鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストおよび使用方法
本発明は下式の化合物
またはその薬学的に受容可能な塩；化合物（Ｉ）を適切な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物；および、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を含む、生理障害、特に鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療する方法、を提供する。
またはその薬学的に受容可能な塩；化合物（Ｉ）を適切な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物；および、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を含む、生理障害、特に鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療する方法、を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療薬として有用な三環式化合物と、その化合物を含む医薬組成物と、患者における生理障害を治療する化合物を使用する方法と、その化合物の合成において有用な中間体および工程に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルドステロン（一次性内因性鉱質コルチコイド）は、鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）との相互作用後におけるナトリウムと水の再吸収およびカリウム排出を促進する。アルドステロンの役割は電解質と水とのバランスを維持することにあるため、ＭＲアンタゴニストは、多くの生理障害（例えば、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、および、一次性または二次性の高アルドステロン症状（例えば、コン症候群）の障害）の治療に用いられてきた。より最近は、ＭＲアンタゴニストは、鬱血性心不全および急性心筋梗塞の治療に用いられている。加えて、ＭＲアンタゴニストは、更に、腎疾患の前臨床モデルにおいて有効であり、腎障害（例えば糖尿病性腎症を含む慢性腎疾患）に苦しむ患者においてタンパク尿を減少させる標準的な治療との組み合わせにおいても有効であることが証明されている。
【０００３】
しかしながら、既存のステロイド性ＭＲアンタゴニストは、それらの安全性および／または有効性を制限する随伴効果を発生させてしまう。例えば、スピロノラクトンは、他の生理学的プロセスを媒介する他の核ホルモン受容体（例えば、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、または、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ））に対して、非選択性であり、かつ、交差反応する。スピロノラクトン治療はまた、高カリウム血症に関連しており、更に、女性化乳房、勃起障害、性欲減退、月経不順、および、胃部不快感とも関連している。エプレレノンは、他の核ホルモン受容体と比較してＭＲに選択的であるものの、同様に、高カリウム血症に関連している。したがって、現在のＭＲアンタゴニスト治療の代替治療が当該技術分野において未だ必要とされている。
【０００４】
本発明の目的は、ＭＲアンタゴニスト活性を有する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することである。より具体的には、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することが目的である。より具体的な実施形態として、本発明の目的は、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合し、かつ、腎臓（ｒｅｎｏ）または心臓（ｃａｒｄｉｏ）の防御効果活性を有する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することである。更により具体的な実施形態として、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合し、かつ、腎臓または心臓の防御効果活性を有するが、高カリウム血症の低い発生率または発生可能性を有する非ステロイド性ＭＲアンタゴニストを提供することが目的である。
【０００５】
三環式ＭＲリガンドは、当該技術分野において公知である。例えば、特許文献１および特許文献２は、鉱質コルチコイド受容体または糖質コルチコイド受容体の調節の影響を受けやすい疾患を治療するのに有用な三環式ステロイドホルモン受容体調節因子を開示している。本発明は、以下に示す化合物（Ｉ）として与えられた特定のジベンゾオキセピンに関する。ここで、化合物（Ｉ）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト治療に応答する疾患の治療または予防における効用を有することを示す、インビトロ活性およびインビボ活性のプロファイルを有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第０４／０５２８４７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０５／０６６１６１号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
したがって、本発明は、下式の化合物、
【化１】
または、その薬学的に受容可能な塩を提供する。
【０００８】
特定の実施形態として、本発明は、結晶形態における化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、あるいは、コン症候群を治療または予防する方法を提供する。より特定の態様として、本発明は、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、更に、治療に用いられる化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。更に、本発明は、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、またはコン症候群の治療または予防において用いるための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。より具体的には、本発明は、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患の治療または予防において用いられるための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、またはコン症候群を治療または予防する医薬を製造するための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。より具体的には、本発明は、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防する医薬を製造するための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。
【００１２】
加えて、本発明は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。より具体的には、本発明は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防するための医薬組成物を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた状態で提供する。本発明は、また、化合物（Ｉ）の合成に有用な新規中間体および工程を包含する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、化合物（Ｉ）の薬学的に受容可能な塩および化合物（Ｉ）の溶媒和物、または、その薬学的に受容可能な塩に関する。そのため、本願明細書において用いられる場合、用語「化合物（Ｉ）」は、その意味の範囲内で化合物の任意の溶媒和物を含む。薬学的に受容可能な塩およびそれらの調製方法の例は、当該技術分野において周知である。例えば、以下の文献を参照のこと。Ｓｔａｈｌら，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」，ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，（２００２）；Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）；およびＢａｓｔｉｎら，「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）。特に記載すべきは、化合物（Ｉ）のトシラート塩により作られたものであるが、化合物（Ｉ）の遊離塩基が好ましいことが理解されるべきである。
【００１４】
用語「Ｒ」および「Ｓ」は、キラル中心の特定の構造を示すための有機化学において一般的に用いられるように本願明細書において用いられる。用語「（±）」、「Ｒ／Ｓ」または「ＲＳ」は、キラル中心のラセミ構造を意味する。立体化学における優先順位の部分的なリストおよび議論は、「Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ」，（Ｊ．Ｈ．Ｆｌｅｔｃｈｅｒら，ｅｄｓ．，１９７４）」に含まれている。本願明細書において用いられるように、記号
【数１】
は、ページの領域から前方へ突き出る結合を意味し、一方で、記号
【数２】
は、ページの領域から後方へ突き出る結合を意味する。
【００１５】
当業者に理解されるように、炭素−炭素または炭素−窒素二重結合を含む分子は、幾何異性体として存在し得る。２つの方法が、特定の異性体を指定するために一般的に用いられる。「シス−トランス」法および「ＥとＺ」法は、二重結合された各原子に結合している基が同一であるか異なるかに依存する。幾何異性の議論および特定の異性体の名前付けは、Ｍａｒｃｈ，「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２，Ｃｈａｐｔｅｒ４」において見出される。
【００１６】
化合物（Ｉ）は、医薬組成物の一部として調製され得る。そのため、薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物またはその薬学的に受容可能な塩は、本発明の重要な実施形態である。医薬組成物およびそれらの調製方法の例は、当該技術分野において周知である。例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，１９ｔｈｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５））」を参照のこと。化合物（Ｉ）を含む例示的な組成物としては、例えば、０．５％カルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０および２．７％ＮａＣｌを含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、または１％カルボキシメチルセルロースおよび０．２５％ポリソルベート８０を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、１％カルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および精製水中０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、１％ナトリウムカルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および精製水中０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）（ジェットミル処理済）、１％ヒドロキシエチルセルロース、１０％ビタミンＥ ＴＰＧＳ（ｄ−アルファ−トコフェロールポリエチレングルコール１０００コハク酸エステル）、および精製水中の０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）（ジェットミル処理済）、１０％ビタミンＥ ＴＰＧＳおよび精製水中の０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合（Ｉ）（ジェットミル処理済）、ならびに２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ約２）および１等量（ｅｑ．）ＨＣｌを含む溶液（１５ｍｇ／ｍｌ）中の化合物（Ｉ）が挙げられる。しかしながら、本発明の好ましい組成物が、カプセルまたはタブレット中に調製された、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含むことは理解されるだろう。
【００１７】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、あるいは、化合物（Ｉ）を含む組成物またはその薬学的に受容可能な塩は、経口および非経口経路を含む、化合物を生物学的に利用可能とする任意の経路によって投与され得る。しかしながら、経口経路が好ましいことが理解されるだろう。
【００１８】
当業者は、粒径が薬剤のインビボ溶解に影響を及ぼし得、続いて、その薬剤の吸収にも影響を及ぼし得ることを理解するだろう。本願明細書において用いられる「粒径」は、従来技術（例えば、レーザー光散乱、レーザー回折、ミー散乱、沈降場流動分画、光子相関分光法等）によって決定された薬剤の粒子の直径を意味する。薬剤が低い溶解性を有する場合、小さいまたは低減された粒径は溶解を促進し得、よって、その薬剤の吸収を増加させる（Ａｍｉｄｏｎら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２；４１３−４２０（１９９５））。粒径を低減または制御する（微粉化（ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ））方法は、従来技術であり、ボールミル粉砕、ピン粉砕（ｐｉｎ ｍｉｌｌｉｎｇ）、ジェットミル（ｊｅｔ ｍｉｌｌｉｎｇ）、湿式粉砕などが挙げられる。粒径を制御する別の方法は、ナノ懸濁液中で薬剤を調製することを含む。本発明の特定の実施形態は、化合物（Ｉ）または化合物（Ｉ）の薬学的に受容可能な塩、あるいは、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物またはその薬学的に受容可能な塩を含む。ここで、当該化合物または塩は、約１０μｍよりも小さいｄ９０粒径（すなわち、粒径の９０％以下のサイズ）を有する。
【００１９】
薬剤が特定の物理的特性を有することが望まれることは当業者により理解されるだろう。具体的には、安定で結晶固体である薬剤が望ましく、それらは、化学合成、精製、保存、および、調製物または投与形態の開発といった従来のパラダイムの影響を特に受けやすい。本願明細書において用いられる「結晶形（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｆｏｒｍ）」または「結晶形態（ｃｒｙｓｔａｌ ｆｏｒｍ）」は、化学種の結晶調製物を意味する。
【００２０】
特定の結晶形体は、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、分光法（例えば、赤外線（ＩＲ）または核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法）、および、熱的手法（例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、または示差熱分析（ＤＴＡ））を含む従来技術を用いて同じ化学種の他の固体形から特徴付けられ得、そして、区別され得る。ＸＲＰＤが化学種の結晶形態を特徴付けるのに特に有用な手法である一方で、Ｘ線パターン中の実際のピーク強度は、同じ結晶形態の分析であっても分析ごとに変化し得、分析されたサンプル、および、使用された装置、溶媒、または手順に依存することが理解されるだろう。加えて、°２θにおいて測定される所与の結晶形態の分析から得られた正確なピーク位置は、分析ごとに変化し得る（たとえば、±０．１°）一方で、ピーク位置の相対パターンは、同じスペクトル間で実質的に維持されることも理解される。
【００２１】
本発明は結晶形態の化合物（Ｉ）を提供する。より具体的には、本発明は、約１０．５、１３．０、１５．５および１９．７の°２θにて特性ピークを有する結晶形態の化合物（１）の遊離塩基（本明細書中の実施例の遊離塩基式Ｉ）を提供する。さらに、本発明は、約１１．３、１２．１、１８．８および２１．０の°２θにて特性ピークを有する結晶形態の化合物（Ｉ）の遊離塩基（本明細書中の実施例の遊離塩基式ＩＩ）を提供する。
【００２２】
本明細書中で使用される用語「患者」は、イヌ、ネコ、ウシ、サル、ウマ、またはヒツジのようなヒトまたは非ヒト哺乳動物を示す。より具体的には、用語「患者」は、ヒトを示す。本明細書中で使用される用語「処置すること」（あるいは「処置する」または「処置」）は、既存の症状または疾患の進行または重篤度を、妨げること、予防すること、抑えること、遅滞させること、停止させること、または逆転させることを含む。本明細書中で使用される用語「予防すること」（あるいは「予防する」または「予防」）は、症状または疾患の発生または出現を、妨げること、抑えること、または阻害することを示す。当業者によって理解されるように、生理的障害が、「慢性」状態、または「急性」症状の発現として存在してもよい。このように、障害の処置は、急性症状の発現および慢性状態の両方を意図する。急性症状の発現において、化合物は症状の発症時に投与され、症状が消失した場合、停止され、一方、慢性状態は疾患の期間全体にわたって処置される。
【００２３】
本明細書で使用される用語「有効量」は、患者への単回または複数回の投薬の際に、診断または処置下の患者に所望の効果を提供する、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の量または投薬量を示す。有効量は、当業者として、哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および一般的健康；関連する特定の疾患；疾患の度合いまたは重篤度；個々の患者の反応；投与された特定の化合物；投与の様式；投与された調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬養生法；ならびに何らかの併用薬の使用のような多くの因子を考慮することにより、担当の診断医によって容易に決定されることができる。
【００２４】
本発明の方法および使用と併せて使用される場合、本発明の化合物および組成物は、単独、または特定の障害もしくは状態を処置するのに使用される従来の治療薬と共に投与されてもよい。例えば、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ薬物）などの高血圧、糖尿病性ネフロパシーまたは慢性腎疾患を処置するための従来の薬剤と共に投与されてもよい。本発明の化合物または組成物が、併用薬の一部として使用される場合、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、別個に、または併用される治療剤を含む製剤の一部として投与されてもよい。
【００２５】
生物学的活性の測定
本明細書中で使用される場合、「Ｋｄ」は、リガンド−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「Ｋｉ」は、薬物−受容体複合体についての平衡解離定数を示し、かつ、平衡状態で結合部位の半数に結合する薬物の濃度の指標であり；「Ｋｂ」は、アンタゴニスト−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「ＩＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度、あるいは、受容体へのリガンド結合の５０％変位を生じる薬剤の濃度を示し；「ＥＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大応答の５０％を生じる薬剤の濃度を示し；そして「ＥＤ５０」は、薬剤についての最大応答の５０％を生じる、投与された治療剤の投薬量を示す。
【００２６】
Ａ．ステロイド核ホルモン受容体結合アッセイ
ヒトＭＲ（鉱質コルチコイド受容体）、ＧＲ（糖質コルチコイド受容体）、ＡＲ（アンドロゲン受容体）、またはＰＲ（プロゲステロン受容体）を過剰発現するヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞からの細胞溶解物を、Ｋｉ値を決定するための受容体−リガンド競合結合アッセイのために使用する。
【００２７】
簡単に言うと、ステロイド受容体競合結合アッセイを、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ＝７．６）、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、７５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２０％グリセロール、２０ｍＭモリブデン酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、２０μｇ／ｍＬアプロチニン、および２０μｇ／ｍＬロイペプチン（アッセイ緩衝液）を含有する緩衝液中で行う。典型的には、ステロイド受容体結合アッセイは、１ウェル毎に、放射線標識されたリガンド（例えば、ＭＲ結合について０．２５ｎＭ［３Ｈ］−アルドステロン、ＧＲ結合について０．７ｎＭ［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合について０．３６ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン、およびＰＲ結合について０．２９ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン）、および２０μｇ ２９３−ＭＲ溶解物、２０μｇ ２９３−ＧＲ溶解物、２２μｇ ２９３−ＡＲ溶解物、または４０μｇ ２９３−ＰＲ溶解物のいずれかを含む。アッセイは、典型的には９６ウェル形式で行う。競合する試験化合物を、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度で添加する。非特異的結合を、ＭＲ結合について５００ｎＭアルドステロン、ＧＲ結合について５００ｎＭデキサメタゾン、またはＡＲおよびＰＲ結合について５００ｎＭメチルトリエノロンの存在下で決定する。結合反応物（１４０μＬ）を、４℃で一晩インキュベートし、次いで、７０μｌの冷炭デキストラン緩衝液（５０ｍｌのアッセイ緩衝液毎に０．７５ｇの炭と０．２５ｇのデキストランを含有する）を、各反応物に添加する。プレートを、４℃で、オービタルシェーカー上で８分間混合する。プレートを、次いで、１０分間４℃で、３，０００ｒｐｍで遠心分離する。結合反応混合物の１２０μｌのアリコートを、次いで、別の９６ウェルプレートに移し、１７５μｌのＷａｌｌａｃ Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ Ｈｉｓａｆｅ ３（商標）シンチレーション液を各ウェルに添加する。プレートを密封し、オービタルシェーカー上で激しく撹拌する。２時間のインキュベーション後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計数器で読み取る。
