者の能動的な手動入力を要求することなく実施されることができることを意味し、典型的には、その操作が、プログラムで指示および／または実行されることができることを意味する。
【００３６】
用語「電子的」は、システム、操作、またはデバイスが、任意の好適な電子媒体を使用して通信することができ、そして典型的には、遠く離れ得る制御システムと、コンピュータネットワークを使用する１つ以上のローカルＮＭＲ分析器との間の通信をプログラムにより制御することを利用する。
【００３７】
リポタンパク質は、血漿、血清、全血、およびリンパにおいて見出される様々な粒子を含み、種々のタイプおよび量のトリグリセリド、コレステロール、リン脂質、スフィンゴ脂質、およびタンパク質を含む。これらの種々の粒子は、血中の他の疎水性脂質分子の可溶化を可能にし、かつ、脂肪分解、脂肪生成、および腸と、肝臓と、筋肉組織と、脂肪組織との間の脂質輸送に関する様々な機能を果たす。血液および／または血漿において、リポタンパク質は、一般的に、密度または電気泳動移動度のような物理的性質に基づいて多くの方法で分類されている。核磁気共鳴による決定された粒径に基づく分類は、少なくとも１６種の異なるトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子のサブタイプ（高密度リポタンパク質の５種のサブタイプ、低密度リポタンパク質の４種のサブタイプ、および極めて低密度リポタンパク質の６種のサブタイプを含む）、指定されたＴＲＬ Ｖ１〜Ｖ６、およびカイロミクロンを区別する。これらのリポタンパク質サブタイプの中から、かつ他のサブタイプとは対照的に、本発明は最も大きいＴＲＬ粒子サブタイプであるＴＲＬ Ｖ６が、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝のバイオマーカーとして使用されることができることを決定し、ここで、ＴＲＬ Ｖ６の濃度が、脂肪含有食の消費後に予測的に上昇され、次いで、試験被験体が絶食状態に近づくにつれて、食後のある時点で基礎レベルに戻る。
【００３８】
ＴＲＬ粒子のＮＭＲ特徴を推定直径と関連付けるために、以下の表１は、ＴＲＬ Ｖ６範囲ならびにＴＲＬ Ｖ５およびカイロミクロンについての化学シフトを規定する。
【００３９】
表１：ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）分析によって測定されたトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスの特徴
【表１】
【００４０】
表１は、Ｃａ ＥＤＴＡの内部基準シグナル（２．５１９ｐｐｍ）に対して測定された、単離されたトリグリセリドリッチリポタンパク質（ＴＲＬ）サブクラス（亜画分）のプロトンＮＭＲ化学シフトを示す。図１は、例示的なＴＲＬサブクラスのＮＭＲ特性シグナルを示す。ＮＭＲ測定は、４７℃で、４００ＭＨｚ分光計で行った。カイロミクロンとして特定されたＴＲＬサブクラスを、脂肪含有食を摂取した後のヒト被験体から得られた食後の血漿検体から単離した。ＴＲＬ Ｖ６またはＴＲＬ Ｖ５として特定されたＴＲＬサブクラスを、高トリグリセリド血症のヒト被験体から得られた空腹時血漿検体から得た。ＴＲＬサブクラスを、連続的超遠心分離法（カイロミクロンについては密度＜０．９４ｇ／ｍＬ、ＴＲＬ Ｖ５〜Ｖ６については＜１．００６ｇ／ｍＬ）によって最初は単離し、１２０ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＣａＣｌ２、５０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、および０．２ｇ／Ｌ ＮａＮ３を含有する緩衝液（ｐＨ７．４）において１％または２％アガロースビーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用する、ゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。リポタンパク質直径の推定を、単離されたＴＲＬサブクラスの電子顕微鏡法測定から得た。
【００４１】
したがって、ＴＲＬ Ｖ６は上記で直径によって規定されていたが、表１中のＮＭＲ化学シフトは、規定された直径範囲と等価なものを表す。したがって、ＮＭＲ評価を使用すると、ＴＲＬ Ｖ６はまた、約０．８３７４〜約０．８４０２の化学シフトを有するとも規定されることができ、隣接するＴＲＬ亜画分（例えば、ＴＲＬ Ｖ５およびカイロミクロン）は表１にも記される化学シフトを有する。それにより、「ＴＲＬ Ｖ６」の定義はまた、記載されるように測定された場合、たとえ論争中の実際の試験が非ＮＭＲ評価法を利用するか、あるいは密度に関するパラメータを規定するかまたは直径よりも別の様式でパラメータを規定するにしても、上記のＮＭＲ化学シフト（＋／−合理的な測定範囲）を有するいかなるＴＲＬ亜画分も示す。
【００４２】
例えば、極めて大きなＴＲＬ粒子を測定する１つの公知の技術は、密度ベースの分離を利用する浮遊超遠心分離法である。Ｒｅｄｇｒａｖｅらは、粒子の推定直径に対する粒子の浮遊率（Ｓｆ、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ単位）によって粒子を特徴づけている：Ｓｆ＞４００の場合、＞７５ｎｍの粒子を含み；Ｓｆ１７５〜４００の場合、５０〜７５ｎｍの粒子を含み；Ｓｆ１００〜１７５の場合、３７〜５０ｎｍの粒子を含み；そしてＳｆ２０〜１００の場合、２０〜３７ｎｍの粒子を含む。Ｒｅｄｇｒａｖｅら、Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｉｎ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ａｎｄ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｉｚｅ ａｆｔｅｒ ａ ｆａｔｔｙ ｍｅａｌ ｉｎ ｎｏｒｍｏ−ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉｃ ｍａｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２０，ｐｐ．２１７−２２９（１９７９）を参照のこと。また、Ｋａｒｐｅら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｖｅｒｙ−Ｌｏｗ−Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｈｙｌｏｍｉｃｒｏｎ Ｒｅｍｎａｎｔｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｒｍｏｔｒｙｇｌｉｃｙｅｒｉｄｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉｃ Ｍｅｎ Ｗｉｔｈ ａｎｄ Ｗｉｔｈｏｕｔ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｖｏｌ．４８，Ｎｏ．３（Ｍａｒｃｈ），１９９９，ｐｐ．３０１−３０７も参照のこと。したがって、たとえ試験方法それ自身によって大きさに基づいて特徴付けられなくても、もし密度によって分離された粒子がおよそ上記の化学シフトを有しているなら、そのＴＲＬ粒子はＴＲＬ Ｖ６粒子である。
【００４３】
さらに、本発明は、食後のトリグリセリドレベルがＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇と相関することを決定した。これらのトリグリセリドレベルは、加水分解される内腔内部のトリグリセリド、腸から吸収される脂肪酸に起因し、次いで、トリグリセリドとして再エステル化され、そしてカイロミクロンとしてリンパ循環または門脈循環中に輸送されるか、あるいは、肝臓によって分泌されたＶＬＤＬに起因することができる。例えば、正のエネルギーバランスの状態において、過剰な食物摂取の後、トリグリセリドは、筋肉のような脂肪酸酸化によりエネルギーを使用する他の組織とは対照的に、または他の組織に加えて、ＶＬＤＬの構成要素として脂肪組織に貯蔵のために輸送される。したがって、食後のトリグリセリドレベルの減少は、いずれの場合も脂肪貯蔵の減少と相関する、脂肪酸酸化の増加および／または脂肪吸収の減少を示し得る。いくつかの実施形態において、本発明は、具体的には、ＴＲＬ Ｖ６濃度の減少がこの脂肪貯蔵の減少と相関し、その結果、試験中の化合物または減量用医薬品での処置によるＴＲＬ Ｖ６濃度の変化が、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝に対する効果についてのバイオマーカーとして、特に所定の個々の患者が所定の化合物または減量用医薬品に対して反応する患者であるか、または反応しない患者であるかどうかを予測すること含む、脂肪貯蔵の減少についてのマーカーとして使用されることができることを実証する。
【００４４】
ＴＲＬ Ｖ６濃度（または粒子数）の上昇が、いくつかの場合において、平均ＶＬＤＬ粒径の増大（ＶＬＤＬリポタンパク質粒子、ＴＲＬ Ｖ１〜Ｖ６の群の全てのリポタンパク質粒子についての中間または平均の大きさ、または大きなＴＲＬ＝ＴＲＬ Ｖ５＋ＴＲＬ Ｖ６のみでも）によっても追跡され得ることが理解されるだろう。なぜなら、このグループにおいて脂肪負荷に対して変化する濃度を示す主成分が、上記のようにＴＲＬ Ｖ６成分であるからである。そのようなシグナルは、他のサブタイプからのシグナルによって弱められるが、ＶＬＤＬ反応（平均サイズの変化）を識別すること、それにより、ＶＬＤＬ反応の減少をＴＲＬ Ｖ６反応を直接的に測定することに代わるものとして識別することは可能であり得る。グループとしてのＶＬＤＬ Ｖ１〜Ｖ５の濃度全体は、はっきりとは変化せず、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応は、クラスとして（平均サイズで区別される）ＶＬＤＬ濃度を測定することからは一般的には検出可能ではないことに注意されたい。
【００４５】
表２は、ＮＭＲによって測定された大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスについての、偽薬と比較した、脂肪負荷からの曲線下面積（ＡＵＣ）のシブトラミンによって誘導された減少の統計学的分析を示す。このデータは、シブトラミンがＴＲＬ Ｖ６反応を減少させるが、ＴＲＬ Ｖ５またはカイロミクロン反応を減少させない（個々のサブグループとして測定された場合に、ＴＲＬ Ｖ６のみが統計学的に有意な変化を有することに注意されたい）ことを示し、これによってＴＲＬ Ｖ６がバイオマーカーであることを示している。そのデータはまた、ある状況下において、ＴＲＬ Ｖ６反応の減少は他のサブタイプからのシグナルを含む測定の場合でも検出されることができるが、サブタイプの全ての組み合わせでの測定の場合は検出できないことを実証する。この特定の研究において、ＴＲＬ Ｖ６＋カイロミクロンは有意な変化を示したが、ＴＲＬ Ｖ６＋ＴＲＬ Ｖ５およびＴＲＬ Ｖ６＋ＴＲＬ Ｖ５＋カイロミクロンは有意な変化を生じなかった。ＴＲＬ Ｖ６反応が、サブタイプの組み合わせの反応と一致し得る場合、ＴＲＬ Ｖ６シグナルの変化に起因するシグナルの変化の大きさが、基線シグナルと比べて十分に大きいので、有意に異なる（すなわち、基線シグナルにおけるＴＲＬ Ｖ６からのシグナルが、組み合わせられたシグナルを圧倒し、その結果ＴＲＬ Ｖ６の変化が確実に検出される）ことに注意されたい。
【００４６】
表２：ＮＭＲによって測定され、かつＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）ＩＩＩ リポタンパク質試験（ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）によって分析された、大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスについての、偽薬と比較した、脂肪負荷からのＡＵＣ（５〜１１時間の時点）のシブトラミンによって誘導された減少の分析。
【表２】
Ｐ値＜０．０５は、統計学的に有意；Ｐ値＞０．０５は、統計学的に有意ではない。
【００４７】
ラットにおいて、ＴＲＬ Ｖ６濃度の有意な減少は、典型的な高い（容易に測定可能な）基礎レベルのために容易に測定される。したがって、試験中の化合物または減量用医薬品についての研究は、ラットにおいて容易に行われることができる。しかしながら、ヒトにおいては、基礎レベルは比較的低く、かつ、血漿サンプルに対するＮＭＲ分光法のような現在の分析方法による検出の限界に近いかまたはそれを下回りがちである。
【００４８】
高脂肪の食餌を与えた、食餌により誘導した肥満ラットを使用するラット研究において、ＴＲＬ Ｖ６濃度は構成的に上昇され、医薬品の投与によって誘導されたＴＲＬ Ｖ６濃度の減少は、医薬品がトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節し、その結果、脂肪組織中の脂質の貯蔵が減少される能力の指標である。ヒトにおいて、ＴＲＬ Ｖ６の濃度は、通常確実な定量化のためには低すぎる。しかしながら、本発明の実施形態は、ＴＲＬ Ｖ６の確実に測定可能な濃度が、短期間の脂肪負荷を、特に個々の患者が絶食状態を達成した後に施すことによって誘導されることができることを見出した。さらに、これらの上昇した濃度は、ヒト患者が再び絶食状態に近づくにつれて基礎レベルに戻る。加えて、特定の減量用医薬品の投与は、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の大きさを減少させることが示される。
【００４９】
本発明の特定の実施形態は、各々直接的または間接的にトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝経路を調節する、１種以上の治療標的を標的にする試験中の減量用医薬品を試験するのに好適である。その調節が本発明の方法を使用してアッセイされることができる治療標的の例は、５−ＨＴ２Ｃ受容体（アゴニストは、肥満症／過体重を処置するために開発されている）、ＣＢ−１受容体（アンタゴニスト）、ＳＮＤＲＩ（阻害剤）、ＰＤＥ−１０（阻害剤）、およびオレキシン−１受容体（アンタゴニスト）である。５−ＨＴ２Ｃ受容体、ＣＢ−１受容体、および／またはＰＤＥ−１０の阻害剤を標的にする医薬品は、本発明のアッセイ方法に特に好適である。他の治療標的は、本発明の方法を使用して標的の調節因子を試験することおよびＴＲＬ Ｖ６反応の減少が観察されたかどうかを決定することによる過度の実験なしで容易に見出され得る。
【００５０】
試験治療薬についての調査のための研究および所定の治療薬に対する個体の反応性／非反応性を試験するための研究を含む、ヒトにおける研究のために、ヒト患者は、典型的には、ウォーキング後、かつ何かを摂取する前に、例えば約５〜１０時間、好ましくは約６〜９時間、例えば約８時間の絶食の後に試験される。患者は、試験期間の前または間のいつでも水を飲むことができる。試験前の期間は、食事内容および各試験セッションの前のタイミングについての整合性を容易にするためにもうけられることができる。血液サンプルが、次いで、患者が絶食状態にある場合の、ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数の基礎レベル測定を提供するために採取される。
【００５１】
患者は、次いで、比較的短期間、例えば、４０分間以内、好ましくは２０分間以内にわたって、好適な脂肪負荷を施されることができる。行われた研究または所望の好ましい所定の試験条件に依存して、１種以上の血液サンプルが、次いで、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇を決定するために採取される。典型的には、１回の採血は、例えば、個々の患者の、治療における薬剤に対する反応の可能性をあらかじめ決めるための、確立された減量用医薬品を使用する所定の試験に十分であろう。他の用途のためには、完全なＴＲＬ Ｖ６反応曲線を得るために、複数回の採血を行うことが好まれ得る。典型的には脂肪負荷を与えてから約２時間後から始まる、脂肪負荷に対するヒトＴＲＬ Ｖ６反応（すなわち、ＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇）は、脂肪負荷を与えてから約４時間〜約６時間後にピークになり、脂肪負荷を与えてから約９時間〜約１２時間後に基礎レベルに戻る。極めて高い脂肪濃度が投与される場合、遅い開始／基礎レベルまでの遅い戻りへの時間的経過における推移が存在し得ることに注意されたい。そのような推移は、典型的には約４〜６時間での開始、約１０時間でのピーク到達、および約１２時間〜１５時間での基礎レベルへの戻りを予測する。脂肪負荷に対する典型的なヒトＴＲＬ Ｖ６反応は、絶食状態での約０ｍｇ／ｄＬ〜約３５ｍｇ／ｄＬの基礎レベルから、約８０ｍｇ／ｄＬ〜約２５０ｍｇ／ｄＬへの血漿濃度の上昇である。
