脳卒中及び神経変性疾患の予防及び治療ための神経保護活性を有する複合生薬材抽出物を含む組成物
本発明は、神経細胞保護活性を有する高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物、及び黄ごん抽出物からなる複合生薬材抽出物を含む脳卒中及び神経変性疾患の予防及び治療用組成物及び複合生薬材抽出物の製造方法に関するもので、前記複合生薬材抽出物は、脳虚血によって誘導される神経細胞損傷を保護する効果が優れているだけではなく人体に無害で、神経細胞の死滅によって発生する神経変性疾患、すなわち、卒中、中風、老年認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンテントン病、ピック（Ｐｉｃｋ）病、及びクロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病などを予防及び治療するための医薬品及び機能性健康食品として使用することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び治療効果を有する複合生薬材抽出物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
２０世紀になって、人間の平均寿命が生命科学と医学の急速な発達によって長くなり、老齢人口増加が社会問題化してきている。特に、神経系の致命的な機能性疾病である脳卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病など老人性神経疾患が増加した。
【０００３】
神経系における神経細胞の成長、分化及び死滅は、一般的な発達、組織的特異的な機能の確立及び恒常性維持にそれぞれ重要な調節過程である。
【０００４】
脳血管疾患は、大きく２種類の形態に分類することができる。一つは、脳出血などに見られる出血性脳疾患で、もう一つは脳血管の閉鎖などによって現れる虚血性脳疾患である。出血性脳疾患は、交通事故などによって主に現れ、虚血性脳疾患は主に老齢の人々によく現れる疾患である。
【０００５】
大脳に一時的な脳虚血が誘発される場合、酸素とブドウ糖の供給が遮断されて神経細胞ではＡＴＰ減少、浮腫（ｅｄｅｍａ）が発生して、結局、脳の広範囲な損傷が誘発される。神経細胞の死滅は、脳虚血があった後、相当な時間経過後に現れる。これを遅延性神経細胞死（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ）と言う。遅延性神経細胞死は、モンゴリアン・ジャービル（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ ｇｅｒｂｉｌ）を使用した一過性前脳虚血モデル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）を通じた実験で詳しく見ると、５分間脳虚血誘導４日後、海馬（ｈｉｐｐｃａｍｐｕｓ）のＣＡ１領域で神経細胞死が観察されると報告されている（Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ，Ｓａｎｏ Ｋ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．，１９８４年，第６２巻，２０１〜２０８頁；Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９８２年，第２３９巻，５７〜６９頁）。
【０００６】
今まで最も多くの人々が受け入れている脳虚血による神経細胞死の機序には、２種類がある。一つは、脳虚血によって細胞外に過度なグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）が蓄積されるようになって、このようなグルタメートが細胞内に流入し、結局過度な細胞内カルシウムの蓄積により神経細胞死が誘発されるという、興奮性神経細胞死の機序（Ｋａｎｇ ＴＣ，等，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．，２００１年，第３０巻，９４５〜９５５頁）であり、もう一つは、虚血・再潅流時に急激な酸素供給によって生体内ラジカルの増加によるＤＮＡ及び細胞質に損傷を受けて誘発されるという酸化性神経細胞死の機序である（Ｗｏｎ ＭＨ，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９９年，第８３６巻，７０〜７８頁；Ｓｕｎ ＡＹ，Ｃｈｅｎ ＹＭ．Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１９９８年，第５巻，４０１〜４１４頁；Ｆｌｏｗｅｒｓ Ｆ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ＪＪ．Ｎｅｗ Ｈｏｒｉｚ．，１９９８年，第６巻，１６９〜１８０頁）。
【０００７】
このような機序的な研究を土台にして脳虚血時に現れる神経細胞死を効果的に抑制する物質を探索する研究、または物質に対する機序を明らかにする研究が多く遂行されている。しかし、いまだに効果的に脳虚血による神経細胞死を抑制する物質は、ほとんどないのが実情である。
【０００８】
今まで唯一、脳虚血治療剤としてＦＤＡ公認の市販中の組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ−ＰＡ）は、脳虚血を誘発させる血栓を血栓溶解剤で溶かして酸素及びブドウ糖の早期供給を誘導する物質である。したがって、直接的に神経細胞を保護するのではないので、早期使用が必要であり、血栓溶解剤という特徴のため過量の使用や頻繁な使用時には、血管壁が薄くなって結局は出血性脳血管疾患を誘発するようになる。
【０００９】
また、初期のカルシウム流入を効果的に抑制するためのカルシウムチャンネル抑制剤（ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）であるＭＫ−８０１の場合、臨床的テストが実行されたが、その副作用のため薬物が廃棄されたことがある。
【００１０】
一方、韓国国内の場合、多数の天然物質が脳卒中予防に効果がある健康食品として市販されているが、これらの大部分は、科学的な検証を経ていないものが多く、かえって健康食品乱用の原因になり、社会的な問題になっている。
【００１１】
したがって、長期間使用されてその安全性が立証された天然資源を客観的に検証して、脳疾患治療及び予防効果を有する天然物質を開発しようとする努力が早急に求められている。
【００１２】
高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ． Ａ． Ｍｅｙｅｒ）は、五加皮科に属する多年生薬草であり、各種生理活性を有するサポニン（Ｓａｐｏｎｉｎ）系誘導体化合物が主要薬効を有し、ジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）の含量が品質の指標になると報告されている。漢方処方では、健胃消化薬、整腸止瀉薬、陣痛鎮痙薬からなる処方などに使用され、薬理作用では血糖降下作用、抗癌効果、血清蛋白合成促進、抗体生産促進作用、中枢興奮作用、抗疲労作用などがある（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ， Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４３９〜４４４頁）。
【００１３】
刺五加は、刺五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＡＳ）とも言って、韓国国内で五加皮（オガピ）またはオガルピとして知られている。五加皮は、たらの木科で多数の種があるが、それらの中で刺があるものを刺五加皮という。動物実験の結果、刺五加皮はひどい血液循環障害と酸素欠乏症状がある生命体の抵抗性を増進させる機能と効果を示し、物理的（寒さ、熱と循環運動、強制的浮動等）、化学的、生物学的悪影響に対して抵抗力を増進させるのみならず、体内の大量の抗体形成にも効果を示した（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４３３〜４３５頁）。
【００１４】
当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）は、セリ科に属する多年生薬草で、漢方処方では各種婦人科疾患、更年期障害、不妊などを治療する目的に使用されてきた。現在は、不整脈、虚血性中風、脳動脈硬化、貧血、血栓閉塞性血管炎、高血圧及び不眠症等に応用されている。薬理作用では、抗血栓作用、造血作用、心臓収縮抑制作用、血管弛緩作用、血中脂質濃度降下による粥状動脈硬化抑制作用、免疫調節作用、抗癌作用及び抗炎症作用などが報告されている（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４０６〜４０８）。
【００１５】
黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）は、双葉植物筒花植物目ウツボグサ科の多年生草で山地の草原で育ち、韓国、中国、モンゴル及びシベリア東部等に分布する。漢方では、根を解熱、利尿、止瀉、利膽及び消炎剤に使用して、薬用植物として栽培する（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，８６４〜８６５頁）。
【００１６】
しかし、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物の脳疾患治療効果に対しては、参考文献として本文に挿入した前記引用文献のどこにも報告または記載されていない。
【００１７】
いくつかの生化学的実験を通じて、神経成長及び分化に対する効果を観察し、前記複合生薬材抽出物が、脳卒中及び神経変性疾患の主な原因である神経細胞死滅を抑制する役割をするのかを確認するために、本発明者等は、動物モデルを使用して４種の感覚運動機能テストを実施し、最後に前記抽出物が神経細胞死滅を抑制することを確認することにより本発明を完成した。
【００１８】
本発明のこのような目的は、下記の本発明の詳細な説明によってさらに明確になるだろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
大脳に一時的な脳虚血が誘発される場合、酸素とブドウ糖の供給が遮断されて神経細胞ではＡＴＰ減少、浮腫（ｅｄｅｍａ）が発生して、結局、脳の広範囲な損傷が誘発される。神経細胞の死滅は、脳虚血があった後、相当な時間経過後に現れる。これを遅延性神経細胞死（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ）と言う。遅延性神経細胞死は、モンゴリアン・ジャービル（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ ｇｅｒｂｉｌ）を使用した一過性前脳虚血モデル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）を通じた実験で詳しく見ると、５分間脳虚血誘導４日後、海馬（ｈｉｐｐｃａｍｐｕｓ）のＣＡ１領域で神経細胞死が観察されると報告されている（Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ，Ｓａｎｏ Ｋ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．，１９８４年，第６２巻，２０１〜２０８頁；Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９８２年，第２３９巻，５７〜６９頁）。
【００２０】
今まで最も多くの人々が受け入れている脳虚血による神経細胞死の機序には、２種類がある。一つは、脳虚血によって細胞外に過度なグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）が蓄積されるようになって、このようなグルタメートが細胞内に流入し、結局過度な細胞内カルシウムの蓄積により神経細胞死が誘発されるという、興奮性神経細胞死の機序（Ｋａｎｇ ＴＣ，等，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．，２００１年，第３０巻，９４５〜９５５頁）であり、もう一つは、虚血・再潅流時に急激な酸素供給によって生体内ラジカルの増加によるＤＮＡ及び細胞質に損傷を受けて誘発されるという酸化性神経細胞死の機序である（Ｗｏｎ ＭＨ，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９９年，第８３６巻，７０〜７８頁；Ｓｕｎ ＡＹ，Ｃｈｅｎ ＹＭ．Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１９９８年，第５巻，４０１〜４１４頁；Ｆｌｏｗｅｒｓ Ｆ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ＪＪ．Ｎｅｗ Ｈｏｒｉｚ．，１９９８年，第６巻，１６９〜１８０頁）。
【００２１】
このような機序的な研究を土台にして脳虚血時に現れる神経細胞死を効果的に抑制する物質を探索する研究、または物質に対する機序を明らかにする研究が多く遂行されている。しかし、いまだに効果的に脳虚血による神経細胞死を抑制する物質は、ほとんどないのが実情である。
【００２２】
