補体活性を抑制することによる同種移植片の生存の延長
同種移植した細胞、組織または器官の生存を延長させるための方法を提示している。これらの方法は、１以上の免疫抑制剤および／または免疫抑制方法と共に同種移植レシピエントへ補体活性の抑制剤を投与することを目的としている。補体活性の阻害剤は慢性投与される。これらの方法は、同種移植片の慢性拒絶の予防において補助するように定められている。これらの方法は、同種移植片とレシピエントとにＡＢＯ不適合が存在する同種移植片に対してレシピエントが前感作されている場合に追加で使用できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００６年３月２日出願の米国特許仮出願第６０／７７８，８５９号の利益および優先権を主張し、これにより全体として参照により組み入れられる。
【０００２】
本開示は哺乳動物での同種移植片の生存を延長させるための方法に関する。特に、本開示は、免疫反応を抑制する１以上の薬物または方法に加えて、補体または終末補体（terminal complement）の形成の阻害剤、特に補体Ｃ５切断の阻害剤を投与することによる同種移植片の生存を延長させることに関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
臓器移植は、慢性臓器不全を伴う大半の患者において好ましい治療である。腎臓、肝臓、肺および心臓の移植は、レシピエントがより正常なライフスタイルに戻る際に、回復の素晴らしい機会を与えるが、潜在的レシピエントの医学的および外科的な適合性、ドナー不足の深刻化、および移植臓器機能の早期不全によって制限される。
【０００４】
細胞、組織および器官の移植が非常に一般的になっており、救命手段となる場合が多い。臓器移植は慢性臓器不全を伴う大半の患者において好ましい治療である。拒絶反応を抑制するための処置における大きな改善にもかかわらず、拒絶反応が臓器移植の成功における一つの最も大きな障害であり続けている。拒絶反応には急性拒絶反応だけでなく慢性拒絶反応も含まれる。腎臓移植での１年間生存率は、死亡したドナーからの腎臓では平均８８．３％、そして生きているドナーから受けた腎臓では平均９４．４％である。腎臓移植での対応する５年間生存率は、６３．３％および７６．５％（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）である。肝臓では、１年間生存率は、死亡したドナーおよび生きているドナーからの肝臓でそれぞれ８０．２％および７６．５％である。肝臓移植での対応する生存率は６３．５％および７３．０％（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）である。免疫抑制薬、特にシクロスポリンＡ、そしてより最近ではタクロリムスの使用によって、特に急性拒絶反応を予防することにより臓器移植術の成功率が劇的に改善されている。しかし、上記数字が示す通り、依然として短期および特に長期のいずれの成功率も改善させる必要性がある。腎臓および肝臓の上記移植数から分かる通り、これらの移植器官での５年間失敗率は約２５〜３５％である。２００１年だけで、臓器移植を受けた患者が２３，０００人以上おり、そのうち約１９，０００人が腎臓または肝臓であった（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）。この１年間の移植臓器だけで、現在の技術によって、移植された腎臓および肝臓の約５，０００〜６，０００が５年以内に失敗すると予測できる。これらの数字には、骨髄などの他の移植器官または移植組織または移植細胞さえも含まれない。
【０００５】
移植には複数の種類が存在する。これらは［Ａｂｂａｓら、２０００］に記載されている。１個人から同じ個人に移植された移植片は、自己の移植片または自己移植片と呼ばれる。遺伝的に同一または同系の個人間で移植された移植片は同系移植と呼ばれる。同じ種の遺伝的に異なる２人の個人間で移植された移植片は、同種の移植片または同種移植片と呼ばれる。異なる種の個体間で移植された移植片は、異種の移植片または異種移植と呼ばれる。同種移植片上で異物として認識される分子は同種抗原と呼ばれ、そして異種移植片上の分子は異種抗原と呼ばれる。同種抗原または異種抗原と反応するリンパ球または抗体は、それぞれアロ反応性または異種反応性であると記載される。
【０００６】
現在、米国では毎年４０，０００例以上の腎臓、心臓、肺、肝臓および膵臓の移植が行なわれている（Ａｂｂａｓら、２０００）。他の可能な移植としては、限定はされないが、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞および造血細胞が挙げられる。不運にも、ドナーよりもずっと多くの移植の候補者が存在する。この不足を克服するために、異種移植の利用方法を学ぶための多大な努力がなされている。この分野が進歩するにつれて、実情は現在のところ大半の移植片が同種移植片である。現在、同種移植は異種移植よりも成功する可能性が高いが、成功するには多数の障害を越えなくてはならない。ドナー器官に対してレシピエントが起こす数種の免疫学的攻撃が存在しており、これらは同種移植片の拒絶反応を招きうる。これらとしては、超急性拒絶反応、急性血管拒絶反応（早期体液性拒絶反応と新たな急性体液性拒絶反応を含む）および慢性拒絶反応が挙げられる。通常、拒絶反応はＴ細胞媒介性の攻撃または体液性抗体の攻撃の結果であるが、しかし補体およびサイトカインの効果といった追加の二次的因子が含まれうる。
【０００７】
臓器移植を必要とする患者の数と利用可能なドナー臓器の数との絶え間なく増大するギャップが世界中で主要な問題になっている（Ｐａｒｋら、２００３）。抗ＨＬＡ抗体を発生させた個人は、免疫性を付与されている、または感作されていると言われる。（Ｇｌｏｏｒ，２００５）重度の抗体媒介性拒絶反応（ＡＢＭＲ）の発生のため、臨床移植における生きているドナーからの器官の最適な使用においてはＨＬＡ感作が大きな障壁である。例えば、腎移植を待つすべての個人の５０％以上が、複数回の輸血、過去の同種移植片の失敗または妊娠に起因する、反応性の広い同種抗体の濃度が上昇している前感作患者（Ｇｌｏｔｚら、２００２）である（Ｋｕｐｉｅｃ−Ｗｅｇｌｉｎｓｋｉ，１９９６）。この種の拒絶反応が同種移植片の機能の急性喪失または慢性喪失を招きうるとの認識のため、現在、ＡＢＭＲの役割は移植において最も精力的に試験されている分野の１つである（Ｍｅｈｒａら、２００３）。超急性拒絶反応（ＨＡＲ）または早期体液性拒絶反応（ＡＣＨＲ）を含む、多数のＡＢＭＲ症例が報告されており、強力な抗Ｔ細胞治療に耐性である急性同種移植片傷害、循環ドナー特異的抗体の検出および移植片中の補体成分の沈着を特徴とする。急性拒絶反応の症例の２０〜３０％において生じる循環同種抗体の上昇および補体活性化を伴うＡＢＭＲは、細胞性拒絶反応よりも予後不良である（Ｍａｕｉｙｙｅｄｉら、２００２）。
【０００８】
高濃度の同種抗体を示す高度に前感作された患者は、通常、即時および侵襲性のＨＡＲ を経験する。診療においては、当技術における多大の努力および大幅な進歩によって、ドナーＨＬＡ抗原に特異的な抗体を有する感作患者を特定するための移植前リンパ球毒性クロスマッチを得ることでＨＡＲを回避する。しかし、ドナーＨＬＡまたは他の非ＭＨＣ内皮抗原に対する循環抗体は、移植片消失の発生増加に関連する遅延型の急性体液性拒絶反応にも関与しうる。（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９）。したがって、臨床現場においてＡＢＭＲを模倣する新規の前感作動物モデルの作成は、機序の研究、および前感作宿主における同種移植片の拒絶反応の管理におけるより大きな必要性に対して有益となりうる。
【０００９】
高度に前感作させた患者は、一時的に抗ドナー抗体を排除するように設計および実施される、免疫吸着（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）、血漿搬出および静脈内免疫グロブリン（非特許文献４；非特許文献５）などの介入プログラムから恩典を得ることができる。しかし、それらの恩典に加えて、一部の個人はこれらの効果に対して感受性が低いため、上述の治療は多数の欠点を伴い（非特許文献３；Ｈａｋｉｍら、１９９０；Ｇｌｏｔｚら、１９９３；Ｔｙａｎら、１９９４）、それらは極めて効果であり、時間がかかり、そしてリスクを伴う（Ｓａｌａｍａら、２００１）。さらに、これらのプロトコルの一過性かつ変動する効果のため、それらの影響が限定される（Ｇｌｏｔｚら、２００２；Ｋｕｐｉｎら、１９９１ ；Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒら、２０００）。したがって、ＡＢＭＲの予防におけるリスクとコストを低減させるための新規戦略を開発することは、同種移植片を受ける前感作レシピエントに有益となりうる。
【非特許文献１】Ｐａｌｍｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ（１９８９）１：１０〜１２
【非特許文献２】Ｒｏｓｓら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９３）５５：７８５〜７８９
【非特許文献３】Ｋｒｉａａら、Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（１９９５）１０ Ｓｕｐｐｌ．６：１０８〜１１０
【非特許文献４】Ｓｏｎｎｅｎｄａｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．（２００２）３４：１６１４〜１６１６
【非特許文献５】Ｒｏｃｈａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００３）７５：１４９０〜１４９５
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（要旨）
したがって、移植した細胞、組織または器官の生存を延長させるための方法を提供する。特に、同種移植した細胞、組織または器官の生存を延長させるための方法を提供する。これらの方法では、補体活性の阻害剤に加えて、１以上の免疫抑制剤および／または免疫抑制方法の使用を対象としている。１以上の薬物または薬物パッケージの製造における１以上の免疫抑制剤および補体活性の阻害剤の使用も提供する。のような薬物あるいは薬物パッケージは、被験体である哺乳動物における同種移植片の生存期間を延長する際に有用である。
【００１１】
同種移植片の例は、同種移植された細胞、組織または臓器であり、限定はされないが、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞、造血細胞、心臓、肝臓、肺、腎臓および膵臓が挙げられる。
【００１２】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法を提供し、該方法は、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される。
【００１３】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００１４】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）である。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００１５】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００１６】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００１７】
特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００１８】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００１９】
特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００２０】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含む前記方法であって、前記治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、前記哺乳動物は前記同種移植片に対して前感作される、方法を提供する。
【００２１】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００２２】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００２３】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００２４】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００２５】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００２６】
哺乳動物を同種移植片に対して前感作させる特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００２７】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作用される特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００２８】
特定の局面では、開示は、哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用を提供する。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が前記の薬物または薬物パッケージに含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。特定の態様では、前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。
【００２９】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される方法を提供する。
【００３０】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００３１】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００３２】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００３３】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００３４】
特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００３５】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００３６】
特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００３７】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対するａ）補体活性を抑制する薬物およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制薬を投与することを含み、治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法を提供する。
【００３８】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００３９】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００４０】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００４１】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００４２】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００４３】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００４４】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００４５】
特定の局面では、開示は、哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用を提供し、少なくとも１つの免疫抑制薬にＬＦ１５−０１９５が含まれる。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が前記の薬物または薬物パッケージに含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。特定の態様では、前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。
【００４６】
特定の局面では、開示は、補体活性を抑制する薬物および少なくとも１つの免疫抑制薬を含む薬学的パッケージであって、該補体活性を抑制する薬物および該免疫抑制薬が慢性投与用に製剤化されており、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む薬学的パッケージを提供する。
【００４７】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が抗体および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中の抗体である。特定の態様では、前記免疫抑制薬が免疫抑制薬および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中にある。特定の態様では、前記薬物および前記免疫抑制薬が前記薬物、前記免疫抑制薬および凍結保護剤を含む同じ凍結乾燥製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物を含む。特定の態様では、前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該免疫抑制薬を含む。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあり、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物および該免疫抑制薬を含む。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が単位投薬形態で存在する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が単位投薬形態で存在する。
【００４８】
特定の態様では、前記抗体が終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、抗体は抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。
【００４９】
出願では、上記局面および態様の任意の併用についても検討している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
（詳細な説明）
概観：移植器官または移植片の拒絶反応
移植から数分から数時間以内に超急性拒絶反応が発生しており、移植された組織抗原に対して前もって形成された抗体に起因している。これは移植片の血管系での出血および血栓性閉塞を特徴とする。内皮への抗体の結合によって補体が活性化されて、抗体および補体は静脈内血栓症が促進されて、そして血管閉塞を招く移植片の内皮に多くの変化を誘発させて、結果として移植された臓器に不可逆的な虚血性傷害を招く（Ａｂｂａｓら、２０００）。
超急性拒絶反応は既存のＩｇＭ同種抗体（例、赤血球細胞に発現するＡＢＯ血液群抗原に対する同種抗体）によって媒介されることが多い。この種の拒絶反応は自然抗体によって媒介され、異種移植の拒絶反応の主な理由である。同種移植は通常ドナーおよびレシピエントのＡＢＯ型とマッチするように選択されるため、自然のＩｇＭ抗体に起因する超急性拒絶反応はもはや同種移植における大きな問題ではない。通常、外来のＭＨＣ分子などのタンパク質同種抗原または血管内皮細胞に発現する十分に明らかにされていない同種抗原に対するＩｇＧ抗体によって媒介される、ＡＢＯマッチ同種移植の超急性拒絶反応が発生する可能性がある。このような抗体は、輸血、先行する移植または多胎妊娠（先行するこの暴露は、「前感作」と呼ばれる）を通して同種抗原への先行する暴露の結果として生じうる（Ａｂｂａｓら、２０００）。
【００５１】
急性拒絶反応は、通常、移植の第１週間後に始まるＴ細胞、マクロファージおよび抗体によって媒介される血管や実質の損傷の過程である。（Ａｂｂａｓら、２００１）。Ｔリンパ球は、血管内皮や実質細胞に存在するＭＨＣ分子を含む同種抗原に応答することで急性拒絶反応において中心的な役割を果たす。活性化Ｔ細胞は、移植片細胞を直接溶解させるか、または炎症性細胞を動員して、活性化させるサイトカインを産生して、これによって壊死を起こす。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞のいずれも急性拒絶反応の一因となりうる。移植片における同種細胞の破壊は高度に特異的であり、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞による殺傷の特徴である。（Ａｂｂａｓら、２０００）。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、サイトカインを分泌して、そして移植組織における遅延型感覚過敏症様反応を誘発することによって急性移植片の拒絶反応を媒介する際に重要となりうるが、ＣＤ４＋Ｔ細胞が急性拒絶反応を媒介するのに十分であることを示すいくつかの証拠を入手できる。（Ａｂｂａｓら、２０００）。移植片のレシピエントにおいて管壁抗原に対する体液性免疫反応が高まり、そして産生された抗体が管壁に結合して補体を活性化した後、抗体は急性拒絶反応を媒介することもできる（Ａｂｂａｓら、２０００）。
【００５２】
慢性拒絶反応は、長期の期間にわたって正常な臓器構造の消失が起こる線維化を特徴とする。慢性拒絶反応の病因は、急性拒絶反応の病因ほどには理解されていない。移植片の動脈性閉塞が内膜平滑筋細胞の増殖の結果として起こりうる（Ａｂｂａｓら、２０００）。この過程は、早期の、または移植片の動脈硬化と呼ばれ、移植後６カ月から１年以内に任意の血管新生させる臓器移植において発生しうる。
【００５３】
移植を成功させるには、いくつかの機序の拒絶反応を克服しなくてはならない。拒絶反応を予防するために複数のアプローチが利用される。これには免疫抑制剤、多くの場合には、様々な機序の攻撃、例えば、Ｔ細胞攻撃、抗体ならびにサイトカインおよび補体の効果を阻止するためのいくつかの種類の投与が要求されうる。これらをレシピエントと適合させるためのドナーのプレスクリーニングも、拒絶反応の予防、特に超急性拒絶反応の予防における重要な要因である。移植前の抗ＨＬＡ抗体の免疫吸着によって超急性拒絶反応が軽減されうる。移植前に、レシピエントまたは宿主に抗Ｔ細胞試薬、例えば、モノクローナル抗体ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、シクロスポリンＡまたはタクロリムス（ＦＫ５０６）を投与できる。さらに、グルココルチコイドおよび／またはアザチオプリン（または他のプリン類似体）を移植前に宿主に投与できる。移植拒絶反応の予防を補助するために使用する薬物としては、限定はされないが、ＡＴＧまたはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリンなどのプリン類似体、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナール、レフルノミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４− Ｉｇ、リツキサン、抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗ＬＦＡｌモノクローナル抗体、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗ＣＤ２モノクローナル抗体および抗ＣＤ４５が挙げられる。
【００５４】
同種移植片は部分的にＴ細胞の活性化によって拒絶反応される。移植レシピエントにおいては、同種移植片内の外来抗原をＣＤ４＋Ｔ細胞が認識後、拒絶反応が高まる。これらの抗原は主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によってコード化される。クラスＩおよびクラスＩＩのいずれのＭＨＣ分子も存在する。ヒトでは、クラスＩのＭＨＣ分子はＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ −Ｃである。ヒトのクラスＩＩ ＭＨＣ分子は、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱおよびＨＬＡ − ＤＰと呼ばれる。マウスでは、クラスＩ ＭＨＣ分子は、Ｈ−２Ｋ、Ｈ−２ＤおよびＨ−２Ｌであり、そしてクラスＩＩ ＭＨＣ分子はＩ−ＡおよびＩ−Ｅである。ＣＤ４＋Ｔ細胞が外来ＭＨＣ抗原に結合した際、それらは活性化されて、クローン増殖を遂げる。活性化Ｔ細胞は、単球／マクロファージ、Ｂ細胞と細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化する際の補助となるサイトカインを分泌する。活性化単球／マクロファージは、組織傷害を招く薬剤を放出し、Ｂ細胞は補体媒介性の組織破壊を招く同種抗体を産生し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞はアポトーシスおよび細胞溶解を介した抗原特異的な方法で移植片細胞を殺傷する。
【００５５】
免疫抑制剤
移植片の拒絶反応を遅らせる（つまり、移植片の生存期間を長くする）ために使用される多くの薬物が、様々な方法で作用する。免疫抑制剤が広く使用されている。いくつかの免疫抑制薬の作用機序のレビューについては、［Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００］を参照すること。移植片の拒絶反応を抑制する際に、シクロスポリンＡは最も広く使用される免疫抑制薬の１つである。これはインターロイキン２またはＩＬ−２の阻害剤（これはインターロイキン２のｍＲＮＡ転写を阻止する）である。より直接的には、シクロスポリンによって、Ｔ細胞受容体刺激時に正常に起こるカルシニューリン活性化が抑制される。カルシニューリンはＮＦＡＴ（活性Ｔ細胞核因子）を脱リン酸化させて、ＮＦＡＴを核内に進入させ、インターロイキン２プロモーターに結合できるようにする。この過程を遮断することによって、シクロスポリンＡはＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化および、本来ならば結果として生じうるカスケードの活性化を抑制する。タクロリムスはインターロイキン２の産生を抑制することによって作用するもう１つの免疫抑制剤である。
【００５６】
ラパマイシン（シロリムス）、ＳＤＺ ＲＡＤおよびインターロイキン２受容体遮断薬は、インターロイキン２の作用を抑制して、ひいては上記事象のカスケードを阻止する薬物である。
【００５７】
プリンまたはピリミジン合成の阻害剤は、移植片の拒絶反応の抑制にも使用される。これらはＤＮＡ合成を阻止して、そしてそれによってＴ細胞の分裂能を含む細胞分裂を抑制する。結果として、新しいＴ細胞の形成を阻止することによってＴ細胞の活性を阻害する。プリン合成の阻害剤としては、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）およびミゾリビン（ブレディニン）が挙げられる。ピリミジン合成の阻害剤がブレキナールナトリウムとレフルノミドを挙げる。シクロホスファミドは、プリンおよびピリミジンの両方の合成の阻害剤である。
【００５８】
Ｔ細胞活性化を阻害するためのさらに別の方法は、Ｔ細胞に対する抗体でレシピエントを治療することである。ＯＫＴ３は、Ｔ細胞受容体の一部であるＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体である。この抗体はＴ細胞受容体を抑制して、そしてＴ細胞の活性化を抑制する。
【００５９】
同種移植での拒絶反応を遅延させるための多数の他の薬物および方法が、当業者には公知であり、当業者によって使用されている。１つのアプローチは、例えば放射線治療によってＴ細胞を枯渇させることであった。特に主要ＨＬＡの部分的ミスマッチが存在する場合、これは骨髄移植において利用される場合が多い。ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０の相互作用の阻害剤（遮断薬）および／またはＣＤ２８−Ｂ７相互作用の遮断薬のレシピエントへの投与が利用されてきた（米国特許第６，２８０，９５７号）。公表されたＰＣＴ特許出願国際公開公報第０１／３７８６０号には、Ｔｈ１免疫反応を抑制するための抗ＣＤ３モノクローナル抗体およびＩＬ −５の投与について教示している。公表されたＰＣＴ特許出願国際公開公報第００／２７４２１号には、腫瘍壊死因子−αアンタゴニストを投与することによる角膜移植の拒絶反応の予防または治療の方法について教示している。Ｇｌｏｔｚら（２００２）は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）の投与によって抗ＨＬＡ抗体の力価の大幅で持続的な低下を誘発されて、これによってＨＬＡ不適合臓器の移植が可能になることを示している。同様のプロトコルとしては、血漿交換（Ｔａｕｂｅら、１９８４）または免疫抑制剤を併用した免疫吸着技術（Ｈｉｅｓｓｅら、１９９２）またはこれらの併用（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、２０００）が挙げられる。Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎら（２００３）は、共通のγ鎖（γｃ）（インターロイキン−２、−４、−７、−９、−１５、−２１）を利用したサイトカイン受容体の適切なシグナリングに必要な酵素であるヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の経口阻害剤によって免疫抑制が起こり、結果としてＴ細胞活性化が抑制されるモデルを教示している。ＩＣＡＭ−１に対するアンチセンス核酸が、心臓同種移植片移植の試験において単剤で、または白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）に特異的なモノクローナル抗体と併用されている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。同様に、心臓同種移植片を治療するために抗ＩＣＡＭ−１抗体が抗ＬＦＡ−１抗体と併用されてきた（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、さらに、心臓または腎臓同種移植片モデルにおいてシクロスポリンと併用されており、結果として生存期間を延長する相乗効果をもたらしている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。慢性移植拒絶反応は、分化、増殖およびアポトーシスに関与するサイトカインであるＴＧＦ−βのアンタゴニストを投与することによって治療された（米国特許出願公開第２００３／０１８０３０１号）。
【００６０】
補体と移植片／移植片の拒絶反応
移植拒絶反応における補体の役割は周知である。これは特に異種移植に当てはまるが、しかし補体は同種移植での拒絶反応においても役割を果たす。［Ｐｌａｔｔ ａｎｄ Ｓａａｄｉ，１９９９］のレビューを参照すること。補体の役割の一局面は、レシピエントの血液で臓器移植片を再潅流させる際に虚血再潅流障害が起こりうることである。補体は同種移植片の拒絶反応の一部の徴候も起こしうる。
【００６１】
補体系については米国特許第６，３５５，２４５号に詳述されている。補体系は、細胞およびウイルスの病原体の侵入を防御する身体の他の免疫系と共に作用する。少なくとも２５の補体タンパク質が存在しており、これらは血漿タンパク質と膜補因子の複雑な回収物として見いだされる。血漿タンパク質は、脊椎動物の血清においてグロブリンの約１０％を構成する。補体成分は、複雑であるが、正確な一連の酵素切断および膜結合の事象において相互作用することによって補体成分の免疫防御機能を得る。結果として生じる補体カスケードは、オプソニン作用、免疫調節作用および溶菌作用と共に産物の産生をもたらす。
【００６２】
補体カスケードは古典経路または補体活性化第２経路を介して進行する。これらの経路は多くの成分を共用しており、そして、経路はそれらの最初の段階で異なるが、経路は収束して、標的細胞の活性化および破壊に関与する同じ「終末補体」成分（Ｃ５からＣ９）を共用する。
【００６３】
典型的には、古典的な補体経路は、標的細胞上の抗原部位の抗体認識および抗原部位への結合によって開始する。通常、補体活性化第２経路は抗体に依存せず、病原体の表面上にある特定分子によって開始できる。両経路は、補体成分Ｃ３が活性プロテアーゼによって切断されて（各経路で異なる）、Ｃ３ａとＣ３ｂを生じる時点で収束する。補体作用の様々な局面をもたらす一連の事象の後半において、補体攻撃を活性化させる他の経路が作用できる。
【００６４】
Ｃ３ａはアナフィラトキシンである。Ｃ３ｂは、特定のウイルスや免疫複合体の他、細菌細胞および他の細胞に結合して、そしてそれらにタグを付けて血液循環から除外する。この役割におけるＣ３ｂは、オプソニンとして知られている。Ｃ３ｂのオプソニン作用は、補体系の最も重要な抗感染作用と見なされる。Ｃ３ｂ機能を遮断する遺伝子損傷を伴う患者は、多種多様な病原生物に感染されやすく、補体カスケードシークエンスの後半に損傷を伴う患者、つまりＣ５機能を遮断する損傷を伴う患者はナイセリア感染にのみ傾向が強く、多少傾向が認められるのみである（Ｆｅａｒｏｎ，１９８３）。
【００６５】
Ｃ３ｂは、各経路に特有な他の成分と複合体も形成して、古典的または代替のＣ５転化酵素を形成し、これはＣ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。補体活性化第２経路および古典経路のいずれにも必須であることから、従って、Ｃ３は補体反応シークエンスにおける中心的なタンパク質と見なされる（Ｗｕｒｚｎｅｒら、１９９１）。Ｃ３ｂのこの特性は、Ｃ３ｂに作用してｉＣ３ｂを産生する血清プロテアーゼ第Ｉ 因子 （Ｆａｃｔｏｒ Ｉ）によって調節される。依然としてオプソニンとして機能的であるが、ｉＣ３ｂは活性Ｃ５転化酵素を形成できない。
【００６６】
Ｃ５は、正常血清において７５μｇ／ｍｌ（０．４μＭ）認められる１９０ ｋＤａのβ−グロブリンである。Ｃ５はグリコシル化され、その質量の約１．５〜３％が炭水化物に起因する。成熟Ｃ５は、６５６個のアミノ酸７５ｋＤａβ鎖とジスルフィド結合した９９９個のアミノ酸１１５ｋＤａα鎖のヘテロダイマーである。Ｃ５は１コピー遺伝子の一本鎖前駆体タンパク質産物として合成される（Ｈａｖｉｌａｎｄら、１９９１）。この遺伝子の転写産物のｃＤＮＡ配列から、１８個のアミノ酸のリーダー配列を伴う１６５９個のアミノ酸の分泌型のプロＣ５前駆体が予測される。
【００６７】
プロＣ５前駆体は６５５および６５９のアミノ酸の後で切断されて、アミノ末端断片としてβ鎖（＋１から６５５アミノ酸残基）およびカルボキシル末端断片としてα鎖（６６０から１６５８アミノ酸残基）を生じ、２つの間で４個のアミノ酸が取り除かれる。
【００６８】
Ｃ５ａは、α鎖の最初の７４のアミノ酸を含んでいるアミノ終末断片（つまり、６６０−７３３アミノ酸残基）として、代替Ｃ５転化酵素または古典的Ｃ５転化酵素のいずれかによってＣ５のα鎖から切断される。Ｃ５ａの１１ ｋＤａの質量の約２０％は炭水化物に起因する。転換酵素が作用する切断部位は、７３３アミノ酸残基またはこれに直接隣接している。この切断部位に結合しうる、または隣接しうる化合物は、Ｃ５転化酵素の切断部位への接近を遮断して、これによって補体阻害剤として作用する可能性を持ちうる。
【００６９】
Ｃ５は、Ｃ５転化酵素活性以外に方法によっても活性化できる。限定トリプシン消化（Ｍｉｎｔａ ａｎｄ Ｍａｎ，１９７７；Ｗｅｔｓｅｌ ａｎｄ Ｋｏｌｂ，１９８２）と酸処理（Ｙａｍａｍｏｔｏ ａｎｄ Ｇｅｗｕｒｚ，１９７８；Ｖｏｇｔら、１９８９）によってもＣ５を切断して、そして活性Ｃ５ｂを産生できる。
【００７０】
Ｃ５ａはもう１つのアナフィラトキシンである。Ｃ５ｂは、ヘキサメトニウム （Ｃ６）、Ｃ７およびＣ８に結合して、標的細胞の表面においてＣ５ｂ−８複合体を形成する。いくつかのＣ９分子の結合時に、膜攻撃複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ−９、終末補体複合体−ＴＣＣ）が形成される。十分な数のＭＡＣが標的細胞膜に挿入された場合、ＭＡＣが作る開口（ＭＡＣ孔）は標的細胞の迅速な浸透圧溶解を媒介する。より低い、溶菌濃度未満のＭＡＣは、他の効果をもたらすことができる。特に、内皮細胞および血小板内への少数のＣ５ｂ−９複合体の膜挿入は、有害な細胞活性化を起こしうる。一部の場合、活性化は細胞溶解より前に起こりうる。
【００７１】
上記の通り、Ｃ３ａおよびＣ５ａはアナフィラトキシンである。これらの活性化補体成分は、ヒスタミンおよび他の炎症媒介物質を放出するマスト細胞の脱顆粒を引き起こして、結果として平滑筋収縮、血管透過性の上昇、白血球活性化、および超細胞充実性を招く細胞増殖などの他の炎症現象を招く。Ｃ５ａは走化性ペプチドとしても機能して、補体活性化部位に炎症誘発性顆粒球を集める役割を果たす。
【００７２】
ドナー同種抗原に対する補体結合レシピエント抗体は、超急性移植片の拒絶反応の主因と考えられる。移植前の交差適合試験のために、このプロトタイプの体液性拒絶反応は今日では稀にしか認められない（Ｒｅｇｅｌｅら、２００１）。今日、データは体液性免疫の機序が他の種類の同種移植片の拒絶反応の一因となりうることを示している（Ｒｅｇｅｌｅら、２００１）。体液性前感作を示す高濃度のパネル反応性抗体は、腎臓移植片の生存期間の低下に関連していることが判明しており（Ｏｐｅｌｚ，１９９２）、移植後の同種抗体の出現は、移植の転帰不良を予測すると報告されており（Ｊｅａｎｎｅｔら、１９７０；Ｈａｌｌｏｒａｎら、１９９２）、ならびに免疫吸着によるレシピエントＩｇＧの選択的除去は、拒絶反応への体液性免疫機序の寄与を示す一部の拒絶反応発症を回復させた（Ｐｅｒｓｓｏｎら、１９９５；Ｂoｈｍｉｇら、２０００）。移植片内の補体活性化は、抗体媒介性の移植片傷害を示しうる。補体切断産物Ｃ４ｄは、抗体依存性の古典経路の活性化マーカーである。腎臓同種移植片の生検材料における毛細血管Ｃ４ｄ沈着物は、移植の転帰不良に関連していた。
【００７３】
近年、補体活性化が同種移植片レシピエントの感作および同種移植片における組織傷害の発生に大きく寄与することを示す証拠が増加している（Ｐｌａｔｔら、１９９９）。抗体は、古典的補体経路の活性化において最も徹底的に研究されている媒介物質である。臨床的には、同種抗体は補体を活性化することが知られている（Ｂａｌｄｗｉｎら、２００１）。ＨａｌｌｏｒａｎとＣｏｌｌｉｎｓは、腎臓同種移植片の傍尿細管毛細血管におけるＣ４ｄ沈着が循環ドナー特異的抗体の存在に関連する急性体液性拒絶反応の高感度な診断マーカーであることを示している（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９；Ｈａｌｌｏｒａｎ，２００３）。補体阻害（Ｐｒａｔｔら、１９９６；Ｐｒｕｉｔｔら、１９９１ ；Ｆｏｒｂｅｓら、１９７８）または補体欠乏（Ｐｒａｔｔら、２０００；Ｂａｕｒｅｒら、１９９５）を伴う動物においてさらなる裏づけ証拠が認められ、これらは炎症性傷害の大幅な軽減および抗ドナー免疫反応の低下を呈する。ＡＢＭＲにおいては、補体は古典経路によって活性化されて、そして病因における主要な役割を果たすことが示されている（Ｃｏｌｌａｒｄら、１９９７）。異種移植後のＨＡＲまたは急性血管拒絶反応（ＡＶＲ）における補体の役割については十分に立証されているが（Ｐｌａｔｔら、１９９９）、同種移植術後のＡＢＭＲの病因における補体の厳密な機序につてはまだ明らかにされていない。
【００７４】
補体のＣ５成分が切断されて、複数の炎症誘発性作用を伴う産物を形成して、これによって免疫媒介性の炎症反応内で補体阻害の魅力的な標的を示す。上記の通り、Ｃ５ａは強力なアナフィラトキシンおよび走化性因子である。Ｃ５ａによる細胞の活性化は、複数のさらなる炎症性媒介物質の放出を誘発する（Ｊｏｓｅら、１９８３）。補体活性化経路（古典経路、補体活性化第２経路またはマンナン結合レクチン経路）は、最終的には細胞溶解性の膜攻撃複合体Ｃ５ｂ−９の形成を導き（Ｋｉｒｓｃｈｆｕｎｋ，２００１）、これは細胞溶解による直接的な組織傷害および溶解量未満での炎症誘発性細胞活性化の両方を媒介できる（Ｓａａｄｉら、１９９５；Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕら、１９９１）。したがって、Ｃ５ａとＣ５ｂ−９の両方の産生を遮断することが、移植後の補体媒介性の炎症反応の最適な抑制に必要となりうる。同時に、Ｃ５での補体カスケードの抑制はＣ３ｂ産生を妨げず、免疫複合体の可溶化およびクリアランスの他、病原微生物のＣ３ｂ媒介性オプソニン化を保護する（Ｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，１９９３）。
【００７５】
抗Ｃ５ｍＡｂの有益な効果は、自己免疫疾患（Ｋｉｒｓｃｈｆｉｎｋ、２００１）、両心バイパスおよび急性心筋梗塞におけるヒトでの臨床試験の他、心筋再潅流（Ｖａｋｅｖａら、１９９８）、全身性紅斑性狼瘡（Ｗａｎｇら、１９９６）および関節リウマチ（Ｗａｎｇら、１９９５）を含む数例の実験において報告されている。また、抗Ｃ５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の機能的遮断による補体不活化によって、異種移植モデルでのＨＡＲが予防された（Ｋｒｏｓｈｕｓら、１９９５；Ｗａｎｇら、１９９９）。
【００７６】
