酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤
【課題】酸化ＬＤＬおよびＡＧＥｓを吸着除去しうる体外血液浄化用吸着剤を提供する。
【解決手段】次式：
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤が開示される。吸着剤は、ヘパリンによる吸着能阻害が低く、高密度リポ蛋白に対する吸着能が低いという利点を有し、アフェレーシス治療に用いるのに有用である。
【解決手段】次式：
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤が開示される。吸着剤は、ヘパリンによる吸着能阻害が低く、高密度リポ蛋白に対する吸着能が低いという利点を有し、アフェレーシス治療に用いるのに有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体外血液循環治療用吸着剤に関する。より詳細には、本発明は、酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物に吸着能を有する吸着剤、ならびにこれを用いて酸化低密度リポ蛋白あるいは終末糖化産物が関与する疾患を治療する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化や高齢化に伴い動脈硬化症を発症する患者が増加している。低密度リポ蛋白（以下ＬＤＬと記す）や極低密度リポ蛋白（以下ＶＬＤＬと記す）はコレステロールを多く含み、動脈硬化の原因となることはよく知られている。高コレステロール血症を有する患者では動脈硬化症の発症率が高いことも知られている。また、高密度リポ蛋白（以下ＨＤＬと記す）は動脈硬化の遅延因子であることが知られている。
【０００３】
これら疾患の治療法は、初期段階で食事療法、薬物療法が行われているが、効果が不十分な患者には、血液を体外に導き、血液中からＬＤＬを吸着除去する治療法が適用されている。いわゆるアフェレーシス治療のひとつである。なかでもデキストラン硫酸固定化セルロースゲルを吸着剤とし、ＬＤＬを吸着して血漿から除去する療法が広く普及し、治療効果をあげている。例えば、株式会社カネカメディックス社製リポソーバーＬＡ−１５およびリポソーバー（ＬＡ−Ｓ）は、難治性高コレステロール血症患者に対しアポリポ蛋白Ｂ含有リポ蛋白を除去することを目的として使用される（非特許文献１、２）。医療機器添付文書によれば、リポソーバーＬＡ−１５は、インビトロ試験でＬＤＬを５６％程度除去し、ＨＤＬは除去しない。また、リポソーバー（ＬＡ−Ｓ）は、インビトロ試験は前述と同じであり、臨床試験でＬＤＬを５３％、ＨＤＬを２８％除去する。
【０００４】
血中で体内を循環しているＬＤＬは、体内に存在する活性酸素やラジカルにより酸化を受け、酸化ＬＤＬに変性する。酸化低密度リポ蛋白（以下酸化ＬＤＬまたはＯｘ−ＬＤＬと記す）は、代表的な変性低密度リポ蛋白（以下変性ＬＤＬと記す）である。この酸化ＬＤＬは、ＬＤＬの一部位がアセチル化されるか、あるいはアルデヒドと反応して変性を受けたものである。動脈硬化病変では、泡沫細胞の集積が特徴的な形態として観察されるが、この泡沫細胞は、マクロファージがスカベンジャー受容体を介して変性ＬＤＬなどを貪食した細胞である（非特許文献３）。
【０００５】
最近、高脂血症モデルマウスの肝臓に酸化ＬＤＬ受容体の遺伝子を導入すると、血中のコレステロール、ＬＤＬ及びＨＤＬコレステロール値は保ちながら、酸化ＬＤＬ値だけを３分の１程度に減少させることができ、無処置の高脂血症マウスと比較すると、動脈硬化の進行が完全に抑制されて通常のマウス程度になったという実験結果が示された（非特許文献４）。これらの結果から、ＬＤＬそのものが動脈硬化を引き起こすのではなく、酸化ＬＤＬこそが動脈硬化の真の原因であることが示唆されている。血中にある酸化ＬＤＬの酸化状態の異なる状態が明らかにされつつある（非特許文献９）。
【０００６】
血液透析患者の死因の約４０％は、心不全や心筋梗塞などの冠動脈疾患である（非特許文献５）。その冠動脈疾患患者では血中の酸化ＬＤＬ濃度が高く、すなわち血中酸化ＬＤＬ値は冠動脈疾患の進行度合いを示す良い指標となることが報告されている（非特許文献６）。したがって、体外血液浄化により血中の酸化ＬＤＬ濃度を低下させることによって、冠動脈疾患への進展を抑制することが期待されるが、現在まで疾患原因である酸化ＬＤＬを選択的に低下させる方法は見出されていない。
【０００７】
酸化ＬＤＬの吸着除去に関しては、たとえば、カチオン性ポリマーのポリエチレンイミンをポリスルホン中空糸膜に固定化し、酸化ＬＤＬを２４％（特開２００２−２８４６１：特許文献１)、または５０％（特許第４４３３８２１：特許文献２）吸着除去したとの報告がある。また、ジエチルアミノエチルデキストランをポリスルホンとポリビニルピロリドンとのブレンド支持体に固定化し、酸化ＬＤＬを７２％吸着除去している（特開２００２−１０２３４１：特許文献３)。
【０００８】
一方、現在日本において、糖尿病患者及び糖尿病予備軍の総数は、２千万人にも達するといわれている。高血糖状態が長く続いた糖尿病患者では、血液中に増えるグルコースなどの還元糖のアルデヒド基と体内の蛋白質のアミノ基との反応（メイラード反応）により生成される終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下ＡＧＥｓと記す）のレベルが高いことが知られている。このＡＧＥｓが体内の様々な器官に蓄積することによって糖尿病性合併症を引き起こす。例えば、蓄積臓器が腎臓であれば糖尿病性腎症、網膜であれば糖尿病性網膜症、神経であれば糖尿病性神経障害、血管であれば動脈硬化である。さらに、ＡＧＥｓは、アルツハイマー病、慢性関節リウマチ及び老化などの原因となることも報告されている（非特許文献７、非特許文献８）。
【０００９】
ＡＧＥｓは、多くの成分の総称であり、例えば、ペントシジン、クロスリン、ＣＭＬ（Ｎε−カルボキシメチル リジン）、ピラリン等の多種の修飾化合物が含まれる。これらのうち、特にＡＧＥ−２（グリセルアルデヒド由来ＡＧＥ）およびＡＧＥ−３（グリコ−ルアルデヒド由来ＡＧＥ）は、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害の原因物質であると考えられている（非特許文献８）。
【００１０】
ペントシジンおよびピラリン誘導体であるＡＧＥｓの生成を抑制することが提案されている。しかし、臓器に蓄積されたＡＧＥｓを除去することはできない。したがって、体内に蓄積されたＡＧＥｓを効果的に除去する治療方法の開発が待ち望まれている。
【００１１】
ＡＧＥｓの吸着除去に関しては、国際公開第２００７／０３７５５４(特許文献４)には、親水性メタクリレート含有共重合体樹脂がＡＧＥｓに対し吸着能があることを開示している。また、特開２００３−２３８４０４(特許文献５)は、ＲＡＧＥ(Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＡＧＥｓ)の全配列もしくは部分配列を含むペプチドを固定化した再生可能な糖尿病合併症因子吸着体を開示する。これは、ＡＧＥｓレセプターを水不溶担体に固定化したものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００２−２８４６１
【特許文献２】特許４４３３８２１
【特許文献３】特開２００２−１０２３４１
【特許文献４】再公表ＷＯ２００７／０３７５５４
【特許文献５】特開２００３−２３８４０４
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】医療機器添付文書：リポソーバーＬＡ−１５
【非特許文献２】医療機器添付文書：リポソーバー（ＬＡ−Ｓ）
【非特許文献３】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、２００２年、第１０１巻、ｐ．２８８９−２８９５
【非特許文献４】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、２００８年、第１１８巻、ｐ．７５−８３
【非特許文献５】Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｒｅｎａｌ Ｄａｔａ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＳＲＤＳ）、２００６ Ａｎｎｕａｌ Ｄａｔａ Ｒｅｐｏｒｔ、Ｃｈｒｏｎｉｃ ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ
【非特許文献６】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、１９９８年、第９８巻、ｐ．１４８７−１４９４
【非特許文献７】グリコバイオロジー（Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ）、２００５年、第１５巻、ｐ．１６Ｒ−２８Ｒ
【非特許文献８】北陸大学紀要、２００４年、第２８号、ｐ．３３−４８
【非特許文献９】臨床病理、第５６回学術集会 シンポジウム８、リポ蛋白・脂質研究の最前線（３）、酸化リポ蛋白の最前線、ｐ．６２２−６３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、広い範囲の異なる酸化状態の酸化ＬＤＬを吸着除去でき、かつ、ＡＧＥｓをも同時に吸着除去できる、アフェレーシス治療に用いる吸着剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、末端に芳香環を持つ特定のアルキルアミン化合物が酸化ＬＤＬとＡＧＥｓを同時に吸着する能力を有することを見出した。
【００１６】
すなわち、本発明は、次式：
【化１】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤を提供する。
【００１７】
別の態様においては、本発明は、次式：
【化２】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤を提供する。
【００１８】
好ましくは、本発明の吸着剤は、酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白に対して６０％以上の吸着能をもつ。また好ましくは、本発明の吸着剤は、終末糖化産物に対して４５％以上の吸着能、より好ましくは９０％以上の吸着能をもつ。
【００１９】
また好ましくは、本発明の吸着剤は、ヘパリンによる吸着能阻害は５％以下である。また好ましくは、本発明の吸着剤は、高密度リポ蛋白に対する吸着能が５％以下である。