今まで唯一、脳虚血治療剤としてＦＤＡ公認の市販中の組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ−ＰＡ）は、脳虚血を誘発させる血栓を血栓溶解剤で溶かして酸素及びブドウ糖の早期供給を誘導する物質である。したがって、直接的に神経細胞を保護するのではないので、早期使用が必要であり、血栓溶解剤という特徴のため過量の使用や頻繁な使用時には、血管壁が薄くなって結局は出血性脳血管疾患を誘発するようになる。
【００２３】
また、初期のカルシウム流入を効果的に抑制するためのカルシウムチャンネル抑制剤（ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）であるＭＫ−８０１の場合、臨床的テストが実行されたが、その副作用のため薬物が廃棄されたことがある。
【００２４】
一方、韓国国内の場合、多数の天然物質が脳卒中予防に効果がある健康食品として市販されているが、これらの大部分は、科学的な検証を経ていないものが多く、かえって健康食品乱用の原因になり、社会的な問題になっている。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
前記目的を達成するために、本発明は、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための薬学的組成物を提供する。
【００２６】
好ましくは、前記高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物は、１〜５：２〜７：２〜７：１、より好ましくは、２：５：４：１の割合である。
【００２７】
前記抽出物は、水、メタノール、エチルアルコールのような低級アルコール、好ましくは、メタノールまたはその混合物で植物を抽出して取得された抽出物を含む。
【００２８】
本発明の目的は、高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、刺五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＳ）、当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）、黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）を含む複合生薬材抽出物の、ヒトまたは哺乳動物での神経細胞を保護することによる脳卒中の治療及び予防のための治療剤製造への用途を提供するものである。
【００２９】
本発明の目的は、高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、刺五加（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＳ）、当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）、黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）を含む複合生薬材の抽出物の治療的有効量を薬学的に許容可能な担体とともに哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療または予防する方法を提供するものである。
【００３０】
本発明は、生理学的に許容可能な添加剤とともに、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための健康食品または食品添加剤を提供する。
【００３１】
神経細胞死によって誘発される神経変性疾患では、卒中、中風、老年認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンテントン病、ピック（Ｐｉｃｋ）病、及びクロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病が含まれ得る。
【００３２】
本発明の薬学的組成物は、組成物全体重量に対して前記抽出物を約０．０１〜５０重量％で含むことができる。
【００３３】
本発明の健康食品は、全体組成物の重量に対して上記組成物を０．０１〜８０％、好ましくは１〜５０％含む。
【００３４】
前記健康食品は、健康食品、健康飲料などに作ることができ、粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセル、飲料などに使用することができる。
【００３５】
本発明の抽出物は、下記の好ましい実施例によって製造できる。
【００３６】
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明の抽出物は、詳細には下記の過程によって製造される。
【００３７】
本発明の高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物は、次のように製造することができる。黄ごんを除いて乾燥し、切って粉砕して５〜３５倍、好ましくは約１０倍容積の蒸留水、メタノール、エチルアルコール、ブタノールなどまたはそれらの混合物、好ましくは熱水と混合する。溶液は、摂氏２０〜１００度、好ましくは摂氏６０〜１００度で１〜２４時間熱水処理して、熱水、冷水、還流抽出超音波抽出を１〜５回、好ましくは２〜３回連続的に抽出する。残余物は、ハチ蜜と残っている乾燥した黄ごんに追加して熱水と４８〜１２０時間、好ましくは９６時間追加的に抽出する。取得した抽出物は、ろ過して上澄み液を取得して摂氏２０〜１００度、好ましくは５０〜７０度で回転蒸発器で濃縮した後、水、低級アルコールまたはその混合物に溶解することができる複合生薬の乾燥抽出粉末を取得するために、真空凍結乾燥、熱風乾燥または噴霧乾燥によって乾燥して熱風乾燥する。
【００３８】
本発明のまた他の実施例として、本発明の生薬材抽出物は、以下により構成される工程を含む。（ａ）高麗人参、刺五加に約５〜２５倍、好ましくは２〜８倍の蒸留水、メタノール、エチルアルコール、ブタノールなどのような低級アルコールまたはそれらの混合物、好ましくは熱水を追加して、摂氏２０度〜１００度、好ましくは６０度〜１００度の温度で１〜２４時間還流抽出して抽出物を取得し、ろ過及び乾燥して濃縮された抽出物を取得する工程。（ｂ）白茯苓パウダー及びハチ蜜を生地黄汁とよく混合して添加した後、４８〜１２０時間、好ましくは９６時間熱水で抽出しながら黄ごんを添加して本発明の複合生薬材抽出物を取得する工程。
【００３９】
したがって、本発明はまた、前記製造方法による複合生薬材抽出物を提供する。
【００４０】
追加的に極性溶媒及び非極性溶媒に溶解可能な本発明の抽出物は、次の工程の過程によって製造することができる。前記工程によって製造された抽出物を水に懸濁して１〜１００、好ましくは１〜５倍容積の非極性溶媒（エチルアセテート、クロロホルム、ヘキサンなど）と混合して、非極性溶媒溶解層を集めて本発明の非極性溶媒溶解性抽出物を取得し、残っている極性溶媒溶解性層は集めて、水、低級アルコールまたはそれらの混合物に溶解可能な本発明の極性溶媒溶解可能抽出物を取得する。また、前記過程は変更されてもよく、またはさらなる段階に供されてもよく、当技術分野で通常のよく知られた方法、例えば、文献（Ｈａｒｂｏｒｎｅ Ｊ．Ｂ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｏｄｅｒｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．，３ｒｄ Ｅｄ．，１９９８年，６〜７頁）に記載された方法によって、より潜在的な画分または化合物を分画または分離することができる。
【００４１】
前記複合生薬材抽出物が、ＭＣＡｏ動物モデルで発生した局所脳虚血による神経損傷に効果があるかどうか調べるための実験を通じて、抽出物が局所脳虚血による神経細胞死滅を抑制して神経保護活性を示すことを確認した。
【００４２】
また、本発明は、前記製造方法によって製造された活性成分で神経細胞を保護し、脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための前記複合生薬材抽出物を含む薬学的組成物を提供する。
【００４３】
したがって、本発明は、前記製造方法で取得される神経細胞保護活性を有する複合生薬材抽出物を提供する。
【００４４】
本発明のまた他の目的は、前記製造方法によって製造された前記複合生薬材の抽出物を有効量で哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療または予防する方法を提供するものである。
【００４５】
本発明の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための組成物は、全体組成物の重量に対して前記抽出物を０．０１〜５０％含む。
【００４６】
本発明の組成物は、追加的に通常の担体、アジュバントまたは希釈剤を当技術分野でよく知られた方法を使用して一緒に含むことができる。前記担体は、用法及び服用法によって適合した成分を使用するのが好ましいが、それに限定されるものではない。適当な希釈剤は、レミントンの製薬（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ）テキストに目録で記載されている。
【００４７】
下記の製剤化方法及び添加剤は、単なる例であって、本発明を制限するものではない。
【００４８】
本発明による組成物は、薬学的に許容可能な担体、アジュバントまたは希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キリシトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油を含む薬学的組成物として提供することができる。剤形は、追加的に、充填剤、抗凝固剤、増量剤、湿潤剤、香辛料、崩壊剤、防腐剤などを使用して調剤される。本発明の組成物は、当技術分野でよく知られた方法を使用して患者に投与後、活性成分を早く持続的に徐々に放出するように（速放型、持続徐放型、徐放型）製剤化することができる。
【００４９】
例えば、本発明の組成物は、一般的に注射のために使用される油、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）または他の溶媒に溶解することができる。担体の適切な例は、生理学的食塩水、ポリエチレングリコール、エチルアルコール、植物性油、イソプロピルミリステートなどを含むが、これに限定されるものではない。局所投与のための本発明の抽出物は、軟膏やクリーム形態に製剤化することができる。
【００５０】
本組成物を含む薬学的製剤は、それぞれ通常の方法によって散剤、錠剤、カプセル剤、軟性カプセル剤、水性薬剤、エリキシルピル（ｅｌｉｘｉｒ ｐｉｌｌ）、シロップ、エアゾールなどの経口型剤形、またはクリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム、パッチ、ペースト、噴霧液、エアゾールなどの局所剤形または溶液、懸濁液、エマルジョンなどの注射剤形に製剤化することができる。
【００５１】
薬学的服用形態の本発明の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができ、単独でまたは適当に一緒に使用することができ、他の薬学的に活性がある成分とともに使用することができる。
【００５２】
本発明の抽出物または組成物の好ましい服用量は、患者の状態及び体重、重症度、剤形、経路及び投与期間によって変えることができ、当業者によって選択されうる。しかし、好ましい効果を得るためには、本発明の抽出物が１日当り体重１ｋｇ当たり１０ｇ／ｋｇ、好ましくは１〜３ｇ／ｋｇの量で投与されることが勧奨される。外用剤、座剤及び滅菌注射溶液の形態に剤形化して使用することができる。服用量は、一日に一度または何回に分けて投与することができる。組成物において、本発明の抽出物の量は、全体組成物の重量に対して０．０１〜５０重量％、好ましくは０．５〜４０重量％で含まれる。
【００５３】
本発明の薬学的組成物は、多様な経路を通じて哺乳類のような動物（ラット、マウス、飼育用動物または人間）に投与することができる。投与のすべての方式が意図される。例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜、髄膜腔内、硬膜外または脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与することができる。
【００５４】
また、本発明は、神経細胞保護活性を有する高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物及び黄ごん抽出物からなる複合生薬材抽出物を含む、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び改善用健康食品を提供する。健康食品は、前記抽出物０．０１〜８０重量％、アミノ酸０．００１〜５重量％、ビタミン０．００１〜２重量％、糖０．０１〜２０重量％、有機酸０．００１〜１０重量％及び薬学的に許容可能な食品添加剤である適量の甘味料及び香料を添加して製造することができる。
【００５５】
前記複合生薬材抽出物は、神経細胞保護活性によって脳卒中及び神経変性疾患を予防及び改善するための食品及び飲料に添加することができる。
【００５６】
健康食品を開発するための本発明の抽出物を含む食品添加物の例としては、多様な食物、飲料、ガム、ビタミン複合剤、健康増進食品及びその類似物などがあり、粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセルまたは飲料の形態で使用することができる。
