臨床検査キットおよび血液の検査方法
【課題】全血を採取した後、血漿だけではなく赤血球の検査を行うことができる臨床検査キットおよび血液の検査方法を提供すること。
【解決手段】検査キットは、採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタ４と、血液分離フィルタ４を通過した血漿を収容する第１の容器１２と、第１の容器１２に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬２１と、赤血球を収容する第２の容器１３と、第２の容器１３内に配置されており、赤血球と反応する第２の臨床検査試薬２２と、を備える。血液分離フィルタ４は親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む。
【解決手段】検査キットは、採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタ４と、血液分離フィルタ４を通過した血漿を収容する第１の容器１２と、第１の容器１２に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬２１と、赤血球を収容する第２の容器１３と、第２の容器１３内に配置されており、赤血球と反応する第２の臨床検査試薬２２と、を備える。血液分離フィルタ４は親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検査を行うための臨床検査キットおよび血液の検査方法に関し、より詳細には、全血を採取した後、血漿もしくは血清および赤血球を用いて臨床検査を行うことを可能とする臨床検査キットおよび血液の検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
臨床検査においては、真空採血管に血液を採取した後、採取された血液を遠心分離し、赤血球と血漿もしくは血清（以下、血漿および血清を単に血漿という。）とに分離する。得られた血漿を検査試薬と混合し、その後様々な測定が行われている。
【０００３】
しかし、このような方法では、真空採血管に全血を採取した後、血液を凝固し、遠心分離などの後操作が必要であるため、検査を行うまでの前処理にかなりの操作と時間が必要である。また、全血から血漿を分離するために大型でかつ高価な遠心分離装置を必要とし、しかも長時間を要する。
【０００４】
そこで、遠心分離装置を必要とすることなく、メンブレンフィルタを使って血液から血漿を分離し検査する技術が、例えば、次に示す特許文献に開示されている。
【０００５】
特開２００７−３４８２号公報（特許文献１）、特開２００４−３２５４１２号公報（特許文献２）、特開２００７−３３０８６号公報（特許文献３）、特開平５−１９６６２０号公報（特許文献４）。
【０００６】
しかし、これらの特許文献に記載の技術は、全血から血漿を採取し、その血漿についてのみ検査するものであり、同一の試料からの赤血球についての測定をする方法を開示しない。
【０００７】
また、従来のメンブレンフィルタを用いて、全血をろ過しようとしても、フィルタが目詰まりするので、十分にろ過できず、またフィルタに吸水性や保持性があるため、分析に必要とする以上の多量の血液が必要になるという問題もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００７−３４８２号公報
【特許文献２】特開２００４−３２５４１２号公報
【特許文献３】特開２００７−３３０８６号公報
【特許文献４】特開平５−１９６６２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は上記課題を解決するためになされたもので、全血を採取した後、血漿だけではなく赤血球の検査を行うことができる臨床検査キットおよび血液の検査方法を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、フィルタが目詰まりすることがなく、しかも可能な限り少ない量の血液で検査が行える臨床検査キットおよび血液の検査方法を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、現行のイムノクロマトよりも感度および検査速度が上がり、かつ製造コストが低減できる臨床検査キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
すなわち、本発明は以下を特徴とする。
（項目１）
採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタと、
該血液分離フィルタを通過した血漿を収容する第１の容器と、該第１の容器内に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬と、
該赤血球を収容する第２の容器と、該第２の容器内に配置されており、該赤血球と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
（項目２）
前記ナノファイバーの分散体の少なくとも一部が網目状構造を形成している、項目１に記載の臨床検査キット。
（項目３）
前記血液分離フィルタが、前記ナノファイバーの分散体と、数平均直径が１μｍより大きく１００μｍ以下の繊維基材との積層体である、項目１または２に記載の臨床検査キット。
（項目４）
前記ナノファイバーの平均直径が、３０ｎｍ以上３００ｎｍ以下である、項目１〜３のいずれかに記載の臨床検査キット。
（項目５）
前記血液分離フィルタを配置する分離装置をさらに有し、
該分離装置の排出口に切り替え用コックを介して前記第１の容器および第２の容器がそれぞれ接続されている、項目１〜４のいずれかに記載の臨床検査キット。
（項目６）
前記分離装置の開口を気密的に封止するように該開口に取り付けられており、かつ中空針により刺通可能な材料からなる栓体を有する、項目５に記載の臨床検査キット。
（項目７）
(a)血液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された血液分離フィルタによって、該採取された血液から血漿をろ過し、赤血球を該フィルタ上またはフィルタ内に残す工程、
(c)該血漿と第１の容器内に配置された第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該赤血球と第２の容器内に配置された第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する血液の検査方法であって、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
（項目８）
前記(d)フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程の前に、
(f)該フィルタ上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する工程、を包含する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記(b)工程および前記(d)工程が、前記第１および第２の容器内を吸引することによって行われる、項目７に記載の方法。
（項目１０）
細胞成分を含む溶液を採取する分離装置と、
該分離装置内に配置されており、該採取された溶液を液体成分と、細胞成分とに分離するための分離フィルタと、
該第１の容器内に収納されており、該分離フィルタにおいて溶液を分離することにより得られた液体成分と反応する第１の臨床検査試薬と、
第２の容器内に配置されており該細胞成分と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
