転移を阻害するための方法および組成物
本発明は、概して、転移性表現型を発現する腫瘍細胞標的に対して親和性を有する抗体ファージ群の作製方法に関する。本発明はさらに、転移細胞上の細胞表面レセプターに特異的に結合する抗体組成物に関する。本発明は、類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体を提供する。転移性表現型を発現する腫瘍細胞は、活性化細胞表面レセプター（例えば、活性化インテグリンレセプターまたはαｖβ３インテグリンレセプター）を発現する細胞株であり得る。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する、抗体。
【請求項２】
配列番号２を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号４を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
相補性決定領域（ＣＤＲ）中にＲ−Ｇ−Ｄ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記相補性決定領域がＣＤＲ−Ｈ３である、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
前記転移細胞が、乳房、脳、肺、肝臓、または骨から選択される組織を標的とする、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１に記載の抗体を含有する、薬学的組成物。
【請求項８】
活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合し、非活性化αｖβ３インテグリンレセプターには結合しない、抗体。
【請求項９】
前記活性化αｖβ３インテグリンレセプターが類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合するリガンド模倣物を含む、抗体。
【請求項１１】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物の病状を処置するための方法。
【請求項１２】
前記病状が、腫瘍性疾患、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、良性または悪性の乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍性疾患が前記哺乳動物における腫瘍細胞の転移である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記病状が前記哺乳動物における乳癌の転移である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
配列番号２または配列番号４を含む抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物の病状を処置するための方法。
【請求項１６】
前記病状が、腫瘍性疾患、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記腫瘍性疾患が前記哺乳動物における腫瘍細胞の転移である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記病状が前記哺乳動物における乳癌の転移である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
標的組織への転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体を含む、細胞株。
【請求項２０】
前記腫瘍細胞改変体が、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫に由来する、請求項１９に記載の細胞株。
【請求項２１】
前記標的組織が脳、肝臓、肺または骨から選択される、請求項１９に記載の細胞株。
【請求項２２】
腫瘍細胞標的に対して親和性を有する抗体ファージ群の作製方法であって、以下：
癌患者のコホートから得た血中リンパ球ｃＤＮＡライブラリー由来のファージライブラリーを提供する工程；
非転移性表現型を発現する細胞株にて該ファージライブラリーをサブトラクトする工程；
該非転移性表現型を発現する細胞株とは結合しない第１の抗体ファージ群を選択する工程；
転移性表現型を発現する細胞株にて該第１の抗体ファージ群をパンニングする工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合する第２の抗体ファージ群を選択する工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合し、かつ、前記腫瘍細胞標的に結合する抗体ファージクローンを精製する工程；
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記転移性表現型を発現する細胞株が活性化細胞表面レセプターを発現する細胞株である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記活性化細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記転移性表現型を発現する細胞株が、標的組織に対して転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記標的組織が、脳、肝臓、肺または骨から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２２に記載の方法であって、さらに以下：
前記抗体ファージクローンを（ａ）細胞表面上に活性化インテグリンレセプターを発現する腫瘍細胞への結合；および（ｂ）細胞表面上に非活性化インテグリンレセプターを発現する腫瘍細胞への結合の低下について試験する工程
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記腫瘍細胞標的が転移細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記転移細胞が転移性の乳癌細胞である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項２４に記載の方法であって、Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋またはＭｎ＋＋から選択される陽イオン存在下で増加する活性化インテグリンレセプターを発現する前記細胞株に対する前記抗体ファージ群の結合効率を測定する工程をさらに包含する、方法。
【請求項３２】
前記抗体ファージ群が単鎖（ｓｃＦｖ）抗体ファージ群である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
癌治療薬を用いた処置による哺乳動物における腫瘍細胞を検出する方法であって、以下：
活性化インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体組成物に検出可能なマーカーを連結させる工程；
該検出可能なマーカー−抗体組成物複合体を哺乳動物または哺乳動物組織へ接触させる工程；
該検出マーカー−抗体組成物複合体と該哺乳動物組織中の該腫瘍細胞との結合を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項３４】
