遅延型追加刺激免疫処置に対する迅速な応答
追加刺激免疫は、病原体に対する保護的免疫の迅速な誘導を引き起こし得る（例えば追加刺激用量の＜７日後に）。この迅速な応答は、活性化された免疫応答が必要であり得るイベントの直前に、追加刺激免疫処置を使用し得ることを意味する。例えば、典型的には特定の状況下で高齢の被験体に影響を与える病原体に対して、若い年齢のときに被験体を初回刺激し得、被験体が高齢になったときに、それらの特定の状況が予期される場合、免疫応答を迅速に動員し得る。１つの例は、被験体を、典型的には院内感染する感染に対して初回刺激し、そして次いで、予定した病院予約のすぐ前に、被験体が免疫警戒状態で入院するように、被験体の免疫応答を追加刺激することである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００８年６月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／１３３，１４０号（この完全な内容は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫処置の分野内である。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
初回刺激−追加刺激（ｐｒｉｍｅ−ｂｏｏｓｔ）免疫処置スケジュールの使用は周知である。例えば、小児は典型的に１５ヶ月齢までに様々な１次免疫処置を受け（例えばＤＴＰワクチン）、そして次いで４−６歳の間およびそれより上の年齢で追加刺激用量を受ける（例えばＴｄａｐワクチン）。しかし現在のスケジュールによると、追加刺激用量によって誘発される免疫応答は、免疫（例えば保護抗体力価）の迅速な再建を引き起こさない。さらに、１次免疫処置は、小児集団に影響を与える疾患に対する即時の保護を提供することを目的とし、そして追加刺激の目的は、この即時の保護を延長することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の開示）
現在、追加刺激免疫処置は、初回刺激用量が数年前に与えられて保護免疫が確立されなかったとしても、病原体に対する保護免疫の迅速な誘導を引き起こし得ることが見出されている（例えば追加刺激用量後の７日以内）。この遅延型追加刺激に対する迅速な応答は、追加刺激免疫処置を、活性化免疫応答を必要とし得るイベントの直前に使用し得ることを意味し、そして、後で必要になった場合に迅速な保護を提供するための免疫系を準備するために、初回刺激用量を使用する。従って、追加刺激用量の目的は、保護を延長させることではなく、保護を完成させることであり得る。その迅速な応答は、追加刺激免疫処置を、活性化免疫応答を必要とし得るイベントの直前に使用し得ることを意味する。例えば、典型的には高齢の被験体に特定の状況下で影響を与える病原体に対して、被験体を若い年齢で初回刺激し得、その被験体が年をとったときに、それらの特定の状況が予期される場合、免疫応答を迅速に動員し得る。１つの例は、典型的には院内感染する感染（例えばＭＲＳＡ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対して被験体を初回刺激し、そして次いで、予定された病院予約のすぐ前に、被験体が免疫警戒（ｉｍｍｕｎｅ−ａｌｅｒｔ）状態で入院するように、被験体の免疫応答を追加刺激することである。別の例は、典型的には出産中にうつされる感染（例えばＢ群連鎖球菌、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）に対して、女性を青春期に初回刺激し、そして次いで、出産の前に、女性が分娩時に有用な抗ＧＢＳ免疫を有するように、女性の免疫応答を追加刺激することである。
【０００５】
この初回／追加刺激アプローチは、病原体が初回刺激免疫処置以来、抗原的にゆるやかに変化（ｄｒｉｆｔ）しても、有効であり得ることも見出されている。従って、初回刺激免疫処置は「廃れることがない（ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｏｆ）」可能性があり、感染のリスクの多年前に投与することを可能にする。
【０００６】
従って、本発明は、被験体において免疫応答を惹起する方法を提供し、それは（ｉ）少なくとも１用量の初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程、ここでその初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対して一次免疫応答を誘発する、工程；および次いで（ｉｉ）追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程、ここでその追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に（またはそれより早く）、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する、工程を含む。
【０００７】
本発明はまた、被験体を初回刺激する方法を提供し、それは初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含み、ここでその初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発して免疫記憶の確立を可能にし、ここでその被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物が与えられ、上記追加刺激免疫原性組成物はその投与の２１日以内（またはより早く）に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【０００８】
本発明はまた、被験体において、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する方法を提供し、それは追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内（またはより早く）に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）その被験体は以前に、その病原体に対して一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられた。
【０００９】
以下で説明するように、追加刺激組成物にアジュバントを含むことが好ましい。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（病原体）
本発明を、様々な病原体に対して免疫化するために使用し得る。理想的には、一般的に小児期ではなく成人に起こる疾患に対して免疫化するためにふさわしい。同様に、現在の小児期の免疫処置スケジュールによってカバーされない病原体に対して免疫化するために十分ふさわしい（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉ、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、ロタウイルス、Ｈ３Ｎ２およびＨ１Ｎ１インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス）。本発明は、一般的に院内感染する病原体に対して非常に有用である。本発明はまた、一般的に出産中に感染する病原体に対して有用である。本発明のいくつかの実施態様において、その病原体はＨ５赤血球凝集素を有するインフルエンザＡウイルスではない。
【００１１】
従って、本発明をまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ株を含む）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種（「ＣｏＮＳ」、Ｓ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含む）、Ｃａｎｄｉｄａ株（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓのような）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、および腸外病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（「ＥｘＰＥＣ」）などの（しかしこれらに限らない）病原体に対して免疫化するために使用し得る。これらの病原体由来の免疫原は公知であり、例えば参考文献１−１８。
【００１２】
病原体は、複数の異なる病原性改変体で存在し得る。従って、特定の病原体に依存して、そのような改変体は、例えば血清群、血清型、免疫型、血液型亜型、次亜種、株、クレイド、または種であり得る。
【００１３】
（ヒト被験体）
被験体は、少なくとも１用量の初回刺激組成物および少なくとも１用量の追加刺激組成物を与えられる。いくつかの実施態様において、初回刺激組成物を投与するための基準は広いが、追加刺激組成物を投与するための基準はより狭く、例えば初回刺激組成物を、所定の集団中の実質的に全ての小児に与え得、一方追加刺激組成物を、関連する病原体による感染に特定のリスクがある成人にのみ与える。他の実施態様において、初回刺激および追加刺激組成物を、お互い実質的に同じ幅で投与する。
【００１４】
その被験体は（特に追加刺激用量のときに）、入院、そして従って院内感染にかかる増加したリスクがあり得る（例えば一般的な集団よりも高いリスク）。そのような被験体としては、消防士または武装軍隊のメンバーのような、熱傷の増加したリスクを有する被験体；武装軍隊または警察業務のメンバーのような、創傷の増加したリスクを有する被験体；内科医、外科医、または看護師のような医療従事者；獣医；ナーシングホーム居住者；侵襲的な医学的処置に備えているかまたはそれを受けている患者；美容手術に備えている被験体；補綴インプラント、例えば心臓弁、関節、慢性血管カテーテル、美容的インプラントに備えているかまたはそれを受けているかまたはそれを有する被験体；例えば末期の腎臓疾患を有する血液透析患者；持続的外来腹膜透析を有する患者；糖尿病患者；少なくとも６５歳、例えば≧７０歳、≧７５歳、≧８０歳、≧８５歳、≧９０歳の患者；皮膚科学的病状を有する患者；違法な静脈内薬物の使用者；ＨＩＶ陽性患者；がん患者；冠動脈バイパス患者；および移植患者が挙げられるがこれらに限らない。
【００１５】
特に病原体がＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅである場合には、その被験体は女性であり得る。
【００１６】
（初回刺激用量および追加刺激用量）
被験体に少なくとも１用量の初回刺激組成物および少なくとも１用量の追加刺激組成物を与える。初回刺激組成物および追加刺激組成物を、典型的には１年超離して、例えば≧１４ヶ月離して、≧１６ヶ月離して、≧１８ヶ月離して、≧２年離して、≧５年離して、≧１０年離して、≧１５年離して、≧２０年離して、≧２５年離して、≧３０年離して、≧３５年離して、≧４０年離して、≧４５年離して、≧５０年離して等、投与する。
【００１７】
初回刺激組成物は、病原体に対する１次免疫応答を誘発する。従って、それは典型的には病原体に対する抗体応答および記憶Ｂ細胞を誘発する。その効果は、免疫系を、後の追加刺激組成物に対する曝露のために備えることである。１用量より多い、例えば２用量の初回刺激組成物を与え得る。いくつかの実施態様において、その初回刺激組成物は、（少なくとも一時的に）病原体によって引き起こされる感染および／または疾患から被験体を保護する。他の実施態様において、その初回刺激組成物は、病原体によって引き起こされる感染および／または疾患から被験体を保護せず、そしてそのような保護は、追加刺激組成物によって提供される。
【００１８】
