貝殻を原料とする抗ウイルス剤
【課題】ヒト・環境にやさしく無害なものであり、廃棄物の有効利用の一環として豊富に得ることができる抗ウイルス剤を提供することにあり、また、それを含有した、例えばマスク、フィルター、飼料等の抗ウイルス材を提供すること。
【解決手段】貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤であり、特に該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が１５μｍ以下であり、特に該貝殻がホタテガイの貝殻である抗ウイルス剤によって課題を解決した。
【解決手段】貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤であり、特に該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が１５μｍ以下であり、特に該貝殻がホタテガイの貝殻である抗ウイルス剤によって課題を解決した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貝殻を原料とする抗ウイルス剤に関するものであり、より詳しくは、貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有する抗ウイルス剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
我が国の貝類の生産量は、年間約９０万トンあり、そのうちの約６５質量％が貝殻である。そして、我が国の貝類の生産量のうち、特にホタテガイの生産量は年間約８０万トンであり、そのうちその貝殻が約５２万トンであり、約１５万トンが廃棄物として処理されている。
【０００３】
近年、この廃棄物の有効利用の観点から、ホタテガイの貝殻の焼成粉末の水懸濁液の抗菌作用が注目されている。例えば、ホタテガイ貝殻焼成粉末水懸濁液が、大腸菌、黄色ブドウ球菌及び枯草菌に抗菌性を示すことが報告されている（非特許文献１）。また、該懸濁液が真菌類及びメリシチン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、ビブリオ属細菌等にも抗菌性があることが報告されている（非特許文献２及び３）。更に、特許文献１には、ホタテ貝殻の焼成物が、除菌剤、抗菌剤又は防カビ剤として有効であることが示されている。
【０００４】
一方、ヒトや環境にやさしい抗ウイルス剤の開発が望まれている。しかしながら、貝殻由来のものであって、ウイルスに対して感染力を減弱させる等の効果を奏する抗ウイルス剤に関しては、ヒトや環境にやさしい貝殻焼成物等を利用した報告は知られていない。上記抗菌作用等を示す貝殻焼成物であっても、抗ウイルス活性を示すとは限らず、そのためには、更なる技術が必要とされていた。
【０００５】
【非特許文献１】Sawai. J., Shiga. H.,Kojima. H.： Kinetic analysis of the bactericidal actionof heated scallop-shell powder. Int. J. Food Microbiol., 71, 211〜218（2001）
【非特許文献２】小山信治、他：ホタテ貝殻のバイオニックデザイン、八戸工業大学食品工学研究紀要、12、pl,（2001）
【非特許文献３】岡重美、他：Vibrio属細菌に対するホタテガイ貝殻焼成カルシウムの抗菌作用について、日本食品衛生学会 第８３回学術講演会講演要旨集、30,（2002）
【特許文献１】特開２００２−２５５７１４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記背景技術に鑑みてなされたものであり、その課題は、ヒトや環境にやさしく無害なものであり、しかも廃棄物の有効利用の一環として豊富に得ることができる抗ウイルス剤を提供することにあり、またそれを含有した抗ウイルス材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、貝殻に特定の処理を施すことによって、得られたものが抗ウイルス活性を示すようになることを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤を提供するものである。
【０００９】
また本発明は、上記抗ウイルス剤を含有する抗ウイルス材を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ウイルスに対して感染力を減弱させる効果等に優れた抗ウイルス剤を提供することができる。更に、ヒトや環境にやさしく無害であり、しかも廃棄物の有効利用ができ、また豊富に得ることができる抗ウイルス剤を提供することができる。また、上記した抗ウイルス剤を含有し、上記効果を有する抗ウイルス材を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、任意に変形して実施することができる。
【００１２】
本発明の抗ウイルス剤は、貝殻を焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする。本発明において使用される貝殻は、多板類、単板類、腹足類、掘足類、二枚貝類、頭足類等の何れの貝類の貝殻であれば特に制限はされないが、人体に安全で、炭酸カルシウムを含有し、大量に入手が可能なホタテガイ、カキ又はホッキガイの貝殻が好ましく、日本国内で最も多く生産されており、白色度や純度が高く、組成の変動が少ない点で特にホタテガイの貝殻が好ましい。
【００１３】
貝殻から微細焼成粉砕物を得るための処理方法については、少なくとも、焼成及び粉砕の両工程が必須である。微細焼成粉砕物は、少なくとも、焼成及び粉砕をして得られたものであれば、その他の処理については特に限定はなく、更に焼成と粉砕の順序も問わない。ただし、微細に粉砕するために、焼成後に粉砕することが好ましい。
【００１４】
貝殻は、そのまま焼成又は粉砕を行ってもよいが、それらの工程の前に、貝殻に対し直接「荒潰し」をすることが、その後の焼成及び粉砕を効率よくするために好ましい。荒潰し後の形状は特に限定はないが、体積平均粒径で０．１ｍｍ〜２０ｍｍが好ましく、０．５ｍｍ〜１４ｍｍがより好ましく、２ｍｍ〜１０ｍｍが特に好ましい。
【００１５】
荒潰しの方法としては特に限定はないが、人力で潰したり、クラッシャー、ハンマーミル等を用いて行ったりすることが好ましい。
【００１６】
本発明においては焼成することが必須である。本発明における「焼成」とは、加熱により貝殻の成分である炭酸カルシウムの少なくとも一部を酸化カルシウムにする処理である。なお、焼成で得られるものを、以下、「焼成物」ということがある。
【００１７】
本発明における焼成方法や焼成条件としては特に限定されるものではないが、焼成温度については、好ましくは６００℃〜１５００℃、より好ましくは７００℃〜１４００℃、特に好ましくは８００℃〜１３００℃、最も好ましくは１０００℃〜１１００℃である。焼成時間は焼成条件にも依存し特に限定はないが、好ましくは３０分〜１５時間、より好ましくは１時間〜１０時間、特に好ましくは１．５時間〜６時間、最も好ましくは２時間〜４時間である。焼成温度が高すぎたり焼成時間が長すぎたりすると、ガラス化する場合があり、また、その必要性がなくコスト的に不利となる場合もある。一方、焼成温度が低すぎたり焼成時間が短すぎたりすると、貝殻の成分である炭酸カルシウムから酸化カルシウムが十分に生成されない場合があり、本発明の抗ウイルス効果が発揮できなかったり、また、その後に粉砕をする場合、粉砕が十分にできず、所定の平均粒径のものが得られ難くなったりする場合がある。
【００１８】
焼成時の雰囲気は、空気中、窒素等の不活性気体中、真空中等何れでもよく特に限定はないが、空気中で焼成するのが貝殻中の炭酸カルシウムが酸化カルシウムに変換し易い点で好ましい。
【００１９】
本発明においては粉砕することが必須である。本発明における「粉砕」とは、平均粒径を小さくすることをいい、粉砕は１回だけでもまた２回以上でもよい。２回以上粉砕を行う場合には、それぞれ別の粉砕方法で粉砕することが好ましい。以下、粉砕を２回以上行う場合、最後の粉砕を微粉砕といい、微粉砕の前に行う粉砕を粗粉砕という。本発明においては、焼成をしてから１回又は２回以上の粉砕をしてもよく、粗粉砕をした後に焼成を行い、その後に微粉砕をしてもよい。粉砕のし易さ、均一な微細粒子が得られる点で、焼成をしてから粗粉砕をし、その後に微粉砕をすることが好ましい。
【００２０】