【００５２】
ヒト患者は、次いで、医薬品の投与と併せて再試験される。医薬品と併せた試験は、その患者の通常のＴＲＬ Ｖ６反応を決定する試験の前か後のいずれかに行われ得、ただし、それが好ましくないとしても、その医薬品を再試験する前に患者の系をクリアすることが理解されるべきである。試験医薬品または減量用医薬品に対する有益な反応の指標であるヒトＴＲＬ Ｖ６反応の典型的な減少は、ＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少である。約２０％〜約８０％減少されたＴＲＬ Ｖ６反応を見ることは一般的である。好ましい反応の指標である典型的な反応は、約５０％の減少またはそれ以上であり得る。
【００５３】
１つの最適化された実施形態において、例えば、所定の患者が減量用医薬品での提案された治療に対して好ましく反応する可能性をあらかじめ決めること（すなわち、その患者が反応する患者であるか反応しない患者であるかを予測すること）における通常の使用において、１回分の提案された減量用医薬品と併せた脂肪負荷の単回投与は好適であり得、その結果、ＴＲＬ Ｖ６反応の減少は、所定の脂肪負荷に対するあらかじめ決められた患者母集団の平均ＴＲＬ Ｖ６反応から決定され得る。そのような最適化された実施形態において、脂肪負荷および減量用医薬品の投与の前の１回の採血、および脂肪負荷投与後のあらかじめ決められた時点での１回の採血は、減量用医薬品が、脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を減少させたかどうかを決定するのに十分であり、したがって、その薬剤が個々の患者のトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節するかどうかをあらかじめ決定することができる。関連するＴＲＬ Ｖ６反応、または最初の採血をせずに、減量用医薬品の投与と併せた脂肪負荷投与の後のあらかじめ決められた時間範囲内でのサンプルの採取のみでＴＲＬ Ｖ６反応の減少を決定することもまた可能である。与えられた脂肪負荷が、食物ベースの脂肪負荷よりもむしろ化学的および／または医薬的に誘導または刺激された脂肪負荷であり得ることもまた企図される。
【００５４】
使用される特定の臨床アッセイプロトコルが、治療のために検討されている減量用医薬品に依存するであろうこと、およびそのようなプロトコルの決定が当業者の範囲内であることは理解されるだろう。例えば、薬剤および第二脂肪負荷の投与の具体的なタイミングは、その薬剤の薬物動態に依存して変わるだろう。考慮すべき１つの要因は、その薬剤の血中レベルが脂肪負荷の投与の前に有効なレベルであることである。したがって、医薬品と「併せて」とは、薬剤および脂肪負荷の投与が、その薬剤が、それが投与されたときに脂肪負荷の分配／代謝に作用するように患者において有効なレベルであることを可能にするように調整されることを意味すると理解される。これは、薬剤の仕様に依存して、その薬剤が脂肪負荷と同時、あるいはそのすぐ後、脂肪負荷投与後の約３０分間までに投与されること、またはその薬剤がその薬剤の有効な血漿レベルを達成するのに必要な期間だけ脂肪負荷の前に、例えば、脂肪負荷の投与の約０時間〜約３時間前、例えば、脂肪負荷の投与の１５分〜３０分前に投与されることを意味することができる。医薬品がプロドラッグとして投与される場合、または活性代謝物がその医薬品の薬物動態において重要である場合、より長い時間が、活性部分の適切な血漿濃度を蓄積させるのに必要であり得る。そのような投薬養生法の決定は習慣的であり、十分に当業者の範囲内である。
【００５５】
同様に、脂肪負荷の投与後の採血のタイミングおよび回数は、脂肪負荷後の採血の後まで薬剤の血中レベルが有効レベルのままであることの重要な要因である薬剤のクリアランス率に依存して変わり得、投与された脂肪負荷に基づくピークＴＲＬ Ｖ６反応に対応して最適にタイミングを合わせられるべきである。
【００５６】
好適な脂肪負荷は、約３０ｇより多い脂肪、好ましくは約５０ｇより多いかそれに等しい脂肪、好ましくは約６０ｇ〜７０ｇの脂肪を含む。約８０ｇより多いかそれに等しい脂肪を含む脂肪負荷は、ＴＲＬ Ｖ６反応の開始により長い時間を誘導し始め得る。
【００５７】
脂肪負荷の正確な組成は重要ではなく、多くの好適な組成物が当業者の栄養学者によって容易に配合され得ることは理解されるだろう。好適な脂肪負荷配合物は、所望の研究に適するようにおよび／または患者母集団の好みにしたがって合わせられ得る。重要な要因は、十分な脂肪含有量および過剰な全体のカロリー含有量が、短い期間内に提供されて、試験医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６濃度の測定可能な上昇を生じさせることである。
【００５８】
脂肪負荷は、多くの好適な形態、例えば、調理された食事、包装された食事、スナックバー（ｓｎａｃｋ ｂａｒ）のような１回分の食料品、包装された飲料または粉末の飲料ミックスのような１回分の液体組成物、あるいは経口の錠剤またはカプセル剤のいずれかをとり得る。脂肪負荷として機能し得る好適な組成物の例は以下の通りである。
【００５９】
脂肪負荷の例１：
【表３】
【００６０】
脂肪負荷の例２：
【表４】
【００６１】
脂肪負荷の例３：飲料：所望される量の脂肪を提供するための、全乳またはクリームあるいはそれらの混合物の容量。例えば、約１５０ｍＬ〜約１８０ｍＬのホイッピングクリーム。美味しさを改善するための香味剤が加えられ得る。
【００６２】
ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数の測定
ＴＲＬ Ｖ６反応は、任意の好適な様式で測定されることができる。ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数を選択的に測定するための１つの現在知られている方法は、血漿サンプルをＮＭＲ分光法によって、その後デコンボリューション分析によって、全ＮＭＲシグナルに対する種々のリポタンパク質サブタイプの相対的な寄与を分離する。１つのそのようなデコンボリューション方法は、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩ、および／またはＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）ＩＩＩの、ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａによって提供されるサブクラス粒子分析である。同様に、平均ＶＬＤＬ粒径も、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）サブクラス粒子分析で同じように測定され得る。この分析技術の説明については、Ｏｔｖｏｓに対する米国特許第５３４３３８９号、米国特許第６６１７１６７号、米国特許第４９３３８４４号、および米国特許第７２４３０３０号を参照のこと。また、ＮＭＲの臨床分析機器の説明については、米国特許出願第２００５−０２２２５０４号も参照のこと。また、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１：「Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｂｃｌａｓｓ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｂｙ ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ」，Ｊ．Ｄ．Ｏｔｖｏｓ，ＡＡＣＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ，２０００，第２版，ｐｐ ６０９−６２３、およびＪｅｙａｒａｊａｈ ＥＪ，Ｃｒｏｍｗｅｌｌ ＷＣ，Ｏｔｖｏｓ ＪＤ．Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐａｒｔｉｃｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｍｅｄ．２００６；２６：８４７−７０も参照のこと。これらの参考文献の内容は、その全文が本明細書中に引用されるように、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００６３】
典型的な例として、全血サンプルを、２ｍＬ ＥＤＴＡ採血管中に採取し、よく混合するために数回転倒させ、氷上に置く。サンプルを、次いでおよそ３０００ｒｐｍで１０〜１５分間４℃で遠心分離する。遠心分離が完了すると、管を氷上に置き、血漿を取り出す。血漿を、ポリプロピレン管中に入れ、分析まで４℃で保つ。サンプルは、採取の後約４日までいつでも分析され得る。サンプルを、ＴＲＬ Ｖ６反応について、例えば、ＮＭＲ血漿リポタンパク質分析によって、例えば、ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｒａｌｅｉｇｈ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）によって提供されるＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩ、またはＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩＩリポタンパク質試験によって分析する。
【００６４】
ＮＭＲスペクトルデータを、Ｊｅｙａｒａｊａｈら（上述）に記載されるように分析する。リポタンパク質サブクラス濃度を、脂質質量濃度単位（ｍｇ／ｄＬトリグリセリド単位のＴＲＬサブクラス）で、あるいは、ｎｍｏｌ／Ｌの粒子濃度単位（１リットルあたりの粒子のナノモル）で報告する。元の情報（各サブクラスのＮＭＲシグナル振幅）を、正常な脂質組成の単離したカイロミクロン、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、およびＨＤＬサブクラス基準の化学的脂質分析およびＮＭＲ分析から得られた変換計数のセットを使用する、分析ソフトウェアによってこれらの質量濃度単位または粒子濃度単位に変換する。
【００６５】
図２は、例示的なＮＭＲ分析システム７を示し、それは、ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００を使用してＴＲＬ Ｖ６分析および／またはＴＲＬ Ｖ６測定を実行するために使用されることができる。ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００は、シグナルプロセッサおよび／またはコントローラ１１中にシステムを搭載することができ、またはサーバー、クライアント、および／または他のコンピュータ上のような異なるローカルプロセッサまたは遠隔プロセッサに部分的または全体的に存在し得る。図２を参照すると、システム７は、生体サンプルのＮＭＲ測定を行うためのＮＭＲ分光計１０を含む。いくつかの実施形態において、分光計１０は、ＮＭＲ測定がプロトンシグナルについて４００ＭＨｚで行われるように構成され；他の実施形態において、測定は、３６０ＭＨｚまたは別の所望の周波数で実行され得る。すなわち、所望の操作磁場強度に対応する他の周波数もまた利用され得る。典型的には、プロトンフロープローブが、サンプル温度を４７＋／−０．２℃に維持する温度コントローラとして設置される。分光計１０の磁場均一性は、９９．８％ Ｄ２Ｏのサンプル上で、ＨＤＯ ＭＮＲシグナルのスペクトル線幅が０．６Ｈｚ未満になるまで粗調製する（ｓｈｉｍｍｉｎｇ）ことによって最適化されることができる。Ｄ２Ｏ測定のために使用される９０°ＲＥ励起パルス幅は、典型的には、約６〜７マイクロ秒である。
【００６６】
図２を再度参照すると、分光計１０は、デジタルシグナルプロセッサおよび／またはコントローラ１１、またはシグナル処理ユニットによって制御される。プロセッサ／コントローラ１１は、迅速なフーリエ変換を実施することが可能であるべきであり、この目的のために、配線で接続されたサインテーブル、ならびに配線で接続された乗算回路および除算回路を含み得る。それはまた、外部または遠隔コンピュータ１３へのデータリンク１２、および電子記憶ユニット１５に接続する直接メモリアクセスチャンネル１４も含み得る。
【００６７】
プロセッサ／コントローラ１１はまた、アナログからデジタルへの変換器、デジタルからアナログへの変換器、およびパルスコントロールおよびインターフェース回路１６を介して、分光計の操作要素に接続するスローデバイスＩ／Ｏポートも含み得る。これらの要素は、デジタルコンピュータ１１によって指示されるＲＦ励起パルスの継続時間、周波数、および大きさを生成するＲＦ送信器１７、およびパルスを増幅し、かつそれをサンプルセル２０を囲むＲＦ送信コイル１９に連結するＲＦ電力増幅器１８を含む。超電動磁石２１によって生成された９．４ Ｔｅｓｌａ偏光磁場の存在下で励起されたサンプルによって生成されたＮＭＲシグナルは、コイル２２によって受信され、ＲＦ受信器２３に適用される。増幅およびフィルター処理されたＮＭＲシグナルは、２４で復調され、生じた直交シグナルはインターフェース回路１６に適用され、そこではそれらはデジタル化されデジタルコンピュータ１１を介してディスク記憶装置１５中のファイルに入力される。システム７は、シグナルプロセッサ／コントローラ１１および／または全体的にまたは部分的に、オンサイトまたは遠隔であり得る異なるコンピュータ、サーバー、またはクライアント上の別のプロセッサに配置されたデコンボリューションモジュール含むことができる。好適な臨床ＮＭＲ分析機器のさらなる説明についてはＵＳ２００５／０２２２５０４を参照のこと（その内容は、その全文が本明細書中に引用されるように、参照によって本明細書中に組み込まれる。）。
【００６８】
ＮＭＲデータが測定セル２０においてサンプルから獲得された後、シグナル処理は、化学シフトスペクトルのデジタル表示であるデータファイルを生成し、それは、電子的アーカイバルメディア記録記憶装置２５中に記憶され得る。パーソナルコンピュータ、ラップトップコンピュータ、デスクトップコンピュータ、または他のコンピュータであり得るコンピュータ１３は、化学シフトスペクトルを処理し、プリンター２６に出力されるか、または電子的に記憶され、そして所望の電子メールアドレスまたはＵＲＬに送られる患者報告書を提供することができる。当業者は、表示装置のような他の出力デバイスもまた、結果を提供するために利用され得ることを認識するだろう。
【００６９】
当業者には、コンピュータ１３およびその記憶装置２５によって実施される機能はまた、分光計のデジタルシグナルプロセッサ／コントローラ１１によって実施される機能中に、またはＮＭＲ分光計１０および／またはプロセッサ１１と通信するさらなる回路に組み込まれ得ることはあきらかだろう。当業者に周知であるように、他のインターフェースおよび出力デバイスもまた利用され得る。
【００７０】
図３および図４は、ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００ａ、１００ｂの例を示し、それらは、システム７と通信し、システム７を搭載し、そして／またはシステム７またはＴＲＬ Ｖ６データを提供できる他の測定システムによって測定されたＴＲＬ Ｖ６データを分析することができる。示されるように、図３および図４は、本発明の実施形態に従うシステム、方法、および／またはコンピュータプログラム製品として包含されるかまたは提供されることができる、データ処理システムの例示的実施形態を示す。プロセッサ４１０（任意選択的に、図２のプロセッサ１１および／またはコンピュータ１３であるか、またはそれらと通信することができる）は、アドレス／データバス４４８を介してメモリ４１４と通信する。プロセッサ４１０は、いかなる市販マイクロプロセッサまたはカスタムマイクロプロセッサでもあることができる。メモリ４１４は、データ処理システム４０５の機能を実行するために使用されるソフトウェアおよびデータを含有するメモリデバイスの階層の代表である。メモリ４１４は、限定されないが、以下のタイプのデバイスを含むことができる：キャッシュメモリ、ＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリ、ＳＲＡＭ、およびＤＲＡＭ。