その初回刺激組成物を、１つまたはそれ以上の他のワクチンと共に投与し得る。例えば、初回刺激組成物を、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合型ワクチン（４価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチンのような）、肺炎球菌結合型ワクチン、ロタウイルスワクチン、インフルエンザウイルスワクチン、Ａ型肝炎ウイルスワクチン、単純ヘルペスウイルスワクチン、および／またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチンと実質的に同時に（例えば医療専門家またはワクチン接種センターへの同じ医療相談または訪問の間に）、被験体に投与し得る。例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅに対する初回刺激免疫処置を、例えばＴｄａｐワクチン、ＨＰＶワクチン、髄膜炎菌結合型ワクチン等と同時に、１１−１８歳の間に与え得る。
【００１９】
以前の初回刺激組成物の投与のために、追加刺激組成物は、病原体に対する２次免疫応答を誘発する。従って、初回刺激組成物によって誘発された記憶Ｂ細胞が活性化され、そしてそれらは迅速に増殖し得、高親和性血清抗体を分泌する形質細胞へと分化し得る。その結果は、被験体がその病原体によって引き起こされる感染および／または疾患に対して保護的な既往性免疫応答を開始することである。
【００２０】
その保護的な既往性免疫応答は、一般的に少なくとも抗体応答を含み、そしてその抗体応答は、中和および／またはオプソニン化抗体を含み得る。
【００２１】
その既往性の免疫応答は、追加刺激組成物が与えられてから２１日以内に、例えば≦２０日、≦１９日、≦１８日、≦１７日、≦１６日、≦１５日、≦１４日、≦１３日、≦１２日、≦１１日、≦１０日、≦９日、≦８日、≦７日、≦６日、≦５日、≦４日、≦３日、≦２日、または≦１日にも、被験体によって開始される。好ましい実施態様において、被験体は、追加刺激組成物が与えられてから≦７日以内に、保護的な既往性免疫応答を開始する。
【００２２】
いくつかの実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントの前に、例えば病院の予約の前、海外旅行の前、服務期間の前、戦闘の前、出産の前、居住者としてナーシングホームへ入居する前、侵襲的な医学的処置または手術の前、補綴インプラントを受ける前、血液透析の前、化学療法を受ける前、放射線療法を受ける前等に投与する。そのような実施態様において、その追加刺激組成物を、保護的な既往性免疫応答のために必要な期間と少なくとも同じだけ前に投与する。例えば、保護的な既往性免疫応答を達成するまでに７日間かかる場合、追加刺激組成物を上記イベントの少なくとも７日前に投与する。しかし、典型的には、その追加刺激組成物を、上記イベントのあまりにも前、例えば１年より前には投与しない。
【００２３】
他の実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントを計画しているときに投与する。例えば、妊娠を計画している場合、その追加刺激組成物を、出産に備えた保護的な既往性免疫応答を提供するために、受胎前、または受胎後に女性に投与し得る。
【００２４】
他の実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントとは関係がない任意のときに、例えば特定の年齢のときに投与する。
【００２５】
初回刺激組成物および追加刺激組成物はそれぞれ、同じ病原体に対する免疫応答を誘発する免疫原を含む。その初回刺激免疫原および追加刺激免疫原はそれぞれ、典型的にはＴ依存性抗原を含む。それらは、同じ免疫原または異なる免疫原を含み得る。その免疫原は、あらゆる適当な形態をとり得、例えばそれはタンパク質、複合糖類、外膜小胞、不活化した細胞全体等を含み得る。
【００２６】
病原体が、複数の異なる病原性改変体で存在する場合、その初回刺激免疫原および追加刺激免疫原は、同じ改変体由来、または異なる改変体由来であり得る。例えば、初回刺激および追加刺激免疫原は、同じ病原体の、異なる血清群、異なる血清型、異なる免疫型、異なる血液型亜型、異なる次亜種、異なる株、異なるクレイド、または異なる種由来であり得る。例えばＨ５インフルエンザの場合、追加刺激赤血球凝集素は、初回刺激赤血球凝集素と異なるクレイド由来であり得る。
【００２７】
初回刺激組成物および／または追加刺激組成物は、免疫学的アジュバントを含み得る。
【００２８】
その初回刺激組成物および／または追加刺激組成物を、同じ経路によって、または異なる経路によって投与し得る。適当な経路としては、筋肉内注射（例えば腕または脚へ）、皮下注射、鼻腔内、経口、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）および経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）が挙げられるがこれらに限らない。
【００２９】
（天然の初回刺激）
初回刺激用量投与の代わりとして、天然の感染が、被験体の免疫応答を初回刺激するために役立ち得る。その感染は、同じ病原体、または免疫学的に関連した病原体（例えば牛痘／天然痘の免疫学的関連のように）により得る。感染が同じ病原体種によるが、その病原体が複数の異なる病原性改変体で存在する場合、追加刺激用量は、そのような改変体であり得る（例えば以前に天然の感染を引き起こした種の、異なる血清群、血清型、免疫型、血液型亜型、次亜種、株、またはクレイド由来）。
【００３０】
その追加刺激組成物を、典型的には天然の感染の１年超後、例えば≧１４ヶ月後、≧１６ヶ月後、≧１８ヶ月後、≧２年後、≧５年後、≧１０年後、≧１５年後、≧２０年後、≧２５年後、≧３０年後、≧３５年後、≧４０年後、≧４５年後、≧５０年後等に投与する。
【００３１】
以前の感染のために、その追加刺激組成物は、その病原体に対する２次免疫応答を誘発する。従って、感染によって誘発された記憶Ｂ細胞が活性化され、そしてそれらは上記で記載したように迅速に増殖し得、形質細胞へ分化し得る。
【００３２】
従って、本発明は、被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を含む、被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する方法を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に（またはより早く）、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）以前の感染は被験体にその病原体に対する１次免疫応答を開始させた。
【００３３】
（医学的使用）
本発明はまた、本発明の方法において使用するための免疫原を提供する。
【００３４】
本発明はまた、病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用を提供し、ここで（ｉ）その被験体は以前に、その病原体に対して１次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられ；そして（ｉｉ）そのワクチンは、その投与の２１日以内に、その病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３５】
本発明はまた、後の追加刺激のために、被験体の免疫系を初回刺激するためのワクチンの製造における免疫原の使用を提供し、ここでその追加刺激は、その投与の２１日以内に、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発し、そしてその初回刺激はその病原体に対して１次免疫応答を誘発する。
【００３６】
本発明はまた、初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する１次免疫応答を生じるさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここでその被験体は後で追加免疫原性組成物が与えられ、それはその投与の２１日以内に、その病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３７】
本発明はまた、追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する二次免疫応答（ｂｏｏｓｔｅｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を生じさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）その被験体は以前に、その病原体に対する１次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられた。
【００３８】
本発明はまた、病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における、免疫原の使用を提供し、ここで（ｉ）被験体の以前の感染は、その病原体に対する１次免疫応答を開始させ、そして（ｉｉ）そのワクチンは、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３９】
本発明はまた、追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する二次免疫応答を生じるさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）以前の感染は、被験体にその病原体に対する１次免疫応答を開始させた。
【００４０】
（アジュバント）
初回刺激組成物および／または追加刺激組成物は、被験体において誘発される免疫応答（体液性および／または細胞性）を増強するために、免疫学的アジュバントを含み得る。両方の組成物がアジュバントを含む場合、それらは同じアジュバントかまたは異なるアジュバントを含み得る。２つのワクチンのうち１つのみがアジュバントを含む場合、好ましくは、アジュバントを含むのは２番目である。アジュバントを含む追加刺激用量の使用が、有効であることを下記に示し（研究Ｉ）、そしてアジュバントを含む初回刺激用量および追加刺激用量の使用が、最も良好な保護的既往性免疫応答を提供した。
【００４１】
本発明で使用するために適当なアジュバントとしては、ミネラルを含む組成物および水中油型エマルジョンが挙げられるが、これらに限らない。
【００４２】
ミネラルを含む組成物としては、カルシウム塩、アルミニウム塩、またはその混合物が挙げられ得る。適当なカルシウム塩としては、リン酸カルシウムが挙げられる（例えば参考文献１９で開示される「ＣＡＰ」粒子）。適当なアルミニウム塩としては、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩等が挙げられ、その塩は任意の適当な形態（例えばゲル、結晶性、非晶質等）をとる。これらの塩への吸着が好ましい。ミネラルを含む組成物をまた、金属塩の粒子として処方し得る［２０］。
【００４３】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントを使用し得る。これらの名称は慣習的なものであるが、どちらも存在する実際の化学的化合物の正確な説明ではないので、簡便さのためのみに使用する（例えば参考文献２４の第９章を参照のこと）。本発明は、一般的にアジュバントとして使用される、あらゆる「水酸化物」または「リン酸塩」アジュバントを使用し得る。
【００４４】
被験体に投与するための組成物におけるＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌ等である。有用な範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌの間である。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。
【００４５】