【００５７】
また、本発明の抽出物は、例えば、粉乳、成長期粉乳、成長期食餌のような子供及び乳児の食品に含ませて、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を予防及び向上させることができる。
【００５８】
前記組成物は、食物、添加剤または飲料に添加することができる。ここで、食品や飲料内の前記抽出物の量は、一般的に健康食品組成物の全体食品質量に対して約０．１〜８０ｗ／ｗ％、好ましくは１〜５０ｗ／ｗ％であって、健康飲料組成物１００ｍＬに対して１〜３０ｇ、好ましくは３〜１０ｇである。
【００５９】
本発明の健康飲料組成物は、基本成分で前記抽出物を表示された割合で含み、他の液体成分には特別な制限がなく、他の成分は多様な防臭剤または通常の飲料のような天然の炭水化物であり得る。前記天然炭水化物の例は、グルコース、フルクトースなどのような単糖類；マルトース、スクロースなどの二糖類；デキストリン、クロデキストリンなどのような通常の糖；及びキリシトール及びエリスリトールなどの糖アルコールである。前記の外に他の防臭剤として、タウマチンのような天然防臭剤、レバウジオシドＡ、グリシリジンなどのようなステビア抽出物及びサッカリン、アスパルテームなどのような防臭剤を使用することができる。前記天然炭水化物は、一般的に本発明の飲料組成物１００ｍＬに対して約１〜２０ｇ、好ましくは５〜１２ｇである。
【００６０】
前記組成物の外に多様な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び充填剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。前記の外に他の成分は、天然果物ジュース、果物ジュース飲料及び野菜飲料を製造するための果物ジュースであり得る。前記成分は、独立的にまたは混合して使用することができる。成分比は、あまり重要ではないが、一般的に本発明の組成物１００ｗ／ｗ％当り約０〜２０ｗ／ｗ％である。前記抽出物を含む食品の例は、多様な食品、飲料、ガム、ビタミン総合剤、健康改善食品などである。
【００６１】
本発明の組成物は、追加的にクエン酸、フマル酸、アジピン酸、乳酸、リンゴ酸のような有機酸、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ピロホスファート、ポリホスファートのようなリン酸、ポリフェノール、カテキン、アルファトコフェロール、ローズマリー抽出物、ビタミンＣ、緑茶抽出物、リコリス根抽出物、キトサン、タンニン酸、フィト酸などのような天然抗酸化物中の一つまたはそれ以上を含むことができる。
【００６２】
前記本発明の抽出物は、２０〜９０％の高濃度液体、粉末または顆粒型であり得る。
【００６３】
同様に、本発明の前記抽出物は、追加的に少なくても一つのラクトース、カゼイン、デキストロース、グルコース、スクロース及びソルビトールを含むことができる。
【００６４】
本発明の抽出物は、毒性及び副作用がない。したがって、安全に使用することができる。
【００６５】
本発明の組成物、用途及び製造において、多様な変形及び変化が可能であることは、当業者には自明なことである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６６】
以下、本発明を下記実施例及び実験例によって詳細に説明する。
但し、下記の実施例及び実験例は本発明を例示するだけのものであって、本発明の内容が下記実験例によって限定されるものではない。
【００６７】
実施例１．複合生薬材抽出物の製造（１）
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんは、市販品を購入して慶煕大学校漢方医科大学本草学教室の検証を受けて実験に使用した。まず、高麗人参６６０ｇを３Ｌの３次蒸留水で２時間還流抽出した後、取得された抽出物を減圧濃縮及び凍結乾燥器（Ｓｐｅｃ ３０００，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｃｏ．米国）で凍結乾燥して抽出物２００ｇを得た。刺五加は、３００ｇを前記と同じ方法を遂行して抽出物２０ｇを得た。当帰は、３５０ｇで抽出物５０ｇを得た。黄ごんは、８０ｇで抽出物１０ｇを得た。
【００６８】
前記の抽出物を抽出する前の薬剤の用量にして２：５：４：１の割合で混合して下記の実験試料に使用した。
【００６９】
実施例２．複合生薬材抽出物の製造（２）
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんは、市販品を購入して慶煕大学校漢方医科大学本草学教室の検証を受けて実験に使用した。
【００７０】
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごん薬剤を２：５：４：１の割合で混合して混合薬剤１，２００ｇを３Ｌの３次蒸留水で２時間還流抽出した。取得された抽出物を減圧濃縮及び凍結乾燥器（Ｓｐｅｅｄ Ｓｐｅｃ ３０００，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｃｏ．米国）で凍結乾燥して抽出物（１６３．５４ｇ）を得て試料に使用した。
【００７１】
前記の工程を通じて製造された四種類の生薬材の抽出物は、後述する実験の試験例に使用した。
【００７２】
実験例１：ＭＣＡｏ実験モデル
前記実施例１で取得した複合生薬材抽出物の神経細胞損傷防御効果を測定するためにゼア等（Ｚｅａ ＬＥ．，等，Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９年，第２０巻，８４〜９１頁）の方法を応用した血管内縫合糸挿入法（ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ ｓｕｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ）を使用した。
実験方法を下記に示す。
【００７３】
方法
実験動物に約２８０ｇ、８週齢のスプラーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄｏｗｌｅｙ）雄のマウスを韓国セムタゴ社から購入して飼料と水を充分に供給しながら１週間実験環境に適応させた後、実験に使用した。
【００７４】
マウスを７０％Ｎ２Ｏと３０％Ｏ２が混じった混合ガスに５％のイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｒａｎｅ）で全身麻酔をした後、一方は採血のための注射器を、もう一方は血圧測定用プローブ（ｐｒｏｂｅ）を挿入して血圧を観察した。採血をした後、血糖及び血液ガスを分析して観察した。首前方部位中央の皮膚を切開して右側頚動脈と外頚動脈（ＥＣＡ）を周囲組織と神経から注意深く分離した。外頚動脈分枝である上部甲状腺動脈と喉頭動脈を電気焼灼器で焼灼して内径動脈の分枝である翼突筋口蓋動脈を電気焼灼して外頚動脈を切ってプローブを外頚動脈から内径動脈に挿入した。プローブは、４−０ナイロン糸が２３ｍｍの血管に対する接着力を増加させるために活性化剤で固形化されたポリシロキサンのようなシリコン成分でコーティングされる工程によって作った。ＩＣＡは、コーティングされたプローブの約１０ｍｍ結紮して挿入地点から２０ｍｍまたはそれ以下に至るようにして抵抗が感じられるように挿入した。プローブは、閉鎖不全を防ぐために同時に固定した。皮膚切開部位は再び縫合し、マウスは麻酔された状態から自然に回復した。挿入されたプローブは、ＭＣＡ血液の流れを妨害して局所虚血を誘発した。２時間後に、マウスは頚動脈の血液流れを除去するために再び麻酔した。それから２２時間後に、マウスを屠殺して脳を摘出し、脳組織を顕微鏡で観察した。
【００７５】
体温が、３７±０．５℃になるように維持しながら観察した。尾を切開し、末端組織は除去してブレインマトリックスによって２ｍｍ厚の６枚の脳切片を取得した。２％のトリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）溶液適正量を生理食塩水で希釈して、９ウェルプレートに入れた。脳切片を添加して摂氏３７度で３０分間染色した。染められた組織は、デジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｃｏ．ｃ２５００Ｌモデル， 米国）で撮影した。脳梗塞部位の体積は、ＯＰＴＩＭＡＳプログラム（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ．，６．５１バージョン）で計算した。浮腫の体積を除いた右半球の拡散した脳梗塞部位体積（Ａ）を測定するために脳梗塞の実際体積は次の数式１及び２で計算した。
【００７６】
（数１）
脳梗塞の割合（％）＝（Ａ−Ｂ／Ａ）×１００
Ａ：正常左半球の体積（ｍｍ３）、Ｂ：校正された脳梗塞の体積（ｍｍ３）
【００７７】
（数２）
校正された脳梗塞の体積（ｍｍ３）＝（正常左半球の体積）−（損傷半球の正常部位体積）
【００７８】
薬物処理
誘発直後及び１２０分後に、対照群には水を、試験群には前記実施例１の複合生薬材抽出物を試料として経口投与した。ここで、脳動脈の膨脹を避けて薬物の用量による効能を調べるために、複合生薬材抽出物を８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇでそれぞれマウス体重１００ｇ当たり０．３ｍＬずつの体積で３次蒸留水に希釈して、閉塞２時間及び４時間後に二度投与した。陽性対照群動物は、同じ方法で４５ｍｇ／ｋｇのミノサイクリン（ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ）で処理した。
【００７９】
複合生薬材抽出物の脳組織及び脳神経保護効果を測定した結果を、図１及び図２に示した。図１で二つの脳組織切片を比べて見ると、対照群に比べて複合生薬材抽出物を投与した群は、ＴＴＣ染色されない死滅した部位の面積が少なく、ＴＴＣ染色されて黒赤色になった部位の面積が少ないことが分かった。参考に、ＴＴＣで脳組織を染色すると、損傷によって組織が死滅した部位は、染色されない白い状態になり、正常部位の組織は黒赤色の状態になる。
【００８０】
また、図２を見ると、水投与した対照群は脳梗塞割合（％）が３４．７±１．７７％であったのに比べて、陽性対照群で使用したミノサイクリンを４５ｍｇ／ｋｇ投与時の脳梗塞割合は２０．５±２．８５％であった。また、複合生薬材抽出物８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時、それぞれ３４．７±４．１９％、２５．６±１．８６％及び２３．４±２．４０％の脳組織損傷を示し、濃度依存的に脳組織損傷に対する保護効果を示した。特に、複合生薬材抽出物４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時は、対照群に比べてそれぞれ２９％及び３４％の神経組織保護効果を示し、陽性対照群であるミノサイクリン４５ｍｇ／ｋｇに比べて７０及び８１％の保護効果を示した。
【００８１】
実験例２．複合生薬材抽出物の感覚運動機能回復効果
脳損傷は、身体感覚運動機能損失ももたらすため、前記実施例１の複合生薬材抽出物の脳損傷による均衡感覚、運動機能及び筋肉調和など感覚運動機能失調に対する保護（回復）効果を下記のような様々な実験を通じて測定した。
文献に記載されたよく知られた方法を変形して使用した。
【００８２】
２−１．ロータロッドテスト（ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発２０時間後に感覚運動機能に及ぼす効果を評価するためにロータロッドテスト（ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）を実施した。ロータロッドテストは、脳損傷モデル特に中風モデルや脊髄神経損傷モデルにおいて、脳損傷と非常に密接な結果を示すテスト中の一つで、感覚運動機能失調を評価するのに非常に適している。ロータロッドテストのためにバジレ社（ｂａｓｉｌｅ社，イタリア）のロータロッドを使用した。２分にＲＰＭが２５まで上がる加速回転で実験に臨んだ。実験動物で中風を誘発したマウスは、棒の中央に均衡を取るようにおいた後、ロッドが回転を始めた時間からマウスが落ちる時までの時間を測定して評価した。マウスごとに５回実施して最高値と最低値を除いた中間３回の値を平均してデータに使用した。
【００８３】
図３に中風誘発後２０時間に測定したロータロッドテスト結果を示した。シャム群が９２．４±１５．９２秒（ｐ＜０．０１）、対照群が２４．８±６．３２秒間運動した一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ１５±７．１４秒、７４．１±１２．５９秒及び６３．１±１０．０８秒を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性のある感覚運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．００１）。
【００８４】
２−２．プレヘンシルトラクションテスト（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発後２１時間に筋肉の筋力に及ぼす影響を評価するために、ワラス（Ｗａｌｌａｃｅ．Ｊ．Ｅ．，等， Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．，１９８０年，第３５巻，３６４〜３７０頁）の方法を変形したプレヘンシルトラクションテスト（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）を実施した。この方法は、マウスの足筋肉の筋力を評価するのに良い方法である。