補体阻害剤の投与による同種移植での拒絶反応を延期させる方法が試験された。公表ＰＣＴ特許出願国際公開公報第９２／１０２０５号には、前感作ラットモデルにおける心臓同種移植の拒絶反応を抑制するシクロスポリンと可溶性補体受容体（ｓＣＲｌ）の併用が開示されている。補体受容体１は、補体Ｃ３ｂおよびＣ４ｂに結合する。可溶型の補体受容体１は自然発生する、または組換えＤＮＡ技術によって作成できる。これらの可溶性補体受容体は、インビトロで補体活性化の結果を抑制する（米国特許第６，０５７，１３１号）。国際公開広報第９２／１０２０５号では、受け取る心臓同種移植片に対して前感作させたラットに、移植の２日前から１０ｍｇ／ｋｇ ／日のシクロスポリンＡの筋肉内投与を開始して、そして移植片の拒絶反応時まで続けた。さらに、移植片の再潅流の直前に可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１）を１５ｍｇ／ｋｇの静脈内ボーラス単回投与した。薬物療法のない対照動物は、平均３．８日で移植片が拒絶反応された。シクロスポリンＡを単剤投与された動物は、平均５７日で移植片を拒絶反応した（これにはばらつきがあり、２匹のラットが２日目および４日目に急に拒絶して、そして３番目のラットが１６６日目に拒絶反応した）。ｓＣＲ１を単剤投与されたラットは、平均４４日目に移植片を拒絶反応した。シクロスポリンＡとｓＣＲ１を併用投与されたラットは、平均１４７日目に移植片を拒絶反応した。慢性シクロスポリンＡおよび単回ボーラスｓＣＲ１の併用では、結果として移植片の拒絶反応までの時間を大幅に延長させる相乗効果が認められた。ＰｒｕｉｔｔとＢｏｌｌｉｎｇｅｒによる過去の試験（１９９１年）では、前感作ラットでの同種移植の同様のモデル動物を使用しており、補体を不活化させるためのｓＣＲ１単剤投与によって移植片の拒絶反応までの時間が延長されることを示している。
【００７７】
Ｓｉｍｓら（米国特許第５，１３５，９１６号）は、移植される臓器および組織の血管内皮を処理するために、補体の阻害剤（例、ＣＤ５９またはＣ５ｂ−９複合体の形成を遮断するＣ７またはＣ９に対する抗体）の使用を示唆している。これによってＣ５ｂ−９によって開始される細胞壊死が阻止されうる。Ｃ５ｂ−９不活化物質を灌流液または保存培地に添加して、インビトロでの保存中に血管内層（ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｉｎｉｎｇ）細胞を補体活性化の進行から保護する。さらに、移植時に開始する補体活性化に起因する細胞溶解および血栓性効果から臓器または組織を防御して、これによって補体媒介性の急性拒絶反応を回避しうる。Ｓｉｍｓら（米国特許第５，５７３，９４０号および米国特許第６，１００，４４３号）は、移植された臓器を拒絶反応から保護するための移植された組織または臓器におけるＣＤ５９の発現方法についても教示している。移植される細胞にトランスフェクトすることでこれを達成できる。
【００７８】
ドナーの同種移植片をレシピエントに適合させるためのドナーとレシピエントをプレスクリーニングする方法と併用される、今日まで開発された数種の薬物によって、同種移植片の平均生存期間が経時的に増加しているが、しかしながら、多くの同種移植片はレシピエントの生存期間中に拒絶反応される。一般的に、先行技術の進歩は、主に、移植片の急性拒絶反応を克服することに向けられてきた。さらに、抗体媒介性の同種移植片の拒絶反応における活性化された終末補体成分の役割は、Ｃ５タンパク質レベルで補体カスケードを特異的に標的とする阻害剤を用いて試験されることはなかった。本明細書に記載の方法および実施例に例示した方法は、同種移植片、特に前感作させたレシピエントの同種移植片の慢性拒絶反応を抑制することによっての同種移植の技術を進歩させる。補体阻害剤の慢性投与との併用での免疫抑制薬の適切な併用を利用することによって、同種移植片の生存を延長させるための新しい方法を示している。
【００７９】
方法と使用
本明細書に開示する方法を利用して、同種移植片の生存を延長させる。一般的に、方法には、１以上の免疫抑制剤との併用での補体活性の阻害剤の投与が含まれる。
【００８０】
適当な補体阻害剤は、当業者には公知である。抗体は、活性化補体の個々の成分に対して作成できる（例えば、Ｃ５ａ、Ｃ７、Ｃ９などに対する抗体）（例、米国特許第６，５３４，０５８号；米国特許出願第２００３／０１２９１８７号；および米国特許第５，６６０，８２５号を参照すること）。ＣＤ５９、ＣＤ５５、ＣＤ４６およびＣ８とＣ９の他の阻害剤を含む、補体媒介性の溶解を抑制するタンパク質が知られている（例、米国特許第６，１００，４４３号を参照すること）。米国特許第６，３５５，２４５号には、Ｃ５に結合して、そしてＣ５ａおよびＣ５ｂへ切断されることを阻止して、これによってＣ５ａの形成のみならずＣ５ｂ−９複合体の形成も阻止する抗体について教示している。補体受容体として知られており、補体に結合するタンパク質も知られている（公表されているＰＣＴ特許出願国際公開広報第９２／１０２０５号および米国特許第６，０５７，１３１号を参照すること）。可溶化型の補体受容体（例、可溶性ＣＲ１）の使用によって、好中球の酸化的破壊、補体媒介性の溶血、ならびにＣ３ａおよびＣ５ａの産生などの補体活性化の結果を抑制できる。当業者であれば、補体および補体の活性化を阻害する上記の既知の方法の全てではないが、その一部を認識する。
【００８１】
適当な免疫抑制剤としては、限定はされないが、ＡＴＧまたはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナール、レフルノミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、リツキサン、抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗ＬＦＡ１モノクローナル抗体、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗ＣＤ２モノクローナル抗体および抗ＣＤ４５が挙げられる。
【００８２】
同種移植片としては、移植された臓器、臓器の一部、組織または細胞を挙げることができる。これらには、限定はされないが、心臓、腎臓、肺、膵臓、肝臓、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞および造血細胞が挙げられる。
【００８３】
同種移植片の不全の理由の少なくとも一部は、同種移植片のレシピエントによる１つの反応が補体活性化であるということである。これは、結果的に強力な炎症誘発性分子であるＣ５ａおよびＣ５ｂ−９の形成を招き、これらは移植片の不全を起こす際の補助となる。提示している任意の理論に拘束されることを望まないが、Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９の形成を抑制すること、または存在するＣ５ａおよびＣ５ｂ−９を抑制することは、移植片不全を予防する際の補助となりうることを出願者は理論化した。さらに、同種移植片が存在する限りレシピエントは移植片に対する免疫反応を高める試みを続けて、そしてこの反応にはＣ５ａおよびＣ５ｂ−９を産生する試みが含まれうることが理論化された。阻止されない場合、この補体反応は短期的には急性血管拒絶反応を招き、そして長期的には慢性移植片の拒絶反応の一因となりうる。先行技術における補体活性の阻害剤の使用方法は、移植時にのみこれらの阻害剤を投与することに限られる。これは急性拒絶反応の予防に役立つが、本明細書で開示する結果が例示する通り、長期間のこのような阻害剤の投与によって改善された結果が得られる。この長期投与は、急性拒絶反応を予防する際に補助するだけであるのとは対照的に、同種移植片の慢性拒絶反応を予防する際の補助となる。結果的に、補体活性の阻害剤を投与しない、または同種移植片の移植時にのみこのような阻害剤を投与することのいずれかと比較して、同種移植片の生存期間はより長期になる。非常に多くの場合、同種移植片がレシピエントの残りの生存期間にわたり生き残ることが望ましいが、同種移植片が短期間にわたり必要な場合がある（例、レシピエント自身の臓器が、それ自体が回復できるまでの時間を橋渡しするブリッジ臓器（ｂｒｉｄｇｅ ｏｒｇａｎ）であって、この時には同種移植片はもはや必要とされない）。このような移植片が必要とされる時間の長さは変動するが、しかし、通常、急性拒絶反応が起こる時間よりは長く、そして慢性拒絶反応が起こるのに十分長くなりうる。ブリッジ移植片（ｂｒｉｄｇｅ ｇｒａｆｔ）のための所望のこの生存期間は数カ月、例えば、６カ月間でよい。
【００８４】
補体活性の長期抑制によって同種移植片の生存期間が延長されることを証明するために、補体活性化が移植時のみでなく、慢性的に阻害された実験を行なった。慢性治療とは、同種移植片の生存期間まで延長させた期間中での治療を意味する。これは毎日の治療でよいが、しかし、毎日の治療に限定されない。慢性治療では、同種移植片のレシピエントにおいて有効量の薬物が維持されうる。例えば、好ましい方法では、治療に抗Ｃ５モノクローナル抗体エクリズマブを含む。発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を患う人々での試験では、１２〜１４日に１回、９００ｍｇ／患者の用量でエクリズマブが投与された。この投薬では、終末補体活性が完全かつ一貫して遮断されて、そしてＰＮＨの徴候が大幅に抑制されることが見出されている（Ｈｉｌｌｍｅｎら、２００４）。投薬量では、エクリズマブが不活化される、または身体から除去される前の約２週間にわたり、補体の効果を遮断できる。したがって、エクリズマブの慢性投与は、例えば、患者の残りの生存期間にわたり２週間に１回、同種移植片のレシピエントに９００ｍｇの投与でよい。同様に、これが毎日であるのか、もしくは同種移植片のレシピエントにおいて薬物の有効量を維持するために別のスケジュールが必要となるかを問わず、適宜、他の薬物を慢性デリバリーできる。移植片の拒絶反応が、補体活性化のみではなくそれ以上のもの、例えば、Ｔ細胞活性によって起こりうることが周知であるため、移植片の拒絶反応の予防をさらに補助するために、実験にはシクロスポリンなどの免疫抑制剤が含まれた。
【００８５】
補体活性の好ましい抑制方法は、補体Ｃ５に結合して、Ｃ５の切断を阻止するモノクローナル抗体の使用である。これはＣ５ａおよびＣ５ｂ−９いずれの形成も阻止して、同時にレシピエントに有益なＣ３ａおよびＣ３ｂの形成を可能にする。ヒト補体に特異的なこのような抗体が公知である（米国特許第６，３５５，２４５号）。米国特許第６，３５５，２４５号に開示されているこれらの抗体としては、抗体全体または完全長抗体（現在はエクリズマブと名付けられている）および単鎖抗体（現在はペキセリズマブと名付けられている）が挙げられる。マウスＣ５に対する同様の抗体が、ＢＢ５．１と呼ばれている（Ｆｒｅｉら、１９８７）。ＢＢ５．１が下記の実験で使用された。補体活性を抑制する抗体は、モノクローナル抗体である必要はない。それらは、例えば、ポリクローナル抗体でよい。それらはさらに抗体断片でよい。抗体断片としては、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖抗体、ドメイン抗体およびＦｖが挙げられる。さらに、抗体は、ヒト化（Ｊｏｎｅｓら、１９８６）、キメラ化または脱免疫化できることが、当業者には周知である。抗体は変異Ｆｃ部分も含むことができ、このような変異Ｆｃは補体を活性化しない。本開示で使用する抗体は、これらのいずれかでよい。同種移植片のレシピエントがヒトである場合、ヒト化抗体を使用することが好ましい。
【００８６】
投与と製剤
補体活性の阻害剤の投与は、当業者に公知の方法に従って実施される。これらの阻害剤は、好ましくは、同種移植片の移植時前または移植時に投与され、投与を慢性的に持続させる。このような症状が強く発現した場合、拒絶反応発症中にこれらの阻害剤を追加投与できる。
【００８７】
本開示は、薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制剤の使用を提供する。このような薬物または薬物パッケージは、レシピエントにおいて同種移植片の生存を延長させる際、特に、同種移植片の長期生存に有用である。好ましい態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対する慢性投与に適するように製剤化および調製され、例えば、安定製剤が採用される。特定の態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対して補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の同時投与に適するように製剤化および調製される。特定の態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対して補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の連続（いずれかの順番での）投与に適するように製剤化および調製される。
【００８８】
本開示の薬学的パッケージは、補体活性を抑制する薬物と少なくとも１つの免疫抑制剤を含むことができる。薬学的パッケージは、慢性投与のラベルをさらに含むことができる。薬学的パッケージは、患者による自己投与のためのラベルを含むこともでき、例えば、移植した移植片のレシピエントまたは移植片のレシピエントの介護者に対する指示も含むことができる。特定の態様では、薬物と薬学的パッケージ中の薬剤は、慢性投与および／または自己投与に適した製剤または個々の製剤中にある。
【００８９】
本開示は、凍結乾燥製剤および注射に適した製剤も提供する。特定の態様は、補体活性を抑制する抗体および凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む凍結乾燥抗体製剤を提供する。好ましい態様では、抗体製剤は慢性投与に適しており、例えば、抗体製剤は安定である。別の態様は、シリンジから成る注射システムを提供し、シリンジは補体活性を抑制し、注射に適した製剤中にある抗体を含むカートリッジから成る。
【００９０】
好ましくは、本開示の様々な態様で利用される抗体は、終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する抗体は抗体全体または抗体断片である。抗体全体または抗体断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片でよい。特定の態様では、抗体全体または抗体断片は補体Ｃ５の切断を抑制しうる。特定の態様では、抗体断片はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体である。好ましい態様では、抗体断片はペキセリズマブである。代わりの好ましい態様では、抗体全体はエクリズマブである。
【００９１】
特定の態様では、補体活性を抑制する抗体などの薬物は、自己投与に特に適した単位剤形中に存在する。同様に、本開示の免疫抑制剤も単位剤形中に存在できる。本開示の製剤化させた製品は、容器内、典型的には、例えば、小瓶、薬包、充填済みシリンジまたは使い捨てペン内に含めることができる。米国特許第６，３０２，８５５号に記載の投薬装置などの投薬器、例えば、本開示の注射システムも使用できる。
【００９２】
特定の態様では、最初４週間は７±２日ごとに２５〜４５分間の静脈内注射により６００ｍｇ、これに続き７±２日ごとに５回量で９００ｍｇ、次にその後１４±２日ごとに９００ｍｇという投薬計画でエクリズマブをデリバリーできる。投与は２５〜４５分間にわたる静脈内注射でよい。エクリズマブは投与前に最終濃度５ｍｇ／ｍｌに希釈できる。
【００９３】
「安定」製剤は、薬物（例、抗体）または薬物中の薬剤が保存時にその物理化学的な安定性および完全性を実質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野において利用可能であり、［Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０： ２９−９０ （１９９３）］においてレビューされている。
安定性は、選択した時間にわたり選択した温度で測定できる。例えば、凍結乾燥および保存後の凝集の程度は、タンパク質の安定性の指標として使用できる。例えば、「安定」製剤は、製剤中の凝集体として約１０％未満、好ましくは約５％未満のタンパク質が存在する製剤でありうる。他の態様では、凍結乾燥製剤の凍結乾燥および保存後の凝集体形成の増加を測定できる。例えば、「安定」凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤を２〜８℃で少なくとも１年間保存した場合に凍結乾燥製剤中の凝集物の増加が約５％未満、好ましくは約３％未満である製剤でありうる。他の態様では、タンパク質製剤の安定性は生物活性アッセイを利用して測定できる。
【００９４】
「再生」製剤は、タンパク質が再生した製剤中に分散されるように、希釈剤中の凍結乾燥タンパク質製剤を溶解させることにより調製されてきた。再生製剤は、対象のタンパク質で治療される患者への投与（例、非経口投与）に適しており、特定の態様では、皮下投与に適した製剤でよい。
【００９５】
等張性の再生製剤が特定の態様において好まれる。「等張性」とは、対象となる製剤の浸透圧がヒトの血液の浸透圧と実質的に同じである。等張性製剤の浸透圧は、一般的に、約２５０〜３５０ ｍＯｓｍである。等張性は、例えば、蒸気圧または氷凍結型の浸透圧計を使用して測定できる。
【００９６】
「凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」は、対象の薬物（例、抗体）と混合した際に、凍結乾燥および保存時の薬物（例、抗体）の化学的および／または物理的な不安定性を予防または軽減させる分子である。例示的な凍結保護剤としては、ショ糖またはトレハロースなどの糖、グルタミン酸ナトリウムまたはヒスチジンなどのアミノ酸、ベタインなどのメチルアミン、硫酸マグネシウムなどの離液性塩、三価以上の糖アルコール（例、グリセリン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール）などのポリオール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓおよびこれらの配合物が挙げられる。好ましい凍結保護剤は、トレハロースやショ糖などの非還元糖である。
【００９７】
凍結乾燥前の製剤に「凍結保護量」の凍結保護剤を添加するが、これは凍結保護量の凍結保護剤の存在下での薬物（例、抗体）の凍結乾燥後、凍結乾燥および保存中に薬物（例、抗体）がその物理化学的な安定性および完全性を実質的に保持することを意味する。
【００９８】
本明細書の対象の「希釈剤」は、薬学的に受容でき（ヒトへの投与において安全かつ毒性がない）、そして再生製剤の調製に有用な希釈剤である。例示的な希釈剤には、滅菌水、静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例、リン酸塩緩衝生理食塩液）、滅菌食塩水、リンガー液またはデキストロース溶液が含まれる。
【００９９】
「保存剤」は、再生製剤中での細菌作用を本質的に低減させるための希釈剤に添加して、これによって、例えば、多用途の再生製剤の産生を促進させる化合物である。潜在的な保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキソメソニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライドの混合物）および塩化ベンゼトニウムが挙げられる。他の種類の保存剤としては、フェノール、ブチルおよびベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチルパラペンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノールおよびｍ−メタクレゾールが挙げられる。
【０１００】
「バルク剤」は凍結乾燥混合物に質量付加して、そして凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物である（例、開放孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケーキの産生を促進させる）。例示的なバルク剤としては、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびソルビトールが挙げられる。
【０１０１】
したがって、安定な凍結乾燥抗体製剤は、凍結保護剤（好ましくはショ糖またはトレハロースなどの糖）を使用して調製できるが、この凍結乾燥製剤を再生させて、凍結乾燥前の製剤における抗体濃度よりも有意に高い（例、約２〜４０倍高く、好ましくは３〜１０倍高く、そして最も好ましくは３〜６倍高い）抗体濃度を有する安定した再生製剤を生成できる。再生製剤におけるこのような高タンパク質濃度は、製剤が皮下投与を意図している場合に特に有用であると考えられる。再生製剤における非常に高いタンパク質濃度にもかかわらず、再生製剤は２〜８℃において少なくとも約３０日間安定でありうる（つまり、有意な、または受容できないレベルのタンパク質の化学的または物理的な不安定性を示さない）。米国特許第６，８２１，５１５号を参照すること。特定の態様では、再生製剤は等張性である。
【０１０２】
保存剤を含む希釈剤（静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）など）で再生する場合、再生製剤は複数使用製剤として使用できる。このような製剤は、例えば、被験体である患者が薬物または抗体および／または慢性症状を治療するための薬剤の頻繁な投与を必要とする場合に有用である。複数使用製剤の利点は、数用量が１本のバイアルに包装されているため、患者への使いやすさを促して、バイアル容量の完全な使用を可能にすることで無駄を減らして、製造業者に大幅なコスト削減をもたらす点である（充填および出荷コストの低減）。
【０１０３】
本開示は、（ａ）抗体と凍結保護剤の混合物を凍結乾燥させること、および（ｂ）再生製剤が等張性であり、安定するように（ａ）段階の凍結乾燥混合物を再生することの段階を含む方法も提供する。
【０１０４】
（ａ）抗体と凍結保護剤の凍結乾燥混合物を含む容器、および（ｂ）再生製剤における望ましい抗体濃度に希釈剤で凍結乾燥混合物を再生するための指示を含む製造品目も本明細書において提供する。製造品目は、希釈剤（例、芳香族アルコールを含む静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ））を含む第２の容器をさらに含むことができる。
【０１０５】
本開示の注射システムでは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載する薬物デリバリーペンを使用できる。薬物デリバリーペンは、薬物の自己投与を容易にするために開発された。本開示の薬物は、補体活性を抑制する薬物、例えば補体Ｃ５に特異的な抗体および／または免疫抑制剤でありうる。１つの薬物デリバリーペンには、その中にインシュリンまたは他の薬物のバイアルを入れることのできるバイアルホルダーが含まれる。一般的に、バイアルホルダーは、近位端と遠位端を伴う細長い管状構造物である。バイアルホルダーの遠位端には、両頭針カニューレを引くための取り付け手段が含まれる。近位端には、ドライバーおよび用量設定装置を含むペン体を引くための取り付け手段が含まれる。先行技術のバイアルホルダーと共に使用するバイアルを含む使い捨て投薬には、両頭針カニューレの１端によって貫通できる穴を開けることのできる弾性隔膜を持つ遠位端が含まれる。このバイアルの近位端は、バイアルの円筒状壁を伴う流体密封結合内にスライド可能なように配置された停止装置が含まれる。この薬物デリバリーペンは、薬物バイアルをバイアルホルダーに挿入することによって使用する。次に、ペン体をバイアルホルダーの近位端に接続する。ペン体には、ペンによってデリバリーされる薬物の用量を指定するための用量設定装置、および選択した用量に対応した距離で遠位にバイアルのストッパーを押し進めるためのドライビング装置が含まれる。
【０１０６】
ニードルカニューレの近位点がバイアル上の隔膜に穴を開けるように、ペンの使用者はバイアルホルダーの遠位端に両頭針カニューレを取り付ける。次に、患者は用量を選択して、そしてペンを操作して、選択された用量をデリバリーするためにストッパーを遠位に押し進める。用量選択装置は、選択した用量の注射時にゼロに戻る。次に、患者はニードルカニューレを取り除いて、捨てて、そして次に必要な薬物投与のために便利な場所に先行技術の薬物デリバリーペンを保つ。バイアル内の薬物は、薬物のこのような数回の投与後に使い尽くされる。次に、患者はペン体からバイアルホルダーを分離させる。次に、空バイアルを取り除いて、捨てることができる。新しいバイアルをバイアルホルダーに挿入でき、そして上記で説明する通りにバイアルホルダーとペン体を再び組み立てて使用できる。
【０１０７】
したがって、一般的に、薬物デリバリーペンは正確な投薬と使いやすさのためのドライブ機構を備えている。回転ノブなどの投与機構によって、使用者は包装前の薬物からペンによって注射される薬物の量を正確に調整できる。薬物の用量を注射するために、使用者は皮膚下に針を挿入して、押し下がる限りノブを１回押し下げる。ペンは全体が機械装置でありうる、もしくは使用者に注射される薬物の用量を正確に設定および／または示すために電子回路と併用できる。米国特許第６，１９２，８９１号を参照すること。
【０１０８】
本開示では、薬物の慢性投与および／または自己投与に適した放出制御製剤または徐放製剤を提示している。
【０１０９】
ボーラスとして、もしくは一定期間におよぶ持続注入による静脈投与、筋肉内、腹腔内、脳室内、皮下、関節内、滑液内、くも膜下腔内、経口、局所または吸入経路によって、薬物（例、本開示の抗体および少なくとも１つの免疫抑制剤）による治療を必要とする患者（例、同種移植片のレシピエント）に様々な製剤を投与できる。
【０１１０】
特定の態様では、皮下（つまり、皮膚の下への）投与によって製剤を患者に投与する。このような目的で、注射器を使用して製剤を注射できる。一方では、注射器具（例、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（登録商標）デバイスおよびＧｅｎｊｅｃｔ（登録商標）デバイス）、インジェクターペン（ＧｅｎＰｅｎ（登録商標））、無針器具（例、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（登録商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））および皮下パッチデリバリーシステムなどの製剤投与用の他の装置を利用できる。
【０１１１】
本方法および使用は、以下の実施例を参照して記載しており、実施例は例示として与えられており、決して開示を限定することを意図していない。当技術分野または以下で具体的に記載する技術において周知の標準的技術が利用される。本明細書では以下の略語を使用する：ＡＢＭＲ、抗体媒介性拒絶反応；ＡＣＨＲ、早期体液性拒絶反応；ＡＣＲ、急性細胞拒絶反応；ＡＶＲ、急性血管拒絶反応；ＣｓＡ、シクロスポリン；ＣｙＰ、シクロホスファミド；ＨＡＲ、超急性拒絶反応；ＭＣＰ−Ｉ、単球走化性タンパク質１；ＭＳＴ、平均生存時間；ＰＯＤ、手術後日数。
【実施例】
【０１１２】
実施例１
方法
動物と免疫抑制薬 体重２５〜３０ ｇの雄Ｃ３Ｈ（Ｈ−２）成体マウスおよびＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）をそれぞれドナーおよびレシピエントとして選んだ。免疫抑制を受けている群では、レシピエントはＣｓＡ（０日目からエンドポイント拒絶反応まで、または１００日目まで１５ｍｇ／ｋｇ／日を毎日皮下）、またはＣｙＰ（０日目および１日目に４０ｍｇ／ｋｇ／日を静脈内）、または抗Ｃ５ｍＡｂ（０〜２日目、続いて０〜６０日目に週２回、クローンＢＢ５．１（Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）。４０ｍｇ／ｋｇ／日を腹腔内）を注射した。従来の条件下で動物をＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ ＯｎｔａｒｉｏのＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙに収容して、そしてＣａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅが定めたガイドラインに従って飼育した。（Ｏｌｆｅｒｔら、１９９３）。
【０１１３】
皮膚前感作 Ｃ３Ｈドナーから採取した全層皮膚移植片を１×１ ｃｍ２の正方形の小片に切り、そして同じドナーからの心臓移植の１週前にＢＡＬＢ／ｃレシピエントの胸部の背後部に移植した。拒絶反応は、皮膚移植片の完全な壊死と定義した。
【０１１４】
腹部および子宮頸管への心臓移植 皮膚前感作から７日後にドナー大動脈とレシピエント大動脈およびドナー肺動脈とレシピエント下大静脈を吻合することで前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの腹部にＣ３Ｈマウスの心臓を移植した。再移植群では、ドナー大動脈とレシピエント頚動脈およびドナー肺動脈とレシピエント外頚静脈（端側）を吻合することで、長期生存中の腹部の第１の心臓移植片を持つレシピエントの子宮頸管部に、未感作Ｃ３Ｈマウスまたは長期生存中の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントから採った第２の心臓移植片を移植した。特記ある場合を除き、拒絶反応まで毎日心臓移植片をモニターして、拒絶反応は鼓動の完全な中止と定義した。
【０１１５】
実験群 前感作レシピエントを８群に無作為に割り当てて、各群は８匹の動物から成った：１群、未治療マウス；２群、ＣｓＡ治療マウス；３群、ＣｙＰ治療マウス；４群、ＣｓＡ＋ＣｙＰ治療マウス；５群、抗Ｃ５ｍＡｂ治療マウス；６群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｓＡ治療マウス；７群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｙＰ治療マウス；８群、ＣｓＡ＋ＣｙＰの併用で抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス。心拍動がもはや触知できなくなった、またはＰＯＤ１００に、ルーチンの組織学的解析、免疫組織化学的解析およびウェスタンブロット解析のために移植片を摘出して、フローサイトメトリー解析および補体溶血アッセイのために血清検体を採取した。ＰＯＤ３に、６群および８群（１群、５群、７群ではＭＳＴ）内に追加で５匹の動物を置いて、そして殺して、同一の時間点で比較できるようにした。抗ドナー抗体の濃度および補体活性の連続変化を検出するために、８群においてＰＯＤ１１、２１、２８および６０でも血清検体を採取した。また、３剤併用療法で治療した前感作レシピエントが第１の心臓移植片を受けて１００日目に、第２の心臓を再移植させた。別の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントからの未感作Ｃ３Ｈ心臓または１００日間生存中のＣ３Ｈ心臓を第２の心臓として使用した。各再移植群には８匹の動物が含まれた。
【０１１６】
移植片組織像 組織検体を１０％緩衝ホルムアルデヒトで固定させた。次に、試料をパラフィン包埋して、そしてＨ＆Ｅ染色のために切片にした。拒絶反応の重症度について、病理学者が盲検法によって顕微鏡用切片を調べた。移植片の拒絶反応の基準には、脈管炎、血栓症、出血およびリンパ球浸潤の有無が含まれた。これらの変化を得点化した：０、不変；１、最小変化；２、軽度の変化；３、中程度の変化；または４、顕著な変化。
【０１１７】
免疫組織化学 ゼラチンコーティング済みの顕微鏡用ガラススライド上に乗せたＴｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ Ｏ．Ｃ．Ｔゲル（Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ｓｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）に包埋させた組織検体から４μｍの切片を切り、Ｅｌｉｔｅ Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用した標準的な間接アビジン−ビオチン免疫ペルオキシダーゼ染色法によって染色した。ＣＤ４＋とＣＤ８＋について、それぞれビオチン結合ラット抗マウスＣＤ４ ｍＡｂ（ｃｌｏｎｅ ＹＴＳ １９１．１．２，Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）およびビオチン結合ラット抗マウスＣＤ８ ｍＡｂ（ｃｌｏｎｅ ５３−６．７，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって試料を染色した。ビオチン結合ラット抗マウスＭａｃ−１ｍＡｂ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）染色によって、移植片内への単球／マクロファージ浸潤を検出した。ビオチン結合ヤギ抗マウスＩｇＧおよびヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を使用して、移植片内のマウスＩｇＧおよびＩｇＭの沈着を検出した。補体沈着の同定では、ヤギ抗Ｃ３または抗Ｃ５ポリクローナル抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、そしてＨＲＰ結合ストレプトアビジン（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって切片を連続的にインキュベートさせた。段階間でスライドをリン酸緩衝生理的食塩水で洗って、そして光学顕微鏡下で観察した。一次抗体を除くことで、陰性対照とした。各切片の５つの高倍率視野において免疫染色を点数化して、そして５つの独立した実験を行なった。免疫ペルオキシダーゼ染色の切片は染色強度に従って０から４に採点した：０、陰性；１＋判定不能；２＋、弱染色；３＋、中程度の染色；そして４＋、非常に強い染色。
【０１１８】
フローサイトメトリー ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によってレシピエント血清中の循環抗ドナー特異的ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体を評価した。（Ｇｌｏｔｚら、（１９９３）；Ｔｙａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４））。簡単に説明すると、Ｃ３Ｈマウス脾細胞を単離して、そして未感作の対照群および実験群の血清と３７℃で３０分間インキュベートさせた。全ＩｇＧ、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＭの染色のために、細胞を洗って、マウスＩｇＧのＦｃ部分に特異的なＦＩＴＣ結合ヤギ抗体、またはマウスＩｇＭのμ鎖に特異的なフィコエリスリン結合ヤギ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）、またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ１（ＣＡＬＴＡＧ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）、またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ（ＣＡＬＴＡＧ）またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ２ｂ（ＣＡＬＴＡＧ）とインキュベートさせた。４０℃で１時間の染色後、細胞をＰＢＳで洗って、５×１０６／ｍＬに再浮遊させて、そして抗体結合反応性を示す平均チャンネル蛍光強度のフローサイトメトリーによって解析した。
【０１１９】
補体溶血アッセイ 精製抗体Ｃ５ ｍＡｂをＧＶＢ２＋緩衝液（ゼラチン緩衝生理食塩水：０．１％ゼラチン、１４１ ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１５ ｍＭ ＣａＣｌ２および１．８ ｍＭナトリウムバルビタール）で２倍希釈（１７５−０．１μｇ／ｍｌ）して、そして９６ウェルプレートに３通り添加した（５０μｌ／ウェル）。ＢＡＬＢ／ｃマウス血清をＧＶＢ２＋緩衝液で４０％（ｖ／ｖ）に希釈させて、各ウェルのＢＡＬＢ／ｃマウス血清の最終濃度が２０％になるように９６ウェルプレートの列に添加した。次に、ニワトリ赤血球を調製する間に、プレートを室温で約３０分間インキュベートさせた。チキン赤血球を１ ｍｌのＧＶＢ２＋緩衝液で５回洗って、ＧＶＢ２＋中で最終濃度５×１０７／ｍｌに再浮遊させた。抗トリＲＢＣポリクローナル抗体（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｈｏｐｅｗｅｌｌ，ＮＪ，０．１％ ｖ／ｖ）を添加することで４ ｍｌのニワトリ赤血球を感作させて、そして頻繁にボルテックスしながら４℃で１５分間細胞をインキュベートさせた。次に、細胞を１ ｍｌのＧＶＢ２＋で２回洗って、最終容量２．４ ｍｌのＧＶＢ２＋中に再浮遊させた。上記の通り、血清および抗Ｃ５ ｍＡｂを含むプレートにニワトリ赤血球を添加して（３０μｌ／ウェル；２．５×１０６細胞）、十分に混合させて、３７℃で３０分間インキュベートさせた。次に、プレートを２分間１０００×ｇで遠心分離させて、そして８５μｌの上精を新しい９６ウェルマイクロタイタプレートに移した。マイクロプレートリーダーを使用して、ＯＤ ４１５ ｎｍでプレートを読み、そして以下の化学式を用いて溶血反応のパーセンテージを決定した：
【０１２０】
【化１】
先に調製した３０ μｇ／ｍｌのニワトリ赤血球に、０．１％ ＮＰ−４０を含む１００μｌのＧＶＢ２＋を添加することよって得られた１００％溶解対照。
【０１２１】
ウェスタンブロット解析 ＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。中で、４℃で１分間、１０秒間隔で凍結心臓検体の超音波処理を行い、続いて４℃で１０分間、１３，０００ ｒｐｍの極小遠心分離にかけた。Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を使用して、清浄化させた上精のタンパク質含量を迅速に３回定量した。心臓溶解物をＮｕＰＡＧＥ４〜１２％勾配Ｂｉｓ−ＴｒｉｓゲルおよびＭＥＳ緩衝系において分離させて（１０μｇタンパク質／ウェル）、セミドライトランスファー装置（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を使用してポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）メンブレン（孔サイズ０．４５μｍ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にトランスファーさせた。各ブロットが試験抗体と内部対照抗体に暴露されるように、メンブレンを正確な分子量の位置で適切に切り、ブロットごとに２つの異なる一次抗体でのブロットの展開を可能にして、検体の等しい添加量を保証した。抗Ｂｃｌ−２（Ｎ−１９）ウサギポリクローナル血清（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。および抗ＢｃｌＸＳ（Ｂｃｌ−ＸＳ）／Ｌ（Ｍ−１２５）ウサギポリクローナル血清（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。を含む試験一次抗体を使用して、移植片内でのＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の発現を検出した。抗カルセケストリンウサギポリクローナル血清（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を内部対照の一次抗体として使用した（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９）。先述の通り（Ａｒｐら、１９９６）、洗ったインキュベート済みブロットをホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ポリクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ分画に暴露させることで、一次抗体の結合を検出して、ＨＲＰ結合抗体（Ｒｏｃｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の化学発光を高めるための暴露によって適切に現像した。
【０１２２】
統計解析
平均値±ＳＤでデータを報告した。ランクログテストを利用して、同種移植片の生存期間を実験群間で比較された。マンホイットニーＵ 検定を利用して、組織学的所見および免疫組織学的所見を解析した。Ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡを利用して、フローサイトメトリーのデータおよびウェスタンブロットのデータを解析した。ｐ値が０．０５未満の差を有意と見なした。
【０１２３】
実施例２
Ｃ３Ｈドナー皮膚移植片での前感作によって、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの心臓同種移植片に抗体媒介性のＡＣＨＲを誘発される。
【０１２４】
臨床での前感作患者を模倣した適当な小型動物モデルを作成して、ＡＢＭＲを試験するために、マウスレシピエントの前感作によって新しい完全ＭＨＣ不適合マウスＡＢＭＲモデルを作成した。このモデルでは、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントは心臓移植の１週間目に同じドナーからのＣ３Ｈドナー皮膚移植片で前感作させた。ドナー皮膚の前感作から７日目、ＩｇＭ抗体ではなく、抗ドナーＩｇＧの血清濃度が顕著に高まり、そして前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおけるピーク濃度に達した（図１Ａ）。次に、これらの高度に感作させたレシピエントにおいて同じドナーからの心臓を移植した。免疫抑制なしで、Ｃ３Ｈ心臓移植片はＡＣＨＲによって３．１±０．４日内に迅速に拒絶されて、重度の血栓症、出血および梗塞を特徴とした（図１Ｂ−ａ）。対照的に、非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおける同じ心臓移植片（平均生存期間、８．２±０．８日のＭＳＴ）は、手術後（ＰＯＤ）３日目に正常な組織像を示している（図１Ｂｂ）。同日の非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントと比較した場合、前感作動物における心臓移植片では、多量のＩｇＧ抗体および補体（Ｃ３およびＣ５）の沈着が明らかになったが、しかしＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞浸潤は最小限であった（表１）。さらに、前感作レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＧ濃度は、ＰＯＤ３に心臓移植片を受けた同じ非感作レシピエントでの濃度よりも有意により高かった（Ｐ＜０．０１、図１Ｃ）。しかし、抗ドナーＩｇＭは、血液循環（図１Ｃ）および心臓移植片のいずれにおいても非常に低い濃度のままであり（表１）、非感作レシピエントと前感作レシピエントとの間で有意差は認められなかった。また、治療なしの前感作心臓レシピエントおよび非感作心臓レシピエントのいずれでも補体溶血活性が示された（図１Ｄ）。これらのデータは、これが、補体が病因において重要な役割を果たす前感作レシピエントにおいてＡＢＭＲを試験するための理想的な移植モデルであることを示す。
