本発明は、融合タンパク質を用いて、皮膚膜、粘膜及び他の細胞膜内に及び／又はこれらを通して並びに血管脳関門を通して、薬学的因子及び／又は画像化因子を送達する方法を含む。融合タンパク質は、リン脂質膜（例えばリポソーム）と結び付く。リポソームには、負に荷電した長鎖脂質であるジオレオイルホスファチジルセリンが含まれ得る。代替的には、リポソームは、負に荷電した長鎖脂質と、中性長鎖脂質と、中性短鎖脂質との混合物から成る。好ましい融合タンパク質としては、サポシンＣ、及びサポシンＣに由来する他のタンパク質、ポリペプチド及びペプチド類似体が挙げられる。リポソーム内に含有された活性剤は、生体分子及び／又は有機分子を含み得る。この技術は、生体膜内に及び／又は生体膜下に、又は血液脳関門及びニューロン膜を通して、活性剤を送達することを目的とする美容用途及び医学用途に用いることができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）長鎖リン脂質、短鎖脂質及びこれらの混合物から成る群から選択される１つ又は複数のリン脂質と、
ｂ）安全で且つ効果的な量の作用因子と、
ｃ）プロサポシン由来の融合タンパク質又はポリペプチドと、
ｄ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む組成物を前記膜に適用させることを含み、前記融合タンパク質又はポリペプチドの濃度が該膜を通して前記作用因子を送達するのに十分な量であり、該組成物が前記標的生体膜と融合可能なリポソームを形成する、標的生体膜を通して作用因子を送達する方法。
【請求項２】
前記リン脂質がアニオン性長鎖脂質と中性長鎖脂質との混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記リン脂質が、アニオン性長鎖脂質と、中性長鎖脂質と、中性短鎖脂質との混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記リポソームがカチオン性リン脂質を含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
アニオン性長鎖脂質、中性長鎖脂質及び短鎖脂質の量が、（［中性長鎖脂質］＋［アニオン性長鎖脂質］）／（短鎖脂質）＝約４である式によって支配される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記標的生体膜が、皮膚膜、粘膜、血液脳関門及び細胞膜から成る群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記リポソームが、ジオレオイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びヘキサノイルホスファチジルコリンから成り、アニオン性長鎖脂質、中性長鎖脂質及び中性短鎖脂質の量が、（［中性長鎖脂質］＋［アニオン性長鎖脂質］）／（中性短鎖脂質）＝約４である式によって支配される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
リン脂質の濃度が、前記融合タンパク質又はポリペプチドの濃度に対してモル比で約１倍〜１０倍過剰である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ジオレオイルホスファチジルセリンと、ジパルミトイルホスファチジルコリンとのモル比が約１０：１である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物のｐＨが約６．８〜２である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物のｐＨが約５．５〜約２である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ｐＨを中和緩衝液で中性にするさらなる工程を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
平均直径が５０ｎｍ〜３５０ｎｍのリポソームを形成するように前記組成物のｐＨが調整される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
平均直径が約２００ｎｍのリポソームを形成するように前記組成物のｐＨが調整される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が乾燥粉末状で提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が酸で処理される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記酸が酸性緩衝液又は有機酸である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記タンパク質の少なくとも一部分にプロトンを付加するのに十分なレベルで前記酸が添加される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物の最終ｐＨが約５．５〜約２である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記タンパク質に実質的にプロトンを付加するのに十分なレベルで前記酸が添加され、前記組成物のｐＨが約５．５〜約２である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
酸で処理した前記組成物のｐＨをその後実質的に中性にする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
ｐＨを中性ｐＨ緩衝液で中性にする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記得られるリポソームのサイズを制御するのに十分、ｐＨを中性ｐＨ緩衝液で中性にする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記得られるリポソームのサイズを制御して、平均直径が５０ｎｍ〜３５０ｎｍのリポソームを提供するのに十分、ｐＨを中性ｐＨ緩衝液で中性にする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記得られるリポソームのサイズを制御して、平均直径が約２００ｎｍのリポソームを提供するのに十分、ｐＨを中性ｐＨ緩衝液で中性にする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
