ａ）約０．１〜５％ｗ／ｗの水を食用油（好ましくは、粗製食用油）および脂質アシルトランスフェラーゼと混合する工程と、ｂ）約４５〜約９０℃で約１０分間〜１８０分間、前記混合物を撹拌する工程と、ｃ）油相とガム相を分離する工程とを含む、食用油（好ましくは、粗製食用油）を水脱ガムするプロセス。一実施形態において、脂質アシルトランスフェラーゼは、好ましくは、ホスホリパーゼＣ酵素と組み合わせて用いられる。脂質アシルトランスフェラーゼを用いる脱ガム油のガム相を改変するためのプロセスもまた本明細書に教示される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）約０．１〜５％ｗ／ｗの水を食用油（好ましくは、粗製食用油）および脂質アシルトランスフェラーゼと混合する工程と、ｂ）約４５℃〜約９０℃で約１０分間と１８０分の間、前記混合物を撹拌する工程と、ｃ）油相とガム相を分離する工程とを含む、食用油（好ましくは、粗製食用油）を水脱ガムする方法。
【請求項２】
ｄ）最低約２時間と最高７日間の間、活性脂質アシルトランスフェラーゼ酵素を含む前記ガム相をインキュベートする工程と、ｅ）前記ガム相から前記油を分離する工程とをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（好ましくは、食用油の脱ガム、例えば、水脱ガムもしくは酵素的脱ガムまたはそれらの組合せから獲得可能である、または獲得された）ガム相を処理し（前記ガム相を、最低約２時間と最高７日間の間、単独の、または１つもしくは複数のホスホリパーゼＣ酵素と組み合わせた１つまたは複数の脂質アシルトランスフェラーゼ酵素とインキュベートする）、前記ガム相から前記油を分離する方法。
【請求項４】
プロセスのｐＨが約ｐＨ５．０〜約ｐＨ１０．０の間である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記脂質アシルトランスフェラーゼがＧＤＳｘモチーフおよび／またはＧＡＮＤＹモチーフを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記脂質アシルトランスフェラーゼ酵素が、アシルトランスフェラーゼ活性を有し、かつアミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（Ｘは、以下のアミノ酸残基、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ、またはＳの１つまたは複数である）を含む酵素として特徴付けられる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
本発明の方法および／または使用のいずれか一つに用いる前記脂質アシルトランスフェラーゼが、以下の属の１つまたは複数由来の生物から獲得可能であり得、好ましくは獲得され得る、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法：Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ、Ｘｙｌｅｌｌａ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、およびＣａｎｄｉｄａ。
【請求項８】
脂質アシルトランスフェラーゼが前記Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属由来の生物から獲得可能であり、好ましくは獲得される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号４９、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、もしくは配列番号６３として示されるヌクレオチド配列、またはそれらと７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列のいずれか一つの発現によって獲得される、脂質アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１から３９のいずれか一項に記載の方法であって、ここで前記脂質アシルトランスフェラーゼが、脂質アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドであって、以下：
ａ）配列番号４９として示されたヌクレオチド配列、またはそれと７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列；
ｂ）前記ポリペプチドをコードする核酸であって、前記ポリペプチドが、配列番号１６に示されたポリペプチド配列または配列番号６８に示されたポリペプチド配列と少なくとも７０％同一である、核酸；
ｃ）または配列番号４９として示された前記ヌクレオチド配列を含む核酸プローブと中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸
の発現によって獲得されるポリペプチドである、方法。
【請求項１１】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓにおけるヌクレオチド配列の発現によって獲得されるポリペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号６８、配列番号１６、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１７、配列番号１８、配列番号３４、配列番号３５として示されるアミノ酸配列、またはそれらと７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列のいずれか一つを含む、脂質アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号６８として示される前記アミノ酸配列、またはそれと７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、脂質アシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
追加として、ホスホリパーゼＣが、油および／または水および／または脂質アシルトランスフェラーゼと混合される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
水脱ガムプロセスの完了後の油相において油の収率を増加させるための食用油の水脱ガムにおける脂質アシルトランスフェラーゼの使用。
【請求項１６】
水脱ガムプロセスの完了後のガム相の粘性を減少させるための食用油の水脱ガムにおける脂質アシルトランスフェラーゼの使用。
【請求項１７】
水脱ガムプロセスの完了後の油相において油の収率を増加させるため、および／もしくはトリグリセリドレベルを増加させるため、ならびに／または水脱ガムプロセスの完了後の油相においてジグリセリドレベルを低下させるための食用油の水脱ガムにおけるホスホリパーゼＣと組み合わせた脂質アシルトランスフェラーゼの使用。
【請求項１８】
未処理のガムと比較して、油の収率を増加させ、および／または向上したリンレベルを有する（酸性油の分離後の）固相を生じるための（食用油の脱ガム、例えば、水脱ガム、酵素的脱ガム、またはそれらの組合せから獲得可能であるか、または獲得された）ガム相のインキュベーションにおける（単独の、またはホスホリパーゼＣと組み合わせた）脂質アシルトランスフェラーゼの使用。
【請求項１９】
０．１〜４％ｗ／ｗの水が前記食用油と混合される、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
酵素が、約４５℃〜約９０℃の範囲の温度で食用油に加えられる、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
脱ガムプロセスのｐＨが約ｐＨ５．０〜約ｐＨ１０．０の間である、請求項１５から２０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、約１０分間〜１８０分間、前記食用油と反応する、請求項１５から２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記脂質アシルトランスフェラーゼがＧＤＳｘモチーフおよび／またはＧＡＮＤＹモチーフを含む、請求項１５から２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
前記脂質アシルトランスフェラーゼ酵素が、アシルトランスフェラーゼ活性を有し、かつアミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（Ｘは、以下のアミノ酸残基、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ、またはＳの１つまたは複数である）を含む酵素として特徴付けられる、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、以下の属の１つまたは複数由来の生物から獲得可能であり、好ましくは獲得される、請求項１５から２４のいずれか一項に記載の使用：Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ、Ｘｙｌｅｌｌａ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、およびＣａｎｄｉｄａ。
【請求項２６】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが前記Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属由来の生物から獲得可能であり、好ましくは獲得される、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号４９、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、もしくは配列番号６３として示されるヌクレオチド配列、またはそれらと７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列のいずれか一つの発現によって獲得される、請求項１５から２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、
ａ．配列番号４９として示されるヌクレオチド配列、もしくはそれと７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列；
ｂ．ポリペプチドをコードする核酸であって、前記ポリペプチドが、配列番号１６に示されるポリペプチド配列もしくは配列番号６８に示されるポリペプチド配列と少なくとも７０％同一である、核酸；または
ｃ．配列番号４９として示されるヌクレオチド配列を含む核酸プローブと中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸
の発現によって獲得されるポリペプチドである、請求項１５から２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓにおけるヌクレオチド配列の発現によって獲得されるポリペプチドである、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号６８、配列番号１６、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１８、配列番号３４、配列番号３５として示されるアミノ酸配列、またはそれらと７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列のいずれか一つを含むポリペプチドである、請求項１５から２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
前記脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号６８として示されるアミノ酸配列、またはそれと７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項１５から３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
前記脂質アシルトランスフェラーゼがホスホリパーゼＣと組み合わせて用いられる、請求項１５から３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
実施例および図を参照して本明細書で一般的に定義された方法。
【請求項３４】
実施例および図を参照して本明細書で一般的に定義された使用。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】