【０１２５】
（表１）
ＰＯＤ３での非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントおよび前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおけるＣ３Ｈ心臓同種移植片の免疫組織学的変化の比較
【０１２６】
【表１】
免疫ペルオキシダーゼ染色の採点：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強。ＣｓＡおよびＣｙＰと併用での抗Ｃ５ ｍＡｂによってＡＢＭＲが予防されて、そして前感作マウスレシピエントでの心臓同種移植片の生存期間が無期限になる。
【０１２７】
補体がＡＢＭＲにおいて重要な役割を果たすことが示された。しかし、高度に感作させたレシピエントにおいてＣ５濃度で終末補体カスケードを機能的に遮断することの抑制効果は不明である。本明細書で示す試験では、前感作モデルを使用して、ＡＢＭＲの予防における抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤またはＣｓＡおよび／またはＣｙＰと併用した抗Ｃ５ ｍＡｂの有効性を試験した。図２Ａに示す通り、ＣｓＡまたはＣｙＰもしくは２つの薬物の併用による治療によってＡＢＭＲは予防されず、移植片はそれぞれ３．０±０．０日間、３．３±０．５日間、そして３．５±０．６日間で拒絶され、未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおける心臓移植片とは識別できない静脈内血栓症および組織内出血（図２Ｂ−ｂ、ｃ、ｄ）を含むＡＣＨＲの典型的な病理学的特徴を伴った（図２Ｂ−ａ）。抗Ｃ５単剤療法またはＣｙＰとの併用によって、移植片の生存期間を改善させることはできず、心臓移植片はそれぞれ３．５±０．６日間、そして３．２±０．４日間でＡＣＨＲ（図２Ｂ−ｅ，ｆ）によって拒絶された（図２Ａ）。非感作動物において心臓同種移植片の長期生存期間を誘発できるプロトコルである抗Ｃ５ ｍＡｂとＣｓＡの併用療法によって、この前感作モデルにおける移植片の生存期間がわずかに延長されたが、心臓移植片は１１．９±１．８日間で脈管炎、血栓症、出血、最小限の細胞浸潤（図２Ｂ−ｇ）を伴う重度の体液性拒絶反応によって同様に拒絶された（図２Ａ）。対照的に、ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂの３剤併用療法では、前感作動物において心臓移植片の生存期間が１００日間を超えて無期限となり（Ｐ＜０．０１、未治療動物、もしくは単剤療法または２つの薬物で併用療法された動物に対して）（図２Ａ）、拒絶反応の徴候も認められなかった（図２Ｂ−ｈ）。表２に示す通り、この前感作マウスモデルでは、３日以内に心臓移植片を拒絶したレシピエントにおいて移植片内へのＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞のわずかな浸潤のみが認められた。しかし、拒絶反応の時点（ＰＯＤ１１）での抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｓＡ治療レシピエントにおいて、移植片の生存期間の初期段階（例、ＰＯＤ１１）に３剤併用療法によって治療したレシピエントで心臓移植片がより長く生存した場合、これらのＴ細胞の個数はわずかに増加していた。さらに、３剤併用療法群におけるＣｓＡ連続治療では、ＰＯＤ６０およびＰＯＤ１００に長期生存中の心臓移植片において、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の浸潤が抑制された。また、ＣｓＡ、ＣｙＰまたはＣｓＡ＋ＣｙＰ治療動物において、移植片内に単球とマクロファージを含むＭａｃ−１細胞の中程度の浸潤が認められ、これらの細胞の浸潤は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療動物において有意に減少した（表２）。これらの結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂを機能的に遮断することで従来の免疫抑制剤の使用と有効性に可能性を与えて、これによって前感作レシピエントにおいてＡＢＭＲを予防して、そして心臓移植片の生存期間を無期限とする。
【０１２８】
（表２）
剖検時の前感作マウスレシピエントにおける心臓同種移植片の免疫ペルオキシダーゼ染色の採点
【０１２９】
【表２】
採点：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強
心臓同種移植を受けた前感作レシピエントにおいて、抗Ｃ５ ｍＡｂによって補体の全溶血活性および局所的なＣ５沈着が完全に抑制された。
【０１３０】
抗Ｃ５ ｍＡｂによって補体タンパク質Ｃ５の炎症誘発性分子Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９への切断が遮断されて（Ｋｘｏｓｈｕｓら、１９９５）、そして完全かつ一貫してマウスにおける終末補体活性が遮断されることが過去に示されている（Ｗａｎｇら、１９９９）。現在の試験では、抗体によって前感作されたニワトリ赤血球をレシピエントマウス血清が溶解させる能力を評価することによって、終末補体活性を測定して、そして同じ時間点（ＰＯＤ３）で比較した。ＣｓＡまたはＣｙＰのいずれか、もしくは２つの薬物の併用によるマウスの治療では、終末補体活性に及ぼす効果は認められず、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤またはＣｓＡおよび／またはＣｙＰの併用による治療によってこの活性は完全に抑制された（図３；Ｐ＜０．０１、対ＣｓＡ、ＣｙＰまたはＣｓＡ＋ＣｙＰで治療した動物の他、未感作動物および未治療動物）。また、より早いいくつかの時間点で抗Ｃ５ ｍＡｂ治療した動物から得られた血清では、同様に溶血活性が低下しており、治療期間を通じて血清終末補体が抑制されることを示唆している。さらに、心臓移植片における局所的なＣ５沈着は、抗Ｃ５ ｍＡｂで治療された前感作レシピエントにおいて完全に阻止されたが、未治療、またはＣｓＡ、ＣｙＰおよびＣｓＡ＋ＣｙＰで治療された前感作動物においては阻止されなかった（表２）。予測された通り、抗Ｃ５ ｍＡｂでの治療によって移植片内のＣ３沈着は阻止されなかった（表２）。これらの結果は、抗Ｃ５治療によって、高度に感作されたレシピエントにおける心臓同種移植後の全補体活性が完全に遮断されることを示唆している。
【０１３１】
前感作動物における長期生存中の心臓移植片は、低濃度の抗ドナー抗体および補体の存在下（適応状態）における液性免疫に耐性である。
【０１３２】
体液性拒絶反応における抗Ｃ５ ｍＡｂの役割をさらに研究するために、免疫染色技術を利用したフローサイトメトリーおよび移植片内の抗体沈着によって、異なる群におけるレシピエント血清中の抗ドナー同種抗体濃度を測定した。図４Ａは、ＰＯＤ３に未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて循環抗ドナーＩｇＧ抗体の濃度が高いことを示している。単剤療法または２つの薬物の併用（ＣｓＡおよび／またはＣｙＰ）を受けている前感作レシピエントでは循環抗ドナーＩｇＧ濃度が部分的に下方制御されており、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤もしくはＣｓＡまたはＣｙＰとの併用での治療によって同日に抗ドナー抗体の濃度に及ぼすさらなる影響はなかった。対照的に、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＣｙＰの３剤併用療法によって、高濃度の循環抗ドナーＩｇＧが徐々に下方制御されて、ＰＯＤ６０には低濃度に達して、その後１００日目までこの濃度のままであった（図４Ｂ）。異なる治療群における循環抗体の濃度と同様に、抗マウスＩｇＧの強い沈着が、未治療である、もしくは単剤療法または２つの薬剤の併用療法を受けた前作動物の急速に拒絶された心臓移植片に存在することを表２は示している。興味深いことに、３剤併用療法によって、ＰＯＤ １００にはＩｇＧ抗体沈着が長期生存中の心臓移植片の軽度のレベルにまで次第に減弱された（図４Ｃ−ａ、表２）。このモデルでは、ＩｇＭは、治療の有無にかかわらず、前感作血レシピエントの循環中（図４Ａ、Ｂ）または移植した心臓移植片（図４Ｃ−ｂ、表２）のいずれかにおいての非常に低い濃度のままであった。また、抗Ｃ５ ｍＡｂによる治療によって、６０日目までに補体活性が検出できないレベルにまで除去され、その後、３剤併用療法を受けている前感作マウスレシピエントにおける抗Ｃ５治療の中断後、ＰＯＤ１００には枯渇前濃度に漸進的に回復した（図４Ｄ）。さらに、移植片内Ｃ５沈着が１００日間生存中の前感作動物においても検出された（表２）。これらのデータは、抗移植片抗体および補体活性化の存在にもかかわらず、３剤併用療法での治療を受けた前感作レシピエントにおいて継続的な移植適応が発生することを実証している。
【０１３３】
ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂによって、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ比が低下して、そして適応させた移植片を伴うレシピエントにおけるＩｇＧ２ｂへのＩｇＧサブクラスシフトが引き起こされた。
【０１３４】
抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によって、適応に関連しうるＩｇＧサブクラスシフトが誘発されるか否かを判定するために、未治療レシピエントと適応させた心臓移植片を伴うレシピエントとで、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの抗ドナーＩｇＧサブクラスの血清濃度を比較した。未治療レシピエントからの血清には、高比率のＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａによって示される、主なＩｇＧ１アイソタイプが含まれた（図５Ａ）。対照的に、適応させた移植片を有するレシピエントにおいてＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ比率の有意な低下が認められた（図５Ａ、Ｐ＜０．０１）。さらに、適応させた心臓移植片を伴う前感作レシピエントは、拒絶移植片を伴う同じレシピエントと比較して、抗ドナーＩｇＧ２ｂの濃度上昇を示した（図５Ｂ、Ｐ＜０．０１）。また、単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けたレシピエントのＩｇＧアイソタイプのパターンは、未治療動物のパターンと区別できない。これらのデータは、抗ドナーＩｇＧ１アイソタイプが、移植片の拒絶反応に関連する可能性があり、抗ドナーＩｇＧ２ｂサブクラスの産生が保護抗体として作用して、適応の誘発において重要な役割を果たす可能性を示している。
【０１３５】
ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂは、高度に感作させたマウスレシピエントにおいて移植片内Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌの発現を誘発させた。
【０１３６】
このモデルにおいて保護タンパク質の移植片内発現と液性免疫に対する移植片の耐性との間に因果関係が存在するか否かを判定するために、ウェスタンブロット解析を利用して、高度に感作させたマウスレシピエントからの心臓移植片組織内において対象のタンパク質を検出した。長期生存中の心臓移植片においてＰＯＤ１００に高濃度のＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質が発現していることが見出されており、そして抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法を受けた高度に感作させたレシピエントにおける心臓移植から１２日目の早期にこれらのタンパク質は検出された。対照的に、未治療動物（図６）または単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた動物の心臓移植片においてＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の発現は認められなかった。この結果は、無期限に生存する動物における液性免疫に対する移植片の耐性が、この前感作モデルにおけるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質がもたらす保護に関連していることを示唆している。
【０１３７】
適応中の第１の心臓移植片を伴う前感作レシピエントは、適応させた第２の心臓移植片を受容するが、同じドナーからの第２の未処理の心臓移植片は拒絶する。
【０１３８】
拒絶反応に対する適応させた移植片の耐性能については、未感作移植片が同種移植術後に拒絶反応を受ける病態生理学的条件下では直接試験されたことがない。このモデルでは、適応中の第１の心臓移植片を伴う前感作レシピエントが第２の適応させた移植片を受容するが、しかし、第２の未感作移植片は拒絶するか否かを判定するために、再移植シナリオを実施した。抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法で治療した適応させた前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて、低濃度の同種抗体が検出され（図４Ｂ）、補体活性が治療前のレベルまで戻った（図４Ｄ）１００日点まで適応させたＣ３Ｈ心臓移植片が生存後、これらのレシピエントは第２の心臓移植片を受けた。具体的には、別の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントからの未感作Ｃ３Ｈ心臓（図７Ａ）または１００日間適応させたＣ３Ｈ心臓（図７Ｂ）のいずれかを適応中の第１のＣ３Ｈ心臓を有する前感作レシピエントの頸部に移植した。これらのレシピエントは、重度のＡＶＲを伴い６．６±１．１日目に第２の未処理の心臓を拒絶したが（図８Ａ）、第１の心臓は生存し続けた。対照的に、異なる前感作マウスにおいて既に１００日間生存していた適応させた心臓を第２の移植片として使用した場合、これらの移植片は、適応中の第１の心臓移植片を有する前感作レシピエントによって受容された。２回目の移植から９０日後、これらの適応させた第２の心臓移植片において拒絶反応の徴候は認められなかった（図８−ｂ）。これらのデータは、適応させた移植片が、これらの前感作レシピエントにおいて同種移植片の拒絶反応を通常媒介する抗ドナー抗体および補体の効果に対して耐性であることを示している。さらに、適応させた移植片の宿主が新しい移植片を拒絶したという事実は、適応には移植片に対する変化が伴うことを示唆している。
【０１３９】
ＣｓＡで治療中の前感作レシピエントは、適応させた心臓移植片を拒絶する。
【０１４０】
この前感作モデルにおける適応が移植片および／またはレシピエントの変化によって起こされたのか否かを判定するために、別の再移植を実施した。具体的には、前感作ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＣ３Ｈ心臓移植片を１００日間の適応させた後、次に適応させた心臓移植片を、ＣｓＡ単剤で治療した第２の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントに再移植させ（図７Ｃ）、この治療では細胞性拒絶反応を予防できるが、しかし前感作レシピエントにおける新しいＣ３Ｈ心臓の早期体液性拒絶反応を予防できない。適応させたＣ３Ｈ心臓移植片は、ＣｓＡ治療した前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて迅速に拒絶された。再移植後、適応させた心臓移植片の病理像は、正常（図９Ａ）から重度のＡＣＨＲに変化しており、多量の組織内出血を伴ったが、細胞の浸潤はほとんど認められなかった（図９Ｂ）。また、適応させたＣ３Ｈ心臓を受けたこれらのレシピエントにおける高濃度の抗ドナーＩｇＧおよび正常レベルの補体溶血活性は、未感作Ｃ３Ｈ心臓を受けるＣｓＡ治療済み前感作レシピエントでの濃度と類似していた。この結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によって誘発された適応が、移植片だけでなく、レシピエントに対する変化も含む機序に起因しうることをさらに示している。
【０１４１】
実施例３
心臓移植モデルにおける急性血管拒絶反応
終末補体の形成の阻害剤を含めることで急性血管拒絶反応が減弱されるか否か、そして免疫抑制剤とこのような阻害剤の併用によって同種移植片の長期生存期間が達成されるか否かを判定するために実験を行なった。この一連の実験では、抗Ｃ５モノクローナル抗体がシクロスポリンと併用された。使用したモデルは、Ｃ３ＨマウスからＢＡＬＢ／ｃマウスへの同種移植片の異所性心臓移植であった。このモデルは、強くＭＨＣ不適合であるＣ３ＨおよびＢＡＬＢ ／ｃマウスの厳密な急性血管拒絶モデルである。Ｗａｎｇら（２００３）が記載している通りに、移植と他の方法を実施した。
【０１４２】
異所性心臓移植 Ｗａｎｇら（２００３）が記載している通りに、腹腔内異所性心臓移植を実施した。簡単に説明すると、ドナーに胸骨正中切開術を施して、そして上大静脈と肺静脈を結紮させて、分離させる前に、下大静脈と大動脈を通して１．０ ｍｌの冷ヘパリン化リンガー乳酸液によりｉｎ ｓｉｔｕで心臓移植片を徐々に潅流させた。上行大動脈と肺動脈を切断して、そして移植片をドナーから摘出した。ドナーの大動脈とレシピエントの腹部大動脈の他、ドナーの肺動脈とレシピエントの下大静脈の間を、１１−０ナイロン縫合糸を使用した端側吻合によって移植片に血管移植させた。直接の腹部触診法によって、移植した心臓の鼓動を毎日モニターした。鼓動の程度を点数化した：Ａ、強い鼓動；Ｂ、鼓動の強さの顕著な低下；またはＣ、心拍動の完全な停止。心拍動がもはや触知できない場合、ルーチンの組織学的分析のために移植片を摘出した。特定の例では、組織学的分析のために、まだ機能している移植片を犠牲にした。
【０１４３】
結果
マウス（体重２５〜３０ｇの８〜１２週齢の雄マウス）を６つの実験群（各群マウス６〜８匹）に分けた。０日目に移植を実施した。エンドポイント（移植片不全であるエンドポイント）で組織学的変化を調べて、もしくは一部の場合に移植片不全前にマウスを殺した。過去の試験から、 投与したＢＢ５．１の用量（週３回４０ｍｇ／ｋｇ体重）によって終末補体活性が完全に抑制されることが知られていた。
【０１４４】
１’群（対照） −１、０、１、２日目にマウスに０．７５ ｍｌの生理食塩水を腹腔内投与した。その後、エンドポイントまで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）０．７５ ｍｌの生理食塩水をこれらのマウスに腹腔内投与した。
【０１４５】
２’群（シクロスポリンＡ単剤） ０日目（移植日）から開始して、エンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡをマウスに皮下投与した。
【０１４６】
３’群（抗補体抗体単剤） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１（Ｆｒｅｉら、１９８７）をマウスに腹腔内投与し、続いてエンドポイントまで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与した。
【０１４７】
４’群（移植後１４日目までの抗補体抗体＋シクロスポリンＡ） −１日目から１４日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重のＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに静脈内投与して、０日目から開始してエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。この群は、ＢＢ５．１が毎日静脈内投与された点で、他の群とは異なることに注意すること。
【０１４８】
５’群（移植後２８日目までの抗補体抗体＋シクロスポリンＡ） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに腹腔内投与し、続いて２８日目まで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与し、０日目から開始してエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。
【０１４９】
６’群（移植後１００日目までの抗補体抗体の慢性投与＋シクロスポリンＡ） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに腹腔内投与し、続いて１００日目まで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与し、０日目から開始して１００日目まで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。
【０１５０】
この実験の結果を表３および表４に示している。表３には移植片の生存期間を示している。表４には組織像の採点を示している。
【０１５１】
（表３）
同種移植片の生存期間
【０１５２】
【表３】
（表４）
剖検での心臓同種移植片の組織学的変化スコアの中央値
【０１５３】
【表４】
スコアの中央値：０、正常；１、最小限の変化；２、軽度の変化；３、中程度の変更；４、顕著な変化。Ｎ／Ａ−該当なし
＊ Ｖａｓｃ−脈管炎；Ｉｎｆａｒ−梗塞；Ｌｙｍｐｈ−リンパ球浸潤；Ｔｈｒｏｍ−血栓症；Ｈｅｍｏ−出血；フィブリン−フィブリン沈着；ＰＭＮ−多形核細胞浸潤物。
【０１５４】
結果は、免疫抑制剤に加えて補体阻害薬を使うことの相乗効果を示している。未治療マウスでは、移植片は約８日間で拒絶された。免疫抑制剤シクロスポリンＡ単剤の毎日の慢性使用は、移植から約１５日間まで移植片の生存期間を延ばした。終末補体の形成を抑制するための抗Ｃ５抗体ＢＢ５．１の使用は、それ自体には影響を及ぼさず、対照群において移植片の拒絶反応が移植から８日目に起った（１’群）。移植後２８日目までのシクロスポリンＡとＢＢ５．１の併用では相乗効果が認められ、移植片の生存期間が約８０日目まで延長した。より驚くべき結果は、ＢＢ５．１とシクロスポリンＡが移植後に慢性投与された５’群での結果である。この場合、移植片の生存期間は１００日間以上であった（現在入手可能な限りのデータ）。さらに、表４に示した組織学的結果では、ＢＢ５．１とシクロスポリンＡの両剤の投与がＢＢ５．１またはシクロスポリンＡ単剤よりもずっと良く移植片を変化から保護し、そしてＢＢ５．１とシクロスポリンＡの慢性投与では、移植後１００日目でさえ移植心臓において組織学的変化が認められない程度にまで移植片を保護することが示されている。これらのモデルでの生存期間１００日間が判断基準と見なされる。モデルでの生存期間１００日間は、同種移植片の生存期間が無期限であると考えられる。２８日目にＢＢ５．１投与を止めた際、移植片は保護されたが、しかし、それらは移植片不全が起こった時点である約８０日目までに最小限から軽度の組織学的変化を確実に示し始めた。
【０１５５】
静脈投与によってＢＢ５．１を毎日投与された点で、４’群のマウスは異なる治療を受けた。これらの動物は発病して、体重減少および尿貯留を呈し、そして機能は低下していたが、移植心臓がまだ鼓動していた時に殺した。これは、試験されたマウスの第１群であり、そしてこれらの病的影響がなぜ認められたのかは不明である。ＢＢ５．１を週３回のスケジュールで腹腔内投与した場合、これらの病的影響は認められなかった。以下の実施例４で見られる通り、腹腔内経路を介したＢＢ５．１の連日投与は病的影響を起こさなかった。また、静脈内投与はこれらの動物において必ずしも病気の原因ではなかった。ＰＮＨの試験（Ｈｉｌｌｍｅｎら、２００４）では、病的影響なしにエクリズマブの静脈内投与（ヒトＣ５に結合する点でＢＢ５．１に対するヒトの同等の抗体）に成功している。補体阻害剤は、静脈内および腹腔内に加えて、他の経路によって投与でき、これらの全ての経路は当業者には周知である。
【０１５６】
実施例４
前感作心臓移植モデルにおける早期拒絶反応
実施例３の実験と類似の第２組の実験を行なったが、しかし、レシピエントマウスはドナー臓器に前感作させていた。これらの実験において、皮膚移植片の事前の移植によって前感作を起こさせた。一般的に、前感作は、以前に同種移植片を受け取ったことの結果としてのみでなく、頻回輸血または妊娠していた女性においても生じうる。このような前感作の方法の他、このような攻撃を阻止する措置を取らない場合、ＡＢＯ抗原に対して先に形成された抗体のために、ＡＢＯ不適合の同種移植片は迅速に攻撃されて拒絶される。
【０１５７】
これらの試験における一部のマウスに対して、ＢＢ５．１および／またはシクロスポリンＡに加えて、シクロホスファミドを投与した。これらの実験では、（Ｐｒｕｉｔｔ ａｎｄ Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ，１９９１の方法を利用して）ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスは心臓移植の１週間前に同じドナーからのＣ３Ｈ皮膚移植片で前感作させていた。このモデルは、特に早期体液性拒絶反応に関連して、ヒトにおける前感作移植を模倣するようにデザインする。レシピエントマウスを各６〜８匹のマウスの８群に分けた。治療を以下のように継続した。
【０１５８】
１’’群（対照）
マウス（体重２５〜３０ ｇの８〜１２週齢の雄マウス）に−１日目から開始してエンドポイント（移植片の拒絶反応）まで０．７５ ｍｌの生理食塩水を腹腔内投与した。
【０１５９】
２’’群（シクロスポリンＡ単剤）
マウスに０日目（移植日）から開始してエンドポイントまで１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下投与した。
【０１６０】
３’’群（ＢＢ５．１単剤）
マウスに−１日目（移植日）から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量の抗マウス補体モノクローナル抗体ＢＢ５．１を腹腔内投与した。
【０１６１】
４’’群（シクロホスファミド単剤）
マウスに０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内投与した。
【０１６２】
５’’群（ＢＢ５．１＋シクロスポリンＡ）
マウスに−１日目から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目からエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下に追加投与した。
【０１６３】
６’’群（ＢＢ５．１＋シクロホスファミド）
マウスに−１日目から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。
【０１６４】
７’’群（シクロスポリンＡ＋シクロホスファミド）
マウスに０日目からエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。
【０１６５】
８’’群（ＢＢ５．１＋シクロスポリンＡ＋シクロホスファミド）
マウスに−１日目から１００日目まで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目から１００日目まで１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下に追加投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。この群内の２匹のマウスを組織学的研究のために６０日目に殺し（拒絶反応はまだ起っていなかった）、残りの４匹のマウスは１００日目まで依然として移植片を拒絶しなかった。
【０１６６】
さらに、１’’群では、前感作させていないが、生理食塩水治療のみを受けたマウスの対照群を試験した。
【０１６７】
これらの実験の結果を表５と表６に示している。表５には移植片の生存期間を記載しており、表６には組織学的結果をまとめている。
【０１６８】
表５
同種移植片の生存
【０１６９】
【表５】
＊Ｐ＜０．０１ １’’群 対 前感作なし
＊＊Ｐ＜０．０１ ５’’群 対 １’’〜４’’群および６’’〜７’’群
＊＊＊Ｐ＜０．０１ ８’’群 対 １’’〜７’’群。
【０１７０】
表６
剖検時の心臓同種移植片の組織学的変化スコアの中央値
【０１７１】
【表６】
スコアの中央値：０、正常；１、最小変化；２、軽度の変化；３、中程度の変更；４、顕著な変化。Ｎ／Ａ−該当なし
＊Ｖａｓｃ−脈管炎；Ｉｎｆａｒ−梗塞；Ｌｙｍｐｈ−リンパ球浸潤；Ｔｈｒｏｍ−血栓症；Ｈｅｍｏ−出血；フィブリン−フィブリン沈着；ＰＭＮ−多形核細胞浸潤物。
【０１７２】
表５には、実施例３で使用した前感作マウスモデルと前感作させていないマウスモデルとの違いを示している。結果は、前感作がない場合には、薬物療法がない限り移植片は約８日間で拒絶されることを示している。動物を前感作させることで拒絶反応がより迅速に起り、薬物療法がない場合には前感作動物において移植片の拒絶が約３日以内に認められる。ＢＢ５．１、シクロスポリンＡまたはシクロホスファミドのいずれかによる治療が移植片の生存期間に及ぼす影響は認められず、これらの各群の動物において移植片は約３〜４日以内に拒絶された。ＢＢ５．１とシクロスポリンＡの併用は一定の効果を示し、拒絶反応が１２日目前後に起った。ＢＢ５．１とシクロホスファミドの併用には保護作用は認められず、拒絶反応が３日目前後に起った。同様に、シクロスポリンＡとシクロホスファミドの併用では実質的な保護作用は認められず、拒絶反応が３〜４日目に起った。非常に驚くべきことに、３つ全ての薬物の併用（ＢＢ５．１とシクロスポリンプラスの慢性投与＋移植時のシクロホスファミド）では高い相乗効果が認められ、全てのマウスが１００日間以上におよび生存した。ここでも、このモデルでの１００日間の生存期間が判断基準と見なされて、無期限の生存期間が想定される。
【０１７３】
表６に示した組織学的結果の他、これらの結果は、前感作マウスの治療における補体阻害剤およびシクロスポリンＡなどの免疫抑制剤による慢性治療の併用が、早期拒絶反応をある程度軽減させることを示している。移植時および移植後１日目にシクロホスファミドによるこれらの動物の追加治療によって、生存期間がずっと長くなり、少なくとも１００日目までは拒絶反応が認められなかった。
【０１７４】
実施例５
Ｃ３Ｈ腎臓同種移植片は前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいてＡＢＭＲのため壊死する。
高度に前感作させた患者における腎臓同種移植術の臨床状況を厳密に模倣した特徴を有する新規マウスＡＢＭＲモデルを作成した。レシピエントＢＡＬＢ／ｃマウスを完全同種Ｃ３Ｈドナー皮膚移植片で前感作させた。前感作後、循環抗ドナーＩｇＧ濃度が著しく上昇して、皮膚移植後７日目にピーク濃度に達した（図１０Ａ）。この時、同じドナー株（Ｃ３Ｈ）からの腎臓同種移植片を前感作レシピエントに移植した；これらの移植片は８．５±１．３日で全ての動物において迅速に拒絶された（図１１Ａ）。拒絶された移植片としては、１）腎糸球体および腎尿細管壊死の他、脈管炎、間質内の出血と浮腫（図１０Ｂ−ａ）、２）ＩｇＧ（図１０Ｂ−ｃ）、Ｃ３（図１０Ｂ−ｅ）およびＣ５（図１０Ｂ−ｇ）の広範な移植片内沈着、３）移植後の同日に評価された前感作されていないレシピエントにおいて認められる濃度と比較して有意に高い循環抗ドナーＩｇＧ濃度（ｐ＜０．０１；図１０Ｃ）、４）正常レベルの補体活性（図１０Ｄ）、ならびに５）単球やマクロファージを含む多数のＭａｃ−１細胞の移植片内浸潤（図１０Ｂ−ｉ）を含む早期体液性拒絶反応と一致する組織学的特徴が挙げられる。対照的に、前感作させていないＢＡＬＢ／ｃマウスは、５５．２± ５．６日間でＣ３Ｈ腎臓移植片を拒絶して、そしてＰＯＤ８に移植片の正常な組織像（図１０Ｂ−ｂ）を示し、検出可能なＩｇＧ沈着は認められず（図１０Ｂ−ｄ）、Ｍａｃ−１細胞の浸潤はほとんど認められず（図１０Ｂ−ｊ）、そしてＣ３（図１０Ｂ−ｆ）と（図１０Ｂ−ｈ）の軽度の沈着のみが認められた。ドナー皮膚での前感作によって、循環抗ドナーＩｇＭ濃度（図１０Ｃ）または血清補体活性（図１０Ｄ）が上昇するようには見えなかった。これらのデータは、この新規の腎臓同種移植片モデルが、高度に前感作させたレシピエントでの抗体媒介性の腎臓同種移植片の拒絶反応における補体の潜在的役割を研究するための優れた手段を提供することを示唆している。ＣｓＡとＬＦの併用での抗Ｃ５ ｍＡｂはＡＢＭＲを予防して、そして前感作マウスレシピエントにおける腎臓同種移植片の生存期間を無期限とする。
【０１７５】
このモデルの作成中に実施された初期実験では、腎臓移植片の生存を延長させる際のＣｓＡとシクロホスファミド（ＣｙＰ）の免疫抑制作用が評価された。一方で、ＣｙＰ治療は深刻な腎毒性に関連しており、さらなる評価を妨げた（データ未提示）。ＬＦでの短期治療は腎毒性に関連しておらず、そしてさらなるモデリングでは実験的な免疫抑制計画の一部としてこの薬剤を使用した。
【０１７６】
単剤またはＣｓＡと併用した抗Ｃ５ ｍＡｂおよび短期間のＬＦ治療によって、腎臓同種移植片を受けた前感作マウスレシピエントにおいてＡＢＭＲを予防できるか否かを評価した。図１１Ａに示される通り、ＣｓＡまたはＬＦの単剤療法、または２つの薬物の併用療法を受けた前感作レシピエントの移植片は、それぞれ９．３±２．５日間、６．０±１．０日間、そして１１．７±２．１日間で拒絶された。また、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤療法、もしくはＣｓＡまたはＬＦと抗Ｃ５ ｍＡｂの併用によって移植片の生存期間を改善させることはできず、拒絶反応がそれぞれ７．０±１．０日間、７．０±１．０日間、そして８．３±３．２日間で起った（図１１Ａ）。これらの拒絶された腎臓移植片は、抗体媒介性の体液性拒絶反応の典型的な病理学的特徴も発現しており（データ未提示）、拒絶反応のパターンは、未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて認められるパターンと実質的に同じであった（図１０Ｂ−ａ）。対照的に、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよび短期ＬＦ治療から成る３剤併用療法によって移植片の拒絶反応が効果的に予防されて、そして前感作動物において腎臓同種移植片の生存期間が１００日間を超えて無期限になった（図１１Ａ）。さらに、正常範囲内の血清クレアチニン濃度によって示される通り、長期生存中の腎臓移植片は正常な腎臓機能を示した（図１１Ｂ；ｐ＜０．０１、対未治療マウスまたはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けたマウス）。３剤併用療法によって治療された前感作レシピエントにおけるＰＯＤ１００での腎臓同種移植片の組織像は正常であり（図１１Ｃ−ａ）、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋またはＭａｃ−１＋細胞の浸潤は検出できなかった（図１１Ｃ −ｂ、ｃ、ｄ）。また、多数のＭａｃ−１＋細胞の移植片内浸潤が未治療動物およびＣｓＡ、ＬＦまたはＣｓＡ＋ＬＦ治療動物において認められ、これらの細胞の浸潤は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療動物において有意に減少した（表７）。これらの結果は、ＣｓＡおよび短期間のＬＦを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂを機能的に遮断することによる治療によって、高度に前感作させたレシピエントにおいてＡＢＭＲが予防されて、腎臓同種移植片の生存期間を無期限にすることができることを示している。
【０１７７】
抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって、腎臓同種移植片を受けた前感作レシピエントにおいて終末補体活性および局所的なＣ５沈着が完全に抑制される。
【０１７８】
このモデルにおける抗Ｃ５ ｍＡｂ治療の全身的および局所的な有効性を判定するために、同じ時間点（ＰＯＤ７）の異なる治療群のマウスにおいてインビトロでの血清溶血アッセイによる測定によって補体活性を評価した。ＣｓＡまたはＬＦ、もしくは２つの薬物の併用によるマウスの治療では、終末補体活性に及ぼす抑制作用は認められず、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤もしくはＣｓＡおよび／またはＬＦとの併用による治療によって血清補体活性は完全に抑制された（ｐ＜０．０１、未感作マウス、未治療の前感作マウスまたはＣｓＡ、ＬＦまたはＣｓＡ＋ＬＦ治療動物）（図１２）。ＰＯＤ６０での治療中止後、ＰＯＤ１００までに補体溶血活性が正常濃度に回復した（表１２）。さらに、局所的な（移植片内の）Ｃ５沈着は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療を受けた前感作レシピエントにおいて完全に予防されたが、無治療またはＣｓＡ、ＬＦおよびＣｓＡ＋ＬＦ治療を受けた前感作動物においては顕著であった（表７）。予測された通り、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって移植片内Ｃ３沈着は阻止されなかった（表７）。これらの結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって終末補体活性が完全に遮断されるが、しかし、前感作レシピエントにおける同種腎移植後の初期補体成分が維持されることを示している。
【０１７９】
長期生存中の腎臓移植片は、適応によって前感作レシピエントにおける液性免疫に抵抗性を示す。
【０１８０】
これらの腎臓移植片の長期生存期間が適応の発生に関連しているか否かを調べるために、拒絶反応の時点での異なる治療群のマウスにおける循環抗ドナー抗体の濃度、血清補体活性および移植片内抗体および補体沈着を測定した。未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントが高濃度の循環抗ドナーＩｇＧ抗体を産生し（図１３Ａ）、これらはＣｓＡまたはＬＦの単剤または併用での治療時に部分的に減少した。ＣｓＡまたはＬＦのいずれの単剤療法に抗Ｃ５を加えても抗ドナー抗体の濃度がさらに減弱することはなかった。抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＬＦの３剤併用療法では、循環抗ドナーＩｇＧ濃度は顕著に抑制されて、そしてＰＯＤ１００では依然として低いままであった（＊ｐ＜０．０１、対未治療の前感作動物もしくは単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた動物）。しかし、この低い抗体濃度は、未感作動物での抗体濃度よりも依然として高かった（＊＊ｐ＜０．０５、対３剤併用療法で治療した前感作動物）。循環抗ドナー抗体の濃度に及ぼす治療効果と矛盾なく、未治療の前感作レシピエント、もしくはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用のいずれかを受けているレシピエントにおいて顕著な移植片内ＩｇＧ沈着が認められた（表７）。興味深いことに、ＰＯＤ１００では、３剤併用療法によって治療された動物からの長期生存中の腎臓移植片も軽度のＩｇＧ沈着を示した（図１１Ｃ−ｅ、表７）。さらに、軽度から中程度のＣ３およびＣ５の沈着が、前感作動物の１００日間生存中の腎臓移植片において検出された（図１１Ｃ−ｆ、ｇ、表７）。血液循環中（図１３Ａ）または移植された腎臓移植片（表７）中の抗ドナーＩｇＭ濃度は、治療にかかわらず全ての前感作レシピエントにおいて依然として低いままであった。まとめると、これらのデータは、実証可能な移植片内のＩｇＧおよび補体の沈着の存在にも関わらず、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によってＡＢＭＲが予防されることを示しており、移植片の長期生存期間が適応過程を通じて達成されることを示唆している。
【０１８１】
適応させた腎臓移植片を有する長期生存中の前感作レシピエントにおけるＩｇＧ２ｂへのＩｇＧサブクラスシフト
抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法がＩｇＧサブクラスシフトに関連するか否かを判定するために、未治療の前感作レシピエントおよび適応させた腎臓移植片を有するレシピエントにおいて、抗ドナーＩｇＧサブクラスの血清濃度間で比較を行なった。未治療の前感作レシピエントからの血清には、主にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ３抗ドナー抗体が含まれていた（図１３Ｂ）。ＣｓＡ、ＬＦ、または２つの薬物の併用で治療された前感作レシピエントにおいて同じパターンが認められた（データ未提示）。対照的に、適応させた移植片を有する前感作レシピエントにおいて（ＰＯＤ１００）、主な抗ドナーＩｇＧサブクラスはＩｇＧ２ｂであった（図１３Ｂ、ｐ＜０．０１）。これらのデータは、抗ドナーＩｇＧ２ｂ抗体の産生が移植片の適応誘導に関連しうることを示唆する。
【０１８２】
保護タンパク質Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌは、適応させた腎臓移植片で発現する。
【０１８３】