粗粉砕をする場合、粗粉砕後の体積平均粒径は特に限定はないが、好ましくは１０μｍ〜３００μｍ、より好ましくは１２μｍ〜２００μｍ、特に好ましくは１５μｍ〜１００μｍである。粗粉砕に用いられる粉砕機ではこれより小さい体積平均粒径にするには効率が悪すぎたり、粉砕全体の粉砕効率を考えるとこれより小さくしておく必要性がない場合があり、一方、大きすぎる場合は、その後の微粉砕の効率が落ちたり、十分に微粉砕できなかったりする場合がある。
【００２１】
ここで、粗粉砕後の体積平均粒径は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）を用いて、常法に従って得られた体積平均粒径として定義される。
【００２２】
粗粉砕に用いられる粉砕機としては特に限定はないが、乾式ボールミル、乾式ビーズミル、クラッシャー等を用いて行うことが、上記の体積平均粒径の範囲内に効率よく粉砕でき、粉砕工程全体の粉砕効率の点で好ましい。
【００２３】
焼成後又は焼成に続く粗粉砕後に微粉砕をして、本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物を得る。微粉砕後の体積平均粒径、すなわち本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物の体積平均粒径は、好ましくは１５μｍ以下、より好ましくは０．１μｍ〜１０μｍ、特に好ましくは０．３μｍ〜７μｍ、最も好ましくは１μｍ〜５μｍである。微細焼成粉砕物の体積平均粒径が大きすぎる場合は、使用に際して微細焼成粉砕物を懸濁する時にむらが生じたり、懸濁に時間がかかったりする場合がある。また、ウイルスとの接触が悪くなる等、抗ウイルス効果が十分に発揮できない場合がある。一方、小さすぎる場合は、そこまで十分に微粉砕できなかったり、粉砕の効率が悪くなったりする場合がある。
【００２４】
本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物の個数平均粒径は、好ましくは７．５μｍ未満、より好ましくは０．０１μｍ〜６μｍ、特に好ましくは０．１μｍ〜５μｍ、最も好ましくは０．５μｍ〜３μｍである。微細焼成粉砕物の個数平均粒径が大きすぎる場合や小さすぎる場合は、上記した体積平均粒径の場合と同様の問題点が発生する場合がある。
【００２５】
ここで、微細焼成粉砕物の体積平均粒径と個数平均粒径は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）にて、常法に従って得られる、それぞれ体積平均粒径、個数平均粒径として定義される。
【００２６】
微細焼成粉砕物の比表面積は、０．４ｍ２／ｃｍ３以上が好ましく、０．６〜１００ｍ２／ｃｍ３が好ましく、より好ましくは０．８〜３０ｍ２／ｃｍ３、特に好ましくは１〜１０ｍ２／ｃｍ３である。微細焼成粉砕物の比表面積が小さすぎる場合は、ウイルスとの接触が悪くなる等、抗ウイルス効果が十分に発揮できない場合があり、一方、大きすぎる場合は、そこまで十分に微粉砕できなかったり、粉砕の効率が悪くなったりする場合がある。
【００２７】
ここで、微細焼成粉砕物の比表面積は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）を用いて測定され、そのようにして得られたものとして定義される。
【００２８】
微粉砕の方法としては特に限定はないが、微粉砕に用いられる粉砕装置としては、具体的には例えば、乾式ボールミル、湿式ボールミル、乾式ビーズミル、湿式ビーズミル、ペイントシェーカー等のメディアミル；ジェット式ミル、高速ローター回転式ミル等の乾式粉砕装置；三本ロール、プラネタリーミキサー等の他の媒体と共に粉砕する装置が挙げられる。このうち、粉砕効率、コスト等の点でメディアミルが好ましく、抗ウイルス効果を発揮する体積平均粒径まで効率よく粉砕できる点、得られた抗ウイルス剤の用途等を考慮して、湿式ボールミル、湿式ビーズミル等が特に好ましい。かかる湿式ボールミルや湿式ビーズミルとしては、回転式のものでも震盪式のものでも好ましく用いられる。
【００２９】
例えば、湿式ビーズミルを用いるときの例を以下に挙げる。すなわち、焼成物又は焼成物を粗粉砕したものを、好ましくは１〜５０質量％、より好ましくは２〜３０質量％、特に好ましくは５〜２０質量％となるように分散媒に懸濁した後、湿式ビーズミルを用いて、好ましくは３０分〜３時間、より好ましくは１．５時間〜２時間粉砕する。湿式ビーズミル粉砕機を使用するときの分散媒としては、特に限定はないが、水、エタノール、イソプロパノール又は、それらの混合分散媒が、その後の取り扱い、得られた微細焼成粉砕物含有抗ウイルス剤の用途等を考慮すると好ましい。また、無菌的に保存できる点で好ましい。分散メディアも特に限定はないが、シリカ、酸化ジルコニウム等の金属酸化物；ガラス；セラミックス；ステンレス、鋼等の金属等が挙げられる。このうち、酸化ジルコニウム（ＺｒＯ２）が、上記した好ましい平均粒径に効率よく粉砕でき、また、酸化ジルコニウム自体が磨耗しにくい点で好ましい。分散メディアの直径も特に限定はないが、０．０３ｍｍ〜１０ｍｍが好ましく、０．０５ｍｍ〜５ｍｍがより好ましく、０．１ｍｍ〜０．５ｍｍが特に好ましい。
【００３０】
本発明の抗ウイルス剤は、上記微細焼成粉砕物を含有するが、それ以外に、水、エタノール、プロパノール等の分散媒；澱粉等の分散促進剤を含有させることができる。かかる「その他の物質」は、微細焼成粉砕物の効果を減じない範囲で配合できる。「その他の物質」は、本発明の抗ウイルス剤全体に対して、０質量％（抗ウイルス剤が微細焼成粉砕物のみからなる場合）〜７０質量％が好ましく、０.１質量％〜５０質量％がより好ましく、１質量％〜３０質量％が特に好ましい。
【００３１】
本発明の抗ウイルス剤が適用されるウイルスについては特に制限はなく、全てのウイルスが対象にされる。そのウイルスの科に関しては、例えば具体的には、マイオウイルス科（Ｍｙｏｖｉｒｉｄａｅ）、サイフォウイルス科（Ｓｉｐｈｏｖｉｒｉｄａ）、ポドウイルス科（Ｐｏｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、パポーバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、イノウイルス科（Ｉｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ミクロウイルス科（Ｍｉｃｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、へペウイルス科（Ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）、レトロウイルス科（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、カリモウイルス科（Ｃａｕｌｉｍｏｖｉｒｉｄａｅ）等が考えられる。
【００３２】
本発明の抗ウイルス剤の適用されるウイルスは、上記何れのウイルスでもよいが、オルトミクソウイルス科、コロナウイルス科、パラミクソウイルス科が、新興感染症、人蓄共通感染症、新型ウイルス感染症を予防等するため好ましく、特にオルトミクソウイルス科のインフルエンザウイルスが、高病原性トリインフルエンザウイルスの蔓延を阻止できる等の点で好ましい。
【００３３】
例えば具体的には、
Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（ソ連型）、Ａ型インフルエンザウイルスＨＲ／Ｋ５／０１（Ｈ９Ｎ２）、Ａ型インフルエンザウイルス愛知／２／６８（Ｈ３Ｎ２）（人分離株）、Ａ型インフルエンザウイルスコハクチョウ／島根／４９９／８３（Ｈ５Ｎ３）（鳥分離株）等のＡ型インフルエンザウイルスやＢ型インフルエンザウイルスＳｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２等のＢ型インフルエンザウイルス等のオルトミクソウイルス科
鶏伝染性気管支炎ウイルス ボーデット株４２や重症呼吸器感染症（ＳＡＲＳ）ウイルス等のコロナウイルス科
ニューカッスル病ウイルス ラソーダ株及びＫｒＫＪＷ／４９株等のパラミクソウイルス科
のウイルスに適用されることが好ましい。
【００３４】
本発明の抗ウイルス剤を含有させて、各種抗ウイルス材として使用に供される。かかる抗ウイルス材としては、本発明の抗ウイルス剤を含有すれば、固体であっても、液体であっても、また、それらの混合、複合であってもよい。
【００３５】