（項目１１）
(a)細胞成分を含む溶液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された分離フィルタによって、該採取された溶液から液体成分を該フィルタを通過させ、細胞成分を該フィルタ上に残す工程、
(c)該液体成分と第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に細胞溶解液を滴下して細胞成分を溶解し、該細胞成分からの溶解成分を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該細胞成分と第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する細胞成分を含む溶液の検査方法であって、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【発明の効果】
【００１３】
血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバー分散体を含むので、全血が血液分離フィルタに供給されると、血漿が血液分離フィルタを通過すると共に、赤血球が血液分離フィルタ上に目詰まりすることなく残る。フィルタを通過した血漿は、容器内に配置された第１の臨床検査試薬と接触し反応させる。次に、フィルタ上に分離された赤血球は生理食塩水で洗浄することができ、洗浄後、精製水で溶血させて赤血球内の成分を回収できる。この赤血球を第２の臨床検査試薬と反応させる。
【００１４】
このようにして、採血した場所において、開業医の診察室などで簡単に、遠心分離機などを使用することなく、赤血球と血漿を分離し、それぞれを検査・診断することができる（例えば、ＨｂＡｌｃを測定する。）。
【００１５】
本発明の試験対象は、血液中の赤血球に限定されることなく、溶液中の細胞成分全般に適用可能である。例えば、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバー分散体を含む本発明のフィルタは、細胞成分を含む溶液から、細胞成分と液体成分をそれぞれさらなる試験のために同一の試料から分離するために使用できる。
【００１６】
例えば、細胞成分を含む溶液をフィルタを通過させることによって、溶液中の細胞成分をフィルタにトラップし、液体成分をろ過液として回収する。その後、フィルタを生理食塩水などで洗浄し、次に、フィルタ上にトラップされた細胞を細胞溶解液（例えば、水などの低張液、または、界面活性剤もしくは変性剤を含む溶液）によって溶解し、細胞内の成分を回収する。
【００１７】
上記の分離方法は、例えば、以下の工程を包含する：
（ａ）細胞成分を含む溶液をフィルタでろ過する工程；
（ｂ）ろ液を回収するか、または、ろ液を測定する工程；
（ｃ）フィルタを洗浄する工程；
（ｄ）フィルタ上の細胞を溶解する工程；および、
（ｅ）細胞溶解液を回収するか、または、細胞溶解液を測定する工程。
【００１８】
一つの局面において、分離対象の細胞は、血液細胞であり、好ましくは、赤血球、白血球、リンパ球であり、最も好ましくは、赤血球である。本発明の細胞成分を含む溶液は、血液、リンパ液、尿、腹腔液、髄液、滑液、または、関節液である。
【００１９】
別の局面において、分離対象は、動物細胞、植物細胞、真核生物細胞、原核生物細胞、細菌、真菌、あるいは、ウイルスである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、血液分離フィルタの一実施形態の断面図である。
【図２】図２は、臨床検査キットの一実施形態の概略断面図である。
【図３】図３は、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【図４】図４は、図３に続いて、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【図５】図５は、図４に続いて、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら詳細に説明する。
【００２２】
図１〜図２に示すように、本発明の臨床検査キット１は、血液を採取する分離装置１１と、該分離装置１１内に配置された血液分離フィルタ４と、分離装置１１の下部にチューブ１４およびコック１５を介して接続された第１の容器１２および第２の容器１３と、第１の容器１２内に収納されており血漿と反応する第１の臨床検査試薬２１と、第２の容器１３内に収納されており赤血球と反応する第２の臨床検査試薬２２と、を備えている。分離装置１１の開口は栓体３により気密的に封止されている。栓体３は、中空針により刺通可能な材料であって、かつ開口を封止し得る限り、適宜のゴム弾性を有する材料により構成され得る。このような材料としては、ブチルゴムなどの合成ゴム、熱可塑性エラストマーまたは天然ゴムなどを挙げることができる。コック１５は、２方コックまたは３方コックなどを用いることができる。
【００２３】
分離装置１１の下部にチューブ１４およびコック１５を介して第１の容器１２および第２の容器１３がそれぞれ接続されているので、該コック１５の切り替えによって、分離装置１１と第１の容器１２および第２の容器１３とを連通しない状態（分離状態）としたり、分離装置１１と第１の容器１２とを連通状態としたり、あるいは分離装置１１と第２の容器１３とを連通状態とすることができる。
【００２４】
該第１および第２の容器１２、１３は、合成樹脂、ガラスまたは金属などの適宜の材料により形成され得るが、好ましくは、後述する測定結果を外部から観察できるように、透明な材料で構成されていることが望ましい。
【００２５】
血液分離フィルタ４は、支持体４０の表面にナノファイバー分散体４１を貼り付けあるいは積層して構成されている。ナノファイバー分散体４１は、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体４１である。このナノファイバーの分散体４１の構成は後述する。
【００２６】
ナノファイバー分散体４１の支持体４０としては、通液性を有するものであればよく、織物、編物、不織布、紙など繊維基材が好ましく使用できる。支持体４０を使用することにより、ナノファイバー分散体４１を補強することができる。また、ナノファイバー分散体４１を容器２に取り付ける際に、支持体４０を介してナノファイバーを容器２に取り付けることができる。例えば、支持体４０として熱可塑性樹脂などで構成する場合には、支持体４０を溶融して容器２に融着することができる。
【００２７】
支持体４０は、薄くて強度のあるナイロンなど、メッシュが望ましく、親水性であることが好ましい。
【００２８】
支持体４０は、ナノインプリントによる凹凸であっても、赤血球を保持し、親水性で血清や生理食塩水などが流れる流路が確保できればよい。ナノインプリントで成形された流路の上にナイロン製のナノファイバのフィルタを形成してもよい。
【００２９】
ナノファイバー分散体４１は薄く（２０層あっても２ミクロン程度、通常のメンブレンフィルタは３０から５０ミクロン）、支持体４０を選択することで吸水できる水の量も少なく、保水性も低くできるため少ない血液量ですむ。
【００３０】
上記第１の容器１２内に第１の臨床検査試薬が配置されている。また、第２の容器１３内に第２の臨床検査試薬２２が配置されている。
【００３１】
本実施形態では、減圧、吸引または加圧などの方法によって、分離装置１１内に採取された血液成分（血漿、血清）を第１の容器１２および第２の容器１３内へ移動させることができる。
【００３２】