低濃度の同種抗体および補体に対する適応させた移植片の耐性は、過去に異種移植モデルでの適応させた移植片の血管内において上方制御されていることが報告されているＢｃｌ−ｘｌやＢｃｌ−２などの保護タンパク質の移植片内での発現に関連している可能性があると仮定されている（Ｂａｃｈら、１９９７）。これらのタンパク質の発現は、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法を受けている前感作レシピエントにおいて評価した。抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法で治療した前感作レシピエントからの適応させた腎臓移植片はＰＯＤ１００に高濃度のＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質を発現していた（図１４）。対照的に、これらのタンパク質の発現は、未治療の前感作動物（図１４）、もしくはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた前感作動物の拒絶された腎臓移植片においては検出できなかった（データ未提示）。これらの結果は、これらの前感作動物における液性免疫に対する適応させた移植片の耐性がＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質によってもたらされる保護に関連しうることを示唆している。
【０１８４】
表７
剖検時の前感作マウスレシピエントにおける腎臓同種移植片の免疫ペルオキシダーゼ染色＊
【０１８５】
【表７】
＊拒絶反応の時点または移植後のＰＯＤ１００（３剤併用療法群について）に移植片を回収した。染色強度は以下の通り点数化した：０、陰性；１＋、判定不能 ；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強。
【０１８６】
実施例６ 実施例５の方法
動物 体重２５〜３０ ｇの雄の成体Ｃ３Ｈ（Ｈ−２ｋ）マウスおよびＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２ｄ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）をそれぞれドナーおよびレシピエントとして選んだ。Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ ＯｎｔａｒｉｏのＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて従来の条件下で動物を収容させて、そしてＣａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅが定めたガイドラインに従って飼育した。
【０１８７】
皮膚前感作 Ｃ３Ｈドナーから採取した全層皮膚移植片を１×１ ｃｍ２の小片に切り、そしてＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスの背部に移植した。拒絶反応は皮膚移植片の完全な壊死と定義した。
【０１８８】
同所性腎移植 皮膚前感作から７日後、１１−０ナイロン縫合糸を使用してドナーとレシピエントの大動脈およびドナー腎静脈とレシピエントの下大静脈に吻合させることによって前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの腹部にＣ３Ｈマウス腎臓を移植させた。また、１０−０縫合糸を使用してドナー尿管をレシピエント膀胱に縫合された。移植直後に固有腎を摘出した。宿主に死を招く移植片の拒絶反応を腎臓移植での拒絶反応のエンドポイントとして利用した。
【０１８９】
実験群 前感作レシピエントを各５匹の動物から成る８群に無作為に割り当てた：１群、未治療マウス；２群、ＣｓＡ治療マウス（１５ｍｇ／ｋｇ ／日、皮下、０日目から試験エンドポイントまで毎日（移植片の拒絶反応または手術後日数（ＰＯＤ）１００）；３群、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス（クローンＢＢ５．１、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、４０ｍｇ／ｋｇ ／日、腹腔内、毎日、０〜１４日目、その後、６０日目まで週２回）；４群、ＬＦ１５−０１９５治療マウス（ＬＦ、２ｍｇ／ｋｇ ／日、皮下、０〜１４日目）；５群、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス；６群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＬＦ治療マウス；７群、ＣｓＡ＋ＬＦ治療マウス；８群、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＬＦから成る３剤併用療法治療を受けたマウス。拒絶反応の時点で、ルーチンの組織学的研究、免疫組織化学的研究およびウェスタンブロット分析のために腎臓移植片を摘出して、そして抗ドナー抗体の濃度および補体活性の評価のために血清抗体を採取した。
【０１９０】
血清中クレアチニンの測定 腎移植後、試験エンドポイント（拒絶反応またはＰＯＤ１００の時点）で血清検体を得た。ヤッフェ反応の速度修飾（ｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（Ｊｕｎｇｅら、２００４）によってクレアチニンを測定するＳｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の手順を利用して、１０μＬ検体中で血清中クレアチニン濃度を定量した。
【０１９１】
移植片組織像 剖検時に、組織検体をヘマトキシリン＆エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色法（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，ＪＩ ２００３）で処理して、そして脈管炎、血栓症、出血およびリンパ球浸潤を評価した。変化を以下の通りに採点した：０、なし；１、最小限；２、軽度；３、中程度または４、正常組織と比較して顕著。
【０１９２】
免疫組織化学 Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ｏ．Ｃ．Ｔ）ゲル（Ｓｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ、トランス （Ｔｏｒｒａｎｃｅ）、ＣＡ）包埋した組織検体を切片にして、そしてＥｌｉｔｅ Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用してＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびとＭａｃ−１＋浸潤細胞、ならびにＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｃ３およびＣ５沈着を染色した。一次ビオチン化抗体として、抗ＣＤ４（ＹＴＳ １９１．１．２，Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｍｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）、抗ＣＤ８（５３− ６．７，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）および抗Ｍａｃ−１（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）が挙げられる。ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧとヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を使用して移植片内のＩｇＧおよびＩｇＭの沈着を検出した。ヤギ抗マウスＣ３または抗マウスＣ５ポリクローナル抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およびＨＲＰ結合ストレプトアビジン（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）による連続インキュベーション後に補体沈着を検出した。一次抗体を除くことによって陰性対照とした。動物５匹／実験群からの組織検体を使用して、各切片の５つの高倍率視野内で免疫染色を点数化した。免疫反応性が以下の通り染色強度に従って０から４＋で採点した：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、非常に強度の染色。
【０１９３】
フローサイトメトリー フローサイトメトリーによってレシピエント血清中の循環抗ドナー特異的ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体を評価した。簡単に説明すると、Ｃ３Ｈマウス脾細胞が単離して、そして様々な治療群からのマウスから指定された時間点で得た血清検体と３７℃で３０分間インキュベートさせた。全ＩｇＧまたは特異的抗体サブクラスを染色するために、マウスＩｇＧ、マウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂまたはマウスＩｇＧ３（全てＣＡＬＴＡＧ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）のＦｃ部分に特異的なＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウス抗体またはマウスＩｇＭ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）に特異的なフィコエリスリン結合ヤギ抗体と、洗った細胞を４℃で１時間インキュベートさせて、洗い、ＦＡＣＳｃａｎ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で分析した（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９；Ｐｒａｔｔら、１９９６）。結果は、検体中の各抗ドナーアイソタイプの濃度の測定値として、平均チャンネル蛍光強度で表している。
【０１９４】
補体溶血アッセイ レシピエントマウスの血清における終末補体活性を標準的方法によって測定して、過去に記載された通りに（Ｗａｎｇら、１９９９）、赤血球特異的抗体で前感作させたニワトリ赤血球に対する血清の溶解能を評価した。
【０１９５】
ウェスタンブロット解析 凍結腎臓検体を超音波分解させて、電気泳動で分離させてそしてポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）メンブレンにトランスファーさせた。Ｂｃｌ−２とＢｃｌ−Ｘｓ／Ｌの移植片内発現をそれぞれポリクローナル血清Ｎ−１９とＭ−１２５を使用して検出した（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。。ポリクローナル抗カルセケストリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）は、検体添加対照として使用した（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９）。ホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧによって抗体結合が検出され、そして化学発光（Ｒｏｃｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が高められた（Ａｒｐら、１９９６）。
【０１９６】
統計解析 平均値±標準偏差（ＳＤ）でデータを報告する。ログランクテストを利用して、同種移植片の生存期間を実験群間で比較した。ランク（ｏｎ ｒａｎｋ）ＡＮＯＶＡを利用して組織学的所見と免疫組織学的所見を解析した。一元配置ＡＮＯＶＡを利用してフローサイトメトリーとウェスタンブロットのデータを解析した。ｐ値の差が０．０５未満を有意と見なした。
【０１９７】
本開示の方法および組成物は、様々な態様の形で組み込むことができ、その少数のみを本明細書で開示していることが理解される。他の態様が存在し、そして開示の精神から逸脱しないことは当業者には明らかであろう。従って、記載している態様は例示であり、そして限定的であると解釈してはならない。
【０１９８】
参考文献のリスト
開示の背景を明らかにするために本明細書で使用する出版物および他の資料、特に、実行に関する追加の詳細を提供する事例は、本明細書において全体として参照により組み入れられ、そして便宜のための、著者および日付により参照され、以下の参考文献のリストにおいてそれぞれグループ分けしている。
【０１９９】
【化２】
【０２００】
【化３】
【０２０１】
【化４】
【０２０２】
【化５】
本明細書で引用されたすべての参考文献の内容は、全体として参照により組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【０２０３】
【図１−１】図１Ａ−１Ｂには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する非感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１−２】図１Ｃ−１Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する非感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図２Ａ】図２Ａには、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰを使用した３剤併用療法と、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体およびＣｓＡを使用した併用療法との比較を示している。図２Ａでは、異なる治療下での様々なレシピエントにおける心臓同種移植片の生存期間を比較している。
【図２Ｂ】図２Ｂには、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰを使用した３剤併用療法と、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体およびＣｓＡを使用した併用療法との比較を示している。図２Ｂには、例えば、異なる群のレシピエントでの心同種移植におけるリンパ球浸潤の組織像および免疫組織像を示している。
【図３】図３には、免疫抑制剤と比較した、抗Ｃ５抗体によって遮断された終末補体活性を示している。
【図４−１】図４Ａ−４Ｂでは、抗Ｃ５抗体での単剤療法、抗Ｃ５抗体およびＣｓＡでの併用療法、ならびに抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰでの併用療法下での前感作レシピエントにおける抗ドナー抗体の濃度を比較している。
【図４−２】図４Ｃ−４Ｄでは、抗Ｃ５抗体での単剤療法、抗Ｃ５抗体およびＣｓＡでの併用療法、ならびに抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰでの併用療法下での前感作レシピエントにおける抗ドナー抗体の濃度を比較している。
【図５】図５には、未治療であった、または異なる治療下にあった同種移植レシピエントにおけるＩｇＧアイソタイプの比率の変化を示している。
【図６】図６には、未治療動物の心臓移植片と比較した、長期生存中の心臓移植片におけるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の高レベル発現を示している。
【図７】図７Ａ−７Ｃには、初回移植レシピエントからの適応させた移植片の２回目の移植（再移植）での改善を示している。
【図８】図８Ａ−８Ｂには、再移植実験での結果を示している。
【図９】図９Ａ−９Ｂには、再移植実験での結果を示している。
【図１０−１】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１０−２】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１０−３】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１１−１】図１１Ａ−１１Ｂには、ＣｓＡと抗体Ｃ５ ｍＡｂとの併用を示しており、ＬＦによって前感作マウスにおける腎臓移植片の生存期間が無期限になる。
【図１１−２】図１１Ｃには、ＣｓＡと抗体Ｃ５ ｍＡｂとの併用を示しており、ＬＦによって前感作マウスにおける腎臓移植片の生存期間が無期限になる。
【図１２】図１２には、前感作ＢＡＬＢ／ｃマウス血清において補体の溶血活性が完全に抑制されることを示している。
【図１３】図１３Ａ−１３Ｂには、未治療であった、または異なる治療下にあった同種移植レシピエントにおけるＩｇＧアイソタイプの比率の変化を示している。
【図１４】図１４には、前感作レシピエントの長期生存腎臓移植片における防御タンパク質の発現を示している。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００６年３月２日出願の米国特許仮出願第６０／７７８，８５９号の利益および優先権を主張し、これにより全体として参照により組み入れられる。
【０００２】
本開示は哺乳動物での同種移植片の生存を延長させるための方法に関する。特に、本開示は、免疫反応を抑制する１以上の薬物または方法に加えて、補体または終末補体（terminal complement）の形成の阻害剤、特に補体Ｃ５切断の阻害剤を投与することによる同種移植片の生存を延長させることに関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
臓器移植は、慢性臓器不全を伴う大半の患者において好ましい治療である。腎臓、肝臓、肺および心臓の移植は、レシピエントがより正常なライフスタイルに戻る際に、回復の素晴らしい機会を与えるが、潜在的レシピエントの医学的および外科的な適合性、ドナー不足の深刻化、および移植臓器機能の早期不全によって制限される。
【０００４】
細胞、組織および器官の移植が非常に一般的になっており、救命手段となる場合が多い。臓器移植は慢性臓器不全を伴う大半の患者において好ましい治療である。拒絶反応を抑制するための処置における大きな改善にもかかわらず、拒絶反応が臓器移植の成功における一つの最も大きな障害であり続けている。拒絶反応には急性拒絶反応だけでなく慢性拒絶反応も含まれる。腎臓移植での１年間生存率は、死亡したドナーからの腎臓では平均８８．３％、そして生きているドナーから受けた腎臓では平均９４．４％である。腎臓移植での対応する５年間生存率は、６３．３％および７６．５％（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）である。肝臓では、１年間生存率は、死亡したドナーおよび生きているドナーからの肝臓でそれぞれ８０．２％および７６．５％である。肝臓移植での対応する生存率は６３．５％および７３．０％（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）である。免疫抑制薬、特にシクロスポリンＡ、そしてより最近ではタクロリムスの使用によって、特に急性拒絶反応を予防することにより臓器移植術の成功率が劇的に改善されている。しかし、上記数字が示す通り、依然として短期および特に長期のいずれの成功率も改善させる必要性がある。腎臓および肝臓の上記移植数から分かる通り、これらの移植器官での５年間失敗率は約２５〜３５％である。２００１年だけで、臓器移植を受けた患者が２３，０００人以上おり、そのうち約１９，０００人が腎臓または肝臓であった（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２００２）。この１年間の移植臓器だけで、現在の技術によって、移植された腎臓および肝臓の約５，０００〜６，０００が５年以内に失敗すると予測できる。これらの数字には、骨髄などの他の移植器官または移植組織または移植細胞さえも含まれない。
【０００５】
移植には複数の種類が存在する。これらは［Ａｂｂａｓら、２０００］に記載されている。１個人から同じ個人に移植された移植片は、自己の移植片または自己移植片と呼ばれる。遺伝的に同一または同系の個人間で移植された移植片は同系移植と呼ばれる。同じ種の遺伝的に異なる２人の個人間で移植された移植片は、同種の移植片または同種移植片と呼ばれる。異なる種の個体間で移植された移植片は、異種の移植片または異種移植と呼ばれる。同種移植片上で異物として認識される分子は同種抗原と呼ばれ、そして異種移植片上の分子は異種抗原と呼ばれる。同種抗原または異種抗原と反応するリンパ球または抗体は、それぞれアロ反応性または異種反応性であると記載される。
【０００６】
現在、米国では毎年４０，０００例以上の腎臓、心臓、肺、肝臓および膵臓の移植が行なわれている（Ａｂｂａｓら、２０００）。他の可能な移植としては、限定はされないが、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞および造血細胞が挙げられる。不運にも、ドナーよりもずっと多くの移植の候補者が存在する。この不足を克服するために、異種移植の利用方法を学ぶための多大な努力がなされている。この分野が進歩するにつれて、実情は現在のところ大半の移植片が同種移植片である。現在、同種移植は異種移植よりも成功する可能性が高いが、成功するには多数の障害を越えなくてはならない。ドナー器官に対してレシピエントが起こす数種の免疫学的攻撃が存在しており、これらは同種移植片の拒絶反応を招きうる。これらとしては、超急性拒絶反応、急性血管拒絶反応（早期体液性拒絶反応と新たな急性体液性拒絶反応を含む）および慢性拒絶反応が挙げられる。通常、拒絶反応はＴ細胞媒介性の攻撃または体液性抗体の攻撃の結果であるが、しかし補体およびサイトカインの効果といった追加の二次的因子が含まれうる。
【０００７】
臓器移植を必要とする患者の数と利用可能なドナー臓器の数との絶え間なく増大するギャップが世界中で主要な問題になっている（Ｐａｒｋら、２００３）。抗ＨＬＡ抗体を発生させた個人は、免疫性を付与されている、または感作されていると言われる。（Ｇｌｏｏｒ，２００５）重度の抗体媒介性拒絶反応（ＡＢＭＲ）の発生のため、臨床移植における生きているドナーからの器官の最適な使用においてはＨＬＡ感作が大きな障壁である。例えば、腎移植を待つすべての個人の５０％以上が、複数回の輸血、過去の同種移植片の失敗または妊娠に起因する、反応性の広い同種抗体の濃度が上昇している前感作患者（Ｇｌｏｔｚら、２００２）である（Ｋｕｐｉｅｃ−Ｗｅｇｌｉｎｓｋｉ，１９９６）。この種の拒絶反応が同種移植片の機能の急性喪失または慢性喪失を招きうるとの認識のため、現在、ＡＢＭＲの役割は移植において最も精力的に試験されている分野の１つである（Ｍｅｈｒａら、２００３）。超急性拒絶反応（ＨＡＲ）または早期体液性拒絶反応（ＡＣＨＲ）を含む、多数のＡＢＭＲ症例が報告されており、強力な抗Ｔ細胞治療に耐性である急性同種移植片傷害、循環ドナー特異的抗体の検出および移植片中の補体成分の沈着を特徴とする。急性拒絶反応の症例の２０〜３０％において生じる循環同種抗体の上昇および補体活性化を伴うＡＢＭＲは、細胞性拒絶反応よりも予後不良である（Ｍａｕｉｙｙｅｄｉら、２００２）。
【０００８】
高濃度の同種抗体を示す高度に前感作された患者は、通常、即時および侵襲性のＨＡＲ を経験する。診療においては、当技術における多大の努力および大幅な進歩によって、ドナーＨＬＡ抗原に特異的な抗体を有する感作患者を特定するための移植前リンパ球毒性クロスマッチを得ることでＨＡＲを回避する。しかし、ドナーＨＬＡまたは他の非ＭＨＣ内皮抗原に対する循環抗体は、移植片消失の発生増加に関連する遅延型の急性体液性拒絶反応にも関与しうる。（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９）。したがって、臨床現場においてＡＢＭＲを模倣する新規の前感作動物モデルの作成は、機序の研究、および前感作宿主における同種移植片の拒絶反応の管理におけるより大きな必要性に対して有益となりうる。
【０００９】
高度に前感作させた患者は、一時的に抗ドナー抗体を排除するように設計および実施される、免疫吸着（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）、血漿搬出および静脈内免疫グロブリン（非特許文献４；非特許文献５）などの介入プログラムから恩典を得ることができる。しかし、それらの恩典に加えて、一部の個人はこれらの効果に対して感受性が低いため、上述の治療は多数の欠点を伴い（非特許文献３；Ｈａｋｉｍら、１９９０；Ｇｌｏｔｚら、１９９３；Ｔｙａｎら、１９９４）、それらは極めて効果であり、時間がかかり、そしてリスクを伴う（Ｓａｌａｍａら、２００１）。さらに、これらのプロトコルの一過性かつ変動する効果のため、それらの影響が限定される（Ｇｌｏｔｚら、２００２；Ｋｕｐｉｎら、１９９１ ；Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒら、２０００）。したがって、ＡＢＭＲの予防におけるリスクとコストを低減させるための新規戦略を開発することは、同種移植片を受ける前感作レシピエントに有益となりうる。
【非特許文献１】Ｐａｌｍｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ（１９８９）１：１０〜１２
【非特許文献２】Ｒｏｓｓら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９３）５５：７８５〜７８９
【非特許文献３】Ｋｒｉａａら、Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（１９９５）１０ Ｓｕｐｐｌ．６：１０８〜１１０
【非特許文献４】Ｓｏｎｎｅｎｄａｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．（２００２）３４：１６１４〜１６１６
【非特許文献５】Ｒｏｃｈａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００３）７５：１４９０〜１４９５
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（要旨）
したがって、移植した細胞、組織または器官の生存を延長させるための方法を提供する。特に、同種移植した細胞、組織または器官の生存を延長させるための方法を提供する。これらの方法では、補体活性の阻害剤に加えて、１以上の免疫抑制剤および／または免疫抑制方法の使用を対象としている。１以上の薬物または薬物パッケージの製造における１以上の免疫抑制剤および補体活性の阻害剤の使用も提供する。のような薬物あるいは薬物パッケージは、被験体である哺乳動物における同種移植片の生存期間を延長する際に有用である。
【００１１】
同種移植片の例は、同種移植された細胞、組織または臓器であり、限定はされないが、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞、造血細胞、心臓、肝臓、肺、腎臓および膵臓が挙げられる。
【００１２】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法を提供し、該方法は、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される。
【００１３】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００１４】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）である。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００１５】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００１６】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００１７】
特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００１８】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００１９】
特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００２０】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含む前記方法であって、前記治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、前記哺乳動物は前記同種移植片に対して前感作される、方法を提供する。
【００２１】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００２２】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００２３】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００２４】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００２５】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００２６】
哺乳動物を同種移植片に対して前感作させる特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００２７】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作用される特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００２８】
特定の局面では、開示は、哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用を提供する。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が前記の薬物または薬物パッケージに含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。特定の態様では、前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。
【００２９】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される方法を提供する。
【００３０】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００３１】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００３２】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００３３】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００３４】
特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００３５】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００３６】
特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００３７】
特定の局面では、開示は、レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、前記哺乳動物に対するａ）補体活性を抑制する薬物およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制薬を投与することを含み、治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法を提供する。
【００３８】
特定の態様では、前記哺乳動物がヒトである。特定の態様では、前記同種移植片がＭＨＣ不適合である。特定の態様では、前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である。特定の態様では、前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が慢性投与される。
【００３９】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する前記薬物が抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。特定の態様では、前記エクリズマブが慢性投与される。特定の態様では、前記エクリズマブが２週間に１回投与される。
【００４０】
特定の態様では、前記の補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される。
【００４１】
特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が投与される。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、前記方法にｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することが含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である。特定の態様では、免疫調節治療法（例、血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着）が補体活性の阻害剤と併用される。
【００４２】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記方法が補体活性を抑制する前記薬物なしで実施された場合に前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る。特定の態様では、前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る。特定の態様では、前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る。
【００４３】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１４日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも２８日間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも３ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも６ヶ月間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも１年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が少なくとも５年間慢性投与される。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり慢性投与される。
【００４４】
哺乳動物が同種移植片に対して前感作される特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される。特定の態様では、哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される。特定の態様では、前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される。
【００４５】
特定の局面では、開示は、哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用を提供し、少なくとも１つの免疫抑制薬にＬＦ１５−０１９５が含まれる。特定の態様では、２以上の免疫抑制薬が前記の薬物または薬物パッケージに含まれる。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。特定の態様では、前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある。
【００４６】
特定の局面では、開示は、補体活性を抑制する薬物および少なくとも１つの免疫抑制薬を含む薬学的パッケージであって、該補体活性を抑制する薬物および該免疫抑制薬が慢性投与用に製剤化されており、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む薬学的パッケージを提供する。
【００４７】
特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が抗体および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中の抗体である。特定の態様では、前記免疫抑制薬が免疫抑制薬および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中にある。特定の態様では、前記薬物および前記免疫抑制薬が前記薬物、前記免疫抑制薬および凍結保護剤を含む同じ凍結乾燥製剤中にある。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物を含む。特定の態様では、前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該免疫抑制薬を含む。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物および前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあり、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物および該免疫抑制薬を含む。特定の態様では、補体活性を抑制する前記薬物が単位投薬形態で存在する。特定の態様では、前記免疫抑制薬が単位投薬形態で存在する。
【００４８】
特定の態様では、前記抗体が終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、抗体は抗体全体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である。特定の態様では、前記の抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する。特定の態様では、前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される。特定の態様では、前記抗体断片がペキセリズマブである。特定の態様では、前記抗体全体がエクリズマブである。
【００４９】
出願では、上記局面および態様の任意の併用についても検討している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
（詳細な説明）
概観：移植器官または移植片の拒絶反応
移植から数分から数時間以内に超急性拒絶反応が発生しており、移植された組織抗原に対して前もって形成された抗体に起因している。これは移植片の血管系での出血および血栓性閉塞を特徴とする。内皮への抗体の結合によって補体が活性化されて、抗体および補体は静脈内血栓症が促進されて、そして血管閉塞を招く移植片の内皮に多くの変化を誘発させて、結果として移植された臓器に不可逆的な虚血性傷害を招く（Ａｂｂａｓら、２０００）。
超急性拒絶反応は既存のＩｇＭ同種抗体（例、赤血球細胞に発現するＡＢＯ血液群抗原に対する同種抗体）によって媒介されることが多い。この種の拒絶反応は自然抗体によって媒介され、異種移植の拒絶反応の主な理由である。同種移植は通常ドナーおよびレシピエントのＡＢＯ型とマッチするように選択されるため、自然のＩｇＭ抗体に起因する超急性拒絶反応はもはや同種移植における大きな問題ではない。通常、外来のＭＨＣ分子などのタンパク質同種抗原または血管内皮細胞に発現する十分に明らかにされていない同種抗原に対するＩｇＧ抗体によって媒介される、ＡＢＯマッチ同種移植の超急性拒絶反応が発生する可能性がある。このような抗体は、輸血、先行する移植または多胎妊娠（先行するこの暴露は、「前感作」と呼ばれる）を通して同種抗原への先行する暴露の結果として生じうる（Ａｂｂａｓら、２０００）。
【００５１】
急性拒絶反応は、通常、移植の第１週間後に始まるＴ細胞、マクロファージおよび抗体によって媒介される血管や実質の損傷の過程である。（Ａｂｂａｓら、２００１）。Ｔリンパ球は、血管内皮や実質細胞に存在するＭＨＣ分子を含む同種抗原に応答することで急性拒絶反応において中心的な役割を果たす。活性化Ｔ細胞は、移植片細胞を直接溶解させるか、または炎症性細胞を動員して、活性化させるサイトカインを産生して、これによって壊死を起こす。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞のいずれも急性拒絶反応の一因となりうる。移植片における同種細胞の破壊は高度に特異的であり、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞による殺傷の特徴である。（Ａｂｂａｓら、２０００）。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、サイトカインを分泌して、そして移植組織における遅延型感覚過敏症様反応を誘発することによって急性移植片の拒絶反応を媒介する際に重要となりうるが、ＣＤ４＋Ｔ細胞が急性拒絶反応を媒介するのに十分であることを示すいくつかの証拠を入手できる。（Ａｂｂａｓら、２０００）。移植片のレシピエントにおいて管壁抗原に対する体液性免疫反応が高まり、そして産生された抗体が管壁に結合して補体を活性化した後、抗体は急性拒絶反応を媒介することもできる（Ａｂｂａｓら、２０００）。
【００５２】
慢性拒絶反応は、長期の期間にわたって正常な臓器構造の消失が起こる線維化を特徴とする。慢性拒絶反応の病因は、急性拒絶反応の病因ほどには理解されていない。移植片の動脈性閉塞が内膜平滑筋細胞の増殖の結果として起こりうる（Ａｂｂａｓら、２０００）。この過程は、早期の、または移植片の動脈硬化と呼ばれ、移植後６カ月から１年以内に任意の血管新生させる臓器移植において発生しうる。
【００５３】