【００８５】
まず、マウスを３ｃｍの四角棒にぶら下がるようにして落ちる時までの時間を測定し、毎回５回実施して中間の３回の値を平均してデータに使用した。
【００８６】
その結果、図４に示したように対照群は６．６±０．９０秒を持ち堪えた。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ７．２±２．０８秒、１１．０±１．５８秒及び７．０±２．３１秒を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性をもって運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．０５）。
【００８７】
２−３．平均台テスト（ｂａｌａｎｃｅ ｂｅａｍ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発後２２時間に均衡感覚に及ぼす効果を測定するために均衡台テスト（ｂａｌａｎｃｅ ｂｅａｍ ｔｅｓｔ）をプルネン等（Ｐｕｕｒｕｎｅｎ Ｋ．，等，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１年、第４０巻，５９７〜６０６頁）の方法を若干変形して下記のように実施した。本テストは、マウスの均衡感覚を測定して前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）の機能を測定する方法で中風誘発後脳機能損傷を測定するのに良いテスト中の一つである。
【００８８】
まず、幅２．５ｃｍ、長さ１２２ｃｍの木の棒を床から約４２ｃｍの高さにかけておいて、中心にマウスを均衡を取るようにおいた後、３０秒間マウスの行動を見て３人の観察者がその点数を付ける。点数の評価基準を下記に示す。０点；棒で均衡を取ることができない状態。１点；３０秒間均衡を取るだけで他の動きがない状態。２点；３０秒間均衡を取って棒の長さ方向に身を向ける状態。３点；２点で身を向けた状態で棒の長さ方向に歩くがステップの５０％以上が滑る状態。４点；３点で滑るのが５０％以下の状態。５点；４点で１ステップ程度滑る状態。６点：５点で滑るステップなしに自由に歩く状態と決めて実施した。マウスごとに３回実施して平均値をデータに使用した。
【００８９】
その結果、図５に示したように、シャム群は３．４±０．３９点、対照群は１．５±０．１９点を示した。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ１．６±０．２５点、２．７±０．１８点及び２．１±０．２３点を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性のある運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０５）。
【００９０】
２−４．フットフォルトテスト（Ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、中風誘発後２３時間に運動機能に及ぼす効果を測定するためにマークグラフ（Ｍａｒｋｇｒａｆ ＣＧ．，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９２年，第５７５巻，２３８〜２４６頁）のフットフォルトテスト（Ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ ｔｅｓｔ）の方法を若干変形して下記のように実施した。このテストは、中風誘発後運動調和と精緻な運動を測定するのに良い方法である。
【００９１】
まず、間隔が２．５ｃｍ、直径２ｍｍの針金からなる幅２３．５ｃｍ、長さ４３．５ｃｍの格子を床から約９２ｃｍ上にかけておき、マウスを中央においた後、６０秒間前足の全体のステップから一方のステップで滑って格子の間にはまる数の割合とし、３回実施して平均値をデータに使用した。
【００９２】
その結果、図６に示したように、シャム群は１．６±０．１４％（ｐ＜０．０１）、対照群は１６．６±２．８７％のフットスリップ（ｆｏｏｔ ｓｌｉｐ）を示した。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時それぞれ２０．５±６．２５％、１０．７±２．２５％（ｐ＜０．０１）及び１５．４±２．１２％を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて運動機能失調に対する保護傾向を示した。
【００９３】
実験例３．急性毒性実験
方法（１）
ＩＣＲ系マウス（体重２５±５ｇ）とスプラーグ・ドーリーラット（２３５±１０ｇ、中央実験動物）をそれぞれ１０匹ずつ４群に分けて、本発明の複合生薬材抽出物それぞれ２５０、５００、１０００及び５０００ｍｇ／ｋｇ及び溶媒（０．２ｍＬ）を経口投与した後、２週間毒性の有無を観察した結果、４群全てで死亡した例が一匹もなく、外見上対照群と何ら変わった症状を見いだすことができなかった。
【００９４】
方法（２）
ＩＣＲ系マウスとスプラーグ・ドーリーラットをそれぞれ１０匹ずつ４群に分けて、本発明の複合生薬材抽出物それぞれ２５、２５０、５００及び７２５ｍｇ／ｋｇ及び溶媒（０．２ｍＬ）を経口投与した後、２４時間の毒性有無を観察した。結果は、４群全てで死亡した例が一匹もなく、外見上対照群と何ら変わった症状を見いだすことができなかった。
【００９５】
結果
本発明の複合生薬材抽出物は、急性毒性がほとんどないことが確認された。
【００９６】
下記に本発明の複合生薬材抽出物を含む薬学的組成物の製剤例を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、これらは単に具体的に説明するためのものである。
【００９７】
散剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
タルク １０ｍｇ
前記の成分を混合して密封パッケージに充填して散剤を製造する。
【００９８】
錠剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
とうもろこし澱粉 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤製造方法にしたがって打錠して錠剤を製造する。
【００９９】
カプセル剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
とうもろこし澱粉 １００ｍｇ
ラクトース １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
通常のカプセル剤の製造方法によって前記の成分を混合してゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【０１００】
注射剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
注射用滅菌蒸留水 適量
ｐＨ調節剤 適量
注射剤は、活性成分を溶解させてｐＨを約７．５に調節し、すべての成分を２ｍＬアンプルに充填して滅菌し、通常の注射剤製造方法によって製造する。
【０１０１】
液剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ０．１〜８０ｇ
糖 ５〜１０ｇ
クエン酸 ０．０５〜０．３％
カラメル ０．００５〜０．０２％
ビタミンＣ ０．１〜１％
精製水 ７９〜９４％
二酸化炭素ガス ０．５〜０．８２％
通常の液剤の製造方法によって精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させて前記の成分を混合した後、精製水を加えて全体を充填し、滅菌して液剤を製造する。
【０１０２】
健康食品の製造
複合生薬材抽出物粉末 １０００ｍｇ
ビタミン混合物 適量
ビタミンＡアセテート ７０ｍｇ
ビタミンＥ １．０ｍｇ
ビタミンＢ１ ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２ ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６ ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２ ０．２ｍｇ
ビタミンＣ １０ｍｇ
ビオチン １０ｍｇ
アミドニコチン酸 １．７ｍｇ
葉酸（Ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ） ５０ｍｇ
カルシウムパントテン酸 ０．５ｍｇ
ミネラル混合物 適量
硫酸第一鉄 １．７５ｍｇ
酸化亜鉛 ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム ２５．３ｍｇ
リン酸モノカリウム １５ｍｇ
リン酸二カルシウム ５５ｍｇ
クエン酸カリウム ９０ｍｇ
炭酸カルシウム １００ｍｇ
塩酸マグネシウム ２４．８ｍｇ
前記ビタミン及びミネラル混合物は、非常に多様に使用することができるが、それは本発明の範疇を逸脱するものではない。
【０１０３】
健康飲料の製造
複合生薬材抽出物粉末 １０００ｍｇ
クエン酸 １０００ｍｇ
オリゴ糖 １００ｇ
アプリコット濃縮 ２ｇ
タウリン １ｇ
蒸留水 ９００ｍＬ
通常の健康飲料製造方法によって前記の成分を混合した後、約１時間８５℃で撹拌加熱した後、作られた溶液をろ過し、滅菌された２Ｌ容器に取得して密封滅菌した後、冷蔵保管し、本発明の健康飲料組成物製造に使用する。
【０１０４】
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適合した成分を好ましい実施例として混合組成したが、需要階層や、需要国家、使用用途など、地域的、民族的嗜好度によってその配合比を任意に変形実施してもかまわない。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
以上詳しく見たように、本発明の高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物及び黄ごん抽出物は、脳虚血時に発生する神経細胞死を阻害する効果が優れているだけではなく、人体に無害であり、神経細胞の壊死によって発生する神経変性疾患を予防及び治療するために使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
本発明の前記及び他の目的、特性及び他の利点は、下記の詳細な説明とそれに伴った図面を通じて、より明らかに理解されるだろう。
（図１）ＭＣＡｏ２時間後及び再潅流２４時間後にＴＴＣで染色してデジタルカメラで撮影した結果、脳梗塞を示す脳切片写真である。
（図２）対照群、陽性対照群、及び本発明の抽出物の、マウスＭＣＡｏモデルで神経保護活性に対する比較グラフである（それぞれの黒い点は、各マウスに対する個別値を示す）。
（図３〜図６）感覚運動機能に対する本発明の抽出物の回復効果を示したグラフである。
（図３）２０時間目に測定されたロータロッドテスト結果を示したグラフである。
（図４）２１時間目に測定されたプレヘンシルトラクション（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ）テスト結果を示したグラフである。
（図５）２２時間目に測定された平均台テスト結果を示したグラフである。
（図６）ＭＣＡｏ後、２３時間目に測定されたフットフォルト（ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ）テスト結果を示したグラフである。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び治療効果を有する複合生薬材抽出物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
２０世紀になって、人間の平均寿命が生命科学と医学の急速な発達によって長くなり、老齢人口増加が社会問題化してきている。特に、神経系の致命的な機能性疾病である脳卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病など老人性神経疾患が増加した。
【０００３】
神経系における神経細胞の成長、分化及び死滅は、一般的な発達、組織的特異的な機能の確立及び恒常性維持にそれぞれ重要な調節過程である。
【０００４】
脳血管疾患は、大きく２種類の形態に分類することができる。一つは、脳出血などに見られる出血性脳疾患で、もう一つは脳血管の閉鎖などによって現れる虚血性脳疾患である。出血性脳疾患は、交通事故などによって主に現れ、虚血性脳疾患は主に老齢の人々によく現れる疾患である。
【０００５】