該第１の臨床検査試薬２１は、血漿と接触し混合した後、免疫反応により凝集する免疫反応試薬により構成することができる。また第２の臨床検査試薬２２は、赤血球と接触し混合した後、免疫反応により凝集する免疫反応試薬により構成することができる。これらの臨床検査試薬としては、検査対象項目等に応じて適宜の試薬を用いることができる。あるいは、臨床検査試薬の代わりにセンサーを容器内に配置してもよい。
【００３３】
また、分離装置１１は、フィルタを通過した液体成分を排出する排出口を含んでもよい。
【００３４】
分離装置１１内には、血液分離フィルタ４が分離装置１１の中間高さ位置に収納されている。分離装置１１内の血液分離フィルタ４よりも開口側において、血液採取部１１ｂが形成され、また、分離装置１１内の血液分離フィルタ４よりも下流側において検体収容部１１ｃが形成されている。
【００３５】
分離装置１１内では、採取された全血が血液採取部１１ｂに採取され、血液分離フィルタ４を通過して、血漿が検体収容部１１ｃへ送られる。
【００３６】
血液分離フィルタ４は、上記血液の流れ方向と直交するように、分離装置１１内に配置される。従って、血液採取部１１ｂに導かれた血液は血液分離フィルタ４を通って下方へ移動する。
【００３７】
血液などの液体を移動させる手段としては、第１および第２の容器１２、１３内を真空状態としてもよく、あるいは第１および第２の容器１２、１３に吸引装置を切り替え可能に接続して、適宜時期に各容器内を吸引するようにしてもよい。
【００３８】
（血液分離フィルタ）
次に、本発明で使用する血液分離フィルタ４について詳細に説明する。血液分離フィルタは、血液のみならず、細胞成分を含む任意の溶液に適用可能である。
【００３９】
血液分離フィルタ４は、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下である熱可塑性ポリマーからなるナノファイバーの分散体４１を含む。
【００４０】
ナノファイバーの分散体４１とは、ナノファイバーが分散した形態を有するもののことである。ナノファイバーは、繊維状の形態であればよく、その長さや断面形状などは限定されない。
【００４１】
ナノファイバーの数平均直径が１ｎｍ以上であれば繊維としての強力を確保できるので、例えば血液を処理している時に衝突する血球成分や他の粗大成分などによって繊維が切れやすくなるのを抑制する。また、数平均直径が５００ｎｍ以下であれば、赤血球や蛋白が吸着するための充分な表面積を確保できるとともに、ナノファイバー故の選択吸着性が発現し、フィルタ４の性能を向上させることができる。ナノファイバーの強力を向上させる観点からは、ナノファイバーの数平均直径は大きい方が好ましく、３０ｎｍ以上であることが好ましい。一方、フィルタ４の性能を向上させる観点からは、ナノファイバーの数平均直径は小さい方が好ましく、好ましくは３００ｎｍ以下である。
【００４２】
ナノファイバーの分散体４１は、網目状構造を形成していることが好ましい。ここで網目状構造とは、ナノファイバーが束状にはなっておらず、それぞれのナノファイバーが開繊された状態にある、いわゆる単繊維が分散されポアを形成する状態であって、複数本の単繊維が物理的あるいは化学的に絡まり合って網目状構造を形成していることを指す。
【００４３】
上記熱可塑性ポリマーとしては、ポリエステルやポリアミド（ナイロン）、ポリオレフィン、ポリフェニレンスルフィド（ＰＰＳ）等が挙げられる。特に、ナイロンなどの親水性に富むもの、または親水性処理などによってファイバに親水性を付与させたものが特に好ましい。
【００４４】
血液分離フィルタ４の表面を改質する方法としては、表面グラフト重合、高分子材料のコーティングあるいは浴中処理、放電処理などが挙げられる。
【００４５】
表面グラフト重合、高分子材料のコーティングあるいは浴中処理によって血液分離フィルタ４表面を改質する場合に用いられる高分子材料としては、特に限定はないが、親水化する目的から、非イオン性親水基を有する高分子材料が好ましい。
【００４６】
非イオン性親水基としては、ヒドロキシル基、アミド基、ポリエチレンオキサイド鎖などが挙げられる。非イオン性水酸基を有する高分子材料の合成に用いることができるモノマーとしては、例えば、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、ビニルアルコール（酢酸ビニルを重合して得られた高分子を加水分解することにより調製したもの）、メタクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドンなどが挙げられる。上記モノマーの中でも、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレートが好ましい。
【００４７】
本発明に係る血液分離フィルタ４の形態は特に限定されず、ナノファイバが少なくとも一部に含まれていればよい。好ましい血液分離フィルタ４の形態としては、織物、編物、不織布、紙、フィルムおよびそれらの複合体などが特に好ましい。
【００４８】
このナノファイバは以下の性質を有するものである。
（１）親水性であり、水を給水したり、膨潤させたりすることがない。
（２）ナノファイバは、薄い層で構成されている。
（３）数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下（好ましくは１００〜３００nm）である。そのため、１０〜２０層になっていてもなの７ファイバーの分散体４１の厚みは１〜３ミクロンである。
【００４９】
次に、図２に示す臨床検査キットの使用方法を説明する。以下の説明は、血液を血漿と赤血球に分ける方法に関するものであるが、本願発明は、細胞成分を含む任意の溶液に適用可能であり、血液を血漿と赤血球に分ける方法に限定されるものではない。
【００５０】
コック１５の切り替えによって、分離装置１１を第２および第２の容器１２、１３から分離した状態とし、該分離装置１１内に全血を採取する。血液は注射器に採取した後、注射針を栓体３に差し込んで分離装置１１内へ注入することができる。なお、栓体３を分離装置１１に取付けることなく、直接分離装置１１内へ血液を注入してもよい。
【００５１】
血液は血液分離フィルタ４を通して濾過が始まる。血漿がフィルタ４を通過すると共に、赤血球がフィルタ４上に残り、血漿が分離装置１１の検体収容部１１ｃに収容される。
【００５２】
次に、コック１５を切り替えて分離装置１１と第１の容器１２とを連通させる。第１の容器１２内には、第１の臨床検査試薬２１が配置されており、チューブ１４を介して分離装置１１から第１の容器１２へ入った血漿は該第１の臨床検査試薬２１と反応する。
【００５３】
次に、分離装置１１内のフィルタ４上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する。この操作によって、血漿は分離装置１１から排出される。この排出液は、コック１５の操作により第１の容器１２内へ送ってもよく、あるいは分離装置１１の下部に接続した第３の容器（図示せず）に送ってもよい。
【００５４】
次に、分離装置１１内のフィルタ４上に精製水を滴下して赤血球を溶血させると、赤血球はフィルタ４を通過して検体収容部１１ｃに収容され、コック１５の操作により第２の容器１３へ送られる。
【００５５】
第２の容器１３内には、第２の臨床検査試薬２２が配置されているので、赤血球はこの第２の臨床検査試薬２２と反応する。精製水の代わりに、界面活性剤および／またはカオトロピック剤などの細胞を破壊する溶液を用いることもできる。
【００５６】
上記第１および第２の臨床検査試薬２１、２２との免疫反応による凝集反応が進行すると、第１の容器１２の底部に凝集物が生じ、目視により第１の容器１２を外部から凝集物を観察し、または光学的にこの凝集物の存在により反応結果を確認、検査することができる。
【００５７】
上記反応結果の確認や反応結果の測定法としては、目視により観察し、凝集の有無を把握する方法の他、目視により呈色の度合いを観察する方法を用いてもよい。あるいは、上記呈色の度合いや、凝集の度合い、あるいは濁度を光学的に測定してもよい。