【００７１】
図３および図４に示されるように、メモリ４１４は、データ処理システム４０５において使用されるいくつかのカテゴリーのソフトウェアおよびデータ含み得る：操作システム４５２；アプリケーションプログラム４５４；入力／出力（Ｉ／Ｏ）デバイスドライバ４５８；ＴＲＬ Ｖ６減量反応者予測モジュール１００ａ（図３）および／またはＴＲＬ Ｖ６ベース研究用減量薬物評価モジュール１００ｂ（図４）；およびデータ４５６。
【００７２】
データ４５６は、（図２に示されるシステム７のような）データまたはシグナル獲得システム４２０から得られ得る、ＴＲＬ ＮＭＲ サブクラスシグナル（構成および／または複合スペクトル線形）データ４６２を含み得る。各患者または動物モデルの生体サンプルについて、データは、ＴＲＬ Ｖ６の固有データ値、またはＴＲＬ Ｖ６と他の亜画分（例えば、カイロミクロンおよび／またはＴＲＬ Ｖ５）のデータを含むことができる。当業者によって理解されるように、操作システム４５２は、例えば、内蔵されたデータ処理システムのための、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍａｃｈｉｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ）製のＯＳ／２、ＡＩＸ、またはＯＳ／３９０、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）製のＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＣＥ、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＮＴ、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ９５、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ９８、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ２０００、またはＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＸＰ、ＰａｌｍＳｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）製のＰａｌｍ ＯＳ、Ａｐｐｌｅ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ，Ｉｎｃ製のＭａｃ ＯＳ、ＵＮＩＸ（登録商標）、ＦｒｅｅＢＳＤ、またはＬｉｎｕｘ、私有の操作システムまたは専用の操作システムのようなデータ処理システムでの使用に好適ないかなる操作システムであっても良い。
【００７３】
Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８は、典型的には、アプリケーションプログラム４５４によって操作システム４５２を介してアクセスされるソフトウェアルーチンを含んで、Ｉ／Ｏデータポート、データ記憶装置４５６、および特定のメモリ４１４コンポーネントおよび／またはデータ獲得システム４２０のようなデバイスと通信する。アプリケーションプログラム４５４は、データ処理システム４０５の種々の特徴を実施するプログラムの実例であり、好ましくは、本発明の実施形態による操作を支持する少なくとも１つのアプリケーションを含む。最終的には、データ４５４は、アプリケーションプログラム４５４、操作システム４５２、Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８、およびメモリ４１４中に存在し得る他のソフトウェアプログラムによって使用される静的および動的データを表す。
【００７４】
本発明の実施形態は、例えば、図３および図４のアプリケーションプログラムであるモジュール１００ａ、１００ｂに関して例示的であるが、当業者によって理解されるように、本発明の実施形態の教示から利益を受ける限りは、他の構成もまた利用可能であり得る。例えば、モジュール１００ａ、１００ｂはまた、操作システム４５２、Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８、またはデータ処理システム４０５の他のそのような論理部中に内蔵され得る。したがって、本発明の実施形態は、図３／４の構成に限定されるとみなされるべきではなく、それらは、本明細書中に記載される操作を実行することができるいかなる構成も包含することが意図される。特定の実施形態において、モジュール１００ａおよび／または１００ｂは、遠隔コントロールシステム（ローカルまたはオフサイト）と通信するためのコンピュータプログラムコードを含み得る。
【００７５】
本発明の方法、システム、およびコンピュータプログラム製品が、ＴＲＬ Ｖ６反応またはＶＬＤＬ反応を測定する手段によって限定されないことは理解されるだろう。そのようなサブタイプを区別する測定は将来発見されるだろうし、また、従来の方法がそのような測定を可能にするために変更され得るからである。例えば、もしＴＲＬ Ｖ６特異的抗原が公知になり、かつそのような抗体に対して特異的抗体が開発されたときは、ＴＲＬ Ｖ６反応を免疫アッセイ技術によって測定することが可能になり得る。また、ＴＲＬ Ｖ６特異的タンパク質または他のＴＲＬ Ｖ６特異的成分を識別および定量化することも可能になり得、それによってＴＲＬ Ｖ６反応を測定するための新しい方法が可能になり得るか、あるいは超遠心分離および浮遊評価、または他の従来の方法が、好適なＴＲＬ Ｖ６情報を提供するために変更され得る。そのような方法は、本明細書中に記載されるＮＭＲ技術を使用する方法と等価であると当業者によって理解されるだろう。
【００７６】
図５は、例示的な患者報告書２００を示す。示されるように、報告書２００は、患者の氏名２０１および個人データ２０５（例えば、検体採取日、体重、脂肪負荷投与および薬物投与の時間）を含むことができる。報告書２００は、患者からの第二生体サンプルの採取と併せて投与された減量用医薬品（ＷＬＰＡ）の名前も含むことができる（ブロック２１０）。報告書２００は、任意選択的に、２つの異なるＴＲＬ Ｖ６測定または評価を提供することができ、患者の正常なＴＲＬ Ｖ６反応の指標であるサンプルの測定または評価と、ＷＬＰＡと併せて行われる測定または評価である（ブロック２１５、２２５）。報告書２００は、ＷＬＰＡと関連する陽性ＴＲＬ Ｖ６反応が存在するかどうかを示すことができる（ブロック２３０）。報告書２００は、その患者がそのＷＬＰＡを進めるか、またはそのＷＬＰＡがこの患者にとって有益でないようであるという提案を含むことができる（ブロック２５０）。提案は、ＴＲＬ Ｖ６の減少率（あれば）を示すことができ（示されていない）、少なくとも８０％である、減少に反応するであろうＴＲＬ Ｖ６についての関連する統計値を提供し得る。これは、患者が境界例の反応者である（例えば、６０％〜７５％の減少）場合に、臨床医がＷＬＰＡを進めることを可能にし得る。
【００７７】
本発明の実施形態は、以下の非限定的な実施例においてより詳細に説明される。
【実施例】
【００７８】
実施例１：交差治療標的ラット研究
試験中の減量用医薬品がラットにおけるＴＲＬ Ｖ６濃度を減少させる能力を、既知の強力かつ選択的５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、既知の強力かつ選択的ＣＢ−１受容体アンタゴニスト／逆アゴニスト、および強力なＳＮＤＲＩ（シブトラミン）を含む、異なる機構の作用を標的にする３つの化合物で示す。３つの化合物の各々は、ラットにおいて減量を誘導することが知られており、そのため、試験中の減量医薬品の減量を誘導する能力と相関するＴＲＬ Ｖ６濃度の減少のバイオマーカーである。逆に、ラットまたは過体重かつ肥満のヒト被験体における減量の誘導に効果が無いことが知られている（Ｍａｌｃｏｌｍ Ｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．１９８５；９（５）：３４７−５３．）アヘン剤アンタゴニスト（ナルトレキソン）は、ラットにおいてＴＲＬ Ｖ６濃度を減少しないことが示され、やはり試験中の減量医薬品の減量を誘導する能力に対するＴＲＬ Ｖ６濃度の減少のバイオマーカーに相関する。
【００７９】
高脂肪食で飼育されたＤＩＯ−ＬＥラットに、賦形剤投与または試験化合物の急性投与のいずれかを施す。投与後の特定の時点に、動物を犠牲にし、ＥＤＴＡを含有する血液サンプル管に血液を採取し、本質的に上記に記載されるように処理する。サンプルを、全ての粒子サブタイプの報告（特に、ＴＲＬ Ｖ６の濃度または粒子数）と共に、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）リポタンパク質サブ粒子試験によって分析する。
【００８０】
１０ｍｇ／ｋｇ用量の５−ＨＴ２Ｃアゴニストは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度を、投薬の２時間後に約９０％、投薬の約８時間後に約８０％減少させる。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度およびＶＬＤＬ平均粒径は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８１】
０．３ｍｇ／ｋｇ用量のＣＢ−１アンタゴニストは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度およびＶＬＤＬ粒径を、投薬の約１時間後および投薬の約３時間後に約７５％減少させる。反応は、投薬の５時間後に、約５０％まで減少し続ける。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８２】
３ｍｇ／ｋｇ用量のＳＮＤＲＩは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度およびＶＬＤＬ粒径を、投薬の約２時間後および投薬の約５時間後に約７８％減少させる。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８３】
それに対し、１０ｍｇ／ｋｇの経口投与された用量のナルトレキソンは、循環ＴＲＬ Ｖ６レベルに対して最小の効果を有した。ナルトレキソンは、ＴＲＬ Ｖ６レベルを、投薬の２時間後に３０％だけ減少させた。ＴＲＬ Ｖ６レベルは、投薬の５時間には基線レベルに戻り、投薬の１８時間後に変化していなかった。
【００８４】
【表５】
【００８５】
実施例２：ＳＮＤＲＩ（シブトラミン）でのヒト研究
ヒトにおいて減量を誘導できることが知られているＳＮＤＲＩ（シブトラミン）を、それが、単純盲検のクロスオーバー設計を利用し、シブトラミンおよび偽薬を含み、高グリセリド血症かつ過体重および肥満であるが、それ以外は健康な被験体における、予備的なバイオマーカー研究においてヒトのＴＲＬ Ｖ６反応血漿濃度およびＶ−ＴＲＬ反応を減少させる能力と相関するか試験する。
【００８６】
それぞれ６人の被験体を含有する３つのコホートに、研究の間３つの期間を経験させる。被験体を一晩絶食させ、２つの空腹時採血を入手し、その後、およそ０７：００時に朝食をとらせる。偽薬またはシブトラミンを、および１０：００時に投与する。血液サンプリングを、朝食の開始のおよそ１時間後に開始し、７時間の間は１時間間隔で、次いで、次の１０時間の間は２時間ごとに続ける。脂肪負荷の例２に従う昼食を、および１２：００時に供する（および６０ｇ〜６５ｇの脂肪）。脂肪負荷投与の１２時間後までは他の食物を許可しない。被験体を、最後の血液サンプリングの後に、研究の第２試験期間に戻る前の４〜８日間の洗い流し期間の間解放する。洗い流し期間の後に、被験体を、再度一晩絶食させる。次いで、各被験体がシブトラミンまたは偽薬の交互処置を受けるようクロスオーバーする以外は、研究の第１の試験期間における手順と同じように手順を繰り返す。血液サンプルを、本質的に実施例１に記載されるように採取し、処理し、そして分析する。
【００８７】
ＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応を、脂肪負荷の５時間〜１１時間の期間に観察する。脂肪負荷投与の５時間〜１１時間のＡＵＣ（反応曲線下面積）を計算し、混合効果モデル分析を使用して統計学的に分析して、シブトラミン処置群と偽薬処置群を比較する。シブトラミン処置群は、平均して、約２８％のＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少を示すが、ＴＲＬ Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、またはＶ５サブタイプのいずれかの血漿濃度の有意な変化は示さない。平均Ｖ−ＴＲＬ反応の統計学的に有意な減少もまた観察されるが、この変化の大きさは、ＴＲＬ Ｖ６反応の変化より小さいことが見出される。大半の被験体において、シブトラミンの投与は、彼らの偽薬処置反応と比較してＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応の大きさを減少した。したがって、ＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応の減少は、ヒトにおいて減量を誘導するＳＮＤＲＩの既知の能力と相関するＳＮＤＲＩによって誘導された。
【００８８】
実施例３：５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニストでのヒト研究
ラットおよびサルにおいて減量を誘導することが知られており、かつヒトにおいて減量を誘導すると考えられる５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニストを、それが、過体重または肥満であるが、それ以外は健康な被験体における、単一中心の、入院患者／外来患者の、二重盲検（被験体および研究者について盲検）の、無作為化された、偽薬コントロールされた、単回投与の、用量漸増研究において、予備的なバイオマーカー研究においてＴＲＬ Ｖ６反応を減少させる能力と相関するか試験する。
【００８９】
各コホートの被験体は、４つの投薬期間に参加する（どの被験体も偽薬を２回受けないことを確実にする無作為化コードに従う、活性薬物での３つの期間と偽薬での１つの期間）。被験体を一晩絶食させ、投薬前の血液採取を得る。次いで、被験体に化合物または偽薬の経口投薬を与える。投薬の２時間後に、経口の上記脂肪負荷の例２に従う脂肪負荷を被験体に投与する。０時間〜１２時間の投薬後の期間にわたって、一定の間隔で、血液サンプルを採取および処理し、本質的に上記の実施例２のように分析する。ＴＲＬ Ｖ６反応についてのＡＵＣを、０時間〜１２時間の投薬後のサンプリング期間にわたって推量して、化合物または偽薬の存在下での経口脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応を評価する。
【００９０】
化合物処置群と偽薬処置群についてＴＲＬ Ｖ６反応を統計学的に比較するために混合効果モデルを使用して、化合物処置群についてＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少を、高脂肪食に反応する偽薬関連反応と比較して確認する。ＴＲＬ Ｖ６反応と化合物の血漿曝露との関係は、より高い血漿薬物濃度でのＴＲＬ Ｖ６反応の大きさの急な減少を有する非線形である。したがって、５−ＨＴ２Ｃアゴニストによって誘導されたＴＲＬ Ｖ６反応およびＶＬＤＬ反応は、化合物のラットにおいて減量を誘導する既知の能力と相関する。
【００９１】
上述は、本発明の例示であり、開示された特定の実施形態に限定されるものとしてみなされるべきではない。本発明のいくつかの例示的な実施形態を説明してきたが、当業者は、多くの変更が、本発明の新規の教示および利点から実質的に逸脱することなく例示的な実施形態において可能であることを容易に理解するだろう。したがって、全てのそのような変更は、特許請求の範囲において規定される本発明の範囲内に含まれることが意図される。特許請求の範囲において、手段＋機能の節は、使用される場合、挙げられる機能を実施するように本明細書中に記載される構造、およびその等価な構造を含む構造的等価物もまたカバーすることが意図される。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００７年１２月１９日に出願された米国仮出願番号第６１／０１４８８１号の優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