【００２０】
別の態様においては、本発明は、上述の本発明の吸着剤を充填した体外血液処理用デバイスを提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の吸着剤は、広い酸化状態の酸化ＬＤＬの吸着能を有し、同時にＡＧＥｓの吸着能も有し、さらに、ヘパリンによる吸着能阻害を受けないことを特徴とする。この吸着剤は、脂質異常疾患患者、冠動脈疾患患者の酸化ＬＤＬ、糖尿病血管合併症疾患患者、神経変性疾患患者のＡＧＥｓを効果的に吸着除去の目的のため、アフェレーシス治療に用いるのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、血中のＯｘ-ＬＤＬと銅酸化により作製した酸化状態の異なるＯｘ-ＬＤＬのアガロースゲル電気泳動の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の１つの態様においては、本発明の吸着剤は、末端に芳香環を有する末端アリール置換鎖状アルキルアミノ化合物が結合した高分子支持体からなる：
【化３】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］。
【００２４】
本発明の別の態様においては、本発明の吸着剤は、末端に複素環芳香族を有する末端複素環鎖状アルキルアミノ化合物が結合した高分子支持体からなる：
【化４】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］。
【００２５】
有機高分子支持体としては、血液透析用カラムに用いることができる任意の水不溶性高分子を用いることができ、例えば、セルロース系ポリマー、ポリスルホン系ポリマー、エポキシ系ポリマー、メタクリレート系ポリマーなどが挙げられる。有機高分子支持体は、アミノ基と結合しうる官能基、例えば、ヒドロキシル基やカルボキシル基を有する。有機高分子支持体は、クロマトグラフィー用樹脂として一般に市販されているものを用いることができ、その一例としては、例えば、メタアクリル系多孔質ゲルであるＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０（東ソー株式会社製）、アガロースの多孔性ゲルであるセファロース（ＧＥヘルスケア社製）、セルロースの多孔性ゲルであるセルファイン（チッソ株式会社製）などが挙げられる。有機高分子支持体は、中空糸膜状、線維状、スポンジ状、ビーズ状などの形状とすることができ、これをカラムに充填して、体外血液浄化デバイス（人工腎臓など）に適用することができる。
【００２６】
本発明の吸着剤は、アフィニティークロマトグラフィー用の樹脂にリガンドをカップリングさせるための慣用の方法のいずれかを用いて、容易に製造することができる。エポキシ基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ９〜１１のアルカリ性条件下、４０℃で、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させることにより製造することができる。アルデヒド基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ７条件下、２５℃で、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元して製造することができる。ヒドロキシル基を有する有機高分子支持体の場合には、アルカリ性条件下、エピクロルヒドリンを反応させることで、エポキシ基を有する有機高分子支持体に官能基変換でき、その後、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させることにより製造することができる。アミノ基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ７条件下、２５℃で、フェニル−アルキルアルデヒドまたはインドリル−アルキルアルデヒドを反応させた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元して製造することができる。
【００２７】
本発明の吸着剤は、弱い正電荷状態の２級アミノ基と、疎水性の芳香環とを有し、広い酸化状態の酸化ＬＤＬおよびＡＧＥｓに対して吸着能を有するという利点を有する。本発明における、広い酸化状態の酸化ＬＤＬとは、人工的にラジカル酸化で作製した変性ＬＤＬの酸化状態の異なる酸化ＬＤＬ、即ち、ラジカル濃度の違いにより酸化修飾を受ける度合いの異なるＬＤＬの群を表す。酸化ＬＤＬは、酸化を受ける前のＬＤＬに比して、より陰性の電荷を持ち、親水性をもつ。酸化度合いが進むにつれ、陰性電荷度は強くなり、それに伴い親水性度も増す。
【００２８】
好ましくは、本発明の吸着剤は、酸化ＬＤＬに対して４０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは７０％以上、さらにより好ましくは８０％以上の吸着能をもつ。吸着能は、サンプルを吸着剤と接触させたときに、サンプル中に含まれる酸化ＬＤＬのうち吸着剤に吸着される割合で表される。また好ましくは、本発明の吸着剤は、ＡＧＥｓに対して３０％以上、好ましくは４５％以上、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは９０％以上の吸着能をもつ。
【００２９】
本発明の吸着剤の有利な特徴は、体外血液浄化処理の際に血液の凝固防止のために添加されるヘパリンによる吸着能阻害が非常に低いことである。また、本発明の吸着剤は、ＨＤＬに対する吸着能が非常に低い。このことにより、血液中のＨＤＬレベルを低下させることなく、酸化ＬＤＬを吸着除去することができる。
【実施例】
【００３０】
以下実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。実施例における操作方法は以下の通りである。
【００３１】
酸化ＬＤＬの調製法
Ｋａｌｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製Ｈｕｍａｎ ＭｕｌｔｉＰｏｉｎｔ ＯｘＬＤＬ Ｋｉｔ（商標）を使用し、そのプロトコルにしたがって、順次２価銅イオンによって酸化状態の異なるＯｘ-ＬＤＬ（酸化ＬＤＬ）を調製した。
【００３２】
ＬＯｘ−ＬＤＬ（低酸化ＬＤＬ）の調製方法は、ＬＤＬを、必要な場合、酸化する前に予め透析して、ＥＤＴＡを完全に取り除いた。このＥＤＴＡ非含有ＬＤＬを、ＥＤＴＡ非含有ＰＢＳ（以下（−）ＰＢＳと記す）で１ｍｇ／ｍｌ濃度の溶液にし、その溶液に、最終濃度が５μＭになるようにＣｕＳＯ4を添加した。次いで、この溶液を、３７℃で２時間インキュベートし、その後、１ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度）を添加して、酸化を停止した。この溶液を、（−）ＰＢＳ（１ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、１０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、１３７ ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ ７．４）に対して透析した。得られた酸化ＬＤＬ含有溶液を濾過滅菌し、ＬＯｘ-ＬＤＬ溶液とし、使用時まで４℃で保存した。
【００３３】
ＭＯｘ−ＬＤＬ（中酸化ＬＤＬ）の調製方法は、前述ＬＯｘ−ＬＤＬの調製方法中のＣｕＳＯ4酸化時間を４時間に変え、その他の手順はそのままとして調製した。
【００３４】
ＨＯｘ−ＬＤＬ（高酸化ＬＤＬ）の調製方法は、前述ＬＯｘ−ＬＤＬの調製方法中のＣｕＳＯ4酸化時間を２４時間に変え、その他の手順はそのままとして調製した。
【００３５】
人工的に作製された酸化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬあるいは糖化ＬＤＬなどの変性ＬＤＬは、正味の陰性荷電を有しているために、アガロースゲルを用いた電気泳動ではその相対移動度は上昇することが知られている。血中に存在するＯｘ−ＬＤＬは、ラジカルで酸化状態を変化させたＯｘ-ＬＤＬのうち、低い酸化状態のものと同等であることが、Ｋａｌｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｏｃａｌ社製、Ｈｕｍａｎ ＭｕｌｔｉＰｏｉｎｔ ＯｘＬＤＬ Ｋｉｔ（商標）で解る（図１）。患者血液由来のサンプル（ｎａｔｉｖｅと表示）とＬＯｘすなわちＬＯｘ-ＬＤＬは同程度の移動度であり、患者血液中に存在する酸化ＬＤＬと合成のＬＯｘ−ＬＤＬが同じ程度の酸化状態であることを意味している。
【００３６】
酸化ＬＤＬ吸着操作法、濃度測定法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、血漿３００μＬを容器に入れ、例えば、濃度０．５μｇ／μｌのＬＯｘ−ＬＤＬ１０μｌ加え、その上澄み溶液中の残存しているＬＯｘ-ＬＤＬ量を基にして吸着能率を算出した。
【００３７】
ＭＯｘ-ＬＤＬ、ＨＯｘ-ＬＤＬについての測定も前述のＬＯｘ-ＬＤＬと同様に行った。
【００３８】
ＡＧＥｓの調製法
ＡＧＥｓとしては、ＣｉｒｃｕＬｅｘ社製ＡＧＥ−２（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ-ＡＧＥ-ＢＳＡ）およびＡＧＥ−３（Ｇｌｙｃｏａｌｄｅｈｙｄｅ-ＡＧＥ-ＢＳＡ）を用いた。
【００３９】
ＡＧＥ−２吸着操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌをＰＢＳ溶液で洗浄後、濃度０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液５００μｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。上清を除いた後、濃度３ｍｇ／ｍｌのＡＧＥ−２溶液を含むヒト血清２５０μｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のＡＧＥ−２濃度をＣｉｒｃｕＬｅｘ社製ＣＭＬエライザキットで測定し、吸着除去率を求めた。
【００４０】
ＡＧＥ−３吸着操作法