前記腫瘍細胞が転移性腫瘍細胞である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体の血漿中濃度が少なくとも４ヶ月間検出可能レベルを超えて維持されるように該抗細胞表面レセプター抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物における抗原への免疫応答を誘導または増強するための方法。
【請求項３６】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、その血漿中濃度が少なくとも４ヶ月間検出可能レベルを超えて維持されるように複数回投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗インテグリンレセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも２μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗細胞表面レセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも５μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗細胞表面レセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも１０μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト化抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト配列抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳動物の転移性癌疾患を処置するための方法であって、該哺乳動物が前記転移性癌疾患を処置されるように、細胞傷害性物質と結合した転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体を該哺乳動物へ投与する工程を包含する、方法。
【請求項４７】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞傷害性物質が細胞傷害性薬物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞傷害性物質が放射性同位体である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
哺乳動物組織サンプルにおける転移性腫瘍細胞表面上の活性化細胞表面レセプターを検出する方法であって、以下：
該哺乳動物組織を固相に固定化された第１のヒト抗体、および溶液中の第２のヒト抗体と接触させる工程であって、前記活性化細胞表面レセプターが該組織サンプル中に存在する場合に、前記第１の抗体および第２の抗体が前記活性化細胞表面レセプターの異なるエピトープに結合する、工程；
該組織サンプル中の該活性化細胞表面レセプターの存在を示唆する結合である、該第１の抗体および該第２の抗体への該活性化細胞表面レセプターの結合を検出する工程であって、該第１のヒト抗体および第２のヒト抗体が、癌患者のコホートから得られた血中のリンパ球ｃＤＮＡライブラリー由来のファージライブラリーにより提供される該第１のヒト抗体および該第２のヒト抗体をコードする核酸をサブクローニングすることにより産生される、工程；
非転移性表現型を発現する細胞株について該ファージライブラリーをサブトラクトする工程；
該非転移性表現型を発現する細胞株とは結合しない第１の抗体ファージ群を選択する工程；
転移性表現型を発現する細胞株において前記第１の抗体ファージ群をパンニングする工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合する第２の抗体ファージ群を選択する工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合し、かつ、腫瘍細胞標的に結合する抗体ファージクローンを精製する工程；
を包含する、方法。
【請求項５１】
前記活性化細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２の抗体が標識され、前記検出工程が前記活性化細胞表面レセプターへの前記第２の抗体の結合を検出する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記組織サンプルは、前記固相に固定化された第１のヒト抗体群および溶液中の第２のヒト抗体群と接触され、該第１の群および該第２の群の構成要素が前記活性化細胞表面レセプターの異なるエピトープに結合する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記第２のヒト抗体群が標識されている、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の各々が、前記活性化細胞表面レセプター上のそれらの各エピトープに対し少なくとも１０９Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の各々が、前記活性化細胞表面レセプターに対し少なくとも１０１０Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５８】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体が、前記活性化細胞表面レセプターに対し少なくとも１０１１Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５９】
前記活性化細胞表面レセプターに対する前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の結合が１時間以内に平衡に達する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６０】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体がＥ．ｃｏｌｉにおける組換え構築物の発現により産生される、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記第１の抗体および第２の抗体の分子の少なくとも９０％が前記活性化細胞表面レセプターに免疫反応性である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
病状に関連した転移が起こる傾向を有する細胞を干渉する方法であって、転移の危険性を有することが疑われる患者を、抗体に接触させる工程を包含し、該抗体は、類似で非転移性の細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合し、該抗体がそれに結合した細胞傷害性部分を有する、方法。
【請求項６３】
前記抗体組成物が配列番号２を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体組成物が配列番号４を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞傷害性部分が化学的毒素である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞傷害性部分が生物学的毒素である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞傷害性部分が放射性物質である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