水中油型エマルジョンは、ワクチンのアジュバントとして特に適当であることが見出されている。様々なそのようなエマルジョンが公知であり、そしてそれらは典型的には、少なくとも１つの油（例えばスクアレン）および少なくとも１つの界面活性剤を含み、その油および界面活性剤は生物分解性（代謝可能）かつ生体適合性である。エマルジョン中の油滴は一般的に直径が５μｍ未満であり、そしてサブミクロンの直径さえ有し得、安定なエマルジョンを提供するために、これらの小さいサイズを、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅｒ）によって達成する。それらをフィルター滅菌に供し得るので、２２０ｎｍより小さいサイズを有する滴が好ましい。
【００４６】
本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントとしては、以下のものが挙げられるがこれらに限らない：
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンのエマルジョン。容積によるエマルジョンの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０、および約０．５％のＳｐａｎ８５であり得る。重量では、これらの比は、４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０、および０．４８％のＳｐａｎ８５となる。このアジュバントは、「ＭＦ５９」［２１−２３］として公知であり、参考文献２４の第１０章および参考文献２５の第１２章においてより詳細に記載されている。ＭＦ５９エマルジョンは、クエン酸イオン、例えば１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液を有利に含む。
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ８０のエマルジョン。このエマルジョンは、リン酸緩衝化生理食塩水を含み得る。これはまた、Ｓｐａｎ８５（例えば１％で）および／またはレシチンを含み得る。これらのエマルジョンは、２から１０％のスクアレン、２から１０％のトコフェロール、および０．３から３％のＴｗｅｅｎ８０を有し得、そしてスクアレン：トコフェロールの重量比は、好ましくは≦１である（より安定なエマルジョンを提供するため）。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は、約５：２の容積比で存在し得る。１つのそのようなエマルジョンを、ＰＢＳ中にＴｗｅｅｎ８０を溶解して２％の溶液を生じさせ、次いで９０ｍｌのこの溶液を、（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌのスクアレン）の混合物と混合し、次いでその混合物をマイクロフルイダイズすることによって作製し得る。できたエマルジョンは、例えば１００〜２５０ｎｍの間の、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径を有する、サブミクロンの油滴を有し得る。１０．６８ｍｇのスクアレン、１１．８６ｍｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび４．８６ｍｇのポリソルベート８０（０．２５ｍｌあたりまたは用量あたり）を含むアジュバントが理想的である。
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えばポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性非イオン性界面活性剤（例えばモノオレイン酸ソルビタンまたは「Ｓｐａｎ８０」のようなソルビタンエステルまたはマンニドエステル（ｍａｎｎｉｄｅ ｅｓｔｅｒ））を含むエマルジョン。そのエマルジョンは、好ましくは熱可逆的であり、および／または２００ｎｍより小さいサイズを有する少なくとも９０％の油滴（体積で）を有する［２６］。そのエマルジョンはまた、１つまたはそれより多く、以下のものを含み得る：アルジトール；凍結防止剤（例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはショ糖のような糖）；および／またはアルキルポリグリコシド。そのようなエマルジョンを、凍結乾燥し得る。
（一般）
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみから成り得、またはさらなる何かを含み得る（例えばＸ＋Ｙ）。
【００４７】
「実質的に」という用語は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まなくてもよい。必要な場合には、「実質的に」という用語は、本発明の定義から省略され得る。
【００４８】
数値ｘに関連して「約」という用語は任意であり、そして例えばｘ±１０％を意味する。
【実施例】
【００４９】
（発明を実施するための様式）
（ヒト研究Ｉ［２７、２８］）
被験体を、Ｈ５Ｎ３株Ａ／アヒル／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１９９７（クレイド０）から調製したインフルエンザワクチンで初回刺激した。そのワクチンには、アジュバントを加えなかった（グループ２）か、またはＭＦ５９水中スクアレンエマルジョン（ｓｑｕａｌｅｎｅ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）をアジュバントに加えた（グループ１）。被験体の３番目のグループ（グループ３）には、Ｈ５Ｎ３ワクチンを与えなかった。
【００５０】
６から８年後、そしてＨ５Ｎ１の世界的流行の発生リスクが高まったときに、被験体をＨ５Ｎ１株（クレイド１または２）から調製したインフルエンザワクチンで免疫処置した。０日目および２１日目に、ＭＦ５９アジュバントと共に２用量を投与した。従ってグループ１および２に、追加刺激組成物を与えた。
【００５１】
結果を表１に示す。
【００５２】
幾何平均抗体力価および血清応答は、初回刺激していない被験体よりも初回刺激した被験体において有意に高かった。ワクチン１用量の７日後までに、≧８０％のＭＦ５９−Ｈ５初回刺激レシピエントが、試験した全てのクレイド１、２．１、２．２、および２．３鳥類Ｈ５ウイルス改変体ならびにオリジナルのＡ／アヒル／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１９９７クレイド０抗原に対して、≧１：４０のセロプロテクティブ（ｓｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）ＨＡＩ力価を達成した。
【００５３】
クレイド０ワクチンによって以前に初回刺激した被験体は、初回刺激していない被験体よりも、新しいクレイドに対して、より良好かつより迅速に免疫応答を開始した。初回刺激した被験体の中で、多様なＨ５Ｎ１ウイルス改変体に対する保護的な交差反応抗体力価を、単一追加刺激用量の７日後までに認めた。初回刺激したグループの中で、アジュバントを加えた初回刺激用量が与えられた被験体は、アジュバントを加えずに初回刺激された被験体よりも、より良好な免疫応答を開始した。
【００５４】
これらの結果を、インフルエンザウイルスを用いて得たが、これらの結果は、関連する病原体による感染のリスクが低いときにワクチンの初回刺激用量を被験体に投与し得、そして次いでその免疫系を、リスクの高まった数年後に追加刺激して、１週間未満で保護的なレベルの免疫を提供し得るという原理の証明を提供する。この発見は、Ｈ５インフルエンザだけではなく、広い範囲の病原体、特に病院においてしばしば感染するものに対しても適用可能である。
【００５５】
（ヒト研究ＩＩ［３０］）
第ＩＩ相臨床試験を行って、Ｈ５Ｎ１ Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５由来の３．７５μｇのＨＡを含む、一価のＡＳ０３アジュバント添加ワクチンの、１回または２回の追加刺激投与の、１９−６１歳の成人における免疫原性を評価した。患者を以前に（約１４ヶ月前）、ＡＳ０３アジュバントを含むかまたは含まない、Ｈ５Ｎ１ Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１１９４／２００４由来の３．８μｇ、７．５μｇ、１５μｇまたは３０μｇのＨＡを含む、世界的流行候補ワクチン２用量でワクチン接種している（すなわち、全８グループ）。この研究は、新たな世界的流行株とは異種のＨ５Ｎ１株に基づいた世界的流行ワクチンで被験体を初回刺激した後に起こる急激な発生を模倣する。
【００５６】
初回刺激研究の分析は、アジュバント無添加ワクチンの２回の投与は、現在使用されている規制基準（ＣＨＭＰおよびＣＢＥＲからの）によって保護的であるとみなされる免疫応答を誘発するには十分でなかったことを示した。これらの被験体（４グループ）に、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５ワクチンを２回投与した；他の被験体には、単一追加刺激ワクチンを与えた；初回刺激していない被験体のコントロールグループには、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５ワクチンを２用量与えた。
【００５７】
１４ヶ月前に免疫処置された被験体（その初回刺激ワクチンがアジュバント添加または無添加に関わらず）の一部が、コントロール被験体と比較して、１用量の追加刺激ワクチンを与えた７日後に血清陽性になった。血清陽性率は、アジュバント添加初回刺激ワクチンが与えられた被験体においてより高かった。最後の追加刺激ワクチン接種の２１日後、全てのグループの大部分の被験体が血清陽性になった。
【００５８】
アジュバント添加初回刺激ワクチンが与えられた被験体において、追加刺激の７日後、１８−６０歳の成人に関して、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ（ＣＨＭＰ）によって必要とされる≧４０％のセロコンバージョン率の閾値を超え、そしてセロコンバージョン率は免疫処置の２１日後、高いままであった。セロコンバージョンの９５％信頼区間の下限は、７．５μｇおよび１５μｇグループの閾値より下であったが、初回刺激ワクチンがアジュバント無添加であった被験体においても、最初のワクチン接種の７日後、≧４０％のセロコンバージョン率を超えた。
【００５９】
追加刺激株と異なる株由来のアジュバント添加ワクチンで初回刺激した場合、被験体は、追加刺激株に対して適切なセロプロテクティブ体液性応答を生じた。１次のワクチン接種で使用した株からドリフトした株に対するセロプロテクティブ応答を、迅速に（７日以内と早く）生じる能力は、被験体がアジュバント添加ワクチンで初回刺激され、そしてアジュバント添加ワクチンで追加刺激された場合、１４ヶ月と長く維持される。追加刺激のために１次株からドリフトしたワクチン株を使用した場合、および追加刺激のために使用した株に対して試験した場合、アジュバント添加ワクチンによる１次ワクチン接種の６または１４ヶ月後に、アジュバント添加ワクチンで追加刺激した後得られるＨＩ抗体レベルは同様である。
【００６０】
持続的交差クレイドＣＤ４陽性および記憶Ｂ細胞応答を、アジュバント添加ワクチンによる１次ワクチン接種の１４ヶ月後に検出した。これらの応答は、初回刺激用量がアジュバント無添加であった被験体と比較してより高かった。交差クレイドＣＤ４陽性および記憶Ｂ細胞応答の増加を、全てのグループにおいて観察したが、その初回刺激ワクチンがアジュバント添加であった被験体においてはより高かった。
【００６１】
（ヒト研究ＩＩＩ［２９］）
１８から５９歳の健康なボランティアに、０日目に全ビリオンベロ細胞由来Ｈ５Ｎ１（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４）インフルエンザワクチンの、単一初回刺激ワクチン接種を与え、そして１年後に単一追加刺激用量（Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５）を与える。
【００６２】
この研究の第一の測定は、追加刺激ワクチン接種の２１日後に、保護と関連するワクチン株に対する抗体応答を有する被験体の数である（マイクロ中和試験によって測定される力価＞＝１：２０と定義される）。第二の測定は、初回刺激ワクチン接種の２１、４２、１８０および３６０日後、および追加刺激ワクチン接種の２１日後に、保護と関連する抗体応答を有する被験体の数である。