９６穴プレート（Ｎｕｎｃ）に、ＡＧＥ−３を、濃度０．５μｇ／ｍｌにＰＢＳで希釈した後、１００μｌ／ウェルずつ分注し、４℃で一晩放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳでプレートを洗浄し、濃度２０％イムノブロック（ＤＳファーマ）／ＰＢＳにて１時間ブロッキングし、さらに濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳで洗浄した後、ＰＢＳで３倍に希釈したサンプル５０μｌ、濃度０．２μｇ／ｍｌの抗ＡＧＥ−３モノクローナル抗体（Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）を５０μl添加し、２時間室温で放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳにて十分に洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗マウスモノクローナル抗体（ＧＥヘルスケア）の２０００倍希釈溶液を１００μｌ／ウェルで添加し、さらに室温で１時間放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳにて十分に洗浄後、ＨＲＰの発色基質である３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を１００μｌ／ウェルで添加し、発色を確認後に反応停止液として濃度１Ｎ塩酸を１００μｌ／ウェルに加え、Ａ４５０における吸光度を測定し、吸着除去率を求めた。
【００４１】
ヘパリン添加時の操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ溶液５００μｌを容器に入れ、３７℃１時間インキュベーションした後、上澄み溶液を除去し、０．２％ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。これに、濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリン溶液を３００μｌ添加し、３７℃１時間インキュベーションしたのち、その上澄み溶液の一部を、濃度０．２％ＮａＣｌ水溶液で５０倍希釈、および１００倍希釈して、それぞれサンプル溶液とした。その各希釈サンプル溶液５０μｌに、濃度０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％ＮａＣｌ添加の０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌ加えて、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清の６３１ｎｍの吸収から、ヘパリンの吸着率を求めた。
【００４２】
ＨＤＬの吸着操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、ＰＢＳ溶液で洗浄した後、血清３００μｌを加え、３７℃で１時間緩やかに回転させインキュベーションさせ吸着させた。
【００４３】
ＨＤＬ濃度の測定法
前述（５）のインキュベーション後、３０００ｒｐｍ、５分間遠心分離を行い、上清をサンプルとし、そのＨＤＬ濃度をＭｅｄｉｃａｌ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製ＨＤＬ ａｎｄ ＬＤＬ／ＶＬＤＬ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔで測定し、吸着量を求めた。
【００４４】
末端芳香環アルキルアミノ化合物
［実施例１］
末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、ベンジルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）水溶液２ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン（和光純薬工業社製）水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物を調製した。
【００４５】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム注（和光純薬工業社製）溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー（ナカライテスク社製）溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００４６】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を求めた。
【００４７】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００４８】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００４９】
ＨＤＬの吸着除去
上述のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用いインキュベートした。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００５０】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製したベンジルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５１】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製したベンジルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５２】
［実施例２］
末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、２−フェニルエチルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）３００ｍｇ、ジオキサン（和光純薬工業社製）１ｍｌ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物を調製した。
【００５３】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００５４】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００５５】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００５６】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００５７】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００５８】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した２−フェニルエチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５９】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した２−フェニルエチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６０】
［実施例３］
末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、３−フェニルプロピルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。
その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物を調製した。
【００６１】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００６２】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００６３】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００６４】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００６５】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００６６】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した３−フェニルプロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６７】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した３−フェニルプロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６８】
［比較例１］
末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、４−フェニルブチルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。
その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物を調製した。
【００６９】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００７０】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００７１】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００７２】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００７３】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００７４】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した４−フェニルブチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００７５】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した４−フェニルブチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００７６】
［比較例２］