前記結合が共有結合である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
前記結合がリガンド相互作用である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
前記結合が物理学的相互作用である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
前記結合が管内への封じ込めを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項７２】
前記管がリポソームまたは他の血液循環血管である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
病状に関連した転移が起こる傾向を有する細胞を同定する方法であって、転移の危険性を有することが疑われる患者を、類似で非転移性の細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体と接触させる工程を包含し、該抗体が該抗体に結合した画像化部分を有する、方法。
【請求項７４】
前記画像化部分が、磁気共鳴スペクトロスコピー、×線スペクトロスコピー、または陽電子放射断層法（ＰＥＴ）によって画像化され得る、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記結合が共有結合である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記関連が非共有結合である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
哺乳動物の転移性癌疾患を処置するための方法であって、転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体を該哺乳動物に投与する工程、および、該転移細胞のプログラム細胞死を誘導する工程を包含する方法であって、このようにして、該哺乳動物が該転移性癌疾患の処置を受ける、方法。
【請求項７８】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、単離Ｂｃ−１２ポリヌクレオチド。
【請求項８１】
配列番号１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または、Ｂｃ−１２と生物学的機能を共有するヌクレオチド配列を含む、単離ポリペプチド。
【請求項８２】
請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項８３】
前記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、宿主細胞における該ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列と作動可能に連結されている、請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項８４】
請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、または該細胞の子孫。
【請求項８５】
配列番号３に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、単離Ｂｃ−１５ポリヌクレオチド。
【請求項８６】
配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または、Ｂｃ−１５と生物学的機能を共有するヌクレオチド配列を含む、単離ポリペプチド。
【請求項８７】
請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項８８】
前記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、宿主細胞における該ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列と作動可能に連結されている、請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項８９】
請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、または該細胞の子孫。
【請求項９０】
哺乳動物中での試験化合物の抗転移活性を決定するための方法であって、以下：
標的組織への転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体を該哺乳動物に投与する工程；
該試験化合物を該哺乳動物へ投与する工程；
コントロール哺乳動物中のコントロール化合物の抗転移活性と比較して、該哺乳動物中の該試験化合物の抗転移活性を測定する工程、
を包含する、方法。
【請求項９１】
前記哺乳動物の前記標的組織における転移性病巣を測定する工程をさらに包含する請求項９０に記載の方法であって、コントロール化合物に応答するコントロール動物の転移性病巣に対する前記試験化合物に応答する該哺乳動物の転移性病巣の縮小が該試験化合物の抗転移活性を示す、方法。
【請求項９２】
前記腫瘍細胞改変体および前記試験化合物が前記哺乳動物の末梢血循環へ投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記腫瘍細胞改変体および前記試験化合物が前記哺乳動物の乳腺脂肪パッドへと同所的に投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
前記哺乳動物が、げっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、または非ヒト霊長類である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記哺乳動物がマウスである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記哺乳動物が免疫欠損マウスである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記腫瘍細胞改変体が、ＢＣＭ−１、ＢＣＭ−２またはＢＭＳである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９９】
前記試験化合物が、抗体、単鎖Ｆｖ抗体、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ分子、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する、抗体。
【請求項２】
配列番号２を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号４を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
相補性決定領域（ＣＤＲ）中にＲ−Ｇ−Ｄ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記相補性決定領域がＣＤＲ−Ｈ３である、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