移植を成功させるには、いくつかの機序の拒絶反応を克服しなくてはならない。拒絶反応を予防するために複数のアプローチが利用される。これには免疫抑制剤、多くの場合には、様々な機序の攻撃、例えば、Ｔ細胞攻撃、抗体ならびにサイトカインおよび補体の効果を阻止するためのいくつかの種類の投与が要求されうる。これらをレシピエントと適合させるためのドナーのプレスクリーニングも、拒絶反応の予防、特に超急性拒絶反応の予防における重要な要因である。移植前の抗ＨＬＡ抗体の免疫吸着によって超急性拒絶反応が軽減されうる。移植前に、レシピエントまたは宿主に抗Ｔ細胞試薬、例えば、モノクローナル抗体ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、シクロスポリンＡまたはタクロリムス（ＦＫ５０６）を投与できる。さらに、グルココルチコイドおよび／またはアザチオプリン（または他のプリン類似体）を移植前に宿主に投与できる。移植拒絶反応の予防を補助するために使用する薬物としては、限定はされないが、ＡＴＧまたはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリンなどのプリン類似体、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナール、レフルノミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４− Ｉｇ、リツキサン、抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗ＬＦＡｌモノクローナル抗体、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗ＣＤ２モノクローナル抗体および抗ＣＤ４５が挙げられる。
【００５４】
同種移植片は部分的にＴ細胞の活性化によって拒絶反応される。移植レシピエントにおいては、同種移植片内の外来抗原をＣＤ４＋Ｔ細胞が認識後、拒絶反応が高まる。これらの抗原は主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によってコード化される。クラスＩおよびクラスＩＩのいずれのＭＨＣ分子も存在する。ヒトでは、クラスＩのＭＨＣ分子はＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ −Ｃである。ヒトのクラスＩＩ ＭＨＣ分子は、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱおよびＨＬＡ − ＤＰと呼ばれる。マウスでは、クラスＩ ＭＨＣ分子は、Ｈ−２Ｋ、Ｈ−２ＤおよびＨ−２Ｌであり、そしてクラスＩＩ ＭＨＣ分子はＩ−ＡおよびＩ−Ｅである。ＣＤ４＋Ｔ細胞が外来ＭＨＣ抗原に結合した際、それらは活性化されて、クローン増殖を遂げる。活性化Ｔ細胞は、単球／マクロファージ、Ｂ細胞と細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化する際の補助となるサイトカインを分泌する。活性化単球／マクロファージは、組織傷害を招く薬剤を放出し、Ｂ細胞は補体媒介性の組織破壊を招く同種抗体を産生し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞はアポトーシスおよび細胞溶解を介した抗原特異的な方法で移植片細胞を殺傷する。
【００５５】
免疫抑制剤
移植片の拒絶反応を遅らせる（つまり、移植片の生存期間を長くする）ために使用される多くの薬物が、様々な方法で作用する。免疫抑制剤が広く使用されている。いくつかの免疫抑制薬の作用機序のレビューについては、［Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００］を参照すること。移植片の拒絶反応を抑制する際に、シクロスポリンＡは最も広く使用される免疫抑制薬の１つである。これはインターロイキン２またはＩＬ−２の阻害剤（これはインターロイキン２のｍＲＮＡ転写を阻止する）である。より直接的には、シクロスポリンによって、Ｔ細胞受容体刺激時に正常に起こるカルシニューリン活性化が抑制される。カルシニューリンはＮＦＡＴ（活性Ｔ細胞核因子）を脱リン酸化させて、ＮＦＡＴを核内に進入させ、インターロイキン２プロモーターに結合できるようにする。この過程を遮断することによって、シクロスポリンＡはＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化および、本来ならば結果として生じうるカスケードの活性化を抑制する。タクロリムスはインターロイキン２の産生を抑制することによって作用するもう１つの免疫抑制剤である。
【００５６】
ラパマイシン（シロリムス）、ＳＤＺ ＲＡＤおよびインターロイキン２受容体遮断薬は、インターロイキン２の作用を抑制して、ひいては上記事象のカスケードを阻止する薬物である。
【００５７】
プリンまたはピリミジン合成の阻害剤は、移植片の拒絶反応の抑制にも使用される。これらはＤＮＡ合成を阻止して、そしてそれによってＴ細胞の分裂能を含む細胞分裂を抑制する。結果として、新しいＴ細胞の形成を阻止することによってＴ細胞の活性を阻害する。プリン合成の阻害剤としては、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）およびミゾリビン（ブレディニン）が挙げられる。ピリミジン合成の阻害剤がブレキナールナトリウムとレフルノミドを挙げる。シクロホスファミドは、プリンおよびピリミジンの両方の合成の阻害剤である。
【００５８】
Ｔ細胞活性化を阻害するためのさらに別の方法は、Ｔ細胞に対する抗体でレシピエントを治療することである。ＯＫＴ３は、Ｔ細胞受容体の一部であるＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体である。この抗体はＴ細胞受容体を抑制して、そしてＴ細胞の活性化を抑制する。
【００５９】
同種移植での拒絶反応を遅延させるための多数の他の薬物および方法が、当業者には公知であり、当業者によって使用されている。１つのアプローチは、例えば放射線治療によってＴ細胞を枯渇させることであった。特に主要ＨＬＡの部分的ミスマッチが存在する場合、これは骨髄移植において利用される場合が多い。ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０の相互作用の阻害剤（遮断薬）および／またはＣＤ２８−Ｂ７相互作用の遮断薬のレシピエントへの投与が利用されてきた（米国特許第６，２８０，９５７号）。公表されたＰＣＴ特許出願国際公開公報第０１／３７８６０号には、Ｔｈ１免疫反応を抑制するための抗ＣＤ３モノクローナル抗体およびＩＬ −５の投与について教示している。公表されたＰＣＴ特許出願国際公開公報第００／２７４２１号には、腫瘍壊死因子−αアンタゴニストを投与することによる角膜移植の拒絶反応の予防または治療の方法について教示している。Ｇｌｏｔｚら（２００２）は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）の投与によって抗ＨＬＡ抗体の力価の大幅で持続的な低下を誘発されて、これによってＨＬＡ不適合臓器の移植が可能になることを示している。同様のプロトコルとしては、血漿交換（Ｔａｕｂｅら、１９８４）または免疫抑制剤を併用した免疫吸着技術（Ｈｉｅｓｓｅら、１９９２）またはこれらの併用（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、２０００）が挙げられる。Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎら（２００３）は、共通のγ鎖（γｃ）（インターロイキン−２、−４、−７、−９、−１５、−２１）を利用したサイトカイン受容体の適切なシグナリングに必要な酵素であるヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の経口阻害剤によって免疫抑制が起こり、結果としてＴ細胞活性化が抑制されるモデルを教示している。ＩＣＡＭ−１に対するアンチセンス核酸が、心臓同種移植片移植の試験において単剤で、または白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）に特異的なモノクローナル抗体と併用されている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。同様に、心臓同種移植片を治療するために抗ＩＣＡＭ−１抗体が抗ＬＦＡ−１抗体と併用されてきた（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、さらに、心臓または腎臓同種移植片モデルにおいてシクロスポリンと併用されており、結果として生存期間を延長する相乗効果をもたらしている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，２０００）。慢性移植拒絶反応は、分化、増殖およびアポトーシスに関与するサイトカインであるＴＧＦ−βのアンタゴニストを投与することによって治療された（米国特許出願公開第２００３／０１８０３０１号）。
【００６０】
補体と移植片／移植片の拒絶反応
移植拒絶反応における補体の役割は周知である。これは特に異種移植に当てはまるが、しかし補体は同種移植での拒絶反応においても役割を果たす。［Ｐｌａｔｔ ａｎｄ Ｓａａｄｉ，１９９９］のレビューを参照すること。補体の役割の一局面は、レシピエントの血液で臓器移植片を再潅流させる際に虚血再潅流障害が起こりうることである。補体は同種移植片の拒絶反応の一部の徴候も起こしうる。
【００６１】
補体系については米国特許第６，３５５，２４５号に詳述されている。補体系は、細胞およびウイルスの病原体の侵入を防御する身体の他の免疫系と共に作用する。少なくとも２５の補体タンパク質が存在しており、これらは血漿タンパク質と膜補因子の複雑な回収物として見いだされる。血漿タンパク質は、脊椎動物の血清においてグロブリンの約１０％を構成する。補体成分は、複雑であるが、正確な一連の酵素切断および膜結合の事象において相互作用することによって補体成分の免疫防御機能を得る。結果として生じる補体カスケードは、オプソニン作用、免疫調節作用および溶菌作用と共に産物の産生をもたらす。
【００６２】
補体カスケードは古典経路または補体活性化第２経路を介して進行する。これらの経路は多くの成分を共用しており、そして、経路はそれらの最初の段階で異なるが、経路は収束して、標的細胞の活性化および破壊に関与する同じ「終末補体」成分（Ｃ５からＣ９）を共用する。
【００６３】
典型的には、古典的な補体経路は、標的細胞上の抗原部位の抗体認識および抗原部位への結合によって開始する。通常、補体活性化第２経路は抗体に依存せず、病原体の表面上にある特定分子によって開始できる。両経路は、補体成分Ｃ３が活性プロテアーゼによって切断されて（各経路で異なる）、Ｃ３ａとＣ３ｂを生じる時点で収束する。補体作用の様々な局面をもたらす一連の事象の後半において、補体攻撃を活性化させる他の経路が作用できる。
【００６４】
Ｃ３ａはアナフィラトキシンである。Ｃ３ｂは、特定のウイルスや免疫複合体の他、細菌細胞および他の細胞に結合して、そしてそれらにタグを付けて血液循環から除外する。この役割におけるＣ３ｂは、オプソニンとして知られている。Ｃ３ｂのオプソニン作用は、補体系の最も重要な抗感染作用と見なされる。Ｃ３ｂ機能を遮断する遺伝子損傷を伴う患者は、多種多様な病原生物に感染されやすく、補体カスケードシークエンスの後半に損傷を伴う患者、つまりＣ５機能を遮断する損傷を伴う患者はナイセリア感染にのみ傾向が強く、多少傾向が認められるのみである（Ｆｅａｒｏｎ，１９８３）。
【００６５】
Ｃ３ｂは、各経路に特有な他の成分と複合体も形成して、古典的または代替のＣ５転化酵素を形成し、これはＣ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。補体活性化第２経路および古典経路のいずれにも必須であることから、従って、Ｃ３は補体反応シークエンスにおける中心的なタンパク質と見なされる（Ｗｕｒｚｎｅｒら、１９９１）。Ｃ３ｂのこの特性は、Ｃ３ｂに作用してｉＣ３ｂを産生する血清プロテアーゼ第Ｉ 因子 （Ｆａｃｔｏｒ Ｉ）によって調節される。依然としてオプソニンとして機能的であるが、ｉＣ３ｂは活性Ｃ５転化酵素を形成できない。
【００６６】
Ｃ５は、正常血清において７５μｇ／ｍｌ（０．４μＭ）認められる１９０ ｋＤａのβ−グロブリンである。Ｃ５はグリコシル化され、その質量の約１．５〜３％が炭水化物に起因する。成熟Ｃ５は、６５６個のアミノ酸７５ｋＤａβ鎖とジスルフィド結合した９９９個のアミノ酸１１５ｋＤａα鎖のヘテロダイマーである。Ｃ５は１コピー遺伝子の一本鎖前駆体タンパク質産物として合成される（Ｈａｖｉｌａｎｄら、１９９１）。この遺伝子の転写産物のｃＤＮＡ配列から、１８個のアミノ酸のリーダー配列を伴う１６５９個のアミノ酸の分泌型のプロＣ５前駆体が予測される。
【００６７】
プロＣ５前駆体は６５５および６５９のアミノ酸の後で切断されて、アミノ末端断片としてβ鎖（＋１から６５５アミノ酸残基）およびカルボキシル末端断片としてα鎖（６６０から１６５８アミノ酸残基）を生じ、２つの間で４個のアミノ酸が取り除かれる。
【００６８】
Ｃ５ａは、α鎖の最初の７４のアミノ酸を含んでいるアミノ終末断片（つまり、６６０−７３３アミノ酸残基）として、代替Ｃ５転化酵素または古典的Ｃ５転化酵素のいずれかによってＣ５のα鎖から切断される。Ｃ５ａの１１ ｋＤａの質量の約２０％は炭水化物に起因する。転換酵素が作用する切断部位は、７３３アミノ酸残基またはこれに直接隣接している。この切断部位に結合しうる、または隣接しうる化合物は、Ｃ５転化酵素の切断部位への接近を遮断して、これによって補体阻害剤として作用する可能性を持ちうる。
【００６９】
Ｃ５は、Ｃ５転化酵素活性以外に方法によっても活性化できる。限定トリプシン消化（Ｍｉｎｔａ ａｎｄ Ｍａｎ，１９７７；Ｗｅｔｓｅｌ ａｎｄ Ｋｏｌｂ，１９８２）と酸処理（Ｙａｍａｍｏｔｏ ａｎｄ Ｇｅｗｕｒｚ，１９７８；Ｖｏｇｔら、１９８９）によってもＣ５を切断して、そして活性Ｃ５ｂを産生できる。
【００７０】
Ｃ５ａはもう１つのアナフィラトキシンである。Ｃ５ｂは、ヘキサメトニウム （Ｃ６）、Ｃ７およびＣ８に結合して、標的細胞の表面においてＣ５ｂ−８複合体を形成する。いくつかのＣ９分子の結合時に、膜攻撃複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ−９、終末補体複合体−ＴＣＣ）が形成される。十分な数のＭＡＣが標的細胞膜に挿入された場合、ＭＡＣが作る開口（ＭＡＣ孔）は標的細胞の迅速な浸透圧溶解を媒介する。より低い、溶菌濃度未満のＭＡＣは、他の効果をもたらすことができる。特に、内皮細胞および血小板内への少数のＣ５ｂ−９複合体の膜挿入は、有害な細胞活性化を起こしうる。一部の場合、活性化は細胞溶解より前に起こりうる。
【００７１】
上記の通り、Ｃ３ａおよびＣ５ａはアナフィラトキシンである。これらの活性化補体成分は、ヒスタミンおよび他の炎症媒介物質を放出するマスト細胞の脱顆粒を引き起こして、結果として平滑筋収縮、血管透過性の上昇、白血球活性化、および超細胞充実性を招く細胞増殖などの他の炎症現象を招く。Ｃ５ａは走化性ペプチドとしても機能して、補体活性化部位に炎症誘発性顆粒球を集める役割を果たす。
【００７２】
ドナー同種抗原に対する補体結合レシピエント抗体は、超急性移植片の拒絶反応の主因と考えられる。移植前の交差適合試験のために、このプロトタイプの体液性拒絶反応は今日では稀にしか認められない（Ｒｅｇｅｌｅら、２００１）。今日、データは体液性免疫の機序が他の種類の同種移植片の拒絶反応の一因となりうることを示している（Ｒｅｇｅｌｅら、２００１）。体液性前感作を示す高濃度のパネル反応性抗体は、腎臓移植片の生存期間の低下に関連していることが判明しており（Ｏｐｅｌｚ，１９９２）、移植後の同種抗体の出現は、移植の転帰不良を予測すると報告されており（Ｊｅａｎｎｅｔら、１９７０；Ｈａｌｌｏｒａｎら、１９９２）、ならびに免疫吸着によるレシピエントＩｇＧの選択的除去は、拒絶反応への体液性免疫機序の寄与を示す一部の拒絶反応発症を回復させた（Ｐｅｒｓｓｏｎら、１９９５；Ｂoｈｍｉｇら、２０００）。移植片内の補体活性化は、抗体媒介性の移植片傷害を示しうる。補体切断産物Ｃ４ｄは、抗体依存性の古典経路の活性化マーカーである。腎臓同種移植片の生検材料における毛細血管Ｃ４ｄ沈着物は、移植の転帰不良に関連していた。
【００７３】
近年、補体活性化が同種移植片レシピエントの感作および同種移植片における組織傷害の発生に大きく寄与することを示す証拠が増加している（Ｐｌａｔｔら、１９９９）。抗体は、古典的補体経路の活性化において最も徹底的に研究されている媒介物質である。臨床的には、同種抗体は補体を活性化することが知られている（Ｂａｌｄｗｉｎら、２００１）。ＨａｌｌｏｒａｎとＣｏｌｌｉｎｓは、腎臓同種移植片の傍尿細管毛細血管におけるＣ４ｄ沈着が循環ドナー特異的抗体の存在に関連する急性体液性拒絶反応の高感度な診断マーカーであることを示している（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９；Ｈａｌｌｏｒａｎ，２００３）。補体阻害（Ｐｒａｔｔら、１９９６；Ｐｒｕｉｔｔら、１９９１ ；Ｆｏｒｂｅｓら、１９７８）または補体欠乏（Ｐｒａｔｔら、２０００；Ｂａｕｒｅｒら、１９９５）を伴う動物においてさらなる裏づけ証拠が認められ、これらは炎症性傷害の大幅な軽減および抗ドナー免疫反応の低下を呈する。ＡＢＭＲにおいては、補体は古典経路によって活性化されて、そして病因における主要な役割を果たすことが示されている（Ｃｏｌｌａｒｄら、１９９７）。異種移植後のＨＡＲまたは急性血管拒絶反応（ＡＶＲ）における補体の役割については十分に立証されているが（Ｐｌａｔｔら、１９９９）、同種移植術後のＡＢＭＲの病因における補体の厳密な機序につてはまだ明らかにされていない。
【００７４】
補体のＣ５成分が切断されて、複数の炎症誘発性作用を伴う産物を形成して、これによって免疫媒介性の炎症反応内で補体阻害の魅力的な標的を示す。上記の通り、Ｃ５ａは強力なアナフィラトキシンおよび走化性因子である。Ｃ５ａによる細胞の活性化は、複数のさらなる炎症性媒介物質の放出を誘発する（Ｊｏｓｅら、１９８３）。補体活性化経路（古典経路、補体活性化第２経路またはマンナン結合レクチン経路）は、最終的には細胞溶解性の膜攻撃複合体Ｃ５ｂ−９の形成を導き（Ｋｉｒｓｃｈｆｕｎｋ，２００１）、これは細胞溶解による直接的な組織傷害および溶解量未満での炎症誘発性細胞活性化の両方を媒介できる（Ｓａａｄｉら、１９９５；Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕら、１９９１）。したがって、Ｃ５ａとＣ５ｂ−９の両方の産生を遮断することが、移植後の補体媒介性の炎症反応の最適な抑制に必要となりうる。同時に、Ｃ５での補体カスケードの抑制はＣ３ｂ産生を妨げず、免疫複合体の可溶化およびクリアランスの他、病原微生物のＣ３ｂ媒介性オプソニン化を保護する（Ｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，１９９３）。
【００７５】
抗Ｃ５ｍＡｂの有益な効果は、自己免疫疾患（Ｋｉｒｓｃｈｆｉｎｋ、２００１）、両心バイパスおよび急性心筋梗塞におけるヒトでの臨床試験の他、心筋再潅流（Ｖａｋｅｖａら、１９９８）、全身性紅斑性狼瘡（Ｗａｎｇら、１９９６）および関節リウマチ（Ｗａｎｇら、１９９５）を含む数例の実験において報告されている。また、抗Ｃ５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の機能的遮断による補体不活化によって、異種移植モデルでのＨＡＲが予防された（Ｋｒｏｓｈｕｓら、１９９５；Ｗａｎｇら、１９９９）。
【００７６】
補体阻害剤の投与による同種移植での拒絶反応を延期させる方法が試験された。公表ＰＣＴ特許出願国際公開公報第９２／１０２０５号には、前感作ラットモデルにおける心臓同種移植の拒絶反応を抑制するシクロスポリンと可溶性補体受容体（ｓＣＲｌ）の併用が開示されている。補体受容体１は、補体Ｃ３ｂおよびＣ４ｂに結合する。可溶型の補体受容体１は自然発生する、または組換えＤＮＡ技術によって作成できる。これらの可溶性補体受容体は、インビトロで補体活性化の結果を抑制する（米国特許第６，０５７，１３１号）。国際公開広報第９２／１０２０５号では、受け取る心臓同種移植片に対して前感作させたラットに、移植の２日前から１０ｍｇ／ｋｇ ／日のシクロスポリンＡの筋肉内投与を開始して、そして移植片の拒絶反応時まで続けた。さらに、移植片の再潅流の直前に可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１）を１５ｍｇ／ｋｇの静脈内ボーラス単回投与した。薬物療法のない対照動物は、平均３．８日で移植片が拒絶反応された。シクロスポリンＡを単剤投与された動物は、平均５７日で移植片を拒絶反応した（これにはばらつきがあり、２匹のラットが２日目および４日目に急に拒絶して、そして３番目のラットが１６６日目に拒絶反応した）。ｓＣＲ１を単剤投与されたラットは、平均４４日目に移植片を拒絶反応した。シクロスポリンＡとｓＣＲ１を併用投与されたラットは、平均１４７日目に移植片を拒絶反応した。慢性シクロスポリンＡおよび単回ボーラスｓＣＲ１の併用では、結果として移植片の拒絶反応までの時間を大幅に延長させる相乗効果が認められた。ＰｒｕｉｔｔとＢｏｌｌｉｎｇｅｒによる過去の試験（１９９１年）では、前感作ラットでの同種移植の同様のモデル動物を使用しており、補体を不活化させるためのｓＣＲ１単剤投与によって移植片の拒絶反応までの時間が延長されることを示している。
【００７７】
Ｓｉｍｓら（米国特許第５，１３５，９１６号）は、移植される臓器および組織の血管内皮を処理するために、補体の阻害剤（例、ＣＤ５９またはＣ５ｂ−９複合体の形成を遮断するＣ７またはＣ９に対する抗体）の使用を示唆している。これによってＣ５ｂ−９によって開始される細胞壊死が阻止されうる。Ｃ５ｂ−９不活化物質を灌流液または保存培地に添加して、インビトロでの保存中に血管内層（ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｉｎｉｎｇ）細胞を補体活性化の進行から保護する。さらに、移植時に開始する補体活性化に起因する細胞溶解および血栓性効果から臓器または組織を防御して、これによって補体媒介性の急性拒絶反応を回避しうる。Ｓｉｍｓら（米国特許第５，５７３，９４０号および米国特許第６，１００，４４３号）は、移植された臓器を拒絶反応から保護するための移植された組織または臓器におけるＣＤ５９の発現方法についても教示している。移植される細胞にトランスフェクトすることでこれを達成できる。
【００７８】
ドナーの同種移植片をレシピエントに適合させるためのドナーとレシピエントをプレスクリーニングする方法と併用される、今日まで開発された数種の薬物によって、同種移植片の平均生存期間が経時的に増加しているが、しかしながら、多くの同種移植片はレシピエントの生存期間中に拒絶反応される。一般的に、先行技術の進歩は、主に、移植片の急性拒絶反応を克服することに向けられてきた。さらに、抗体媒介性の同種移植片の拒絶反応における活性化された終末補体成分の役割は、Ｃ５タンパク質レベルで補体カスケードを特異的に標的とする阻害剤を用いて試験されることはなかった。本明細書に記載の方法および実施例に例示した方法は、同種移植片、特に前感作させたレシピエントの同種移植片の慢性拒絶反応を抑制することによっての同種移植の技術を進歩させる。補体阻害剤の慢性投与との併用での免疫抑制薬の適切な併用を利用することによって、同種移植片の生存を延長させるための新しい方法を示している。
【００７９】
方法と使用
本明細書に開示する方法を利用して、同種移植片の生存を延長させる。一般的に、方法には、１以上の免疫抑制剤との併用での補体活性の阻害剤の投与が含まれる。
【００８０】
適当な補体阻害剤は、当業者には公知である。抗体は、活性化補体の個々の成分に対して作成できる（例えば、Ｃ５ａ、Ｃ７、Ｃ９などに対する抗体）（例、米国特許第６，５３４，０５８号；米国特許出願第２００３／０１２９１８７号；および米国特許第５，６６０，８２５号を参照すること）。ＣＤ５９、ＣＤ５５、ＣＤ４６およびＣ８とＣ９の他の阻害剤を含む、補体媒介性の溶解を抑制するタンパク質が知られている（例、米国特許第６，１００，４４３号を参照すること）。米国特許第６，３５５，２４５号には、Ｃ５に結合して、そしてＣ５ａおよびＣ５ｂへ切断されることを阻止して、これによってＣ５ａの形成のみならずＣ５ｂ−９複合体の形成も阻止する抗体について教示している。補体受容体として知られており、補体に結合するタンパク質も知られている（公表されているＰＣＴ特許出願国際公開広報第９２／１０２０５号および米国特許第６，０５７，１３１号を参照すること）。可溶化型の補体受容体（例、可溶性ＣＲ１）の使用によって、好中球の酸化的破壊、補体媒介性の溶血、ならびにＣ３ａおよびＣ５ａの産生などの補体活性化の結果を抑制できる。当業者であれば、補体および補体の活性化を阻害する上記の既知の方法の全てではないが、その一部を認識する。
【００８１】
適当な免疫抑制剤としては、限定はされないが、ＡＴＧまたはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナール、レフルノミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、リツキサン、抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗ＬＦＡ１モノクローナル抗体、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗ＣＤ２モノクローナル抗体および抗ＣＤ４５が挙げられる。
【００８２】
同種移植片としては、移植された臓器、臓器の一部、組織または細胞を挙げることができる。これらには、限定はされないが、心臓、腎臓、肺、膵臓、肝臓、血管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、膵島、軟骨、肝細胞および造血細胞が挙げられる。
【００８３】
同種移植片の不全の理由の少なくとも一部は、同種移植片のレシピエントによる１つの反応が補体活性化であるということである。これは、結果的に強力な炎症誘発性分子であるＣ５ａおよびＣ５ｂ−９の形成を招き、これらは移植片の不全を起こす際の補助となる。提示している任意の理論に拘束されることを望まないが、Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９の形成を抑制すること、または存在するＣ５ａおよびＣ５ｂ−９を抑制することは、移植片不全を予防する際の補助となりうることを出願者は理論化した。さらに、同種移植片が存在する限りレシピエントは移植片に対する免疫反応を高める試みを続けて、そしてこの反応にはＣ５ａおよびＣ５ｂ−９を産生する試みが含まれうることが理論化された。阻止されない場合、この補体反応は短期的には急性血管拒絶反応を招き、そして長期的には慢性移植片の拒絶反応の一因となりうる。先行技術における補体活性の阻害剤の使用方法は、移植時にのみこれらの阻害剤を投与することに限られる。これは急性拒絶反応の予防に役立つが、本明細書で開示する結果が例示する通り、長期間のこのような阻害剤の投与によって改善された結果が得られる。この長期投与は、急性拒絶反応を予防する際に補助するだけであるのとは対照的に、同種移植片の慢性拒絶反応を予防する際の補助となる。結果的に、補体活性の阻害剤を投与しない、または同種移植片の移植時にのみこのような阻害剤を投与することのいずれかと比較して、同種移植片の生存期間はより長期になる。非常に多くの場合、同種移植片がレシピエントの残りの生存期間にわたり生き残ることが望ましいが、同種移植片が短期間にわたり必要な場合がある（例、レシピエント自身の臓器が、それ自体が回復できるまでの時間を橋渡しするブリッジ臓器（ｂｒｉｄｇｅ ｏｒｇａｎ）であって、この時には同種移植片はもはや必要とされない）。このような移植片が必要とされる時間の長さは変動するが、しかし、通常、急性拒絶反応が起こる時間よりは長く、そして慢性拒絶反応が起こるのに十分長くなりうる。ブリッジ移植片（ｂｒｉｄｇｅ ｇｒａｆｔ）のための所望のこの生存期間は数カ月、例えば、６カ月間でよい。
【００８４】
補体活性の長期抑制によって同種移植片の生存期間が延長されることを証明するために、補体活性化が移植時のみでなく、慢性的に阻害された実験を行なった。慢性治療とは、同種移植片の生存期間まで延長させた期間中での治療を意味する。これは毎日の治療でよいが、しかし、毎日の治療に限定されない。慢性治療では、同種移植片のレシピエントにおいて有効量の薬物が維持されうる。例えば、好ましい方法では、治療に抗Ｃ５モノクローナル抗体エクリズマブを含む。発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を患う人々での試験では、１２〜１４日に１回、９００ｍｇ／患者の用量でエクリズマブが投与された。この投薬では、終末補体活性が完全かつ一貫して遮断されて、そしてＰＮＨの徴候が大幅に抑制されることが見出されている（Ｈｉｌｌｍｅｎら、２００４）。投薬量では、エクリズマブが不活化される、または身体から除去される前の約２週間にわたり、補体の効果を遮断できる。したがって、エクリズマブの慢性投与は、例えば、患者の残りの生存期間にわたり２週間に１回、同種移植片のレシピエントに９００ｍｇの投与でよい。同様に、これが毎日であるのか、もしくは同種移植片のレシピエントにおいて薬物の有効量を維持するために別のスケジュールが必要となるかを問わず、適宜、他の薬物を慢性デリバリーできる。移植片の拒絶反応が、補体活性化のみではなくそれ以上のもの、例えば、Ｔ細胞活性によって起こりうることが周知であるため、移植片の拒絶反応の予防をさらに補助するために、実験にはシクロスポリンなどの免疫抑制剤が含まれた。
【００８５】
補体活性の好ましい抑制方法は、補体Ｃ５に結合して、Ｃ５の切断を阻止するモノクローナル抗体の使用である。これはＣ５ａおよびＣ５ｂ−９いずれの形成も阻止して、同時にレシピエントに有益なＣ３ａおよびＣ３ｂの形成を可能にする。ヒト補体に特異的なこのような抗体が公知である（米国特許第６，３５５，２４５号）。米国特許第６，３５５，２４５号に開示されているこれらの抗体としては、抗体全体または完全長抗体（現在はエクリズマブと名付けられている）および単鎖抗体（現在はペキセリズマブと名付けられている）が挙げられる。マウスＣ５に対する同様の抗体が、ＢＢ５．１と呼ばれている（Ｆｒｅｉら、１９８７）。ＢＢ５．１が下記の実験で使用された。補体活性を抑制する抗体は、モノクローナル抗体である必要はない。それらは、例えば、ポリクローナル抗体でよい。それらはさらに抗体断片でよい。抗体断片としては、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖抗体、ドメイン抗体およびＦｖが挙げられる。さらに、抗体は、ヒト化（Ｊｏｎｅｓら、１９８６）、キメラ化または脱免疫化できることが、当業者には周知である。抗体は変異Ｆｃ部分も含むことができ、このような変異Ｆｃは補体を活性化しない。本開示で使用する抗体は、これらのいずれかでよい。同種移植片のレシピエントがヒトである場合、ヒト化抗体を使用することが好ましい。
【００８６】
投与と製剤
補体活性の阻害剤の投与は、当業者に公知の方法に従って実施される。これらの阻害剤は、好ましくは、同種移植片の移植時前または移植時に投与され、投与を慢性的に持続させる。このような症状が強く発現した場合、拒絶反応発症中にこれらの阻害剤を追加投与できる。
【００８７】
本開示は、薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制剤の使用を提供する。このような薬物または薬物パッケージは、レシピエントにおいて同種移植片の生存を延長させる際、特に、同種移植片の長期生存に有用である。好ましい態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対する慢性投与に適するように製剤化および調製され、例えば、安定製剤が採用される。特定の態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対して補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の同時投与に適するように製剤化および調製される。特定の態様では、薬物または薬物パッケージは、同種移植片のレシピエントに対して補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の連続（いずれかの順番での）投与に適するように製剤化および調製される。
【００８８】
本開示の薬学的パッケージは、補体活性を抑制する薬物と少なくとも１つの免疫抑制剤を含むことができる。薬学的パッケージは、慢性投与のラベルをさらに含むことができる。薬学的パッケージは、患者による自己投与のためのラベルを含むこともでき、例えば、移植した移植片のレシピエントまたは移植片のレシピエントの介護者に対する指示も含むことができる。特定の態様では、薬物と薬学的パッケージ中の薬剤は、慢性投与および／または自己投与に適した製剤または個々の製剤中にある。
【００８９】
本開示は、凍結乾燥製剤および注射に適した製剤も提供する。特定の態様は、補体活性を抑制する抗体および凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む凍結乾燥抗体製剤を提供する。好ましい態様では、抗体製剤は慢性投与に適しており、例えば、抗体製剤は安定である。別の態様は、シリンジから成る注射システムを提供し、シリンジは補体活性を抑制し、注射に適した製剤中にある抗体を含むカートリッジから成る。
【００９０】
好ましくは、本開示の様々な態様で利用される抗体は、終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する。特定の態様では、終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する抗体は抗体全体または抗体断片である。抗体全体または抗体断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片でよい。特定の態様では、抗体全体または抗体断片は補体Ｃ５の切断を抑制しうる。特定の態様では、抗体断片はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体である。好ましい態様では、抗体断片はペキセリズマブである。代わりの好ましい態様では、抗体全体はエクリズマブである。
【００９１】
特定の態様では、補体活性を抑制する抗体などの薬物は、自己投与に特に適した単位剤形中に存在する。同様に、本開示の免疫抑制剤も単位剤形中に存在できる。本開示の製剤化させた製品は、容器内、典型的には、例えば、小瓶、薬包、充填済みシリンジまたは使い捨てペン内に含めることができる。米国特許第６，３０２，８５５号に記載の投薬装置などの投薬器、例えば、本開示の注射システムも使用できる。
【００９２】
特定の態様では、最初４週間は７±２日ごとに２５〜４５分間の静脈内注射により６００ｍｇ、これに続き７±２日ごとに５回量で９００ｍｇ、次にその後１４±２日ごとに９００ｍｇという投薬計画でエクリズマブをデリバリーできる。投与は２５〜４５分間にわたる静脈内注射でよい。エクリズマブは投与前に最終濃度５ｍｇ／ｍｌに希釈できる。
【００９３】
「安定」製剤は、薬物（例、抗体）または薬物中の薬剤が保存時にその物理化学的な安定性および完全性を実質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野において利用可能であり、［Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０： ２９−９０ （１９９３）］においてレビューされている。
安定性は、選択した時間にわたり選択した温度で測定できる。例えば、凍結乾燥および保存後の凝集の程度は、タンパク質の安定性の指標として使用できる。例えば、「安定」製剤は、製剤中の凝集体として約１０％未満、好ましくは約５％未満のタンパク質が存在する製剤でありうる。他の態様では、凍結乾燥製剤の凍結乾燥および保存後の凝集体形成の増加を測定できる。例えば、「安定」凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤を２〜８℃で少なくとも１年間保存した場合に凍結乾燥製剤中の凝集物の増加が約５％未満、好ましくは約３％未満である製剤でありうる。他の態様では、タンパク質製剤の安定性は生物活性アッセイを利用して測定できる。
【００９４】
「再生」製剤は、タンパク質が再生した製剤中に分散されるように、希釈剤中の凍結乾燥タンパク質製剤を溶解させることにより調製されてきた。再生製剤は、対象のタンパク質で治療される患者への投与（例、非経口投与）に適しており、特定の態様では、皮下投与に適した製剤でよい。
【００９５】
等張性の再生製剤が特定の態様において好まれる。「等張性」とは、対象となる製剤の浸透圧がヒトの血液の浸透圧と実質的に同じである。等張性製剤の浸透圧は、一般的に、約２５０〜３５０ ｍＯｓｍである。等張性は、例えば、蒸気圧または氷凍結型の浸透圧計を使用して測定できる。
【００９６】
「凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」は、対象の薬物（例、抗体）と混合した際に、凍結乾燥および保存時の薬物（例、抗体）の化学的および／または物理的な不安定性を予防または軽減させる分子である。例示的な凍結保護剤としては、ショ糖またはトレハロースなどの糖、グルタミン酸ナトリウムまたはヒスチジンなどのアミノ酸、ベタインなどのメチルアミン、硫酸マグネシウムなどの離液性塩、三価以上の糖アルコール（例、グリセリン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール）などのポリオール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓおよびこれらの配合物が挙げられる。好ましい凍結保護剤は、トレハロースやショ糖などの非還元糖である。
【００９７】
凍結乾燥前の製剤に「凍結保護量」の凍結保護剤を添加するが、これは凍結保護量の凍結保護剤の存在下での薬物（例、抗体）の凍結乾燥後、凍結乾燥および保存中に薬物（例、抗体）がその物理化学的な安定性および完全性を実質的に保持することを意味する。
【００９８】
本明細書の対象の「希釈剤」は、薬学的に受容でき（ヒトへの投与において安全かつ毒性がない）、そして再生製剤の調製に有用な希釈剤である。例示的な希釈剤には、滅菌水、静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例、リン酸塩緩衝生理食塩液）、滅菌食塩水、リンガー液またはデキストロース溶液が含まれる。
【００９９】
「保存剤」は、再生製剤中での細菌作用を本質的に低減させるための希釈剤に添加して、これによって、例えば、多用途の再生製剤の産生を促進させる化合物である。潜在的な保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキソメソニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライドの混合物）および塩化ベンゼトニウムが挙げられる。他の種類の保存剤としては、フェノール、ブチルおよびベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチルパラペンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノールおよびｍ−メタクレゾールが挙げられる。
【０１００】
「バルク剤」は凍結乾燥混合物に質量付加して、そして凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物である（例、開放孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケーキの産生を促進させる）。例示的なバルク剤としては、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびソルビトールが挙げられる。
【０１０１】
したがって、安定な凍結乾燥抗体製剤は、凍結保護剤（好ましくはショ糖またはトレハロースなどの糖）を使用して調製できるが、この凍結乾燥製剤を再生させて、凍結乾燥前の製剤における抗体濃度よりも有意に高い（例、約２〜４０倍高く、好ましくは３〜１０倍高く、そして最も好ましくは３〜６倍高い）抗体濃度を有する安定した再生製剤を生成できる。再生製剤におけるこのような高タンパク質濃度は、製剤が皮下投与を意図している場合に特に有用であると考えられる。再生製剤における非常に高いタンパク質濃度にもかかわらず、再生製剤は２〜８℃において少なくとも約３０日間安定でありうる（つまり、有意な、または受容できないレベルのタンパク質の化学的または物理的な不安定性を示さない）。米国特許第６，８２１，５１５号を参照すること。特定の態様では、再生製剤は等張性である。
【０１０２】
保存剤を含む希釈剤（静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）など）で再生する場合、再生製剤は複数使用製剤として使用できる。このような製剤は、例えば、被験体である患者が薬物または抗体および／または慢性症状を治療するための薬剤の頻繁な投与を必要とする場合に有用である。複数使用製剤の利点は、数用量が１本のバイアルに包装されているため、患者への使いやすさを促して、バイアル容量の完全な使用を可能にすることで無駄を減らして、製造業者に大幅なコスト削減をもたらす点である（充填および出荷コストの低減）。
【０１０３】
本開示は、（ａ）抗体と凍結保護剤の混合物を凍結乾燥させること、および（ｂ）再生製剤が等張性であり、安定するように（ａ）段階の凍結乾燥混合物を再生することの段階を含む方法も提供する。
【０１０４】
（ａ）抗体と凍結保護剤の凍結乾燥混合物を含む容器、および（ｂ）再生製剤における望ましい抗体濃度に希釈剤で凍結乾燥混合物を再生するための指示を含む製造品目も本明細書において提供する。製造品目は、希釈剤（例、芳香族アルコールを含む静菌性注射用蒸留水（ＢＷＦＩ））を含む第２の容器をさらに含むことができる。
【０１０５】