かかる抗ウイルス材としては、ブタ、ウシ、ヒツジ等の家畜類の飼料；ニワトリ、ガチョウ、アヒル等の家禽類の飼料；エアコンディショナー、空気清浄機、掃除機等のフィルター；家庭用、医療用、作業用等のマスク；接着剤；床拭き材、壁拭き材等の拭き材；消臭材；キッチン用部材；水虫治療薬、うがい薬、褥瘡の感染予防剤等の薬剤；不織布、糸、織布、壁材等の部材等が好ましいものとして挙げられる。
【００３６】
例えば、本発明の抗ウイルス剤を含有するフィルターであれば、このフィルターに接触したインフルエンザウイルス等のウイルスの感染力を減弱させることができる。これにより、例えばエアコンディショナー等に使用すれば、インフルエンザウイルス等のウイルス感染を防ぐことができる。
【００３７】
また、本発明の抗ウイルス剤を飼料に含有させれば、ウイルス感染を防止し、発育促進効果がある。飼料に用いる場合は、特に制限されないが、本発明の抗ウイルス剤の粉末をそのまま飼料に混合する方法や、本発明の抗ウイルス剤を水に懸濁させ、飼料と混ぜ合わせる方法等が用いられる。本発明の抗ウイルス剤を飼料に混合する場合、飼料１００重量部に対して、本発明の抗ウイルス剤を微細焼成粉砕物換算で、０．００５重量部〜０．１５重量部混合することが好ましく、０．０７５重量部〜０．１重量部混合することが特に好ましい。微細焼成粉砕物が少なすぎると、抗ウイルス効果が得られない場合があり、多すぎると、細胞毒性が生じたり、環境を汚染したりする場合がある。
【００３８】
抗ウイルス剤を含有する液体として用いる場合では、床拭き剤等の拭き材等に用いるだけではなく、ウイルスに感染するのを予防するために、動物に摂取させることも可能である。ペットや、ブタ、ウシ、ニワトリ、ヒツジ等の家畜に継続して飲ませ続けることで、有益な菌を殺さずに、有害なウイルスを不活性化させ、ペットや家畜はもとより、人の健康も守ることが可能である。
【００３９】
本発明の貝殻の微細焼成粉砕物を含有する抗ウイルス剤が優れた抗ウイルス活性を示す作用・原理は明らかではなく、また本発明はかかる作用・原理の範囲に限定されるわけではないが、以下のことが考えられる。すなわち、貝殻の主成分である炭酸カルシウムが焼成されて生成する酸化カルシウム、それと水との反応物（水酸化カルシウム）、及び／又は、貝殻に含有されるその他の化合物が、更に形状が微細化されることによって、インフルエンザウイルス等のウイルスに対して即効的に作用するためであると考えられる。
【実施例】
【００４０】
以下に、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限りこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４１】
実施例１
（１）微細焼成粉砕物Ａの製造方法
青森県産のホタテガイの貝殻を、粒径５ｍｍ程度に乾式ボールミルを用いて荒潰しをしてから、空気中で１０５０℃〜１１００℃で３時間焼成した。この焼成物を、乾式ビーズミル粉砕機（アジサワ・ファインテック社製）で約２時間処理し、焼成粉砕物ａを得た。この「焼成粉砕物ａ」の体積粒径分布を図１、個数粒径分布を図２に示す。焼成粉砕物ａの１０％（体積）粒径は８．５μｍ、５０％（体積）粒径は１８．４μｍ、９０％（体積）粒径は４３．７μｍ、体積平均粒径は１８．４μｍであり、１０％（個数）粒径は３．３μｍ、５０％（個数）粒径は６．１μｍ、９０％（個数）粒径は１３．２μｍ、個数平均粒径は６．１μｍであった。また、比表面積は０．３９ｍ２／ｃｍ３であった。
【００４２】
焼成粉砕物ａの、「水で１０質量倍に希釈して懸濁攪拌した液の室温におけるｐＨ」、灰分及び含有元素を表１に示す。ただし、表１以外にも微量成分を含有する可能性が考えられ、従って、本発明は、抗ウイルス効果が表１に記載されたものに起因して奏されているものには限定されない。焼成粉砕物ａの主成分は酸化カルシウム（ＣａＯ）であった。この酸化カルシウムはホタテガイの貝殻の主成分である炭酸カルシウム（ＣａＣＯ３）が焼成により脱炭酸して生成したものである。
【００４３】
【表１】
【００４４】
その後、焼成粉砕物ａを１０質量％となるように水に懸濁して、湿式ビーズミル粉砕機（アジサワ・ファインテック社製）で約２時間処理し、１０％（体積）粒径２．１μｍ、５０％（体積）粒径３．５μｍ、９０％（体積）粒径５．７μｍ、体積平均粒径３．５μｍであり、１０％（個数）粒径１．３μｍ、５０％（個数）粒径２．２μｍ、９０％（個数）粒径３．７μｍ、個数平均粒径２．２μｍ、比表面積１．８５ｍ２／ｃｍ３の微細焼成粉砕物Ａを得た。この微細焼成粉砕物Ａの体積粒径分布を図３、個数粒径分布を図４に示す。
この微細焼成粉砕物Ａの、「水で１０質量倍に希釈して懸濁攪拌した液の室温におけるｐＨ」、灰分及び含有元素の種類は、当然上記表１に示すものと同じである。
【００４５】
（２）抗ウイルス活性の評価方法
（ａ）試験溶液の調製
貝殻の微細焼成粉砕物Ａを、０．１５質量％になるように、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）に分散し、攪拌子を入れて、２０℃で１時間攪拌して、抗ウイルス活性の試験に用いる「試験溶液原液」とした。
【００４６】
（ｂ）供試ウイルス液の調製
Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）をウイルス株として使用した。ウイルス株は、１０日齢発育鶏卵の漿尿膜腔に接種し、３５℃、３日間培養後、採取した感染漿尿液を−８０℃で保存したものを、用時解凍後、減菌生理食塩水で希釈してウイルス液として用いた。
【００４７】
（ｃ）抗ウイルス活性の試験
減菌したマイクロチューブに、上記のウイルス液０．１ｍＬと、上記「試験溶液原液」を、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）で希釈した「０．７５質量％試験溶液」０．９ｍＬを加えた。その１分後に、上記のウイルス液と「０．０７５質量％試験溶液」の混合液を採取し、イヌ腎由来のMardin-Darby canine kidney（ＭＤＣＫ）細胞を用いて生残ウイルス量をプラック法で求め、プラック形成単位（plaque forming unit；ＰＦＵ）／ｍＬで生残ウイルス量（ＰＦＵ／ｍＬ）を表し、抗ウイルス活性の評価を行った。この評価方法は、「Tobita,K., 1975, Permanent canine kidney(MDCK) cells for isolation
and plaque assay of influenzaB virus. Med.Microbiol.Immunol.,62; p.23〜27.」に従って行った。その結果を図５に示す。
【００４８】
図５において、「対照」は、上記のウイルス液０．１ｍＬと、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）０．９ｍＬを混合し、５分後に、この混合液を採取し、上記と同様にして生残ウイルス量（ＰＦＵ／ｍＬ）を求めたものである。なお、図６、図７及び図８における「対照」についても同様である。
【００４９】
また、図５ないし図８において、縦軸の「１．Ｅ＋ｎ」（ｎは３〜９の整数）なる表現は、「１０ｎ」（ｎは３〜９の整数）を意味する。また、縦軸は「１．Ｅ＋０３」の下で切れているが、そこまで棒が達していないものは、全て「５００ＰＦＵ／ｍＬ未満」であることを意味する。
【００５０】
実施例２
実施例１において、抗ウイルス活性の試験を、「０．０５質量％試験溶液」及び「０．０２５質量％試験溶液」で行った以外は、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図５に合わせて示す。
【００５１】
実施例３
実施例１において、混合１分後に上記のウイルス液と「０．０７５質量％試験溶液」の混合液を採取したことに代えて、混合３０秒後、５分後、１０分後及び１５分後にも、ウイルス液と各濃度の試験溶液の混合液を採取して、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図５に合わせて示す。
【００５２】
実施例４
実施例１、実施例２及び実施例３において、ウイルス株として、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）の代わりに、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）を用いた以外は実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図６に合わせて示す。なお、図６には記載されていないが、１５分後には「生き残りウイルス量」が全ての濃度で５００ＰＦＵ／ｍＬ未満となった。
【００５３】
比較例１
