ＣＯＰＤの処置用薬物としてのＮ−フェニルベンズアミド誘導体
【課題】 本発明は、下記式（Ｉ）で示されるＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の新規な用途を提供する。
【化１】
［式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６は明細書の記載と同意義である］
【解決手段】 かかる化合物の用途は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療処置用薬剤の製造のための使用である。
【化１】
［式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６は明細書の記載と同意義である］
【解決手段】 かかる化合物の用途は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療処置用薬剤の製造のための使用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体の、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置用薬剤の製造のための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＯＰＤは、重大で増大する世界的な健康問題であり、２０２０年までには世界で廃疾の最も一般的な原因の中で５番目の原因となることが予測され、そのうえ、入院するますます一般的な原因でもある。この病気を処置する有効な治療剤の不足は、この病気と満足に取り組むことができる適切な薬理学的作用物質を認定するために、科学的地域社会内に多くの努力を促した。
【０００３】
最新の情報によれば（Ｎational Ｉnstitute of Ｈealth，Ｎational Ｈeart，
Ｌung and Ｂlood Ｉnstitute：ＧＯＬＤ，Ｇlobal Ｉnitiative for Ｃhronic Ｏbstructive Ｌung Ｄisease：Ｇlobal Ｓtrategy for Ｄiagnosis，Ｍanagement and Ｐrevention of Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease；改訂２００３年）、ＣＯＰＤは、十分には逆転しない空気流の制限が特徴の疾患状態である。空気流の制限は通常、進行性でありかつ最も多くは喫煙に関係するが、有害な粒子またはガスに対する肺の異常な炎症性反応が付随する。ＣＯＰＤの症状、機能不全および合併症は全て、この根元的な炎症および結果として生ずる病状に基づき説明することができる。
【０００４】
ＣＯＰＤの慢性的な空気流制限の特徴は、小さな気道疾患（閉塞性細気管支炎）および実質破壊（気腫）の混合によって起こり、これらの相対的な関与は、人によって変化する。慢性炎症は、小気道を再造形したり、狭くする。肺実質の破壊は、これも炎症プロセスによるが、小気道への肺胞付着のロスを招き、かつ肺の弾力ある反動を縮小し、次いでこれらの変化は、呼気作用中に開いたままでいる気道の能力を減少させる。語句“気腫”および“慢性気管支炎”とは、臨床上頻繁に用いられ、かつＣＯＰＤの定義に含まれる。
【０００５】
肺（肺胞）の気腫、またはガス交換表面の破壊は、ＣＯＰＤを持った患者に存在する幾つかの構造異常の１つを示す。慢性気管支炎、またはそれぞれ２年続いた中で少なくとも３ヶ月にわたる咳および痰生成の出現は、臨床上および免疫上実用的な用語としてとどまる。しかしながら、それはＣＯＰＤ患者における罹病率や死亡率に関して空気流制限の重大な衝撃を反映することはない。このため用語ＣＯＰＤは、この病気全体を正しく規定する。
【０００６】
上記予想の如く、ＣＯＰＤは気道、実質および肺血管系の中の慢性炎症によって示される。炎症の強度並びに細胞および分子特性は、該病気の進行に準じて変化する。時間の経過に伴ない、炎症は肺を損傷し、かつＣＯＰＤの病的変化特性に導く（Ｓutherland Ｅ.Ｒ.ら，Ｍanagement of Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease，Ｎ．Ｅngl．Ｊ．Ｍed．２００４，３５０：２６８９−９７；Ｈogg Ｊ．Ｃ．ら，Ｔhe nature