多数の生理系が、体重およびエネルギー恒常性の調節に関与し、これらの系は多数の複雑なフィードバック機構を介して相互に関連する。この複雑性は、薬物療法の影響を受けやすい治療標的の多様性を引き起こすが、複雑な相互調節もまた、肥満症および過体重の効果的な薬学的処置の開発を、困難で時間がかかるものにしている。
【０００３】
さらに、いったん一般に効果的な薬理作用のある物質が肥満症および／または過体重の処置のために見出されると、個体間の遺伝的および／または生理学的差異が、患者母集団内の有効性における大きな分散を生じさせ得る；すなわち、個体の生理機能に基づいて治療薬に対して反応する患者であるかまたは反応しない患者であるという患者の部分母集団の傾向が存在する。結果として、所定の個体が所定の薬物療法に対して十分反応するかどうかを、長期の治療過程の前に予測することは困難である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ある化合物が、治療的減量に対する長期の臨床試験の前に、体重および／またはエネルギー恒常性に対して所望の生理学的効果を有するかどうかを決定する方法を有することは大きな価値があり得る。また、個々の患者が、特定の減量用医薬品の治療効果に好ましく反応するかどうかを、好ましくはその薬剤での治療過程の開始前にあらかじめ決めるための方法を有することも大きな価値がある。本発明は、バイオマーカーならびに医薬品が哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節する能力、まわり回ってその薬剤の肥満症および／または過体重の処置のための起こり得る生理学的利益の指標となるものを試験するためにそのバイオマーカー使用するための方法、システム、およびコンピュータプラグラム製品を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの態様において、Ｖ６サブクラスの大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子（ＴＲＬ Ｖ６）の濃度の変化が、減量用医薬品によって誘導された哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝の調節についてのバイオマーカーとして使用できることが見出された。具体的には、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝の調節を介する肥満症または過体重の処置に好適な医薬品は、被験体哺乳動物のＴＲＬ Ｖ６濃度の減少を生じるだろう。そのようなものとして、本発明の１つの実施形態は、減量用医薬品でのヒトにおける肥満症または過体重のための処置に対する反応性を予測する方法であって、ヒトにおいて、医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、医薬品の存在下での脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含む方法を提供する。さらなる実施形態は、医薬品が、５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から独立して選択される任意の１種の化合物または２種以上の化合物の任意の組み合わせである場合を含む。
【０００６】
本発明の別の態様において、個々の患者が所定の減量用医薬品に対して好ましく反応するかどうかを決定するための方法、すなわち、薬剤が患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少を生じるかどうかを決定することによって、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする個々の患者が所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかまたは反応しない患者であるかを予測するための方法が提供される。本発明のこの態様の種々の実施形態において、減量用医薬品は、５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から独立して選択される任意の１種の化合物または２種以上の化合物の任意の組み合わせである。
【０００７】
本発明のこの態様の別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、１回分の減量用医薬品を、患者に脂肪負荷を施すことと併せて患者に投与し、次いで、医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含み、ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【０００８】
本発明のこの態様の別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）患者に第二脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
４）第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）第一脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、第二脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；
６）ＴＲＬ Ｖ６反応の相対的減少に基づいて、減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、そしてＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【０００９】
本発明のこの態様のさらに別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）患者に脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
２）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を、減量用医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較すること；
４）比較する工程に基づいて、減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少はその減量用医薬品がその患者を処置するのに好適であることを示し、そして標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如はその減量用医薬品がその患者の処置に好適ではないことを示す方法が提供される。
【００１０】
別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）患者に第二脂肪負荷を施すとともに、１回分の医薬品を患者に投与すること；
４）第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）第一脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、第二脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；および
６）決定する工程に基づいて、患者が反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する方法が提供される。
【００１１】
別の実施形態において、肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）患者に脂肪負荷を施すとともに、１回分の減量用医薬品を患者に投与すること；
２）脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）脂肪負荷に対する患者のＶ６反応を、減量用医薬品の非存在下での脂肪負荷に対する標準的なＶ６反応と比較すること；および
４）比較する工程に基づいて、患者がその減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、標準的なＶ６反応と比較した患者のＶ６反応の有意な減少は、患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する方法が提供される。
【００１２】
本発明の別の態様において、医薬品の哺乳動物におけるトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝に作用する能力を決定するための方法であって、偽薬関連反応と比較して脂肪負荷および／または高脂肪食に応じた哺乳動物におけるＴＲＬ Ｖ６濃度の減少を測定することを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様は、減量用医薬品に対して好ましく反応する患者の可能性を評価するための方法に向けられる。その方法は：（ａ）少なくとも１つは患者への減量用医薬品の投与と併せて採取される、患者からの少なくとも２つのインビトロサンプルにおいてＴＲＬ Ｖ６のレベルを測定すること；（ｂ）減量剤に関連するＴＲＬ Ｖ６レベルの減少が存在するかどうかを電子的に特定すること；（ｃ）および特定する工程に基づいて、減量用医薬品に対して好ましく反応する患者の可能性を評価することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、例示的なトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子亜画分（サブクラス）についての脂質メチル基ＮＭＲシグナルのグラフである。
【図２】図２は、本発明の実施形態によるＮＭＲシステムの概略図である。
【図３】図３は、本発明の実施形態による例示的なデータ処理システムの概略図である。
【図４】図４は、本発明の実施形態による例示的なデータ処理システムの概略図である。
【図５】図５は、本発明の実施形態による例示的なＴＲＬ Ｖ６評価の患者試験報告書の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下で本発明の実施形態が示され、本発明は、より完全に説明されるだろう。しかしながら、本発明は様々な形式で具体化され得、本明細書中に記載される実施形態に限定されるものとしてみなされるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全であり、そして当業者に本発明の範囲を完全に伝達することができるように提供される。図面において、類似の番号は全体にわたって類似の要素を示し、一部の構成要素、線、および特徴の厚み、大きさ、および寸法は、明確にするために誇張され得る。図中に示されるか、または特許請求の範囲において列挙される操作および／または工程の順序は、そうでないことが示されない限り表示された順序に限定されることを意図しない。図中の破線は、使用される場合、そのような示された特徴、操作、または工程がそうでないことが示されない限り任意選択的であることを示す。
【００１６】
当業者によって理解されるように、本発明のいくつかの実施形態は、装置、方法、コンピュータプログラム製品、および／またはデータ処理システムまたはシグナル処理システムとして具体化され得る。したがって、特定の方法実施形態は、ソフトウェア限定を必要とせず、一方、特定の他の実施形態は、完全にソフトウェア実施形態の形態をとり得るか、またはソフトウェア態様およびハードウェア態様を組み合わせる実施形態の形態をとり得る。さらに、本発明の特定の実施形態は、媒体中に具体化されたコンピュータ使用可能プログラムコードを有するコンピュータ使用可能記憶媒体上のコンピュータプログラム製品の形態をとり得る。ハードディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、光学式記憶デバイス、または磁気記憶デバイスを含む、任意の好適なコンピュータ読み取り可能媒体が利用され得る。
【００１７】
コンピュータ使用可能またはコンピュータ読み取り可能媒体は、限定されないが、電子、磁気、光学、超電導磁気、赤外線、または半導体のシステム、装置、デバイス、または伝搬媒体であり得る。コンピュータ読み取り可能媒体のより具体的な例（限定的な列挙）は、以下のものを含み得る：１本以上のワイヤを有する電気的接続、携帯用フロッピー（登録商標）ディスク、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、読み取り専用メモリ（ＲＯＭ）、消去可能・プログラム可能読み取り専用メモリ（ＥＰＲＯＭまたはフラッシュメモリ）、光ファイバー、および携帯用コンパクトディスク読み取り専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）。コンピュータ使用可能またはコンピュータ読み取り可能媒体は、プログラムが印刷された紙または別の好適な媒体であることも可能であり、そのプログラムが例えば、紙または他の媒体の光走査を介して電子的に捕捉され、次いで、もし必要であれば好適な様式でコンパイルされ、解釈され、またはそうでない場合処理され、次いで、コンピュータメモリに保存されることができる。
【００１８】
本発明の操作を実行するためのコンピュータプログラムコードは、Ｊａｖａ（登録商標）７、Ｓｍａｌｌｔａｌｋ、Ｐｙｔｈｏｎ、Ｌａｂｖｉｅｗ、Ｃ＋＋、またはＶｉｓｕａｌＢａｓｉｃのようなオブジェクト指向のプログラム言語で書かれ得る。しかしながら、本発明の操作を実行するためのプログラムコードはまた、「Ｃ」プログラミング言語またはアセンブリ言語でさえあるような、従来の手続き型プログラミング言語でも書かれ得る。プログラムコードは、完全にユーザのコンピュータ上で、部分的にユーザのコンピュータ上で、独立したソフトウェアパッケージとして、部分的にユーザのコンピュータ上でかつ部分的にリモートコンピュータ上で、または完全にリモートコンピュータ上で実行し得る。後者の状況において、リモートコンピュータは、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）または広域ネットワーク（ＷＡＮ）を介してユーザのコンピュータに接続され得、さもなければ接続は、（例えば、インターネットサービスプロバイダを使用するインターネットを介して）外部コンピュータへとなされ得る。
【００１９】
本明細書中で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り複数形も同様に含むことが意図される。本明細書中で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および／または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が、記載される特徴、完全体（ｉｎｔｅｇｅｒ）、工程、操作、要素、および／または構成要素の存在を特定するが、１つ以上の他の特徴、完全体、工程、操作、要素、構成要素、および／またはそれらの群の存在または追加を排除しないことがさらに理解されるだろう。本明細書中で使用される場合、用語「および／または」は、１つ以上の、関連して列挙された項目の任意のかつ全ての組み合わせを含む。
【００２０】
他のように定義されない限り、本明細書中で使用される（技術的用語および科学的用語を含む）全ての用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。一般的に使用される辞書に定義されるような用語は、関連する分野および本出願の文脈におけるそれらの意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書中に明確にそのように定義されない限り理想的な意味または過度に改まった意味で解釈されるべきではないことがさらに理解されるだろう。
【００２１】
本出願の目的のために、以下の用語は、そうでないことが具体的に述べられない限り、以下の意味を有するだろう。
【００２２】
用語「ＢＭＩ」は、ボディマス指数を意味し、それは、身長の二乗で除した個体の体重である（ｋｇ／ｍ２）。
【００２３】
用語「絶食状態」は、食物またはカロリーを含有する飲料無しの約６時間より長い期間の後の個体の生理学的状態を意味する。この状態において、個体の胃内容排出は達成され、そしてトリグリセリドは基礎レベルである。
【００２４】