【００２８】
データを、推定ＩＣ５０および１０μＭでの阻害率を計算するために使用する。ＭＲ結合についての［３Ｈ］−アルドステロン、ＧＲ結合についての［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロン、またはＰＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロンに対するＫｄを、飽和結合によって決定する。化合物に対するＩＣ５０値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用してＫｉに変換する。
【００２９】
本質的に上記に記載される手順にしたがって、化合物（Ｉ）は、約０．４０ｎＭのＭＲ結合アッセイにおけるＫｉを示したので、化合物（Ｉ）がヒトＭＲの有効なリガンドであることを実証する。さらに、化合物（Ｉ）は、約１１７０ｎＭ、６６９ｎＭ、および４７８ｎＭのそれぞれＡＲ、ＧＲおよびＰＲ結合アッセイにおけるＫｉを示したので、化合物（Ｉ）がＭＲについての選択的リガンドであることを実証する。
【００３０】
Ｂ．ステロイド核ホルモン受容体調節の機能的アッセイ
アルドステロンは、鉱質コルチコイド受容体との相互作用によりそれに生理的効果を与える。ＭＲに対するアルドステロン細胞結合の後、リガンド受容体複合体は、それがＤＮＡ上のホルモン応答エレメントに結合する細胞核へ移行して、標的遺伝子の発現を開始する。本発明の化合物がステロイドホルモン受容体の活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する、のいずれか）能力を実証するために、核受容体タンパク質およびホルモン応答エレメント−受容体遺伝子構築物で一時的にトランスフェクトされた細胞における標的遺伝子発現の機能的調節を検出するバイオアッセイを実施する。機能アッセイにおいて利用される溶媒、試薬、およびリガンドは、商業的供給源から容易に利用可能であり、または、当業者によって調製されることができる。
【００３１】
１．核ホルモン受容体パネルスクリーン
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ（商標）などの適切なトランスフェクション試薬を使用して、ステロイドホルモン受容体およびレポーター遺伝子プラスミドでトランスフェクトする。簡単に言うと、ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のプロバシン（ｐｒｏｂａｓｉｎ）ＡＲＥおよびＴＫ（チミジンキナーゼ）プロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーターを使用して、ヒトアンドロゲン受容体（ＡＲ）を構成的に発現するプラスミドでＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトする。ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のＧＲＥおよびＴＫプロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶプロモーターを使用して、ヒト糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）、ヒト鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、またはヒトプロゲステロン受容体（ＰＲ）のいずれかを構成的に発現するプラスミドでトランスフェクトする。細胞を、Ｔ１５０ｃｍフラスコにおいて５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を有するＤＭＥＭ培地中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトされた細胞をトリプシン処理し、９６ウェル皿において５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度の試験化合物に曝露する。アッセイのためのアンタゴニスト様式において、各々の受容体に対して低濃度のアゴニストを培地に添加する（ＭＲについて０．０８ｎＭ アルドステロン、ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．６６ｎＭのメチルトリエノロン、ＰＲについて０．０８ｎＭのプロメゲストン）。試験化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解させ、標準的な技術を使用してルシフェラーゼ活性を決定する。
【００３２】
データを、ＥＣ５０値を決定するために４パラメータフィットロジスティック曲線に当てはめる。有効性率（飽和最大応答を有する化合物）または最大刺激率（飽和していない最大応答を有する化合物）を、以下の参照アゴニストで得られた最大刺激と比較して決定する：ＭＲアッセイについて３０ｎＭ アルドステロン、ＡＲアッセイについて１００ｎＭ メチルトリエノロン、ＰＲアッセイについて３０ｎＭ プロメゲストン、およびＧＲアッセイについて１００ｎＭ デキサメタゾン。ＩＣ５０値を、アンタゴニスト様式アッセイのデータを使用して同様に決定する。アンタゴニスト様式において、阻害率を、低濃度のアゴニスト（ＭＲについて０．０８ｎＭ アルドステロン、ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．６６ｎＭのメチルトリエノロン、およびＰＲについて０．０８ｎＭのプロメゲストン）の存在下での試験化合物活性と、試験化合物の非存在下での同じ低濃度のアゴニストによって生じる応答とを比較することによって決定する。
【００３３】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、ＭＲ、ＰＲ、ＧＲ、およびＡＲアッセイ（アンタゴニスト様式）において、それぞれ、約２１ｎＭ、９２４ｎＭ、＞１００００ｎＭ、および＞１００００ｎＭのＩＣ５０値を示し、アゴニスト様式において、ＭＲ、ＰＲ、ＧＲ、およびＡＲの各々について＞１００００ｎＭのＥＣ５０を示した。従って、化合物（Ｉ）はｈＭＲの選択的機能的アンタゴニストである。
【００３４】
２．ｈＭＲ競合アンタゴニストアッセイ
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、核ホルモン受容体パネルスクリーンについて上記と同じトランスフェクション試薬、プラスミド、プロモーター、レポーター構築物、緩衝液、および手順を使用してヒトＭＲでトランスフェクトする。トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中で９６ウェル皿に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、アルドステロンの種々の濃度（１０個の希釈物）（約０．００１ｎＭ〜０．０３μＭの範囲）に曝露する。ｈＭＲを刺激するアルドステロンの能力を、一定濃度の試験化合物の非存在下および存在下で決定し、標準的技術を使用してルシフェラーゼ活性を測定することによってモニターする。次いで、試験化合物Ｋｂを、式：Ｌｏｇ（ＤＲ−１）＝Ｌｏｇ［アンタゴニスト］−ＬｏｇＫｂを使用してアンタゴニスト濃度のｌｏｇに対するＳｃｈｉｌｄ解析プロットログ（用量比−１）を使用して決定することができる（ここで、用量比（ＤＲ）は、試験化合物の存在下でのアルドステロンＥＣ５０対試験化合物の非存在下でのアルドステロンＥＣ５０の比を表す）。
【００３５】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、ＭＲ競合アンタゴニストアッセイにおいて約５．１ｎＭのＫｂを示したので、化合物（Ｉ）がヒトＭＲの有効なアンタゴニストであることを実証する。
【００３６】
Ｃ．アルドステロン媒介性腎疾患のインビボモデル
雄の腎摘出を行っていないＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）を、１週間、収容所の水（ｈｏｕｓｅ ｗａｔｅｒ）および齧歯動物５００１食餌を自由に取らせて個々に収容する。順化後、ベースライン２４時間尿サンプルを回収し、全尿タンパク質およびクレアチニンを解析する。動物を体重およびベースライン尿タンパク質によって研究群に無作為に選ぶ。ベースライン血清を尾クリップにより取得し、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、および電解質を解析する。ベースラインサンプルを取得後、コントロール群を除いた全てのラットを、研究期間にわたって６％塩を含む食餌、および０．３％ＫＣｌを含む飲料水で維持する。コントロール動物を、研究期間にわたって５００１食餌および収容所の水で維持し、アルドステロンを与えない。０．７５μｇ／ｈにて２．５μｌ／ｈ×２８日の０．０１％ＤＭＳＯ中のｄ−アルドステロンを皮下送達するためにＡｌｚａミニポンプを、イソフルラン麻酔下で非コントロール動物（例えば試験化合物群およびビヒクルのみの群）に埋め込む。次いで、１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）／０．２５％ポリソルベート８０を含むビヒクル中の試験化合物、またはビヒクルのみを、アルドステロン注入の日後に開始して１日１回強制経口投与（１０ｍＬ／ｋｇ）する。繰り返し尿サンプルを、化合物またはビヒクル単独投与の２および４週間後に回収し、全尿タンパク質およびクレアチニンを解析する。研究終了時に、薬物動態サンプルを８時点（０．５、１、２、３、６、８、１２および２４時間）で得る。さらに、心臓および腎臓を除去し、心臓および腎臓組織における構造的損傷を検出するためのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびにマッソントリクローム染色のために１０％緩衝化ホルマリン中で固定することができる。血清もまた、血清ＢＵＮ、クレアチニン、および電解質のさらなる解析のために研究終了時に心穿刺により取得できる。
【００３７】
本質的に上記に記載される手順に従って、１０ｍｇ／ｋｇ／日×２８日で投与する場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクル処置した動物と比べて尿タンパク排泄を約６０％減少させたので、化合物（Ｉ）はインビボでの腎保護活性において有効であることを実証する。
【００３８】
化合物が抗高血圧効果を有することを実証するために、以下のモデルを利用することができる。
【００３９】
Ｄ．アルドステロン媒介性高血圧のインビボモデル
雄の腎摘出を行っていないＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）を、１週間、収容所の水および齧歯動物５００１食餌を自由に取らせて個々に収容する。順化後、動物に、２８日まで２．５μｌ／ｈにて０．２５μｇ／ｈのアルドステロンを皮下送達するためにＡｌｚｅｔポンプを埋め込み、研究期間にわたって６％ＮａＣｌを含む食餌および０．３％ＫＣｌを含む飲料水で維持する。遠隔測定装置もまた、動脈圧をモニターするために埋め込む。例えば、各動物からのシグナルを、研究にわたって１０分ごとにサンプリングする。２４時間にわたって収集した全ての値の平均（±ＳＥＭ）は、各動物についての日平均動脈血を表す。次いで、ポンプ埋め込み後の日に、１％中間粘度ナトリウムカルボキシメチルセルロース／０．２５％ポリソルベート８０／０．０５％Ａｎｔｉｆｏａｍ１５１０（商標）を含むビヒクル中の試験化合物、またはビヒクル単独を、１日に１回経口強制投与（１０ｍＬ／ｋｇ）する。
【００４０】
本質的に上記に記載される手順に従って、１日に１回（１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日）×１４日、経口投与した場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクルと比べて塩の存在下においてアルドステロンの血圧上昇効果を用量依存的に低下させるので、化合物（Ｉ）は降圧効果を有することが実証される。
【００４１】
化合物が、高カリウム血症の発生または高カリウム血症を生じる可能性を低下させることを実証するために、以下のモデルを利用することができる。
【００４２】
Ｅ．電解質調節のインビボアッセイ
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）の副腎を摘出し、次いで、手術後、５００１齧歯動物食餌および１％ＮａＣｌ飲料溶液で６日間維持する。次いで、動物を一晩絶食させ、１％生理食塩水飲料水を収容所の自由に取れる水と置き換える。その研究の朝、絶食させた動物を無作為に選んで、絶食させた体重に基づいて処置する。コントロール動物（例えばアルドステロンまたは試験化合物を与えていないもの）に、０．５％ＣＭＣ／０．２５％ポリソルベート８０／２．７％ＮａＣｌを含む１０ｍＬ／ｋｇの試験化合物ビヒクルを強制経口投与により与え、１ｍＬ／ｋｇのアルドステロンビヒクル（０．０１％ＤＭＳＯ／水）を皮下注射により与える。ビヒクル動物に同じ試験化合物ビヒクルを強制経口投与により与え、アルドステロン３μｇ／ｋｇを皮下注射により与える。試験物質はカルボキシメチルセルロース／ＮａＣｌビヒクルに懸濁する。試験化合物処置群に、カルボキシメチルセルロース／ＮａＣｌビヒクルに懸濁した試験物質およびアルドステロン３μｇ／ｋｇを皮下に与える。投与後すぐに、動物を、収容所の水を自由に取ることができる代謝ラックに置く。尿サンプルを用量投与から５時間後に回収し、電解質排泄をアッセイする。データは、副腎を摘出したビヒクル処置した動物に対するｌｏｇＮａ／Ｋ排泄比またはＮａ／Ｋ比の％として示す。化合物Ｉは種々の用量で試験することができ、どの程度化合物が尿のＮａ／Ｋ比（高い血清カリウム濃度の指標）の増加を誘発するかを決定する。
【００４３】
本質的に上記に記載される手順に従って、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与した場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクル処置した動物と比べて尿のＮａ／Ｋ排泄比を約３０％のみ増加させ、これは、化合物（Ｉ）が、高カリウム血症の発生または高カリウム血症を生じる可能性を低下させ得ることを実証する。
【００４４】
さらに綿密にせずに、当業者は、前述の説明を使用して本発明を十分に実施することができると考えられる。以下の調製物および実施例は、さらに詳細に本発明を例示し、化合物（Ｉ）の典型的な合成を表すために提供する。試薬および出発物質は容易に入手可能であるか、または当業者により容易に合成され得る。当業者は、実施例に記載される手順から適切なバリエーションを即座に理解するだろう。本発明の化合物名は、概して、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（登録商標）バージョン１０．０によって提供される。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、以下の用語は以下に示す意味を有する：「ＤＭＳＯ」とはジメチルスルホキシドを指し；「ＤＭＡＣ」とはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを指し；「ｔＢＯＣ」または「ｂｏｃ」とはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指し；「ＴＬＣ」とは薄層クロマトグラフィーを指す。
【００４６】
（調製例１）
１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン
【化２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７５０ｍＬ）中の２−ヨードベンジルブロミド（９０ｇ，０．２９ｍｏｌ）、２−ブロモ−５−フルオロフェノール（５７．９ｇ，０．２９ｍｏｌ）、および炭酸カリウム（６３ｇ，０．４６ｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間、攪拌する。水（１Ｌ）を加え、得られた混合物を１時間攪拌し、固形物を濾過し、水でリンスし、真空オーブン（２０ｍｍ Ｈｇ／６０°Ｃ）中で乾燥させ、標題の化合物を得る（１２１ｇ，＞１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ５．１１（ｓ，２Ｈ），６．８１（ｔ，１Ｈ），７．１３（ｔ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，１Ｈ），７．４６（ｔ，１Ｈ），７．５９（ｄ，１Ｈ），７．６２（ｔ，１Ｈ），７．９３（ｄ，１Ｈ）。
【００４７】
（調製例２）
３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル
【化３】
５５〜６０°Ｃにて、１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（１１７．４ｇ，０．２９ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３６．１ｇ，０．４４ｍｏｌ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド（９０．３ｇ，０．２９ｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．８ｇ，８ｍｍｏｌ，３ｍｏｌ％）、およびＮ−メチルピロリジノン（９００ｍＬ）の混合物に、Ｎ−メチルピロリジノン（２００ｍＬ）中のアクリル酸エチルの水溶液（３４．３ｍＬ，０．３２ｍｏｌ）を、滴下して加える。この反応混合物を室温まで冷却し、水（２Ｌ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）で処理する。珪藻土に反応物を通し、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、層を分離させ、水（２Ｌ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで有機部分を乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られた固形物をヘキサン（１Ｌ）中で懸濁し、２時間冷蔵し、濾過し、低温のへキサン（５００ｍＬ）で洗浄する。真空オーブン（５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇ）中で乾燥させ、標題の化合物を淡黄色の固形物として得る（１０４．４ｇ，９５％）。ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ３８１．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
（代替手順）
窒素下で、無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、新鮮なＮ−メチルピロリジノン（７２Ｌ）、酢酸ナトリウム（２７２１ｇ，３３．１７ｍｏｌ），１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（９０００ｇ，２２．１１ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（７１２８ｇ，２２．１１ｍｏｌ）を加える。攪拌を開始し、完全な真空下で３０分間、反応混合物からガスを抜き、窒素でパージする。反応器を窒素下で大気圧まで戻し、ガス抜きの手順を繰り返す。酢酸パラジウム（ＩＩ）（１８０ｇ，２％／重量）を反応混合物に加え、６０°Ｃまで加熱する。６０°Ｃにて、Ｎ−メチルピロリジノン（１８Ｌ）中の溶液として、アクリル酸エチル（２２５８ｇ，２２．５５ｍｏｌ）を添加漏斗を介して反応混合物にゆっくりと加える。添加を終えた後、反応混合物を７０℃まで加熱する。７０℃で最低でも２時間、攪拌を続ける。反応混合物の内部温度を５℃〜１０℃に調整する。別個の無菌の適切な大きさの反応器に、水（２２５Ｌ）を充填し、激しい攪拌を開始し、内部温度を５℃以下まで冷却する。最低でも１時間に亘り、反応混合物を激しく攪拌した水に移す。得られた懸濁液を３０分から１時間、周囲温度で攪拌する。ポリプロピレンのフィルターパッドで濾過し、薄い紫色の固形物を回収する。水（２５Ｌ）でフィルターケーキを洗浄し、ラバーダムを用いて、フィルタ上で吸引乾燥する。固形物を、水（４５Ｌ）と共に反応器へ再充填し、３０分から１時間、懸濁液を攪拌する。固形物をポリプロピレンのフィルターパッド上で再濾過し、水（２５Ｌ）を用いてフィルターケーキを洗浄する。ラバーダムを用いて、フィルタ上で吸引乾燥する。薄い紫色の物質を乾燥したトレイに移し、最低でも２４時間、ドラフト中で空気乾燥する。真空下で、５０℃未満にて、固形物をオーブンで乾燥させて、標題の化合物を得る（８．４ｋｇ，１００％）。
【００４９】
（調製例３）
（Ｅ）−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル
【化４】
１００℃〜１１０℃にて、６時間、Ｎ−メチルピロリジノン（８５０ｍＬ）中で、３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル（９４ｇ，０．２５ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３０ｇ，０．３７ｍｏｌ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド（８１ｇ，０．２５ｍｏｌ）、および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．７ｇ，７ｍｍｏｌ，３ｍｏｌ％）の混合物を加熱する。室温まで冷却し、水（１Ｌ）で希釈し、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（２Ｌ）で洗浄する。濾液を分液漏斗に移し、水（５００ｍＬ）を加え、層を分離する。有機層を水（２×１．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカパッドで濾過し、酢酸エチル（１．５Ｌ）で洗浄し、濃縮して乾燥する。残余の固形物にヘキサン（１Ｌ）を加え、２時間、冷蔵し、濾過し、ヘキサン（５００ｍＬ）でリンスし、５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、標題の化合物（６４．３ｇ，８７％）を得る。ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ２９９．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５０】
（代替手順）