本開示の注射システムでは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載する薬物デリバリーペンを使用できる。薬物デリバリーペンは、薬物の自己投与を容易にするために開発された。本開示の薬物は、補体活性を抑制する薬物、例えば補体Ｃ５に特異的な抗体および／または免疫抑制剤でありうる。１つの薬物デリバリーペンには、その中にインシュリンまたは他の薬物のバイアルを入れることのできるバイアルホルダーが含まれる。一般的に、バイアルホルダーは、近位端と遠位端を伴う細長い管状構造物である。バイアルホルダーの遠位端には、両頭針カニューレを引くための取り付け手段が含まれる。近位端には、ドライバーおよび用量設定装置を含むペン体を引くための取り付け手段が含まれる。先行技術のバイアルホルダーと共に使用するバイアルを含む使い捨て投薬には、両頭針カニューレの１端によって貫通できる穴を開けることのできる弾性隔膜を持つ遠位端が含まれる。このバイアルの近位端は、バイアルの円筒状壁を伴う流体密封結合内にスライド可能なように配置された停止装置が含まれる。この薬物デリバリーペンは、薬物バイアルをバイアルホルダーに挿入することによって使用する。次に、ペン体をバイアルホルダーの近位端に接続する。ペン体には、ペンによってデリバリーされる薬物の用量を指定するための用量設定装置、および選択した用量に対応した距離で遠位にバイアルのストッパーを押し進めるためのドライビング装置が含まれる。
【０１０６】
ニードルカニューレの近位点がバイアル上の隔膜に穴を開けるように、ペンの使用者はバイアルホルダーの遠位端に両頭針カニューレを取り付ける。次に、患者は用量を選択して、そしてペンを操作して、選択された用量をデリバリーするためにストッパーを遠位に押し進める。用量選択装置は、選択した用量の注射時にゼロに戻る。次に、患者はニードルカニューレを取り除いて、捨てて、そして次に必要な薬物投与のために便利な場所に先行技術の薬物デリバリーペンを保つ。バイアル内の薬物は、薬物のこのような数回の投与後に使い尽くされる。次に、患者はペン体からバイアルホルダーを分離させる。次に、空バイアルを取り除いて、捨てることができる。新しいバイアルをバイアルホルダーに挿入でき、そして上記で説明する通りにバイアルホルダーとペン体を再び組み立てて使用できる。
【０１０７】
したがって、一般的に、薬物デリバリーペンは正確な投薬と使いやすさのためのドライブ機構を備えている。回転ノブなどの投与機構によって、使用者は包装前の薬物からペンによって注射される薬物の量を正確に調整できる。薬物の用量を注射するために、使用者は皮膚下に針を挿入して、押し下がる限りノブを１回押し下げる。ペンは全体が機械装置でありうる、もしくは使用者に注射される薬物の用量を正確に設定および／または示すために電子回路と併用できる。米国特許第６，１９２，８９１号を参照すること。
【０１０８】
本開示では、薬物の慢性投与および／または自己投与に適した放出制御製剤または徐放製剤を提示している。
【０１０９】
ボーラスとして、もしくは一定期間におよぶ持続注入による静脈投与、筋肉内、腹腔内、脳室内、皮下、関節内、滑液内、くも膜下腔内、経口、局所または吸入経路によって、薬物（例、本開示の抗体および少なくとも１つの免疫抑制剤）による治療を必要とする患者（例、同種移植片のレシピエント）に様々な製剤を投与できる。
【０１１０】
特定の態様では、皮下（つまり、皮膚の下への）投与によって製剤を患者に投与する。このような目的で、注射器を使用して製剤を注射できる。一方では、注射器具（例、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（登録商標）デバイスおよびＧｅｎｊｅｃｔ（登録商標）デバイス）、インジェクターペン（ＧｅｎＰｅｎ（登録商標））、無針器具（例、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（登録商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））および皮下パッチデリバリーシステムなどの製剤投与用の他の装置を利用できる。
【０１１１】
本方法および使用は、以下の実施例を参照して記載しており、実施例は例示として与えられており、決して開示を限定することを意図していない。当技術分野または以下で具体的に記載する技術において周知の標準的技術が利用される。本明細書では以下の略語を使用する：ＡＢＭＲ、抗体媒介性拒絶反応；ＡＣＨＲ、早期体液性拒絶反応；ＡＣＲ、急性細胞拒絶反応；ＡＶＲ、急性血管拒絶反応；ＣｓＡ、シクロスポリン；ＣｙＰ、シクロホスファミド；ＨＡＲ、超急性拒絶反応；ＭＣＰ−Ｉ、単球走化性タンパク質１；ＭＳＴ、平均生存時間；ＰＯＤ、手術後日数。
【実施例】
【０１１２】
実施例１
方法
動物と免疫抑制薬 体重２５〜３０ ｇの雄Ｃ３Ｈ（Ｈ−２）成体マウスおよびＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）をそれぞれドナーおよびレシピエントとして選んだ。免疫抑制を受けている群では、レシピエントはＣｓＡ（０日目からエンドポイント拒絶反応まで、または１００日目まで１５ｍｇ／ｋｇ／日を毎日皮下）、またはＣｙＰ（０日目および１日目に４０ｍｇ／ｋｇ／日を静脈内）、または抗Ｃ５ｍＡｂ（０〜２日目、続いて０〜６０日目に週２回、クローンＢＢ５．１（Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）。４０ｍｇ／ｋｇ／日を腹腔内）を注射した。従来の条件下で動物をＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ ＯｎｔａｒｉｏのＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙに収容して、そしてＣａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅが定めたガイドラインに従って飼育した。（Ｏｌｆｅｒｔら、１９９３）。
【０１１３】
皮膚前感作 Ｃ３Ｈドナーから採取した全層皮膚移植片を１×１ ｃｍ２の正方形の小片に切り、そして同じドナーからの心臓移植の１週前にＢＡＬＢ／ｃレシピエントの胸部の背後部に移植した。拒絶反応は、皮膚移植片の完全な壊死と定義した。
【０１１４】
腹部および子宮頸管への心臓移植 皮膚前感作から７日後にドナー大動脈とレシピエント大動脈およびドナー肺動脈とレシピエント下大静脈を吻合することで前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの腹部にＣ３Ｈマウスの心臓を移植した。再移植群では、ドナー大動脈とレシピエント頚動脈およびドナー肺動脈とレシピエント外頚静脈（端側）を吻合することで、長期生存中の腹部の第１の心臓移植片を持つレシピエントの子宮頸管部に、未感作Ｃ３Ｈマウスまたは長期生存中の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントから採った第２の心臓移植片を移植した。特記ある場合を除き、拒絶反応まで毎日心臓移植片をモニターして、拒絶反応は鼓動の完全な中止と定義した。
【０１１５】
実験群 前感作レシピエントを８群に無作為に割り当てて、各群は８匹の動物から成った：１群、未治療マウス；２群、ＣｓＡ治療マウス；３群、ＣｙＰ治療マウス；４群、ＣｓＡ＋ＣｙＰ治療マウス；５群、抗Ｃ５ｍＡｂ治療マウス；６群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｓＡ治療マウス；７群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｙＰ治療マウス；８群、ＣｓＡ＋ＣｙＰの併用で抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス。心拍動がもはや触知できなくなった、またはＰＯＤ１００に、ルーチンの組織学的解析、免疫組織化学的解析およびウェスタンブロット解析のために移植片を摘出して、フローサイトメトリー解析および補体溶血アッセイのために血清検体を採取した。ＰＯＤ３に、６群および８群（１群、５群、７群ではＭＳＴ）内に追加で５匹の動物を置いて、そして殺して、同一の時間点で比較できるようにした。抗ドナー抗体の濃度および補体活性の連続変化を検出するために、８群においてＰＯＤ１１、２１、２８および６０でも血清検体を採取した。また、３剤併用療法で治療した前感作レシピエントが第１の心臓移植片を受けて１００日目に、第２の心臓を再移植させた。別の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントからの未感作Ｃ３Ｈ心臓または１００日間生存中のＣ３Ｈ心臓を第２の心臓として使用した。各再移植群には８匹の動物が含まれた。
【０１１６】
移植片組織像 組織検体を１０％緩衝ホルムアルデヒトで固定させた。次に、試料をパラフィン包埋して、そしてＨ＆Ｅ染色のために切片にした。拒絶反応の重症度について、病理学者が盲検法によって顕微鏡用切片を調べた。移植片の拒絶反応の基準には、脈管炎、血栓症、出血およびリンパ球浸潤の有無が含まれた。これらの変化を得点化した：０、不変；１、最小変化；２、軽度の変化；３、中程度の変化；または４、顕著な変化。
【０１１７】
免疫組織化学 ゼラチンコーティング済みの顕微鏡用ガラススライド上に乗せたＴｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ Ｏ．Ｃ．Ｔゲル（Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ｓｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）に包埋させた組織検体から４μｍの切片を切り、Ｅｌｉｔｅ Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用した標準的な間接アビジン−ビオチン免疫ペルオキシダーゼ染色法によって染色した。ＣＤ４＋とＣＤ８＋について、それぞれビオチン結合ラット抗マウスＣＤ４ ｍＡｂ（ｃｌｏｎｅ ＹＴＳ １９１．１．２，Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）およびビオチン結合ラット抗マウスＣＤ８ ｍＡｂ（ｃｌｏｎｅ ５３−６．７，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって試料を染色した。ビオチン結合ラット抗マウスＭａｃ−１ｍＡｂ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）染色によって、移植片内への単球／マクロファージ浸潤を検出した。ビオチン結合ヤギ抗マウスＩｇＧおよびヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を使用して、移植片内のマウスＩｇＧおよびＩｇＭの沈着を検出した。補体沈着の同定では、ヤギ抗Ｃ３または抗Ｃ５ポリクローナル抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、そしてＨＲＰ結合ストレプトアビジン（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって切片を連続的にインキュベートさせた。段階間でスライドをリン酸緩衝生理的食塩水で洗って、そして光学顕微鏡下で観察した。一次抗体を除くことで、陰性対照とした。各切片の５つの高倍率視野において免疫染色を点数化して、そして５つの独立した実験を行なった。免疫ペルオキシダーゼ染色の切片は染色強度に従って０から４に採点した：０、陰性；１＋判定不能；２＋、弱染色；３＋、中程度の染色；そして４＋、非常に強い染色。
【０１１８】
フローサイトメトリー ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によってレシピエント血清中の循環抗ドナー特異的ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体を評価した。（Ｇｌｏｔｚら、（１９９３）；Ｔｙａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４））。簡単に説明すると、Ｃ３Ｈマウス脾細胞を単離して、そして未感作の対照群および実験群の血清と３７℃で３０分間インキュベートさせた。全ＩｇＧ、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＭの染色のために、細胞を洗って、マウスＩｇＧのＦｃ部分に特異的なＦＩＴＣ結合ヤギ抗体、またはマウスＩｇＭのμ鎖に特異的なフィコエリスリン結合ヤギ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）、またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ１（ＣＡＬＴＡＧ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）、またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ（ＣＡＬＴＡＧ）またはＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ２ｂ（ＣＡＬＴＡＧ）とインキュベートさせた。４０℃で１時間の染色後、細胞をＰＢＳで洗って、５×１０６／ｍＬに再浮遊させて、そして抗体結合反応性を示す平均チャンネル蛍光強度のフローサイトメトリーによって解析した。
【０１１９】
補体溶血アッセイ 精製抗体Ｃ５ ｍＡｂをＧＶＢ２＋緩衝液（ゼラチン緩衝生理食塩水：０．１％ゼラチン、１４１ ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１５ ｍＭ ＣａＣｌ２および１．８ ｍＭナトリウムバルビタール）で２倍希釈（１７５−０．１μｇ／ｍｌ）して、そして９６ウェルプレートに３通り添加した（５０μｌ／ウェル）。ＢＡＬＢ／ｃマウス血清をＧＶＢ２＋緩衝液で４０％（ｖ／ｖ）に希釈させて、各ウェルのＢＡＬＢ／ｃマウス血清の最終濃度が２０％になるように９６ウェルプレートの列に添加した。次に、ニワトリ赤血球を調製する間に、プレートを室温で約３０分間インキュベートさせた。チキン赤血球を１ ｍｌのＧＶＢ２＋緩衝液で５回洗って、ＧＶＢ２＋中で最終濃度５×１０７／ｍｌに再浮遊させた。抗トリＲＢＣポリクローナル抗体（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｈｏｐｅｗｅｌｌ，ＮＪ，０．１％ ｖ／ｖ）を添加することで４ ｍｌのニワトリ赤血球を感作させて、そして頻繁にボルテックスしながら４℃で１５分間細胞をインキュベートさせた。次に、細胞を１ ｍｌのＧＶＢ２＋で２回洗って、最終容量２．４ ｍｌのＧＶＢ２＋中に再浮遊させた。上記の通り、血清および抗Ｃ５ ｍＡｂを含むプレートにニワトリ赤血球を添加して（３０μｌ／ウェル；２．５×１０６細胞）、十分に混合させて、３７℃で３０分間インキュベートさせた。次に、プレートを２分間１０００×ｇで遠心分離させて、そして８５μｌの上精を新しい９６ウェルマイクロタイタプレートに移した。マイクロプレートリーダーを使用して、ＯＤ ４１５ ｎｍでプレートを読み、そして以下の化学式を用いて溶血反応のパーセンテージを決定した：
【０１２０】
【化１】
先に調製した３０ μｇ／ｍｌのニワトリ赤血球に、０．１％ ＮＰ−４０を含む１００μｌのＧＶＢ２＋を添加することよって得られた１００％溶解対照。
【０１２１】
ウェスタンブロット解析 ＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。中で、４℃で１分間、１０秒間隔で凍結心臓検体の超音波処理を行い、続いて４℃で１０分間、１３，０００ ｒｐｍの極小遠心分離にかけた。Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を使用して、清浄化させた上精のタンパク質含量を迅速に３回定量した。心臓溶解物をＮｕＰＡＧＥ４〜１２％勾配Ｂｉｓ−ＴｒｉｓゲルおよびＭＥＳ緩衝系において分離させて（１０μｇタンパク質／ウェル）、セミドライトランスファー装置（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を使用してポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）メンブレン（孔サイズ０．４５μｍ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にトランスファーさせた。各ブロットが試験抗体と内部対照抗体に暴露されるように、メンブレンを正確な分子量の位置で適切に切り、ブロットごとに２つの異なる一次抗体でのブロットの展開を可能にして、検体の等しい添加量を保証した。抗Ｂｃｌ−２（Ｎ−１９）ウサギポリクローナル血清（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。および抗ＢｃｌＸＳ（Ｂｃｌ−ＸＳ）／Ｌ（Ｍ−１２５）ウサギポリクローナル血清（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。を含む試験一次抗体を使用して、移植片内でのＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の発現を検出した。抗カルセケストリンウサギポリクローナル血清（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を内部対照の一次抗体として使用した（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９）。先述の通り（Ａｒｐら、１９９６）、洗ったインキュベート済みブロットをホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ポリクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ分画に暴露させることで、一次抗体の結合を検出して、ＨＲＰ結合抗体（Ｒｏｃｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の化学発光を高めるための暴露によって適切に現像した。
【０１２２】
統計解析
平均値±ＳＤでデータを報告した。ランクログテストを利用して、同種移植片の生存期間を実験群間で比較された。マンホイットニーＵ 検定を利用して、組織学的所見および免疫組織学的所見を解析した。Ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡを利用して、フローサイトメトリーのデータおよびウェスタンブロットのデータを解析した。ｐ値が０．０５未満の差を有意と見なした。
【０１２３】
実施例２
Ｃ３Ｈドナー皮膚移植片での前感作によって、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの心臓同種移植片に抗体媒介性のＡＣＨＲを誘発される。
【０１２４】
臨床での前感作患者を模倣した適当な小型動物モデルを作成して、ＡＢＭＲを試験するために、マウスレシピエントの前感作によって新しい完全ＭＨＣ不適合マウスＡＢＭＲモデルを作成した。このモデルでは、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントは心臓移植の１週間目に同じドナーからのＣ３Ｈドナー皮膚移植片で前感作させた。ドナー皮膚の前感作から７日目、ＩｇＭ抗体ではなく、抗ドナーＩｇＧの血清濃度が顕著に高まり、そして前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおけるピーク濃度に達した（図１Ａ）。次に、これらの高度に感作させたレシピエントにおいて同じドナーからの心臓を移植した。免疫抑制なしで、Ｃ３Ｈ心臓移植片はＡＣＨＲによって３．１±０．４日内に迅速に拒絶されて、重度の血栓症、出血および梗塞を特徴とした（図１Ｂ−ａ）。対照的に、非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおける同じ心臓移植片（平均生存期間、８．２±０．８日のＭＳＴ）は、手術後（ＰＯＤ）３日目に正常な組織像を示している（図１Ｂｂ）。同日の非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントと比較した場合、前感作動物における心臓移植片では、多量のＩｇＧ抗体および補体（Ｃ３およびＣ５）の沈着が明らかになったが、しかしＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞浸潤は最小限であった（表１）。さらに、前感作レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＧ濃度は、ＰＯＤ３に心臓移植片を受けた同じ非感作レシピエントでの濃度よりも有意により高かった（Ｐ＜０．０１、図１Ｃ）。しかし、抗ドナーＩｇＭは、血液循環（図１Ｃ）および心臓移植片のいずれにおいても非常に低い濃度のままであり（表１）、非感作レシピエントと前感作レシピエントとの間で有意差は認められなかった。また、治療なしの前感作心臓レシピエントおよび非感作心臓レシピエントのいずれでも補体溶血活性が示された（図１Ｄ）。これらのデータは、これが、補体が病因において重要な役割を果たす前感作レシピエントにおいてＡＢＭＲを試験するための理想的な移植モデルであることを示す。
【０１２５】
（表１）
ＰＯＤ３での非感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントおよび前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおけるＣ３Ｈ心臓同種移植片の免疫組織学的変化の比較
【０１２６】
【表１】
免疫ペルオキシダーゼ染色の採点：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強。ＣｓＡおよびＣｙＰと併用での抗Ｃ５ ｍＡｂによってＡＢＭＲが予防されて、そして前感作マウスレシピエントでの心臓同種移植片の生存期間が無期限になる。
【０１２７】
補体がＡＢＭＲにおいて重要な役割を果たすことが示された。しかし、高度に感作させたレシピエントにおいてＣ５濃度で終末補体カスケードを機能的に遮断することの抑制効果は不明である。本明細書で示す試験では、前感作モデルを使用して、ＡＢＭＲの予防における抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤またはＣｓＡおよび／またはＣｙＰと併用した抗Ｃ５ ｍＡｂの有効性を試験した。図２Ａに示す通り、ＣｓＡまたはＣｙＰもしくは２つの薬物の併用による治療によってＡＢＭＲは予防されず、移植片はそれぞれ３．０±０．０日間、３．３±０．５日間、そして３．５±０．６日間で拒絶され、未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおける心臓移植片とは識別できない静脈内血栓症および組織内出血（図２Ｂ−ｂ、ｃ、ｄ）を含むＡＣＨＲの典型的な病理学的特徴を伴った（図２Ｂ−ａ）。抗Ｃ５単剤療法またはＣｙＰとの併用によって、移植片の生存期間を改善させることはできず、心臓移植片はそれぞれ３．５±０．６日間、そして３．２±０．４日間でＡＣＨＲ（図２Ｂ−ｅ，ｆ）によって拒絶された（図２Ａ）。非感作動物において心臓同種移植片の長期生存期間を誘発できるプロトコルである抗Ｃ５ ｍＡｂとＣｓＡの併用療法によって、この前感作モデルにおける移植片の生存期間がわずかに延長されたが、心臓移植片は１１．９±１．８日間で脈管炎、血栓症、出血、最小限の細胞浸潤（図２Ｂ−ｇ）を伴う重度の体液性拒絶反応によって同様に拒絶された（図２Ａ）。対照的に、ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂの３剤併用療法では、前感作動物において心臓移植片の生存期間が１００日間を超えて無期限となり（Ｐ＜０．０１、未治療動物、もしくは単剤療法または２つの薬物で併用療法された動物に対して）（図２Ａ）、拒絶反応の徴候も認められなかった（図２Ｂ−ｈ）。表２に示す通り、この前感作マウスモデルでは、３日以内に心臓移植片を拒絶したレシピエントにおいて移植片内へのＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞のわずかな浸潤のみが認められた。しかし、拒絶反応の時点（ＰＯＤ１１）での抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＣｓＡ治療レシピエントにおいて、移植片の生存期間の初期段階（例、ＰＯＤ１１）に３剤併用療法によって治療したレシピエントで心臓移植片がより長く生存した場合、これらのＴ細胞の個数はわずかに増加していた。さらに、３剤併用療法群におけるＣｓＡ連続治療では、ＰＯＤ６０およびＰＯＤ１００に長期生存中の心臓移植片において、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の浸潤が抑制された。また、ＣｓＡ、ＣｙＰまたはＣｓＡ＋ＣｙＰ治療動物において、移植片内に単球とマクロファージを含むＭａｃ−１細胞の中程度の浸潤が認められ、これらの細胞の浸潤は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療動物において有意に減少した（表２）。これらの結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂを機能的に遮断することで従来の免疫抑制剤の使用と有効性に可能性を与えて、これによって前感作レシピエントにおいてＡＢＭＲを予防して、そして心臓移植片の生存期間を無期限とする。
【０１２８】
（表２）
剖検時の前感作マウスレシピエントにおける心臓同種移植片の免疫ペルオキシダーゼ染色の採点
【０１２９】
【表２】
採点：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強
心臓同種移植を受けた前感作レシピエントにおいて、抗Ｃ５ ｍＡｂによって補体の全溶血活性および局所的なＣ５沈着が完全に抑制された。
【０１３０】
抗Ｃ５ ｍＡｂによって補体タンパク質Ｃ５の炎症誘発性分子Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９への切断が遮断されて（Ｋｘｏｓｈｕｓら、１９９５）、そして完全かつ一貫してマウスにおける終末補体活性が遮断されることが過去に示されている（Ｗａｎｇら、１９９９）。現在の試験では、抗体によって前感作されたニワトリ赤血球をレシピエントマウス血清が溶解させる能力を評価することによって、終末補体活性を測定して、そして同じ時間点（ＰＯＤ３）で比較した。ＣｓＡまたはＣｙＰのいずれか、もしくは２つの薬物の併用によるマウスの治療では、終末補体活性に及ぼす効果は認められず、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤またはＣｓＡおよび／またはＣｙＰの併用による治療によってこの活性は完全に抑制された（図３；Ｐ＜０．０１、対ＣｓＡ、ＣｙＰまたはＣｓＡ＋ＣｙＰで治療した動物の他、未感作動物および未治療動物）。また、より早いいくつかの時間点で抗Ｃ５ ｍＡｂ治療した動物から得られた血清では、同様に溶血活性が低下しており、治療期間を通じて血清終末補体が抑制されることを示唆している。さらに、心臓移植片における局所的なＣ５沈着は、抗Ｃ５ ｍＡｂで治療された前感作レシピエントにおいて完全に阻止されたが、未治療、またはＣｓＡ、ＣｙＰおよびＣｓＡ＋ＣｙＰで治療された前感作動物においては阻止されなかった（表２）。予測された通り、抗Ｃ５ ｍＡｂでの治療によって移植片内のＣ３沈着は阻止されなかった（表２）。これらの結果は、抗Ｃ５治療によって、高度に感作されたレシピエントにおける心臓同種移植後の全補体活性が完全に遮断されることを示唆している。
【０１３１】
前感作動物における長期生存中の心臓移植片は、低濃度の抗ドナー抗体および補体の存在下（適応状態）における液性免疫に耐性である。
【０１３２】
体液性拒絶反応における抗Ｃ５ ｍＡｂの役割をさらに研究するために、免疫染色技術を利用したフローサイトメトリーおよび移植片内の抗体沈着によって、異なる群におけるレシピエント血清中の抗ドナー同種抗体濃度を測定した。図４Ａは、ＰＯＤ３に未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて循環抗ドナーＩｇＧ抗体の濃度が高いことを示している。単剤療法または２つの薬物の併用（ＣｓＡおよび／またはＣｙＰ）を受けている前感作レシピエントでは循環抗ドナーＩｇＧ濃度が部分的に下方制御されており、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤もしくはＣｓＡまたはＣｙＰとの併用での治療によって同日に抗ドナー抗体の濃度に及ぼすさらなる影響はなかった。対照的に、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＣｙＰの３剤併用療法によって、高濃度の循環抗ドナーＩｇＧが徐々に下方制御されて、ＰＯＤ６０には低濃度に達して、その後１００日目までこの濃度のままであった（図４Ｂ）。異なる治療群における循環抗体の濃度と同様に、抗マウスＩｇＧの強い沈着が、未治療である、もしくは単剤療法または２つの薬剤の併用療法を受けた前作動物の急速に拒絶された心臓移植片に存在することを表２は示している。興味深いことに、３剤併用療法によって、ＰＯＤ １００にはＩｇＧ抗体沈着が長期生存中の心臓移植片の軽度のレベルにまで次第に減弱された（図４Ｃ−ａ、表２）。このモデルでは、ＩｇＭは、治療の有無にかかわらず、前感作血レシピエントの循環中（図４Ａ、Ｂ）または移植した心臓移植片（図４Ｃ−ｂ、表２）のいずれかにおいての非常に低い濃度のままであった。また、抗Ｃ５ ｍＡｂによる治療によって、６０日目までに補体活性が検出できないレベルにまで除去され、その後、３剤併用療法を受けている前感作マウスレシピエントにおける抗Ｃ５治療の中断後、ＰＯＤ１００には枯渇前濃度に漸進的に回復した（図４Ｄ）。さらに、移植片内Ｃ５沈着が１００日間生存中の前感作動物においても検出された（表２）。これらのデータは、抗移植片抗体および補体活性化の存在にもかかわらず、３剤併用療法での治療を受けた前感作レシピエントにおいて継続的な移植適応が発生することを実証している。
【０１３３】
ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂによって、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ比が低下して、そして適応させた移植片を伴うレシピエントにおけるＩｇＧ２ｂへのＩｇＧサブクラスシフトが引き起こされた。
【０１３４】
抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によって、適応に関連しうるＩｇＧサブクラスシフトが誘発されるか否かを判定するために、未治療レシピエントと適応させた心臓移植片を伴うレシピエントとで、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの抗ドナーＩｇＧサブクラスの血清濃度を比較した。未治療レシピエントからの血清には、高比率のＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａによって示される、主なＩｇＧ１アイソタイプが含まれた（図５Ａ）。対照的に、適応させた移植片を有するレシピエントにおいてＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａ比率の有意な低下が認められた（図５Ａ、Ｐ＜０．０１）。さらに、適応させた心臓移植片を伴う前感作レシピエントは、拒絶移植片を伴う同じレシピエントと比較して、抗ドナーＩｇＧ２ｂの濃度上昇を示した（図５Ｂ、Ｐ＜０．０１）。また、単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けたレシピエントのＩｇＧアイソタイプのパターンは、未治療動物のパターンと区別できない。これらのデータは、抗ドナーＩｇＧ１アイソタイプが、移植片の拒絶反応に関連する可能性があり、抗ドナーＩｇＧ２ｂサブクラスの産生が保護抗体として作用して、適応の誘発において重要な役割を果たす可能性を示している。
【０１３５】
ＣｓＡとＣｙＰを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂは、高度に感作させたマウスレシピエントにおいて移植片内Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌの発現を誘発させた。
【０１３６】
このモデルにおいて保護タンパク質の移植片内発現と液性免疫に対する移植片の耐性との間に因果関係が存在するか否かを判定するために、ウェスタンブロット解析を利用して、高度に感作させたマウスレシピエントからの心臓移植片組織内において対象のタンパク質を検出した。長期生存中の心臓移植片においてＰＯＤ１００に高濃度のＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質が発現していることが見出されており、そして抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法を受けた高度に感作させたレシピエントにおける心臓移植から１２日目の早期にこれらのタンパク質は検出された。対照的に、未治療動物（図６）または単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた動物の心臓移植片においてＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の発現は認められなかった。この結果は、無期限に生存する動物における液性免疫に対する移植片の耐性が、この前感作モデルにおけるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質がもたらす保護に関連していることを示唆している。
【０１３７】
適応中の第１の心臓移植片を伴う前感作レシピエントは、適応させた第２の心臓移植片を受容するが、同じドナーからの第２の未処理の心臓移植片は拒絶する。
【０１３８】
拒絶反応に対する適応させた移植片の耐性能については、未感作移植片が同種移植術後に拒絶反応を受ける病態生理学的条件下では直接試験されたことがない。このモデルでは、適応中の第１の心臓移植片を伴う前感作レシピエントが第２の適応させた移植片を受容するが、しかし、第２の未感作移植片は拒絶するか否かを判定するために、再移植シナリオを実施した。抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法で治療した適応させた前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて、低濃度の同種抗体が検出され（図４Ｂ）、補体活性が治療前のレベルまで戻った（図４Ｄ）１００日点まで適応させたＣ３Ｈ心臓移植片が生存後、これらのレシピエントは第２の心臓移植片を受けた。具体的には、別の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントからの未感作Ｃ３Ｈ心臓（図７Ａ）または１００日間適応させたＣ３Ｈ心臓（図７Ｂ）のいずれかを適応中の第１のＣ３Ｈ心臓を有する前感作レシピエントの頸部に移植した。これらのレシピエントは、重度のＡＶＲを伴い６．６±１．１日目に第２の未処理の心臓を拒絶したが（図８Ａ）、第１の心臓は生存し続けた。対照的に、異なる前感作マウスにおいて既に１００日間生存していた適応させた心臓を第２の移植片として使用した場合、これらの移植片は、適応中の第１の心臓移植片を有する前感作レシピエントによって受容された。２回目の移植から９０日後、これらの適応させた第２の心臓移植片において拒絶反応の徴候は認められなかった（図８−ｂ）。これらのデータは、適応させた移植片が、これらの前感作レシピエントにおいて同種移植片の拒絶反応を通常媒介する抗ドナー抗体および補体の効果に対して耐性であることを示している。さらに、適応させた移植片の宿主が新しい移植片を拒絶したという事実は、適応には移植片に対する変化が伴うことを示唆している。
【０１３９】
ＣｓＡで治療中の前感作レシピエントは、適応させた心臓移植片を拒絶する。
【０１４０】
この前感作モデルにおける適応が移植片および／またはレシピエントの変化によって起こされたのか否かを判定するために、別の再移植を実施した。具体的には、前感作ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＣ３Ｈ心臓移植片を１００日間の適応させた後、次に適応させた心臓移植片を、ＣｓＡ単剤で治療した第２の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントに再移植させ（図７Ｃ）、この治療では細胞性拒絶反応を予防できるが、しかし前感作レシピエントにおける新しいＣ３Ｈ心臓の早期体液性拒絶反応を予防できない。適応させたＣ３Ｈ心臓移植片は、ＣｓＡ治療した前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて迅速に拒絶された。再移植後、適応させた心臓移植片の病理像は、正常（図９Ａ）から重度のＡＣＨＲに変化しており、多量の組織内出血を伴ったが、細胞の浸潤はほとんど認められなかった（図９Ｂ）。また、適応させたＣ３Ｈ心臓を受けたこれらのレシピエントにおける高濃度の抗ドナーＩｇＧおよび正常レベルの補体溶血活性は、未感作Ｃ３Ｈ心臓を受けるＣｓＡ治療済み前感作レシピエントでの濃度と類似していた。この結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によって誘発された適応が、移植片だけでなく、レシピエントに対する変化も含む機序に起因しうることをさらに示している。
【０１４１】
実施例３
心臓移植モデルにおける急性血管拒絶反応
終末補体の形成の阻害剤を含めることで急性血管拒絶反応が減弱されるか否か、そして免疫抑制剤とこのような阻害剤の併用によって同種移植片の長期生存期間が達成されるか否かを判定するために実験を行なった。この一連の実験では、抗Ｃ５モノクローナル抗体がシクロスポリンと併用された。使用したモデルは、Ｃ３ＨマウスからＢＡＬＢ／ｃマウスへの同種移植片の異所性心臓移植であった。このモデルは、強くＭＨＣ不適合であるＣ３ＨおよびＢＡＬＢ ／ｃマウスの厳密な急性血管拒絶モデルである。Ｗａｎｇら（２００３）が記載している通りに、移植と他の方法を実施した。
【０１４２】
異所性心臓移植 Ｗａｎｇら（２００３）が記載している通りに、腹腔内異所性心臓移植を実施した。簡単に説明すると、ドナーに胸骨正中切開術を施して、そして上大静脈と肺静脈を結紮させて、分離させる前に、下大静脈と大動脈を通して１．０ ｍｌの冷ヘパリン化リンガー乳酸液によりｉｎ ｓｉｔｕで心臓移植片を徐々に潅流させた。上行大動脈と肺動脈を切断して、そして移植片をドナーから摘出した。ドナーの大動脈とレシピエントの腹部大動脈の他、ドナーの肺動脈とレシピエントの下大静脈の間を、１１−０ナイロン縫合糸を使用した端側吻合によって移植片に血管移植させた。直接の腹部触診法によって、移植した心臓の鼓動を毎日モニターした。鼓動の程度を点数化した：Ａ、強い鼓動；Ｂ、鼓動の強さの顕著な低下；またはＣ、心拍動の完全な停止。心拍動がもはや触知できない場合、ルーチンの組織学的分析のために移植片を摘出した。特定の例では、組織学的分析のために、まだ機能している移植片を犠牲にした。
【０１４３】
結果
マウス（体重２５〜３０ｇの８〜１２週齢の雄マウス）を６つの実験群（各群マウス６〜８匹）に分けた。０日目に移植を実施した。エンドポイント（移植片不全であるエンドポイント）で組織学的変化を調べて、もしくは一部の場合に移植片不全前にマウスを殺した。過去の試験から、 投与したＢＢ５．１の用量（週３回４０ｍｇ／ｋｇ体重）によって終末補体活性が完全に抑制されることが知られていた。
【０１４４】
１’群（対照） −１、０、１、２日目にマウスに０．７５ ｍｌの生理食塩水を腹腔内投与した。その後、エンドポイントまで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）０．７５ ｍｌの生理食塩水をこれらのマウスに腹腔内投与した。
【０１４５】
２’群（シクロスポリンＡ単剤） ０日目（移植日）から開始して、エンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡをマウスに皮下投与した。
【０１４６】
３’群（抗補体抗体単剤） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１（Ｆｒｅｉら、１９８７）をマウスに腹腔内投与し、続いてエンドポイントまで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与した。
【０１４７】
４’群（移植後１４日目までの抗補体抗体＋シクロスポリンＡ） −１日目から１４日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重のＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに静脈内投与して、０日目から開始してエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。この群は、ＢＢ５．１が毎日静脈内投与された点で、他の群とは異なることに注意すること。
【０１４８】
５’群（移植後２８日目までの抗補体抗体＋シクロスポリンＡ） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに腹腔内投与し、続いて２８日目まで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与し、０日目から開始してエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。
【０１４９】
６’群（移植後１００日目までの抗補体抗体の慢性投与＋シクロスポリンＡ） −１、０、１、２日目に４０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣ５抗体ＢＢ５．１をマウスに腹腔内投与し、続いて１００日目まで週３回（月曜日、水曜日、金曜日）４０ｍｇ／ｋｇ体重を投与し、０日目から開始して１００日目まで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重のシクロスポリンＡも投与した。
【０１５０】
この実験の結果を表３および表４に示している。表３には移植片の生存期間を示している。表４には組織像の採点を示している。
【０１５１】
（表３）
同種移植片の生存期間
【０１５２】
【表３】
（表４）
剖検での心臓同種移植片の組織学的変化スコアの中央値
【０１５３】
【表４】
スコアの中央値：０、正常；１、最小限の変化；２、軽度の変化；３、中程度の変更；４、顕著な変化。Ｎ／Ａ−該当なし
＊ Ｖａｓｃ−脈管炎；Ｉｎｆａｒ−梗塞；Ｌｙｍｐｈ−リンパ球浸潤；Ｔｈｒｏｍ−血栓症；Ｈｅｍｏ−出血；フィブリン−フィブリン沈着；ＰＭＮ−多形核細胞浸潤物。
【０１５４】