実施例１において、貝殻の微細焼成粉砕物Ａの「０．０７５質量％試験溶液」の代わりに、微細粉砕を施していない貝殻の焼成粉砕物ａの０．０７５質量％試験溶液を用いた以外は、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図７に示す。
【００５４】
比較例２
比較例１において、混合後１分混合液を採取したことに代えて、３０秒後、５分後及び１０分後にもウイルス液と試験溶液の混合液を採取して、比較例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を、実施例１、実施例３の微細焼成粉砕物Ａの「０．０７５質量％試験溶液」での結果と合わせて、図７に合わせて示す。
【００５５】
比較例３
比較例１及び比較例２において、ウイルス株として、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）の代わりに、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）を用いた以外は、比較例１及び比較例２と同様にして、抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図８に合わせて示す。
【００５６】
図５及び図６の結果から明らかなように、本発明の貝殻の微細焼成粉砕物Ａを用いたもの（実施例１ないし実施例６）では、ウイルスに対して感染力を減弱させる性質を有していた。特に、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）に対しては、より即効的に作用して、ウイルスの感染力を消失させることが明らかになった。
【００５７】
一方、本発明の微細焼成粉砕物Ａではなく、焼成粉砕物ａを含有するもの（比較例１ないし比較例３）では、実施例と比較して何れも抗ウイルス活性が低かった。例えば、図７に示すように、０．０７５質量％試験溶液、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）について、生残ウイルス量を対照と比較すると、微細焼成粉砕物Ａは、３０秒間で既に約３０００分の１まで低下したのに対して、焼成粉砕物ａは３０秒間で約１０分の１までしか低下しなかった。また、０．０７５質量％試験溶液、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）についても同様に生残ウイルス量を対照と比較すると、微細焼成粉砕物Ａは、３０秒間で既に約４００分の１に低下したのに対して、焼成粉砕物ａは３０秒間で約５０分の１までしか低下しなかった（図８）。
【００５８】
このことは、微細粉末である微細焼成粉砕物Ａの平均粒径が焼成粉砕物ａに比べて小さいこと、比表面積が焼成粉砕物ａに比べて大きいことが、抗ウイルス活性に大きく寄与することを示すものであり、抗ウイルス活性を得るには、焼成粉砕物ａではなく、より微細粉末である微細焼成粉砕物Ａであることが必須であることが分かった。なお、焼成粉砕物ａのカルシウム含量は、微細焼成粉砕物Ａのその含量の約１／２と低かったことも抗ウイルス活性が弱い一つの原因であると考えられる。
【００５９】
実施例５
実施例１に記載の製造方法と同様にして、微細焼成粉砕物Ａを得た。その微細焼成粉砕物Ａを、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）で希釈して、０．１質量％、０．４質量％、１質量％試験溶液を調製した。この各試験溶液を３種の濃度の違うインフルエンザウイルスに感染させた各グループのマウス各１０匹にそれぞれ注入し、感染させるために４時間放置し、マウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６０】
比較例４
実施例５において、試験溶液をマウスに注入しなかった以外は、実施例５と同様にしてマウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６１】
参考例１
実施例５において、５質量％試験溶液を用いた以外は、実施例５と同様にしてマウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６２】
その結果、０．１質量％、０．４質量％、１質量％試験溶液を与えたマウス（実施例５）は、何も与えていないマウス（比較例４）と比較して、明らかに死亡率も発病率も減少した。このことから、本発明の微細焼成粉砕物Ａを含有した試験溶液がマウスの体内に存在するインフルエンザウイルスの感染力を弱める又は殺す作用があることが分かった。
【００６３】
なお、５質量％試験溶液を与えたマウス（参考例１）は、何も与えていないマウス（比較例５）と比較すると、２１日後に死亡率、発病率が増加していた。この結果から、５質量％試験溶液はマウスには多すぎる摂取量であったことが考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の貝殻の微細焼成粉砕物Ａを用いた抗ウイルス剤は、ウイルスに対して感染力を減弱させる作用に優れているため、抗ウイルス剤をはじめ、抗ウイルス剤を含有するフィルター、飼料等の抗ウイルス材として広く利用されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】焼成粉砕物ａの体積粒径分布を示す図である。
【図２】焼成粉砕物ａの個数粒径分布を示す図である。
【図３】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの体積粒径分布を示す図である。
【図４】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの個数粒径分布を示す図である。
【図５】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの抗ウイルス活性（Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型））の試験結果を示す図である。
【図６】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの抗ウイルス活性（Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）の試験結果を示す図である。
【図７】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａ、及び焼成粉砕物ａの抗ウイルス活性（Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型））の試験結果を示す図である。
【図８】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａ、及び焼成粉砕物ａの抗ウイルス活性（Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）の試験結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貝殻を原料とする抗ウイルス剤に関するものであり、より詳しくは、貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有する抗ウイルス剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
我が国の貝類の生産量は、年間約９０万トンあり、そのうちの約６５質量％が貝殻である。そして、我が国の貝類の生産量のうち、特にホタテガイの生産量は年間約８０万トンであり、そのうちその貝殻が約５２万トンであり、約１５万トンが廃棄物として処理されている。
【０００３】
近年、この廃棄物の有効利用の観点から、ホタテガイの貝殻の焼成粉末の水懸濁液の抗菌作用が注目されている。例えば、ホタテガイ貝殻焼成粉末水懸濁液が、大腸菌、黄色ブドウ球菌及び枯草菌に抗菌性を示すことが報告されている（非特許文献１）。また、該懸濁液が真菌類及びメリシチン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、ビブリオ属細菌等にも抗菌性があることが報告されている（非特許文献２及び３）。更に、特許文献１には、ホタテ貝殻の焼成物が、除菌剤、抗菌剤又は防カビ剤として有効であることが示されている。
【０００４】
一方、ヒトや環境にやさしい抗ウイルス剤の開発が望まれている。しかしながら、貝殻由来のものであって、ウイルスに対して感染力を減弱させる等の効果を奏する抗ウイルス剤に関しては、ヒトや環境にやさしい貝殻焼成物等を利用した報告は知られていない。上記抗菌作用等を示す貝殻焼成物であっても、抗ウイルス活性を示すとは限らず、そのためには、更なる技術が必要とされていた。