（第２実施形態）
図３〜図５は他の実施形態を示したものである。
【００５８】
本実施形態の臨床検査キットで使用する血液分離フィルタ４の上面にプラスチックシート２４が積層され、該血液分離フィルタ４の下面に剥離用フィルム２５が積層され、さらに該剥離用フィルム２５の下面にろ紙２６が積層されている。
【００５９】
該プラスチックシート２４の中央部には血液を滴下するための滴下口２７が形成され、また該滴下口２７に対応する位置において該剥離用フィルム２５の中央部に開口部２８が形成されている。このようにして積層体３０が構成されている。
【００６０】
プラスチックシート２４の滴下口２７に血液Ｂを滴下すると、血液Ｂは血液分離フィルタ４によってろ過され、赤血球は該血液分離フィルタ４の上に残り、血漿が血液分離フィルタ４を通過してろ紙２６内へ入る（図４（Ａ））。
【００６１】
次に、赤血球を覆うようにプラスチックシート２４の上にカバーフィルム２８を貼着する。その後、ろ紙２６から剥離用フィルム２５を剥がし取る（図４（Ｂ））。
【００６２】
この血漿を含むろ紙２６は、第１の容器（図示せず）内へ投入され、第１の容器内で血漿は第１の臨床検査試薬と反応する。
【００６３】
ろ紙２６以外の赤血球を含む積層体は、次に、図５に示すように、第２の容器３２内へ投入される。この第２の容器３２内には蒸留水が入っており、赤血球は蒸留水によって溶血し、ヘモグロビンはフィルタ４を通して溶出してくる。このとき、赤血球膜などの不溶成分はろ過されて溶血液中に出てくることはない。この第２の容器３２内で赤血球は第２の臨床検査試薬と反応する。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明する。本発明は本実施例により限定されるものではない。
【００６５】
（実施例１）
Ａ．血液分離フィルタの作成
厚み３０μｍのナイロンメッシュ上に数平均直径が５００ｎｍのナイロン製のナノファイバーの分散体を積層して血液分離フィルタを作成した。ファイバーの分散体は１０層とし、その厚みは２ミクロンであった。
【００６６】
Ｂ．臨床検査キットの作成および血液の検査
図２に示す形状の分離装置１１内に上記で得られた血液分離フィルタを配置した。
【００６７】
フィルタ上に全血１００μｌを滴下し、分離装置の底部から吸引してろ過を行った。血液はフィルタ上に円状に広がるがその広がり程度は小さかった。
【００６８】
次に、生理食塩水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。赤血球は、ろ過された後でもフィルタ上に残っていた。最後に、精製水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。フィルタ上には溶血した血液の色が残っていたが赤血球は存在していなかった。
【００６９】
（比較例１）
実施例１で用いた血液分離フィルタに代えて普通の市販のろ紙を用いたこと以外は、実施例１と同様に臨床検査キットを作成し、血液の検査を実施した。
【００７０】
ろ紙上に全血１００μｌを滴下し、分離装置の底部から吸引してろ過を行った。血液はろ紙上に円状に広がった。
【００７１】
次に、生理食塩水２００μｌをろ紙上に滴下し、吸引によるろ過を行った。赤血球は、ろ過されてろ紙上には残らなかった。最後に、精製水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。ろ紙はきれいになった。
【符号の説明】
【００７２】
１ 臨床検査キット
４ 血液分離フィルタ
１１ 分離装置
１２ 第１の容器
１３ 第２の容器
１４ チューブ
１５ コック
２１ 第１の臨床検査試薬
２２ 第２の臨床検査試薬
４０ 支持体
４１ ナノファイバーの分散体
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検査を行うための臨床検査キットおよび血液の検査方法に関し、より詳細には、全血を採取した後、血漿もしくは血清および赤血球を用いて臨床検査を行うことを可能とする臨床検査キットおよび血液の検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
臨床検査においては、真空採血管に血液を採取した後、採取された血液を遠心分離し、赤血球と血漿もしくは血清（以下、血漿および血清を単に血漿という。）とに分離する。得られた血漿を検査試薬と混合し、その後様々な測定が行われている。
【０００３】
しかし、このような方法では、真空採血管に全血を採取した後、血液を凝固し、遠心分離などの後操作が必要であるため、検査を行うまでの前処理にかなりの操作と時間が必要である。また、全血から血漿を分離するために大型でかつ高価な遠心分離装置を必要とし、しかも長時間を要する。
【０００４】
そこで、遠心分離装置を必要とすることなく、メンブレンフィルタを使って血液から血漿を分離し検査する技術が、例えば、次に示す特許文献に開示されている。
【０００５】
特開２００７−３４８２号公報（特許文献１）、特開２００４−３２５４１２号公報（特許文献２）、特開２００７−３３０８６号公報（特許文献３）、特開平５−１９６６２０号公報（特許文献４）。
【０００６】
しかし、これらの特許文献に記載の技術は、全血から血漿を採取し、その血漿についてのみ検査するものであり、同一の試料からの赤血球についての測定をする方法を開示しない。
【０００７】
また、従来のメンブレンフィルタを用いて、全血をろ過しようとしても、フィルタが目詰まりするので、十分にろ過できず、またフィルタに吸水性や保持性があるため、分析に必要とする以上の多量の血液が必要になるという問題もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００７−３４８２号公報
【特許文献２】特開２００４−３２５４１２号公報
【特許文献３】特開２００７−３３０８６号公報
【特許文献４】特開平５−１９６６２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は上記課題を解決するためになされたもので、全血を採取した後、血漿だけではなく赤血球の検査を行うことができる臨床検査キットおよび血液の検査方法を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、フィルタが目詰まりすることがなく、しかも可能な限り少ない量の血液で検査が行える臨床検査キットおよび血液の検査方法を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、現行のイムノクロマトよりも感度および検査速度が上がり、かつ製造コストが低減できる臨床検査キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
すなわち、本発明は以下を特徴とする。
（項目１）
採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタと、
該血液分離フィルタを通過した血漿を収容する第１の容器と、該第１の容器内に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬と、
該赤血球を収容する第２の容器と、該第２の容器内に配置されており、該赤血球と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
（項目２）
前記ナノファイバーの分散体の少なくとも一部が網目状構造を形成している、項目１に記載の臨床検査キット。
（項目３）
前記血液分離フィルタが、前記ナノファイバーの分散体と、数平均直径が１μｍより大きく１００μｍ以下の繊維基材との積層体である、項目１または２に記載の臨床検査キット。