窒素下で、無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、Ｎ−メチルピロリジノン（８３．４Ｌ）、酢酸ナトリウム（２．７０６ｋｇ，３２．９８ｍｏｌ）、３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル（９．２５６ｋｇ，２１．９９ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（７．０８８ｋｇ，２１．９９）を加える。攪拌を開始し、３０分間、完全な真空下で反応混合物をガス抜きし、窒素でパージする。反応器を窒素下で大気圧まで戻し、ガス抜き手順を繰り返す。酢酸パラジウム（ＩＩ）（１６７ｇ，２％重量）を反応混合物に加える。１００℃から１２５℃の間で反応物を加熱し、最低でも３時間から５時間、攪拌する。酢酸エチル（１００Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。水（１００Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。攪拌を止め、最低でも１時間、層を分離させる。有機層を回収し、酢酸エチル（５０Ｌ、次いで２５Ｌ）で水層を抽出する。有機部分を合わせ、水（４０Ｌ）、２０％の塩化ナトリウム水溶液（２×２０Ｌ）で洗浄し、各々最低でも３０分間、攪拌し、層を分離するために少なくとも３０分攪拌する。硫酸マグネシウム（８．０ｋｇ）で有機水溶液を乾燥し、活性炭（２．０ｋｇ）およびシリカゲル６０（２．０ｋｇ）を加え、最低でも１時間、攪拌する。濾過して固形物を取り除く。濾液を濃縮し、３５℃未満で、真空下で乾燥する。メタノール（２０Ｌ）を固形の残留物に加え、混合物を加熱して、５０℃〜６０℃にて、透明な溶液とした。ヘプタン（４０Ｌ）を加え、２０℃から２５℃の間まで冷却する。反応混合物を、最低でも３時間、−１０℃にまで、さらに冷却を続ける。最低でも１２時間、−１０℃にて攪拌する。濾過して、残留した固形の生成物を回収し、ヘプタン：メタノール（７５：２５）（２×２０Ｌ）の混合液で洗浄する。４０℃未満で、真空下で固形物を乾燥し、一定重量にし、標題の化合物を得る（３．７ｋｇ，６４％）。
【００５１】
（代替手順２）
Ｎ−メチルピロリジン（２５０ｍＬ）中で、１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（５０ｇ，０．１２３ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３０．２ｇ，０．３６９ｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムブロミド（３９．６ｇ，０．１２３ｍｏｌ）、および酢酸パラジウム（１ｇ）を６０℃に加熱する。アクリル酸エチル（１２．９１ｇ，０．１２９ｍｏｌ）を、Ｎ−メチルピロリジン（５０ｍＬ）中に、２０分間、滴下して加える。添加が完了した後、反応混合物を３時間、１４５℃まで加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、メチルｔ−ブチルエーテル（２×１５０ｍＬ）で固形物を洗浄する。濾液をメチルｔ−ブチルエーテル（０．５Ｌ）で希釈し、水（０．５Ｌ）で洗浄する。有機層を分離し、水層をメチルｔ−ブチルエーテル（２×３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（２×２００ｍＬ）で洗浄する。有機部分を硫酸マグネシウムで乾燥し、炭で処理し、濾過し、メチルｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で固形物を洗浄し、濃縮する。真空にせずに、５５℃のビュッヒフラスコ中に、イソプロパノール（２０ｍＬ）中で残留物をスラリーにする。攪拌しながら、ヘプタン（１００ｍＬ）を加える。暗い懸濁液を冷温の部屋で一晩置く。固形物を濾過し、低温のヘプタン／イソプロパノール（９：１，２×１００ｍＬ）、次いで、ヘプタン（５０ｍＬ）でリンスし、乾燥し、３５℃にて、真空オーブン内で、一定重量にし、標題の化合物を黄褐色の粉末として得る（２２．２５ｇ，６１％）。
【００５２】
（調製例４）
（Ｅ）−１１−ブロモメチレン−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン
【化５】
イソプロパノール（７２５ｍＬ）中の（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル（６９．５ｇ，０．２３ｍｏｌ）の懸濁液に、水（１２５ｍＬ）中の水酸化リチウム（１２．０ｇ，０．５３ｍｏｌ）の水溶液を加え、７０℃まで、４時間、加温する。混合物を４０℃まで冷却させ、次いで、氷酢酸（０．４４ｍｏｌ，２５ｍＬ）で処理する。１５分間、攪拌した後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．２５ｍｏｌ，４４ｇ）を加える。泡立ちが続いて起き、温度が４５℃まで上昇し、数分後に固形物を形成する。４０℃〜４５℃で混合物を１時間、攪拌し、室温まで冷却する。水（１５０ｍＬ）中の亜硫酸水素ナトリウム（４．５ｇ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）、および水（４５０ｍＬ）を加える。得られた懸濁液を濾過し、低温の１：１のイソプロパノール／水（３００ｍＬ）でリンスする。固形物を６０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで一晩乾燥し、標題の化合物を得る（６５．８ｇ，９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ４．９−５．４（ｂｒ ｄ，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．７７（ｄｔ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．４６（ｍ，４Ｈ），７．５２（ｄｄ，１Ｈ）。
【００５３】
（代替手順）
無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、窒素下で、イソプロパノール（１２５Ｌ）、（Ｅ）−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル（１３．８５７ｋｇ，４６．４２ｍｏｌ）、および水（５４Ｌ）中の水酸化リチウム（３．８９６ｋｇ，９２．８４ｍｏｌ）水溶液を充填する。反応混合物を８０℃まで加熱し、２時間、攪拌する。反応混合物を４０℃まで冷却し、２０分間に亘って４０℃から４５℃の間で酢酸（５．５７５ｋｇ，９２．８４ｍｏｌ）を加える。４５℃未満で、３０分に亘って、Ｎ−ブロモスクシンイミド（４８．７４ｍｏｌ，８．６７６ｋｇ）を少しずつ加える。反応物を室温まで冷却し、最低でも１２時間攪拌する。亜硫酸水素ナトリウム水溶液（約３７．７Ｌ）を加え、１５分間、攪拌する。炭酸水素ナトリウム水溶液（約３７．７Ｌ）を加え、１５分間、攪拌する。水（１２９Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。得られた固形物を濾過して回収し、イソプロパノール：水（１：１，２×２０Ｌ）で洗浄する。真空化で、３２℃にて固形物を乾燥し、一定の重量とし、標題の化合物を得る（１３．８ｋｇ，９７％）。
【００５４】
（調製例５）
（Ｅ）−２−（（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン
【化６】
１，４−ジオキサン（２５０ｍＬ）中の（Ｅ）−１１−（ブロモメチレン）−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン（１５ｇ，４９ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラト）ジボロン（１６ｇ，６４ｍｍｏｌ）の攪拌した混合物に、酢酸カリウム（１５ｇ，１５０ｍｍｏｌ）を加える。窒素で混合物を洗い流し、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタンアダクト（１．８０ｇ，２．４６ｍｍｏｌ）を加え、一晩、６５℃で加熱する。室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空内で濾液を濃縮する。メタノール（２００ｍＬ）を加え、真空せずにロータリーエバポレータで１時間、混合物を回転し、茶色の固形物を形成する。暗褐色の結晶を濾過により回収し、真空化で一晩乾燥し、標題の化合物を得る（７．２８ｇ，４２％）。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン中の０％〜１６％の酢酸エチルで溶出し、標題の化合物を黄色の固形物（３．４６ｇ，２０％）として得る。反応物の全収率は１０．７ｇ（６２％）である。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，４Ｈ），６．６４−６．５７（ｍ，１Ｈ），６．４８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｓ，１Ｈ），５．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．１５（ｓ，１２Ｈ）。
【００５５】
（代替手順）
機械的攪拌器、熱電温度計、窒素入り口、および還流冷却器を有する５０Ｌの三つ口丸底フラスコを用意する。加熱マントルに配置する。フラスコを、ジオキサン（１３．５Ｌ）、（Ｅ）−１１−ブロモメチレン−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン（１．６００ｋｇ，５．２４ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．７３１ｋｇ，６．８２ｍｏｌ）、酢酸カリウム（８２３ｇ，８．３８ｍｏｌ）、水（２０ｍＬ）、トリシクロヘキシルホスフィン（２９．５ｇ，０．１０５ｍｏｌ）、およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジ−パラジウム（４８ｇ，０．０５２ｍｏｌ）で充填する。混合物を８０℃〜８５℃まで加熱する。最低でも６時間、反応物を８５〜９０℃に維持する。室温まで冷却する。珪藻土（２−３中）のパッドで反応混合物を濾過する。酢酸エチル（２×３．５Ｌ）で濾液を洗浄する。５０℃〜５５℃で、ロータリーエバポレータ上で濾液を濃縮する。ヘプタン（２×３．５Ｌ）で共蒸留し、懸濁液を形成する。５０℃で、メタノール（２．５Ｌ）をスラリーに加える。１０〜１５分間、攪拌する。スラリーを２０〜３０分間、−１０℃〜０℃に冷却する。固形物を濾過する。回収した固形物を、低温（−１０°Ｃ）のメタノール（２×１．５Ｌ）で洗浄し、次いで、ヘプタン（２×１．５Ｌ）で洗浄する。真空化で、周囲温度で固形物を乾燥し、標題の化合物を灰色がかった白色の固形物として得る（１．４０８ｋｇ，７６％）。
【００５６】
（調製例６）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸塩酸塩
【化７】
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，１４，（２００３）３１４１−３１５２に実質的に記載された手順に従って、５０℃で、無水酢酸（１．４３７ｋｇ，５．６５ｅｑ）および酢酸（４．２２５Ｌ）の混合物に、３０分に亘って、少しずつ、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（３３１ｇ，２．４９ｍｏｌ）を加える。９０℃で、５．５時間、反応混合物を加熱し、次いで、室温まで冷却する。反応物を室温で一晩攪拌し、次いで濃縮する。２Ｎ塩酸（４．５７Ｌ）中で残留物を溶解し、３時間、還流する。反応混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、真空下で、７０℃で約７００ｍＬまで濃縮する。物質を室温まで冷却し、一晩静置させる。エーテル（１Ｌ）で得られたスラリーを希釈し、結晶を濾過し、エーテルで洗浄し、真空化で乾燥し、標題の化合物（３４０ｇ）を得る。固形物を高温のエタノール（２．５Ｌ）で溶解し、冷却し、３５℃でゆっくりと攪拌し、エーテル（２．５Ｌ）をゆっくりと、少しずつ、１時間に亘って加える。２時間攪拌し、得られた白色の固形物を濾過し、一晩、真空オーブン内で乾燥し、標題の化合物（２７０．６ｇ，６５％）を得る。［α］Ｄ２０＋１２．０（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ），δ ２．３４−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．４５−２．５３（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｄｄ，１Ｈ），３．４５（ｄ，１Ｈ），４．５０（ｄｄ，１Ｈ），４．５８（ｂｒ ｓ，１Ｈ）。
【００５７】
（調製例７）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化８】
塩化チオニル（２３３ｍＬ，３．１０ｍｏｌ）を、０℃で、窒素雰囲気下で、乾燥したメタノール（３．５Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸塩酸塩（３５５ｇ，２．１２ｍｏｌ）の溶液に、滴下して加える。完全に加えた後、反応混合物を室温まで加温し、６時間、攪拌する。減圧下で反応混合物を濃縮し、対応するメチルエステル塩酸塩をろう状の固形物として得る。乾燥したジクロロメタン（３．５Ｌ）中で、０℃にて、固形物を懸濁し、トリエチルアミン（６４０ｍＬ，４．６６ｍｏｌ）を注意深く、３０分間、加え、さらに３０分間、攪拌する。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３９ｇ，０．３２ｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５００ｇ，２．２５ｍｏｌ）を連続して加える。反応混合物を室温まで加温し、１８時間攪拌する。水溶液を、水（４Ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム（４Ｌ）、およびブライン（４Ｌ）で抽出する。有機層をエチレンジアミン（８ｍＬ）で処理し、１５分間攪拌し、１０％のクエン酸水溶液（４Ｌ）で逆抽出する。無水硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、黄色の油状物（４８４ｇ）を得て、これを一晩凝固する。メチルｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）中で溶解し、少量まで濃縮する。ヘキサン（２Ｌ）を加え、混合物を１時間置く。白色の固形物を濾過し、ヘキサンで洗浄する。白色の固形物（２０ｍｍ Ｈｇ／６０°Ｃ）を一晩乾燥し、標題の化合物（３５４ｇ，６８％）を得る。［α］Ｄ２０＋５６．３（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １．４３（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．３５（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），４．２７−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．３８（ｍ，２Ｈ）。
【００５８】
（調製例８）
（２Ｒ，４Ｓ）−４−ブロモ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化９】
０〜５℃で、ジクロロメタン（３．２Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（３２０ｇ，１．３０ｍｏｌ）および四臭化炭素（５４０ｇ，１．９４ｍｏｌ）（ドライアイス／ジクロロメタンバス）の溶液に、トリフェニルホスフィン（１．９５ｍｏｌ，５１４ｇ）を少しずつ３０分に亘り加え、室温で４時間攪拌する。エタノール（３．２Ｌ）を加え、さらに２時間攪拌する。反応物を１８Ｌのカーボイに移し、沈殿が生じるまでエーテル（８Ｌ）を加える。混合物を一晩攪拌する。固形物を濾過し、エーテル層を濃縮する。ジクロロメタン中の油性の残留物を溶解し、生成物がＴＬＣによって検出できなくなるまで、ジクロロメタンで溶出するシリカプラグで濾過する。ジクロロメタン層を濃縮し、ヘキサン（４Ｌ）中の５％酢酸エチルで処理し、白色の固形物を形成する。混合物を、ヘキサン中の５％酢酸エチルで溶出するシリカプラグに通し、所望の生成物を含む画分のみを回収する。溶液を濃縮し、ヘキサン（２Ｌ）中の５％酢酸エチルで溶解し、ヘキサン中の５％酢酸エチルで溶出する１ｋｇのシリカゲルパッドで精製し、標題の化合物を黄色がかった油状物（３７２．４ｇ，９３％）として得る。［α］Ｄ２０＋５３．６（メタノール中、ｃ＝１．０）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３３および１．３９（２つのｓ，９Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．５３（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｑ，１Ｈ），４．７３（ｍ，１Ｈ）。
【００５９】
（調製例９）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化１０】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．５Ｌ）中のアジ化ナトリウム（１５７ｇ，２．３９ｍｏｌ）を（２Ｒ，４Ｓ）−４−ブロモ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（３７０ｇ，１．２０ｍｏｌ）に加え、７０℃〜７５℃、１６時間、窒素下で加熱する。室温まで冷却し、水（５Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（３Ｌ）で抽出する。ブライン（２Ｌ）で洗浄する。ブライン層を酢酸エチル（３Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物（３２４．５ｇ）を得る。物質をエーテル（２Ｌ）中で溶解し、水（２×２Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、２６１．２ｇの暗黄色の油状物を得る。水層をエーテル（２×２Ｌ）で逆抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、さらに７．３ｇの生成物を得る。全収率は２６８．５ｇ（８３％）である。［α］Ｄ２０＋３９．５（メタノール中、ｃ＝１．０）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １．４０−１．４１（ｓ，９Ｈ），２．０９−２．１３（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．４４（ｍ，１Ｈ），３．３７−３．４５（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．６９（ｓ，３Ｈ），４．０９−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．２５−４．３８（ｍ，１Ｈ）。
【００６０】
（調製例１０）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１１】
水素化ホウ素リチウム（８．５０ｇ，３５１ｍｍｏｌ）を、窒素下で、−３０℃にて、エーテル（１Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（９５ｇ，３５１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。温度を１．５時間、０℃まで上昇させ、さらに２時間、攪拌する。−７０℃まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｌ）を滴下して加える。室温まで加温し、層を分離させ、エーテル（１Ｌ）で水溶層を抽出する。エーテル層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。得られた物質を高真空下で乾燥し、黄色の油状物（８２ｇ，９６％）を得る。［α］Ｄ２０＋２０．３（メタノール中、ｃ＝１．０）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３８（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．２０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．７８（ｍ，１Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ）。
【００６１】
（調製例１１）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１２】
１５ｐｓｉの水素にて、室温で１６時間、メタノール（２．３Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２５ｇ，０．９３ｍｏｌ）および炭素上の１０％のパラジウム（２２．５ｇ，トルエンで湿らせてある）の混合物を水素化する。触媒を濾過し、濾液を濃縮し、標題の化合物を油状物（１９８ｇ，９２％）として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３８（ｓ，９Ｈ），１．５８（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｍ，１Ｈ），３．２０−３．５８（ｍ，６Ｈ），３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【００６２】
（調製例１２）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１３】
激しく攪拌しつつ、窒素下で、１６時間、酢酸エチル（２Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１９８ｇ，０．９２ｍｏｌ）、５−ブロモ−フルオロニトロベンゼン（２２４ｇ，０．９８ｍｏｌ）、トリエチルアミン（２７３ｍＬ，１．９６ｍｏｌ）の混合物を還流する。室温まで冷却し、ブラインで洗浄する。ブライン層を酢酸エチル（１Ｌ）で逆抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。暖かい酢酸エチル（２Ｌ）で得られた固形物を溶解し、約５００ｍＬまで濃縮し、結晶を形成し始めさせる。溶液をゆっくりとヘキサン（２Ｌ）で処理し、混合物を室温で２時間、静置させる。黄色の固形物を濾過により回収し、ヘキサンで洗浄し、４０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、２２７ｇの所望の生成物を得る。濾液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２：３：５酢酸エチル／ジクロロメタン／ヘプタンが２：３酢酸エチル／ヘプタンまで徐々に増加する）で精製し、さらに５４ｇの所望の生成物を得る。全収率は２８１ｇ（７０％）である。［α］Ｄ２０−８１（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．４０（ｓ，９Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），２．４８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｍ，１Ｈ），７．０８（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，１Ｈ），８．１５（ｄ，１Ｈ），８．５７（ｂｒｄ，１Ｈ，ＮＨ）。
【００６３】
（調製例１３）
（２Ｒ，４Ｒ）−［４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−ピロリジン−２−ｙｌ］−メタノール、塩酸塩
【化１４】