【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１】

【図６２】

【図６３】

【図６４】

【図６５】

【図６６】

【図６７】

【図６８】

【図６９】

【図７０】

【図７１】

【図７２】

【図７３】

【図７４ａ】

【図７４ｂ】

【図７５】

【図７６】

【図７７】

【図７８】

【図７９】

【図８０】

【図８１】

【図８２】

【図８３】

【図８４】

【図８５】

【図８６】

【図８７】

【図８８】

【図８９】

【図９０】

【図９１】

【図９２】

【図９３】

【図９４】

【図９５】

【図９６】

【図９７】

【図９８】

【図９９】

【図１００】

【図１０１】

【図１０２】

【図１０３】

【図１０４】

【図１０５】

【図１０６】

【図１０７】

【図１０８】

【図１０９】

【図１１０】

【図１１１】

【図１１２】

【図１１３】

【図１１４】

【図１１５】

【図１１６】

【図１１７】

【図１１８】

【図１１９】

【公表番号】特表２０１１−５０５８６５（Ｐ２０１１−５０５８６５Ａ）
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３８８８２（Ｐ２０１０−５３８８８２）
【出願日】平成２０年１２月１１日（２００８．１２．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００４０６４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８１０９４
【国際公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ　エイ／エス (67)
【Ｆターム（参考）】