【０００５】
【非特許文献１】Sawai. J., Shiga. H.,Kojima. H.： Kinetic analysis of the bactericidal actionof heated scallop-shell powder. Int. J. Food Microbiol., 71, 211〜218（2001）
【非特許文献２】小山信治、他：ホタテ貝殻のバイオニックデザイン、八戸工業大学食品工学研究紀要、12、pl,（2001）
【非特許文献３】岡重美、他：Vibrio属細菌に対するホタテガイ貝殻焼成カルシウムの抗菌作用について、日本食品衛生学会 第８３回学術講演会講演要旨集、30,（2002）
【特許文献１】特開２００２−２５５７１４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記背景技術に鑑みてなされたものであり、その課題は、ヒトや環境にやさしく無害なものであり、しかも廃棄物の有効利用の一環として豊富に得ることができる抗ウイルス剤を提供することにあり、またそれを含有した抗ウイルス材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、貝殻に特定の処理を施すことによって、得られたものが抗ウイルス活性を示すようになることを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤を提供するものである。
【０００９】
また本発明は、上記抗ウイルス剤を含有する抗ウイルス材を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ウイルスに対して感染力を減弱させる効果等に優れた抗ウイルス剤を提供することができる。更に、ヒトや環境にやさしく無害であり、しかも廃棄物の有効利用ができ、また豊富に得ることができる抗ウイルス剤を提供することができる。また、上記した抗ウイルス剤を含有し、上記効果を有する抗ウイルス材を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、任意に変形して実施することができる。
【００１２】
本発明の抗ウイルス剤は、貝殻を焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする。本発明において使用される貝殻は、多板類、単板類、腹足類、掘足類、二枚貝類、頭足類等の何れの貝類の貝殻であれば特に制限はされないが、人体に安全で、炭酸カルシウムを含有し、大量に入手が可能なホタテガイ、カキ又はホッキガイの貝殻が好ましく、日本国内で最も多く生産されており、白色度や純度が高く、組成の変動が少ない点で特にホタテガイの貝殻が好ましい。
【００１３】
貝殻から微細焼成粉砕物を得るための処理方法については、少なくとも、焼成及び粉砕の両工程が必須である。微細焼成粉砕物は、少なくとも、焼成及び粉砕をして得られたものであれば、その他の処理については特に限定はなく、更に焼成と粉砕の順序も問わない。ただし、微細に粉砕するために、焼成後に粉砕することが好ましい。
【００１４】
貝殻は、そのまま焼成又は粉砕を行ってもよいが、それらの工程の前に、貝殻に対し直接「荒潰し」をすることが、その後の焼成及び粉砕を効率よくするために好ましい。荒潰し後の形状は特に限定はないが、体積平均粒径で０．１ｍｍ〜２０ｍｍが好ましく、０．５ｍｍ〜１４ｍｍがより好ましく、２ｍｍ〜１０ｍｍが特に好ましい。
【００１５】
荒潰しの方法としては特に限定はないが、人力で潰したり、クラッシャー、ハンマーミル等を用いて行ったりすることが好ましい。
【００１６】
本発明においては焼成することが必須である。本発明における「焼成」とは、加熱により貝殻の成分である炭酸カルシウムの少なくとも一部を酸化カルシウムにする処理である。なお、焼成で得られるものを、以下、「焼成物」ということがある。
【００１７】
本発明における焼成方法や焼成条件としては特に限定されるものではないが、焼成温度については、好ましくは６００℃〜１５００℃、より好ましくは７００℃〜１４００℃、特に好ましくは８００℃〜１３００℃、最も好ましくは１０００℃〜１１００℃である。焼成時間は焼成条件にも依存し特に限定はないが、好ましくは３０分〜１５時間、より好ましくは１時間〜１０時間、特に好ましくは１．５時間〜６時間、最も好ましくは２時間〜４時間である。焼成温度が高すぎたり焼成時間が長すぎたりすると、ガラス化する場合があり、また、その必要性がなくコスト的に不利となる場合もある。一方、焼成温度が低すぎたり焼成時間が短すぎたりすると、貝殻の成分である炭酸カルシウムから酸化カルシウムが十分に生成されない場合があり、本発明の抗ウイルス効果が発揮できなかったり、また、その後に粉砕をする場合、粉砕が十分にできず、所定の平均粒径のものが得られ難くなったりする場合がある。
【００１８】
焼成時の雰囲気は、空気中、窒素等の不活性気体中、真空中等何れでもよく特に限定はないが、空気中で焼成するのが貝殻中の炭酸カルシウムが酸化カルシウムに変換し易い点で好ましい。
【００１９】
本発明においては粉砕することが必須である。本発明における「粉砕」とは、平均粒径を小さくすることをいい、粉砕は１回だけでもまた２回以上でもよい。２回以上粉砕を行う場合には、それぞれ別の粉砕方法で粉砕することが好ましい。以下、粉砕を２回以上行う場合、最後の粉砕を微粉砕といい、微粉砕の前に行う粉砕を粗粉砕という。本発明においては、焼成をしてから１回又は２回以上の粉砕をしてもよく、粗粉砕をした後に焼成を行い、その後に微粉砕をしてもよい。粉砕のし易さ、均一な微細粒子が得られる点で、焼成をしてから粗粉砕をし、その後に微粉砕をすることが好ましい。
【００２０】
粗粉砕をする場合、粗粉砕後の体積平均粒径は特に限定はないが、好ましくは１０μｍ〜３００μｍ、より好ましくは１２μｍ〜２００μｍ、特に好ましくは１５μｍ〜１００μｍである。粗粉砕に用いられる粉砕機ではこれより小さい体積平均粒径にするには効率が悪すぎたり、粉砕全体の粉砕効率を考えるとこれより小さくしておく必要性がない場合があり、一方、大きすぎる場合は、その後の微粉砕の効率が落ちたり、十分に微粉砕できなかったりする場合がある。
【００２１】
ここで、粗粉砕後の体積平均粒径は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）を用いて、常法に従って得られた体積平均粒径として定義される。
【００２２】
粗粉砕に用いられる粉砕機としては特に限定はないが、乾式ボールミル、乾式ビーズミル、クラッシャー等を用いて行うことが、上記の体積平均粒径の範囲内に効率よく粉砕でき、粉砕工程全体の粉砕効率の点で好ましい。
【００２３】
焼成後又は焼成に続く粗粉砕後に微粉砕をして、本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物を得る。微粉砕後の体積平均粒径、すなわち本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物の体積平均粒径は、好ましくは１５μｍ以下、より好ましくは０．１μｍ〜１０μｍ、特に好ましくは０．３μｍ〜７μｍ、最も好ましくは１μｍ〜５μｍである。微細焼成粉砕物の体積平均粒径が大きすぎる場合は、使用に際して微細焼成粉砕物を懸濁する時にむらが生じたり、懸濁に時間がかかったりする場合がある。また、ウイルスとの接触が悪くなる等、抗ウイルス効果が十分に発揮できない場合がある。一方、小さすぎる場合は、そこまで十分に微粉砕できなかったり、粉砕の効率が悪くなったりする場合がある。
【００２４】
本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物の個数平均粒径は、好ましくは７．５μｍ未満、より好ましくは０．０１μｍ〜６μｍ、特に好ましくは０．１μｍ〜５μｍ、最も好ましくは０．５μｍ〜３μｍである。微細焼成粉砕物の個数平均粒径が大きすぎる場合や小さすぎる場合は、上記した体積平均粒径の場合と同様の問題点が発生する場合がある。
【００２５】
ここで、微細焼成粉砕物の体積平均粒径と個数平均粒径は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）にて、常法に従って得られる、それぞれ体積平均粒径、個数平均粒径として定義される。
【００２６】