ジクロロメタン（４００ｍＬ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２５．５ｇ，０．３０１ｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン（８００ｍＬ）中の４Ｎ塩酸を加え、室温で４時間、攪拌する。濾過により沈殿物を回収し、エーテルで洗浄し、２０ｍｍＨｇ／６０°Ｃで乾燥し、標題の化合物（１０５．２ｇ，９９％）を得る。［α］Ｄ２０−８９．６（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．８０−１．８５（ｍ，１Ｈ），２．５４−２．５９（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．５１（ｍ，３Ｈ），３．５６−３．６３（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．７２（ｍ，２Ｈ），４．５０−４．５１（ｍ，１Ｈ），５．６０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，１Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ），８．９５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ）。
【００６４】
（調製例１４）
（７Ｒ，８ａＲ）−７−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−４−オン
【化１５】
テトラヒドロフラン（３７５ｍＬ）および水（３７６ｍＬ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−［４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−ピロリジン−２−イル］−メタノール、塩酸塩（５４．５ｇ，１５５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ｐＨが１０〜１２となるまで、５Ｎ水酸化ナトリウムを滴下して加える。３０分に亘り、滴下漏斗を介して、塩化クロロアセチル（２７．３ｍＬ，３３７ｍｍｏｌ）を加える。別の滴下漏斗を用いて、内部ｐＨが８〜１２を維持するような速度にて、酸塩化物を加えている間、５Ｎ水酸化ナトリウムを加える。６時間攪拌し、濾過して形成された固形物を回収し、水で洗浄する。減圧下で濾液の有機成分を取り除き、濾過により固形物を回収する。２つの固形物のバッチを合わせ、６０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、５１．４ｇを得る。固形物をジクロロメタン（１．５Ｌ）中の２％メタノールで懸濁し、１時間、４０℃でロータリーエバポレータ上で回転する。沈殿物を濾過により回収（１１ｇ）し、取り除く。濾液をジクロロメタンで溶出するシリカゲルプラグに通し、溶出液を濃縮し、標題の化合物を橙黄色の固形物として得る（３２．８ｇ，６０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．６８（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｍ，１Ｈ），３．４９（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．９１（ｍ，３Ｈ），４．１０（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，１Ｈ），７．９３（ｄ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ）。
【００６５】
（調製例１５）
（７Ｒ，８ａＲ）−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニル）−（ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン
【化１６】
（７Ｒ，８ａＲ）−７−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−４−オン（３２．１ｇ，９０．１ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）に加え、０℃から−５℃で冷却する。ボラン−硫化ジメチル合成物（２６ｍＬ，０．２７９ｍｏｌ）を１０分に亘って加える。混合物を加熱し、３時間、還流する。氷槽で反応混合物を冷却し、注意深くメタノール（４５０ｍＬ）を滴下して加える。４Ｎ塩酸（４５０ｍＬ）を加え、２時間還流する。約４０℃まで冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウムを注意深く滴下して加えて、ｐＨを１０〜１２に調節する。減圧下で有機溶媒を取り除く。水（１．２Ｌ）で水層を希釈し、ジクロロメタン（１．２Ｌ）で抽出する。硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物を得る。この時点で、油状物を、以前の同一の調製（３０．２ｇのアミド出発物質で開始）からの粗物質と混合する。油状物を塩化メチレンで溶出するシリカゲルプラグに通し、より高いＲｆ成分を取り除く。ジクロロメタン中の１％のメタノールで溶出し、濃縮し、固形物を得る（５７．８ｇ）。エーテル（１Ｌ）中に固形物を懸濁し、一晩静置させる。濾過による固形物を回収し、少量のエーテルで洗浄し、４７．５ｇを得る。濾液を濃縮し、エーテル（１００ｍＬ）中に懸濁し、室温で２時間静置させる。さらに３．１ｇの所望の生成物を濾過して回収する。濾液を濃縮して、シリカプラグ濾過により残留物を精製し、さらに２．９ｇのオレンジ色の固形物を得る。全ての固形物を混合し、標題の化合物（５３．５ｇ，８９％）を得る。［α］Ｄ２０−３６（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．２１（ｍ，１Ｈ），２．０６（ｍ，１Ｈ），２．１８（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｄ，１Ｈ），２．９５（ｄ，１Ｈ），３．１８（ｔ，１Ｈ），３．４２（ｔ，１Ｈ），３．７３（ｄ，１Ｈ），３．８５（ｄ，１Ｈ），４．１９（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｄ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，１Ｈ），８．０１（ｄ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ３４２．０，３４４．０（１：１アイソトープ比）［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６６】
（調製例１６）
（Ｅ）−［４−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデンメチル）−２−ニトロ−フェニル］−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン
【化１７】
フラスコにテトラヒドロフラン（１Ｌ）およびメタノール（５００ｍＬ）中の（７Ｒ，８ａＲ）−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニル）−（ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン（５０．９ｇ，０．１４９ｍｏｌ）、（Ｅ）−２−（（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（５７．５ｇ，０．１６３ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１０．１ｇ，３９ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（１９．７ｇ，０．３４６ｍｏｌ）を充填する。混合物に窒素を通して３０分間、泡立てる。酢酸パラジウム（ＩＩ）（３．００ｇ，１３ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間、混合物に窒素を通して泡立てる。１６時間、窒素下で還流（６０℃）にて、加熱する。室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、真空内で濃縮し、固形物を得る。１：１の酢酸エチル／ブライン（２Ｌ）中で溶解し、珪藻土のパッドに通す。パッドを１：１の酢酸エチル／ブライン（２×１Ｌ）で洗浄し、次いでジクロロメタン（４×１Ｌ）中の１０％のメタノールで洗浄する。層を分離し、有機相を混合する。硫酸ナトリウムで有機部分を乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物を得る。ジクロロメタン中で油状物を溶解し、シリカゲルパッドに通す。より高いＲｆ ＴＬＣ成分が取り除かれるまで、ジクロロメタンでパッドをリンスする。ジクロロメタン中の１％のメタノールで溶出し、真空内で濃縮し、発泡体を得る。酢酸エチル（２Ｌ）中で溶解し、約２００ｍＬまで濃縮する。ヘキサン（１．５Ｌ）を加え、懸濁液を室温で１時間、静置させる。濾過により、オレンジ色の固形物を回収し、５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、標題の化合物（５３ｇ，７３％）を得る。［α］Ｄ２０−２６（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．０８（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｍ，１Ｈ），２．４１（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｍ，１Ｈ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｄ，１Ｈ），３．８２（ｄ，１Ｈ），４．１２（ｍ，１Ｈ），５．０２（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），５．５９（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ），６．６０（ｄ，１Ｈ），６．８１（ｍ，２Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｔ，１Ｈ），７．３８（ｔ，１Ｈ），７．６０（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ４５８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【実施例】
【００６７】
（実施例１）
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（式Ｉ）
【化１８】
室温で、２時間、５０ｐｓｉにて、テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）中の（Ｅ）−［４−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデンメチル）−２−ニトロ−フェニル］−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン（５２ｇ，０．１０７ｍｏｌ）、トリエチルアミン（３３ｍＬ，０．２３７ｍｏｌ）および５％の炭素上の白金（１８ｇ）の混合物を水素化する。触媒を濾過し、テトラヒドロフランでリンスし、濃縮し、茶色の発泡体を得る。無水テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中で発泡体を溶解し、氷槽中で冷却する。トリホスゲン（３１．５ｇ，０．１０６ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）中に、３０分に亘って滴下して加え、１６時間室温で攪拌する。溶液を濃縮し、ジクロロメタン中の５％メタノールで溶解し、短いシリカゲルプラグで精製する。濃縮して茶色の固体を得る。飽和炭酸水素ナトリウム（１．５Ｌ）中で固体を懸濁し、ロータリーエバポレータ上で１時間攪拌する。濾過し、真空内で乾燥する。暖かい１：１メタノール／ジクロロメタン（約６Ｌ）中に溶解し、ポリ（４−ビニルピリジン）２％の架橋樹脂（１７０ｇ）で処理する。３０分間、スラリーを攪拌し、珪藻土で濾過する。濾液を約１．５Ｌ体積に濃縮し、得られた固体を濾過して回収する。８０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで一晩乾燥し、標題の化合物（３８．１ｇ，７４％）を白色の固形物として得る。［α］Ｄ２０−２０．５（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．４８（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｍ，２Ｈ），２．５２（ｍ，１Ｈ），２．９１（ｄ，１Ｈ），３．０３（ｄ，１Ｈ），３．２５（ｔ，１Ｈ），３．５０（ｔ，１Ｈ），３．７９（ｄ，１Ｈ），３．８８（ｄ，１Ｈ），４．９５（ｍ，１Ｈ），５．０３（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），５．６０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．７８（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．３８（ｔ，１Ｈ），７．４８−７．６１（ｍ，３Ｈ），１０．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８４．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６８】
実施例１に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンを得、約１０．５、１３．０、１５．５、および１９．７の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形体（式Ｉ）を明らかにする。物質の融点特徴をＤＳＣによって測定する。融点開始＝２９８．９°Ｃ。
【００６９】
（実施例１（ａ））
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（式ＩＩ）
１１７．７ｍｇの５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１に記載されるように調製する）をバイアルに加え、溶解するまで、１０００ｒｐｍで、攪拌プレート上で７０℃で２．５ｍＬのＤＭＡＣで混合する。濁るまで水をサンプルにゆっくりと加え、次いで熱を取り除く。白色の固形物が溶液から沈殿するまで３０分間攪拌を続ける。濾過により固形物を回収し、４０℃で一晩乾燥する。
【００７０】
実施例１（ａ）に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンを得、約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形態（式ＩＩ）を明らかにする。
【００７１】
（代替手順）
（ｉ）分液漏斗中の５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３溶液（５×１００ｍＬ）で、１ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）中の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン．４−メチルベンゼンスルホン酸塩（１０．２ｇ，１５．５５ｍｍｏｌｅｓ）（以下の実施例２に記載されるように実質的に調製する）の懸濁液を抽出する。ブラインで有機層を洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、プリーツのあるフィルタで濾過し、真空内で濃縮する。一晩、５０℃の真空オーブンで残留物を乾燥し、白色の固形物（６．７１ｇ，９０％回収）を得る。ＬＣ−ＭＳ（４ｍｉｎ）：ＲＴ＝１．８７分、１００％Ｍ＋Ｈ＝４８４．２。
【００７２】
（ｉｉ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、１ｍＬのＤＭＡｃで処理し、３０分間、８０℃の油浴中において得られた懸濁液を加熱する。１５ｍＬのＡｃＣＮを溶液に加え、８０℃の油浴で３０分間加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで５０°Ｃの真空オーブンで一晩乾燥し、７４．５ｍｇの生成物を回収する。
【００７３】
（ｉｉｉ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、２０ｍＬのＡｃＣＮで処理し、得られた懸濁液を３０分間、８０℃の油浴中で加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで、一晩、５０℃の真空オーブン中で乾燥し、８１．８ｍｇの生成物を回収する。
【００７４】
（ｉｖ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、２０ｍＬのＩＰＡで処理し、得られた懸濁液を３０分間、８０℃の油浴中で加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで、一晩、５０℃の真空オーブン中で乾燥し、９２．８ｍｇの生成物を回収する。
【００７５】
上述の代替手順（ｉ）に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンは、約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０（式ＩＩ）の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形態を明らかにする。
【００７６】
（実施例２）
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン．トシレート塩
【化１９】
３０分間、４０℃の油浴中のジメチルアセトアミド（５０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５１．７０ｍｍｏｌ，９．９８ｇ）の溶液を加熱する。均質な溶液に、５ｇ部中の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（５１．７０ｍｍｏｌ，２５．００ｇ）を、激しく攪拌して加える。粉末漏斗およびコンテナボトルをジメチルアセトアミド（２５ｍＬ）で洗浄し、懸濁液を４０℃で、３０分間、固形物が完全に溶解するまで攪拌する。３０℃で一晩、窒素ガス流中の淡褐色の均質な溶液を静置させる。残留物を、アセトニトリル（２００ｍＬ）で希釈し、２０分間、水浴中で超音波処理する。３時間、６０℃の油浴中で白色の固形物の懸濁液を加熱する。室温まで冷却し、濾過によって固形物を回収する。２日間、４０℃で真空オーブン中において乾燥し、標題の化合物（３２．８８ｇ，９７％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ２．００（ｍ，０．５Ｈ），２．２９（ｍ，０．５Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｍ，０．５Ｈ），３．１−４．２（ｍ，７Ｈ），５．１０（ｂｒｏａｄ ｍ，２Ｈ），５．５５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），６．６０（ｄｄ，１Ｈ），６．６７（ｄ，１Ｈ），６．７８（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｍ，３Ｈ），７．０８（ｄ，２Ｈ），７．２１（ｔ，１Ｈ），７．３３（ｔ，１Ｈ），７．４３（ｄ，２Ｈ），７．５７（ｍ，２Ｈ），９．６５（ｓ，０．５Ｈ），１０．２５（ｓ，０．５Ｈ），１０．９８（ｓ，０．５Ｈ），１１．１４（ｓ，０．５Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７７】
（代替手順）
（ａ）ジメチルアセトアミド（２ｍＬ）中に８５．８ｍｇ（０．１７７ｍｍｏｌ）の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１において記載されるように実質的に調製する）を溶解する。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４３ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を透明な溶液となるまで攪拌する。アセトニトリル（７ｍＬ）を加え、蒸発し、透明な油状物を得る。水（２ｍＬ）を加え、サンプルを超音波処理する。白色の固形物が沈殿した後、サンプルを１０分間、スラリーにする。濾過して乾燥し、固形物を得る。
【００７８】
（ｂ）２．５ｍＬのＤＭＡＣ中に９８．０ｍｇの５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１に記載されるように実質的に調製する）を溶解する。１．２等量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物を加え、溶液が透明になり、色がなくなるまで攪拌する。２ｍＬの８８％のアセトンを加え、次いで１６ｍＬの水を加え、次いで、蒸発させて溶媒を取り除く。得られた透明な油状物に、１ｍＬのアセトンを加え、超音波処理する。得られたゲルを乾燥し、灰色がかった固形物を得る。固形物を再び、１：１０のＴＨＦ：Ｈ２Ｏで溶解し、蒸発させ、透明な油状物を得て、次いで、５ｍＬのアセトニトリルで超音波処理する。白色の固形物が沈殿した後、サンプルを一晩、スラリーにする。濾過して乾燥させ、固形物を得る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療薬として有用な三環式化合物と、その化合物を含む医薬組成物と、患者における生理障害を治療する化合物を使用する方法と、その化合物の合成において有用な中間体および工程に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルドステロン（一次性内因性鉱質コルチコイド）は、鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）との相互作用後におけるナトリウムと水の再吸収およびカリウム排出を促進する。アルドステロンの役割は電解質と水とのバランスを維持することにあるため、ＭＲアンタゴニストは、多くの生理障害（例えば、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、および、一次性または二次性の高アルドステロン症状（例えば、コン症候群）の障害）の治療に用いられてきた。より最近は、ＭＲアンタゴニストは、鬱血性心不全および急性心筋梗塞の治療に用いられている。加えて、ＭＲアンタゴニストは、更に、腎疾患の前臨床モデルにおいて有効であり、腎障害（例えば糖尿病性腎症を含む慢性腎疾患）に苦しむ患者においてタンパク尿を減少させる標準的な治療との組み合わせにおいても有効であることが証明されている。
【０００３】
しかしながら、既存のステロイド性ＭＲアンタゴニストは、それらの安全性および／または有効性を制限する随伴効果を発生させてしまう。例えば、スピロノラクトンは、他の生理学的プロセスを媒介する他の核ホルモン受容体（例えば、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、または、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ））に対して、非選択性であり、かつ、交差反応する。スピロノラクトン治療はまた、高カリウム血症に関連しており、更に、女性化乳房、勃起障害、性欲減退、月経不順、および、胃部不快感とも関連している。エプレレノンは、他の核ホルモン受容体と比較してＭＲに選択的であるものの、同様に、高カリウム血症に関連している。したがって、現在のＭＲアンタゴニスト治療の代替治療が当該技術分野において未だ必要とされている。