用語「過体重」は、所定の個体について最適な体重よりも著しく重い状態を意味する。定義は大きく異なり得るが、一般的な目的のために、約２５〜約２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する患者は、過体重であると考えられるだろう（Ｄｏｎａｔｏ，ＰｉＳｕｎｙｅｒら、１９９８）。本発明は、現在のＢＭＩ基準によって述べられるような過体重の正確な定義によって影響されず、全てのそのような定義は、等価であると考えられるべきである。
【００２５】
用語「肥満症」は、重篤な過体重である状態または重篤な過度の体重を有することを意味する。定義は大きく異なり得るが、一般的な目的のために、３０．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する患者は、肥満であると考えられるだろう（Ｄｏｎａｔｏ，ＰｉＳｕｎｙｅｒら、１９９８）。本発明は、現在のＢＭＩ基準によって述べられるような肥満症の正確な定義によって影響されず、全てのそのような定義は、等価であると考えられるべきである。
【００２６】
用語「脂肪負荷」は、試験被験体において高脂質血症を誘導するのに十分な脂質の用量を意味し、経口脂肪負荷、脂肪含有静脈内注入、高脂肪食品、食事、高脂肪飲料などの形態をとることができる。医薬品が開発されて、脂肪負荷または疑似脂肪負荷を送達するために使用され得ることもまた企図される。
【００２７】
用語「ＴＲＬ Ｖ６」は、約９０ｎｍ〜最大約１７０ｎｍまでの直径を有する、より典型的には約１００ｎｍ〜１４０ｎｍの直径を有するＴＲＬ（トリグリセリドリッチリポタンパク質）の粒子または亜画分を示す。用語「ＴＲＬ Ｖ６」はまた、以下の表１において提供されるような推定直径に対応する、脂質メチル基ＮＭＲシグナル化学シフト（ｐｐｍ）に関しても定義されることができる。
【００２８】
用語「ＴＲＬ Ｖ５」は、約６０ｎｍ〜約８０ｎｍの直径を有する大きなＴＲＬ粒子を示す（関連するＮＭＲ化学シフトについて以下の表１を参照のこと）。
【００２９】
用語「カイロミクロン」は、ＴＲＬ Ｖ６より大きな直径を有する極めて大きなＴＲＬ粒子を示す。そのようなカイロミクロンとしては、約１７０ｎｍ〜約２６０ｎｍまでの直径を有するＴＲＬ粒子または亜画分を示す（関連するＮＭＲ化学シフトについて以下の表１を参照のこと）。ＴＲＬ Ｖ５とＴＲＬ Ｖ６との間、またはＴＲＬ Ｖ６とカイロミクロンとの間のいずれも明確な区分が存在せず、その結果、ＴＲＬ Ｖ５〜６については約８０〜９０ｎｍ、ＴＲＬ Ｖ６およびカイロミクロンについては約１４０〜１７０ｎｍの範囲で重複する、各サブグループに対する粒径の分布が存在することに注意することが重要である。
【００３０】
用語「ＴＲＬ Ｖ６反応」は、典型的には、脂肪負荷または高脂肪食の投与に反応した、患者または試験哺乳動物におけるＴＲＬ Ｖ６トリグリセリド濃度および／または粒子数の増加を意味する。ある状況下では、「Ｖ ＴＲＬ」（本出願の目的のために、ＴＲＬ Ｖ６およびＴＲＬ Ｖ５粒子サブタイプの両方を含有する極めて大きいＴＲＬのサブグループを意味するために用いられる）を、ＴＲＬ Ｖ５濃度が脂肪負荷に対する実質的な反応を示さない状況下において、ＴＲＬ Ｖ６濃度単独を測定することに代わるものとして測定することは有利であり得、その結果「Ｖ ＴＲＬ」における反応は、特定の状況においてＴＲＬ Ｖ６反応それ自身を追跡し得ることが理解されるべきである。しかしながらこれは、グループ全体（例えば、全ＶＬＤＬとして）の全ＴＲＬまたはトリグリセリド濃度（または粒子数）を測定することには当てはまらない。種々のＴＲＬの測定は、最終的にはサンプル中のトリグリセリドまたは指定されたＴＲＬの濃度を意味する濃度、または、最終的にはサンプル中のＴＲＬ粒子の濃度を意味する粒子数のいずれかとして報告され得ることに注意されるべきである。その両方が、ＴＲＬ Ｖ６反応またはその減少に関して同じ結果を与える。
【００３１】
用語「ＶＬＤＬ反応」は、脂肪負荷または高脂肪食の投与に反応する、患者または試験動物におけるグループとしてのＴＲＬサブクラスＶ１〜６の粒径の増加を意味し、その増加は、クラスとしてのＶＬＤＬ粒径のサイズ分布上のＴＲＬ Ｖ６濃度（または粒子数）の増加によって引き起こされた効果（すなわち、ＴＲＬ亜母集団であるＶ１〜Ｖ６の平均サイズの変化）である。
【００３２】
ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、測定されたＴＲＬ Ｖ６濃度（あるいは粒子数またはＶＬＤＬ粒径）の統計的に有意な減少を意味する。減少は、ＴＲＬ Ｖ６反応の変化と定義され得、それは、試験化合物または減量用医薬品の非存在下での患者の母集団において測定された時期間（ｉｎｔｅｒ−ｏｃｃａｓｉｏｎ）変位の分布の下限の少なくとも８０パーセンタイル値の信頼区間を下回る。いかなるアッセイプロトコルについても、試験化合物または減量用医薬品に対する陽性反応を決定するために選択された実際の信頼区間は、アッセイプロトコルの所望の予測値に依存するだろう。例えば、ＴＲＬ Ｖ６反応のより少ない偽陽性減少を提供することを望むアッセイプロトコルは、より高いパーセンタイル信頼区間、例えば９０パーセンタイル値、または例えば９５パーセンタイル値を選択するだろう。より少ない偽陰性を望むアッセイプロトコルについては、より低い信頼区間が好適であり得、例えば、８０パーセンタイル値のような信頼区間が好適であり得る。
【００３３】
用語「減量用医薬品」は、肥満症または過体重の処置のための使用される、または使用されるべき医薬化合物（この用語は、ペプチド、抗体などを含む）、医薬処方物、または医薬組成物を意味し、ここで、求められる治療効果は、患者における減量の促進および／または体重の減少後の体重の維持である。本明細書中で使用される減量用医薬品が、１種の、または単一の組み合わせられた薬剤としてまたは薬剤の組み合わせとして摂取され得る１種以上の活性成分の組み合わせを含み得ることが理解される。同様に、用語「減量」は、実際の減量および／または、典型的には体重の減少後の、所望の範囲内での体重の維持を示す。
【００３４】
用語「生体サンプル」は、未加工の形態および／または調製物中の、全血、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、リンパサンプル、便サンプル、組織、および／または体液を含む。しかしながら、全血または血漿の生体サンプルは、本発明の実施形態に特に好適であり得る。生体サンプルは、いかなる標的被験体にも由来することができる。本発明による被験体は、いかなる哺乳動物被験体（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスター、モルモットその他）、ブタ、霊長類、サル、および／またはウサギ）であることもできる。動物は、天然に存在するか遺伝的に操作または組換えられているかにかかわらず、そして／あるいは、実験的に変更された動物の変化、生活様式および／または食餌が変更された動物の変化、または薬物処置された動物の変化にかかわらず、実験動物または非実験動物であることができる。
【００３５】
用語「自動的」は、実質的に全てまたは全てのそのように記載された操作が、ヒト操作者の能動的な手動入力を要求することなく実施されることができることを意味し、典型的には、その操作が、プログラムで指示および／または実行されることができることを意味する。
【００３６】
用語「電子的」は、システム、操作、またはデバイスが、任意の好適な電子媒体を使用して通信することができ、そして典型的には、遠く離れ得る制御システムと、コンピュータネットワークを使用する１つ以上のローカルＮＭＲ分析器との間の通信をプログラムにより制御することを利用する。
【００３７】
リポタンパク質は、血漿、血清、全血、およびリンパにおいて見出される様々な粒子を含み、種々のタイプおよび量のトリグリセリド、コレステロール、リン脂質、スフィンゴ脂質、およびタンパク質を含む。これらの種々の粒子は、血中の他の疎水性脂質分子の可溶化を可能にし、かつ、脂肪分解、脂肪生成、および腸と、肝臓と、筋肉組織と、脂肪組織との間の脂質輸送に関する様々な機能を果たす。血液および／または血漿において、リポタンパク質は、一般的に、密度または電気泳動移動度のような物理的性質に基づいて多くの方法で分類されている。核磁気共鳴による決定された粒径に基づく分類は、少なくとも１６種の異なるトリグリセリドリッチリポタンパク質粒子のサブタイプ（高密度リポタンパク質の５種のサブタイプ、低密度リポタンパク質の４種のサブタイプ、および極めて低密度リポタンパク質の６種のサブタイプを含む）、指定されたＴＲＬ Ｖ１〜Ｖ６、およびカイロミクロンを区別する。これらのリポタンパク質サブタイプの中から、かつ他のサブタイプとは対照的に、本発明は最も大きいＴＲＬ粒子サブタイプであるＴＲＬ Ｖ６が、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝のバイオマーカーとして使用されることができることを決定し、ここで、ＴＲＬ Ｖ６の濃度が、脂肪含有食の消費後に予測的に上昇され、次いで、試験被験体が絶食状態に近づくにつれて、食後のある時点で基礎レベルに戻る。
【００３８】
ＴＲＬ粒子のＮＭＲ特徴を推定直径と関連付けるために、以下の表１は、ＴＲＬ Ｖ６範囲ならびにＴＲＬ Ｖ５およびカイロミクロンについての化学シフトを規定する。
【００３９】
表１：ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）分析によって測定されたトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスの特徴
【表１】
【００４０】
表１は、Ｃａ ＥＤＴＡの内部基準シグナル（２．５１９ｐｐｍ）に対して測定された、単離されたトリグリセリドリッチリポタンパク質（ＴＲＬ）サブクラス（亜画分）のプロトンＮＭＲ化学シフトを示す。図１は、例示的なＴＲＬサブクラスのＮＭＲ特性シグナルを示す。ＮＭＲ測定は、４７℃で、４００ＭＨｚ分光計で行った。カイロミクロンとして特定されたＴＲＬサブクラスを、脂肪含有食を摂取した後のヒト被験体から得られた食後の血漿検体から単離した。ＴＲＬ Ｖ６またはＴＲＬ Ｖ５として特定されたＴＲＬサブクラスを、高トリグリセリド血症のヒト被験体から得られた空腹時血漿検体から得た。ＴＲＬサブクラスを、連続的超遠心分離法（カイロミクロンについては密度＜０．９４ｇ／ｍＬ、ＴＲＬ Ｖ５〜Ｖ６については＜１．００６ｇ／ｍＬ）によって最初は単離し、１２０ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＣａＣｌ２、５０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、および０．２ｇ／Ｌ ＮａＮ３を含有する緩衝液（ｐＨ７．４）において１％または２％アガロースビーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用する、ゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。リポタンパク質直径の推定を、単離されたＴＲＬサブクラスの電子顕微鏡法測定から得た。
【００４１】
したがって、ＴＲＬ Ｖ６は上記で直径によって規定されていたが、表１中のＮＭＲ化学シフトは、規定された直径範囲と等価なものを表す。したがって、ＮＭＲ評価を使用すると、ＴＲＬ Ｖ６はまた、約０．８３７４〜約０．８４０２の化学シフトを有するとも規定されることができ、隣接するＴＲＬ亜画分（例えば、ＴＲＬ Ｖ５およびカイロミクロン）は表１にも記される化学シフトを有する。それにより、「ＴＲＬ Ｖ６」の定義はまた、記載されるように測定された場合、たとえ論争中の実際の試験が非ＮＭＲ評価法を利用するか、あるいは密度に関するパラメータを規定するかまたは直径よりも別の様式でパラメータを規定するにしても、上記のＮＭＲ化学シフト（＋／−合理的な測定範囲）を有するいかなるＴＲＬ亜画分も示す。
【００４２】
例えば、極めて大きなＴＲＬ粒子を測定する１つの公知の技術は、密度ベースの分離を利用する浮遊超遠心分離法である。Ｒｅｄｇｒａｖｅらは、粒子の推定直径に対する粒子の浮遊率（Ｓｆ、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ単位）によって粒子を特徴づけている：Ｓｆ＞４００の場合、＞７５ｎｍの粒子を含み；Ｓｆ１７５〜４００の場合、５０〜７５ｎｍの粒子を含み；Ｓｆ１００〜１７５の場合、３７〜５０ｎｍの粒子を含み；そしてＳｆ２０〜１００の場合、２０〜３７ｎｍの粒子を含む。Ｒｅｄｇｒａｖｅら、Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｉｎ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ａｎｄ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｉｚｅ ａｆｔｅｒ ａ ｆａｔｔｙ ｍｅａｌ ｉｎ ｎｏｒｍｏ−ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉｃ ｍａｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２０，ｐｐ．２１７−２２９（１９７９）を参照のこと。また、Ｋａｒｐｅら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｖｅｒｙ−Ｌｏｗ−Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｈｙｌｏｍｉｃｒｏｎ Ｒｅｍｎａｎｔｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｒｍｏｔｒｙｇｌｉｃｙｅｒｉｄｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉｃ Ｍｅｎ Ｗｉｔｈ ａｎｄ Ｗｉｔｈｏｕｔ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｖｏｌ．４８，Ｎｏ．３（Ｍａｒｃｈ），１９９９，ｐｐ．３０１−３０７も参照のこと。したがって、たとえ試験方法それ自身によって大きさに基づいて特徴付けられなくても、もし密度によって分離された粒子がおよそ上記の化学シフトを有しているなら、そのＴＲＬ粒子はＴＲＬ Ｖ６粒子である。
【００４３】
さらに、本発明は、食後のトリグリセリドレベルがＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇と相関することを決定した。これらのトリグリセリドレベルは、加水分解される内腔内部のトリグリセリド、腸から吸収される脂肪酸に起因し、次いで、トリグリセリドとして再エステル化され、そしてカイロミクロンとしてリンパ循環または門脈循環中に輸送されるか、あるいは、肝臓によって分泌されたＶＬＤＬに起因することができる。例えば、正のエネルギーバランスの状態において、過剰な食物摂取の後、トリグリセリドは、筋肉のような脂肪酸酸化によりエネルギーを使用する他の組織とは対照的に、または他の組織に加えて、ＶＬＤＬの構成要素として脂肪組織に貯蔵のために輸送される。したがって、食後のトリグリセリドレベルの減少は、いずれの場合も脂肪貯蔵の減少と相関する、脂肪酸酸化の増加および／または脂肪吸収の減少を示し得る。いくつかの実施形態において、本発明は、具体的には、ＴＲＬ Ｖ６濃度の減少がこの脂肪貯蔵の減少と相関し、その結果、試験中の化合物または減量用医薬品での処置によるＴＲＬ Ｖ６濃度の変化が、トリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝に対する効果についてのバイオマーカーとして、特に所定の個々の患者が所定の化合物または減量用医薬品に対して反応する患者であるか、または反応しない患者であるかどうかを予測すること含む、脂肪貯蔵の減少についてのマーカーとして使用されることができることを実証する。
【００４４】
ＴＲＬ Ｖ６濃度（または粒子数）の上昇が、いくつかの場合において、平均ＶＬＤＬ粒径の増大（ＶＬＤＬリポタンパク質粒子、ＴＲＬ Ｖ１〜Ｖ６の群の全てのリポタンパク質粒子についての中間または平均の大きさ、または大きなＴＲＬ＝ＴＲＬ Ｖ５＋ＴＲＬ Ｖ６のみでも）によっても追跡され得ることが理解されるだろう。なぜなら、このグループにおいて脂肪負荷に対して変化する濃度を示す主成分が、上記のようにＴＲＬ Ｖ６成分であるからである。そのようなシグナルは、他のサブタイプからのシグナルによって弱められるが、ＶＬＤＬ反応（平均サイズの変化）を識別すること、それにより、ＶＬＤＬ反応の減少をＴＲＬ Ｖ６反応を直接的に測定することに代わるものとして識別することは可能であり得る。グループとしてのＶＬＤＬ Ｖ１〜Ｖ５の濃度全体は、はっきりとは変化せず、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応は、クラスとして（平均サイズで区別される）ＶＬＤＬ濃度を測定することからは一般的には検出可能ではないことに注意されたい。