微細焼成粉砕物の比表面積は、０．４ｍ２／ｃｍ３以上が好ましく、０．６〜１００ｍ２／ｃｍ３が好ましく、より好ましくは０．８〜３０ｍ２／ｃｍ３、特に好ましくは１〜１０ｍ２／ｃｍ３である。微細焼成粉砕物の比表面積が小さすぎる場合は、ウイルスとの接触が悪くなる等、抗ウイルス効果が十分に発揮できない場合があり、一方、大きすぎる場合は、そこまで十分に微粉砕できなかったり、粉砕の効率が悪くなったりする場合がある。
【００２７】
ここで、微細焼成粉砕物の比表面積は、マイクロトラック粒度分布測定装置（日機装社製）を用いて測定され、そのようにして得られたものとして定義される。
【００２８】
微粉砕の方法としては特に限定はないが、微粉砕に用いられる粉砕装置としては、具体的には例えば、乾式ボールミル、湿式ボールミル、乾式ビーズミル、湿式ビーズミル、ペイントシェーカー等のメディアミル；ジェット式ミル、高速ローター回転式ミル等の乾式粉砕装置；三本ロール、プラネタリーミキサー等の他の媒体と共に粉砕する装置が挙げられる。このうち、粉砕効率、コスト等の点でメディアミルが好ましく、抗ウイルス効果を発揮する体積平均粒径まで効率よく粉砕できる点、得られた抗ウイルス剤の用途等を考慮して、湿式ボールミル、湿式ビーズミル等が特に好ましい。かかる湿式ボールミルや湿式ビーズミルとしては、回転式のものでも震盪式のものでも好ましく用いられる。
【００２９】
例えば、湿式ビーズミルを用いるときの例を以下に挙げる。すなわち、焼成物又は焼成物を粗粉砕したものを、好ましくは１〜５０質量％、より好ましくは２〜３０質量％、特に好ましくは５〜２０質量％となるように分散媒に懸濁した後、湿式ビーズミルを用いて、好ましくは３０分〜３時間、より好ましくは１．５時間〜２時間粉砕する。湿式ビーズミル粉砕機を使用するときの分散媒としては、特に限定はないが、水、エタノール、イソプロパノール又は、それらの混合分散媒が、その後の取り扱い、得られた微細焼成粉砕物含有抗ウイルス剤の用途等を考慮すると好ましい。また、無菌的に保存できる点で好ましい。分散メディアも特に限定はないが、シリカ、酸化ジルコニウム等の金属酸化物；ガラス；セラミックス；ステンレス、鋼等の金属等が挙げられる。このうち、酸化ジルコニウム（ＺｒＯ２）が、上記した好ましい平均粒径に効率よく粉砕でき、また、酸化ジルコニウム自体が磨耗しにくい点で好ましい。分散メディアの直径も特に限定はないが、０．０３ｍｍ〜１０ｍｍが好ましく、０．０５ｍｍ〜５ｍｍがより好ましく、０．１ｍｍ〜０．５ｍｍが特に好ましい。
【００３０】
本発明の抗ウイルス剤は、上記微細焼成粉砕物を含有するが、それ以外に、水、エタノール、プロパノール等の分散媒；澱粉等の分散促進剤を含有させることができる。かかる「その他の物質」は、微細焼成粉砕物の効果を減じない範囲で配合できる。「その他の物質」は、本発明の抗ウイルス剤全体に対して、０質量％（抗ウイルス剤が微細焼成粉砕物のみからなる場合）〜７０質量％が好ましく、０.１質量％〜５０質量％がより好ましく、１質量％〜３０質量％が特に好ましい。
【００３１】
本発明の抗ウイルス剤が適用されるウイルスについては特に制限はなく、全てのウイルスが対象にされる。そのウイルスの科に関しては、例えば具体的には、マイオウイルス科（Ｍｙｏｖｉｒｉｄａｅ）、サイフォウイルス科（Ｓｉｐｈｏｖｉｒｉｄａ）、ポドウイルス科（Ｐｏｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）、パポーバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、イノウイルス科（Ｉｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ミクロウイルス科（Ｍｉｃｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、へペウイルス科（Ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、ブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）、レトロウイルス科（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、カリモウイルス科（Ｃａｕｌｉｍｏｖｉｒｉｄａｅ）等が考えられる。
【００３２】
本発明の抗ウイルス剤の適用されるウイルスは、上記何れのウイルスでもよいが、オルトミクソウイルス科、コロナウイルス科、パラミクソウイルス科が、新興感染症、人蓄共通感染症、新型ウイルス感染症を予防等するため好ましく、特にオルトミクソウイルス科のインフルエンザウイルスが、高病原性トリインフルエンザウイルスの蔓延を阻止できる等の点で好ましい。
【００３３】
例えば具体的には、
Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（ソ連型）、Ａ型インフルエンザウイルスＨＲ／Ｋ５／０１（Ｈ９Ｎ２）、Ａ型インフルエンザウイルス愛知／２／６８（Ｈ３Ｎ２）（人分離株）、Ａ型インフルエンザウイルスコハクチョウ／島根／４９９／８３（Ｈ５Ｎ３）（鳥分離株）等のＡ型インフルエンザウイルスやＢ型インフルエンザウイルスＳｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２等のＢ型インフルエンザウイルス等のオルトミクソウイルス科
鶏伝染性気管支炎ウイルス ボーデット株４２や重症呼吸器感染症（ＳＡＲＳ）ウイルス等のコロナウイルス科
ニューカッスル病ウイルス ラソーダ株及びＫｒＫＪＷ／４９株等のパラミクソウイルス科
のウイルスに適用されることが好ましい。
【００３４】
本発明の抗ウイルス剤を含有させて、各種抗ウイルス材として使用に供される。かかる抗ウイルス材としては、本発明の抗ウイルス剤を含有すれば、固体であっても、液体であっても、また、それらの混合、複合であってもよい。
【００３５】
かかる抗ウイルス材としては、ブタ、ウシ、ヒツジ等の家畜類の飼料；ニワトリ、ガチョウ、アヒル等の家禽類の飼料；エアコンディショナー、空気清浄機、掃除機等のフィルター；家庭用、医療用、作業用等のマスク；接着剤；床拭き材、壁拭き材等の拭き材；消臭材；キッチン用部材；水虫治療薬、うがい薬、褥瘡の感染予防剤等の薬剤；不織布、糸、織布、壁材等の部材等が好ましいものとして挙げられる。
【００３６】
例えば、本発明の抗ウイルス剤を含有するフィルターであれば、このフィルターに接触したインフルエンザウイルス等のウイルスの感染力を減弱させることができる。これにより、例えばエアコンディショナー等に使用すれば、インフルエンザウイルス等のウイルス感染を防ぐことができる。
【００３７】
また、本発明の抗ウイルス剤を飼料に含有させれば、ウイルス感染を防止し、発育促進効果がある。飼料に用いる場合は、特に制限されないが、本発明の抗ウイルス剤の粉末をそのまま飼料に混合する方法や、本発明の抗ウイルス剤を水に懸濁させ、飼料と混ぜ合わせる方法等が用いられる。本発明の抗ウイルス剤を飼料に混合する場合、飼料１００重量部に対して、本発明の抗ウイルス剤を微細焼成粉砕物換算で、０．００５重量部〜０．１５重量部混合することが好ましく、０．０７５重量部〜０．１重量部混合することが特に好ましい。微細焼成粉砕物が少なすぎると、抗ウイルス効果が得られない場合があり、多すぎると、細胞毒性が生じたり、環境を汚染したりする場合がある。
【００３８】
抗ウイルス剤を含有する液体として用いる場合では、床拭き剤等の拭き材等に用いるだけではなく、ウイルスに感染するのを予防するために、動物に摂取させることも可能である。ペットや、ブタ、ウシ、ニワトリ、ヒツジ等の家畜に継続して飲ませ続けることで、有益な菌を殺さずに、有害なウイルスを不活性化させ、ペットや家畜はもとより、人の健康も守ることが可能である。
【００３９】
本発明の貝殻の微細焼成粉砕物を含有する抗ウイルス剤が優れた抗ウイルス活性を示す作用・原理は明らかではなく、また本発明はかかる作用・原理の範囲に限定されるわけではないが、以下のことが考えられる。すなわち、貝殻の主成分である炭酸カルシウムが焼成されて生成する酸化カルシウム、それと水との反応物（水酸化カルシウム）、及び／又は、貝殻に含有されるその他の化合物が、更に形状が微細化されることによって、インフルエンザウイルス等のウイルスに対して即効的に作用するためであると考えられる。
【実施例】
【００４０】
以下に、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限りこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４１】
実施例１
（１）微細焼成粉砕物Ａの製造方法