大脳に一時的な脳虚血が誘発される場合、酸素とブドウ糖の供給が遮断されて神経細胞ではＡＴＰ減少、浮腫（ｅｄｅｍａ）が発生して、結局、脳の広範囲な損傷が誘発される。神経細胞の死滅は、脳虚血があった後、相当な時間経過後に現れる。これを遅延性神経細胞死（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ）と言う。遅延性神経細胞死は、モンゴリアン・ジャービル（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ ｇｅｒｂｉｌ）を使用した一過性前脳虚血モデル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）を通じた実験で詳しく見ると、５分間脳虚血誘導４日後、海馬（ｈｉｐｐｃａｍｐｕｓ）のＣＡ１領域で神経細胞死が観察されると報告されている（Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ，Ｓａｎｏ Ｋ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．，１９８４年，第６２巻，２０１〜２０８頁；Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９８２年，第２３９巻，５７〜６９頁）。
【０００６】
今まで最も多くの人々が受け入れている脳虚血による神経細胞死の機序には、２種類がある。一つは、脳虚血によって細胞外に過度なグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）が蓄積されるようになって、このようなグルタメートが細胞内に流入し、結局過度な細胞内カルシウムの蓄積により神経細胞死が誘発されるという、興奮性神経細胞死の機序（Ｋａｎｇ ＴＣ，等，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．，２００１年，第３０巻，９４５〜９５５頁）であり、もう一つは、虚血・再潅流時に急激な酸素供給によって生体内ラジカルの増加によるＤＮＡ及び細胞質に損傷を受けて誘発されるという酸化性神経細胞死の機序である（Ｗｏｎ ＭＨ，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９９年，第８３６巻，７０〜７８頁；Ｓｕｎ ＡＹ，Ｃｈｅｎ ＹＭ．Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１９９８年，第５巻，４０１〜４１４頁；Ｆｌｏｗｅｒｓ Ｆ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ＪＪ．Ｎｅｗ Ｈｏｒｉｚ．，１９９８年，第６巻，１６９〜１８０頁）。
【０００７】
このような機序的な研究を土台にして脳虚血時に現れる神経細胞死を効果的に抑制する物質を探索する研究、または物質に対する機序を明らかにする研究が多く遂行されている。しかし、いまだに効果的に脳虚血による神経細胞死を抑制する物質は、ほとんどないのが実情である。
【０００８】
今まで唯一、脳虚血治療剤としてＦＤＡ公認の市販中の組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ−ＰＡ）は、脳虚血を誘発させる血栓を血栓溶解剤で溶かして酸素及びブドウ糖の早期供給を誘導する物質である。したがって、直接的に神経細胞を保護するのではないので、早期使用が必要であり、血栓溶解剤という特徴のため過量の使用や頻繁な使用時には、血管壁が薄くなって結局は出血性脳血管疾患を誘発するようになる。
【０００９】
また、初期のカルシウム流入を効果的に抑制するためのカルシウムチャンネル抑制剤（ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）であるＭＫ−８０１の場合、臨床的テストが実行されたが、その副作用のため薬物が廃棄されたことがある。
【００１０】
一方、韓国国内の場合、多数の天然物質が脳卒中予防に効果がある健康食品として市販されているが、これらの大部分は、科学的な検証を経ていないものが多く、かえって健康食品乱用の原因になり、社会的な問題になっている。
【００１１】
したがって、長期間使用されてその安全性が立証された天然資源を客観的に検証して、脳疾患治療及び予防効果を有する天然物質を開発しようとする努力が早急に求められている。
【００１２】
高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ． Ａ． Ｍｅｙｅｒ）は、五加皮科に属する多年生薬草であり、各種生理活性を有するサポニン（Ｓａｐｏｎｉｎ）系誘導体化合物が主要薬効を有し、ジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）の含量が品質の指標になると報告されている。漢方処方では、健胃消化薬、整腸止瀉薬、陣痛鎮痙薬からなる処方などに使用され、薬理作用では血糖降下作用、抗癌効果、血清蛋白合成促進、抗体生産促進作用、中枢興奮作用、抗疲労作用などがある（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ， Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４３９〜４４４頁）。
【００１３】
刺五加は、刺五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＡＳ）とも言って、韓国国内で五加皮（オガピ）またはオガルピとして知られている。五加皮は、たらの木科で多数の種があるが、それらの中で刺があるものを刺五加皮という。動物実験の結果、刺五加皮はひどい血液循環障害と酸素欠乏症状がある生命体の抵抗性を増進させる機能と効果を示し、物理的（寒さ、熱と循環運動、強制的浮動等）、化学的、生物学的悪影響に対して抵抗力を増進させるのみならず、体内の大量の抗体形成にも効果を示した（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４３３〜４３５頁）。
【００１４】
当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）は、セリ科に属する多年生薬草で、漢方処方では各種婦人科疾患、更年期障害、不妊などを治療する目的に使用されてきた。現在は、不整脈、虚血性中風、脳動脈硬化、貧血、血栓閉塞性血管炎、高血圧及び不眠症等に応用されている。薬理作用では、抗血栓作用、造血作用、心臓収縮抑制作用、血管弛緩作用、血中脂質濃度降下による粥状動脈硬化抑制作用、免疫調節作用、抗癌作用及び抗炎症作用などが報告されている（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，４０６〜４０８）。
【００１５】
黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）は、双葉植物筒花植物目ウツボグサ科の多年生草で山地の草原で育ち、韓国、中国、モンゴル及びシベリア東部等に分布する。漢方では、根を解熱、利尿、止瀉、利膽及び消炎剤に使用して、薬用植物として栽培する（Ｃｈｕｎｇ Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｈｉｎ Ｍ．Ｋ．ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｃｈｅｏｎ，Ｙｏｕｎｇｒｉｍｓａ，１９９８年，８６４〜８６５頁）。
【００１６】
しかし、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物の脳疾患治療効果に対しては、参考文献として本文に挿入した前記引用文献のどこにも報告または記載されていない。
【００１７】
いくつかの生化学的実験を通じて、神経成長及び分化に対する効果を観察し、前記複合生薬材抽出物が、脳卒中及び神経変性疾患の主な原因である神経細胞死滅を抑制する役割をするのかを確認するために、本発明者等は、動物モデルを使用して４種の感覚運動機能テストを実施し、最後に前記抽出物が神経細胞死滅を抑制することを確認することにより本発明を完成した。
【００１８】
本発明のこのような目的は、下記の本発明の詳細な説明によってさらに明確になるだろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
大脳に一時的な脳虚血が誘発される場合、酸素とブドウ糖の供給が遮断されて神経細胞ではＡＴＰ減少、浮腫（ｅｄｅｍａ）が発生して、結局、脳の広範囲な損傷が誘発される。神経細胞の死滅は、脳虚血があった後、相当な時間経過後に現れる。これを遅延性神経細胞死（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ）と言う。遅延性神経細胞死は、モンゴリアン・ジャービル（Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ ｇｅｒｂｉｌ）を使用した一過性前脳虚血モデル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）を通じた実験で詳しく見ると、５分間脳虚血誘導４日後、海馬（ｈｉｐｐｃａｍｐｕｓ）のＣＡ１領域で神経細胞死が観察されると報告されている（Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ，Ｓａｎｏ Ｋ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．，１９８４年，第６２巻，２０１〜２０８頁；Ｋｉｒｉｎｏ Ｔ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９８２年，第２３９巻，５７〜６９頁）。
【００２０】
今まで最も多くの人々が受け入れている脳虚血による神経細胞死の機序には、２種類がある。一つは、脳虚血によって細胞外に過度なグルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）が蓄積されるようになって、このようなグルタメートが細胞内に流入し、結局過度な細胞内カルシウムの蓄積により神経細胞死が誘発されるという、興奮性神経細胞死の機序（Ｋａｎｇ ＴＣ，等，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．，２００１年，第３０巻，９４５〜９５５頁）であり、もう一つは、虚血・再潅流時に急激な酸素供給によって生体内ラジカルの増加によるＤＮＡ及び細胞質に損傷を受けて誘発されるという酸化性神経細胞死の機序である（Ｗｏｎ ＭＨ，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９９年，第８３６巻，７０〜７８頁；Ｓｕｎ ＡＹ，Ｃｈｅｎ ＹＭ．Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１９９８年，第５巻，４０１〜４１４頁；Ｆｌｏｗｅｒｓ Ｆ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ＪＪ．Ｎｅｗ Ｈｏｒｉｚ．，１９９８年，第６巻，１６９〜１８０頁）。
【００２１】
このような機序的な研究を土台にして脳虚血時に現れる神経細胞死を効果的に抑制する物質を探索する研究、または物質に対する機序を明らかにする研究が多く遂行されている。しかし、いまだに効果的に脳虚血による神経細胞死を抑制する物質は、ほとんどないのが実情である。
【００２２】
今まで唯一、脳虚血治療剤としてＦＤＡ公認の市販中の組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ−ＰＡ）は、脳虚血を誘発させる血栓を血栓溶解剤で溶かして酸素及びブドウ糖の早期供給を誘導する物質である。したがって、直接的に神経細胞を保護するのではないので、早期使用が必要であり、血栓溶解剤という特徴のため過量の使用や頻繁な使用時には、血管壁が薄くなって結局は出血性脳血管疾患を誘発するようになる。
【００２３】
また、初期のカルシウム流入を効果的に抑制するためのカルシウムチャンネル抑制剤（ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）であるＭＫ−８０１の場合、臨床的テストが実行されたが、その副作用のため薬物が廃棄されたことがある。
【００２４】
一方、韓国国内の場合、多数の天然物質が脳卒中予防に効果がある健康食品として市販されているが、これらの大部分は、科学的な検証を経ていないものが多く、かえって健康食品乱用の原因になり、社会的な問題になっている。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
前記目的を達成するために、本発明は、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための薬学的組成物を提供する。
【００２６】
好ましくは、前記高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物は、１〜５：２〜７：２〜７：１、より好ましくは、２：５：４：１の割合である。
【００２７】
前記抽出物は、水、メタノール、エチルアルコールのような低級アルコール、好ましくは、メタノールまたはその混合物で植物を抽出して取得された抽出物を含む。
【００２８】
本発明の目的は、高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、刺五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＳ）、当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）、黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）を含む複合生薬材抽出物の、ヒトまたは哺乳動物での神経細胞を保護することによる脳卒中の治療及び予防のための治療剤製造への用途を提供するものである。
【００２９】