末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、５−フェニルペンチルアミン（Ｅｎａｍｉｎｅ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物を調製した。
【００７７】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００７８】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００７９】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００８０】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００８１】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００８２】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した５−フェニルペンチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００８３】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した５−フェニルペンチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００８４】
【表１】
【００８５】
表１中の実施例１、実施例２、実施例３、比較例１、比較例２の化合物は、末端のフェニル基と固定化支持体側のアミノ基とにはさまれた炭素数がそれぞれ１、２、３、４、５の違い構造の化合物である。これらの化合物は、酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白、すなわちＨＯｘ-ＬＤＬ、ＭＯｘ-ＬＤＬ、ＬＯｘ-ＬＤＬに対し６０％以上の除去能を示し、ＡＧＥ-２、ＡＧＥ-３に対し（９０）％以上の除去能を示す。さらにヘパリンによる除去能阻害を受けない。
【００８６】
ところが、実施例１、実施例２、実施例３の化合物は、ＨＤＬに対しそれぞれ−１１％、−１０％、２％の除去能を示し吸着はしないが、一方、比較例１、比較例２の化合物は、ＨＤＬに対し、それぞれ３５％、８４％の除去能を示し、実施例１、実施例２よりかなりの高値を示し吸着する。
【００８７】
前述の炭素数が、１、２、３である化合物の実施例１、実施例２、実施例３は、炭素数が４、５である化合物の比較例１、比較例２に比べ、酸化状態の異なる低密度リポ蛋白、および終末糖化産物に対して高い吸着除去能を示し、ＨＤＬに対して低い吸着能を示した。さらにヘパリンによる吸着能阻害を受けない。すなわち、炭素数１、２、３である末端アリール置換鎖状アルキルアミノ化合物は、優れた特性を示した。
【００８８】
末端複素環アルキルアミノ化合物
［実施例４］
末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、２−（３−インドリル）エチルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物を調製した。
【００８９】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００９０】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００９１】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００９２】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００９３】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００９４】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した２−（３−インドリル）エチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００９５】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した２−（３−インドリル）エチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００９６】
［比較例３］
末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、３−（４−ピリジル）プロピルアミン（Ｋｅｙ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物を調製した。
【００９７】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００９８】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００９９】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【０１００】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【０１０１】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【０１０２】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した３−（４−ピリジル）プロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【０１０３】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した３−（４−ピリジル）プロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【０１０４】
【表２】
【０１０５】
表２中の実施例４は、前述表１中の実施例２の末端フェニル基がインドール基に変わった複素環化合物である。この化合物は、ヘパリンによる除去能阻害を示さず、ＨＤＬに対しても、−２％の除去能を示した。広い酸化状態、即ちＨＯｘ−ＬＤＬ、ＭＯｘ−ＬＤＬ、ＬＯｘ−ＬＤＬに対して９５％以上の除去能を示す。
【０１０６】
一方、表１中の実施例３の末端フェニル基がピリジル基に変わった複素環化合物である表２中の比較例３は、ＨＤＬに対しほとんど除去能を示さないが、著しいヘパリンによる除去能阻害（７３％）を示した。低い酸化状態のＬＯｘ−ＬＤＬに対して４４％の除去能を示した。
【０１０７】
即ち、末端芳香環がインドール環である場合には、ヘパリンによる除去能阻害は受けないが、末端芳香環がピリジンのような強い塩基性芳香環の場合には、著しいヘパリンによる除去能阻害を受けた。
【０１０８】
このように、末端複素環アルキルアミノ化合物、特にインドール環の場合は、広い酸化状態のＯｘ−ＬＤＬを吸着除去能を持ち、ヘパリンによる除去能阻害を受けず、ＨＤＬに対しても吸着能を示さない優れた特長を持つ化合物である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体外血液循環治療用吸着剤に関する。より詳細には、本発明は、酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物に吸着能を有する吸着剤、ならびにこれを用いて酸化低密度リポ蛋白あるいは終末糖化産物が関与する疾患を治療する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化や高齢化に伴い動脈硬化症を発症する患者が増加している。低密度リポ蛋白（以下ＬＤＬと記す）や極低密度リポ蛋白（以下ＶＬＤＬと記す）はコレステロールを多く含み、動脈硬化の原因となることはよく知られている。高コレステロール血症を有する患者では動脈硬化症の発症率が高いことも知られている。また、高密度リポ蛋白（以下ＨＤＬと記す）は動脈硬化の遅延因子であることが知られている。
【０００３】
これら疾患の治療法は、初期段階で食事療法、薬物療法が行われているが、効果が不十分な患者には、血液を体外に導き、血液中からＬＤＬを吸着除去する治療法が適用されている。いわゆるアフェレーシス治療のひとつである。なかでもデキストラン硫酸固定化セルロースゲルを吸着剤とし、ＬＤＬを吸着して血漿から除去する療法が広く普及し、治療効果をあげている。例えば、株式会社カネカメディックス社製リポソーバーＬＡ−１５およびリポソーバー（ＬＡ−Ｓ）は、難治性高コレステロール血症患者に対しアポリポ蛋白Ｂ含有リポ蛋白を除去することを目的として使用される（非特許文献１、２）。医療機器添付文書によれば、リポソーバーＬＡ−１５は、インビトロ試験でＬＤＬを５６％程度除去し、ＨＤＬは除去しない。また、リポソーバー（ＬＡ−Ｓ）は、インビトロ試験は前述と同じであり、臨床試験でＬＤＬを５３％、ＨＤＬを２８％除去する。
【０００４】
血中で体内を循環しているＬＤＬは、体内に存在する活性酸素やラジカルにより酸化を受け、酸化ＬＤＬに変性する。酸化低密度リポ蛋白（以下酸化ＬＤＬまたはＯｘ−ＬＤＬと記す）は、代表的な変性低密度リポ蛋白（以下変性ＬＤＬと記す）である。この酸化ＬＤＬは、ＬＤＬの一部位がアセチル化されるか、あるいはアルデヒドと反応して変性を受けたものである。動脈硬化病変では、泡沫細胞の集積が特徴的な形態として観察されるが、この泡沫細胞は、マクロファージがスカベンジャー受容体を介して変性ＬＤＬなどを貪食した細胞である（非特許文献３）。
【０００５】
最近、高脂血症モデルマウスの肝臓に酸化ＬＤＬ受容体の遺伝子を導入すると、血中のコレステロール、ＬＤＬ及びＨＤＬコレステロール値は保ちながら、酸化ＬＤＬ値だけを３分の１程度に減少させることができ、無処置の高脂血症マウスと比較すると、動脈硬化の進行が完全に抑制されて通常のマウス程度になったという実験結果が示された（非特許文献４）。これらの結果から、ＬＤＬそのものが動脈硬化を引き起こすのではなく、酸化ＬＤＬこそが動脈硬化の真の原因であることが示唆されている。血中にある酸化ＬＤＬの酸化状態の異なる状態が明らかにされつつある（非特許文献９）。
【０００６】
血液透析患者の死因の約４０％は、心不全や心筋梗塞などの冠動脈疾患である（非特許文献５）。その冠動脈疾患患者では血中の酸化ＬＤＬ濃度が高く、すなわち血中酸化ＬＤＬ値は冠動脈疾患の進行度合いを示す良い指標となることが報告されている（非特許文献６）。したがって、体外血液浄化により血中の酸化ＬＤＬ濃度を低下させることによって、冠動脈疾患への進展を抑制することが期待されるが、現在まで疾患原因である酸化ＬＤＬを選択的に低下させる方法は見出されていない。