（項目４）
前記ナノファイバーの平均直径が、３０ｎｍ以上３００ｎｍ以下である、項目１〜３のいずれかに記載の臨床検査キット。
（項目５）
前記血液分離フィルタを配置する分離装置をさらに有し、
該分離装置の排出口に切り替え用コックを介して前記第１の容器および第２の容器がそれぞれ接続されている、項目１〜４のいずれかに記載の臨床検査キット。
（項目６）
前記分離装置の開口を気密的に封止するように該開口に取り付けられており、かつ中空針により刺通可能な材料からなる栓体を有する、項目５に記載の臨床検査キット。
（項目７）
(a)血液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された血液分離フィルタによって、該採取された血液から血漿をろ過し、赤血球を該フィルタ上またはフィルタ内に残す工程、
(c)該血漿と第１の容器内に配置された第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該赤血球と第２の容器内に配置された第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する血液の検査方法であって、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
（項目８）
前記(d)フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程の前に、
(f)該フィルタ上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する工程、を包含する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記(b)工程および前記(d)工程が、前記第１および第２の容器内を吸引することによって行われる、項目７に記載の方法。
（項目１０）
細胞成分を含む溶液を採取する分離装置と、
該分離装置内に配置されており、該採取された溶液を液体成分と、細胞成分とに分離するための分離フィルタと、
該第１の容器内に収納されており、該分離フィルタにおいて溶液を分離することにより得られた液体成分と反応する第１の臨床検査試薬と、
第２の容器内に配置されており該細胞成分と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
（項目１１）
(a)細胞成分を含む溶液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された分離フィルタによって、該採取された溶液から液体成分を該フィルタを通過させ、細胞成分を該フィルタ上に残す工程、
(c)該液体成分と第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に細胞溶解液を滴下して細胞成分を溶解し、該細胞成分からの溶解成分を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該細胞成分と第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する細胞成分を含む溶液の検査方法であって、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【発明の効果】
【００１３】
血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバー分散体を含むので、全血が血液分離フィルタに供給されると、血漿が血液分離フィルタを通過すると共に、赤血球が血液分離フィルタ上に目詰まりすることなく残る。フィルタを通過した血漿は、容器内に配置された第１の臨床検査試薬と接触し反応させる。次に、フィルタ上に分離された赤血球は生理食塩水で洗浄することができ、洗浄後、精製水で溶血させて赤血球内の成分を回収できる。この赤血球を第２の臨床検査試薬と反応させる。
【００１４】
このようにして、採血した場所において、開業医の診察室などで簡単に、遠心分離機などを使用することなく、赤血球と血漿を分離し、それぞれを検査・診断することができる（例えば、ＨｂＡｌｃを測定する。）。
【００１５】
本発明の試験対象は、血液中の赤血球に限定されることなく、溶液中の細胞成分全般に適用可能である。例えば、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバー分散体を含む本発明のフィルタは、細胞成分を含む溶液から、細胞成分と液体成分をそれぞれさらなる試験のために同一の試料から分離するために使用できる。
【００１６】
例えば、細胞成分を含む溶液をフィルタを通過させることによって、溶液中の細胞成分をフィルタにトラップし、液体成分をろ過液として回収する。その後、フィルタを生理食塩水などで洗浄し、次に、フィルタ上にトラップされた細胞を細胞溶解液（例えば、水などの低張液、または、界面活性剤もしくは変性剤を含む溶液）によって溶解し、細胞内の成分を回収する。
【００１７】
上記の分離方法は、例えば、以下の工程を包含する：
（ａ）細胞成分を含む溶液をフィルタでろ過する工程；
（ｂ）ろ液を回収するか、または、ろ液を測定する工程；
（ｃ）フィルタを洗浄する工程；
（ｄ）フィルタ上の細胞を溶解する工程；および、
（ｅ）細胞溶解液を回収するか、または、細胞溶解液を測定する工程。
【００１８】
一つの局面において、分離対象の細胞は、血液細胞であり、好ましくは、赤血球、白血球、リンパ球であり、最も好ましくは、赤血球である。本発明の細胞成分を含む溶液は、血液、リンパ液、尿、腹腔液、髄液、滑液、または、関節液である。
【００１９】
別の局面において、分離対象は、動物細胞、植物細胞、真核生物細胞、原核生物細胞、細菌、真菌、あるいは、ウイルスである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、血液分離フィルタの一実施形態の断面図である。
【図２】図２は、臨床検査キットの一実施形態の概略断面図である。
【図３】図３は、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【図４】図４は、図３に続いて、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【図５】図５は、図４に続いて、血液分離フィルタの他の実施形態の使用方法を説明する図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら詳細に説明する。
【００２２】
図１〜図２に示すように、本発明の臨床検査キット１は、血液を採取する分離装置１１と、該分離装置１１内に配置された血液分離フィルタ４と、分離装置１１の下部にチューブ１４およびコック１５を介して接続された第１の容器１２および第２の容器１３と、第１の容器１２内に収納されており血漿と反応する第１の臨床検査試薬２１と、第２の容器１３内に収納されており赤血球と反応する第２の臨床検査試薬２２と、を備えている。分離装置１１の開口は栓体３により気密的に封止されている。栓体３は、中空針により刺通可能な材料であって、かつ開口を封止し得る限り、適宜のゴム弾性を有する材料により構成され得る。このような材料としては、ブチルゴムなどの合成ゴム、熱可塑性エラストマーまたは天然ゴムなどを挙げることができる。コック１５は、２方コックまたは３方コックなどを用いることができる。
【００２３】
分離装置１１の下部にチューブ１４およびコック１５を介して第１の容器１２および第２の容器１３がそれぞれ接続されているので、該コック１５の切り替えによって、分離装置１１と第１の容器１２および第２の容器１３とを連通しない状態（分離状態）としたり、分離装置１１と第１の容器１２とを連通状態としたり、あるいは分離装置１１と第２の容器１３とを連通状態とすることができる。