【００６３】
（ヒト研究ＩＶ［３０］）
１８−６０歳の健康な成人に、一価アジュバント添加卵由来スプリットＨ５Ｎ１ワクチンを、６ヶ月または１２ヶ月の間隔で２用量与えた。そのアジュバントは「ＡＳ０３」、スクアレンを含む水中油型エマルジョンであった。抗原用量は、投与量あたり３／７５μｇＨＡであった。２つの異なるワクチン；Ａ／ＶｉｅｔＮａｍ／１１９４／２００５株（クレイド１）由来の抗原を含む「ＶＴ」；およびＡ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／２００５株（クレイド２．１）由来の抗原を含む「ＩＮ」を使用した。４グループの患者（グループあたり約６５人の患者）を以下のように免疫処置した。
【００６４】
【表１】
血清陽性率およびＧＭＴを、ゼロ時、３週間後、２回目のワクチンのとき、２回目のワクチンの１週間後、および２回目のワクチンの３週間後に測定した。グループＢおよびＤのデータはまだ入手可能ではない；グループＡおよびＣのデータは以下のようであった。
【００６５】
【表２】
６ヶ月後に追加刺激用量を受けた全てのグループは、迅速かつ有効な免疫応答を開始し、両方の追加刺激後の時点で、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／２００５株およびＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１１９４／２００４株に対するＨＩ抗体のＧＭＴにおいて有意な増加を示した。さらに、追加刺激用量の７日以内に、全てのグループが両方の株に関してＣＨＭＰセロコンバージョン閾値（０日目をベースラインとして用いて、≧４０％セロコンバージョン）を満たし、そしてその応答は、少なくとも１４日後まで維持された。
【００６６】
上記ワクチンは広い交差クレイド免疫を与えることを示した。それは、（ｉ）２回目の用量が、最初の用量の数ヵ月後に与えられた場合、および（ｉｉ）２回目の用量が、異なるＨ５Ｎ１株由来であった場合でも維持された。さらなるデータとの比較において、２ワクチン接種用量は、２１日間隔または６ヶ月間隔のどちらかに関わらず、そのワクチン株に対して同等の免疫応答を誘発することを示し、このことは、２回目の用量の投与のタイミングは柔軟であり得、最初の免疫処置の６ヶ月後までに行い得ること、そしてこれは免疫応答の質を維持することを確認した。
【００６７】
１用量の初回刺激投与に続く６ヶ月後の異種のワクチン株を含む追加刺激用量は、これらのワクチンに関する全ての関連するＣＨＭＰおよびＦＤＡ基準を満たすかまたは超える。Ａｌｂｅｒｔ Ｏｓｔｅｒｈａｕｓ教授（Ｈｅａｄ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ）は、この研究において使用したワクチンが、「ドリフトしたＨ５Ｎ１株に対しても、広範かつ持続的な免疫を提供する」こと、および「２回目の用量を最初の用量の数ヶ月後に与える場合、異なるＨ５Ｎ１株を用いるとしても、この免疫レベルを維持し得る」ことを確認した。
【００６８】
（ヒト研究Ｖ）
被験体に、免疫学的初回刺激のために、アジュバント添加全ビリオンベロ由来Ｈ５Ｎ１（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４）インフルエンザワクチンを与えた。６個の異なる処方を、初回刺激のために使用した（投与量あたり３．７５μｇ、７．５μｇ、１５μｇ、または３０μｇの、４つのアジュバント添加ＨＡ用量；７．５μｇまたは１５μｇの、２つのアジュバント無添加ＨＡ用量）。１２−１７ヶ月後、７７人の患者に、異なるＨ５Ｎ１株（Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５）由来の７．５μｇのＨＡを含む追加刺激用量を与えた。０日目（初回刺激）、２１日目、４２日目、および１８０日目、および次いで０日目（追加刺激用量）、７日目、および２１日目に採取した血清を用いて、野生型Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５に対するマイクロ中和試験を用いて、免疫応答を評価した。ＧＭＴ値は、初回刺激後、追加刺激用量受取まで、全てのグループにおいて０−２０の範囲であった。次いで追加刺激用量は、ＧＭＴ値を急激に増加させた：７日後、ＧＭＴは５０−１００の範囲であり、そして追加刺激用量の２１日以内では、ＧＭＴは８０−２２０の範囲であった。追加刺激期における中和抗体応答（ＭＮ力価≧２０）を有する被験体のパーセンテージは以下のようであった。
【００６９】
【表３】
全体として、この結果は、このワクチンは記憶Ｂ細胞を誘導し、それは後のＨ５Ｎ１感染に対して即時の抗体応答を提供し得ることを示す。１次免疫処置の１２−１７ヶ月後の単一異種追加刺激は、最初のワクチンおよび追加刺激株の両方に対する非常に高力価の迅速な誘導を引き起こし、追加刺激ワクチン接種の７日後に９０−１００％のセロプロテクションを提供した。さらに、保護的免疫応答の迅速な誘導は、クレイド１初回刺激株およびクレイド２追加刺激株に対してだけでなく、クレイド２．２（シチメンチョウ／Ｔｕｒｋｅｙ）および２．３（Ａｎｈｕｉ）の代表的なウイルスに対しても達成された。
【００７０】
本発明は、単に例として記載され、そして本発明の範囲および精神の範囲内に留まりながら、修飾を行い得ることが理解される。
【００７１】
【表４】
（参考文献）
【００７２】
【化１】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００８年６月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／１３３，１４０号（この完全な内容は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫処置の分野内である。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
初回刺激−追加刺激（ｐｒｉｍｅ−ｂｏｏｓｔ）免疫処置スケジュールの使用は周知である。例えば、小児は典型的に１５ヶ月齢までに様々な１次免疫処置を受け（例えばＤＴＰワクチン）、そして次いで４−６歳の間およびそれより上の年齢で追加刺激用量を受ける（例えばＴｄａｐワクチン）。しかし現在のスケジュールによると、追加刺激用量によって誘発される免疫応答は、免疫（例えば保護抗体力価）の迅速な再建を引き起こさない。さらに、１次免疫処置は、小児集団に影響を与える疾患に対する即時の保護を提供することを目的とし、そして追加刺激の目的は、この即時の保護を延長することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の開示）
現在、追加刺激免疫処置は、初回刺激用量が数年前に与えられて保護免疫が確立されなかったとしても、病原体に対する保護免疫の迅速な誘導を引き起こし得ることが見出されている（例えば追加刺激用量後の７日以内）。この遅延型追加刺激に対する迅速な応答は、追加刺激免疫処置を、活性化免疫応答を必要とし得るイベントの直前に使用し得ることを意味し、そして、後で必要になった場合に迅速な保護を提供するための免疫系を準備するために、初回刺激用量を使用する。従って、追加刺激用量の目的は、保護を延長させることではなく、保護を完成させることであり得る。その迅速な応答は、追加刺激免疫処置を、活性化免疫応答を必要とし得るイベントの直前に使用し得ることを意味する。例えば、典型的には高齢の被験体に特定の状況下で影響を与える病原体に対して、被験体を若い年齢で初回刺激し得、その被験体が年をとったときに、それらの特定の状況が予期される場合、免疫応答を迅速に動員し得る。１つの例は、典型的には院内感染する感染（例えばＭＲＳＡ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対して被験体を初回刺激し、そして次いで、予定された病院予約のすぐ前に、被験体が免疫警戒（ｉｍｍｕｎｅ−ａｌｅｒｔ）状態で入院するように、被験体の免疫応答を追加刺激することである。別の例は、典型的には出産中にうつされる感染（例えばＢ群連鎖球菌、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）に対して、女性を青春期に初回刺激し、そして次いで、出産の前に、女性が分娩時に有用な抗ＧＢＳ免疫を有するように、女性の免疫応答を追加刺激することである。
【０００５】
この初回／追加刺激アプローチは、病原体が初回刺激免疫処置以来、抗原的にゆるやかに変化（ｄｒｉｆｔ）しても、有効であり得ることも見出されている。従って、初回刺激免疫処置は「廃れることがない（ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｏｆ）」可能性があり、感染のリスクの多年前に投与することを可能にする。
【０００６】
従って、本発明は、被験体において免疫応答を惹起する方法を提供し、それは（ｉ）少なくとも１用量の初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程、ここでその初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対して一次免疫応答を誘発する、工程；および次いで（ｉｉ）追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程、ここでその追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に（またはそれより早く）、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する、工程を含む。
【０００７】
本発明はまた、被験体を初回刺激する方法を提供し、それは初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含み、ここでその初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発して免疫記憶の確立を可能にし、ここでその被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物が与えられ、上記追加刺激免疫原性組成物はその投与の２１日以内（またはより早く）に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【０００８】
本発明はまた、被験体において、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する方法を提供し、それは追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内（またはより早く）に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）その被験体は以前に、その病原体に対して一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられた。
【０００９】
以下で説明するように、追加刺激組成物にアジュバントを含むことが好ましい。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（病原体）
本発明を、様々な病原体に対して免疫化するために使用し得る。理想的には、一般的に小児期ではなく成人に起こる疾患に対して免疫化するためにふさわしい。同様に、現在の小児期の免疫処置スケジュールによってカバーされない病原体に対して免疫化するために十分ふさわしい（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉ、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、ロタウイルス、Ｈ３Ｎ２およびＨ１Ｎ１インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス）。本発明は、一般的に院内感染する病原体に対して非常に有用である。本発明はまた、一般的に出産中に感染する病原体に対して有用である。本発明のいくつかの実施態様において、その病原体はＨ５赤血球凝集素を有するインフルエンザＡウイルスではない。