結果は、免疫抑制剤に加えて補体阻害薬を使うことの相乗効果を示している。未治療マウスでは、移植片は約８日間で拒絶された。免疫抑制剤シクロスポリンＡ単剤の毎日の慢性使用は、移植から約１５日間まで移植片の生存期間を延ばした。終末補体の形成を抑制するための抗Ｃ５抗体ＢＢ５．１の使用は、それ自体には影響を及ぼさず、対照群において移植片の拒絶反応が移植から８日目に起った（１’群）。移植後２８日目までのシクロスポリンＡとＢＢ５．１の併用では相乗効果が認められ、移植片の生存期間が約８０日目まで延長した。より驚くべき結果は、ＢＢ５．１とシクロスポリンＡが移植後に慢性投与された５’群での結果である。この場合、移植片の生存期間は１００日間以上であった（現在入手可能な限りのデータ）。さらに、表４に示した組織学的結果では、ＢＢ５．１とシクロスポリンＡの両剤の投与がＢＢ５．１またはシクロスポリンＡ単剤よりもずっと良く移植片を変化から保護し、そしてＢＢ５．１とシクロスポリンＡの慢性投与では、移植後１００日目でさえ移植心臓において組織学的変化が認められない程度にまで移植片を保護することが示されている。これらのモデルでの生存期間１００日間が判断基準と見なされる。モデルでの生存期間１００日間は、同種移植片の生存期間が無期限であると考えられる。２８日目にＢＢ５．１投与を止めた際、移植片は保護されたが、しかし、それらは移植片不全が起こった時点である約８０日目までに最小限から軽度の組織学的変化を確実に示し始めた。
【０１５５】
静脈投与によってＢＢ５．１を毎日投与された点で、４’群のマウスは異なる治療を受けた。これらの動物は発病して、体重減少および尿貯留を呈し、そして機能は低下していたが、移植心臓がまだ鼓動していた時に殺した。これは、試験されたマウスの第１群であり、そしてこれらの病的影響がなぜ認められたのかは不明である。ＢＢ５．１を週３回のスケジュールで腹腔内投与した場合、これらの病的影響は認められなかった。以下の実施例４で見られる通り、腹腔内経路を介したＢＢ５．１の連日投与は病的影響を起こさなかった。また、静脈内投与はこれらの動物において必ずしも病気の原因ではなかった。ＰＮＨの試験（Ｈｉｌｌｍｅｎら、２００４）では、病的影響なしにエクリズマブの静脈内投与（ヒトＣ５に結合する点でＢＢ５．１に対するヒトの同等の抗体）に成功している。補体阻害剤は、静脈内および腹腔内に加えて、他の経路によって投与でき、これらの全ての経路は当業者には周知である。
【０１５６】
実施例４
前感作心臓移植モデルにおける早期拒絶反応
実施例３の実験と類似の第２組の実験を行なったが、しかし、レシピエントマウスはドナー臓器に前感作させていた。これらの実験において、皮膚移植片の事前の移植によって前感作を起こさせた。一般的に、前感作は、以前に同種移植片を受け取ったことの結果としてのみでなく、頻回輸血または妊娠していた女性においても生じうる。このような前感作の方法の他、このような攻撃を阻止する措置を取らない場合、ＡＢＯ抗原に対して先に形成された抗体のために、ＡＢＯ不適合の同種移植片は迅速に攻撃されて拒絶される。
【０１５７】
これらの試験における一部のマウスに対して、ＢＢ５．１および／またはシクロスポリンＡに加えて、シクロホスファミドを投与した。これらの実験では、（Ｐｒｕｉｔｔ ａｎｄ Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ，１９９１の方法を利用して）ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスは心臓移植の１週間前に同じドナーからのＣ３Ｈ皮膚移植片で前感作させていた。このモデルは、特に早期体液性拒絶反応に関連して、ヒトにおける前感作移植を模倣するようにデザインする。レシピエントマウスを各６〜８匹のマウスの８群に分けた。治療を以下のように継続した。
【０１５８】
１’’群（対照）
マウス（体重２５〜３０ ｇの８〜１２週齢の雄マウス）に−１日目から開始してエンドポイント（移植片の拒絶反応）まで０．７５ ｍｌの生理食塩水を腹腔内投与した。
【０１５９】
２’’群（シクロスポリンＡ単剤）
マウスに０日目（移植日）から開始してエンドポイントまで１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下投与した。
【０１６０】
３’’群（ＢＢ５．１単剤）
マウスに−１日目（移植日）から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量の抗マウス補体モノクローナル抗体ＢＢ５．１を腹腔内投与した。
【０１６１】
４’’群（シクロホスファミド単剤）
マウスに０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内投与した。
【０１６２】
５’’群（ＢＢ５．１＋シクロスポリンＡ）
マウスに−１日目から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目からエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下に追加投与した。
【０１６３】
６’’群（ＢＢ５．１＋シクロホスファミド）
マウスに−１日目から開始してエンドポイントまで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。
【０１６４】
７’’群（シクロスポリンＡ＋シクロホスファミド）
マウスに０日目からエンドポイントまで毎日１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。
【０１６５】
８’’群（ＢＢ５．１＋シクロスポリンＡ＋シクロホスファミド）
マウスに−１日目から１００日目まで継続して毎日４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のＢＢ５．１を腹腔内投与した。これらのマウスには０日目から１００日目まで１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロスポリンＡを皮下に追加投与した。これらのマウスには０日目および１日目の各日に４０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドを静脈内に追加投与した。この群内の２匹のマウスを組織学的研究のために６０日目に殺し（拒絶反応はまだ起っていなかった）、残りの４匹のマウスは１００日目まで依然として移植片を拒絶しなかった。
【０１６６】
さらに、１’’群では、前感作させていないが、生理食塩水治療のみを受けたマウスの対照群を試験した。
【０１６７】
これらの実験の結果を表５と表６に示している。表５には移植片の生存期間を記載しており、表６には組織学的結果をまとめている。
【０１６８】
表５
同種移植片の生存
【０１６９】
【表５】
＊Ｐ＜０．０１ １’’群 対 前感作なし
＊＊Ｐ＜０．０１ ５’’群 対 １’’〜４’’群および６’’〜７’’群
＊＊＊Ｐ＜０．０１ ８’’群 対 １’’〜７’’群。
【０１７０】
表６
剖検時の心臓同種移植片の組織学的変化スコアの中央値
【０１７１】
【表６】
スコアの中央値：０、正常；１、最小変化；２、軽度の変化；３、中程度の変更；４、顕著な変化。Ｎ／Ａ−該当なし
＊Ｖａｓｃ−脈管炎；Ｉｎｆａｒ−梗塞；Ｌｙｍｐｈ−リンパ球浸潤；Ｔｈｒｏｍ−血栓症；Ｈｅｍｏ−出血；フィブリン−フィブリン沈着；ＰＭＮ−多形核細胞浸潤物。
【０１７２】
表５には、実施例３で使用した前感作マウスモデルと前感作させていないマウスモデルとの違いを示している。結果は、前感作がない場合には、薬物療法がない限り移植片は約８日間で拒絶されることを示している。動物を前感作させることで拒絶反応がより迅速に起り、薬物療法がない場合には前感作動物において移植片の拒絶が約３日以内に認められる。ＢＢ５．１、シクロスポリンＡまたはシクロホスファミドのいずれかによる治療が移植片の生存期間に及ぼす影響は認められず、これらの各群の動物において移植片は約３〜４日以内に拒絶された。ＢＢ５．１とシクロスポリンＡの併用は一定の効果を示し、拒絶反応が１２日目前後に起った。ＢＢ５．１とシクロホスファミドの併用には保護作用は認められず、拒絶反応が３日目前後に起った。同様に、シクロスポリンＡとシクロホスファミドの併用では実質的な保護作用は認められず、拒絶反応が３〜４日目に起った。非常に驚くべきことに、３つ全ての薬物の併用（ＢＢ５．１とシクロスポリンプラスの慢性投与＋移植時のシクロホスファミド）では高い相乗効果が認められ、全てのマウスが１００日間以上におよび生存した。ここでも、このモデルでの１００日間の生存期間が判断基準と見なされて、無期限の生存期間が想定される。
【０１７３】
表６に示した組織学的結果の他、これらの結果は、前感作マウスの治療における補体阻害剤およびシクロスポリンＡなどの免疫抑制剤による慢性治療の併用が、早期拒絶反応をある程度軽減させることを示している。移植時および移植後１日目にシクロホスファミドによるこれらの動物の追加治療によって、生存期間がずっと長くなり、少なくとも１００日目までは拒絶反応が認められなかった。
【０１７４】
実施例５
Ｃ３Ｈ腎臓同種移植片は前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいてＡＢＭＲのため壊死する。
高度に前感作させた患者における腎臓同種移植術の臨床状況を厳密に模倣した特徴を有する新規マウスＡＢＭＲモデルを作成した。レシピエントＢＡＬＢ／ｃマウスを完全同種Ｃ３Ｈドナー皮膚移植片で前感作させた。前感作後、循環抗ドナーＩｇＧ濃度が著しく上昇して、皮膚移植後７日目にピーク濃度に達した（図１０Ａ）。この時、同じドナー株（Ｃ３Ｈ）からの腎臓同種移植片を前感作レシピエントに移植した；これらの移植片は８．５±１．３日で全ての動物において迅速に拒絶された（図１１Ａ）。拒絶された移植片としては、１）腎糸球体および腎尿細管壊死の他、脈管炎、間質内の出血と浮腫（図１０Ｂ−ａ）、２）ＩｇＧ（図１０Ｂ−ｃ）、Ｃ３（図１０Ｂ−ｅ）およびＣ５（図１０Ｂ−ｇ）の広範な移植片内沈着、３）移植後の同日に評価された前感作されていないレシピエントにおいて認められる濃度と比較して有意に高い循環抗ドナーＩｇＧ濃度（ｐ＜０．０１；図１０Ｃ）、４）正常レベルの補体活性（図１０Ｄ）、ならびに５）単球やマクロファージを含む多数のＭａｃ−１細胞の移植片内浸潤（図１０Ｂ−ｉ）を含む早期体液性拒絶反応と一致する組織学的特徴が挙げられる。対照的に、前感作させていないＢＡＬＢ／ｃマウスは、５５．２± ５．６日間でＣ３Ｈ腎臓移植片を拒絶して、そしてＰＯＤ８に移植片の正常な組織像（図１０Ｂ−ｂ）を示し、検出可能なＩｇＧ沈着は認められず（図１０Ｂ−ｄ）、Ｍａｃ−１細胞の浸潤はほとんど認められず（図１０Ｂ−ｊ）、そしてＣ３（図１０Ｂ−ｆ）と（図１０Ｂ−ｈ）の軽度の沈着のみが認められた。ドナー皮膚での前感作によって、循環抗ドナーＩｇＭ濃度（図１０Ｃ）または血清補体活性（図１０Ｄ）が上昇するようには見えなかった。これらのデータは、この新規の腎臓同種移植片モデルが、高度に前感作させたレシピエントでの抗体媒介性の腎臓同種移植片の拒絶反応における補体の潜在的役割を研究するための優れた手段を提供することを示唆している。ＣｓＡとＬＦの併用での抗Ｃ５ ｍＡｂはＡＢＭＲを予防して、そして前感作マウスレシピエントにおける腎臓同種移植片の生存期間を無期限とする。
【０１７５】
このモデルの作成中に実施された初期実験では、腎臓移植片の生存を延長させる際のＣｓＡとシクロホスファミド（ＣｙＰ）の免疫抑制作用が評価された。一方で、ＣｙＰ治療は深刻な腎毒性に関連しており、さらなる評価を妨げた（データ未提示）。ＬＦでの短期治療は腎毒性に関連しておらず、そしてさらなるモデリングでは実験的な免疫抑制計画の一部としてこの薬剤を使用した。
【０１７６】
単剤またはＣｓＡと併用した抗Ｃ５ ｍＡｂおよび短期間のＬＦ治療によって、腎臓同種移植片を受けた前感作マウスレシピエントにおいてＡＢＭＲを予防できるか否かを評価した。図１１Ａに示される通り、ＣｓＡまたはＬＦの単剤療法、または２つの薬物の併用療法を受けた前感作レシピエントの移植片は、それぞれ９．３±２．５日間、６．０±１．０日間、そして１１．７±２．１日間で拒絶された。また、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤療法、もしくはＣｓＡまたはＬＦと抗Ｃ５ ｍＡｂの併用によって移植片の生存期間を改善させることはできず、拒絶反応がそれぞれ７．０±１．０日間、７．０±１．０日間、そして８．３±３．２日間で起った（図１１Ａ）。これらの拒絶された腎臓移植片は、抗体媒介性の体液性拒絶反応の典型的な病理学的特徴も発現しており（データ未提示）、拒絶反応のパターンは、未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントにおいて認められるパターンと実質的に同じであった（図１０Ｂ−ａ）。対照的に、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよび短期ＬＦ治療から成る３剤併用療法によって移植片の拒絶反応が効果的に予防されて、そして前感作動物において腎臓同種移植片の生存期間が１００日間を超えて無期限になった（図１１Ａ）。さらに、正常範囲内の血清クレアチニン濃度によって示される通り、長期生存中の腎臓移植片は正常な腎臓機能を示した（図１１Ｂ；ｐ＜０．０１、対未治療マウスまたはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けたマウス）。３剤併用療法によって治療された前感作レシピエントにおけるＰＯＤ１００での腎臓同種移植片の組織像は正常であり（図１１Ｃ−ａ）、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋またはＭａｃ−１＋細胞の浸潤は検出できなかった（図１１Ｃ −ｂ、ｃ、ｄ）。また、多数のＭａｃ−１＋細胞の移植片内浸潤が未治療動物およびＣｓＡ、ＬＦまたはＣｓＡ＋ＬＦ治療動物において認められ、これらの細胞の浸潤は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療動物において有意に減少した（表７）。これらの結果は、ＣｓＡおよび短期間のＬＦを併用した抗Ｃ５ ｍＡｂを機能的に遮断することによる治療によって、高度に前感作させたレシピエントにおいてＡＢＭＲが予防されて、腎臓同種移植片の生存期間を無期限にすることができることを示している。
【０１７７】
抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって、腎臓同種移植片を受けた前感作レシピエントにおいて終末補体活性および局所的なＣ５沈着が完全に抑制される。
【０１７８】
このモデルにおける抗Ｃ５ ｍＡｂ治療の全身的および局所的な有効性を判定するために、同じ時間点（ＰＯＤ７）の異なる治療群のマウスにおいてインビトロでの血清溶血アッセイによる測定によって補体活性を評価した。ＣｓＡまたはＬＦ、もしくは２つの薬物の併用によるマウスの治療では、終末補体活性に及ぼす抑制作用は認められず、抗Ｃ５ ｍＡｂ単剤もしくはＣｓＡおよび／またはＬＦとの併用による治療によって血清補体活性は完全に抑制された（ｐ＜０．０１、未感作マウス、未治療の前感作マウスまたはＣｓＡ、ＬＦまたはＣｓＡ＋ＬＦ治療動物）（図１２）。ＰＯＤ６０での治療中止後、ＰＯＤ１００までに補体溶血活性が正常濃度に回復した（表１２）。さらに、局所的な（移植片内の）Ｃ５沈着は抗Ｃ５ ｍＡｂ治療を受けた前感作レシピエントにおいて完全に予防されたが、無治療またはＣｓＡ、ＬＦおよびＣｓＡ＋ＬＦ治療を受けた前感作動物においては顕著であった（表７）。予測された通り、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって移植片内Ｃ３沈着は阻止されなかった（表７）。これらの結果は、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療によって終末補体活性が完全に遮断されるが、しかし、前感作レシピエントにおける同種腎移植後の初期補体成分が維持されることを示している。
【０１７９】
長期生存中の腎臓移植片は、適応によって前感作レシピエントにおける液性免疫に抵抗性を示す。
【０１８０】
これらの腎臓移植片の長期生存期間が適応の発生に関連しているか否かを調べるために、拒絶反応の時点での異なる治療群のマウスにおける循環抗ドナー抗体の濃度、血清補体活性および移植片内抗体および補体沈着を測定した。未治療の前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントが高濃度の循環抗ドナーＩｇＧ抗体を産生し（図１３Ａ）、これらはＣｓＡまたはＬＦの単剤または併用での治療時に部分的に減少した。ＣｓＡまたはＬＦのいずれの単剤療法に抗Ｃ５を加えても抗ドナー抗体の濃度がさらに減弱することはなかった。抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＬＦの３剤併用療法では、循環抗ドナーＩｇＧ濃度は顕著に抑制されて、そしてＰＯＤ１００では依然として低いままであった（＊ｐ＜０．０１、対未治療の前感作動物もしくは単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた動物）。しかし、この低い抗体濃度は、未感作動物での抗体濃度よりも依然として高かった（＊＊ｐ＜０．０５、対３剤併用療法で治療した前感作動物）。循環抗ドナー抗体の濃度に及ぼす治療効果と矛盾なく、未治療の前感作レシピエント、もしくはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用のいずれかを受けているレシピエントにおいて顕著な移植片内ＩｇＧ沈着が認められた（表７）。興味深いことに、ＰＯＤ１００では、３剤併用療法によって治療された動物からの長期生存中の腎臓移植片も軽度のＩｇＧ沈着を示した（図１１Ｃ−ｅ、表７）。さらに、軽度から中程度のＣ３およびＣ５の沈着が、前感作動物の１００日間生存中の腎臓移植片において検出された（図１１Ｃ−ｆ、ｇ、表７）。血液循環中（図１３Ａ）または移植された腎臓移植片（表７）中の抗ドナーＩｇＭ濃度は、治療にかかわらず全ての前感作レシピエントにおいて依然として低いままであった。まとめると、これらのデータは、実証可能な移植片内のＩｇＧおよび補体の沈着の存在にも関わらず、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法によってＡＢＭＲが予防されることを示しており、移植片の長期生存期間が適応過程を通じて達成されることを示唆している。
【０１８１】
適応させた腎臓移植片を有する長期生存中の前感作レシピエントにおけるＩｇＧ２ｂへのＩｇＧサブクラスシフト
抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法がＩｇＧサブクラスシフトに関連するか否かを判定するために、未治療の前感作レシピエントおよび適応させた腎臓移植片を有するレシピエントにおいて、抗ドナーＩｇＧサブクラスの血清濃度間で比較を行なった。未治療の前感作レシピエントからの血清には、主にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ３抗ドナー抗体が含まれていた（図１３Ｂ）。ＣｓＡ、ＬＦ、または２つの薬物の併用で治療された前感作レシピエントにおいて同じパターンが認められた（データ未提示）。対照的に、適応させた移植片を有する前感作レシピエントにおいて（ＰＯＤ１００）、主な抗ドナーＩｇＧサブクラスはＩｇＧ２ｂであった（図１３Ｂ、ｐ＜０．０１）。これらのデータは、抗ドナーＩｇＧ２ｂ抗体の産生が移植片の適応誘導に関連しうることを示唆する。
【０１８２】
保護タンパク質Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌは、適応させた腎臓移植片で発現する。
【０１８３】
低濃度の同種抗体および補体に対する適応させた移植片の耐性は、過去に異種移植モデルでの適応させた移植片の血管内において上方制御されていることが報告されているＢｃｌ−ｘｌやＢｃｌ−２などの保護タンパク質の移植片内での発現に関連している可能性があると仮定されている（Ｂａｃｈら、１９９７）。これらのタンパク質の発現は、抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法を受けている前感作レシピエントにおいて評価した。抗Ｃ５ ｍＡｂベースの３剤併用療法で治療した前感作レシピエントからの適応させた腎臓移植片はＰＯＤ１００に高濃度のＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質を発現していた（図１４）。対照的に、これらのタンパク質の発現は、未治療の前感作動物（図１４）、もしくはＣｓＡまたはＬＦの単剤療法または２つの薬物の併用療法を受けた前感作動物の拒絶された腎臓移植片においては検出できなかった（データ未提示）。これらの結果は、これらの前感作動物における液性免疫に対する適応させた移植片の耐性がＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質によってもたらされる保護に関連しうることを示唆している。
【０１８４】
表７
剖検時の前感作マウスレシピエントにおける腎臓同種移植片の免疫ペルオキシダーゼ染色＊
【０１８５】
【表７】
＊拒絶反応の時点または移植後のＰＯＤ１００（３剤併用療法群について）に移植片を回収した。染色強度は以下の通り点数化した：０、陰性；１＋、判定不能 ；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、強。
【０１８６】
実施例６ 実施例５の方法
動物 体重２５〜３０ ｇの雄の成体Ｃ３Ｈ（Ｈ−２ｋ）マウスおよびＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２ｄ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）をそれぞれドナーおよびレシピエントとして選んだ。Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ ＯｎｔａｒｉｏのＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて従来の条件下で動物を収容させて、そしてＣａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅが定めたガイドラインに従って飼育した。
【０１８７】
皮膚前感作 Ｃ３Ｈドナーから採取した全層皮膚移植片を１×１ ｃｍ２の小片に切り、そしてＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスの背部に移植した。拒絶反応は皮膚移植片の完全な壊死と定義した。
【０１８８】
同所性腎移植 皮膚前感作から７日後、１１−０ナイロン縫合糸を使用してドナーとレシピエントの大動脈およびドナー腎静脈とレシピエントの下大静脈に吻合させることによって前感作ＢＡＬＢ／ｃレシピエントの腹部にＣ３Ｈマウス腎臓を移植させた。また、１０−０縫合糸を使用してドナー尿管をレシピエント膀胱に縫合された。移植直後に固有腎を摘出した。宿主に死を招く移植片の拒絶反応を腎臓移植での拒絶反応のエンドポイントとして利用した。
【０１８９】
実験群 前感作レシピエントを各５匹の動物から成る８群に無作為に割り当てた：１群、未治療マウス；２群、ＣｓＡ治療マウス（１５ｍｇ／ｋｇ ／日、皮下、０日目から試験エンドポイントまで毎日（移植片の拒絶反応または手術後日数（ＰＯＤ）１００）；３群、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス（クローンＢＢ５．１、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、４０ｍｇ／ｋｇ ／日、腹腔内、毎日、０〜１４日目、その後、６０日目まで週２回）；４群、ＬＦ１５−０１９５治療マウス（ＬＦ、２ｍｇ／ｋｇ ／日、皮下、０〜１４日目）；５群、抗Ｃ５ ｍＡｂ治療マウス；６群、抗Ｃ５ ｍＡｂ＋ＬＦ治療マウス；７群、ＣｓＡ＋ＬＦ治療マウス；８群、抗Ｃ５ ｍＡｂ、ＣｓＡおよびＬＦから成る３剤併用療法治療を受けたマウス。拒絶反応の時点で、ルーチンの組織学的研究、免疫組織化学的研究およびウェスタンブロット分析のために腎臓移植片を摘出して、そして抗ドナー抗体の濃度および補体活性の評価のために血清抗体を採取した。
【０１９０】
血清中クレアチニンの測定 腎移植後、試験エンドポイント（拒絶反応またはＰＯＤ１００の時点）で血清検体を得た。ヤッフェ反応の速度修飾（ｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（Ｊｕｎｇｅら、２００４）によってクレアチニンを測定するＳｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の手順を利用して、１０μＬ検体中で血清中クレアチニン濃度を定量した。
【０１９１】
移植片組織像 剖検時に、組織検体をヘマトキシリン＆エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色法（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，ＪＩ ２００３）で処理して、そして脈管炎、血栓症、出血およびリンパ球浸潤を評価した。変化を以下の通りに採点した：０、なし；１、最小限；２、軽度；３、中程度または４、正常組織と比較して顕著。
【０１９２】
免疫組織化学 Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ｏ．Ｃ．Ｔ）ゲル（Ｓｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ、トランス （Ｔｏｒｒａｎｃｅ）、ＣＡ）包埋した組織検体を切片にして、そしてＥｌｉｔｅ Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用してＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびとＭａｃ−１＋浸潤細胞、ならびにＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｃ３およびＣ５沈着を染色した。一次ビオチン化抗体として、抗ＣＤ４（ＹＴＳ １９１．１．２，Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｈｏｍｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）、抗ＣＤ８（５３− ６．７，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）および抗Ｍａｃ−１（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）が挙げられる。ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧとヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を使用して移植片内のＩｇＧおよびＩｇＭの沈着を検出した。ヤギ抗マウスＣ３または抗マウスＣ５ポリクローナル抗体（Ｑｕｉｄｅｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およびＨＲＰ結合ストレプトアビジン（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）による連続インキュベーション後に補体沈着を検出した。一次抗体を除くことによって陰性対照とした。動物５匹／実験群からの組織検体を使用して、各切片の５つの高倍率視野内で免疫染色を点数化した。免疫反応性が以下の通り染色強度に従って０から４＋で採点した：０、陰性；１＋、判定不能；２＋、弱；３＋、中程度；４＋、非常に強度の染色。
【０１９３】
フローサイトメトリー フローサイトメトリーによってレシピエント血清中の循環抗ドナー特異的ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体を評価した。簡単に説明すると、Ｃ３Ｈマウス脾細胞が単離して、そして様々な治療群からのマウスから指定された時間点で得た血清検体と３７℃で３０分間インキュベートさせた。全ＩｇＧまたは特異的抗体サブクラスを染色するために、マウスＩｇＧ、マウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂまたはマウスＩｇＧ３（全てＣＡＬＴＡＧ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）のＦｃ部分に特異的なＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウス抗体またはマウスＩｇＭ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）に特異的なフィコエリスリン結合ヤギ抗体と、洗った細胞を４℃で１時間インキュベートさせて、洗い、ＦＡＣＳｃａｎ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で分析した（Ｃｏｌｌｉｎｓら、１９９９；Ｐｒａｔｔら、１９９６）。結果は、検体中の各抗ドナーアイソタイプの濃度の測定値として、平均チャンネル蛍光強度で表している。
【０１９４】
補体溶血アッセイ レシピエントマウスの血清における終末補体活性を標準的方法によって測定して、過去に記載された通りに（Ｗａｎｇら、１９９９）、赤血球特異的抗体で前感作させたニワトリ赤血球に対する血清の溶解能を評価した。
【０１９５】
ウェスタンブロット解析 凍結腎臓検体を超音波分解させて、電気泳動で分離させてそしてポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）メンブレンにトランスファーさせた。Ｂｃｌ−２とＢｃｌ−Ｘｓ／Ｌの移植片内発現をそれぞれポリクローナル血清Ｎ−１９とＭ−１２５を使用して検出した（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）。。ポリクローナル抗カルセケストリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）は、検体添加対照として使用した（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９）。ホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧによって抗体結合が検出され、そして化学発光（Ｒｏｃｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が高められた（Ａｒｐら、１９９６）。
【０１９６】
統計解析 平均値±標準偏差（ＳＤ）でデータを報告する。ログランクテストを利用して、同種移植片の生存期間を実験群間で比較した。ランク（ｏｎ ｒａｎｋ）ＡＮＯＶＡを利用して組織学的所見と免疫組織学的所見を解析した。一元配置ＡＮＯＶＡを利用してフローサイトメトリーとウェスタンブロットのデータを解析した。ｐ値の差が０．０５未満を有意と見なした。
【０１９７】
本開示の方法および組成物は、様々な態様の形で組み込むことができ、その少数のみを本明細書で開示していることが理解される。他の態様が存在し、そして開示の精神から逸脱しないことは当業者には明らかであろう。従って、記載している態様は例示であり、そして限定的であると解釈してはならない。
【０１９８】
参考文献のリスト
開示の背景を明らかにするために本明細書で使用する出版物および他の資料、特に、実行に関する追加の詳細を提供する事例は、本明細書において全体として参照により組み入れられ、そして便宜のための、著者および日付により参照され、以下の参考文献のリストにおいてそれぞれグループ分けしている。
【０１９９】
【化２】
【０２００】
【化３】
【０２０１】
【化４】
【０２０２】
【化５】
本明細書で引用されたすべての参考文献の内容は、全体として参照により組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【０２０３】
【図１−１】図１Ａ−１Ｂには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する非感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１−２】図１Ｃ−１Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する非感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図２Ａ】図２Ａには、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰを使用した３剤併用療法と、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体およびＣｓＡを使用した併用療法との比較を示している。図２Ａでは、異なる治療下での様々なレシピエントにおける心臓同種移植片の生存期間を比較している。
【図２Ｂ】図２Ｂには、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰを使用した３剤併用療法と、前感作させた同種移植レシピエントにおける抗Ｃ５抗体およびＣｓＡを使用した併用療法との比較を示している。図２Ｂには、例えば、異なる群のレシピエントでの心同種移植におけるリンパ球浸潤の組織像および免疫組織像を示している。
【図３】図３には、免疫抑制剤と比較した、抗Ｃ５抗体によって遮断された終末補体活性を示している。
【図４−１】図４Ａ−４Ｂでは、抗Ｃ５抗体での単剤療法、抗Ｃ５抗体およびＣｓＡでの併用療法、ならびに抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰでの併用療法下での前感作レシピエントにおける抗ドナー抗体の濃度を比較している。
【図４−２】図４Ｃ−４Ｄでは、抗Ｃ５抗体での単剤療法、抗Ｃ５抗体およびＣｓＡでの併用療法、ならびに抗Ｃ５抗体、ＣｓＡおよびＣｙＰでの併用療法下での前感作レシピエントにおける抗ドナー抗体の濃度を比較している。
【図５】図５には、未治療であった、または異なる治療下にあった同種移植レシピエントにおけるＩｇＧアイソタイプの比率の変化を示している。
【図６】図６には、未治療動物の心臓移植片と比較した、長期生存中の心臓移植片におけるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘｌタンパク質の高レベル発現を示している。
【図７】図７Ａ−７Ｃには、初回移植レシピエントからの適応させた移植片の２回目の移植（再移植）での改善を示している。
【図８】図８Ａ−８Ｂには、再移植実験での結果を示している。
【図９】図９Ａ−９Ｂには、再移植実験での結果を示している。
【図１０−１】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１０−２】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１０−３】図１０Ａ−１０Ｄには、異なる治療下での、前感作させたレシピエントに対する未感作レシピエントの抗体濃度を示している。
【図１１−１】図１１Ａ−１１Ｂには、ＣｓＡと抗体Ｃ５ ｍＡｂとの併用を示しており、ＬＦによって前感作マウスにおける腎臓移植片の生存期間が無期限になる。
【図１１−２】図１１Ｃには、ＣｓＡと抗体Ｃ５ ｍＡｂとの併用を示しており、ＬＦによって前感作マウスにおける腎臓移植片の生存期間が無期限になる。
【図１２】図１２には、前感作ＢＡＬＢ／ｃマウス血清において補体の溶血活性が完全に抑制されることを示している。
【図１３】図１３Ａ−１３Ｂには、未治療であった、または異なる治療下にあった同種移植レシピエントにおけるＩｇＧアイソタイプの比率の変化を示している。
【図１４】図１４には、前感作レシピエントの長期生存腎臓移植片における防御タンパク質の発現を示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含む方法であって、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される方法。
【請求項２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記同種移植片がＭＨＣ不適合である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体断片がペキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）である、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体全体がエクリズマブ（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）である、請求項８記載の方法。
【請求項１４】
前記エクリズマブが慢性投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
２以上の免疫抑制薬が投与される、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項２９】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３０】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３１】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３２】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３５】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３８】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項４０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項１記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項１記載の方法。
【請求項４４】
レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、該哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法。
【請求項４５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項５６】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項５７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項５９】
２以上の免疫抑制薬が投与される、請求項４４記載の方法。
【請求項６０】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６１】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６２】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６３】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項６２記載の方法。
【請求項６４】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６５】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６６】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６７】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項６８】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項６９】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７０】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７２】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７５】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７８】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７９】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項８０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項７９記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項４４記載の方法。
【請求項８３】
哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用。
【請求項８４】
２以上の免疫抑制薬が前記薬物または薬物パッケージに含まれる、請求項８３記載の使用。
【請求項８５】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８６】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８７】
前記補体活性を抑制する薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８８】
前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８９】
レシピエント哺乳動物での同種移植片の生存を延長させる方法であって、該方法が該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される、方法。
【請求項９０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項８９記載の方法。
【請求項９１】
前記同種移植片がＭＨＣ不適合である、請求項８９記載の方法。
【請求項９２】
前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である、請求項９１記載の方法。