of small−airway obstruction in Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease，Ｎ．Ｅngl．Ｊ．Ｍed．２００４，３５０：２６４５−５３）。
【０００７】
実際に、ＣＯＰＤは肺の種々の部分における、好中球、マクロファージ、およびＴリンパ球（特にＣＤ８＋）の増加によって特徴づけられる。また幾人かの患者において、特に病状再燃中に好酸球の増加もありうる。これらの増加は、炎症性細胞の漸増（recruitment）、生存および／または活性化の増大によってひき起こされる。多くの研究によって、肺の中の種々タイプの炎症性細胞の数と、ＣＯＰＤの厳しさとに相関関係が明らかにされている。
【０００８】
症状を予防およびコントロールし、病状再燃の頻度や厳しさを縮小し、健康状態を改善し、および運動耐性を改善するのに、薬理学的療法が用いられている。このため、ＣＯＰＤの処置は重々しく、抗炎症性および気管支拡張性薬物に依存している。
現存のＣＯＰＤ用の薬物療法にあって、この病気の顕著な特徴である、肺機能の長期減退を緩和することが認められているものはない。
【０００９】
我々グループの以前に出願した国際特許出願ＷＯ９０／０９９８９に、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１はシアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、メトキシまたはテトラゾール−５−イル基；
Ｒ２は水素、ヒドロキシまたはメトキシ；
Ｒ３はテトラゾール−５−イル基または水素；
Ｒ４およびＲ５は、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；および
Ｒ６は水素またはメチルである］
で示されるＮ−フェニルベンズアミド誘導体が開示されている。
【００１０】
これらの化合物はＷＯ９０／０９９８９において、胃分泌をコントロールし、かつ胃腸粘膜の保護剤としてクレーム化されている。
最終的に、式（Ｉ）の化合物は、アレルゲン、たとえば気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎および結膜炎に対する過敏症に帰すことができる種々病状の薬理学的処置のための適切な作用物質として述べられているにすぎない。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物の中で、下記式（Ｉa）の誘導体，［Ｎ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンズアミド］（アンドラスト（Ａndolast、以下同様），ＣＲ２０３９）（ここで、Ｒ２，Ｒ４，Ｒ５およびＲ６は共に水素、およびＲ１およびＲ３は共にテトラゾール−５−イル基である）は、特にぜん息の処置の見込みがある薬理学的性質を持つことが認められた（Ｒevel Ｌ．ら，ＣＲ２０３９，a new bis−（１Ｈ−tetrazolyl−５−ｙｌ）phenylbenzamide derivative with potential for the topical treatment of asthma．Ｅur．Ｊ．Ｐharmacol．１９９２，２２９：４５−５３）。かかるぜん息処置における化合物（Ｉa）の使用のための適当な医薬配合物は、ＵＳ特許Ｎo．５９７６５７６に記載されている。
式（Ｉa）の化合物（Ａndolast，ＣＲ２０３９）：
【化２】
【００１２】
ぜん息は、根元的な気道炎症を特徴とする気道の他の重大な慢性閉塞性疾患である。
ぜん息とＣＯＰＤは、その共通の重大な症状を有するが、これらの症状は概して、ＣＯＰＤよりもぜん息においての方が変わりやすい。加えて、ぜん息における空気流制限は、自発的にあるいは処置によって、非常にたびたび完全に逆転しうるが、一方、ＣＯＰＤにおいては、空気流制限が完全に逆転することは決してなく、通常は、有害な作用物質にさらすのを続けると進行する。ぜん息においては、気道過反応（ＡＨＲ）、すなわち、刺激薬に対する異常な気管支収縮性反応を示す多くの証拠もある。
【００１３】
また根元的な慢性気道炎症も、非常に異なり、すなわち、ぜん息のそれは主に好酸性で、かつ特にＴｈ２副次集団の、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を含む前炎症性（