前記転移細胞が、乳房、脳、肺、肝臓、または骨から選択される組織を標的とする、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１に記載の抗体を含有する、薬学的組成物。
【請求項８】
活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合し、非活性化αｖβ３インテグリンレセプターには結合しない、抗体。
【請求項９】
前記活性化αｖβ３インテグリンレセプターが類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合するリガンド模倣物を含む、抗体。
【請求項１１】
類似の非転移細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物の病状を処置するための方法。
【請求項１２】
前記病状が、腫瘍性疾患、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、良性または悪性の乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍性疾患が前記哺乳動物における腫瘍細胞の転移である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記病状が前記哺乳動物における乳癌の転移である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
配列番号２または配列番号４を含む抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物の病状を処置するための方法。
【請求項１６】
前記病状が、腫瘍性疾患、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記腫瘍性疾患が前記哺乳動物における腫瘍細胞の転移である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記病状が前記哺乳動物における乳癌の転移である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
標的組織への転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体を含む、細胞株。
【請求項２０】
前記腫瘍細胞改変体が、充実性腫瘤、血液悪性疾患、白血病、結腸直腸癌、乳癌、子宮癌、子宮平滑筋腫、卵巣癌、子宮内膜癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、前立腺癌、前立腺肥大、下垂体癌、腺筋症、腺癌、髄膜腫、黒色腫、骨肉腫、多発性骨髄腫、ＣＮＳ癌、神経膠腫、または星状芽細胞腫に由来する、請求項１９に記載の細胞株。
【請求項２１】
前記標的組織が脳、肝臓、肺または骨から選択される、請求項１９に記載の細胞株。
【請求項２２】
腫瘍細胞標的に対して親和性を有する抗体ファージ群の作製方法であって、以下：
癌患者のコホートから得た血中リンパ球ｃＤＮＡライブラリー由来のファージライブラリーを提供する工程；
非転移性表現型を発現する細胞株にて該ファージライブラリーをサブトラクトする工程；
該非転移性表現型を発現する細胞株とは結合しない第１の抗体ファージ群を選択する工程；
転移性表現型を発現する細胞株にて該第１の抗体ファージ群をパンニングする工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合する第２の抗体ファージ群を選択する工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合し、かつ、前記腫瘍細胞標的に結合する抗体ファージクローンを精製する工程；
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記転移性表現型を発現する細胞株が活性化細胞表面レセプターを発現する細胞株である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記活性化細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記転移性表現型を発現する細胞株が、標的組織に対して転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記標的組織が、脳、肝臓、肺または骨から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２２に記載の方法であって、さらに以下：
前記抗体ファージクローンを（ａ）細胞表面上に活性化インテグリンレセプターを発現する腫瘍細胞への結合；および（ｂ）細胞表面上に非活性化インテグリンレセプターを発現する腫瘍細胞への結合の低下について試験する工程
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記腫瘍細胞標的が転移細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記転移細胞が転移性の乳癌細胞である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項２４に記載の方法であって、Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋またはＭｎ＋＋から選択される陽イオン存在下で増加する活性化インテグリンレセプターを発現する前記細胞株に対する前記抗体ファージ群の結合効率を測定する工程をさらに包含する、方法。
【請求項３２】
前記抗体ファージ群が単鎖（ｓｃＦｖ）抗体ファージ群である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
癌治療薬を用いた処置による哺乳動物における腫瘍細胞を検出する方法であって、以下：
活性化インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体組成物に検出可能なマーカーを連結させる工程；
該検出可能なマーカー−抗体組成物複合体を哺乳動物または哺乳動物組織へ接触させる工程；
該検出マーカー−抗体組成物複合体と該哺乳動物組織中の該腫瘍細胞との結合を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項３４】
前記腫瘍細胞が転移性腫瘍細胞である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体の血漿中濃度が少なくとも４ヶ月間検出可能レベルを超えて維持されるように該抗細胞表面レセプター抗体を哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物における抗原への免疫応答を誘導または増強するための方法。
【請求項３６】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、その血漿中濃度が少なくとも４ヶ月間検出可能レベルを超えて維持されるように複数回投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗インテグリンレセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも２μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗細胞表面レセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも５μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗細胞表面レセプター抗体が、前記哺乳動物における前記抗細胞表面レセプター抗体の血漿中濃度を少なくとも４ヶ月間、少なくとも１０μｇ／ｍｌとするような量および間隔で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト化抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