【０００７】
酸化ＬＤＬの吸着除去に関しては、たとえば、カチオン性ポリマーのポリエチレンイミンをポリスルホン中空糸膜に固定化し、酸化ＬＤＬを２４％（特開２００２−２８４６１：特許文献１)、または５０％（特許第４４３３８２１：特許文献２）吸着除去したとの報告がある。また、ジエチルアミノエチルデキストランをポリスルホンとポリビニルピロリドンとのブレンド支持体に固定化し、酸化ＬＤＬを７２％吸着除去している（特開２００２−１０２３４１：特許文献３)。
【０００８】
一方、現在日本において、糖尿病患者及び糖尿病予備軍の総数は、２千万人にも達するといわれている。高血糖状態が長く続いた糖尿病患者では、血液中に増えるグルコースなどの還元糖のアルデヒド基と体内の蛋白質のアミノ基との反応（メイラード反応）により生成される終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下ＡＧＥｓと記す）のレベルが高いことが知られている。このＡＧＥｓが体内の様々な器官に蓄積することによって糖尿病性合併症を引き起こす。例えば、蓄積臓器が腎臓であれば糖尿病性腎症、網膜であれば糖尿病性網膜症、神経であれば糖尿病性神経障害、血管であれば動脈硬化である。さらに、ＡＧＥｓは、アルツハイマー病、慢性関節リウマチ及び老化などの原因となることも報告されている（非特許文献７、非特許文献８）。
【０００９】
ＡＧＥｓは、多くの成分の総称であり、例えば、ペントシジン、クロスリン、ＣＭＬ（Ｎε−カルボキシメチル リジン）、ピラリン等の多種の修飾化合物が含まれる。これらのうち、特にＡＧＥ−２（グリセルアルデヒド由来ＡＧＥ）およびＡＧＥ−３（グリコ−ルアルデヒド由来ＡＧＥ）は、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害の原因物質であると考えられている（非特許文献８）。
【００１０】
ペントシジンおよびピラリン誘導体であるＡＧＥｓの生成を抑制することが提案されている。しかし、臓器に蓄積されたＡＧＥｓを除去することはできない。したがって、体内に蓄積されたＡＧＥｓを効果的に除去する治療方法の開発が待ち望まれている。
【００１１】
ＡＧＥｓの吸着除去に関しては、国際公開第２００７／０３７５５４(特許文献４)には、親水性メタクリレート含有共重合体樹脂がＡＧＥｓに対し吸着能があることを開示している。また、特開２００３−２３８４０４(特許文献５)は、ＲＡＧＥ(Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＡＧＥｓ)の全配列もしくは部分配列を含むペプチドを固定化した再生可能な糖尿病合併症因子吸着体を開示する。これは、ＡＧＥｓレセプターを水不溶担体に固定化したものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００２−２８４６１
【特許文献２】特許４４３３８２１
【特許文献３】特開２００２−１０２３４１
【特許文献４】再公表ＷＯ２００７／０３７５５４
【特許文献５】特開２００３−２３８４０４
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】医療機器添付文書：リポソーバーＬＡ−１５
【非特許文献２】医療機器添付文書：リポソーバー（ＬＡ−Ｓ）
【非特許文献３】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、２００２年、第１０１巻、ｐ．２８８９−２８９５
【非特許文献４】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、２００８年、第１１８巻、ｐ．７５−８３
【非特許文献５】Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｒｅｎａｌ Ｄａｔａ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＳＲＤＳ）、２００６ Ａｎｎｕａｌ Ｄａｔａ Ｒｅｐｏｒｔ、Ｃｈｒｏｎｉｃ ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ
【非特許文献６】サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、１９９８年、第９８巻、ｐ．１４８７−１４９４
【非特許文献７】グリコバイオロジー（Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ）、２００５年、第１５巻、ｐ．１６Ｒ−２８Ｒ
【非特許文献８】北陸大学紀要、２００４年、第２８号、ｐ．３３−４８
【非特許文献９】臨床病理、第５６回学術集会 シンポジウム８、リポ蛋白・脂質研究の最前線（３）、酸化リポ蛋白の最前線、ｐ．６２２−６３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、広い範囲の異なる酸化状態の酸化ＬＤＬを吸着除去でき、かつ、ＡＧＥｓをも同時に吸着除去できる、アフェレーシス治療に用いる吸着剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、末端に芳香環を持つ特定のアルキルアミン化合物が酸化ＬＤＬとＡＧＥｓを同時に吸着する能力を有することを見出した。
【００１６】
すなわち、本発明は、次式：
【化１】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤を提供する。
【００１７】
別の態様においては、本発明は、次式：
【化２】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤を提供する。
【００１８】
好ましくは、本発明の吸着剤は、酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白に対して６０％以上の吸着能をもつ。また好ましくは、本発明の吸着剤は、終末糖化産物に対して４５％以上の吸着能、より好ましくは９０％以上の吸着能をもつ。
【００１９】
また好ましくは、本発明の吸着剤は、ヘパリンによる吸着能阻害は５％以下である。また好ましくは、本発明の吸着剤は、高密度リポ蛋白に対する吸着能が５％以下である。
【００２０】
別の態様においては、本発明は、上述の本発明の吸着剤を充填した体外血液処理用デバイスを提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の吸着剤は、広い酸化状態の酸化ＬＤＬの吸着能を有し、同時にＡＧＥｓの吸着能も有し、さらに、ヘパリンによる吸着能阻害を受けないことを特徴とする。この吸着剤は、脂質異常疾患患者、冠動脈疾患患者の酸化ＬＤＬ、糖尿病血管合併症疾患患者、神経変性疾患患者のＡＧＥｓを効果的に吸着除去の目的のため、アフェレーシス治療に用いるのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、血中のＯｘ-ＬＤＬと銅酸化により作製した酸化状態の異なるＯｘ-ＬＤＬのアガロースゲル電気泳動の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の１つの態様においては、本発明の吸着剤は、末端に芳香環を有する末端アリール置換鎖状アルキルアミノ化合物が結合した高分子支持体からなる：
【化３】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］。
【００２４】
本発明の別の態様においては、本発明の吸着剤は、末端に複素環芳香族を有する末端複素環鎖状アルキルアミノ化合物が結合した高分子支持体からなる：
【化４】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］。
【００２５】
有機高分子支持体としては、血液透析用カラムに用いることができる任意の水不溶性高分子を用いることができ、例えば、セルロース系ポリマー、ポリスルホン系ポリマー、エポキシ系ポリマー、メタクリレート系ポリマーなどが挙げられる。有機高分子支持体は、アミノ基と結合しうる官能基、例えば、ヒドロキシル基やカルボキシル基を有する。有機高分子支持体は、クロマトグラフィー用樹脂として一般に市販されているものを用いることができ、その一例としては、例えば、メタアクリル系多孔質ゲルであるＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０（東ソー株式会社製）、アガロースの多孔性ゲルであるセファロース（ＧＥヘルスケア社製）、セルロースの多孔性ゲルであるセルファイン（チッソ株式会社製）などが挙げられる。有機高分子支持体は、中空糸膜状、線維状、スポンジ状、ビーズ状などの形状とすることができ、これをカラムに充填して、体外血液浄化デバイス（人工腎臓など）に適用することができる。
【００２６】
本発明の吸着剤は、アフィニティークロマトグラフィー用の樹脂にリガンドをカップリングさせるための慣用の方法のいずれかを用いて、容易に製造することができる。エポキシ基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ９〜１１のアルカリ性条件下、４０℃で、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させることにより製造することができる。アルデヒド基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ７条件下、２５℃で、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元して製造することができる。ヒドロキシル基を有する有機高分子支持体の場合には、アルカリ性条件下、エピクロルヒドリンを反応させることで、エポキシ基を有する有機高分子支持体に官能基変換でき、その後、フェニル−アルキルアミンまたはインドリル−アルキルアミンを反応させることにより製造することができる。アミノ基を有する有機高分子支持体の場合には、pＨ７条件下、２５℃で、フェニル−アルキルアルデヒドまたはインドリル−アルキルアルデヒドを反応させた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元して製造することができる。
【００２７】