【０００４】
本発明の目的は、ＭＲアンタゴニスト活性を有する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することである。より具体的には、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することが目的である。より具体的な実施形態として、本発明の目的は、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合し、かつ、腎臓（ｒｅｎｏ）または心臓（ｃａｒｄｉｏ）の防御効果活性を有する非ステロイド性ＭＲリガンドを提供することである。更により具体的な実施形態として、ＡＲ、ＰＲ、およびＧＲと比較してより大きな親和性にてＭＲと結合し、かつ、腎臓または心臓の防御効果活性を有するが、高カリウム血症の低い発生率または発生可能性を有する非ステロイド性ＭＲアンタゴニストを提供することが目的である。
【０００５】
三環式ＭＲリガンドは、当該技術分野において公知である。例えば、特許文献１および特許文献２は、鉱質コルチコイド受容体または糖質コルチコイド受容体の調節の影響を受けやすい疾患を治療するのに有用な三環式ステロイドホルモン受容体調節因子を開示している。本発明は、以下に示す化合物（Ｉ）として与えられた特定のジベンゾオキセピンに関する。ここで、化合物（Ｉ）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト治療に応答する疾患の治療または予防における効用を有することを示す、インビトロ活性およびインビボ活性のプロファイルを有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第０４／０５２８４７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０５／０６６１６１号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
したがって、本発明は、下式の化合物、
【化１】
または、その薬学的に受容可能な塩を提供する。
【０００８】
特定の実施形態として、本発明は、結晶形態における化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、あるいは、コン症候群を治療または予防する方法を提供する。より特定の態様として、本発明は、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、更に、治療に用いられる化合物（Ｉ）、またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。更に、本発明は、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、またはコン症候群の治療または予防において用いるための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。より具体的には、本発明は、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患の治療または予防において用いられるための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、鬱血性心不全、糖尿病性腎症、慢性腎疾患、高血圧、低カリウム血症、心筋不整脈、バーター症候群、一次性または二次性の高アルドステロン症状、またはコン症候群を治療または予防する医薬を製造するための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。より具体的には、本発明は、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防する医薬を製造するための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の使用を提供する。
【００１２】
加えて、本発明は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。より具体的には、本発明は、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療または予防するための医薬組成物を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた状態で提供する。本発明は、また、化合物（Ｉ）の合成に有用な新規中間体および工程を包含する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、化合物（Ｉ）の薬学的に受容可能な塩および化合物（Ｉ）の溶媒和物、または、その薬学的に受容可能な塩に関する。そのため、本願明細書において用いられる場合、用語「化合物（Ｉ）」は、その意味の範囲内で化合物の任意の溶媒和物を含む。薬学的に受容可能な塩およびそれらの調製方法の例は、当該技術分野において周知である。例えば、以下の文献を参照のこと。Ｓｔａｈｌら，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」，ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，（２００２）；Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）；およびＢａｓｔｉｎら，「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）。特に記載すべきは、化合物（Ｉ）のトシラート塩により作られたものであるが、化合物（Ｉ）の遊離塩基が好ましいことが理解されるべきである。
【００１４】
用語「Ｒ」および「Ｓ」は、キラル中心の特定の構造を示すための有機化学において一般的に用いられるように本願明細書において用いられる。用語「（±）」、「Ｒ／Ｓ」または「ＲＳ」は、キラル中心のラセミ構造を意味する。立体化学における優先順位の部分的なリストおよび議論は、「Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ」，（Ｊ．Ｈ．Ｆｌｅｔｃｈｅｒら，ｅｄｓ．，１９７４）」に含まれている。本願明細書において用いられるように、記号
【数１】
は、ページの領域から前方へ突き出る結合を意味し、一方で、記号
【数２】
は、ページの領域から後方へ突き出る結合を意味する。
【００１５】
当業者に理解されるように、炭素−炭素または炭素−窒素二重結合を含む分子は、幾何異性体として存在し得る。２つの方法が、特定の異性体を指定するために一般的に用いられる。「シス−トランス」法および「ＥとＺ」法は、二重結合された各原子に結合している基が同一であるか異なるかに依存する。幾何異性の議論および特定の異性体の名前付けは、Ｍａｒｃｈ，「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２，Ｃｈａｐｔｅｒ４」において見出される。
【００１６】
化合物（Ｉ）は、医薬組成物の一部として調製され得る。そのため、薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物またはその薬学的に受容可能な塩は、本発明の重要な実施形態である。医薬組成物およびそれらの調製方法の例は、当該技術分野において周知である。例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，１９ｔｈｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５））」を参照のこと。化合物（Ｉ）を含む例示的な組成物としては、例えば、０．５％カルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０および２．７％ＮａＣｌを含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、または１％カルボキシメチルセルロースおよび０．２５％ポリソルベート８０を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、１％カルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および精製水中０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）、１％ナトリウムカルボキシメチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および精製水中０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）（ジェットミル処理済）、１％ヒドロキシエチルセルロース、１０％ビタミンＥ ＴＰＧＳ（ｄ−アルファ−トコフェロールポリエチレングルコール１０００コハク酸エステル）、および精製水中の０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合物（Ｉ）（ジェットミル処理済）、１０％ビタミンＥ ＴＰＧＳおよび精製水中の０．０５％ＡｎｔｉＦｏａｍ １５１０（商標）を含む懸濁液中の化合（Ｉ）（ジェットミル処理済）、ならびに２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ約２）および１等量（ｅｑ．）ＨＣｌを含む溶液（１５ｍｇ／ｍｌ）中の化合物（Ｉ）が挙げられる。しかしながら、本発明の好ましい組成物が、カプセルまたはタブレット中に調製された、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩を含むことは理解されるだろう。
【００１７】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、あるいは、化合物（Ｉ）を含む組成物またはその薬学的に受容可能な塩は、経口および非経口経路を含む、化合物を生物学的に利用可能とする任意の経路によって投与され得る。しかしながら、経口経路が好ましいことが理解されるだろう。
【００１８】
当業者は、粒径が薬剤のインビボ溶解に影響を及ぼし得、続いて、その薬剤の吸収にも影響を及ぼし得ることを理解するだろう。本願明細書において用いられる「粒径」は、従来技術（例えば、レーザー光散乱、レーザー回折、ミー散乱、沈降場流動分画、光子相関分光法等）によって決定された薬剤の粒子の直径を意味する。薬剤が低い溶解性を有する場合、小さいまたは低減された粒径は溶解を促進し得、よって、その薬剤の吸収を増加させる（Ａｍｉｄｏｎら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２；４１３−４２０（１９９５））。粒径を低減または制御する（微粉化（ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ））方法は、従来技術であり、ボールミル粉砕、ピン粉砕（ｐｉｎ ｍｉｌｌｉｎｇ）、ジェットミル（ｊｅｔ ｍｉｌｌｉｎｇ）、湿式粉砕などが挙げられる。粒径を制御する別の方法は、ナノ懸濁液中で薬剤を調製することを含む。本発明の特定の実施形態は、化合物（Ｉ）または化合物（Ｉ）の薬学的に受容可能な塩、あるいは、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物またはその薬学的に受容可能な塩を含む。ここで、当該化合物または塩は、約１０μｍよりも小さいｄ９０粒径（すなわち、粒径の９０％以下のサイズ）を有する。
【００１９】
薬剤が特定の物理的特性を有することが望まれることは当業者により理解されるだろう。具体的には、安定で結晶固体である薬剤が望ましく、それらは、化学合成、精製、保存、および、調製物または投与形態の開発といった従来のパラダイムの影響を特に受けやすい。本願明細書において用いられる「結晶形（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｆｏｒｍ）」または「結晶形態（ｃｒｙｓｔａｌ ｆｏｒｍ）」は、化学種の結晶調製物を意味する。
【００２０】
特定の結晶形体は、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、分光法（例えば、赤外線（ＩＲ）または核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法）、および、熱的手法（例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、または示差熱分析（ＤＴＡ））を含む従来技術を用いて同じ化学種の他の固体形から特徴付けられ得、そして、区別され得る。ＸＲＰＤが化学種の結晶形態を特徴付けるのに特に有用な手法である一方で、Ｘ線パターン中の実際のピーク強度は、同じ結晶形態の分析であっても分析ごとに変化し得、分析されたサンプル、および、使用された装置、溶媒、または手順に依存することが理解されるだろう。加えて、°２θにおいて測定される所与の結晶形態の分析から得られた正確なピーク位置は、分析ごとに変化し得る（たとえば、±０．１°）一方で、ピーク位置の相対パターンは、同じスペクトル間で実質的に維持されることも理解される。
【００２１】
本発明は結晶形態の化合物（Ｉ）を提供する。より具体的には、本発明は、約１０．５、１３．０、１５．５および１９．７の°２θにて特性ピークを有する結晶形態の化合物（１）の遊離塩基（本明細書中の実施例の遊離塩基式Ｉ）を提供する。さらに、本発明は、約１１．３、１２．１、１８．８および２１．０の°２θにて特性ピークを有する結晶形態の化合物（Ｉ）の遊離塩基（本明細書中の実施例の遊離塩基式ＩＩ）を提供する。
【００２２】
本明細書中で使用される用語「患者」は、イヌ、ネコ、ウシ、サル、ウマ、またはヒツジのようなヒトまたは非ヒト哺乳動物を示す。より具体的には、用語「患者」は、ヒトを示す。本明細書中で使用される用語「処置すること」（あるいは「処置する」または「処置」）は、既存の症状または疾患の進行または重篤度を、妨げること、予防すること、抑えること、遅滞させること、停止させること、または逆転させることを含む。本明細書中で使用される用語「予防すること」（あるいは「予防する」または「予防」）は、症状または疾患の発生または出現を、妨げること、抑えること、または阻害することを示す。当業者によって理解されるように、生理的障害が、「慢性」状態、または「急性」症状の発現として存在してもよい。このように、障害の処置は、急性症状の発現および慢性状態の両方を意図する。急性症状の発現において、化合物は症状の発症時に投与され、症状が消失した場合、停止され、一方、慢性状態は疾患の期間全体にわたって処置される。
【００２３】
本明細書で使用される用語「有効量」は、患者への単回または複数回の投薬の際に、診断または処置下の患者に所望の効果を提供する、化合物（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩の量または投薬量を示す。有効量は、当業者として、哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および一般的健康；関連する特定の疾患；疾患の度合いまたは重篤度；個々の患者の反応；投与された特定の化合物；投与の様式；投与された調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬養生法；ならびに何らかの併用薬の使用のような多くの因子を考慮することにより、担当の診断医によって容易に決定されることができる。
【００２４】
本発明の方法および使用と併せて使用される場合、本発明の化合物および組成物は、単独、または特定の障害もしくは状態を処置するのに使用される従来の治療薬と共に投与されてもよい。例えば、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ薬物）などの高血圧、糖尿病性ネフロパシーまたは慢性腎疾患を処置するための従来の薬剤と共に投与されてもよい。本発明の化合物または組成物が、併用薬の一部として使用される場合、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、別個に、または併用される治療剤を含む製剤の一部として投与されてもよい。
【００２５】
生物学的活性の測定
本明細書中で使用される場合、「Ｋｄ」は、リガンド−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「Ｋｉ」は、薬物−受容体複合体についての平衡解離定数を示し、かつ、平衡状態で結合部位の半数に結合する薬物の濃度の指標であり；「Ｋｂ」は、アンタゴニスト−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「ＩＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度、あるいは、受容体へのリガンド結合の５０％変位を生じる薬剤の濃度を示し；「ＥＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大応答の５０％を生じる薬剤の濃度を示し；そして「ＥＤ５０」は、薬剤についての最大応答の５０％を生じる、投与された治療剤の投薬量を示す。
【００２６】
Ａ．ステロイド核ホルモン受容体結合アッセイ
ヒトＭＲ（鉱質コルチコイド受容体）、ＧＲ（糖質コルチコイド受容体）、ＡＲ（アンドロゲン受容体）、またはＰＲ（プロゲステロン受容体）を過剰発現するヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞からの細胞溶解物を、Ｋｉ値を決定するための受容体−リガンド競合結合アッセイのために使用する。
【００２７】
簡単に言うと、ステロイド受容体競合結合アッセイを、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ＝７．６）、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、７５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２０％グリセロール、２０ｍＭモリブデン酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、２０μｇ／ｍＬアプロチニン、および２０μｇ／ｍＬロイペプチン（アッセイ緩衝液）を含有する緩衝液中で行う。典型的には、ステロイド受容体結合アッセイは、１ウェル毎に、放射線標識されたリガンド（例えば、ＭＲ結合について０．２５ｎＭ［３Ｈ］−アルドステロン、ＧＲ結合について０．７ｎＭ［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合について０．３６ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン、およびＰＲ結合について０．２９ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン）、および２０μｇ ２９３−ＭＲ溶解物、２０μｇ ２９３−ＧＲ溶解物、２２μｇ ２９３−ＡＲ溶解物、または４０μｇ ２９３−ＰＲ溶解物のいずれかを含む。アッセイは、典型的には９６ウェル形式で行う。競合する試験化合物を、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度で添加する。非特異的結合を、ＭＲ結合について５００ｎＭアルドステロン、ＧＲ結合について５００ｎＭデキサメタゾン、またはＡＲおよびＰＲ結合について５００ｎＭメチルトリエノロンの存在下で決定する。結合反応物（１４０μＬ）を、４℃で一晩インキュベートし、次いで、７０μｌの冷炭デキストラン緩衝液（５０ｍｌのアッセイ緩衝液毎に０．７５ｇの炭と０．２５ｇのデキストランを含有する）を、各反応物に添加する。プレートを、４℃で、オービタルシェーカー上で８分間混合する。プレートを、次いで、１０分間４℃で、３，０００ｒｐｍで遠心分離する。結合反応混合物の１２０μｌのアリコートを、次いで、別の９６ウェルプレートに移し、１７５μｌのＷａｌｌａｃ Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ Ｈｉｓａｆｅ ３（商標）シンチレーション液を各ウェルに添加する。プレートを密封し、オービタルシェーカー上で激しく撹拌する。２時間のインキュベーション後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計数器で読み取る。
【００２８】
データを、推定ＩＣ５０および１０μＭでの阻害率を計算するために使用する。ＭＲ結合についての［３Ｈ］−アルドステロン、ＧＲ結合についての［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロン、またはＰＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロンに対するＫｄを、飽和結合によって決定する。化合物に対するＩＣ５０値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用してＫｉに変換する。
【００２９】
本質的に上記に記載される手順にしたがって、化合物（Ｉ）は、約０．４０ｎＭのＭＲ結合アッセイにおけるＫｉを示したので、化合物（Ｉ）がヒトＭＲの有効なリガンドであることを実証する。さらに、化合物（Ｉ）は、約１１７０ｎＭ、６６９ｎＭ、および４７８ｎＭのそれぞれＡＲ、ＧＲおよびＰＲ結合アッセイにおけるＫｉを示したので、化合物（Ｉ）がＭＲについての選択的リガンドであることを実証する。
【００３０】
Ｂ．ステロイド核ホルモン受容体調節の機能的アッセイ
アルドステロンは、鉱質コルチコイド受容体との相互作用によりそれに生理的効果を与える。ＭＲに対するアルドステロン細胞結合の後、リガンド受容体複合体は、それがＤＮＡ上のホルモン応答エレメントに結合する細胞核へ移行して、標的遺伝子の発現を開始する。本発明の化合物がステロイドホルモン受容体の活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する、のいずれか）能力を実証するために、核受容体タンパク質およびホルモン応答エレメント−受容体遺伝子構築物で一時的にトランスフェクトされた細胞における標的遺伝子発現の機能的調節を検出するバイオアッセイを実施する。機能アッセイにおいて利用される溶媒、試薬、およびリガンドは、商業的供給源から容易に利用可能であり、または、当業者によって調製されることができる。
【００３１】
１．核ホルモン受容体パネルスクリーン