本発明の目的は、高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、刺五加（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ＨＡＲＭＳ）、当帰（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ＤＩＥＬＳ）、黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ ＧＥＯＲＧＩ）を含む複合生薬材の抽出物の治療的有効量を薬学的に許容可能な担体とともに哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療または予防する方法を提供するものである。
【００３０】
本発明は、生理学的に許容可能な添加剤とともに、高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための健康食品または食品添加剤を提供する。
【００３１】
神経細胞死によって誘発される神経変性疾患では、卒中、中風、老年認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンテントン病、ピック（Ｐｉｃｋ）病、及びクロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病が含まれ得る。
【００３２】
本発明の薬学的組成物は、組成物全体重量に対して前記抽出物を約０．０１〜５０重量％で含むことができる。
【００３３】
本発明の健康食品は、全体組成物の重量に対して上記組成物を０．０１〜８０％、好ましくは１〜５０％含む。
【００３４】
前記健康食品は、健康食品、健康飲料などに作ることができ、粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセル、飲料などに使用することができる。
【００３５】
本発明の抽出物は、下記の好ましい実施例によって製造できる。
【００３６】
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明の抽出物は、詳細には下記の過程によって製造される。
【００３７】
本発明の高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんを含む複合生薬材抽出物は、次のように製造することができる。黄ごんを除いて乾燥し、切って粉砕して５〜３５倍、好ましくは約１０倍容積の蒸留水、メタノール、エチルアルコール、ブタノールなどまたはそれらの混合物、好ましくは熱水と混合する。溶液は、摂氏２０〜１００度、好ましくは摂氏６０〜１００度で１〜２４時間熱水処理して、熱水、冷水、還流抽出超音波抽出を１〜５回、好ましくは２〜３回連続的に抽出する。残余物は、ハチ蜜と残っている乾燥した黄ごんに追加して熱水と４８〜１２０時間、好ましくは９６時間追加的に抽出する。取得した抽出物は、ろ過して上澄み液を取得して摂氏２０〜１００度、好ましくは５０〜７０度で回転蒸発器で濃縮した後、水、低級アルコールまたはその混合物に溶解することができる複合生薬の乾燥抽出粉末を取得するために、真空凍結乾燥、熱風乾燥または噴霧乾燥によって乾燥して熱風乾燥する。
【００３８】
本発明のまた他の実施例として、本発明の生薬材抽出物は、以下により構成される工程を含む。（ａ）高麗人参、刺五加に約５〜２５倍、好ましくは２〜８倍の蒸留水、メタノール、エチルアルコール、ブタノールなどのような低級アルコールまたはそれらの混合物、好ましくは熱水を追加して、摂氏２０度〜１００度、好ましくは６０度〜１００度の温度で１〜２４時間還流抽出して抽出物を取得し、ろ過及び乾燥して濃縮された抽出物を取得する工程。（ｂ）白茯苓パウダー及びハチ蜜を生地黄汁とよく混合して添加した後、４８〜１２０時間、好ましくは９６時間熱水で抽出しながら黄ごんを添加して本発明の複合生薬材抽出物を取得する工程。
【００３９】
したがって、本発明はまた、前記製造方法による複合生薬材抽出物を提供する。
【００４０】
追加的に極性溶媒及び非極性溶媒に溶解可能な本発明の抽出物は、次の工程の過程によって製造することができる。前記工程によって製造された抽出物を水に懸濁して１〜１００、好ましくは１〜５倍容積の非極性溶媒（エチルアセテート、クロロホルム、ヘキサンなど）と混合して、非極性溶媒溶解層を集めて本発明の非極性溶媒溶解性抽出物を取得し、残っている極性溶媒溶解性層は集めて、水、低級アルコールまたはそれらの混合物に溶解可能な本発明の極性溶媒溶解可能抽出物を取得する。また、前記過程は変更されてもよく、またはさらなる段階に供されてもよく、当技術分野で通常のよく知られた方法、例えば、文献（Ｈａｒｂｏｒｎｅ Ｊ．Ｂ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｏｄｅｒｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．，３ｒｄ Ｅｄ．，１９９８年，６〜７頁）に記載された方法によって、より潜在的な画分または化合物を分画または分離することができる。
【００４１】
前記複合生薬材抽出物が、ＭＣＡｏ動物モデルで発生した局所脳虚血による神経損傷に効果があるかどうか調べるための実験を通じて、抽出物が局所脳虚血による神経細胞死滅を抑制して神経保護活性を示すことを確認した。
【００４２】
また、本発明は、前記製造方法によって製造された活性成分で神経細胞を保護し、脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための前記複合生薬材抽出物を含む薬学的組成物を提供する。
【００４３】
したがって、本発明は、前記製造方法で取得される神経細胞保護活性を有する複合生薬材抽出物を提供する。
【００４４】
本発明のまた他の目的は、前記製造方法によって製造された前記複合生薬材の抽出物を有効量で哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療または予防する方法を提供するものである。
【００４５】
本発明の神経細胞を保護することによって脳卒中及び神経変性疾患を治療及び予防するための組成物は、全体組成物の重量に対して前記抽出物を０．０１〜５０％含む。
【００４６】
本発明の組成物は、追加的に通常の担体、アジュバントまたは希釈剤を当技術分野でよく知られた方法を使用して一緒に含むことができる。前記担体は、用法及び服用法によって適合した成分を使用するのが好ましいが、それに限定されるものではない。適当な希釈剤は、レミントンの製薬（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ）テキストに目録で記載されている。
【００４７】
下記の製剤化方法及び添加剤は、単なる例であって、本発明を制限するものではない。
【００４８】
本発明による組成物は、薬学的に許容可能な担体、アジュバントまたは希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キリシトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油を含む薬学的組成物として提供することができる。剤形は、追加的に、充填剤、抗凝固剤、増量剤、湿潤剤、香辛料、崩壊剤、防腐剤などを使用して調剤される。本発明の組成物は、当技術分野でよく知られた方法を使用して患者に投与後、活性成分を早く持続的に徐々に放出するように（速放型、持続徐放型、徐放型）製剤化することができる。
【００４９】
例えば、本発明の組成物は、一般的に注射のために使用される油、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）または他の溶媒に溶解することができる。担体の適切な例は、生理学的食塩水、ポリエチレングリコール、エチルアルコール、植物性油、イソプロピルミリステートなどを含むが、これに限定されるものではない。局所投与のための本発明の抽出物は、軟膏やクリーム形態に製剤化することができる。
【００５０】
本組成物を含む薬学的製剤は、それぞれ通常の方法によって散剤、錠剤、カプセル剤、軟性カプセル剤、水性薬剤、エリキシルピル（ｅｌｉｘｉｒ ｐｉｌｌ）、シロップ、エアゾールなどの経口型剤形、またはクリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム、パッチ、ペースト、噴霧液、エアゾールなどの局所剤形または溶液、懸濁液、エマルジョンなどの注射剤形に製剤化することができる。
【００５１】
薬学的服用形態の本発明の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができ、単独でまたは適当に一緒に使用することができ、他の薬学的に活性がある成分とともに使用することができる。
【００５２】
本発明の抽出物または組成物の好ましい服用量は、患者の状態及び体重、重症度、剤形、経路及び投与期間によって変えることができ、当業者によって選択されうる。しかし、好ましい効果を得るためには、本発明の抽出物が１日当り体重１ｋｇ当たり１０ｇ／ｋｇ、好ましくは１〜３ｇ／ｋｇの量で投与されることが勧奨される。外用剤、座剤及び滅菌注射溶液の形態に剤形化して使用することができる。服用量は、一日に一度または何回に分けて投与することができる。組成物において、本発明の抽出物の量は、全体組成物の重量に対して０．０１〜５０重量％、好ましくは０．５〜４０重量％で含まれる。
【００５３】
本発明の薬学的組成物は、多様な経路を通じて哺乳類のような動物（ラット、マウス、飼育用動物または人間）に投与することができる。投与のすべての方式が意図される。例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜、髄膜腔内、硬膜外または脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与することができる。
【００５４】
また、本発明は、神経細胞保護活性を有する高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物及び黄ごん抽出物からなる複合生薬材抽出物を含む、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び改善用健康食品を提供する。健康食品は、前記抽出物０．０１〜８０重量％、アミノ酸０．００１〜５重量％、ビタミン０．００１〜２重量％、糖０．０１〜２０重量％、有機酸０．００１〜１０重量％及び薬学的に許容可能な食品添加剤である適量の甘味料及び香料を添加して製造することができる。
【００５５】
前記複合生薬材抽出物は、神経細胞保護活性によって脳卒中及び神経変性疾患を予防及び改善するための食品及び飲料に添加することができる。
【００５６】
健康食品を開発するための本発明の抽出物を含む食品添加物の例としては、多様な食物、飲料、ガム、ビタミン複合剤、健康増進食品及びその類似物などがあり、粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセルまたは飲料の形態で使用することができる。
【００５７】
また、本発明の抽出物は、例えば、粉乳、成長期粉乳、成長期食餌のような子供及び乳児の食品に含ませて、神経細胞保護によって脳卒中及び神経変性疾患を予防及び向上させることができる。
【００５８】
前記組成物は、食物、添加剤または飲料に添加することができる。ここで、食品や飲料内の前記抽出物の量は、一般的に健康食品組成物の全体食品質量に対して約０．１〜８０ｗ／ｗ％、好ましくは１〜５０ｗ／ｗ％であって、健康飲料組成物１００ｍＬに対して１〜３０ｇ、好ましくは３〜１０ｇである。
【００５９】
本発明の健康飲料組成物は、基本成分で前記抽出物を表示された割合で含み、他の液体成分には特別な制限がなく、他の成分は多様な防臭剤または通常の飲料のような天然の炭水化物であり得る。前記天然炭水化物の例は、グルコース、フルクトースなどのような単糖類；マルトース、スクロースなどの二糖類；デキストリン、クロデキストリンなどのような通常の糖；及びキリシトール及びエリスリトールなどの糖アルコールである。前記の外に他の防臭剤として、タウマチンのような天然防臭剤、レバウジオシドＡ、グリシリジンなどのようなステビア抽出物及びサッカリン、アスパルテームなどのような防臭剤を使用することができる。前記天然炭水化物は、一般的に本発明の飲料組成物１００ｍＬに対して約１〜２０ｇ、好ましくは５〜１２ｇである。
【００６０】
前記組成物の外に多様な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び充填剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。前記の外に他の成分は、天然果物ジュース、果物ジュース飲料及び野菜飲料を製造するための果物ジュースであり得る。前記成分は、独立的にまたは混合して使用することができる。成分比は、あまり重要ではないが、一般的に本発明の組成物１００ｗ／ｗ％当り約０〜２０ｗ／ｗ％である。前記抽出物を含む食品の例は、多様な食品、飲料、ガム、ビタミン総合剤、健康改善食品などである。
【００６１】
本発明の組成物は、追加的にクエン酸、フマル酸、アジピン酸、乳酸、リンゴ酸のような有機酸、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ピロホスファート、ポリホスファートのようなリン酸、ポリフェノール、カテキン、アルファトコフェロール、ローズマリー抽出物、ビタミンＣ、緑茶抽出物、リコリス根抽出物、キトサン、タンニン酸、フィト酸などのような天然抗酸化物中の一つまたはそれ以上を含むことができる。