本発明の吸着剤は、弱い正電荷状態の２級アミノ基と、疎水性の芳香環とを有し、広い酸化状態の酸化ＬＤＬおよびＡＧＥｓに対して吸着能を有するという利点を有する。本発明における、広い酸化状態の酸化ＬＤＬとは、人工的にラジカル酸化で作製した変性ＬＤＬの酸化状態の異なる酸化ＬＤＬ、即ち、ラジカル濃度の違いにより酸化修飾を受ける度合いの異なるＬＤＬの群を表す。酸化ＬＤＬは、酸化を受ける前のＬＤＬに比して、より陰性の電荷を持ち、親水性をもつ。酸化度合いが進むにつれ、陰性電荷度は強くなり、それに伴い親水性度も増す。
【００２８】
好ましくは、本発明の吸着剤は、酸化ＬＤＬに対して４０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは７０％以上、さらにより好ましくは８０％以上の吸着能をもつ。吸着能は、サンプルを吸着剤と接触させたときに、サンプル中に含まれる酸化ＬＤＬのうち吸着剤に吸着される割合で表される。また好ましくは、本発明の吸着剤は、ＡＧＥｓに対して３０％以上、好ましくは４５％以上、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは９０％以上の吸着能をもつ。
【００２９】
本発明の吸着剤の有利な特徴は、体外血液浄化処理の際に血液の凝固防止のために添加されるヘパリンによる吸着能阻害が非常に低いことである。また、本発明の吸着剤は、ＨＤＬに対する吸着能が非常に低い。このことにより、血液中のＨＤＬレベルを低下させることなく、酸化ＬＤＬを吸着除去することができる。
【実施例】
【００３０】
以下実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。実施例における操作方法は以下の通りである。
【００３１】
酸化ＬＤＬの調製法
Ｋａｌｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製Ｈｕｍａｎ ＭｕｌｔｉＰｏｉｎｔ ＯｘＬＤＬ Ｋｉｔ（商標）を使用し、そのプロトコルにしたがって、順次２価銅イオンによって酸化状態の異なるＯｘ-ＬＤＬ（酸化ＬＤＬ）を調製した。
【００３２】
ＬＯｘ−ＬＤＬ（低酸化ＬＤＬ）の調製方法は、ＬＤＬを、必要な場合、酸化する前に予め透析して、ＥＤＴＡを完全に取り除いた。このＥＤＴＡ非含有ＬＤＬを、ＥＤＴＡ非含有ＰＢＳ（以下（−）ＰＢＳと記す）で１ｍｇ／ｍｌ濃度の溶液にし、その溶液に、最終濃度が５μＭになるようにＣｕＳＯ4を添加した。次いで、この溶液を、３７℃で２時間インキュベートし、その後、１ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度）を添加して、酸化を停止した。この溶液を、（−）ＰＢＳ（１ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、１０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、１３７ ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ ７．４）に対して透析した。得られた酸化ＬＤＬ含有溶液を濾過滅菌し、ＬＯｘ-ＬＤＬ溶液とし、使用時まで４℃で保存した。
【００３３】
ＭＯｘ−ＬＤＬ（中酸化ＬＤＬ）の調製方法は、前述ＬＯｘ−ＬＤＬの調製方法中のＣｕＳＯ4酸化時間を４時間に変え、その他の手順はそのままとして調製した。
【００３４】
ＨＯｘ−ＬＤＬ（高酸化ＬＤＬ）の調製方法は、前述ＬＯｘ−ＬＤＬの調製方法中のＣｕＳＯ4酸化時間を２４時間に変え、その他の手順はそのままとして調製した。
【００３５】
人工的に作製された酸化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬあるいは糖化ＬＤＬなどの変性ＬＤＬは、正味の陰性荷電を有しているために、アガロースゲルを用いた電気泳動ではその相対移動度は上昇することが知られている。血中に存在するＯｘ−ＬＤＬは、ラジカルで酸化状態を変化させたＯｘ-ＬＤＬのうち、低い酸化状態のものと同等であることが、Ｋａｌｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｏｃａｌ社製、Ｈｕｍａｎ ＭｕｌｔｉＰｏｉｎｔ ＯｘＬＤＬ Ｋｉｔ（商標）で解る（図１）。患者血液由来のサンプル（ｎａｔｉｖｅと表示）とＬＯｘすなわちＬＯｘ-ＬＤＬは同程度の移動度であり、患者血液中に存在する酸化ＬＤＬと合成のＬＯｘ−ＬＤＬが同じ程度の酸化状態であることを意味している。
【００３６】
酸化ＬＤＬ吸着操作法、濃度測定法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、血漿３００μＬを容器に入れ、例えば、濃度０．５μｇ／μｌのＬＯｘ−ＬＤＬ１０μｌ加え、その上澄み溶液中の残存しているＬＯｘ-ＬＤＬ量を基にして吸着能率を算出した。
【００３７】
ＭＯｘ-ＬＤＬ、ＨＯｘ-ＬＤＬについての測定も前述のＬＯｘ-ＬＤＬと同様に行った。
【００３８】
ＡＧＥｓの調製法
ＡＧＥｓとしては、ＣｉｒｃｕＬｅｘ社製ＡＧＥ−２（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ-ＡＧＥ-ＢＳＡ）およびＡＧＥ−３（Ｇｌｙｃｏａｌｄｅｈｙｄｅ-ＡＧＥ-ＢＳＡ）を用いた。
【００３９】
ＡＧＥ−２吸着操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌをＰＢＳ溶液で洗浄後、濃度０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液５００μｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。上清を除いた後、濃度３ｍｇ／ｍｌのＡＧＥ−２溶液を含むヒト血清２５０μｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のＡＧＥ−２濃度をＣｉｒｃｕＬｅｘ社製ＣＭＬエライザキットで測定し、吸着除去率を求めた。
【００４０】
ＡＧＥ−３吸着操作法
９６穴プレート（Ｎｕｎｃ）に、ＡＧＥ−３を、濃度０．５μｇ／ｍｌにＰＢＳで希釈した後、１００μｌ／ウェルずつ分注し、４℃で一晩放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳでプレートを洗浄し、濃度２０％イムノブロック（ＤＳファーマ）／ＰＢＳにて１時間ブロッキングし、さらに濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳで洗浄した後、ＰＢＳで３倍に希釈したサンプル５０μｌ、濃度０．２μｇ／ｍｌの抗ＡＧＥ−３モノクローナル抗体（Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）を５０μl添加し、２時間室温で放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳにて十分に洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗マウスモノクローナル抗体（ＧＥヘルスケア）の２０００倍希釈溶液を１００μｌ／ウェルで添加し、さらに室温で１時間放置した。濃度０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴＢＳにて十分に洗浄後、ＨＲＰの発色基質である３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を１００μｌ／ウェルで添加し、発色を確認後に反応停止液として濃度１Ｎ塩酸を１００μｌ／ウェルに加え、Ａ４５０における吸光度を測定し、吸着除去率を求めた。
【００４１】
ヘパリン添加時の操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ溶液５００μｌを容器に入れ、３７℃１時間インキュベーションした後、上澄み溶液を除去し、０．２％ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。これに、濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリン溶液を３００μｌ添加し、３７℃１時間インキュベーションしたのち、その上澄み溶液の一部を、濃度０．２％ＮａＣｌ水溶液で５０倍希釈、および１００倍希釈して、それぞれサンプル溶液とした。その各希釈サンプル溶液５０μｌに、濃度０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％ＮａＣｌ添加の０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌ加えて、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清の６３１ｎｍの吸収から、ヘパリンの吸着率を求めた。
【００４２】
ＨＤＬの吸着操作法
末端アリール基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を１００μｌ、ＰＢＳ溶液で洗浄した後、血清３００μｌを加え、３７℃で１時間緩やかに回転させインキュベーションさせ吸着させた。
【００４３】
ＨＤＬ濃度の測定法
前述（５）のインキュベーション後、３０００ｒｐｍ、５分間遠心分離を行い、上清をサンプルとし、そのＨＤＬ濃度をＭｅｄｉｃａｌ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製ＨＤＬ ａｎｄ ＬＤＬ／ＶＬＤＬ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔで測定し、吸着量を求めた。
【００４４】
末端芳香環アルキルアミノ化合物
［実施例１］
末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、ベンジルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）水溶液２ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン（和光純薬工業社製）水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物を調製した。
【００４５】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム注（和光純薬工業社製）溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー（ナカライテスク社製）溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００４６】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を求めた。