【００１１】
従って、本発明をまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ株を含む）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種（「ＣｏＮＳ」、Ｓ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含む）、Ｃａｎｄｉｄａ株（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓのような）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、および腸外病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（「ＥｘＰＥＣ」）などの（しかしこれらに限らない）病原体に対して免疫化するために使用し得る。これらの病原体由来の免疫原は公知であり、例えば参考文献１−１８。
【００１２】
病原体は、複数の異なる病原性改変体で存在し得る。従って、特定の病原体に依存して、そのような改変体は、例えば血清群、血清型、免疫型、血液型亜型、次亜種、株、クレイド、または種であり得る。
【００１３】
（ヒト被験体）
被験体は、少なくとも１用量の初回刺激組成物および少なくとも１用量の追加刺激組成物を与えられる。いくつかの実施態様において、初回刺激組成物を投与するための基準は広いが、追加刺激組成物を投与するための基準はより狭く、例えば初回刺激組成物を、所定の集団中の実質的に全ての小児に与え得、一方追加刺激組成物を、関連する病原体による感染に特定のリスクがある成人にのみ与える。他の実施態様において、初回刺激および追加刺激組成物を、お互い実質的に同じ幅で投与する。
【００１４】
その被験体は（特に追加刺激用量のときに）、入院、そして従って院内感染にかかる増加したリスクがあり得る（例えば一般的な集団よりも高いリスク）。そのような被験体としては、消防士または武装軍隊のメンバーのような、熱傷の増加したリスクを有する被験体；武装軍隊または警察業務のメンバーのような、創傷の増加したリスクを有する被験体；内科医、外科医、または看護師のような医療従事者；獣医；ナーシングホーム居住者；侵襲的な医学的処置に備えているかまたはそれを受けている患者；美容手術に備えている被験体；補綴インプラント、例えば心臓弁、関節、慢性血管カテーテル、美容的インプラントに備えているかまたはそれを受けているかまたはそれを有する被験体；例えば末期の腎臓疾患を有する血液透析患者；持続的外来腹膜透析を有する患者；糖尿病患者；少なくとも６５歳、例えば≧７０歳、≧７５歳、≧８０歳、≧８５歳、≧９０歳の患者；皮膚科学的病状を有する患者；違法な静脈内薬物の使用者；ＨＩＶ陽性患者；がん患者；冠動脈バイパス患者；および移植患者が挙げられるがこれらに限らない。
【００１５】
特に病原体がＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅである場合には、その被験体は女性であり得る。
【００１６】
（初回刺激用量および追加刺激用量）
被験体に少なくとも１用量の初回刺激組成物および少なくとも１用量の追加刺激組成物を与える。初回刺激組成物および追加刺激組成物を、典型的には１年超離して、例えば≧１４ヶ月離して、≧１６ヶ月離して、≧１８ヶ月離して、≧２年離して、≧５年離して、≧１０年離して、≧１５年離して、≧２０年離して、≧２５年離して、≧３０年離して、≧３５年離して、≧４０年離して、≧４５年離して、≧５０年離して等、投与する。
【００１７】
初回刺激組成物は、病原体に対する１次免疫応答を誘発する。従って、それは典型的には病原体に対する抗体応答および記憶Ｂ細胞を誘発する。その効果は、免疫系を、後の追加刺激組成物に対する曝露のために備えることである。１用量より多い、例えば２用量の初回刺激組成物を与え得る。いくつかの実施態様において、その初回刺激組成物は、（少なくとも一時的に）病原体によって引き起こされる感染および／または疾患から被験体を保護する。他の実施態様において、その初回刺激組成物は、病原体によって引き起こされる感染および／または疾患から被験体を保護せず、そしてそのような保護は、追加刺激組成物によって提供される。
【００１８】
その初回刺激組成物を、１つまたはそれ以上の他のワクチンと共に投与し得る。例えば、初回刺激組成物を、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合型ワクチン（４価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチンのような）、肺炎球菌結合型ワクチン、ロタウイルスワクチン、インフルエンザウイルスワクチン、Ａ型肝炎ウイルスワクチン、単純ヘルペスウイルスワクチン、および／またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチンと実質的に同時に（例えば医療専門家またはワクチン接種センターへの同じ医療相談または訪問の間に）、被験体に投与し得る。例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅに対する初回刺激免疫処置を、例えばＴｄａｐワクチン、ＨＰＶワクチン、髄膜炎菌結合型ワクチン等と同時に、１１−１８歳の間に与え得る。
【００１９】
以前の初回刺激組成物の投与のために、追加刺激組成物は、病原体に対する２次免疫応答を誘発する。従って、初回刺激組成物によって誘発された記憶Ｂ細胞が活性化され、そしてそれらは迅速に増殖し得、高親和性血清抗体を分泌する形質細胞へと分化し得る。その結果は、被験体がその病原体によって引き起こされる感染および／または疾患に対して保護的な既往性免疫応答を開始することである。
【００２０】
その保護的な既往性免疫応答は、一般的に少なくとも抗体応答を含み、そしてその抗体応答は、中和および／またはオプソニン化抗体を含み得る。
【００２１】
その既往性の免疫応答は、追加刺激組成物が与えられてから２１日以内に、例えば≦２０日、≦１９日、≦１８日、≦１７日、≦１６日、≦１５日、≦１４日、≦１３日、≦１２日、≦１１日、≦１０日、≦９日、≦８日、≦７日、≦６日、≦５日、≦４日、≦３日、≦２日、または≦１日にも、被験体によって開始される。好ましい実施態様において、被験体は、追加刺激組成物が与えられてから≦７日以内に、保護的な既往性免疫応答を開始する。
【００２２】
いくつかの実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントの前に、例えば病院の予約の前、海外旅行の前、服務期間の前、戦闘の前、出産の前、居住者としてナーシングホームへ入居する前、侵襲的な医学的処置または手術の前、補綴インプラントを受ける前、血液透析の前、化学療法を受ける前、放射線療法を受ける前等に投与する。そのような実施態様において、その追加刺激組成物を、保護的な既往性免疫応答のために必要な期間と少なくとも同じだけ前に投与する。例えば、保護的な既往性免疫応答を達成するまでに７日間かかる場合、追加刺激組成物を上記イベントの少なくとも７日前に投与する。しかし、典型的には、その追加刺激組成物を、上記イベントのあまりにも前、例えば１年より前には投与しない。
【００２３】
他の実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントを計画しているときに投与する。例えば、妊娠を計画している場合、その追加刺激組成物を、出産に備えた保護的な既往性免疫応答を提供するために、受胎前、または受胎後に女性に投与し得る。
【００２４】
他の実施態様において、その追加刺激組成物を、特定のイベントとは関係がない任意のときに、例えば特定の年齢のときに投与する。
【００２５】
初回刺激組成物および追加刺激組成物はそれぞれ、同じ病原体に対する免疫応答を誘発する免疫原を含む。その初回刺激免疫原および追加刺激免疫原はそれぞれ、典型的にはＴ依存性抗原を含む。それらは、同じ免疫原または異なる免疫原を含み得る。その免疫原は、あらゆる適当な形態をとり得、例えばそれはタンパク質、複合糖類、外膜小胞、不活化した細胞全体等を含み得る。
【００２６】
病原体が、複数の異なる病原性改変体で存在する場合、その初回刺激免疫原および追加刺激免疫原は、同じ改変体由来、または異なる改変体由来であり得る。例えば、初回刺激および追加刺激免疫原は、同じ病原体の、異なる血清群、異なる血清型、異なる免疫型、異なる血液型亜型、異なる次亜種、異なる株、異なるクレイド、または異なる種由来であり得る。例えばＨ５インフルエンザの場合、追加刺激赤血球凝集素は、初回刺激赤血球凝集素と異なるクレイド由来であり得る。
【００２７】
初回刺激組成物および／または追加刺激組成物は、免疫学的アジュバントを含み得る。
【００２８】
その初回刺激組成物および／または追加刺激組成物を、同じ経路によって、または異なる経路によって投与し得る。適当な経路としては、筋肉内注射（例えば腕または脚へ）、皮下注射、鼻腔内、経口、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）および経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）が挙げられるがこれらに限らない。
【００２９】
（天然の初回刺激）
初回刺激用量投与の代わりとして、天然の感染が、被験体の免疫応答を初回刺激するために役立ち得る。その感染は、同じ病原体、または免疫学的に関連した病原体（例えば牛痘／天然痘の免疫学的関連のように）により得る。感染が同じ病原体種によるが、その病原体が複数の異なる病原性改変体で存在する場合、追加刺激用量は、そのような改変体であり得る（例えば以前に天然の感染を引き起こした種の、異なる血清群、血清型、免疫型、血液型亜型、次亜種、株、またはクレイド由来）。
【００３０】
その追加刺激組成物を、典型的には天然の感染の１年超後、例えば≧１４ヶ月後、≧１６ヶ月後、≧１８ヶ月後、≧２年後、≧５年後、≧１０年後、≧１５年後、≧２０年後、≧２５年後、≧３０年後、≧３５年後、≧４０年後、≧４５年後、≧５０年後等に投与する。
【００３１】
以前の感染のために、その追加刺激組成物は、その病原体に対する２次免疫応答を誘発する。従って、感染によって誘発された記憶Ｂ細胞が活性化され、そしてそれらは上記で記載したように迅速に増殖し得、形質細胞へ分化し得る。
【００３２】
従って、本発明は、被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を含む、被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する方法を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に（またはより早く）、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）以前の感染は被験体にその病原体に対する１次免疫応答を開始させた。
【００３３】
（医学的使用）
本発明はまた、本発明の方法において使用するための免疫原を提供する。
【００３４】
本発明はまた、病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用を提供し、ここで（ｉ）その被験体は以前に、その病原体に対して１次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられ；そして（ｉｉ）そのワクチンは、その投与の２１日以内に、その病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３５】