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ（商標）などの適切なトランスフェクション試薬を使用して、ステロイドホルモン受容体およびレポーター遺伝子プラスミドでトランスフェクトする。簡単に言うと、ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のプロバシン（ｐｒｏｂａｓｉｎ）ＡＲＥおよびＴＫ（チミジンキナーゼ）プロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーターを使用して、ヒトアンドロゲン受容体（ＡＲ）を構成的に発現するプラスミドでＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトする。ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のＧＲＥおよびＴＫプロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶプロモーターを使用して、ヒト糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）、ヒト鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、またはヒトプロゲステロン受容体（ＰＲ）のいずれかを構成的に発現するプラスミドでトランスフェクトする。細胞を、Ｔ１５０ｃｍフラスコにおいて５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を有するＤＭＥＭ培地中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトされた細胞をトリプシン処理し、９６ウェル皿において５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度の試験化合物に曝露する。アッセイのためのアンタゴニスト様式において、各々の受容体に対して低濃度のアゴニストを培地に添加する（ＭＲについて０．０８ｎＭ アルドステロン、ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．６６ｎＭのメチルトリエノロン、ＰＲについて０．０８ｎＭのプロメゲストン）。試験化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解させ、標準的な技術を使用してルシフェラーゼ活性を決定する。
【００３２】
データを、ＥＣ５０値を決定するために４パラメータフィットロジスティック曲線に当てはめる。有効性率（飽和最大応答を有する化合物）または最大刺激率（飽和していない最大応答を有する化合物）を、以下の参照アゴニストで得られた最大刺激と比較して決定する：ＭＲアッセイについて３０ｎＭ アルドステロン、ＡＲアッセイについて１００ｎＭ メチルトリエノロン、ＰＲアッセイについて３０ｎＭ プロメゲストン、およびＧＲアッセイについて１００ｎＭ デキサメタゾン。ＩＣ５０値を、アンタゴニスト様式アッセイのデータを使用して同様に決定する。アンタゴニスト様式において、阻害率を、低濃度のアゴニスト（ＭＲについて０．０８ｎＭ アルドステロン、ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．６６ｎＭのメチルトリエノロン、およびＰＲについて０．０８ｎＭのプロメゲストン）の存在下での試験化合物活性と、試験化合物の非存在下での同じ低濃度のアゴニストによって生じる応答とを比較することによって決定する。
【００３３】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、ＭＲ、ＰＲ、ＧＲ、およびＡＲアッセイ（アンタゴニスト様式）において、それぞれ、約２１ｎＭ、９２４ｎＭ、＞１００００ｎＭ、および＞１００００ｎＭのＩＣ５０値を示し、アゴニスト様式において、ＭＲ、ＰＲ、ＧＲ、およびＡＲの各々について＞１００００ｎＭのＥＣ５０を示した。従って、化合物（Ｉ）はｈＭＲの選択的機能的アンタゴニストである。
【００３４】
２．ｈＭＲ競合アンタゴニストアッセイ
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、核ホルモン受容体パネルスクリーンについて上記と同じトランスフェクション試薬、プラスミド、プロモーター、レポーター構築物、緩衝液、および手順を使用してヒトＭＲでトランスフェクトする。トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中で９６ウェル皿に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、アルドステロンの種々の濃度（１０個の希釈物）（約０．００１ｎＭ〜０．０３μＭの範囲）に曝露する。ｈＭＲを刺激するアルドステロンの能力を、一定濃度の試験化合物の非存在下および存在下で決定し、標準的技術を使用してルシフェラーゼ活性を測定することによってモニターする。次いで、試験化合物Ｋｂを、式：Ｌｏｇ（ＤＲ−１）＝Ｌｏｇ［アンタゴニスト］−ＬｏｇＫｂを使用してアンタゴニスト濃度のｌｏｇに対するＳｃｈｉｌｄ解析プロットログ（用量比−１）を使用して決定することができる（ここで、用量比（ＤＲ）は、試験化合物の存在下でのアルドステロンＥＣ５０対試験化合物の非存在下でのアルドステロンＥＣ５０の比を表す）。
【００３５】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、ＭＲ競合アンタゴニストアッセイにおいて約５．１ｎＭのＫｂを示したので、化合物（Ｉ）がヒトＭＲの有効なアンタゴニストであることを実証する。
【００３６】
Ｃ．アルドステロン媒介性腎疾患のインビボモデル
雄の腎摘出を行っていないＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）を、１週間、収容所の水（ｈｏｕｓｅ ｗａｔｅｒ）および齧歯動物５００１食餌を自由に取らせて個々に収容する。順化後、ベースライン２４時間尿サンプルを回収し、全尿タンパク質およびクレアチニンを解析する。動物を体重およびベースライン尿タンパク質によって研究群に無作為に選ぶ。ベースライン血清を尾クリップにより取得し、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、および電解質を解析する。ベースラインサンプルを取得後、コントロール群を除いた全てのラットを、研究期間にわたって６％塩を含む食餌、および０．３％ＫＣｌを含む飲料水で維持する。コントロール動物を、研究期間にわたって５００１食餌および収容所の水で維持し、アルドステロンを与えない。０．７５μｇ／ｈにて２．５μｌ／ｈ×２８日の０．０１％ＤＭＳＯ中のｄ−アルドステロンを皮下送達するためにＡｌｚａミニポンプを、イソフルラン麻酔下で非コントロール動物（例えば試験化合物群およびビヒクルのみの群）に埋め込む。次いで、１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）／０．２５％ポリソルベート８０を含むビヒクル中の試験化合物、またはビヒクルのみを、アルドステロン注入の日後に開始して１日１回強制経口投与（１０ｍＬ／ｋｇ）する。繰り返し尿サンプルを、化合物またはビヒクル単独投与の２および４週間後に回収し、全尿タンパク質およびクレアチニンを解析する。研究終了時に、薬物動態サンプルを８時点（０．５、１、２、３、６、８、１２および２４時間）で得る。さらに、心臓および腎臓を除去し、心臓および腎臓組織における構造的損傷を検出するためのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびにマッソントリクローム染色のために１０％緩衝化ホルマリン中で固定することができる。血清もまた、血清ＢＵＮ、クレアチニン、および電解質のさらなる解析のために研究終了時に心穿刺により取得できる。
【００３７】
本質的に上記に記載される手順に従って、１０ｍｇ／ｋｇ／日×２８日で投与する場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクル処置した動物と比べて尿タンパク排泄を約６０％減少させたので、化合物（Ｉ）はインビボでの腎保護活性において有効であることを実証する。
【００３８】
化合物が抗高血圧効果を有することを実証するために、以下のモデルを利用することができる。
【００３９】
Ｄ．アルドステロン媒介性高血圧のインビボモデル
雄の腎摘出を行っていないＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）を、１週間、収容所の水および齧歯動物５００１食餌を自由に取らせて個々に収容する。順化後、動物に、２８日まで２．５μｌ／ｈにて０．２５μｇ／ｈのアルドステロンを皮下送達するためにＡｌｚｅｔポンプを埋め込み、研究期間にわたって６％ＮａＣｌを含む食餌および０．３％ＫＣｌを含む飲料水で維持する。遠隔測定装置もまた、動脈圧をモニターするために埋め込む。例えば、各動物からのシグナルを、研究にわたって１０分ごとにサンプリングする。２４時間にわたって収集した全ての値の平均（±ＳＥＭ）は、各動物についての日平均動脈血を表す。次いで、ポンプ埋め込み後の日に、１％中間粘度ナトリウムカルボキシメチルセルロース／０．２５％ポリソルベート８０／０．０５％Ａｎｔｉｆｏａｍ１５１０（商標）を含むビヒクル中の試験化合物、またはビヒクル単独を、１日に１回経口強制投与（１０ｍＬ／ｋｇ）する。
【００４０】
本質的に上記に記載される手順に従って、１日に１回（１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日）×１４日、経口投与した場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクルと比べて塩の存在下においてアルドステロンの血圧上昇効果を用量依存的に低下させるので、化合物（Ｉ）は降圧効果を有することが実証される。
【００４１】
化合物が、高カリウム血症の発生または高カリウム血症を生じる可能性を低下させることを実証するために、以下のモデルを利用することができる。
【００４２】
Ｅ．電解質調節のインビボアッセイ
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２８０ｇ）の副腎を摘出し、次いで、手術後、５００１齧歯動物食餌および１％ＮａＣｌ飲料溶液で６日間維持する。次いで、動物を一晩絶食させ、１％生理食塩水飲料水を収容所の自由に取れる水と置き換える。その研究の朝、絶食させた動物を無作為に選んで、絶食させた体重に基づいて処置する。コントロール動物（例えばアルドステロンまたは試験化合物を与えていないもの）に、０．５％ＣＭＣ／０．２５％ポリソルベート８０／２．７％ＮａＣｌを含む１０ｍＬ／ｋｇの試験化合物ビヒクルを強制経口投与により与え、１ｍＬ／ｋｇのアルドステロンビヒクル（０．０１％ＤＭＳＯ／水）を皮下注射により与える。ビヒクル動物に同じ試験化合物ビヒクルを強制経口投与により与え、アルドステロン３μｇ／ｋｇを皮下注射により与える。試験物質はカルボキシメチルセルロース／ＮａＣｌビヒクルに懸濁する。試験化合物処置群に、カルボキシメチルセルロース／ＮａＣｌビヒクルに懸濁した試験物質およびアルドステロン３μｇ／ｋｇを皮下に与える。投与後すぐに、動物を、収容所の水を自由に取ることができる代謝ラックに置く。尿サンプルを用量投与から５時間後に回収し、電解質排泄をアッセイする。データは、副腎を摘出したビヒクル処置した動物に対するｌｏｇＮａ／Ｋ排泄比またはＮａ／Ｋ比の％として示す。化合物Ｉは種々の用量で試験することができ、どの程度化合物が尿のＮａ／Ｋ比（高い血清カリウム濃度の指標）の増加を誘発するかを決定する。
【００４３】
本質的に上記に記載される手順に従って、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与した場合、化合物（Ｉ）は、ビヒクル処置した動物と比べて尿のＮａ／Ｋ排泄比を約３０％のみ増加させ、これは、化合物（Ｉ）が、高カリウム血症の発生または高カリウム血症を生じる可能性を低下させ得ることを実証する。
【００４４】
さらに綿密にせずに、当業者は、前述の説明を使用して本発明を十分に実施することができると考えられる。以下の調製物および実施例は、さらに詳細に本発明を例示し、化合物（Ｉ）の典型的な合成を表すために提供する。試薬および出発物質は容易に入手可能であるか、または当業者により容易に合成され得る。当業者は、実施例に記載される手順から適切なバリエーションを即座に理解するだろう。本発明の化合物名は、概して、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（登録商標）バージョン１０．０によって提供される。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、以下の用語は以下に示す意味を有する：「ＤＭＳＯ」とはジメチルスルホキシドを指し；「ＤＭＡＣ」とはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを指し；「ｔＢＯＣ」または「ｂｏｃ」とはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指し；「ＴＬＣ」とは薄層クロマトグラフィーを指す。
【００４６】
（調製例１）
１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン
【化２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７５０ｍＬ）中の２−ヨードベンジルブロミド（９０ｇ，０．２９ｍｏｌ）、２−ブロモ−５−フルオロフェノール（５７．９ｇ，０．２９ｍｏｌ）、および炭酸カリウム（６３ｇ，０．４６ｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間、攪拌する。水（１Ｌ）を加え、得られた混合物を１時間攪拌し、固形物を濾過し、水でリンスし、真空オーブン（２０ｍｍ Ｈｇ／６０°Ｃ）中で乾燥させ、標題の化合物を得る（１２１ｇ，＞１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ５．１１（ｓ，２Ｈ），６．８１（ｔ，１Ｈ），７．１３（ｔ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，１Ｈ），７．４６（ｔ，１Ｈ），７．５９（ｄ，１Ｈ），７．６２（ｔ，１Ｈ），７．９３（ｄ，１Ｈ）。
【００４７】
（調製例２）
３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル
【化３】
５５〜６０°Ｃにて、１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（１１７．４ｇ，０．２９ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３６．１ｇ，０．４４ｍｏｌ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド（９０．３ｇ，０．２９ｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．８ｇ，８ｍｍｏｌ，３ｍｏｌ％）、およびＮ−メチルピロリジノン（９００ｍＬ）の混合物に、Ｎ−メチルピロリジノン（２００ｍＬ）中のアクリル酸エチルの水溶液（３４．３ｍＬ，０．３２ｍｏｌ）を、滴下して加える。この反応混合物を室温まで冷却し、水（２Ｌ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）で処理する。珪藻土に反応物を通し、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、層を分離させ、水（２Ｌ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで有機部分を乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られた固形物をヘキサン（１Ｌ）中で懸濁し、２時間冷蔵し、濾過し、低温のへキサン（５００ｍＬ）で洗浄する。真空オーブン（５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇ）中で乾燥させ、標題の化合物を淡黄色の固形物として得る（１０４．４ｇ，９５％）。ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ３８１．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
（代替手順）
窒素下で、無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、新鮮なＮ−メチルピロリジノン（７２Ｌ）、酢酸ナトリウム（２７２１ｇ，３３．１７ｍｏｌ），１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（９０００ｇ，２２．１１ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（７１２８ｇ，２２．１１ｍｏｌ）を加える。攪拌を開始し、完全な真空下で３０分間、反応混合物からガスを抜き、窒素でパージする。反応器を窒素下で大気圧まで戻し、ガス抜きの手順を繰り返す。酢酸パラジウム（ＩＩ）（１８０ｇ，２％／重量）を反応混合物に加え、６０°Ｃまで加熱する。６０°Ｃにて、Ｎ−メチルピロリジノン（１８Ｌ）中の溶液として、アクリル酸エチル（２２５８ｇ，２２．５５ｍｏｌ）を添加漏斗を介して反応混合物にゆっくりと加える。添加を終えた後、反応混合物を７０℃まで加熱する。７０℃で最低でも２時間、攪拌を続ける。反応混合物の内部温度を５℃〜１０℃に調整する。別個の無菌の適切な大きさの反応器に、水（２２５Ｌ）を充填し、激しい攪拌を開始し、内部温度を５℃以下まで冷却する。最低でも１時間に亘り、反応混合物を激しく攪拌した水に移す。得られた懸濁液を３０分から１時間、周囲温度で攪拌する。ポリプロピレンのフィルターパッドで濾過し、薄い紫色の固形物を回収する。水（２５Ｌ）でフィルターケーキを洗浄し、ラバーダムを用いて、フィルタ上で吸引乾燥する。固形物を、水（４５Ｌ）と共に反応器へ再充填し、３０分から１時間、懸濁液を攪拌する。固形物をポリプロピレンのフィルターパッド上で再濾過し、水（２５Ｌ）を用いてフィルターケーキを洗浄する。ラバーダムを用いて、フィルタ上で吸引乾燥する。薄い紫色の物質を乾燥したトレイに移し、最低でも２４時間、ドラフト中で空気乾燥する。真空下で、５０℃未満にて、固形物をオーブンで乾燥させて、標題の化合物を得る（８．４ｋｇ，１００％）。
【００４９】
（調製例３）
（Ｅ）−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル
【化４】
１００℃〜１１０℃にて、６時間、Ｎ−メチルピロリジノン（８５０ｍＬ）中で、３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル（９４ｇ，０．２５ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３０ｇ，０．３７ｍｏｌ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド（８１ｇ，０．２５ｍｏｌ）、および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．７ｇ，７ｍｍｏｌ，３ｍｏｌ％）の混合物を加熱する。室温まで冷却し、水（１Ｌ）で希釈し、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（２Ｌ）で洗浄する。濾液を分液漏斗に移し、水（５００ｍＬ）を加え、層を分離する。有機層を水（２×１．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカパッドで濾過し、酢酸エチル（１．５Ｌ）で洗浄し、濃縮して乾燥する。残余の固形物にヘキサン（１Ｌ）を加え、２時間、冷蔵し、濾過し、ヘキサン（５００ｍＬ）でリンスし、５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、標題の化合物（６４．３ｇ，８７％）を得る。ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ２９９．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５０】
（代替手順）
窒素下で、無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、Ｎ−メチルピロリジノン（８３．４Ｌ）、酢酸ナトリウム（２．７０６ｋｇ，３２．９８ｍｏｌ）、３−［２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェノキシメチル）−フェニル］−アクリル酸エチルエステル（９．２５６ｋｇ，２１．９９ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（７．０８８ｋｇ，２１．９９）を加える。攪拌を開始し、３０分間、完全な真空下で反応混合物をガス抜きし、窒素でパージする。反応器を窒素下で大気圧まで戻し、ガス抜き手順を繰り返す。酢酸パラジウム（ＩＩ）（１６７ｇ，２％重量）を反応混合物に加える。１００℃から１２５℃の間で反応物を加熱し、最低でも３時間から５時間、攪拌する。酢酸エチル（１００Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。水（１００Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。攪拌を止め、最低でも１時間、層を分離させる。有機層を回収し、酢酸エチル（５０Ｌ、次いで２５Ｌ）で水層を抽出する。有機部分を合わせ、水（４０Ｌ）、２０％の塩化ナトリウム水溶液（２×２０Ｌ）で洗浄し、各々最低でも３０分間、攪拌し、層を分離するために少なくとも３０分攪拌する。硫酸マグネシウム（８．０ｋｇ）で有機水溶液を乾燥し、活性炭（２．０ｋｇ）およびシリカゲル６０（２．０ｋｇ）を加え、最低でも１時間、攪拌する。濾過して固形物を取り除く。濾液を濃縮し、３５℃未満で、真空下で乾燥する。メタノール（２０Ｌ）を固形の残留物に加え、混合物を加熱して、５０℃〜６０℃にて、透明な溶液とした。ヘプタン（４０Ｌ）を加え、２０℃から２５℃の間まで冷却する。反応混合物を、最低でも３時間、−１０℃にまで、さらに冷却を続ける。最低でも１２時間、−１０℃にて攪拌する。濾過して、残留した固形の生成物を回収し、ヘプタン：メタノール（７５：２５）（２×２０Ｌ）の混合液で洗浄する。４０℃未満で、真空下で固形物を乾燥し、一定重量にし、標題の化合物を得る（３．７ｋｇ，６４％）。
【００５１】
（代替手順２）
Ｎ−メチルピロリジン（２５０ｍＬ）中で、１−ブロモ−４−フルオロ−２−（２−ヨード−ベンジルオキシ）−ベンゼン（５０ｇ，０．１２３ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３０．２ｇ，０．３６９ｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムブロミド（３９．６ｇ，０．１２３ｍｏｌ）、および酢酸パラジウム（１ｇ）を６０℃に加熱する。アクリル酸エチル（１２．９１ｇ，０．１２９ｍｏｌ）を、Ｎ−メチルピロリジン（５０ｍＬ）中に、２０分間、滴下して加える。添加が完了した後、反応混合物を３時間、１４５℃まで加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、メチルｔ−ブチルエーテル（２×１５０ｍＬ）で固形物を洗浄する。濾液をメチルｔ−ブチルエーテル（０．５Ｌ）で希釈し、水（０．５Ｌ）で洗浄する。有機層を分離し、水層をメチルｔ−ブチルエーテル（２×３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（２×２００ｍＬ）で洗浄する。有機部分を硫酸マグネシウムで乾燥し、炭で処理し、濾過し、メチルｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で固形物を洗浄し、濃縮する。真空にせずに、５５℃のビュッヒフラスコ中に、イソプロパノール（２０ｍＬ）中で残留物をスラリーにする。攪拌しながら、ヘプタン（１００ｍＬ）を加える。暗い懸濁液を冷温の部屋で一晩置く。固形物を濾過し、低温のヘプタン／イソプロパノール（９：１，２×１００ｍＬ）、次いで、ヘプタン（５０ｍＬ）でリンスし、乾燥し、３５℃にて、真空オーブン内で、一定重量にし、標題の化合物を黄褐色の粉末として得る（２２．２５ｇ，６１％）。