【請求項９３】
前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である、請求項８９記載の方法。
【請求項９４】
前記同種移植片がｉ）心臓、ｉｉ）腎臓、ｉｉｉ）肺、ｉｖ）膵臓、ｖ）肝臓、ｖｉ）血管組織、ｖｉｉ）眼、ｖｉｉｉ）角膜、ｉｘ）水晶体、ｘ）皮膚、ｘｉ）骨髄、ｘｉｉ）筋肉、ｘｉｉｉ）結合組織、ｘｉｖ）胃腸組織、ｘｖ）神経組織、ｘｖｉ）骨、ｘｖｉｉ）幹細胞、ｘｖｉｉｉ）島、ｘｉｘ）軟骨、ｘｘ）肝細胞およびｘｘｉ）造血細胞からなる群より選択される、請求項８９記載の方法。
【請求項９５】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項８９記載の方法。
【請求項９６】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項９７記載の方法。
【請求項９９】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項９７記載の方法。
【請求項１００】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項９７記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項９７記載の方法。
【請求項１０２】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項９７記載の方法。
【請求項１０３】
前記エクリズマブが慢性投与される、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０４】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０５】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項８９記載の方法。
【請求項１０６】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項１０８】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇおよびブレディニンからなる群より選択される薬物をさらに含む、請求項８９記載の方法。
【請求項１０９】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項８９記載の方法。
【請求項１１０】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項１０９記載の方法。
【請求項１１１】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１２】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１３】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１４】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１５】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１６】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１７】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１８】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１９】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２０】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２１】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２２】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２５】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２６】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項８９記載の方法。
【請求項１２７】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項１２６記載の方法。
【請求項１２８】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項１２６記載の方法。
【請求項１２９】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項８９記載の方法。
【請求項１３０】
レシピエント哺乳動物での同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対するａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、該哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法。
【請求項１３１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３２】
前記同種移植片がｉ）心臓、ｉｉ）腎臓、ｉｉｉ）肺、ｉｖ）膵臓、ｖ）肝臓、ｖｉ）血管組織、ｖｉｉ）眼、ｖｉｉｉ）角膜、ｉｘ）水晶体、ｘ）皮膚、ｘｉ）骨髄、ｘｉｉ）筋肉、ｘｉｉｉ）結合組織、ｘｉｖ）胃腸組織、ｘｖ）神経組織、ｘｖｉ）骨、ｘｖｉｉ）幹細胞、ｘｖｉｉｉ）島、ｘｉｘ）軟骨、ｘｘ）肝細胞およびｘｘｉ）造血細胞からなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３３】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３４】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３５】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項１３４記載の方法。
【請求項１３６】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３７】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３８】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３９】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項１３５記載の方法。
【請求項１４０】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項１３５記載の方法。
【請求項１４１】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１４０記載の方法。
【請求項１４２】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４３】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４４】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４５】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇおよびブレディニンからなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４６】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４７】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項１４６記載の方法。
【請求項１４８】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４９】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１５０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１５１】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５２】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５３】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５４】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５５】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５８】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５９】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６０】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６１】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６２】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６３】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６４】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項１６３記載の方法。
【請求項１６５】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項１６３記載の方法。
【請求項１６６】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項１３０記載の方法。
【請求項１６７】
哺乳動物での同種移植片の生存期間を延ばすための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用であって、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む使用。
【請求項１６８】
２以上の免疫抑制薬が薬物または薬物パッケージに含まれる、請求項１６７記載の使用。
【請求項１６９】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７０】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７１】
前記補体活性を抑制する薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７２】
前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７３】
補体活性を抑制する薬物および少なくとも１つの免疫抑制薬を含む薬学的パッケージであって、該補体活性を抑制する薬物および該免疫抑制薬が慢性投与用に製剤化されており、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む薬学的パッケージ。
【請求項１７４】
前記補体活性を抑制する薬物が抗体および凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む凍結乾燥製剤中の抗体である、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７５】
前記免疫抑制薬が前記免疫抑制薬および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中にある、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７６】
前記薬物および前記免疫抑制薬が該薬物、該免疫抑制薬および凍結保護剤を含む同じ凍結乾燥製剤中にある、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７７】
前記補体活性を抑制する薬物がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７８】
前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該免疫抑制薬を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７９】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあり、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物および該免疫抑制薬を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８０】
前記補体活性を抑制する薬物が単位投薬形態で存在する、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８１】
前記免疫抑制薬が単位投薬形態で存在する、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８２】
前記抗体が終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８３】
前記抗体が抗体全体または抗体断片である、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８４】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８５】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８６】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８７】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８８】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１】
レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含む方法であって、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される方法。
【請求項２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記同種移植片がＭＨＣ不適合である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体断片がペキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）である、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体全体がエクリズマブ（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）である、請求項８記載の方法。
【請求項１４】
前記エクリズマブが慢性投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
２以上の免疫抑制薬が投与される、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項２９】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３０】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３１】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３２】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項２記載の方法。
【請求項３３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３５】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３８】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項６記載の方法。
【請求項４０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項１記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項１記載の方法。
【請求項４４】
レシピエント哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、該哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法。
【請求項４５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項５６】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項５７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項４４記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇ、ＬＦ１５−０１９５およびブレディニンからなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項５９】
２以上の免疫抑制薬が投与される、請求項４４記載の方法。
【請求項６０】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）シクロスポリンＡを投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６１】
ｉ）補体活性を抑制する薬物およびｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６２】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６３】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項６２記載の方法。
【請求項６４】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６５】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６６】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項４４記載の方法。
【請求項６７】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項６８】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項６９】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７０】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項４５記載の方法。
【請求項７２】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７５】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７８】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項７９】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項８０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項７９記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項４４記載の方法。
【請求項８３】
哺乳動物での腎臓同種移植片の生存を延長させるための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用。
【請求項８４】
２以上の免疫抑制薬が前記薬物または薬物パッケージに含まれる、請求項８３記載の使用。
【請求項８５】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８６】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８７】
前記補体活性を抑制する薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８８】
前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項８３記載の使用。
【請求項８９】
レシピエント哺乳動物での同種移植片の生存を延長させる方法であって、該方法が該哺乳動物に対してａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択される、方法。
【請求項９０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項８９記載の方法。
【請求項９１】
前記同種移植片がＭＨＣ不適合である、請求項８９記載の方法。
【請求項９２】
前記ＭＨＣ不適合同種移植片がＨＬＡ不適合同種移植片である、請求項９１記載の方法。
【請求項９３】
前記レシピエントが前記同種移植片に対してＡＢＯ不適合である、請求項８９記載の方法。
【請求項９４】
前記同種移植片がｉ）心臓、ｉｉ）腎臓、ｉｉｉ）肺、ｉｖ）膵臓、ｖ）肝臓、ｖｉ）血管組織、ｖｉｉ）眼、ｖｉｉｉ）角膜、ｉｘ）水晶体、ｘ）皮膚、ｘｉ）骨髄、ｘｉｉ）筋肉、ｘｉｉｉ）結合組織、ｘｉｖ）胃腸組織、ｘｖ）神経組織、ｘｖｉ）骨、ｘｖｉｉ）幹細胞、ｘｖｉｉｉ）島、ｘｉｘ）軟骨、ｘｘ）肝細胞およびｘｘｉ）造血細胞からなる群より選択される、請求項８９記載の方法。
【請求項９５】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項８９記載の方法。
【請求項９６】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項９７記載の方法。
【請求項９９】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項９７記載の方法。
【請求項１００】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項９７記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項９７記載の方法。
【請求項１０２】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項９７記載の方法。
【請求項１０３】
前記エクリズマブが慢性投与される、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０４】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１０２記載の方法。
【請求項１０５】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項８９記載の方法。
【請求項１０６】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項８９記載の方法。
【請求項１０８】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇおよびブレディニンからなる群より選択される薬物をさらに含む、請求項８９記載の方法。
【請求項１０９】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項８９記載の方法。
【請求項１１０】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項１０９記載の方法。
【請求項１１１】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１２】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１３】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項８９記載の方法。
【請求項１１４】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１５】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１６】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１７】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１８】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項９０記載の方法。
【請求項１１９】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２０】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２１】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２２】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２３】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２４】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２５】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項９５記載の方法。
【請求項１２６】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項８９記載の方法。
【請求項１２７】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項１２６記載の方法。
【請求項１２８】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項１２６記載の方法。
【請求項１２９】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項８９記載の方法。
【請求項１３０】
レシピエント哺乳動物での同種移植片の生存を延長させる方法であって、該哺乳動物に対するａ）補体活性を抑制する薬物を投与すること、およびｂ）少なくとも１つの免疫抑制治療を施すことを含み、該治療がｉ）ＬＦ１５−０１９５を含む少なくとも１つの免疫抑制薬またはｉｉ）免疫調節治療から選択され、該哺乳動物が該同種移植片に対して前感作される、方法。
【請求項１３１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３２】
前記同種移植片がｉ）心臓、ｉｉ）腎臓、ｉｉｉ）肺、ｉｖ）膵臓、ｖ）肝臓、ｖｉ）血管組織、ｖｉｉ）眼、ｖｉｉｉ）角膜、ｉｘ）水晶体、ｘ）皮膚、ｘｉ）骨髄、ｘｉｉ）筋肉、ｘｉｉｉ）結合組織、ｘｉｖ）胃腸組織、ｘｖ）神経組織、ｘｖｉ）骨、ｘｖｉｉ）幹細胞、ｘｖｉｉｉ）島、ｘｉｘ）軟骨、ｘｘ）肝細胞およびｘｘｉ）造血細胞からなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３３】
前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３４】
前記補体活性を抑制する薬物がＣ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１３５】
前記Ｃ５ｂまたはＣ５ａの形成を抑制する薬物が抗体全体または抗体断片である、請求項１３４記載の方法。
【請求項１３６】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３７】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３８】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項１３５記載の方法。
【請求項１３９】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項１３５記載の方法。
【請求項１４０】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項１３５記載の方法。
【請求項１４１】
前記エクリズマブが２週間に１回投与される、請求項１４０記載の方法。
【請求項１４２】
前記補体活性の阻害剤がｉ）可溶性補体受容体、ｉｉ）ＣＤ５９、ｉｉｉ）ＣＤ５５、ｉｖ）ＣＤ４６およびｖ）Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８またはＣ９に対する抗体からなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４３】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性またはＢ細胞活性を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４４】
前記免疫抑制薬がＴ細胞活性およびＢ細胞活性を抑制する、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４５】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ＯＫＴ３、コルチコステロイド、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アザチオプレン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、抗Ｔ細胞抗体、シクロホスファミド、レフルノミド、ブレキナール、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、プリン類似体、リツキサン、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、ＩＶＩｇおよびブレディニンからなる群より選択される、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４６】
ｉ）補体活性を抑制する薬物、ｉｉ）シクロスポリンＡおよびｉｉｉ）ＬＦ１５−０１９５を投与することを含む、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４７】
前記補体活性を抑制する薬物が補体Ｃ５の切断を抑制する抗体である、請求項１４６記載の方法。
【請求項１４８】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも２０％長い期間生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１４９】
前記補体活性を抑制する薬物を用いずに前記方法が実施された場合よりも、前記同種移植片が少なくとも４０％長い期間生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１５０】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１３０記載の方法。
【請求項１５１】
前記同種移植片が少なくとも３カ月間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５２】
前記同種移植片が少なくとも６カ月間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５３】
前記同種移植片が少なくとも１年間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５４】
前記同種移植片が少なくとも５年間生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５５】
前記ヒトの残りの生存期間にわたり前記同種移植片が生き残る、請求項１３１記載の方法。
【請求項１５６】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１４日間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５７】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも２８日間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５８】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも３カ月間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１５９】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも６カ月間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６０】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも１年間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６１】
前記補体活性を抑制する薬物が少なくとも５年間慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６２】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり前記補体活性を抑制する薬物が慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６３】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくとも１つの免疫抑制薬が慢性投与される、請求項１３３記載の方法。
【請求項１６４】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともシクロスポリンＡが慢性投与される、請求項１６３記載の方法。
【請求項１６５】
前記哺乳動物の残りの生存期間にわたり少なくともＬＦ１５−０１９５が慢性投与される、請求項１６３記載の方法。
【請求項１６６】
前記免疫調節治療が血漿搬出、脾摘除術または免疫吸着である、請求項１３０記載の方法。
【請求項１６７】
哺乳動物での同種移植片の生存期間を延ばすための薬物または薬物パッケージの製造における補体活性を抑制する薬物および免疫抑制薬の使用であって、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む使用。
【請求項１６８】
２以上の免疫抑制薬が薬物または薬物パッケージに含まれる、請求項１６７記載の使用。
【請求項１６９】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への同時投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７０】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への連続投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７１】
前記補体活性を抑制する薬物が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７２】
前記免疫抑制薬が前記哺乳動物への慢性投与に適した製剤中にある、請求項１６７記載の使用。
【請求項１７３】
補体活性を抑制する薬物および少なくとも１つの免疫抑制薬を含む薬学的パッケージであって、該補体活性を抑制する薬物および該免疫抑制薬が慢性投与用に製剤化されており、少なくとも１つの免疫抑制薬がＬＦ１５−０１９５を含む薬学的パッケージ。
【請求項１７４】
前記補体活性を抑制する薬物が抗体および凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む凍結乾燥製剤中の抗体である、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７５】
前記免疫抑制薬が前記免疫抑制薬および凍結保護剤を含む凍結乾燥製剤中にある、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７６】
前記薬物および前記免疫抑制薬が該薬物、該免疫抑制薬および凍結保護剤を含む同じ凍結乾燥製剤中にある、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７７】
前記補体活性を抑制する薬物がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７８】
前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあって、該カートリッジが注射に適した製剤中に該免疫抑制薬を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１７９】
前記補体活性を抑制する薬物および前記免疫抑制薬がカートリッジを備えたシリンジを含む注射システム内にあり、該カートリッジが注射に適した製剤中に該薬物および該免疫抑制薬を含む、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８０】
前記補体活性を抑制する薬物が単位投薬形態で存在する、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８１】
前記免疫抑制薬が単位投薬形態で存在する、請求項１７３記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８２】
前記抗体が終末補体またはＣ５ａの形成を抑制する、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８３】
前記抗体が抗体全体または抗体断片である、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８４】
前記抗体全体または抗体断片がヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化抗体または脱免疫化抗体または抗体断片である、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８５】
前記抗体全体または抗体断片が補体Ｃ５の切断を抑制する、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８６】
前記抗体断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８７】
前記抗体断片がペキセリズマブである、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【請求項１８８】
前記抗体全体がエクリズマブである、請求項１７４記載の薬学的パッケージ。
【図１−１】
【図１−２】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０−１】
【図１０−２】
【図１０−３】
【図１１−１】
【図１１−２】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１−２】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０−１】
【図１０−２】
【図１０−３】
【図１１−１】
【図１１−２】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００９−５２８３６９（Ｐ２００９−５２８３６９Ａ）
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５７３８３（Ｐ２００８−５５７３８３）
【出願日】平成１９年３月２日（２００７．３．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５２９０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３１３４
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０３１０２６７４）アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (51)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２日（２００７．３．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５２９０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３１３４
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０３１０２６７４）アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (51)
【Ｆターム（参考）】
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