青森県産のホタテガイの貝殻を、粒径５ｍｍ程度に乾式ボールミルを用いて荒潰しをしてから、空気中で１０５０℃〜１１００℃で３時間焼成した。この焼成物を、乾式ビーズミル粉砕機（アジサワ・ファインテック社製）で約２時間処理し、焼成粉砕物ａを得た。この「焼成粉砕物ａ」の体積粒径分布を図１、個数粒径分布を図２に示す。焼成粉砕物ａの１０％（体積）粒径は８．５μｍ、５０％（体積）粒径は１８．４μｍ、９０％（体積）粒径は４３．７μｍ、体積平均粒径は１８．４μｍであり、１０％（個数）粒径は３．３μｍ、５０％（個数）粒径は６．１μｍ、９０％（個数）粒径は１３．２μｍ、個数平均粒径は６．１μｍであった。また、比表面積は０．３９ｍ２／ｃｍ３であった。
【００４２】
焼成粉砕物ａの、「水で１０質量倍に希釈して懸濁攪拌した液の室温におけるｐＨ」、灰分及び含有元素を表１に示す。ただし、表１以外にも微量成分を含有する可能性が考えられ、従って、本発明は、抗ウイルス効果が表１に記載されたものに起因して奏されているものには限定されない。焼成粉砕物ａの主成分は酸化カルシウム（ＣａＯ）であった。この酸化カルシウムはホタテガイの貝殻の主成分である炭酸カルシウム（ＣａＣＯ３）が焼成により脱炭酸して生成したものである。
【００４３】
【表１】
【００４４】
その後、焼成粉砕物ａを１０質量％となるように水に懸濁して、湿式ビーズミル粉砕機（アジサワ・ファインテック社製）で約２時間処理し、１０％（体積）粒径２．１μｍ、５０％（体積）粒径３．５μｍ、９０％（体積）粒径５．７μｍ、体積平均粒径３．５μｍであり、１０％（個数）粒径１．３μｍ、５０％（個数）粒径２．２μｍ、９０％（個数）粒径３．７μｍ、個数平均粒径２．２μｍ、比表面積１．８５ｍ２／ｃｍ３の微細焼成粉砕物Ａを得た。この微細焼成粉砕物Ａの体積粒径分布を図３、個数粒径分布を図４に示す。
この微細焼成粉砕物Ａの、「水で１０質量倍に希釈して懸濁攪拌した液の室温におけるｐＨ」、灰分及び含有元素の種類は、当然上記表１に示すものと同じである。
【００４５】
（２）抗ウイルス活性の評価方法
（ａ）試験溶液の調製
貝殻の微細焼成粉砕物Ａを、０．１５質量％になるように、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）に分散し、攪拌子を入れて、２０℃で１時間攪拌して、抗ウイルス活性の試験に用いる「試験溶液原液」とした。
【００４６】
（ｂ）供試ウイルス液の調製
Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）をウイルス株として使用した。ウイルス株は、１０日齢発育鶏卵の漿尿膜腔に接種し、３５℃、３日間培養後、採取した感染漿尿液を−８０℃で保存したものを、用時解凍後、減菌生理食塩水で希釈してウイルス液として用いた。
【００４７】
（ｃ）抗ウイルス活性の試験
減菌したマイクロチューブに、上記のウイルス液０．１ｍＬと、上記「試験溶液原液」を、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）で希釈した「０．７５質量％試験溶液」０．９ｍＬを加えた。その１分後に、上記のウイルス液と「０．０７５質量％試験溶液」の混合液を採取し、イヌ腎由来のMardin-Darby canine kidney（ＭＤＣＫ）細胞を用いて生残ウイルス量をプラック法で求め、プラック形成単位（plaque forming unit；ＰＦＵ）／ｍＬで生残ウイルス量（ＰＦＵ／ｍＬ）を表し、抗ウイルス活性の評価を行った。この評価方法は、「Tobita,K., 1975, Permanent canine kidney(MDCK) cells for isolation
and plaque assay of influenzaB virus. Med.Microbiol.Immunol.,62; p.23〜27.」に従って行った。その結果を図５に示す。
【００４８】
図５において、「対照」は、上記のウイルス液０．１ｍＬと、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）０．９ｍＬを混合し、５分後に、この混合液を採取し、上記と同様にして生残ウイルス量（ＰＦＵ／ｍＬ）を求めたものである。なお、図６、図７及び図８における「対照」についても同様である。
【００４９】
また、図５ないし図８において、縦軸の「１．Ｅ＋ｎ」（ｎは３〜９の整数）なる表現は、「１０ｎ」（ｎは３〜９の整数）を意味する。また、縦軸は「１．Ｅ＋０３」の下で切れているが、そこまで棒が達していないものは、全て「５００ＰＦＵ／ｍＬ未満」であることを意味する。
【００５０】
実施例２
実施例１において、抗ウイルス活性の試験を、「０．０５質量％試験溶液」及び「０．０２５質量％試験溶液」で行った以外は、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図５に合わせて示す。
【００５１】
実施例３
実施例１において、混合１分後に上記のウイルス液と「０．０７５質量％試験溶液」の混合液を採取したことに代えて、混合３０秒後、５分後、１０分後及び１５分後にも、ウイルス液と各濃度の試験溶液の混合液を採取して、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図５に合わせて示す。
【００５２】
実施例４
実施例１、実施例２及び実施例３において、ウイルス株として、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）の代わりに、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）を用いた以外は実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図６に合わせて示す。なお、図６には記載されていないが、１５分後には「生き残りウイルス量」が全ての濃度で５００ＰＦＵ／ｍＬ未満となった。
【００５３】
比較例１
実施例１において、貝殻の微細焼成粉砕物Ａの「０．０７５質量％試験溶液」の代わりに、微細粉砕を施していない貝殻の焼成粉砕物ａの０．０７５質量％試験溶液を用いた以外は、実施例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図７に示す。
【００５４】
比較例２
比較例１において、混合後１分混合液を採取したことに代えて、３０秒後、５分後及び１０分後にもウイルス液と試験溶液の混合液を採取して、比較例１と同様にして抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を、実施例１、実施例３の微細焼成粉砕物Ａの「０．０７５質量％試験溶液」での結果と合わせて、図７に合わせて示す。
【００５５】
比較例３
比較例１及び比較例２において、ウイルス株として、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）の代わりに、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）を用いた以外は、比較例１及び比較例２と同様にして、抗ウイルス活性の評価を行った。その結果を図８に合わせて示す。
【００５６】
図５及び図６の結果から明らかなように、本発明の貝殻の微細焼成粉砕物Ａを用いたもの（実施例１ないし実施例６）では、ウイルスに対して感染力を減弱させる性質を有していた。特に、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）に対しては、より即効的に作用して、ウイルスの感染力を消失させることが明らかになった。
【００５７】
一方、本発明の微細焼成粉砕物Ａではなく、焼成粉砕物ａを含有するもの（比較例１ないし比較例３）では、実施例と比較して何れも抗ウイルス活性が低かった。例えば、図７に示すように、０．０７５質量％試験溶液、Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型）について、生残ウイルス量を対照と比較すると、微細焼成粉砕物Ａは、３０秒間で既に約３０００分の１まで低下したのに対して、焼成粉砕物ａは３０秒間で約１０分の１までしか低下しなかった。また、０．０７５質量％試験溶液、Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）についても同様に生残ウイルス量を対照と比較すると、微細焼成粉砕物Ａは、３０秒間で既に約４００分の１に低下したのに対して、焼成粉砕物ａは３０秒間で約５０分の１までしか低下しなかった（図８）。
【００５８】