本発明はまた、後の追加刺激のために、被験体の免疫系を初回刺激するためのワクチンの製造における免疫原の使用を提供し、ここでその追加刺激は、その投与の２１日以内に、病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発し、そしてその初回刺激はその病原体に対して１次免疫応答を誘発する。
【００３６】
本発明はまた、初回刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する１次免疫応答を生じるさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここでその被験体は後で追加免疫原性組成物が与えられ、それはその投与の２１日以内に、その病原体に対して保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３７】
本発明はまた、追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する二次免疫応答（ｂｏｏｓｔｅｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を生じさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）その被験体は以前に、その病原体に対する１次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物が与えられた。
【００３８】
本発明はまた、病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における、免疫原の使用を提供し、ここで（ｉ）被験体の以前の感染は、その病原体に対する１次免疫応答を開始させ、そして（ｉｉ）そのワクチンは、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する。
【００３９】
本発明はまた、追加刺激免疫原性組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体において病原体に対する二次免疫応答を生じるさせるための方法に使用するための免疫原を提供し、ここで（ｉ）その追加刺激免疫原性組成物は、その投与の２１日以内に、その病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し；そして（ｉｉ）以前の感染は、被験体にその病原体に対する１次免疫応答を開始させた。
【００４０】
（アジュバント）
初回刺激組成物および／または追加刺激組成物は、被験体において誘発される免疫応答（体液性および／または細胞性）を増強するために、免疫学的アジュバントを含み得る。両方の組成物がアジュバントを含む場合、それらは同じアジュバントかまたは異なるアジュバントを含み得る。２つのワクチンのうち１つのみがアジュバントを含む場合、好ましくは、アジュバントを含むのは２番目である。アジュバントを含む追加刺激用量の使用が、有効であることを下記に示し（研究Ｉ）、そしてアジュバントを含む初回刺激用量および追加刺激用量の使用が、最も良好な保護的既往性免疫応答を提供した。
【００４１】
本発明で使用するために適当なアジュバントとしては、ミネラルを含む組成物および水中油型エマルジョンが挙げられるが、これらに限らない。
【００４２】
ミネラルを含む組成物としては、カルシウム塩、アルミニウム塩、またはその混合物が挙げられ得る。適当なカルシウム塩としては、リン酸カルシウムが挙げられる（例えば参考文献１９で開示される「ＣＡＰ」粒子）。適当なアルミニウム塩としては、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩等が挙げられ、その塩は任意の適当な形態（例えばゲル、結晶性、非晶質等）をとる。これらの塩への吸着が好ましい。ミネラルを含む組成物をまた、金属塩の粒子として処方し得る［２０］。
【００４３】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントを使用し得る。これらの名称は慣習的なものであるが、どちらも存在する実際の化学的化合物の正確な説明ではないので、簡便さのためのみに使用する（例えば参考文献２４の第９章を参照のこと）。本発明は、一般的にアジュバントとして使用される、あらゆる「水酸化物」または「リン酸塩」アジュバントを使用し得る。
【００４４】
被験体に投与するための組成物におけるＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌ等である。有用な範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌの間である。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。
【００４５】
水中油型エマルジョンは、ワクチンのアジュバントとして特に適当であることが見出されている。様々なそのようなエマルジョンが公知であり、そしてそれらは典型的には、少なくとも１つの油（例えばスクアレン）および少なくとも１つの界面活性剤を含み、その油および界面活性剤は生物分解性（代謝可能）かつ生体適合性である。エマルジョン中の油滴は一般的に直径が５μｍ未満であり、そしてサブミクロンの直径さえ有し得、安定なエマルジョンを提供するために、これらの小さいサイズを、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅｒ）によって達成する。それらをフィルター滅菌に供し得るので、２２０ｎｍより小さいサイズを有する滴が好ましい。
【００４６】
本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントとしては、以下のものが挙げられるがこれらに限らない：
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンのエマルジョン。容積によるエマルジョンの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０、および約０．５％のＳｐａｎ８５であり得る。重量では、これらの比は、４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０、および０．４８％のＳｐａｎ８５となる。このアジュバントは、「ＭＦ５９」［２１−２３］として公知であり、参考文献２４の第１０章および参考文献２５の第１２章においてより詳細に記載されている。ＭＦ５９エマルジョンは、クエン酸イオン、例えば１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液を有利に含む。
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ８０のエマルジョン。このエマルジョンは、リン酸緩衝化生理食塩水を含み得る。これはまた、Ｓｐａｎ８５（例えば１％で）および／またはレシチンを含み得る。これらのエマルジョンは、２から１０％のスクアレン、２から１０％のトコフェロール、および０．３から３％のＴｗｅｅｎ８０を有し得、そしてスクアレン：トコフェロールの重量比は、好ましくは≦１である（より安定なエマルジョンを提供するため）。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は、約５：２の容積比で存在し得る。１つのそのようなエマルジョンを、ＰＢＳ中にＴｗｅｅｎ８０を溶解して２％の溶液を生じさせ、次いで９０ｍｌのこの溶液を、（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌのスクアレン）の混合物と混合し、次いでその混合物をマイクロフルイダイズすることによって作製し得る。できたエマルジョンは、例えば１００〜２５０ｎｍの間の、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径を有する、サブミクロンの油滴を有し得る。１０．６８ｍｇのスクアレン、１１．８６ｍｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび４．８６ｍｇのポリソルベート８０（０．２５ｍｌあたりまたは用量あたり）を含むアジュバントが理想的である。
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えばポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性非イオン性界面活性剤（例えばモノオレイン酸ソルビタンまたは「Ｓｐａｎ８０」のようなソルビタンエステルまたはマンニドエステル（ｍａｎｎｉｄｅ ｅｓｔｅｒ））を含むエマルジョン。そのエマルジョンは、好ましくは熱可逆的であり、および／または２００ｎｍより小さいサイズを有する少なくとも９０％の油滴（体積で）を有する［２６］。そのエマルジョンはまた、１つまたはそれより多く、以下のものを含み得る：アルジトール；凍結防止剤（例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはショ糖のような糖）；および／またはアルキルポリグリコシド。そのようなエマルジョンを、凍結乾燥し得る。
（一般）
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみから成り得、またはさらなる何かを含み得る（例えばＸ＋Ｙ）。
【００４７】
「実質的に」という用語は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まなくてもよい。必要な場合には、「実質的に」という用語は、本発明の定義から省略され得る。
【００４８】
数値ｘに関連して「約」という用語は任意であり、そして例えばｘ±１０％を意味する。
【実施例】
【００４９】
（発明を実施するための様式）
（ヒト研究Ｉ［２７、２８］）
被験体を、Ｈ５Ｎ３株Ａ／アヒル／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１９９７（クレイド０）から調製したインフルエンザワクチンで初回刺激した。そのワクチンには、アジュバントを加えなかった（グループ２）か、またはＭＦ５９水中スクアレンエマルジョン（ｓｑｕａｌｅｎｅ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）をアジュバントに加えた（グループ１）。被験体の３番目のグループ（グループ３）には、Ｈ５Ｎ３ワクチンを与えなかった。
【００５０】
６から８年後、そしてＨ５Ｎ１の世界的流行の発生リスクが高まったときに、被験体をＨ５Ｎ１株（クレイド１または２）から調製したインフルエンザワクチンで免疫処置した。０日目および２１日目に、ＭＦ５９アジュバントと共に２用量を投与した。従ってグループ１および２に、追加刺激組成物を与えた。
【００５１】
結果を表１に示す。
【００５２】
幾何平均抗体力価および血清応答は、初回刺激していない被験体よりも初回刺激した被験体において有意に高かった。ワクチン１用量の７日後までに、≧８０％のＭＦ５９−Ｈ５初回刺激レシピエントが、試験した全てのクレイド１、２．１、２．２、および２．３鳥類Ｈ５ウイルス改変体ならびにオリジナルのＡ／アヒル／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１９９７クレイド０抗原に対して、≧１：４０のセロプロテクティブ（ｓｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）ＨＡＩ力価を達成した。
【００５３】
クレイド０ワクチンによって以前に初回刺激した被験体は、初回刺激していない被験体よりも、新しいクレイドに対して、より良好かつより迅速に免疫応答を開始した。初回刺激した被験体の中で、多様なＨ５Ｎ１ウイルス改変体に対する保護的な交差反応抗体力価を、単一追加刺激用量の７日後までに認めた。初回刺激したグループの中で、アジュバントを加えた初回刺激用量が与えられた被験体は、アジュバントを加えずに初回刺激された被験体よりも、より良好な免疫応答を開始した。
【００５４】