【００２４】
該第１および第２の容器１２、１３は、合成樹脂、ガラスまたは金属などの適宜の材料により形成され得るが、好ましくは、後述する測定結果を外部から観察できるように、透明な材料で構成されていることが望ましい。
【００２５】
血液分離フィルタ４は、支持体４０の表面にナノファイバー分散体４１を貼り付けあるいは積層して構成されている。ナノファイバー分散体４１は、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体４１である。このナノファイバーの分散体４１の構成は後述する。
【００２６】
ナノファイバー分散体４１の支持体４０としては、通液性を有するものであればよく、織物、編物、不織布、紙など繊維基材が好ましく使用できる。支持体４０を使用することにより、ナノファイバー分散体４１を補強することができる。また、ナノファイバー分散体４１を容器２に取り付ける際に、支持体４０を介してナノファイバーを容器２に取り付けることができる。例えば、支持体４０として熱可塑性樹脂などで構成する場合には、支持体４０を溶融して容器２に融着することができる。
【００２７】
支持体４０は、薄くて強度のあるナイロンなど、メッシュが望ましく、親水性であることが好ましい。
【００２８】
支持体４０は、ナノインプリントによる凹凸であっても、赤血球を保持し、親水性で血清や生理食塩水などが流れる流路が確保できればよい。ナノインプリントで成形された流路の上にナイロン製のナノファイバのフィルタを形成してもよい。
【００２９】
ナノファイバー分散体４１は薄く（２０層あっても２ミクロン程度、通常のメンブレンフィルタは３０から５０ミクロン）、支持体４０を選択することで吸水できる水の量も少なく、保水性も低くできるため少ない血液量ですむ。
【００３０】
上記第１の容器１２内に第１の臨床検査試薬が配置されている。また、第２の容器１３内に第２の臨床検査試薬２２が配置されている。
【００３１】
本実施形態では、減圧、吸引または加圧などの方法によって、分離装置１１内に採取された血液成分（血漿、血清）を第１の容器１２および第２の容器１３内へ移動させることができる。
【００３２】
該第１の臨床検査試薬２１は、血漿と接触し混合した後、免疫反応により凝集する免疫反応試薬により構成することができる。また第２の臨床検査試薬２２は、赤血球と接触し混合した後、免疫反応により凝集する免疫反応試薬により構成することができる。これらの臨床検査試薬としては、検査対象項目等に応じて適宜の試薬を用いることができる。あるいは、臨床検査試薬の代わりにセンサーを容器内に配置してもよい。
【００３３】
また、分離装置１１は、フィルタを通過した液体成分を排出する排出口を含んでもよい。
【００３４】
分離装置１１内には、血液分離フィルタ４が分離装置１１の中間高さ位置に収納されている。分離装置１１内の血液分離フィルタ４よりも開口側において、血液採取部１１ｂが形成され、また、分離装置１１内の血液分離フィルタ４よりも下流側において検体収容部１１ｃが形成されている。
【００３５】
分離装置１１内では、採取された全血が血液採取部１１ｂに採取され、血液分離フィルタ４を通過して、血漿が検体収容部１１ｃへ送られる。
【００３６】
血液分離フィルタ４は、上記血液の流れ方向と直交するように、分離装置１１内に配置される。従って、血液採取部１１ｂに導かれた血液は血液分離フィルタ４を通って下方へ移動する。
【００３７】
血液などの液体を移動させる手段としては、第１および第２の容器１２、１３内を真空状態としてもよく、あるいは第１および第２の容器１２、１３に吸引装置を切り替え可能に接続して、適宜時期に各容器内を吸引するようにしてもよい。
【００３８】
（血液分離フィルタ）
次に、本発明で使用する血液分離フィルタ４について詳細に説明する。血液分離フィルタは、血液のみならず、細胞成分を含む任意の溶液に適用可能である。
【００３９】
血液分離フィルタ４は、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下である熱可塑性ポリマーからなるナノファイバーの分散体４１を含む。
【００４０】
ナノファイバーの分散体４１とは、ナノファイバーが分散した形態を有するもののことである。ナノファイバーは、繊維状の形態であればよく、その長さや断面形状などは限定されない。
【００４１】
ナノファイバーの数平均直径が１ｎｍ以上であれば繊維としての強力を確保できるので、例えば血液を処理している時に衝突する血球成分や他の粗大成分などによって繊維が切れやすくなるのを抑制する。また、数平均直径が５００ｎｍ以下であれば、赤血球や蛋白が吸着するための充分な表面積を確保できるとともに、ナノファイバー故の選択吸着性が発現し、フィルタ４の性能を向上させることができる。ナノファイバーの強力を向上させる観点からは、ナノファイバーの数平均直径は大きい方が好ましく、３０ｎｍ以上であることが好ましい。一方、フィルタ４の性能を向上させる観点からは、ナノファイバーの数平均直径は小さい方が好ましく、好ましくは３００ｎｍ以下である。
【００４２】
ナノファイバーの分散体４１は、網目状構造を形成していることが好ましい。ここで網目状構造とは、ナノファイバーが束状にはなっておらず、それぞれのナノファイバーが開繊された状態にある、いわゆる単繊維が分散されポアを形成する状態であって、複数本の単繊維が物理的あるいは化学的に絡まり合って網目状構造を形成していることを指す。
【００４３】
上記熱可塑性ポリマーとしては、ポリエステルやポリアミド（ナイロン）、ポリオレフィン、ポリフェニレンスルフィド（ＰＰＳ）等が挙げられる。特に、ナイロンなどの親水性に富むもの、または親水性処理などによってファイバに親水性を付与させたものが特に好ましい。
【００４４】
血液分離フィルタ４の表面を改質する方法としては、表面グラフト重合、高分子材料のコーティングあるいは浴中処理、放電処理などが挙げられる。
【００４５】
表面グラフト重合、高分子材料のコーティングあるいは浴中処理によって血液分離フィルタ４表面を改質する場合に用いられる高分子材料としては、特に限定はないが、親水化する目的から、非イオン性親水基を有する高分子材料が好ましい。
【００４６】
非イオン性親水基としては、ヒドロキシル基、アミド基、ポリエチレンオキサイド鎖などが挙げられる。非イオン性水酸基を有する高分子材料の合成に用いることができるモノマーとしては、例えば、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、ビニルアルコール（酢酸ビニルを重合して得られた高分子を加水分解することにより調製したもの）、メタクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドンなどが挙げられる。上記モノマーの中でも、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレートが好ましい。
【００４７】
本発明に係る血液分離フィルタ４の形態は特に限定されず、ナノファイバが少なくとも一部に含まれていればよい。好ましい血液分離フィルタ４の形態としては、織物、編物、不織布、紙、フィルムおよびそれらの複合体などが特に好ましい。
【００４８】
このナノファイバは以下の性質を有するものである。
（１）親水性であり、水を給水したり、膨潤させたりすることがない。
（２）ナノファイバは、薄い層で構成されている。
（３）数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下（好ましくは１００〜３００nm）である。そのため、１０〜２０層になっていてもなの７ファイバーの分散体４１の厚みは１〜３ミクロンである。