proinflammatory）サイトカインのファミリーを放出する、ＣＤ４＋Ｔリンパ球によって駆動される。逆に、ＣＯＰＤの慢性炎症は好中球性で、かつ増加した数のマクロファージおよびＣＤ８＋Ｔリンパ球の存在によって特徴づけられる。
結局、ぜん息とＣＯＰＤの処置に対する反応は、劇的に異なる。両病状における主要な慢性炎症性成分（component）であるにも拘らず、コルチコステロイドは、ＣＯＰＤよりもぜん息の方が有意的に有効であり、ＣＯＰＤはβ２アドレナリン作用性アゴニストや抗コリン作用薬などの気管支拡張薬に対する感受性が大きい。
【００１４】
ＣＯＰＤにおける炎症縮小のコルチコステロイドの限界値は、新規タイプの非ステロイド性抗炎症性治療薬が必要となるかもしれないことを示唆する。ＣＯＰＤにおける抗炎症性治療薬への新しい幾つかのアプローチがなされ、たとえば該治療薬として、ホスホジエステラーゼ・インヒビター、転写因子ＮＦ−ｋＢインヒビター、癒着（adhesion）分子ブロッカー、細胞間質メタロプロテイナーゼ・インヒビター、およびカリウム（Ｋ＋）チャネル・インヒビターが含まれる。最後の治療薬は、以下に記載されるように、ＣＯＰＤにおいて有益となる幾つかの特徴を有する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物、特に式（Ｉa）の化合物の薬理学的活性は、主にこの種化合物の抗アレルギー特性に基づくものと考えられており、かかる化合物はヒスタミン放出をブロックすることが証明されており（Ｍakovec Ｆ．ら，Ａntiallergic and cytoprotective activity of new Ｎ−phenylbenzamido acid derivatives．Ｊ．Ｍed．Ｃhem．１９９２，３５：３６３３−４０）、このため、アレルギー性鼻炎およびぜん息処置の臨床指標であることがわかる。
【００１６】
目下の予期しない薬理学的な知見によれば、上述の式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｉa），Ａndolastは、以前に確認されていなかったメカニズムを介して作用し、気道炎症反応の種々の成分を除去する（relieve）。
実際に、Ａndolastは、アトピー性被検者の抗体−仲介および細胞−仲介炎症性反応を共に減少させる。
【００１７】
抗体−仲介炎症性反応に関して、Ａndolastは、アレルギー性ドナーからのヒトＢリンパ球によって、ＩＬ−４依存性ＩgＥ合成に対し強力な抑制効果を示した。この効果は、アレルゲン−誘発肥満細胞感作の減少に導き、その結果として、アトピー性気管支ぜん息における気道炎症およびＡＨＲに反応しうる、ヒスタミンを含め、ＩgＥ−依存性メディエイタ放出の抑制に導く。
【００１８】
細胞−仲介プロセスに関して、軽〜中位のぜん息患者からのデータは、Ａndolastによる標準処置過程が、好酸球漸増薬（recruiter）サイトカイン，ＩＬ−５のＴリンパ球（Ｔｈ２）生成に対し抑制効果を誘発することができ、その結果、痰における好酸球の割合が減少することを示した。これらの細胞−仲介プロセスは、アトピー性および非アトピー性被検者の両方に有効であることから、この効果は、両種の被検者において気道炎症およびＡＨＲの減少に寄与することがある。
【発明の開示】
【００１９】
本発明によれば、上述の式（Ｉ）の化合物は意外にも、カルシウム（Ｃa２＋）−依存性Ｋ＋チャネルにおいて優れた活性を持つことがわかり、このため、以下に詳述の通り、特にＣＯＰＤの処置のための予期しえない適切な薬理学的作用物質として、これらの化合物を強調した。
【００２０】
すなわち、本発明の１つの側面は、上記式（Ｉ）の化合物の、ＣＯＰＤの処置用薬剤の製造のための使用である。
本発明での使用に好ましい化合物は、Ｒ１がテトラゾール−５−イル基である式（Ｉ）の化合物である。特に好ましい化合物は、Ｒ２，Ｒ４，Ｒ５およびＲ６が共に水素、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基である化合物（Ｉa）である。
【００２１】