これらの結果を、インフルエンザウイルスを用いて得たが、これらの結果は、関連する病原体による感染のリスクが低いときにワクチンの初回刺激用量を被験体に投与し得、そして次いでその免疫系を、リスクの高まった数年後に追加刺激して、１週間未満で保護的なレベルの免疫を提供し得るという原理の証明を提供する。この発見は、Ｈ５インフルエンザだけではなく、広い範囲の病原体、特に病院においてしばしば感染するものに対しても適用可能である。
【００５５】
（ヒト研究ＩＩ［３０］）
第ＩＩ相臨床試験を行って、Ｈ５Ｎ１ Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５由来の３．７５μｇのＨＡを含む、一価のＡＳ０３アジュバント添加ワクチンの、１回または２回の追加刺激投与の、１９−６１歳の成人における免疫原性を評価した。患者を以前に（約１４ヶ月前）、ＡＳ０３アジュバントを含むかまたは含まない、Ｈ５Ｎ１ Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１１９４／２００４由来の３．８μｇ、７．５μｇ、１５μｇまたは３０μｇのＨＡを含む、世界的流行候補ワクチン２用量でワクチン接種している（すなわち、全８グループ）。この研究は、新たな世界的流行株とは異種のＨ５Ｎ１株に基づいた世界的流行ワクチンで被験体を初回刺激した後に起こる急激な発生を模倣する。
【００５６】
初回刺激研究の分析は、アジュバント無添加ワクチンの２回の投与は、現在使用されている規制基準（ＣＨＭＰおよびＣＢＥＲからの）によって保護的であるとみなされる免疫応答を誘発するには十分でなかったことを示した。これらの被験体（４グループ）に、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５ワクチンを２回投与した；他の被験体には、単一追加刺激ワクチンを与えた；初回刺激していない被験体のコントロールグループには、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／０５ワクチンを２用量与えた。
【００５７】
１４ヶ月前に免疫処置された被験体（その初回刺激ワクチンがアジュバント添加または無添加に関わらず）の一部が、コントロール被験体と比較して、１用量の追加刺激ワクチンを与えた７日後に血清陽性になった。血清陽性率は、アジュバント添加初回刺激ワクチンが与えられた被験体においてより高かった。最後の追加刺激ワクチン接種の２１日後、全てのグループの大部分の被験体が血清陽性になった。
【００５８】
アジュバント添加初回刺激ワクチンが与えられた被験体において、追加刺激の７日後、１８−６０歳の成人に関して、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ（ＣＨＭＰ）によって必要とされる≧４０％のセロコンバージョン率の閾値を超え、そしてセロコンバージョン率は免疫処置の２１日後、高いままであった。セロコンバージョンの９５％信頼区間の下限は、７．５μｇおよび１５μｇグループの閾値より下であったが、初回刺激ワクチンがアジュバント無添加であった被験体においても、最初のワクチン接種の７日後、≧４０％のセロコンバージョン率を超えた。
【００５９】
追加刺激株と異なる株由来のアジュバント添加ワクチンで初回刺激した場合、被験体は、追加刺激株に対して適切なセロプロテクティブ体液性応答を生じた。１次のワクチン接種で使用した株からドリフトした株に対するセロプロテクティブ応答を、迅速に（７日以内と早く）生じる能力は、被験体がアジュバント添加ワクチンで初回刺激され、そしてアジュバント添加ワクチンで追加刺激された場合、１４ヶ月と長く維持される。追加刺激のために１次株からドリフトしたワクチン株を使用した場合、および追加刺激のために使用した株に対して試験した場合、アジュバント添加ワクチンによる１次ワクチン接種の６または１４ヶ月後に、アジュバント添加ワクチンで追加刺激した後得られるＨＩ抗体レベルは同様である。
【００６０】
持続的交差クレイドＣＤ４陽性および記憶Ｂ細胞応答を、アジュバント添加ワクチンによる１次ワクチン接種の１４ヶ月後に検出した。これらの応答は、初回刺激用量がアジュバント無添加であった被験体と比較してより高かった。交差クレイドＣＤ４陽性および記憶Ｂ細胞応答の増加を、全てのグループにおいて観察したが、その初回刺激ワクチンがアジュバント添加であった被験体においてはより高かった。
【００６１】
（ヒト研究ＩＩＩ［２９］）
１８から５９歳の健康なボランティアに、０日目に全ビリオンベロ細胞由来Ｈ５Ｎ１（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４）インフルエンザワクチンの、単一初回刺激ワクチン接種を与え、そして１年後に単一追加刺激用量（Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５）を与える。
【００６２】
この研究の第一の測定は、追加刺激ワクチン接種の２１日後に、保護と関連するワクチン株に対する抗体応答を有する被験体の数である（マイクロ中和試験によって測定される力価＞＝１：２０と定義される）。第二の測定は、初回刺激ワクチン接種の２１、４２、１８０および３６０日後、および追加刺激ワクチン接種の２１日後に、保護と関連する抗体応答を有する被験体の数である。
【００６３】
（ヒト研究ＩＶ［３０］）
１８−６０歳の健康な成人に、一価アジュバント添加卵由来スプリットＨ５Ｎ１ワクチンを、６ヶ月または１２ヶ月の間隔で２用量与えた。そのアジュバントは「ＡＳ０３」、スクアレンを含む水中油型エマルジョンであった。抗原用量は、投与量あたり３／７５μｇＨＡであった。２つの異なるワクチン；Ａ／ＶｉｅｔＮａｍ／１１９４／２００５株（クレイド１）由来の抗原を含む「ＶＴ」；およびＡ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／２００５株（クレイド２．１）由来の抗原を含む「ＩＮ」を使用した。４グループの患者（グループあたり約６５人の患者）を以下のように免疫処置した。
【００６４】
【表１】
血清陽性率およびＧＭＴを、ゼロ時、３週間後、２回目のワクチンのとき、２回目のワクチンの１週間後、および２回目のワクチンの３週間後に測定した。グループＢおよびＤのデータはまだ入手可能ではない；グループＡおよびＣのデータは以下のようであった。
【００６５】
【表２】
６ヶ月後に追加刺激用量を受けた全てのグループは、迅速かつ有効な免疫応答を開始し、両方の追加刺激後の時点で、Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／５／２００５株およびＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１１９４／２００４株に対するＨＩ抗体のＧＭＴにおいて有意な増加を示した。さらに、追加刺激用量の７日以内に、全てのグループが両方の株に関してＣＨＭＰセロコンバージョン閾値（０日目をベースラインとして用いて、≧４０％セロコンバージョン）を満たし、そしてその応答は、少なくとも１４日後まで維持された。
【００６６】
上記ワクチンは広い交差クレイド免疫を与えることを示した。それは、（ｉ）２回目の用量が、最初の用量の数ヵ月後に与えられた場合、および（ｉｉ）２回目の用量が、異なるＨ５Ｎ１株由来であった場合でも維持された。さらなるデータとの比較において、２ワクチン接種用量は、２１日間隔または６ヶ月間隔のどちらかに関わらず、そのワクチン株に対して同等の免疫応答を誘発することを示し、このことは、２回目の用量の投与のタイミングは柔軟であり得、最初の免疫処置の６ヶ月後までに行い得ること、そしてこれは免疫応答の質を維持することを確認した。
【００６７】
１用量の初回刺激投与に続く６ヶ月後の異種のワクチン株を含む追加刺激用量は、これらのワクチンに関する全ての関連するＣＨＭＰおよびＦＤＡ基準を満たすかまたは超える。Ａｌｂｅｒｔ Ｏｓｔｅｒｈａｕｓ教授（Ｈｅａｄ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ）は、この研究において使用したワクチンが、「ドリフトしたＨ５Ｎ１株に対しても、広範かつ持続的な免疫を提供する」こと、および「２回目の用量を最初の用量の数ヶ月後に与える場合、異なるＨ５Ｎ１株を用いるとしても、この免疫レベルを維持し得る」ことを確認した。
【００６８】
（ヒト研究Ｖ）
被験体に、免疫学的初回刺激のために、アジュバント添加全ビリオンベロ由来Ｈ５Ｎ１（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４）インフルエンザワクチンを与えた。６個の異なる処方を、初回刺激のために使用した（投与量あたり３．７５μｇ、７．５μｇ、１５μｇ、または３０μｇの、４つのアジュバント添加ＨＡ用量；７．５μｇまたは１５μｇの、２つのアジュバント無添加ＨＡ用量）。１２−１７ヶ月後、７７人の患者に、異なるＨ５Ｎ１株（Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５）由来の７．５μｇのＨＡを含む追加刺激用量を与えた。０日目（初回刺激）、２１日目、４２日目、および１８０日目、および次いで０日目（追加刺激用量）、７日目、および２１日目に採取した血清を用いて、野生型Ａ／Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ／０５／２００５に対するマイクロ中和試験を用いて、免疫応答を評価した。ＧＭＴ値は、初回刺激後、追加刺激用量受取まで、全てのグループにおいて０−２０の範囲であった。次いで追加刺激用量は、ＧＭＴ値を急激に増加させた：７日後、ＧＭＴは５０−１００の範囲であり、そして追加刺激用量の２１日以内では、ＧＭＴは８０−２２０の範囲であった。追加刺激期における中和抗体応答（ＭＮ力価≧２０）を有する被験体のパーセンテージは以下のようであった。
【００６９】
【表３】
全体として、この結果は、このワクチンは記憶Ｂ細胞を誘導し、それは後のＨ５Ｎ１感染に対して即時の抗体応答を提供し得ることを示す。１次免疫処置の１２−１７ヶ月後の単一異種追加刺激は、最初のワクチンおよび追加刺激株の両方に対する非常に高力価の迅速な誘導を引き起こし、追加刺激ワクチン接種の７日後に９０−１００％のセロプロテクションを提供した。さらに、保護的免疫応答の迅速な誘導は、クレイド１初回刺激株およびクレイド２追加刺激株に対してだけでなく、クレイド２．２（シチメンチョウ／Ｔｕｒｋｅｙ）および２．３（Ａｎｈｕｉ）の代表的なウイルスに対しても達成された。
【００７０】
本発明は、単に例として記載され、そして本発明の範囲および精神の範囲内に留まりながら、修飾を行い得ることが理解される。
【００７１】
【表４】
（参考文献）
【００７２】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において免疫応答を惹起するための方法であって、該方法は、
（ｉ）該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程であって、該初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発する、工程
さらに、
（ｉｉ）該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程であって、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
被験体を初回刺激するための方法であって、該方法は、該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、該初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発し、該被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物を受容し、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、方法。
【請求項３】