【００４５】
表２は、ＮＭＲによって測定された大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスについての、偽薬と比較した、脂肪負荷からの曲線下面積（ＡＵＣ）のシブトラミンによって誘導された減少の統計学的分析を示す。このデータは、シブトラミンがＴＲＬ Ｖ６反応を減少させるが、ＴＲＬ Ｖ５またはカイロミクロン反応を減少させない（個々のサブグループとして測定された場合に、ＴＲＬ Ｖ６のみが統計学的に有意な変化を有することに注意されたい）ことを示し、これによってＴＲＬ Ｖ６がバイオマーカーであることを示している。そのデータはまた、ある状況下において、ＴＲＬ Ｖ６反応の減少は他のサブタイプからのシグナルを含む測定の場合でも検出されることができるが、サブタイプの全ての組み合わせでの測定の場合は検出できないことを実証する。この特定の研究において、ＴＲＬ Ｖ６＋カイロミクロンは有意な変化を示したが、ＴＲＬ Ｖ６＋ＴＲＬ Ｖ５およびＴＲＬ Ｖ６＋ＴＲＬ Ｖ５＋カイロミクロンは有意な変化を生じなかった。ＴＲＬ Ｖ６反応が、サブタイプの組み合わせの反応と一致し得る場合、ＴＲＬ Ｖ６シグナルの変化に起因するシグナルの変化の大きさが、基線シグナルと比べて十分に大きいので、有意に異なる（すなわち、基線シグナルにおけるＴＲＬ Ｖ６からのシグナルが、組み合わせられたシグナルを圧倒し、その結果ＴＲＬ Ｖ６の変化が確実に検出される）ことに注意されたい。
【００４６】
表２：ＮＭＲによって測定され、かつＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）ＩＩＩ リポタンパク質試験（ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）によって分析された、大きなトリグリセリドリッチリポタンパク質サブクラスについての、偽薬と比較した、脂肪負荷からのＡＵＣ（５〜１１時間の時点）のシブトラミンによって誘導された減少の分析。
【表２】
Ｐ値＜０．０５は、統計学的に有意；Ｐ値＞０．０５は、統計学的に有意ではない。
【００４７】
ラットにおいて、ＴＲＬ Ｖ６濃度の有意な減少は、典型的な高い（容易に測定可能な）基礎レベルのために容易に測定される。したがって、試験中の化合物または減量用医薬品についての研究は、ラットにおいて容易に行われることができる。しかしながら、ヒトにおいては、基礎レベルは比較的低く、かつ、血漿サンプルに対するＮＭＲ分光法のような現在の分析方法による検出の限界に近いかまたはそれを下回りがちである。
【００４８】
高脂肪の食餌を与えた、食餌により誘導した肥満ラットを使用するラット研究において、ＴＲＬ Ｖ６濃度は構成的に上昇され、医薬品の投与によって誘導されたＴＲＬ Ｖ６濃度の減少は、医薬品がトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節し、その結果、脂肪組織中の脂質の貯蔵が減少される能力の指標である。ヒトにおいて、ＴＲＬ Ｖ６の濃度は、通常確実な定量化のためには低すぎる。しかしながら、本発明の実施形態は、ＴＲＬ Ｖ６の確実に測定可能な濃度が、短期間の脂肪負荷を、特に個々の患者が絶食状態を達成した後に施すことによって誘導されることができることを見出した。さらに、これらの上昇した濃度は、ヒト患者が再び絶食状態に近づくにつれて基礎レベルに戻る。加えて、特定の減量用医薬品の投与は、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の大きさを減少させることが示される。
【００４９】
本発明の特定の実施形態は、各々直接的または間接的にトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝経路を調節する、１種以上の治療標的を標的にする試験中の減量用医薬品を試験するのに好適である。その調節が本発明の方法を使用してアッセイされることができる治療標的の例は、５−ＨＴ２Ｃ受容体（アゴニストは、肥満症／過体重を処置するために開発されている）、ＣＢ−１受容体（アンタゴニスト）、ＳＮＤＲＩ（阻害剤）、ＰＤＥ−１０（阻害剤）、およびオレキシン−１受容体（アンタゴニスト）である。５−ＨＴ２Ｃ受容体、ＣＢ−１受容体、および／またはＰＤＥ−１０の阻害剤を標的にする医薬品は、本発明のアッセイ方法に特に好適である。他の治療標的は、本発明の方法を使用して標的の調節因子を試験することおよびＴＲＬ Ｖ６反応の減少が観察されたかどうかを決定することによる過度の実験なしで容易に見出され得る。
【００５０】
試験治療薬についての調査のための研究および所定の治療薬に対する個体の反応性／非反応性を試験するための研究を含む、ヒトにおける研究のために、ヒト患者は、典型的には、ウォーキング後、かつ何かを摂取する前に、例えば約５〜１０時間、好ましくは約６〜９時間、例えば約８時間の絶食の後に試験される。患者は、試験期間の前または間のいつでも水を飲むことができる。試験前の期間は、食事内容および各試験セッションの前のタイミングについての整合性を容易にするためにもうけられることができる。血液サンプルが、次いで、患者が絶食状態にある場合の、ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数の基礎レベル測定を提供するために採取される。
【００５１】
患者は、次いで、比較的短期間、例えば、４０分間以内、好ましくは２０分間以内にわたって、好適な脂肪負荷を施されることができる。行われた研究または所望の好ましい所定の試験条件に依存して、１種以上の血液サンプルが、次いで、脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇を決定するために採取される。典型的には、１回の採血は、例えば、個々の患者の、治療における薬剤に対する反応の可能性をあらかじめ決めるための、確立された減量用医薬品を使用する所定の試験に十分であろう。他の用途のためには、完全なＴＲＬ Ｖ６反応曲線を得るために、複数回の採血を行うことが好まれ得る。典型的には脂肪負荷を与えてから約２時間後から始まる、脂肪負荷に対するヒトＴＲＬ Ｖ６反応（すなわち、ＴＲＬ Ｖ６濃度の上昇）は、脂肪負荷を与えてから約４時間〜約６時間後にピークになり、脂肪負荷を与えてから約９時間〜約１２時間後に基礎レベルに戻る。極めて高い脂肪濃度が投与される場合、遅い開始／基礎レベルまでの遅い戻りへの時間的経過における推移が存在し得ることに注意されたい。そのような推移は、典型的には約４〜６時間での開始、約１０時間でのピーク到達、および約１２時間〜１５時間での基礎レベルへの戻りを予測する。脂肪負荷に対する典型的なヒトＴＲＬ Ｖ６反応は、絶食状態での約０ｍｇ／ｄＬ〜約３５ｍｇ／ｄＬの基礎レベルから、約８０ｍｇ／ｄＬ〜約２５０ｍｇ／ｄＬへの血漿濃度の上昇である。
【００５２】
ヒト患者は、次いで、医薬品の投与と併せて再試験される。医薬品と併せた試験は、その患者の通常のＴＲＬ Ｖ６反応を決定する試験の前か後のいずれかに行われ得、ただし、それが好ましくないとしても、その医薬品を再試験する前に患者の系をクリアすることが理解されるべきである。試験医薬品または減量用医薬品に対する有益な反応の指標であるヒトＴＲＬ Ｖ６反応の典型的な減少は、ＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少である。約２０％〜約８０％減少されたＴＲＬ Ｖ６反応を見ることは一般的である。好ましい反応の指標である典型的な反応は、約５０％の減少またはそれ以上であり得る。
【００５３】
１つの最適化された実施形態において、例えば、所定の患者が減量用医薬品での提案された治療に対して好ましく反応する可能性をあらかじめ決めること（すなわち、その患者が反応する患者であるか反応しない患者であるかを予測すること）における通常の使用において、１回分の提案された減量用医薬品と併せた脂肪負荷の単回投与は好適であり得、その結果、ＴＲＬ Ｖ６反応の減少は、所定の脂肪負荷に対するあらかじめ決められた患者母集団の平均ＴＲＬ Ｖ６反応から決定され得る。そのような最適化された実施形態において、脂肪負荷および減量用医薬品の投与の前の１回の採血、および脂肪負荷投与後のあらかじめ決められた時点での１回の採血は、減量用医薬品が、脂肪負荷に対する患者のＴＲＬ Ｖ６反応を減少させたかどうかを決定するのに十分であり、したがって、その薬剤が個々の患者のトリグリセリドおよび／またはリポタンパク質代謝を調節するかどうかをあらかじめ決定することができる。関連するＴＲＬ Ｖ６反応、または最初の採血をせずに、減量用医薬品の投与と併せた脂肪負荷投与の後のあらかじめ決められた時間範囲内でのサンプルの採取のみでＴＲＬ Ｖ６反応の減少を決定することもまた可能である。与えられた脂肪負荷が、食物ベースの脂肪負荷よりもむしろ化学的および／または医薬的に誘導または刺激された脂肪負荷であり得ることもまた企図される。
【００５４】
使用される特定の臨床アッセイプロトコルが、治療のために検討されている減量用医薬品に依存するであろうこと、およびそのようなプロトコルの決定が当業者の範囲内であることは理解されるだろう。例えば、薬剤および第二脂肪負荷の投与の具体的なタイミングは、その薬剤の薬物動態に依存して変わるだろう。考慮すべき１つの要因は、その薬剤の血中レベルが脂肪負荷の投与の前に有効なレベルであることである。したがって、医薬品と「併せて」とは、薬剤および脂肪負荷の投与が、その薬剤が、それが投与されたときに脂肪負荷の分配／代謝に作用するように患者において有効なレベルであることを可能にするように調整されることを意味すると理解される。これは、薬剤の仕様に依存して、その薬剤が脂肪負荷と同時、あるいはそのすぐ後、脂肪負荷投与後の約３０分間までに投与されること、またはその薬剤がその薬剤の有効な血漿レベルを達成するのに必要な期間だけ脂肪負荷の前に、例えば、脂肪負荷の投与の約０時間〜約３時間前、例えば、脂肪負荷の投与の１５分〜３０分前に投与されることを意味することができる。医薬品がプロドラッグとして投与される場合、または活性代謝物がその医薬品の薬物動態において重要である場合、より長い時間が、活性部分の適切な血漿濃度を蓄積させるのに必要であり得る。そのような投薬養生法の決定は習慣的であり、十分に当業者の範囲内である。
【００５５】
同様に、脂肪負荷の投与後の採血のタイミングおよび回数は、脂肪負荷後の採血の後まで薬剤の血中レベルが有効レベルのままであることの重要な要因である薬剤のクリアランス率に依存して変わり得、投与された脂肪負荷に基づくピークＴＲＬ Ｖ６反応に対応して最適にタイミングを合わせられるべきである。
【００５６】
好適な脂肪負荷は、約３０ｇより多い脂肪、好ましくは約５０ｇより多いかそれに等しい脂肪、好ましくは約６０ｇ〜７０ｇの脂肪を含む。約８０ｇより多いかそれに等しい脂肪を含む脂肪負荷は、ＴＲＬ Ｖ６反応の開始により長い時間を誘導し始め得る。
【００５７】
脂肪負荷の正確な組成は重要ではなく、多くの好適な組成物が当業者の栄養学者によって容易に配合され得ることは理解されるだろう。好適な脂肪負荷配合物は、所望の研究に適するようにおよび／または患者母集団の好みにしたがって合わせられ得る。重要な要因は、十分な脂肪含有量および過剰な全体のカロリー含有量が、短い期間内に提供されて、試験医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６濃度の測定可能な上昇を生じさせることである。
【００５８】
脂肪負荷は、多くの好適な形態、例えば、調理された食事、包装された食事、スナックバー（ｓｎａｃｋ ｂａｒ）のような１回分の食料品、包装された飲料または粉末の飲料ミックスのような１回分の液体組成物、あるいは経口の錠剤またはカプセル剤のいずれかをとり得る。脂肪負荷として機能し得る好適な組成物の例は以下の通りである。
【００５９】
脂肪負荷の例１：
【表３】
【００６０】
脂肪負荷の例２：
【表４】
【００６１】
脂肪負荷の例３：飲料：所望される量の脂肪を提供するための、全乳またはクリームあるいはそれらの混合物の容量。例えば、約１５０ｍＬ〜約１８０ｍＬのホイッピングクリーム。美味しさを改善するための香味剤が加えられ得る。
【００６２】
ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数の測定
ＴＲＬ Ｖ６反応は、任意の好適な様式で測定されることができる。ＴＲＬ Ｖ６濃度または粒子数を選択的に測定するための１つの現在知られている方法は、血漿サンプルをＮＭＲ分光法によって、その後デコンボリューション分析によって、全ＮＭＲシグナルに対する種々のリポタンパク質サブタイプの相対的な寄与を分離する。１つのそのようなデコンボリューション方法は、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩ、および／またはＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）ＩＩＩの、ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａによって提供されるサブクラス粒子分析である。同様に、平均ＶＬＤＬ粒径も、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）サブクラス粒子分析で同じように測定され得る。この分析技術の説明については、Ｏｔｖｏｓに対する米国特許第５３４３３８９号、米国特許第６６１７１６７号、米国特許第４９３３８４４号、および米国特許第７２４３０３０号を参照のこと。また、ＮＭＲの臨床分析機器の説明については、米国特許出願第２００５−０２２２５０４号も参照のこと。また、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１：「Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｂｃｌａｓｓ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｂｙ ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ」，Ｊ．Ｄ．Ｏｔｖｏｓ，ＡＡＣＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ，２０００，第２版，ｐｐ ６０９−６２３、およびＪｅｙａｒａｊａｈ ＥＪ，Ｃｒｏｍｗｅｌｌ ＷＣ，Ｏｔｖｏｓ ＪＤ．Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐａｒｔｉｃｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｍｅｄ．２００６；２６：８４７−７０も参照のこと。これらの参考文献の内容は、その全文が本明細書中に引用されるように、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００６３】
典型的な例として、全血サンプルを、２ｍＬ ＥＤＴＡ採血管中に採取し、よく混合するために数回転倒させ、氷上に置く。サンプルを、次いでおよそ３０００ｒｐｍで１０〜１５分間４℃で遠心分離する。遠心分離が完了すると、管を氷上に置き、血漿を取り出す。血漿を、ポリプロピレン管中に入れ、分析まで４℃で保つ。サンプルは、採取の後約４日までいつでも分析され得る。サンプルを、ＴＲＬ Ｖ６反応について、例えば、ＮＭＲ血漿リポタンパク質分析によって、例えば、ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｒａｌｅｉｇｈ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）によって提供されるＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩ、またはＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）−ＩＩＩリポタンパク質試験によって分析する。
【００６４】