【００６２】
前記本発明の抽出物は、２０〜９０％の高濃度液体、粉末または顆粒型であり得る。
【００６３】
同様に、本発明の前記抽出物は、追加的に少なくても一つのラクトース、カゼイン、デキストロース、グルコース、スクロース及びソルビトールを含むことができる。
【００６４】
本発明の抽出物は、毒性及び副作用がない。したがって、安全に使用することができる。
【００６５】
本発明の組成物、用途及び製造において、多様な変形及び変化が可能であることは、当業者には自明なことである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６６】
以下、本発明を下記実施例及び実験例によって詳細に説明する。
但し、下記の実施例及び実験例は本発明を例示するだけのものであって、本発明の内容が下記実験例によって限定されるものではない。
【００６７】
実施例１．複合生薬材抽出物の製造（１）
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんは、市販品を購入して慶煕大学校漢方医科大学本草学教室の検証を受けて実験に使用した。まず、高麗人参６６０ｇを３Ｌの３次蒸留水で２時間還流抽出した後、取得された抽出物を減圧濃縮及び凍結乾燥器（Ｓｐｅｃ ３０００，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｃｏ．米国）で凍結乾燥して抽出物２００ｇを得た。刺五加は、３００ｇを前記と同じ方法を遂行して抽出物２０ｇを得た。当帰は、３５０ｇで抽出物５０ｇを得た。黄ごんは、８０ｇで抽出物１０ｇを得た。
【００６８】
前記の抽出物を抽出する前の薬剤の用量にして２：５：４：１の割合で混合して下記の実験試料に使用した。
【００６９】
実施例２．複合生薬材抽出物の製造（２）
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごんは、市販品を購入して慶煕大学校漢方医科大学本草学教室の検証を受けて実験に使用した。
【００７０】
高麗人参、刺五加、当帰及び黄ごん薬剤を２：５：４：１の割合で混合して混合薬剤１，２００ｇを３Ｌの３次蒸留水で２時間還流抽出した。取得された抽出物を減圧濃縮及び凍結乾燥器（Ｓｐｅｅｄ Ｓｐｅｃ ３０００，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｃｏ．米国）で凍結乾燥して抽出物（１６３．５４ｇ）を得て試料に使用した。
【００７１】
前記の工程を通じて製造された四種類の生薬材の抽出物は、後述する実験の試験例に使用した。
【００７２】
実験例１：ＭＣＡｏ実験モデル
前記実施例１で取得した複合生薬材抽出物の神経細胞損傷防御効果を測定するためにゼア等（Ｚｅａ ＬＥ．，等，Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９年，第２０巻，８４〜９１頁）の方法を応用した血管内縫合糸挿入法（ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ ｓｕｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ）を使用した。
実験方法を下記に示す。
【００７３】
方法
実験動物に約２８０ｇ、８週齢のスプラーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄｏｗｌｅｙ）雄のマウスを韓国セムタゴ社から購入して飼料と水を充分に供給しながら１週間実験環境に適応させた後、実験に使用した。
【００７４】
マウスを７０％Ｎ２Ｏと３０％Ｏ２が混じった混合ガスに５％のイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｒａｎｅ）で全身麻酔をした後、一方は採血のための注射器を、もう一方は血圧測定用プローブ（ｐｒｏｂｅ）を挿入して血圧を観察した。採血をした後、血糖及び血液ガスを分析して観察した。首前方部位中央の皮膚を切開して右側頚動脈と外頚動脈（ＥＣＡ）を周囲組織と神経から注意深く分離した。外頚動脈分枝である上部甲状腺動脈と喉頭動脈を電気焼灼器で焼灼して内径動脈の分枝である翼突筋口蓋動脈を電気焼灼して外頚動脈を切ってプローブを外頚動脈から内径動脈に挿入した。プローブは、４−０ナイロン糸が２３ｍｍの血管に対する接着力を増加させるために活性化剤で固形化されたポリシロキサンのようなシリコン成分でコーティングされる工程によって作った。ＩＣＡは、コーティングされたプローブの約１０ｍｍ結紮して挿入地点から２０ｍｍまたはそれ以下に至るようにして抵抗が感じられるように挿入した。プローブは、閉鎖不全を防ぐために同時に固定した。皮膚切開部位は再び縫合し、マウスは麻酔された状態から自然に回復した。挿入されたプローブは、ＭＣＡ血液の流れを妨害して局所虚血を誘発した。２時間後に、マウスは頚動脈の血液流れを除去するために再び麻酔した。それから２２時間後に、マウスを屠殺して脳を摘出し、脳組織を顕微鏡で観察した。
【００７５】
体温が、３７±０．５℃になるように維持しながら観察した。尾を切開し、末端組織は除去してブレインマトリックスによって２ｍｍ厚の６枚の脳切片を取得した。２％のトリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）溶液適正量を生理食塩水で希釈して、９ウェルプレートに入れた。脳切片を添加して摂氏３７度で３０分間染色した。染められた組織は、デジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｃｏ．ｃ２５００Ｌモデル， 米国）で撮影した。脳梗塞部位の体積は、ＯＰＴＩＭＡＳプログラム（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ．，６．５１バージョン）で計算した。浮腫の体積を除いた右半球の拡散した脳梗塞部位体積（Ａ）を測定するために脳梗塞の実際体積は次の数式１及び２で計算した。
【００７６】
（数１）
脳梗塞の割合（％）＝（Ａ−Ｂ／Ａ）×１００
Ａ：正常左半球の体積（ｍｍ３）、Ｂ：校正された脳梗塞の体積（ｍｍ３）
【００７７】
（数２）
校正された脳梗塞の体積（ｍｍ３）＝（正常左半球の体積）−（損傷半球の正常部位体積）
【００７８】
薬物処理
誘発直後及び１２０分後に、対照群には水を、試験群には前記実施例１の複合生薬材抽出物を試料として経口投与した。ここで、脳動脈の膨脹を避けて薬物の用量による効能を調べるために、複合生薬材抽出物を８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇでそれぞれマウス体重１００ｇ当たり０．３ｍＬずつの体積で３次蒸留水に希釈して、閉塞２時間及び４時間後に二度投与した。陽性対照群動物は、同じ方法で４５ｍｇ／ｋｇのミノサイクリン（ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ）で処理した。
【００７９】
複合生薬材抽出物の脳組織及び脳神経保護効果を測定した結果を、図１及び図２に示した。図１で二つの脳組織切片を比べて見ると、対照群に比べて複合生薬材抽出物を投与した群は、ＴＴＣ染色されない死滅した部位の面積が少なく、ＴＴＣ染色されて黒赤色になった部位の面積が少ないことが分かった。参考に、ＴＴＣで脳組織を染色すると、損傷によって組織が死滅した部位は、染色されない白い状態になり、正常部位の組織は黒赤色の状態になる。
【００８０】
また、図２を見ると、水投与した対照群は脳梗塞割合（％）が３４．７±１．７７％であったのに比べて、陽性対照群で使用したミノサイクリンを４５ｍｇ／ｋｇ投与時の脳梗塞割合は２０．５±２．８５％であった。また、複合生薬材抽出物８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時、それぞれ３４．７±４．１９％、２５．６±１．８６％及び２３．４±２．４０％の脳組織損傷を示し、濃度依存的に脳組織損傷に対する保護効果を示した。特に、複合生薬材抽出物４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時は、対照群に比べてそれぞれ２９％及び３４％の神経組織保護効果を示し、陽性対照群であるミノサイクリン４５ｍｇ／ｋｇに比べて７０及び８１％の保護効果を示した。
【００８１】
実験例２．複合生薬材抽出物の感覚運動機能回復効果
脳損傷は、身体感覚運動機能損失ももたらすため、前記実施例１の複合生薬材抽出物の脳損傷による均衡感覚、運動機能及び筋肉調和など感覚運動機能失調に対する保護（回復）効果を下記のような様々な実験を通じて測定した。
文献に記載されたよく知られた方法を変形して使用した。
【００８２】
２−１．ロータロッドテスト（ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発２０時間後に感覚運動機能に及ぼす効果を評価するためにロータロッドテスト（ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）を実施した。ロータロッドテストは、脳損傷モデル特に中風モデルや脊髄神経損傷モデルにおいて、脳損傷と非常に密接な結果を示すテスト中の一つで、感覚運動機能失調を評価するのに非常に適している。ロータロッドテストのためにバジレ社（ｂａｓｉｌｅ社，イタリア）のロータロッドを使用した。２分にＲＰＭが２５まで上がる加速回転で実験に臨んだ。実験動物で中風を誘発したマウスは、棒の中央に均衡を取るようにおいた後、ロッドが回転を始めた時間からマウスが落ちる時までの時間を測定して評価した。マウスごとに５回実施して最高値と最低値を除いた中間３回の値を平均してデータに使用した。
【００８３】
図３に中風誘発後２０時間に測定したロータロッドテスト結果を示した。シャム群が９２．４±１５．９２秒（ｐ＜０．０１）、対照群が２４．８±６．３２秒間運動した一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ１５±７．１４秒、７４．１±１２．５９秒及び６３．１±１０．０８秒を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性のある感覚運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．００１）。
【００８４】
２−２．プレヘンシルトラクションテスト（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発後２１時間に筋肉の筋力に及ぼす影響を評価するために、ワラス（Ｗａｌｌａｃｅ．Ｊ．Ｅ．，等， Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．，１９８０年，第３５巻，３６４〜３７０頁）の方法を変形したプレヘンシルトラクションテスト（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）を実施した。この方法は、マウスの足筋肉の筋力を評価するのに良い方法である。
【００８５】
まず、マウスを３ｃｍの四角棒にぶら下がるようにして落ちる時までの時間を測定し、毎回５回実施して中間の３回の値を平均してデータに使用した。
【００８６】
その結果、図４に示したように対照群は６．６±０．９０秒を持ち堪えた。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ７．２±２．０８秒、１１．０±１．５８秒及び７．０±２．３１秒を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性をもって運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．０５）。
【００８７】
２−３．平均台テスト（ｂａｌａｎｃｅ ｂｅａｍ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、脳虚血誘発後２２時間に均衡感覚に及ぼす効果を測定するために均衡台テスト（ｂａｌａｎｃｅ ｂｅａｍ ｔｅｓｔ）をプルネン等（Ｐｕｕｒｕｎｅｎ Ｋ．，等，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１年、第４０巻，５９７〜６０６頁）の方法を若干変形して下記のように実施した。本テストは、マウスの均衡感覚を測定して前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）の機能を測定する方法で中風誘発後脳機能損傷を測定するのに良いテスト中の一つである。
【００８８】
まず、幅２．５ｃｍ、長さ１２２ｃｍの木の棒を床から約４２ｃｍの高さにかけておいて、中心にマウスを均衡を取るようにおいた後、３０秒間マウスの行動を見て３人の観察者がその点数を付ける。点数の評価基準を下記に示す。０点；棒で均衡を取ることができない状態。１点；３０秒間均衡を取るだけで他の動きがない状態。２点；３０秒間均衡を取って棒の長さ方向に身を向ける状態。３点；２点で身を向けた状態で棒の長さ方向に歩くがステップの５０％以上が滑る状態。４点；３点で滑るのが５０％以下の状態。５点；４点で１ステップ程度滑る状態。６点：５点で滑るステップなしに自由に歩く状態と決めて実施した。マウスごとに３回実施して平均値をデータに使用した。
【００８９】