【００４７】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００４８】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００４９】
ＨＤＬの吸着除去
上述のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基のベンジルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用いインキュベートした。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００５０】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製したベンジルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５１】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製したベンジルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５２】
［実施例２］
末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、２−フェニルエチルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）３００ｍｇ、ジオキサン（和光純薬工業社製）１ｍｌ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物を調製した。
【００５３】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００５４】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００５５】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００５６】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００５７】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００５８】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した２−フェニルエチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００５９】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した２−フェニルエチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６０】
［実施例３］
末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、３−フェニルプロピルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。
その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物を調製した。
【００６１】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００６２】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００６３】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００６４】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００６５】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００６６】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した３−フェニルプロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６７】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した３−フェニルプロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００６８】
［比較例１］
末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、４−フェニルブチルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。
その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物を調製した。
【００６９】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００７０】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００７１】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００７２】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００７３】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ブチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００７４】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した４−フェニルブチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００７５】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した４−フェニルブチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００７６】
［比較例２］
末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、５−フェニルペンチルアミン（Ｅｎａｍｉｎｅ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物を調製した。
【００７７】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００７８】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００７９】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００８０】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００８１】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端フェニル基置換ペンチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００８２】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した５−フェニルペンチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００８３】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した５−フェニルペンチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００８４】
【表１】
【００８５】
表１中の実施例１、実施例２、実施例３、比較例１、比較例２の化合物は、末端のフェニル基と固定化支持体側のアミノ基とにはさまれた炭素数がそれぞれ１、２、３、４、５の違い構造の化合物である。これらの化合物は、酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白、すなわちＨＯｘ-ＬＤＬ、ＭＯｘ-ＬＤＬ、ＬＯｘ-ＬＤＬに対し６０％以上の除去能を示し、ＡＧＥ-２、ＡＧＥ-３に対し（９０）％以上の除去能を示す。さらにヘパリンによる除去能阻害を受けない。
【００８６】
ところが、実施例１、実施例２、実施例３の化合物は、ＨＤＬに対しそれぞれ−１１％、−１０％、２％の除去能を示し吸着はしないが、一方、比較例１、比較例２の化合物は、ＨＤＬに対し、それぞれ３５％、８４％の除去能を示し、実施例１、実施例２よりかなりの高値を示し吸着する。
【００８７】
前述の炭素数が、１、２、３である化合物の実施例１、実施例２、実施例３は、炭素数が４、５である化合物の比較例１、比較例２に比べ、酸化状態の異なる低密度リポ蛋白、および終末糖化産物に対して高い吸着除去能を示し、ＨＤＬに対して低い吸着能を示した。さらにヘパリンによる吸着能阻害を受けない。すなわち、炭素数１、２、３である末端アリール置換鎖状アルキルアミノ化合物は、優れた特性を示した。
【００８８】
末端複素環アルキルアミノ化合物
［実施例４］
末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、２−（３−インドリル）エチルアミン（東京化成工業社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物を調製した。
【００８９】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００９０】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００９１】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００９２】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【００９３】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端インドリル基置換エチルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【００９４】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した２−（３−インドリル）エチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００９５】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した２−（３−インドリル）エチルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【００９６】