ＮＭＲスペクトルデータを、Ｊｅｙａｒａｊａｈら（上述）に記載されるように分析する。リポタンパク質サブクラス濃度を、脂質質量濃度単位（ｍｇ／ｄＬトリグリセリド単位のＴＲＬサブクラス）で、あるいは、ｎｍｏｌ／Ｌの粒子濃度単位（１リットルあたりの粒子のナノモル）で報告する。元の情報（各サブクラスのＮＭＲシグナル振幅）を、正常な脂質組成の単離したカイロミクロン、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、およびＨＤＬサブクラス基準の化学的脂質分析およびＮＭＲ分析から得られた変換計数のセットを使用する、分析ソフトウェアによってこれらの質量濃度単位または粒子濃度単位に変換する。
【００６５】
図２は、例示的なＮＭＲ分析システム７を示し、それは、ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００を使用してＴＲＬ Ｖ６分析および／またはＴＲＬ Ｖ６測定を実行するために使用されることができる。ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００は、シグナルプロセッサおよび／またはコントローラ１１中にシステムを搭載することができ、またはサーバー、クライアント、および／または他のコンピュータ上のような異なるローカルプロセッサまたは遠隔プロセッサに部分的または全体的に存在し得る。図２を参照すると、システム７は、生体サンプルのＮＭＲ測定を行うためのＮＭＲ分光計１０を含む。いくつかの実施形態において、分光計１０は、ＮＭＲ測定がプロトンシグナルについて４００ＭＨｚで行われるように構成され；他の実施形態において、測定は、３６０ＭＨｚまたは別の所望の周波数で実行され得る。すなわち、所望の操作磁場強度に対応する他の周波数もまた利用され得る。典型的には、プロトンフロープローブが、サンプル温度を４７＋／−０．２℃に維持する温度コントローラとして設置される。分光計１０の磁場均一性は、９９．８％ Ｄ２Ｏのサンプル上で、ＨＤＯ ＭＮＲシグナルのスペクトル線幅が０．６Ｈｚ未満になるまで粗調製する（ｓｈｉｍｍｉｎｇ）ことによって最適化されることができる。Ｄ２Ｏ測定のために使用される９０°ＲＥ励起パルス幅は、典型的には、約６〜７マイクロ秒である。
【００６６】
図２を再度参照すると、分光計１０は、デジタルシグナルプロセッサおよび／またはコントローラ１１、またはシグナル処理ユニットによって制御される。プロセッサ／コントローラ１１は、迅速なフーリエ変換を実施することが可能であるべきであり、この目的のために、配線で接続されたサインテーブル、ならびに配線で接続された乗算回路および除算回路を含み得る。それはまた、外部または遠隔コンピュータ１３へのデータリンク１２、および電子記憶ユニット１５に接続する直接メモリアクセスチャンネル１４も含み得る。
【００６７】
プロセッサ／コントローラ１１はまた、アナログからデジタルへの変換器、デジタルからアナログへの変換器、およびパルスコントロールおよびインターフェース回路１６を介して、分光計の操作要素に接続するスローデバイスＩ／Ｏポートも含み得る。これらの要素は、デジタルコンピュータ１１によって指示されるＲＦ励起パルスの継続時間、周波数、および大きさを生成するＲＦ送信器１７、およびパルスを増幅し、かつそれをサンプルセル２０を囲むＲＦ送信コイル１９に連結するＲＦ電力増幅器１８を含む。超電動磁石２１によって生成された９．４ Ｔｅｓｌａ偏光磁場の存在下で励起されたサンプルによって生成されたＮＭＲシグナルは、コイル２２によって受信され、ＲＦ受信器２３に適用される。増幅およびフィルター処理されたＮＭＲシグナルは、２４で復調され、生じた直交シグナルはインターフェース回路１６に適用され、そこではそれらはデジタル化されデジタルコンピュータ１１を介してディスク記憶装置１５中のファイルに入力される。システム７は、シグナルプロセッサ／コントローラ１１および／または全体的にまたは部分的に、オンサイトまたは遠隔であり得る異なるコンピュータ、サーバー、またはクライアント上の別のプロセッサに配置されたデコンボリューションモジュール含むことができる。好適な臨床ＮＭＲ分析機器のさらなる説明についてはＵＳ２００５／０２２２５０４を参照のこと（その内容は、その全文が本明細書中に引用されるように、参照によって本明細書中に組み込まれる。）。
【００６８】
ＮＭＲデータが測定セル２０においてサンプルから獲得された後、シグナル処理は、化学シフトスペクトルのデジタル表示であるデータファイルを生成し、それは、電子的アーカイバルメディア記録記憶装置２５中に記憶され得る。パーソナルコンピュータ、ラップトップコンピュータ、デスクトップコンピュータ、または他のコンピュータであり得るコンピュータ１３は、化学シフトスペクトルを処理し、プリンター２６に出力されるか、または電子的に記憶され、そして所望の電子メールアドレスまたはＵＲＬに送られる患者報告書を提供することができる。当業者は、表示装置のような他の出力デバイスもまた、結果を提供するために利用され得ることを認識するだろう。
【００６９】
当業者には、コンピュータ１３およびその記憶装置２５によって実施される機能はまた、分光計のデジタルシグナルプロセッサ／コントローラ１１によって実施される機能中に、またはＮＭＲ分光計１０および／またはプロセッサ１１と通信するさらなる回路に組み込まれ得ることはあきらかだろう。当業者に周知であるように、他のインターフェースおよび出力デバイスもまた利用され得る。
【００７０】
図３および図４は、ＴＲＬ Ｖ６評価モジュール１００ａ、１００ｂの例を示し、それらは、システム７と通信し、システム７を搭載し、そして／またはシステム７またはＴＲＬ Ｖ６データを提供できる他の測定システムによって測定されたＴＲＬ Ｖ６データを分析することができる。示されるように、図３および図４は、本発明の実施形態に従うシステム、方法、および／またはコンピュータプログラム製品として包含されるかまたは提供されることができる、データ処理システムの例示的実施形態を示す。プロセッサ４１０（任意選択的に、図２のプロセッサ１１および／またはコンピュータ１３であるか、またはそれらと通信することができる）は、アドレス／データバス４４８を介してメモリ４１４と通信する。プロセッサ４１０は、いかなる市販マイクロプロセッサまたはカスタムマイクロプロセッサでもあることができる。メモリ４１４は、データ処理システム４０５の機能を実行するために使用されるソフトウェアおよびデータを含有するメモリデバイスの階層の代表である。メモリ４１４は、限定されないが、以下のタイプのデバイスを含むことができる：キャッシュメモリ、ＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリ、ＳＲＡＭ、およびＤＲＡＭ。
【００７１】
図３および図４に示されるように、メモリ４１４は、データ処理システム４０５において使用されるいくつかのカテゴリーのソフトウェアおよびデータ含み得る：操作システム４５２；アプリケーションプログラム４５４；入力／出力（Ｉ／Ｏ）デバイスドライバ４５８；ＴＲＬ Ｖ６減量反応者予測モジュール１００ａ（図３）および／またはＴＲＬ Ｖ６ベース研究用減量薬物評価モジュール１００ｂ（図４）；およびデータ４５６。
【００７２】
データ４５６は、（図２に示されるシステム７のような）データまたはシグナル獲得システム４２０から得られ得る、ＴＲＬ ＮＭＲ サブクラスシグナル（構成および／または複合スペクトル線形）データ４６２を含み得る。各患者または動物モデルの生体サンプルについて、データは、ＴＲＬ Ｖ６の固有データ値、またはＴＲＬ Ｖ６と他の亜画分（例えば、カイロミクロンおよび／またはＴＲＬ Ｖ５）のデータを含むことができる。当業者によって理解されるように、操作システム４５２は、例えば、内蔵されたデータ処理システムのための、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍａｃｈｉｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ）製のＯＳ／２、ＡＩＸ、またはＯＳ／３９０、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）製のＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＣＥ、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＮＴ、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ９５、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ９８、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ２０００、またはＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ＸＰ、ＰａｌｍＳｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）製のＰａｌｍ ＯＳ、Ａｐｐｌｅ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ，Ｉｎｃ製のＭａｃ ＯＳ、ＵＮＩＸ（登録商標）、ＦｒｅｅＢＳＤ、またはＬｉｎｕｘ、私有の操作システムまたは専用の操作システムのようなデータ処理システムでの使用に好適ないかなる操作システムであっても良い。
【００７３】
Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８は、典型的には、アプリケーションプログラム４５４によって操作システム４５２を介してアクセスされるソフトウェアルーチンを含んで、Ｉ／Ｏデータポート、データ記憶装置４５６、および特定のメモリ４１４コンポーネントおよび／またはデータ獲得システム４２０のようなデバイスと通信する。アプリケーションプログラム４５４は、データ処理システム４０５の種々の特徴を実施するプログラムの実例であり、好ましくは、本発明の実施形態による操作を支持する少なくとも１つのアプリケーションを含む。最終的には、データ４５４は、アプリケーションプログラム４５４、操作システム４５２、Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８、およびメモリ４１４中に存在し得る他のソフトウェアプログラムによって使用される静的および動的データを表す。
【００７４】
本発明の実施形態は、例えば、図３および図４のアプリケーションプログラムであるモジュール１００ａ、１００ｂに関して例示的であるが、当業者によって理解されるように、本発明の実施形態の教示から利益を受ける限りは、他の構成もまた利用可能であり得る。例えば、モジュール１００ａ、１００ｂはまた、操作システム４５２、Ｉ／Ｏデバイスドライバ４５８、またはデータ処理システム４０５の他のそのような論理部中に内蔵され得る。したがって、本発明の実施形態は、図３／４の構成に限定されるとみなされるべきではなく、それらは、本明細書中に記載される操作を実行することができるいかなる構成も包含することが意図される。特定の実施形態において、モジュール１００ａおよび／または１００ｂは、遠隔コントロールシステム（ローカルまたはオフサイト）と通信するためのコンピュータプログラムコードを含み得る。
【００７５】
本発明の方法、システム、およびコンピュータプログラム製品が、ＴＲＬ Ｖ６反応またはＶＬＤＬ反応を測定する手段によって限定されないことは理解されるだろう。そのようなサブタイプを区別する測定は将来発見されるだろうし、また、従来の方法がそのような測定を可能にするために変更され得るからである。例えば、もしＴＲＬ Ｖ６特異的抗原が公知になり、かつそのような抗体に対して特異的抗体が開発されたときは、ＴＲＬ Ｖ６反応を免疫アッセイ技術によって測定することが可能になり得る。また、ＴＲＬ Ｖ６特異的タンパク質または他のＴＲＬ Ｖ６特異的成分を識別および定量化することも可能になり得、それによってＴＲＬ Ｖ６反応を測定するための新しい方法が可能になり得るか、あるいは超遠心分離および浮遊評価、または他の従来の方法が、好適なＴＲＬ Ｖ６情報を提供するために変更され得る。そのような方法は、本明細書中に記載されるＮＭＲ技術を使用する方法と等価であると当業者によって理解されるだろう。
【００７６】
図５は、例示的な患者報告書２００を示す。示されるように、報告書２００は、患者の氏名２０１および個人データ２０５（例えば、検体採取日、体重、脂肪負荷投与および薬物投与の時間）を含むことができる。報告書２００は、患者からの第二生体サンプルの採取と併せて投与された減量用医薬品（ＷＬＰＡ）の名前も含むことができる（ブロック２１０）。報告書２００は、任意選択的に、２つの異なるＴＲＬ Ｖ６測定または評価を提供することができ、患者の正常なＴＲＬ Ｖ６反応の指標であるサンプルの測定または評価と、ＷＬＰＡと併せて行われる測定または評価である（ブロック２１５、２２５）。報告書２００は、ＷＬＰＡと関連する陽性ＴＲＬ Ｖ６反応が存在するかどうかを示すことができる（ブロック２３０）。報告書２００は、その患者がそのＷＬＰＡを進めるか、またはそのＷＬＰＡがこの患者にとって有益でないようであるという提案を含むことができる（ブロック２５０）。提案は、ＴＲＬ Ｖ６の減少率（あれば）を示すことができ（示されていない）、少なくとも８０％である、減少に反応するであろうＴＲＬ Ｖ６についての関連する統計値を提供し得る。これは、患者が境界例の反応者である（例えば、６０％〜７５％の減少）場合に、臨床医がＷＬＰＡを進めることを可能にし得る。
【００７７】
本発明の実施形態は、以下の非限定的な実施例においてより詳細に説明される。
【実施例】
【００７８】
実施例１：交差治療標的ラット研究
試験中の減量用医薬品がラットにおけるＴＲＬ Ｖ６濃度を減少させる能力を、既知の強力かつ選択的５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、既知の強力かつ選択的ＣＢ−１受容体アンタゴニスト／逆アゴニスト、および強力なＳＮＤＲＩ（シブトラミン）を含む、異なる機構の作用を標的にする３つの化合物で示す。３つの化合物の各々は、ラットにおいて減量を誘導することが知られており、そのため、試験中の減量医薬品の減量を誘導する能力と相関するＴＲＬ Ｖ６濃度の減少のバイオマーカーである。逆に、ラットまたは過体重かつ肥満のヒト被験体における減量の誘導に効果が無いことが知られている（Ｍａｌｃｏｌｍ Ｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．１９８５；９（５）：３４７−５３．）アヘン剤アンタゴニスト（ナルトレキソン）は、ラットにおいてＴＲＬ Ｖ６濃度を減少しないことが示され、やはり試験中の減量医薬品の減量を誘導する能力に対するＴＲＬ Ｖ６濃度の減少のバイオマーカーに相関する。
【００７９】
高脂肪食で飼育されたＤＩＯ−ＬＥラットに、賦形剤投与または試験化合物の急性投与のいずれかを施す。投与後の特定の時点に、動物を犠牲にし、ＥＤＴＡを含有する血液サンプル管に血液を採取し、本質的に上記に記載されるように処理する。サンプルを、全ての粒子サブタイプの報告（特に、ＴＲＬ Ｖ６の濃度または粒子数）と共に、ＮＭＲ ＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ（登録商標）リポタンパク質サブ粒子試験によって分析する。
【００８０】
１０ｍｇ／ｋｇ用量の５−ＨＴ２Ｃアゴニストは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度を、投薬の２時間後に約９０％、投薬の約８時間後に約８０％減少させる。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度およびＶＬＤＬ平均粒径は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８１】
０．３ｍｇ／ｋｇ用量のＣＢ−１アンタゴニストは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度およびＶＬＤＬ粒径を、投薬の約１時間後および投薬の約３時間後に約７５％減少させる。反応は、投薬の５時間後に、約５０％まで減少し続ける。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８２】
３ｍｇ／ｋｇ用量のＳＮＤＲＩは、ＴＲＬ Ｖ６の循環濃度およびＶＬＤＬ粒径を、投薬の約２時間後および投薬の約５時間後に約７８％減少させる。ＴＲＬ Ｖ６血漿濃度は、投薬の約１８時間後までに基線濃度に戻る。
【００８３】
それに対し、１０ｍｇ／ｋｇの経口投与された用量のナルトレキソンは、循環ＴＲＬ Ｖ６レベルに対して最小の効果を有した。ナルトレキソンは、ＴＲＬ Ｖ６レベルを、投薬の２時間後に３０％だけ減少させた。ＴＲＬ Ｖ６レベルは、投薬の５時間には基線レベルに戻り、投薬の１８時間後に変化していなかった。