被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発するための方法であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容している、方法。
【請求項４】
病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、
（ｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容し、ならびに、
（ｉｉ）該ワクチンは、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項５】
後の追加刺激のために被験体の免疫系を初回刺激するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、該追加刺激は、その投与から２１日以内に、病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、そして該初回刺激は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する、使用。
【請求項６】
被験体において病原体に対する一次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、該被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物を受容し、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、免疫原。
【請求項７】
被験体において病原体に対する二次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容している、免疫原。
【請求項８】
被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発するための方法であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に（またはそれより早く）、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）以前の感染によって、該被験体は該病原体に対する一次免疫応答を開始している、方法。
【請求項９】
被験体において病原体に対する二次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）以前の感染によって、該被験体は該病原体に対する一次免疫応答を開始している、免疫原。
【請求項１０】
病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、
（ｉ）該被験体の以前の感染によって、該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を開始しており、ならびに、
（ｉｉ）該ワクチンは、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１１】
前記病原体が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓおよび腸外病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉからなる群より選択される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１２】
前記初回刺激組成物と前記追加刺激組成物とが、５年を超えて離して投与される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１３】
前記保護的な既往性免疫応答が、中和抗体応答および／またはオプソニン化抗体応答を含む、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１４】
前記保護的な既往性免疫が、前記追加刺激組成物の投与から７日以内に誘発される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１５】
前記初回刺激組成物および／または前記追加刺激組成物が、免疫学的アジュバントを含む、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１６】
前記アジュバントが、スクアレンおよび少なくとも１種の界面活性剤を含む水中油型エマルジョンである、請求項１５に記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１７】
前記病原体がＨ５赤血球凝集素を有するインフルエンザＡウイルスではない、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１】
被験体において免疫応答を惹起するための方法であって、該方法は、
（ｉ）該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程であって、該初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発する、工程
さらに、
（ｉｉ）該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程であって、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
被験体を初回刺激するための方法であって、該方法は、該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、該初回刺激免疫原性組成物は、病原体に対する一次免疫応答を誘発し、該被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物を受容し、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、方法。
【請求項３】
被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発するための方法であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容している、方法。
【請求項４】
病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、
（ｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容し、ならびに、
（ｉｉ）該ワクチンは、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項５】
後の追加刺激のために被験体の免疫系を初回刺激するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、該追加刺激は、その投与から２１日以内に、病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、そして該初回刺激は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する、使用。
【請求項６】
被験体において病原体に対する一次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に初回刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、該被験体は、後で追加刺激免疫原性組成物を受容し、該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、免疫原。
【請求項７】
被験体において病原体に対する二次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を誘発する初回刺激免疫原性組成物を以前に受容している、免疫原。
【請求項８】
被験体において病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発するための方法であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に（またはそれより早く）、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）以前の感染によって、該被験体は該病原体に対する一次免疫応答を開始している、方法。
【請求項９】
被験体において病原体に対する二次免疫応答を惹起するための方法に使用するための免疫原であって、該方法は、該被験体に追加刺激免疫原性組成物を投与する工程を包含し、ここで、
（ｉ）該追加刺激免疫原性組成物は、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発し、ならびに、
（ｉｉ）以前の感染によって、該被験体は該病原体に対する一次免疫応答を開始している、免疫原。
【請求項１０】
病原体によって引き起こされる疾患および／または感染から被験体を保護するためのワクチンの製造における免疫原の使用であって、ここで、
（ｉ）該被験体の以前の感染によって、該被験体は、該病原体に対する一次免疫応答を開始しており、ならびに、
（ｉｉ）該ワクチンは、その投与から２１日以内に、該病原体に対する保護的な既往性免疫応答を誘発する、使用。
【請求項１１】
前記病原体が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓおよび腸外病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉからなる群より選択される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１２】
前記初回刺激組成物と前記追加刺激組成物とが、５年を超えて離して投与される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１３】
前記保護的な既往性免疫応答が、中和抗体応答および／またはオプソニン化抗体応答を含む、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１４】
前記保護的な既往性免疫が、前記追加刺激組成物の投与から７日以内に誘発される、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１５】
前記初回刺激組成物および／または前記追加刺激組成物が、免疫学的アジュバントを含む、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１６】
前記アジュバントが、スクアレンおよび少なくとも１種の界面活性剤を含む水中油型エマルジョンである、請求項１５に記載の方法、使用または免疫原。
【請求項１７】
前記病原体がＨ５赤血球凝集素を有するインフルエンザＡウイルスではない、上記請求項のいずれかに記載の方法、使用または免疫原。
【公表番号】特表２０１１−５２５９０２（Ｐ２０１１−５２５９０２Ａ）
【公表日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１５６６３（Ｐ２０１１−５１５６６３）
【出願日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／００６２６０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５６８５２
【国際公開日】平成２１年１２月３０日（２００９．１２．３０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／００６２６０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５６８５２
【国際公開日】平成２１年１２月３０日（２００９．１２．３０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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