活性化インテグリンレセプターに対する前記抗体がヒト配列抗活性化インテグリンレセプター抗体である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳動物の転移性癌疾患を処置するための方法であって、該哺乳動物が前記転移性癌疾患を処置されるように、細胞傷害性物質と結合した転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体を該哺乳動物へ投与する工程を包含する、方法。
【請求項４７】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞傷害性物質が細胞傷害性薬物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞傷害性物質が放射性同位体である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
哺乳動物組織サンプルにおける転移性腫瘍細胞表面上の活性化細胞表面レセプターを検出する方法であって、以下：
該哺乳動物組織を固相に固定化された第１のヒト抗体、および溶液中の第２のヒト抗体と接触させる工程であって、前記活性化細胞表面レセプターが該組織サンプル中に存在する場合に、前記第１の抗体および第２の抗体が前記活性化細胞表面レセプターの異なるエピトープに結合する、工程；
該組織サンプル中の該活性化細胞表面レセプターの存在を示唆する結合である、該第１の抗体および該第２の抗体への該活性化細胞表面レセプターの結合を検出する工程であって、該第１のヒト抗体および第２のヒト抗体が、癌患者のコホートから得られた血中のリンパ球ｃＤＮＡライブラリー由来のファージライブラリーにより提供される該第１のヒト抗体および該第２のヒト抗体をコードする核酸をサブクローニングすることにより産生される、工程；
非転移性表現型を発現する細胞株について該ファージライブラリーをサブトラクトする工程；
該非転移性表現型を発現する細胞株とは結合しない第１の抗体ファージ群を選択する工程；
転移性表現型を発現する細胞株において前記第１の抗体ファージ群をパンニングする工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合する第２の抗体ファージ群を選択する工程；
該転移性表現型を発現する細胞株に結合し、かつ、腫瘍細胞標的に結合する抗体ファージクローンを精製する工程；
を包含する、方法。
【請求項５１】
前記活性化細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２の抗体が標識され、前記検出工程が前記活性化細胞表面レセプターへの前記第２の抗体の結合を検出する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記組織サンプルは、前記固相に固定化された第１のヒト抗体群および溶液中の第２のヒト抗体群と接触され、該第１の群および該第２の群の構成要素が前記活性化細胞表面レセプターの異なるエピトープに結合する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記第２のヒト抗体群が標識されている、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の各々が、前記活性化細胞表面レセプター上のそれらの各エピトープに対し少なくとも１０９Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の各々が、前記活性化細胞表面レセプターに対し少なくとも１０１０Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５８】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体が、前記活性化細胞表面レセプターに対し少なくとも１０１１Ｍ−１の親和性を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５９】
前記活性化細胞表面レセプターに対する前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体の結合が１時間以内に平衡に達する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６０】
前記第１のヒト抗体および第２のヒト抗体がＥ．ｃｏｌｉにおける組換え構築物の発現により産生される、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記第１の抗体および第２の抗体の分子の少なくとも９０％が前記活性化細胞表面レセプターに免疫反応性である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
病状に関連した転移が起こる傾向を有する細胞を干渉する方法であって、転移の危険性を有することが疑われる患者を、抗体に接触させる工程を包含し、該抗体は、類似で非転移性の細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合し、該抗体がそれに結合した細胞傷害性部分を有する、方法。
【請求項６３】
前記抗体組成物が配列番号２を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体組成物が配列番号４を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞傷害性部分が化学的毒素である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞傷害性部分が生物学的毒素である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞傷害性部分が放射性物質である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】
前記結合が共有結合である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】
前記結合がリガンド相互作用である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
前記結合が物理学的相互作用である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
前記結合が管内への封じ込めを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項７２】
前記管がリポソームまたは他の血液循環血管である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