【００８４】
【表５】
【００８５】
実施例２：ＳＮＤＲＩ（シブトラミン）でのヒト研究
ヒトにおいて減量を誘導できることが知られているＳＮＤＲＩ（シブトラミン）を、それが、単純盲検のクロスオーバー設計を利用し、シブトラミンおよび偽薬を含み、高グリセリド血症かつ過体重および肥満であるが、それ以外は健康な被験体における、予備的なバイオマーカー研究においてヒトのＴＲＬ Ｖ６反応血漿濃度およびＶ−ＴＲＬ反応を減少させる能力と相関するか試験する。
【００８６】
それぞれ６人の被験体を含有する３つのコホートに、研究の間３つの期間を経験させる。被験体を一晩絶食させ、２つの空腹時採血を入手し、その後、およそ０７：００時に朝食をとらせる。偽薬またはシブトラミンを、および１０：００時に投与する。血液サンプリングを、朝食の開始のおよそ１時間後に開始し、７時間の間は１時間間隔で、次いで、次の１０時間の間は２時間ごとに続ける。脂肪負荷の例２に従う昼食を、および１２：００時に供する（および６０ｇ〜６５ｇの脂肪）。脂肪負荷投与の１２時間後までは他の食物を許可しない。被験体を、最後の血液サンプリングの後に、研究の第２試験期間に戻る前の４〜８日間の洗い流し期間の間解放する。洗い流し期間の後に、被験体を、再度一晩絶食させる。次いで、各被験体がシブトラミンまたは偽薬の交互処置を受けるようクロスオーバーする以外は、研究の第１の試験期間における手順と同じように手順を繰り返す。血液サンプルを、本質的に実施例１に記載されるように採取し、処理し、そして分析する。
【００８７】
ＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応を、脂肪負荷の５時間〜１１時間の期間に観察する。脂肪負荷投与の５時間〜１１時間のＡＵＣ（反応曲線下面積）を計算し、混合効果モデル分析を使用して統計学的に分析して、シブトラミン処置群と偽薬処置群を比較する。シブトラミン処置群は、平均して、約２８％のＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少を示すが、ＴＲＬ Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、またはＶ５サブタイプのいずれかの血漿濃度の有意な変化は示さない。平均Ｖ−ＴＲＬ反応の統計学的に有意な減少もまた観察されるが、この変化の大きさは、ＴＲＬ Ｖ６反応の変化より小さいことが見出される。大半の被験体において、シブトラミンの投与は、彼らの偽薬処置反応と比較してＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応の大きさを減少した。したがって、ＴＲＬ Ｖ６反応およびＶ−ＴＲＬ反応の減少は、ヒトにおいて減量を誘導するＳＮＤＲＩの既知の能力と相関するＳＮＤＲＩによって誘導された。
【００８８】
実施例３：５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニストでのヒト研究
ラットおよびサルにおいて減量を誘導することが知られており、かつヒトにおいて減量を誘導すると考えられる５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニストを、それが、過体重または肥満であるが、それ以外は健康な被験体における、単一中心の、入院患者／外来患者の、二重盲検（被験体および研究者について盲検）の、無作為化された、偽薬コントロールされた、単回投与の、用量漸増研究において、予備的なバイオマーカー研究においてＴＲＬ Ｖ６反応を減少させる能力と相関するか試験する。
【００８９】
各コホートの被験体は、４つの投薬期間に参加する（どの被験体も偽薬を２回受けないことを確実にする無作為化コードに従う、活性薬物での３つの期間と偽薬での１つの期間）。被験体を一晩絶食させ、投薬前の血液採取を得る。次いで、被験体に化合物または偽薬の経口投薬を与える。投薬の２時間後に、経口の上記脂肪負荷の例２に従う脂肪負荷を被験体に投与する。０時間〜１２時間の投薬後の期間にわたって、一定の間隔で、血液サンプルを採取および処理し、本質的に上記の実施例２のように分析する。ＴＲＬ Ｖ６反応についてのＡＵＣを、０時間〜１２時間の投薬後のサンプリング期間にわたって推量して、化合物または偽薬の存在下での経口脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応を評価する。
【００９０】
化合物処置群と偽薬処置群についてＴＲＬ Ｖ６反応を統計学的に比較するために混合効果モデルを使用して、化合物処置群についてＴＲＬ Ｖ６反応の統計学的に有意な減少を、高脂肪食に反応する偽薬関連反応と比較して確認する。ＴＲＬ Ｖ６反応と化合物の血漿曝露との関係は、より高い血漿薬物濃度でのＴＲＬ Ｖ６反応の大きさの急な減少を有する非線形である。したがって、５−ＨＴ２Ｃアゴニストによって誘導されたＴＲＬ Ｖ６反応およびＶＬＤＬ反応は、化合物のラットにおいて減量を誘導する既知の能力と相関する。
【００９１】
上述は、本発明の例示であり、開示された特定の実施形態に限定されるものとしてみなされるべきではない。本発明のいくつかの例示的な実施形態を説明してきたが、当業者は、多くの変更が、本発明の新規の教示および利点から実質的に逸脱することなく例示的な実施形態において可能であることを容易に理解するだろう。したがって、全てのそのような変更は、特許請求の範囲において規定される本発明の範囲内に含まれることが意図される。特許請求の範囲において、手段＋機能の節は、使用される場合、挙げられる機能を実施するように本明細書中に記載される構造、およびその等価な構造を含む構造的等価物もまたカバーすることが意図される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から選択される医薬品によるヒトにおける肥満症または過体重のための処置に対する反応性を予測する方法であって、前記ヒトにおいて、前記医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記医薬品の存在下での脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含む、方法。
【請求項２】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記患者に第二脂肪負荷を施すとともに、減量用医薬品を前記患者に投与すること；
４）前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）前記第一脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記第二脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；
６）前記ＴＲＬ Ｖ６反応の相対的減少に基づいて、前記減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は前記減量用医薬品が前記患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如は前記減量用医薬品が前記患者の処置に好適ではないことを示す、方法。
【請求項３】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に脂肪負荷を施すとともに、前記減量用医薬品を前記患者に投与すること；
２）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を、前記減量用医薬品の非存在下での前記脂肪負荷に対する標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較すること；
４）前記比較する工程に基づいて、前記減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、前記標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は前記減量用医薬品が前記患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、前記標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如は前記減量用医薬品が前記患者の処置に好適ではないことを示す、方法。
【請求項４】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記患者に第二脂肪負荷を施すとともに、医薬品を前記患者に投与すること；
４）前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；および
６）前記決定する工程に基づいて、前記患者が反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、前記患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する、方法。
【請求項５】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に脂肪負荷を施すとともに、前記減量用医薬品を前記患者に投与すること；
２）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記脂肪負荷に対する前記患者のＶ６反応を、前記減量用医薬品の非存在下での前記脂肪負荷に対する標準的なＶ６反応と比較すること；および
４）前記比較する工程に基づいて、前記患者が前記減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、前記標準的なＶ６反応と比較した前記患者のＶ６反応の有意な減少は、前記患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する、方法。
【請求項１】
５−ＨＴ２Ｃ受容体アゴニスト、カンナビノイド−１受容体（ＣＢ−１）アンタゴニスト、リン脂質ジエステラーゼ−１０（ＰＤＥ−１０）阻害剤、オレキシン−１アンタゴニスト、セロトニン−ノルアドレナリン−ドーパミン三重再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、リパーゼ阻害剤、および／または脂質吸収受容体阻害剤からなる群から選択される医薬品によるヒトにおける肥満症または過体重のための処置に対する反応性を予測する方法であって、前記ヒトにおいて、前記医薬品の非存在下でのＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記医薬品の存在下での脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定することを含む、方法。
【請求項２】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記患者に第二脂肪負荷を施すとともに、減量用医薬品を前記患者に投与すること；
４）前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）前記第一脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記第二脂肪負荷に対するＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；
６）前記ＴＲＬ Ｖ６反応の相対的減少に基づいて、前記減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は前記減量用医薬品が前記患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如は前記減量用医薬品が前記患者の処置に好適ではないことを示す、方法。
【請求項３】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者を処置するための減量用医薬品の適合性を決定するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に脂肪負荷を施すとともに、前記減量用医薬品を前記患者に投与すること；
２）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を、前記減量用医薬品の非存在下での前記脂肪負荷に対する標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較すること；
４）前記比較する工程に基づいて、前記減量用医薬品の適合性を決定すること
を含み、
ここで、前記標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は前記減量用医薬品が前記患者を処置するのに好適であることを示し、かつ、前記標準的なＴＲＬ Ｖ６反応と比較した前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少の欠如は前記減量用医薬品が前記患者の処置に好適ではないことを示す、方法。
【請求項４】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に第一脂肪負荷を施すこと；
２）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記患者に第二脂肪負荷を施すとともに、医薬品を前記患者に投与すること；
４）前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
５）前記第一脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応と比較して、前記第二脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応の減少が存在するかどうかを決定すること；および
６）前記決定する工程に基づいて、前記患者が反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、ＴＲＬ Ｖ６反応の有意な減少は、前記患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する、方法。
【請求項５】
肥満症および／または過体重のための処置を必要とする患者が、所定の減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測するための方法であって、以下の工程：
１）前記患者に脂肪負荷を施すとともに、前記減量用医薬品を前記患者に投与すること；
２）前記脂肪負荷に対する前記患者のＴＲＬ Ｖ６反応を測定すること；
３）前記脂肪負荷に対する前記患者のＶ６反応を、前記減量用医薬品の非存在下での前記脂肪負荷に対する標準的なＶ６反応と比較すること；および
４）前記比較する工程に基づいて、前記患者が前記減量用医薬品での処置に対して反応する患者であるかどうかを予測すること
を含み、
ここで、前記標準的なＶ６反応と比較した前記患者のＶ６反応の有意な減少は、前記患者が反応する患者である可能性が高いことを予測する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１１−５０８２１８（Ｐ２０１１−５０８２１８Ａ）
【公表日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３９７８２（Ｐ２０１０−５３９７８２）
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８７３６７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８５９１７
【国際公開日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．Ｌｉｎｕｘ
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８７３６７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８５９１７
【国際公開日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．Ｌｉｎｕｘ
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]