上記のＫ＋チャネル開口特性については、発明の詳細な説明で報告する実験で示す。これらの実験で、Ａndolastは、迷走神経一次感覚ニューロンの活性化を抑制して（電気刺激，ＥＦＳの脱分極で刺激される細胞内Ｃa２＋動員の抑制によって測定）、タキキニンおよびカルシトニン遺伝子−関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の神経放出によって誘導される、気道におけるいわゆる神経性炎症を抑制し、その結果、気管支収縮を抑制することができた。これらの効果は、選択的高コンダクタンスＣa２＋−活性化Ｋ＋チャネル・インヒビター，カリブドトキシン（charybdotoxin）によって、完全に破壊され、これによって、これらの薬理学的効果がこれらＫ＋チャネルの開口により仲介されることが証明される。
【００２２】
イオンチャネルは、膜内外たん白であって、細胞膜を横切る無機イオンの輸送を触媒する。Ｋ＋チャネルは、イオンチャネルの中で最も大きくかつ最も多様なグループである。Ｋ＋チャネルの活性は、広範にわたる種々の細胞型における休眠膜電位および再分極／過分極電流の発生に、有意的に寄与する。気道平滑筋および神経は、このレベルでの収縮活性および神経反射の調節に必要なＫ＋チャネルを発現する。少なくとも３タイプのかかるチャネル、すなわち、Ｃa２＋−活性化Ｋ＋チャネル、遅延−整流器電圧−依存性Ｋ＋チャネル、およびＡＴＰ−感受性Ｋ＋チャネルが、気道に存在する。
【００２３】
Ｃa２＋−活性化Ｋ＋（Ｋca）チャネルは、ほとんど他のＫ＋チャネルとは、その活性化が二元コントロール下にある点で異なるが、それは、細胞内のＣa２＋濃度増加または膜脱分極のいずれかで活性化されるからである。
Ｋcaチャネルはさらに、それらの単一チャネル・コンダクタンスの生物物理学的特徴に基づき、３つの主なグループ、すなわち、小コンダクタンス（ＳＫca）、中間コンダクタンス（ＩＫca）、および大（高）コンダクタンス（ＢＫca）に下位分類される。これらの３サブグループの中で、ＢＫcaが最も多く研究されているが、最近ではＳＫcaやＩＫcaの薬理学的特性に取り組む研究が幾つかある（Ｊensen Ｂ．Ｓ．ら，ＷＯ００／３３８３４，２０００年６月１５日；Ｕse of isatin derivatives as ion channel activating agents）。
【００２４】
気道平滑筋（ＡＳＭ）細胞において、ＢＫcaチャネルは負のフィードバック機構を活性化することにより、細胞膜の電気安定性を回復させる外部Ｋ＋移動によって生じる過分極の結果として、刺激薬および／またはＣa２＋動員剤を脱分極する作用が弱まったりあるいは終了する。
【００２５】
上記予想の如く、多くのインビトロおよびインビボ研究が動物やヒトの両方で行なわれており、これらの研究により、Ｋ＋チャネルオープナーは、ＡＳＭ細胞の過分極、気管支拡張、気道過反応（ＡＨＲ）の抑制、および神経反射の抑制を誘発しうることが示される。
【００２６】
この最新のポイントに関して、気道神経と炎症間の密な相互作用があることに注目することが重要である。多くの炎症性メディエイタは、神経末端へのレセプタの活性化を介して、気道中のコリン作用性神経および感覚神経を調整しうる（Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，Ｍodulation of neurotransmission in airways．Ｐhysiol．Ｒev．１９９２，７２：６９９−７２９）。感覚神経は主に、神経ペプチド、たとえばタキキニン（Ｐ，ＳＰ物質および神経キニンＡ，ＮＫＡなど）およびＣＧＲＰを放出する。
【００２７】
それらが中枢神経末端（終末）から放出されると、痛み伝達や保護反射（たとえば咳）の活性化が付随する。しかしながら、感覚神経もまた、機械的および化学的刺激（たとえばタバコの煙）で活性化されると、気道の炎症を増幅することにより、逆行性インパルスや、末梢神経末端から同じ神経ペプチドを放出する局所軸索反射を発生させたり、興奮性の非アドレナリン作用性非コリン作用性（ｅＮＡＮＣ）収縮や神経性炎症を招いたりする。
【００２８】