その結果、図５に示したように、シャム群は３．４±０．３９点、対照群は１．５±０．１９点を示した。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時にそれぞれ１．６±０．２５点、２．７±０．１８点及び２．１±０．２３点を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて有意性のある運動機能失調に対する保護効果を示した（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０５）。
【００９０】
２−４．フットフォルトテスト（Ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ ｔｅｓｔ）
前記実施例１の複合生薬材抽出物が、中風誘発後２３時間に運動機能に及ぼす効果を測定するためにマークグラフ（Ｍａｒｋｇｒａｆ ＣＧ．，等，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，１９９２年，第５７５巻，２３８〜２４６頁）のフットフォルトテスト（Ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ ｔｅｓｔ）の方法を若干変形して下記のように実施した。このテストは、中風誘発後運動調和と精緻な運動を測定するのに良い方法である。
【００９１】
まず、間隔が２．５ｃｍ、直径２ｍｍの針金からなる幅２３．５ｃｍ、長さ４３．５ｃｍの格子を床から約９２ｃｍ上にかけておき、マウスを中央においた後、６０秒間前足の全体のステップから一方のステップで滑って格子の間にはまる数の割合とし、３回実施して平均値をデータに使用した。
【００９２】
その結果、図６に示したように、シャム群は１．６±０．１４％（ｐ＜０．０１）、対照群は１６．６±２．８７％のフットスリップ（ｆｏｏｔ ｓｌｉｐ）を示した。一方、複合生薬材抽出物は８０、４００及び２０００ｍｇ／ｋｇ投与時それぞれ２０．５±６．２５％、１０．７±２．２５％（ｐ＜０．０１）及び１５．４±２．１２％を示し、４００ｍｇ／ｋｇの投与用量で対照群に比べて運動機能失調に対する保護傾向を示した。
【００９３】
実験例３．急性毒性実験
方法（１）
ＩＣＲ系マウス（体重２５±５ｇ）とスプラーグ・ドーリーラット（２３５±１０ｇ、中央実験動物）をそれぞれ１０匹ずつ４群に分けて、本発明の複合生薬材抽出物それぞれ２５０、５００、１０００及び５０００ｍｇ／ｋｇ及び溶媒（０．２ｍＬ）を経口投与した後、２週間毒性の有無を観察した結果、４群全てで死亡した例が一匹もなく、外見上対照群と何ら変わった症状を見いだすことができなかった。
【００９４】
方法（２）
ＩＣＲ系マウスとスプラーグ・ドーリーラットをそれぞれ１０匹ずつ４群に分けて、本発明の複合生薬材抽出物それぞれ２５、２５０、５００及び７２５ｍｇ／ｋｇ及び溶媒（０．２ｍＬ）を経口投与した後、２４時間の毒性有無を観察した。結果は、４群全てで死亡した例が一匹もなく、外見上対照群と何ら変わった症状を見いだすことができなかった。
【００９５】
結果
本発明の複合生薬材抽出物は、急性毒性がほとんどないことが確認された。
【００９６】
下記に本発明の複合生薬材抽出物を含む薬学的組成物の製剤例を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、これらは単に具体的に説明するためのものである。
【００９７】
散剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
タルク １０ｍｇ
前記の成分を混合して密封パッケージに充填して散剤を製造する。
【００９８】
錠剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
とうもろこし澱粉 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤製造方法にしたがって打錠して錠剤を製造する。
【００９９】
カプセル剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
とうもろこし澱粉 １００ｍｇ
ラクトース １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
通常のカプセル剤の製造方法によって前記の成分を混合してゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【０１００】
注射剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ５０ｍｇ
注射用滅菌蒸留水 適量
ｐＨ調節剤 適量
注射剤は、活性成分を溶解させてｐＨを約７．５に調節し、すべての成分を２ｍＬアンプルに充填して滅菌し、通常の注射剤製造方法によって製造する。
【０１０１】
液剤の製造
複合生薬材抽出物粉末 ０．１〜８０ｇ
糖 ５〜１０ｇ
クエン酸 ０．０５〜０．３％
カラメル ０．００５〜０．０２％
ビタミンＣ ０．１〜１％
精製水 ７９〜９４％
二酸化炭素ガス ０．５〜０．８２％
通常の液剤の製造方法によって精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させて前記の成分を混合した後、精製水を加えて全体を充填し、滅菌して液剤を製造する。
【０１０２】
健康食品の製造
複合生薬材抽出物粉末 １０００ｍｇ
ビタミン混合物 適量
ビタミンＡアセテート ７０ｍｇ
ビタミンＥ １．０ｍｇ
ビタミンＢ１ ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２ ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６ ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２ ０．２ｍｇ
ビタミンＣ １０ｍｇ
ビオチン １０ｍｇ
アミドニコチン酸 １．７ｍｇ
葉酸（Ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ） ５０ｍｇ
カルシウムパントテン酸 ０．５ｍｇ
ミネラル混合物 適量
硫酸第一鉄 １．７５ｍｇ
酸化亜鉛 ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム ２５．３ｍｇ
リン酸モノカリウム １５ｍｇ
リン酸二カルシウム ５５ｍｇ
クエン酸カリウム ９０ｍｇ
炭酸カルシウム １００ｍｇ
塩酸マグネシウム ２４．８ｍｇ
前記ビタミン及びミネラル混合物は、非常に多様に使用することができるが、それは本発明の範疇を逸脱するものではない。
【０１０３】
健康飲料の製造
複合生薬材抽出物粉末 １０００ｍｇ
クエン酸 １０００ｍｇ
オリゴ糖 １００ｇ
アプリコット濃縮 ２ｇ
タウリン １ｇ
蒸留水 ９００ｍＬ
通常の健康飲料製造方法によって前記の成分を混合した後、約１時間８５℃で撹拌加熱した後、作られた溶液をろ過し、滅菌された２Ｌ容器に取得して密封滅菌した後、冷蔵保管し、本発明の健康飲料組成物製造に使用する。
【０１０４】
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適合した成分を好ましい実施例として混合組成したが、需要階層や、需要国家、使用用途など、地域的、民族的嗜好度によってその配合比を任意に変形実施してもかまわない。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
以上詳しく見たように、本発明の高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物及び黄ごん抽出物は、脳虚血時に発生する神経細胞死を阻害する効果が優れているだけではなく、人体に無害であり、神経細胞の壊死によって発生する神経変性疾患を予防及び治療するために使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
本発明の前記及び他の目的、特性及び他の利点は、下記の詳細な説明とそれに伴った図面を通じて、より明らかに理解されるだろう。
（図１）ＭＣＡｏ２時間後及び再潅流２４時間後にＴＴＣで染色してデジタルカメラで撮影した結果、脳梗塞を示す脳切片写真である。
（図２）対照群、陽性対照群、及び本発明の抽出物の、マウスＭＣＡｏモデルで神経保護活性に対する比較グラフである（それぞれの黒い点は、各マウスに対する個別値を示す）。
（図３〜図６）感覚運動機能に対する本発明の抽出物の回復効果を示したグラフである。
（図３）２０時間目に測定されたロータロッドテスト結果を示したグラフである。
（図４）２１時間目に測定されたプレヘンシルトラクション（ｐｒｅｈｅｎｓｉｌｅ ｔｒａｃｔｉｏｎ）テスト結果を示したグラフである。
（図５）２２時間目に測定された平均台テスト結果を示したグラフである。
（図６）ＭＣＡｏ後、２３時間目に測定されたフットフォルト（ｆｏｏｔ ｆａｕｌｔ）テスト結果を示したグラフである。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物、及び黄ごん抽出物を含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、脳卒中及び神経変性疾患の神経細胞保護による予防及び治療のための薬学的組成物。
【請求項２】
前記抽出物が、水、低級アルコール、及びそれらの混合物からなる群より選択される溶媒で抽出される、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記神経変性疾患が、卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病、ピック（Ｐｉｃｋ）病、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、及び老年認知症を含む、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項４】
高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物、及び黄ごん抽出物からなる複合生薬材抽出物、並びに食品学的に許容可能な添加剤を含む、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び改善のための健康食品。
【請求項５】
粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセル、または飲料の形態として提供される、請求項４記載の健康食品。
【請求項１】
高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物、及び黄ごん抽出物を含む複合生薬材抽出物を有効成分として含む、脳卒中及び神経変性疾患の神経細胞保護による予防及び治療のための薬学的組成物。
【請求項２】
前記抽出物が、水、低級アルコール、及びそれらの混合物からなる群より選択される溶媒で抽出される、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記神経変性疾患が、卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病、ピック（Ｐｉｃｋ）病、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ）病、及び老年認知症を含む、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項４】
高麗人参抽出物、刺五加抽出物、当帰抽出物、及び黄ごん抽出物からなる複合生薬材抽出物、並びに食品学的に許容可能な添加剤を含む、脳卒中及び神経変性疾患の予防及び改善のための健康食品。
【請求項５】
粉末、顆粒、錠剤、チューイング錠、カプセル、または飲料の形態として提供される、請求項４記載の健康食品。
【公表番号】特表２００８−５２８４８１（Ｐ２００８−５２８４８１Ａ）
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５２０４５（Ｐ２００７−５５２０４５）
【出願日】平成１７年１月２５日（２００５．１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００５／０００１９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８０５９０
【国際公開日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【出願人】（５０７２５０３３５）ユニバーシティー−インダストリー コーペレーション グループ オブ キュン ヒー ユニバーシティー (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１月２５日（２００５．１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００５／０００１９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８０５９０
【国際公開日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【出願人】（５０７２５０３３５）ユニバーシティー−インダストリー コーペレーション グループ オブ キュン ヒー ユニバーシティー (2)
【Ｆターム（参考）】
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