このことは、微細粉末である微細焼成粉砕物Ａの平均粒径が焼成粉砕物ａに比べて小さいこと、比表面積が焼成粉砕物ａに比べて大きいことが、抗ウイルス活性に大きく寄与することを示すものであり、抗ウイルス活性を得るには、焼成粉砕物ａではなく、より微細粉末である微細焼成粉砕物Ａであることが必須であることが分かった。なお、焼成粉砕物ａのカルシウム含量は、微細焼成粉砕物Ａのその含量の約１／２と低かったことも抗ウイルス活性が弱い一つの原因であると考えられる。
【００５９】
実施例５
実施例１に記載の製造方法と同様にして、微細焼成粉砕物Ａを得た。その微細焼成粉砕物Ａを、減菌生理食塩水（０．９質量％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）水溶液）で希釈して、０．１質量％、０．４質量％、１質量％試験溶液を調製した。この各試験溶液を３種の濃度の違うインフルエンザウイルスに感染させた各グループのマウス各１０匹にそれぞれ注入し、感染させるために４時間放置し、マウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６０】
比較例４
実施例５において、試験溶液をマウスに注入しなかった以外は、実施例５と同様にしてマウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６１】
参考例１
実施例５において、５質量％試験溶液を用いた以外は、実施例５と同様にしてマウスの発病や死亡を２１日間毎日観察した。
【００６２】
その結果、０．１質量％、０．４質量％、１質量％試験溶液を与えたマウス（実施例５）は、何も与えていないマウス（比較例４）と比較して、明らかに死亡率も発病率も減少した。このことから、本発明の微細焼成粉砕物Ａを含有した試験溶液がマウスの体内に存在するインフルエンザウイルスの感染力を弱める又は殺す作用があることが分かった。
【００６３】
なお、５質量％試験溶液を与えたマウス（参考例１）は、何も与えていないマウス（比較例５）と比較すると、２１日後に死亡率、発病率が増加していた。この結果から、５質量％試験溶液はマウスには多すぎる摂取量であったことが考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の貝殻の微細焼成粉砕物Ａを用いた抗ウイルス剤は、ウイルスに対して感染力を減弱させる作用に優れているため、抗ウイルス剤をはじめ、抗ウイルス剤を含有するフィルター、飼料等の抗ウイルス材として広く利用されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】焼成粉砕物ａの体積粒径分布を示す図である。
【図２】焼成粉砕物ａの個数粒径分布を示す図である。
【図３】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの体積粒径分布を示す図である。
【図４】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの個数粒径分布を示す図である。
【図５】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの抗ウイルス活性（Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型））の試験結果を示す図である。
【図６】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａの抗ウイルス活性（Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）の試験結果を示す図である。
【図７】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａ、及び焼成粉砕物ａの抗ウイルス活性（Ａ型インフルエンザウイルスＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ／８）（ソ連型））の試験結果を示す図である。
【図８】本発明の抗ウイルス剤に含有される微細焼成粉砕物Ａ、及び焼成粉砕物ａの抗ウイルス活性（Ｂ型Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／２２２株（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）の試験結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤。
【請求項２】
該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が１５μｍ以下である請求項１記載の抗ウイルス剤。
【請求項３】
該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が０．１μｍ〜１０μｍの範囲である請求項１又は請求項２記載の抗ウイルス剤。
【請求項４】
該微細焼成粉砕物の比表面積が、０．４ｍ２／ｃｍ３以上である請求項１ないし請求項３の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項５】
該貝殻が、ホタテガイの貝殻である請求項１ないし請求項４の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項６】
該粉砕が、湿式ビーズミル粉砕を含むものである請求項１ないし請求項５の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項７】
該焼成の温度が７００℃〜１５００℃の範囲である請求項１ないし請求項６の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項８】
請求項１ないし請求項７の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤を含有することを特徴とする抗ウイルス材。
【請求項９】
該抗ウイルス材が、飼料、フィルター、マスク、接着剤、拭き材、消臭材、キッチン用部材、薬剤、布又は壁材である請求項８記載の抗ウイルス材。
【請求項１】
貝殻又は貝殻を荒潰ししたものを焼成及び粉砕して得られる微細焼成粉砕物を含有することを特徴とする抗ウイルス剤。
【請求項２】
該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が１５μｍ以下である請求項１記載の抗ウイルス剤。
【請求項３】
該微細焼成粉砕物の体積平均粒径が０．１μｍ〜１０μｍの範囲である請求項１又は請求項２記載の抗ウイルス剤。
【請求項４】
該微細焼成粉砕物の比表面積が、０．４ｍ２／ｃｍ３以上である請求項１ないし請求項３の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項５】
該貝殻が、ホタテガイの貝殻である請求項１ないし請求項４の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項６】
該粉砕が、湿式ビーズミル粉砕を含むものである請求項１ないし請求項５の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項７】
該焼成の温度が７００℃〜１５００℃の範囲である請求項１ないし請求項６の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤。
【請求項８】
請求項１ないし請求項７の何れかの請求項記載の抗ウイルス剤を含有することを特徴とする抗ウイルス材。
【請求項９】
該抗ウイルス材が、飼料、フィルター、マスク、接着剤、拭き材、消臭材、キッチン用部材、薬剤、布又は壁材である請求項８記載の抗ウイルス材。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２００８−１７９５５５（Ｐ２００８−１７９５５５Ａ）
【公開日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１３５９６（Ｐ２００７−１３５９６）
【出願日】平成１９年１月２４日（２００７．１．２４）
【出願人】（５０７０２５４３４）東京ナノ・バイオテクノロジー株式会社 (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１月２４日（２００７．１．２４）
【出願人】（５０７０２５４３４）東京ナノ・バイオテクノロジー株式会社 (1)
【Ｆターム（参考）】
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