【００４９】
次に、図２に示す臨床検査キットの使用方法を説明する。以下の説明は、血液を血漿と赤血球に分ける方法に関するものであるが、本願発明は、細胞成分を含む任意の溶液に適用可能であり、血液を血漿と赤血球に分ける方法に限定されるものではない。
【００５０】
コック１５の切り替えによって、分離装置１１を第２および第２の容器１２、１３から分離した状態とし、該分離装置１１内に全血を採取する。血液は注射器に採取した後、注射針を栓体３に差し込んで分離装置１１内へ注入することができる。なお、栓体３を分離装置１１に取付けることなく、直接分離装置１１内へ血液を注入してもよい。
【００５１】
血液は血液分離フィルタ４を通して濾過が始まる。血漿がフィルタ４を通過すると共に、赤血球がフィルタ４上に残り、血漿が分離装置１１の検体収容部１１ｃに収容される。
【００５２】
次に、コック１５を切り替えて分離装置１１と第１の容器１２とを連通させる。第１の容器１２内には、第１の臨床検査試薬２１が配置されており、チューブ１４を介して分離装置１１から第１の容器１２へ入った血漿は該第１の臨床検査試薬２１と反応する。
【００５３】
次に、分離装置１１内のフィルタ４上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する。この操作によって、血漿は分離装置１１から排出される。この排出液は、コック１５の操作により第１の容器１２内へ送ってもよく、あるいは分離装置１１の下部に接続した第３の容器（図示せず）に送ってもよい。
【００５４】
次に、分離装置１１内のフィルタ４上に精製水を滴下して赤血球を溶血させると、赤血球はフィルタ４を通過して検体収容部１１ｃに収容され、コック１５の操作により第２の容器１３へ送られる。
【００５５】
第２の容器１３内には、第２の臨床検査試薬２２が配置されているので、赤血球はこの第２の臨床検査試薬２２と反応する。精製水の代わりに、界面活性剤および／またはカオトロピック剤などの細胞を破壊する溶液を用いることもできる。
【００５６】
上記第１および第２の臨床検査試薬２１、２２との免疫反応による凝集反応が進行すると、第１の容器１２の底部に凝集物が生じ、目視により第１の容器１２を外部から凝集物を観察し、または光学的にこの凝集物の存在により反応結果を確認、検査することができる。
【００５７】
上記反応結果の確認や反応結果の測定法としては、目視により観察し、凝集の有無を把握する方法の他、目視により呈色の度合いを観察する方法を用いてもよい。あるいは、上記呈色の度合いや、凝集の度合い、あるいは濁度を光学的に測定してもよい。
（第２実施形態）
図３〜図５は他の実施形態を示したものである。
【００５８】
本実施形態の臨床検査キットで使用する血液分離フィルタ４の上面にプラスチックシート２４が積層され、該血液分離フィルタ４の下面に剥離用フィルム２５が積層され、さらに該剥離用フィルム２５の下面にろ紙２６が積層されている。
【００５９】
該プラスチックシート２４の中央部には血液を滴下するための滴下口２７が形成され、また該滴下口２７に対応する位置において該剥離用フィルム２５の中央部に開口部２８が形成されている。このようにして積層体３０が構成されている。
【００６０】
プラスチックシート２４の滴下口２７に血液Ｂを滴下すると、血液Ｂは血液分離フィルタ４によってろ過され、赤血球は該血液分離フィルタ４の上に残り、血漿が血液分離フィルタ４を通過してろ紙２６内へ入る（図４（Ａ））。
【００６１】
次に、赤血球を覆うようにプラスチックシート２４の上にカバーフィルム２８を貼着する。その後、ろ紙２６から剥離用フィルム２５を剥がし取る（図４（Ｂ））。
【００６２】
この血漿を含むろ紙２６は、第１の容器（図示せず）内へ投入され、第１の容器内で血漿は第１の臨床検査試薬と反応する。
【００６３】
ろ紙２６以外の赤血球を含む積層体は、次に、図５に示すように、第２の容器３２内へ投入される。この第２の容器３２内には蒸留水が入っており、赤血球は蒸留水によって溶血し、ヘモグロビンはフィルタ４を通して溶出してくる。このとき、赤血球膜などの不溶成分はろ過されて溶血液中に出てくることはない。この第２の容器３２内で赤血球は第２の臨床検査試薬と反応する。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明する。本発明は本実施例により限定されるものではない。
【００６５】
（実施例１）
Ａ．血液分離フィルタの作成
厚み３０μｍのナイロンメッシュ上に数平均直径が５００ｎｍのナイロン製のナノファイバーの分散体を積層して血液分離フィルタを作成した。ファイバーの分散体は１０層とし、その厚みは２ミクロンであった。
【００６６】
Ｂ．臨床検査キットの作成および血液の検査
図２に示す形状の分離装置１１内に上記で得られた血液分離フィルタを配置した。
【００６７】
フィルタ上に全血１００μｌを滴下し、分離装置の底部から吸引してろ過を行った。血液はフィルタ上に円状に広がるがその広がり程度は小さかった。
【００６８】
次に、生理食塩水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。赤血球は、ろ過された後でもフィルタ上に残っていた。最後に、精製水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。フィルタ上には溶血した血液の色が残っていたが赤血球は存在していなかった。
【００６９】
（比較例１）
実施例１で用いた血液分離フィルタに代えて普通の市販のろ紙を用いたこと以外は、実施例１と同様に臨床検査キットを作成し、血液の検査を実施した。
【００７０】
ろ紙上に全血１００μｌを滴下し、分離装置の底部から吸引してろ過を行った。血液はろ紙上に円状に広がった。
【００７１】
次に、生理食塩水２００μｌをろ紙上に滴下し、吸引によるろ過を行った。赤血球は、ろ過されてろ紙上には残らなかった。最後に、精製水２００μｌをフィルタ上に滴下し、吸引によるろ過を行った。ろ紙はきれいになった。
【符号の説明】
【００７２】
１ 臨床検査キット
４ 血液分離フィルタ
１１ 分離装置
１２ 第１の容器
１３ 第２の容器
１４ チューブ
１５ コック
２１ 第１の臨床検査試薬
２２ 第２の臨床検査試薬
４０ 支持体
４１ ナノファイバーの分散体
【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタと、
該血液分離フィルタを通過した血漿を収容する第１の容器と、該第１の容器内に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬と、
該赤血球を収容する第２の容器と、該第２の容器内に配置されており、該赤血球と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
【請求項２】
前記ナノファイバーの分散体の少なくとも一部が網目状構造を形成している、請求項１に記載の臨床検査キット。
【請求項３】
前記血液分離フィルタが、前記ナノファイバーの分散体と、数平均直径が１μｍより大きく１００μｍ以下の繊維基材との積層体である、請求項１または２に記載の臨床検査キット。
【請求項４】
前記ナノファイバーの平均直径が、３０ｎｍ以上３００ｎｍ以下である、請求項１〜３のいずれかに記載の臨床検査キット。
【請求項５】
前記血液分離フィルタを配置する分離装置をさらに有し、
該分離装置の排出口に切り替え用コックを介して前記第１の容器および第２の容器がそれぞれ接続されている、請求項１〜４のいずれかに記載の臨床検査キット。
【請求項６】
前記分離装置の開口を気密的に封止するように該開口に取り付けられており、かつ中空針により刺通可能な材料からなる栓体を有する、請求項５に記載の臨床検査キット。