【００５２】
（調製例４）
（Ｅ）−１１−ブロモメチレン−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン
【化５】
イソプロパノール（７２５ｍＬ）中の（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル（６９．５ｇ，０．２３ｍｏｌ）の懸濁液に、水（１２５ｍＬ）中の水酸化リチウム（１２．０ｇ，０．５３ｍｏｌ）の水溶液を加え、７０℃まで、４時間、加温する。混合物を４０℃まで冷却させ、次いで、氷酢酸（０．４４ｍｏｌ，２５ｍＬ）で処理する。１５分間、攪拌した後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．２５ｍｏｌ，４４ｇ）を加える。泡立ちが続いて起き、温度が４５℃まで上昇し、数分後に固形物を形成する。４０℃〜４５℃で混合物を１時間、攪拌し、室温まで冷却する。水（１５０ｍＬ）中の亜硫酸水素ナトリウム（４．５ｇ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）、および水（４５０ｍＬ）を加える。得られた懸濁液を濾過し、低温の１：１のイソプロパノール／水（３００ｍＬ）でリンスする。固形物を６０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで一晩乾燥し、標題の化合物を得る（６５．８ｇ，９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ４．９−５．４（ｂｒ ｄ，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．７７（ｄｔ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．４６（ｍ，４Ｈ），７．５２（ｄｄ，１Ｈ）。
【００５３】
（代替手順）
無菌の乾燥した１００ガロンの反応器に、攪拌しながら、窒素下で、イソプロパノール（１２５Ｌ）、（Ｅ）−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデン）−酢酸エチルエステル（１３．８５７ｋｇ，４６．４２ｍｏｌ）、および水（５４Ｌ）中の水酸化リチウム（３．８９６ｋｇ，９２．８４ｍｏｌ）水溶液を充填する。反応混合物を８０℃まで加熱し、２時間、攪拌する。反応混合物を４０℃まで冷却し、２０分間に亘って４０℃から４５℃の間で酢酸（５．５７５ｋｇ，９２．８４ｍｏｌ）を加える。４５℃未満で、３０分に亘って、Ｎ−ブロモスクシンイミド（４８．７４ｍｏｌ，８．６７６ｋｇ）を少しずつ加える。反応物を室温まで冷却し、最低でも１２時間攪拌する。亜硫酸水素ナトリウム水溶液（約３７．７Ｌ）を加え、１５分間、攪拌する。炭酸水素ナトリウム水溶液（約３７．７Ｌ）を加え、１５分間、攪拌する。水（１２９Ｌ）を加え、３０分間、攪拌する。得られた固形物を濾過して回収し、イソプロパノール：水（１：１，２×２０Ｌ）で洗浄する。真空化で、３２℃にて固形物を乾燥し、一定の重量とし、標題の化合物を得る（１３．８ｋｇ，９７％）。
【００５４】
（調製例５）
（Ｅ）−２−（（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン
【化６】
１，４−ジオキサン（２５０ｍＬ）中の（Ｅ）−１１−（ブロモメチレン）−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン（１５ｇ，４９ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラト）ジボロン（１６ｇ，６４ｍｍｏｌ）の攪拌した混合物に、酢酸カリウム（１５ｇ，１５０ｍｍｏｌ）を加える。窒素で混合物を洗い流し、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタンアダクト（１．８０ｇ，２．４６ｍｍｏｌ）を加え、一晩、６５℃で加熱する。室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空内で濾液を濃縮する。メタノール（２００ｍＬ）を加え、真空せずにロータリーエバポレータで１時間、混合物を回転し、茶色の固形物を形成する。暗褐色の結晶を濾過により回収し、真空化で一晩乾燥し、標題の化合物を得る（７．２８ｇ，４２％）。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン中の０％〜１６％の酢酸エチルで溶出し、標題の化合物を黄色の固形物（３．４６ｇ，２０％）として得る。反応物の全収率は１０．７ｇ（６２％）である。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，４Ｈ），６．６４−６．５７（ｍ，１Ｈ），６．４８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｓ，１Ｈ），５．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．１５（ｓ，１２Ｈ）。
【００５５】
（代替手順）
機械的攪拌器、熱電温度計、窒素入り口、および還流冷却器を有する５０Ｌの三つ口丸底フラスコを用意する。加熱マントルに配置する。フラスコを、ジオキサン（１３．５Ｌ）、（Ｅ）−１１−ブロモメチレン−３−フルオロ−６，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン（１．６００ｋｇ，５．２４ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．７３１ｋｇ，６．８２ｍｏｌ）、酢酸カリウム（８２３ｇ，８．３８ｍｏｌ）、水（２０ｍＬ）、トリシクロヘキシルホスフィン（２９．５ｇ，０．１０５ｍｏｌ）、およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジ−パラジウム（４８ｇ，０．０５２ｍｏｌ）で充填する。混合物を８０℃〜８５℃まで加熱する。最低でも６時間、反応物を８５〜９０℃に維持する。室温まで冷却する。珪藻土（２−３中）のパッドで反応混合物を濾過する。酢酸エチル（２×３．５Ｌ）で濾液を洗浄する。５０℃〜５５℃で、ロータリーエバポレータ上で濾液を濃縮する。ヘプタン（２×３．５Ｌ）で共蒸留し、懸濁液を形成する。５０℃で、メタノール（２．５Ｌ）をスラリーに加える。１０〜１５分間、攪拌する。スラリーを２０〜３０分間、−１０℃〜０℃に冷却する。固形物を濾過する。回収した固形物を、低温（−１０°Ｃ）のメタノール（２×１．５Ｌ）で洗浄し、次いで、ヘプタン（２×１．５Ｌ）で洗浄する。真空化で、周囲温度で固形物を乾燥し、標題の化合物を灰色がかった白色の固形物として得る（１．４０８ｋｇ，７６％）。
【００５６】
（調製例６）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸塩酸塩
【化７】
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，１４，（２００３）３１４１−３１５２に実質的に記載された手順に従って、５０℃で、無水酢酸（１．４３７ｋｇ，５．６５ｅｑ）および酢酸（４．２２５Ｌ）の混合物に、３０分に亘って、少しずつ、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（３３１ｇ，２．４９ｍｏｌ）を加える。９０℃で、５．５時間、反応混合物を加熱し、次いで、室温まで冷却する。反応物を室温で一晩攪拌し、次いで濃縮する。２Ｎ塩酸（４．５７Ｌ）中で残留物を溶解し、３時間、還流する。反応混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、真空下で、７０℃で約７００ｍＬまで濃縮する。物質を室温まで冷却し、一晩静置させる。エーテル（１Ｌ）で得られたスラリーを希釈し、結晶を濾過し、エーテルで洗浄し、真空化で乾燥し、標題の化合物（３４０ｇ）を得る。固形物を高温のエタノール（２．５Ｌ）で溶解し、冷却し、３５℃でゆっくりと攪拌し、エーテル（２．５Ｌ）をゆっくりと、少しずつ、１時間に亘って加える。２時間攪拌し、得られた白色の固形物を濾過し、一晩、真空オーブン内で乾燥し、標題の化合物（２７０．６ｇ，６５％）を得る。［α］Ｄ２０＋１２．０（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ），δ ２．３４−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．４５−２．５３（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｄｄ，１Ｈ），３．４５（ｄ，１Ｈ），４．５０（ｄｄ，１Ｈ），４．５８（ｂｒ ｓ，１Ｈ）。
【００５７】
（調製例７）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化８】
塩化チオニル（２３３ｍＬ，３．１０ｍｏｌ）を、０℃で、窒素雰囲気下で、乾燥したメタノール（３．５Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−２−カルボン酸塩酸塩（３５５ｇ，２．１２ｍｏｌ）の溶液に、滴下して加える。完全に加えた後、反応混合物を室温まで加温し、６時間、攪拌する。減圧下で反応混合物を濃縮し、対応するメチルエステル塩酸塩をろう状の固形物として得る。乾燥したジクロロメタン（３．５Ｌ）中で、０℃にて、固形物を懸濁し、トリエチルアミン（６４０ｍＬ，４．６６ｍｏｌ）を注意深く、３０分間、加え、さらに３０分間、攪拌する。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３９ｇ，０．３２ｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５００ｇ，２．２５ｍｏｌ）を連続して加える。反応混合物を室温まで加温し、１８時間攪拌する。水溶液を、水（４Ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム（４Ｌ）、およびブライン（４Ｌ）で抽出する。有機層をエチレンジアミン（８ｍＬ）で処理し、１５分間攪拌し、１０％のクエン酸水溶液（４Ｌ）で逆抽出する。無水硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、黄色の油状物（４８４ｇ）を得て、これを一晩凝固する。メチルｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）中で溶解し、少量まで濃縮する。ヘキサン（２Ｌ）を加え、混合物を１時間置く。白色の固形物を濾過し、ヘキサンで洗浄する。白色の固形物（２０ｍｍ Ｈｇ／６０°Ｃ）を一晩乾燥し、標題の化合物（３５４ｇ，６８％）を得る。［α］Ｄ２０＋５６．３（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １．４３（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），２．０５−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．３５（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），４．２７−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．３８（ｍ，２Ｈ）。
【００５８】
（調製例８）
（２Ｒ，４Ｓ）−４−ブロモ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化９】
０〜５℃で、ジクロロメタン（３．２Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（３２０ｇ，１．３０ｍｏｌ）および四臭化炭素（５４０ｇ，１．９４ｍｏｌ）（ドライアイス／ジクロロメタンバス）の溶液に、トリフェニルホスフィン（１．９５ｍｏｌ，５１４ｇ）を少しずつ３０分に亘り加え、室温で４時間攪拌する。エタノール（３．２Ｌ）を加え、さらに２時間攪拌する。反応物を１８Ｌのカーボイに移し、沈殿が生じるまでエーテル（８Ｌ）を加える。混合物を一晩攪拌する。固形物を濾過し、エーテル層を濃縮する。ジクロロメタン中の油性の残留物を溶解し、生成物がＴＬＣによって検出できなくなるまで、ジクロロメタンで溶出するシリカプラグで濾過する。ジクロロメタン層を濃縮し、ヘキサン（４Ｌ）中の５％酢酸エチルで処理し、白色の固形物を形成する。混合物を、ヘキサン中の５％酢酸エチルで溶出するシリカプラグに通し、所望の生成物を含む画分のみを回収する。溶液を濃縮し、ヘキサン（２Ｌ）中の５％酢酸エチルで溶解し、ヘキサン中の５％酢酸エチルで溶出する１ｋｇのシリカゲルパッドで精製し、標題の化合物を黄色がかった油状物（３７２．４ｇ，９３％）として得る。［α］Ｄ２０＋５３．６（メタノール中、ｃ＝１．０）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３３および１．３９（２つのｓ，９Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．５３（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｑ，１Ｈ），４．７３（ｍ，１Ｈ）。
【００５９】
（調製例９）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【化１０】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．５Ｌ）中のアジ化ナトリウム（１５７ｇ，２．３９ｍｏｌ）を（２Ｒ，４Ｓ）−４−ブロモ−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（３７０ｇ，１．２０ｍｏｌ）に加え、７０℃〜７５℃、１６時間、窒素下で加熱する。室温まで冷却し、水（５Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（３Ｌ）で抽出する。ブライン（２Ｌ）で洗浄する。ブライン層を酢酸エチル（３Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物（３２４．５ｇ）を得る。物質をエーテル（２Ｌ）中で溶解し、水（２×２Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、２６１．２ｇの暗黄色の油状物を得る。水層をエーテル（２×２Ｌ）で逆抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、さらに７．３ｇの生成物を得る。全収率は２６８．５ｇ（８３％）である。［α］Ｄ２０＋３９．５（メタノール中、ｃ＝１．０）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １．４０−１．４１（ｓ，９Ｈ），２．０９−２．１３（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．４４（ｍ，１Ｈ），３．３７−３．４５（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．６９（ｓ，３Ｈ），４．０９−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．２５−４．３８（ｍ，１Ｈ）。
【００６０】
（調製例１０）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１１】
水素化ホウ素リチウム（８．５０ｇ，３５１ｍｍｏｌ）を、窒素下で、−３０℃にて、エーテル（１Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（９５ｇ，３５１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。温度を１．５時間、０℃まで上昇させ、さらに２時間、攪拌する。−７０℃まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｌ）を滴下して加える。室温まで加温し、層を分離させ、エーテル（１Ｌ）で水溶層を抽出する。エーテル層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。得られた物質を高真空下で乾燥し、黄色の油状物（８２ｇ，９６％）を得る。［α］Ｄ２０＋２０．３（メタノール中、ｃ＝１．０）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３８（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．２０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．７８（ｍ，１Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ）。
【００６１】
（調製例１１）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１２】
１５ｐｓｉの水素にて、室温で１６時間、メタノール（２．３Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アジド−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２５ｇ，０．９３ｍｏｌ）および炭素上の１０％のパラジウム（２２．５ｇ，トルエンで湿らせてある）の混合物を水素化する。触媒を濾過し、濾液を濃縮し、標題の化合物を油状物（１９８ｇ，９２％）として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．３８（ｓ，９Ｈ），１．５８（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｍ，１Ｈ），３．２０−３．５８（ｍ，６Ｈ），３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【００６２】
（調製例１２）
（２Ｒ，４Ｒ）−４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１３】
激しく攪拌しつつ、窒素下で、１６時間、酢酸エチル（２Ｌ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１９８ｇ，０．９２ｍｏｌ）、５−ブロモ−フルオロニトロベンゼン（２２４ｇ，０．９８ｍｏｌ）、トリエチルアミン（２７３ｍＬ，１．９６ｍｏｌ）の混合物を還流する。室温まで冷却し、ブラインで洗浄する。ブライン層を酢酸エチル（１Ｌ）で逆抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。暖かい酢酸エチル（２Ｌ）で得られた固形物を溶解し、約５００ｍＬまで濃縮し、結晶を形成し始めさせる。溶液をゆっくりとヘキサン（２Ｌ）で処理し、混合物を室温で２時間、静置させる。黄色の固形物を濾過により回収し、ヘキサンで洗浄し、４０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、２２７ｇの所望の生成物を得る。濾液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２：３：５酢酸エチル／ジクロロメタン／ヘプタンが２：３酢酸エチル／ヘプタンまで徐々に増加する）で精製し、さらに５４ｇの所望の生成物を得る。全収率は２８１ｇ（７０％）である。［α］Ｄ２０−８１（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．４０（ｓ，９Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ），２．４８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．１４（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｍ，１Ｈ），７．０８（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，１Ｈ），８．１５（ｄ，１Ｈ），８．５７（ｂｒｄ，１Ｈ，ＮＨ）。
【００６３】
（調製例１３）
（２Ｒ，４Ｒ）−［４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−ピロリジン−２−ｙｌ］−メタノール、塩酸塩
【化１４】
ジクロロメタン（４００ｍＬ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２５．５ｇ，０．３０１ｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン（８００ｍＬ）中の４Ｎ塩酸を加え、室温で４時間、攪拌する。濾過により沈殿物を回収し、エーテルで洗浄し、２０ｍｍＨｇ／６０°Ｃで乾燥し、標題の化合物（１０５．２ｇ，９９％）を得る。［α］Ｄ２０−８９．６（メタノール中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．８０−１．８５（ｍ，１Ｈ），２．５４−２．５９（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．５１（ｍ，３Ｈ），３．５６−３．６３（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．７２（ｍ，２Ｈ），４．５０−４．５１（ｍ，１Ｈ），５．６０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，１Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ），８．９５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ）。
【００６４】
（調製例１４）
（７Ｒ，８ａＲ）−７−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−４−オン
【化１５】
テトラヒドロフラン（３７５ｍＬ）および水（３７６ｍＬ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−［４−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−ピロリジン−２−イル］−メタノール、塩酸塩（５４．５ｇ，１５５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ｐＨが１０〜１２となるまで、５Ｎ水酸化ナトリウムを滴下して加える。３０分に亘り、滴下漏斗を介して、塩化クロロアセチル（２７．３ｍＬ，３３７ｍｍｏｌ）を加える。別の滴下漏斗を用いて、内部ｐＨが８〜１２を維持するような速度にて、酸塩化物を加えている間、５Ｎ水酸化ナトリウムを加える。６時間攪拌し、濾過して形成された固形物を回収し、水で洗浄する。減圧下で濾液の有機成分を取り除き、濾過により固形物を回収する。２つの固形物のバッチを合わせ、６０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、５１．４ｇを得る。固形物をジクロロメタン（１．５Ｌ）中の２％メタノールで懸濁し、１時間、４０℃でロータリーエバポレータ上で回転する。沈殿物を濾過により回収（１１ｇ）し、取り除く。濾液をジクロロメタンで溶出するシリカゲルプラグに通し、溶出液を濃縮し、標題の化合物を橙黄色の固形物として得る（３２．８ｇ，６０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．６８（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｍ，１Ｈ），３．４９（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．９１（ｍ，３Ｈ），４．１０（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，１Ｈ），７．９３（ｄ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ）。