ｐＨが約７〜約１０の最終組成物を提供するように、前記緩衝液が前記組成物に添加される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記膜が粘膜である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記リポソーム複合体が前記血液脳関門に浸透することを目的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記融合タンパク質又はポリペプチドが、サポシンＡ、サポシンＣ、配列番号１、配列番号２、配列番号３、及びそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物の投与が、経皮パッチ、経腸、経鼻、静脈内、筋肉内又は局所から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記作用因子が生体活性剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記生体活性剤が、診断剤、調合薬、薬物、合成有機分子、タンパク質、ペプチド、ビタミン、ステロイド及び遺伝物質から成る群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記作用因子が画像化因子である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記画像化因子が、磁気共鳴、蛍光、又はＣＴ／ＰＥＴ検出用標識から成る群から選択される１つ又は複数の作用因子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記画像化因子が２つ以上の画像化特性を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記画像化因子が磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）又は共焦点蛍光顕微鏡法によって検出することができるフルオロフォア及びＧｄ（ＩＩＩ）部の両方を含有するＰＴＩＲ色素である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記血液脳関門の膜を通して薬学的因子又は画像化因子を送達する方法であって、
ａ）アニオン性長鎖リン脂質、中性長鎖脂質、中性短鎖脂質、アニオン性短鎖脂質及びこれらの混合物から成る群から選択されるリン脂質と、
ｂ）安全で且つ効果的な量の前記薬学的因子又は画像化因子と、
ｃ）プロサポシン由来の融合タンパク質又はポリペプチドと、
ｄ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む組成物の前記膜への投与を含み、リポソームの濃度が前記膜を通して安全で且つ効果的な量の前記薬学的因子を送達するのに十分な量であり、前記リン脂質が全体的に負に荷電したリポソームを形成する、前記血液脳関門の膜を通して薬学的因子又は画像化因子を送達する方法。
【請求項３８】
前記リン脂質がアニオン性長鎖脂質と中性長鎖脂質との混合物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記リン脂質が、アニオン性長鎖脂質と、中性長鎖脂質と、中性短鎖脂質との混合物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記リポソームがカチオン性リン脂質を含有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
アニオン性長鎖脂質、中性長鎖脂質及び短鎖脂質の量が、（［中性長鎖脂質］＋［アニオン性長鎖脂質］）／（短鎖脂質）＝約４である式によって支配される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記リポソームが、ジオレオイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びヘキサノイルホスファチジルコリンから成り、アニオン性長鎖脂質、中性長鎖脂質及び中性短鎖脂質の量が、（［中性長鎖脂質］＋［アニオン性長鎖脂質］）／（中性短鎖脂質）＝約４である式によって支配される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物のｐＨが約５．５〜約２である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
前記融合タンパク質又はポリペプチドがサポシンＣである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
前記リポソームの濃度が、プロサポシン由来の前記融合タンパク質又はポリペプチドの濃度に対してモル比で少なくとも約１倍〜約１０倍過剰である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４６】
ジオレオイルホスファチジルセリンと、ジパルミトイルホスファチジルコリンとのモル比が約１０：１である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
ｑ値が１〜１０である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４８】
前記画像化因子が、磁気共鳴、蛍光、又はＣＴ／ＰＥＴ検出用標識から成る群から選択される１つ又は複数の作用因子である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
前記画像化因子が２つ以上の画像化特性を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
前記画像化因子が磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）又は共焦点蛍光顕微鏡法によって検出することができるフルオロフォア及びＧｄ（ＩＩＩ）部の両方を含有するＰＴＩＲ色素である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ゴーシェ病を治療する方法であって、このような治療が必要な被験者に、
アニオン性長鎖リン脂質、中性長鎖リン脂質、中性短鎖リン脂質、アニオン性短鎖リン脂質及びこれらの混合物から成る群から選択される１つ又は複数のリン脂質を含有するアニオン性リポソーム（アニオン性長鎖脂質、中性長鎖脂質及び中性短鎖脂質の量が、（［中性長鎖脂質］＋［アニオン性長鎖脂質］）／（中性短鎖脂質）＝約４である式によって支配される）と、
安全で且つ効果的な量の酸β−グルコシダーゼと、
プロサポシン由来の融合タンパク質又はポリペプチドと、
薬学的に許容可能な担体と、
を含む組成物の投与を含み、該組成物のｐＨが約５．５〜約２であり、前記融合タンパク質又はポリペプチドの濃度が前記膜を通して前記薬学的因子を送達するのに十分な量であり、このサポシンＣが静電気的な疎水性相互作用によって前記リポソームの表面と結び付く、ゴーシェ病を治療する方法。
【請求項５２】
前記リポソームの濃度が、融合タンパク質又はポリペプチドの濃度に対してモル比で少なくとも約１倍〜約１０倍過剰である、請求項５１に記載の方法。

【図２】

【図３】

【図４】

【図６】

【図１】

【図５】

【図７】

【図８】

【図９】

【公表番号】特表２００９−５３５３４８（Ｐ２００９−５３５３４８Ａ）
【公表日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０７８４２（Ｐ２００９−５０７８４２）
【出願日】平成１９年４月２７日（２００７．４．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１０３５７
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２７４３９
【国際公開日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【出願人】（５００４６９２３５）チルドレンズ　ホスピタル　メディカル　センター (40)
【Ｆターム（参考）】