［比較例３］
末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の調製
有機高分子支持体としてＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍ（東ソー株式会社製）濃度１４３ｍｇ／ｍｌ水溶液を１ｍｌ、蒸留水１ｍｌを１５ｍｌサンプル管に入れ、蒸留水で４回洗浄した。このサンプル管に、３−（４−ピリジル）プロピルアミン（Ｋｅｙ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社製）３００ｍｇ、ｐＨ１１水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌ、ジオキサン１ｍｌを入れ、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で１回、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液１回、蒸留水でさらに２回洗浄した。前記洗浄後、２Ｍグリシン水溶液１０ｍｌを加え、４５℃恒温槽内で約１５時間ローテーターを用い攪拌した。その後、蒸留水で８回洗浄を繰返し、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物を調製した。
【００９７】
ヘパリン吸着型レジンの調製
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、濃度０．５ｍｇ／ｍｌＢＳＡ／ＰＢＳ水溶液５００μｌを加え３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清を除去し、０．２％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。濃度２５００Ｕ／ｍｌヘパリンナトリウム水溶液を３００μｌ加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。この固形部分をヘパリン吸着型レジンとした。その溶液部分の一部を、０．２％塩化ナトリウム水溶液で１００倍希釈した。その１００倍希釈溶液５０μｌに０．００５％トルイジンブルー溶液（０．２％塩化ナトリウム水溶液と０．０１Ｎ塩酸溶液）５００μｌをあわせ、マイクロチューブミキサーで１０分攪拌した後、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離操作を行い、上清中のヘパリン濃度から、レジンへのヘパリンの吸着量を求めた。
【００９８】
ＨＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上記のように調製したヘパリン吸着型レジン１００μｌをＰＢＳで２回洗浄し、上清の除去後、ヒト血清３００μｌ、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＨＯｘ−ＬＤＬ３０μｇを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清の酸化ＬＤＬ濃度を積水メディカル社製ＥＬＩＳＡキットで測定し吸着量を計算した。
【００９９】
ＭＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＭＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【０１００】
ＬＯｘ−ＬＤＬの吸着除去
上述のＨＯｘ-ＬＤＬを、ＫＡＬＥＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製キットで調製したＬＯｘ−ＬＤＬに変えて同様の操作方法で行った。
【０１０１】
ＨＤＬの吸着除去
上記のように調製したＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０Ｍを支持体に用いた末端ピリジル基置換プロピルアミノ化合物の樹脂１００μｌに、ヒト血清３００μｌを加え、３７℃で１時間ローテーターを用い攪拌した。その後、上清のＨＤＬ濃度を測定し吸着量を計算した。
【０１０２】
ＡＧＥ-２の吸着除去
調製した３−（４−ピリジル）プロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−２の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【０１０３】
ＡＧＥ-３の吸着除去
調製した３−（４−ピリジル）プロピルアミノ基を付けたＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＡＦ−Ｅｐｏｘｙ−６５０樹脂を用いて、前述のＡＧＥ−３の吸着操作法から吸着除去率を求めた。
【０１０４】
【表２】
【０１０５】
表２中の実施例４は、前述表１中の実施例２の末端フェニル基がインドール基に変わった複素環化合物である。この化合物は、ヘパリンによる除去能阻害を示さず、ＨＤＬに対しても、−２％の除去能を示した。広い酸化状態、即ちＨＯｘ−ＬＤＬ、ＭＯｘ−ＬＤＬ、ＬＯｘ−ＬＤＬに対して９５％以上の除去能を示す。
【０１０６】
一方、表１中の実施例３の末端フェニル基がピリジル基に変わった複素環化合物である表２中の比較例３は、ＨＤＬに対しほとんど除去能を示さないが、著しいヘパリンによる除去能阻害（７３％）を示した。低い酸化状態のＬＯｘ−ＬＤＬに対して４４％の除去能を示した。
【０１０７】
即ち、末端芳香環がインドール環である場合には、ヘパリンによる除去能阻害は受けないが、末端芳香環がピリジンのような強い塩基性芳香環の場合には、著しいヘパリンによる除去能阻害を受けた。
【０１０８】
このように、末端複素環アルキルアミノ化合物、特にインドール環の場合は、広い酸化状態のＯｘ−ＬＤＬを吸着除去能を持ち、ヘパリンによる除去能阻害を受けず、ＨＤＬに対しても吸着能を示さない優れた特長を持つ化合物である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式：
【化５】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤。
【請求項２】
次式：
【化６】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤。
【請求項３】
酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白に対して６０％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項４】
終末糖化産物に対して４５％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項５】
終末糖化産物に対して９０％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項６】
ヘパリンによる吸着能阻害は５％以下である、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項７】
高密度リポ蛋白に対する吸着能が５％以下である、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項８】
請求項１−７のいずれかに記載の吸着剤を充填した体外血液処理用デバイス。
【請求項１】
次式：
【化５】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤。
【請求項２】
次式：
【化６】
［式中、Ｘは有機高分子支持体であり、Ｒ1は−Ｈ、−ＣＨ3、または−Ｃ6Ｈ5であり、Ｒ2はＨ、ＣＨ3、−ＣＯＣＨ3、または−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4Ｃｌであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｃ6Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒであり、ｎ＝１、２、または３である］
で表される酸化低密度リポ蛋白および終末糖化産物の吸着剤。
【請求項３】
酸化状態の異なる酸化低密度リポ蛋白に対して６０％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項４】
終末糖化産物に対して４５％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項５】
終末糖化産物に対して９０％以上の吸着能をもつ、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項６】
ヘパリンによる吸着能阻害は５％以下である、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項７】
高密度リポ蛋白に対する吸着能が５％以下である、請求項１または２に記載の吸着剤。
【請求項８】
請求項１−７のいずれかに記載の吸着剤を充填した体外血液処理用デバイス。
【図１】
【公開番号】特開２０１３−１７５３６（Ｐ２０１３−１７５３６Ａ）
【公開日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１５１２５０（Ｐ２０１１−１５１２５０）
【出願日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【出願人】（５０８３１１３９６）株式会社ファルミット (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【出願人】（５０８３１１３９６）株式会社ファルミット (5)
【Ｆターム（参考）】
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