【請求項７】
(a)血液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された血液分離フィルタによって、該採取された血液から血漿をろ過し、赤血球を該フィルタ上またはフィルタ内に残す工程、
(c)該血漿と第１の容器内に配置された第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該赤血球と第２の容器内に配置された第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する血液の検査方法であって、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【請求項８】
前記(d)フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程の前に、
(f)該フィルタ上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する工程、を包含する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記(b)工程および前記(d)工程が、前記第１および第２の容器内を吸引することによって行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
細胞成分を含む溶液を採取する分離装置と、
該分離装置内に配置されており、該採取された溶液を液体成分と、細胞成分とに分離するための分離フィルタと、
該第１の容器内に収納されており、該分離フィルタにおいて溶液を分離することにより得られた液体成分と反応する第１の臨床検査試薬と、
第２の容器内に配置されており該細胞成分と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
【請求項１１】
(a)細胞成分を含む溶液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された分離フィルタによって、該採取された溶液から液体成分を該フィルタを通過させ、細胞成分を該フィルタ上に残す工程、
(c)該液体成分と第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に細胞溶解液を滴下して細胞成分を溶解し、該細胞成分からの溶解成分を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該細胞成分と第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する細胞成分を含む溶液の検査方法であって、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【請求項１】
採取された血液を血漿と赤血球とに分離するための血液分離フィルタと、
該血液分離フィルタを通過した血漿を収容する第１の容器と、該第１の容器内に配置されており、該血漿と反応する第１の臨床検査試薬と、
該赤血球を収容する第２の容器と、該第２の容器内に配置されており、該赤血球と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
【請求項２】
前記ナノファイバーの分散体の少なくとも一部が網目状構造を形成している、請求項１に記載の臨床検査キット。
【請求項３】
前記血液分離フィルタが、前記ナノファイバーの分散体と、数平均直径が１μｍより大きく１００μｍ以下の繊維基材との積層体である、請求項１または２に記載の臨床検査キット。
【請求項４】
前記ナノファイバーの平均直径が、３０ｎｍ以上３００ｎｍ以下である、請求項１〜３のいずれかに記載の臨床検査キット。
【請求項５】
前記血液分離フィルタを配置する分離装置をさらに有し、
該分離装置の排出口に切り替え用コックを介して前記第１の容器および第２の容器がそれぞれ接続されている、請求項１〜４のいずれかに記載の臨床検査キット。
【請求項６】
前記分離装置の開口を気密的に封止するように該開口に取り付けられており、かつ中空針により刺通可能な材料からなる栓体を有する、請求項５に記載の臨床検査キット。
【請求項７】
(a)血液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された血液分離フィルタによって、該採取された血液から血漿をろ過し、赤血球を該フィルタ上またはフィルタ内に残す工程、
(c)該血漿と第１の容器内に配置された第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該赤血球と第２の容器内に配置された第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する血液の検査方法であって、
該血液分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【請求項８】
前記(d)フィルタ上に精製水を滴下して赤血球を溶血させ、該赤血球を該フィルタを通過させる工程の前に、
(f)該フィルタ上に生理食塩水を滴下して赤血球を洗浄する工程、を包含する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記(b)工程および前記(d)工程が、前記第１および第２の容器内を吸引することによって行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
細胞成分を含む溶液を採取する分離装置と、
該分離装置内に配置されており、該採取された溶液を液体成分と、細胞成分とに分離するための分離フィルタと、
該第１の容器内に収納されており、該分離フィルタにおいて溶液を分離することにより得られた液体成分と反応する第１の臨床検査試薬と、
第２の容器内に配置されており該細胞成分と反応する第２の臨床検査試薬と、を備え、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、臨床検査キット。
【請求項１１】
(a)細胞成分を含む溶液を分離装置内に採取する工程、
(b)該分離装置内に配置された分離フィルタによって、該採取された溶液から液体成分を該フィルタを通過させ、細胞成分を該フィルタ上に残す工程、
(c)該液体成分と第１の臨床検査試薬とを反応させる工程、
(d)該フィルタ上に細胞溶解液を滴下して細胞成分を溶解し、該細胞成分からの溶解成分を該フィルタを通過させる工程、および
(e)該細胞成分と第２の臨床検査試薬とを反応させる工程、
を包含する細胞成分を含む溶液の検査方法であって、
該分離フィルタが、親水性の熱可塑性ポリマーからなり、数平均直径が１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるナノファイバーの分散体を含む、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１２−８８０８９（Ｐ２０１２−８８０８９Ａ）
【公開日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２３３０６５（Ｐ２０１０−２３３０６５）
【出願日】平成２２年１０月１５日（２０１０．１０．１５）
【出願人】（０００２２５７４０）南部化成株式会社 (41)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月１５日（２０１０．１０．１５）
【出願人】（０００２２５７４０）南部化成株式会社 (41)
【Ｆターム（参考）】
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