【００６５】
（調製例１５）
（７Ｒ，８ａＲ）−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニル）−（ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン
【化１６】
（７Ｒ，８ａＲ）−７−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニルアミノ）−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−４−オン（３２．１ｇ，９０．１ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）に加え、０℃から−５℃で冷却する。ボラン−硫化ジメチル合成物（２６ｍＬ，０．２７９ｍｏｌ）を１０分に亘って加える。混合物を加熱し、３時間、還流する。氷槽で反応混合物を冷却し、注意深くメタノール（４５０ｍＬ）を滴下して加える。４Ｎ塩酸（４５０ｍＬ）を加え、２時間還流する。約４０℃まで冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウムを注意深く滴下して加えて、ｐＨを１０〜１２に調節する。減圧下で有機溶媒を取り除く。水（１．２Ｌ）で水層を希釈し、ジクロロメタン（１．２Ｌ）で抽出する。硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物を得る。この時点で、油状物を、以前の同一の調製（３０．２ｇのアミド出発物質で開始）からの粗物質と混合する。油状物を塩化メチレンで溶出するシリカゲルプラグに通し、より高いＲｆ成分を取り除く。ジクロロメタン中の１％のメタノールで溶出し、濃縮し、固形物を得る（５７．８ｇ）。エーテル（１Ｌ）中に固形物を懸濁し、一晩静置させる。濾過による固形物を回収し、少量のエーテルで洗浄し、４７．５ｇを得る。濾液を濃縮し、エーテル（１００ｍＬ）中に懸濁し、室温で２時間静置させる。さらに３．１ｇの所望の生成物を濾過して回収する。濾液を濃縮して、シリカプラグ濾過により残留物を精製し、さらに２．９ｇのオレンジ色の固形物を得る。全ての固形物を混合し、標題の化合物（５３．５ｇ，８９％）を得る。［α］Ｄ２０−３６（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．２１（ｍ，１Ｈ），２．０６（ｍ，１Ｈ），２．１８（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｄ，１Ｈ），２．９５（ｄ，１Ｈ），３．１８（ｔ，１Ｈ），３．４２（ｔ，１Ｈ），３．７３（ｄ，１Ｈ），３．８５（ｄ，１Ｈ），４．１９（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｄ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，１Ｈ），８．０１（ｄ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ３４２．０，３４４．０（１：１アイソトープ比）［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６６】
（調製例１６）
（Ｅ）−［４−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデンメチル）−２−ニトロ−フェニル］−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン
【化１７】
フラスコにテトラヒドロフラン（１Ｌ）およびメタノール（５００ｍＬ）中の（７Ｒ，８ａＲ）−（４−ブロモ−２−ニトロ−フェニル）−（ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン（５０．９ｇ，０．１４９ｍｏｌ）、（Ｅ）−２−（（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（５７．５ｇ，０．１６３ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１０．１ｇ，３９ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（１９．７ｇ，０．３４６ｍｏｌ）を充填する。混合物に窒素を通して３０分間、泡立てる。酢酸パラジウム（ＩＩ）（３．００ｇ，１３ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間、混合物に窒素を通して泡立てる。１６時間、窒素下で還流（６０℃）にて、加熱する。室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、真空内で濃縮し、固形物を得る。１：１の酢酸エチル／ブライン（２Ｌ）中で溶解し、珪藻土のパッドに通す。パッドを１：１の酢酸エチル／ブライン（２×１Ｌ）で洗浄し、次いでジクロロメタン（４×１Ｌ）中の１０％のメタノールで洗浄する。層を分離し、有機相を混合する。硫酸ナトリウムで有機部分を乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物を得る。ジクロロメタン中で油状物を溶解し、シリカゲルパッドに通す。より高いＲｆ ＴＬＣ成分が取り除かれるまで、ジクロロメタンでパッドをリンスする。ジクロロメタン中の１％のメタノールで溶出し、真空内で濃縮し、発泡体を得る。酢酸エチル（２Ｌ）中で溶解し、約２００ｍＬまで濃縮する。ヘキサン（１．５Ｌ）を加え、懸濁液を室温で１時間、静置させる。濾過により、オレンジ色の固形物を回収し、５０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで乾燥し、標題の化合物（５３ｇ，７３％）を得る。［α］Ｄ２０−２６（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．０８（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｍ，１Ｈ），２．４１（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｍ，１Ｈ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｄ，１Ｈ），３．８２（ｄ，１Ｈ），４．１２（ｍ，１Ｈ），５．０２（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），５．５９（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ），６．６０（ｄ，１Ｈ），６．８１（ｍ，２Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｔ，１Ｈ），７．３８（ｔ，１Ｈ），７．６０（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ４５８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【実施例】
【００６７】
（実施例１）
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（式Ｉ）
【化１８】
室温で、２時間、５０ｐｓｉにて、テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）中の（Ｅ）−［４−（３−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１−イリデンメチル）−２−ニトロ−フェニル］−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−アミン（５２ｇ，０．１０７ｍｏｌ）、トリエチルアミン（３３ｍＬ，０．２３７ｍｏｌ）および５％の炭素上の白金（１８ｇ）の混合物を水素化する。触媒を濾過し、テトラヒドロフランでリンスし、濃縮し、茶色の発泡体を得る。無水テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中で発泡体を溶解し、氷槽中で冷却する。トリホスゲン（３１．５ｇ，０．１０６ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）中に、３０分に亘って滴下して加え、１６時間室温で攪拌する。溶液を濃縮し、ジクロロメタン中の５％メタノールで溶解し、短いシリカゲルプラグで精製する。濃縮して茶色の固体を得る。飽和炭酸水素ナトリウム（１．５Ｌ）中で固体を懸濁し、ロータリーエバポレータ上で１時間攪拌する。濾過し、真空内で乾燥する。暖かい１：１メタノール／ジクロロメタン（約６Ｌ）中に溶解し、ポリ（４−ビニルピリジン）２％の架橋樹脂（１７０ｇ）で処理する。３０分間、スラリーを攪拌し、珪藻土で濾過する。濾液を約１．５Ｌ体積に濃縮し、得られた固体を濾過して回収する。８０°Ｃ／２０ｍｍ Ｈｇで一晩乾燥し、標題の化合物（３８．１ｇ，７４％）を白色の固形物として得る。［α］Ｄ２０−２０．５（ＤＭＳＯ中、ｃ＝１．０）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １．４８（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｍ，２Ｈ），２．５２（ｍ，１Ｈ），２．９１（ｄ，１Ｈ），３．０３（ｄ，１Ｈ），３．２５（ｔ，１Ｈ），３．５０（ｔ，１Ｈ），３．７９（ｄ，１Ｈ），３．８８（ｄ，１Ｈ），４．９５（ｍ，１Ｈ），５．０３（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），５．６０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），６．５９（ｍ，２Ｈ），６．７８（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．３８（ｔ，１Ｈ），７．４８−７．６１（ｍ，３Ｈ），１０．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８４．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６８】
実施例１に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンを得、約１０．５、１３．０、１５．５、および１９．７の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形体（式Ｉ）を明らかにする。物質の融点特徴をＤＳＣによって測定する。融点開始＝２９８．９°Ｃ。
【００６９】
（実施例１（ａ））
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（式ＩＩ）
１１７．７ｍｇの５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１に記載されるように調製する）をバイアルに加え、溶解するまで、１０００ｒｐｍで、攪拌プレート上で７０℃で２．５ｍＬのＤＭＡＣで混合する。濁るまで水をサンプルにゆっくりと加え、次いで熱を取り除く。白色の固形物が溶液から沈殿するまで３０分間攪拌を続ける。濾過により固形物を回収し、４０℃で一晩乾燥する。
【００７０】
実施例１（ａ）に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンを得、約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形態（式ＩＩ）を明らかにする。
【００７１】
（代替手順）
（ｉ）分液漏斗中の５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３溶液（５×１００ｍＬ）で、１ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）中の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン．４−メチルベンゼンスルホン酸塩（１０．２ｇ，１５．５５ｍｍｏｌｅｓ）（以下の実施例２に記載されるように実質的に調製する）の懸濁液を抽出する。ブラインで有機層を洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、プリーツのあるフィルタで濾過し、真空内で濃縮する。一晩、５０℃の真空オーブンで残留物を乾燥し、白色の固形物（６．７１ｇ，９０％回収）を得る。ＬＣ−ＭＳ（４ｍｉｎ）：ＲＴ＝１．８７分、１００％Ｍ＋Ｈ＝４８４．２。
【００７２】
（ｉｉ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、１ｍＬのＤＭＡｃで処理し、３０分間、８０℃の油浴中において得られた懸濁液を加熱する。１５ｍＬのＡｃＣＮを溶液に加え、８０℃の油浴で３０分間加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで５０°Ｃの真空オーブンで一晩乾燥し、７４．５ｍｇの生成物を回収する。
【００７３】
（ｉｉｉ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、２０ｍＬのＡｃＣＮで処理し、得られた懸濁液を３０分間、８０℃の油浴中で加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで、一晩、５０℃の真空オーブン中で乾燥し、８１．８ｍｇの生成物を回収する。
【００７４】
（ｉｖ）上述の代替手順（ｉ）からの物質の０．１ｇのサンプルを、２０ｍＬのＩＰＡで処理し、得られた懸濁液を３０分間、８０℃の油浴中で加熱し、次いで、攪拌しつつ室温まで冷却する。固形物を濾過して回収し、次いで、一晩、５０℃の真空オーブン中で乾燥し、９２．８ｍｇの生成物を回収する。
【００７５】
上述の代替手順（ｉ）に記載されるように調製した物質を用い、Ｘ線粉末回折パターンは、約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０（式ＩＩ）の特徴的なピーク位置（°２θ値）を有する結晶形態を明らかにする。
【００７６】
（実施例２）
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン．トシレート塩
【化１９】
３０分間、４０℃の油浴中のジメチルアセトアミド（５０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５１．７０ｍｍｏｌ，９．９８ｇ）の溶液を加熱する。均質な溶液に、５ｇ部中の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（５１．７０ｍｍｏｌ，２５．００ｇ）を、激しく攪拌して加える。粉末漏斗およびコンテナボトルをジメチルアセトアミド（２５ｍＬ）で洗浄し、懸濁液を４０℃で、３０分間、固形物が完全に溶解するまで攪拌する。３０℃で一晩、窒素ガス流中の淡褐色の均質な溶液を静置させる。残留物を、アセトニトリル（２００ｍＬ）で希釈し、２０分間、水浴中で超音波処理する。３時間、６０℃の油浴中で白色の固形物の懸濁液を加熱する。室温まで冷却し、濾過によって固形物を回収する。２日間、４０℃で真空オーブン中において乾燥し、標題の化合物（３２．８８ｇ，９７％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ２．００（ｍ，０．５Ｈ），２．２９（ｍ，０．５Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｍ，０．５Ｈ），３．１−４．２（ｍ，７Ｈ），５．１０（ｂｒｏａｄ ｍ，２Ｈ），５．５５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），６．６０（ｄｄ，１Ｈ），６．６７（ｄ，１Ｈ），６．７８（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｍ，３Ｈ），７．０８（ｄ，２Ｈ），７．２１（ｔ，１Ｈ），７．３３（ｔ，１Ｈ），７．４３（ｄ，２Ｈ），７．５７（ｍ，２Ｈ），９．６５（ｓ，０．５Ｈ），１０．２５（ｓ，０．５Ｈ），１０．９８（ｓ，０．５Ｈ），１１．１４（ｓ，０．５Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７７】
（代替手順）
（ａ）ジメチルアセトアミド（２ｍＬ）中に８５．８ｍｇ（０．１７７ｍｍｏｌ）の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１において記載されるように実質的に調製する）を溶解する。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４３ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を透明な溶液となるまで攪拌する。アセトニトリル（７ｍＬ）を加え、蒸発し、透明な油状物を得る。水（２ｍＬ）を加え、サンプルを超音波処理する。白色の固形物が沈殿した後、サンプルを１０分間、スラリーにする。濾過して乾燥し、固形物を得る。
【００７８】
（ｂ）２．５ｍＬのＤＭＡＣ中に９８．０ｍｇの５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（実施例１に記載されるように実質的に調製する）を溶解する。１．２等量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物を加え、溶液が透明になり、色がなくなるまで攪拌する。２ｍＬの８８％のアセトンを加え、次いで１６ｍＬの水を加え、次いで、蒸発させて溶媒を取り除く。得られた透明な油状物に、１ｍＬのアセトンを加え、超音波処理する。得られたゲルを乾燥し、灰色がかった固形物を得る。固形物を再び、１：１０のＴＨＦ：Ｈ２Ｏで溶解し、蒸発させ、透明な油状物を得て、次いで、５ｍＬのアセトニトリルで超音波処理する。白色の固形物が沈殿した後、サンプルを一晩、スラリーにする。濾過して乾燥させ、固形物を得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンである化合物、またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
結晶形である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０の°２θにおける特性ピークを有する結晶形の請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
治療に用いられる請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項６】
鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患の治療に用いられる請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項７】
請求項１から４のいずれか１項に記載の有効量の化合物または塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療する方法。
【請求項８】
有効量の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンを、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１から４のうちいずれか１項に記載の化合物または塩を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１０】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンを、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンである化合物、またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
結晶形である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
約１１．３、１２．１、１８．８、および２１．０の°２θにおける特性ピークを有する結晶形の請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
治療に用いられる請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項６】
鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患の治療に用いられる請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項７】
請求項１から４のいずれか１項に記載の有効量の化合物または塩を、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、鬱血性心不全、高血圧、糖尿病性腎症、または慢性腎疾患を治療する方法。
【請求項８】
有効量の５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンを、それを必要とする患者に対して投与する工程を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１から４のうちいずれか１項に記載の化合物または塩を、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１０】
５−（（Ｅ）−（３−フルオロジベンゾ［ｂ，ｅ］オキセピン−１１（６Ｈ）−イリデン）メチル）−１−（（７Ｒ，８ａＲ）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンを、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【公表番号】特表２０１２−５２０３０２（Ｐ２０１２−５２０３０２Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５４０８３（Ｐ２０１１−５５４０８３）
【出願日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２６１３８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０４７２１
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２６１３８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０４７２１
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
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