病状に関連した転移が起こる傾向を有する細胞を同定する方法であって、転移の危険性を有することが疑われる患者を、類似で非転移性の細胞と比較して転移状態にある細胞上に示差的に産生される活性化αｖβ３インテグリンレセプターに特異的に結合する抗体と接触させる工程を包含し、該抗体が該抗体に結合した画像化部分を有する、方法。
【請求項７４】
前記画像化部分が、磁気共鳴スペクトロスコピー、×線スペクトロスコピー、または陽電子放射断層法（ＰＥＴ）によって画像化され得る、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記結合が共有結合である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記関連が非共有結合である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
哺乳動物の転移性癌疾患を処置するための方法であって、転移細胞上の細胞表面レセプターに対する抗体を該哺乳動物に投与する工程、および、該転移細胞のプログラム細胞死を誘導する工程を包含する方法であって、このようにして、該哺乳動物が該転移性癌疾患の処置を受ける、方法。
【請求項７８】
前記細胞表面レセプターが活性化インテグリンレセプターである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記活性化インテグリンレセプターがαｖβ３インテグリンレセプターである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、単離Ｂｃ−１２ポリヌクレオチド。
【請求項８１】
配列番号１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または、Ｂｃ−１２と生物学的機能を共有するヌクレオチド配列を含む、単離ポリペプチド。
【請求項８２】
請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項８３】
前記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、宿主細胞における該ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列と作動可能に連結されている、請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項８４】
請求項８０に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、または該細胞の子孫。
【請求項８５】
配列番号３に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、単離Ｂｃ−１５ポリヌクレオチド。
【請求項８６】
配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または、Ｂｃ−１５と生物学的機能を共有するヌクレオチド配列を含む、単離ポリペプチド。
【請求項８７】
請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項８８】
前記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、宿主細胞における該ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列と作動可能に連結されている、請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項８９】
請求項８５に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、または該細胞の子孫。
【請求項９０】
哺乳動物中での試験化合物の抗転移活性を決定するための方法であって、以下：
標的組織への転移性ホーミング傾向を有する腫瘍細胞改変体を該哺乳動物に投与する工程；
該試験化合物を該哺乳動物へ投与する工程；
コントロール哺乳動物中のコントロール化合物の抗転移活性と比較して、該哺乳動物中の該試験化合物の抗転移活性を測定する工程、
を包含する、方法。
【請求項９１】
前記哺乳動物の前記標的組織における転移性病巣を測定する工程をさらに包含する請求項９０に記載の方法であって、コントロール化合物に応答するコントロール動物の転移性病巣に対する前記試験化合物に応答する該哺乳動物の転移性病巣の縮小が該試験化合物の抗転移活性を示す、方法。
【請求項９２】
前記腫瘍細胞改変体および前記試験化合物が前記哺乳動物の末梢血循環へ投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記腫瘍細胞改変体および前記試験化合物が前記哺乳動物の乳腺脂肪パッドへと同所的に投与される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
前記哺乳動物が、げっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、または非ヒト霊長類である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記哺乳動物がマウスである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記哺乳動物が免疫欠損マウスである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記腫瘍細胞改変体が、ＢＣＭ−１、ＢＣＭ−２またはＢＭＳである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９９】
前記試験化合物が、抗体、単鎖Ｆｖ抗体、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ分子、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である、請求項９０に記載の方法。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２００７−５２３６５０（Ｐ２００７−５２３６５０Ａ）
【公表日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５５３３１７（Ｐ２００６−５５３３１７）
【出願日】平成１７年２月１４日（２００５．２．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／００４６１２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９１８０５
【国際公開日】平成１７年１０月６日（２００５．１０．６）
【出願人】（５０１２４４２２２）ザ スクリプス リサーチ インスティテュート (33)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月１４日（２００５．２．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／００４６１２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９１８０５
【国際公開日】平成１７年１０月６日（２００５．１０．６）
【出願人】（５０１２４４２２２）ザ スクリプス リサーチ インスティテュート (33)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]