この神経性炎症は、多くの機関紙に記載され、かつ幾つかの種の上および下気道で詳細に報道されている（Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，ＮＡＮＣ nerves and neuropeptides．Ｉn：Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，Ｒogers Ｉ．Ｗ．，Ｔhomson Ｎ．Ｃ．（Ｅds．）１９９８，Ａcademic Ｐress，Ｌondon，４２３−５８；Ｍaggi Ｃ．Ａ．ら，Ｎeuropeptides as regulators of airway function：vasoactive intestinal peptide and the tachykinins．Ｐhysiol．Ｒev．１９９５，７５：２７７−３２２）。実際に、平滑筋収縮、すなわち、直接の気管支収縮を除いて、これらの神経ペプチドは、粘膜下腺分泌の刺激、血管透過性の増加、肥満細胞の刺激、ＢおよびＴリンパ球の刺激、マクロファージの刺激、好酸球および好中球の化学誘引、および好中球の血管癒着を含む、一連の炎症性反応を誘発する。
【００２９】
感覚神経が炎症性反応を増幅し、広げうるという考えは、気道疾患、たとえばぜん息やＣＯＰＤにおける炎症に関与しうるので、かなりの注意をひく（Ｊoos Ｇ．Ｆ．ら，Ｔhe role of neural inflammation in asthma and Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease．Ａnn．Ｎ．Ｙ．Ａcad．Ｓci．２００３，９９２：２１８−３０）。またタキキニンは、コリン作用性神経末端でアセチルコリン放出を促進したり、神経節伝達を高めることにより、コリン作用性神経伝達も高める（Ｗatson Ｎ．ら，Ｅndogenous tachykinins facilitate transmission through parasympathetic ganglia in guinea pig trachea．Ｂr．Ｊ．Ｐharmacol．１９９３，１０９：７５１−５９）。
【００３０】
ＣＯＰＤの病因論において、気道神経の役割に関し、他のことはともかくも同様に重要なのは、ＣＯＰＤで狭くなる気道の主要な逆転成分が、コリン作用性の気管支運動の増進した正常状態（increased tone）であるが、さもなければ、ぜん息において気管支閉塞に関与する多くのファクターの１つを構成するにすぎないという事実である。このため、ＣＯＰＤ患者において、抗コリン作用薬がβ２アドレナリン作用性アゴニストよりも極めて有効である。
【００３１】
ＣＯＰＤ患者は、迷走神経において神経節伝達を害し、かつ神経末端からのアセチルコリン放出を縮小しうる、Ｋ＋チャネルオープナーの薬理学的特性から利益を得ることができることが示唆される。これらの薬物のコリン作用性神経伝達に対する調整効果は神経過分極に基づくが、この効果は、迷走神経刺激によって誘発される気管支収縮に対し、モルモットで発揮されるその大きな抑制作用を、アセチルコリンの静脈内注入によって顕現するそれと比較することによって確認される。
【００３２】
幾つかの炎症性メディエイタの放出および神経伝達におけるこれらチャネルの必要（involvement）と共に、気道平滑筋におけるＢＫca活性化作用物質の弛緩薬特性は、Ｋcaチャネルオープナーとして作用する薬理学的作用物質の将来有望な標的としてＣＯＰＤを示唆する（Ｇ．Ｐelaiaら，Ｐotential role of potassium channel openers in the treatment of asthma and Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease．Ｌife Ｓci．２００２，７０：９７７−９０）。
【００３３】
指摘すべき点は、他のＫ＋チャネルオープナー、たとえばクロマカリン（Ｃromakalim）が、動物モデルで実験的に誘発される気管支収縮を有意的に抑制することが本当に証明されていることであり、そして、臨床試験でクロマカリンが慢性気道炎症に有効であることを立証した。しかしながら、この薬物並びにその同類のレマカリン（Ｌemakalim）やビマカリン（Ｂimakalim）は、ＢＫcaとは異なるＫ＋チャネルである、別タイプのＫ＋チャネル，ＡＴＰ感受性Ｋ＋チャネル，ＫＡＴＰに作用する。ＫＡＴＰチャネルオープナーは、血管平滑筋の強力な弛緩薬であることが立証されており、従って、その使用は低血圧などの望ましくない副作用によって制限される。
【００３４】
加えて、このチャネルの活性薬は、炎症性メディエイタ放出での抑制特性および気道への炎症性細胞漸増の抑制が欠けており、ＣＯＰＤ処置の基本成分として提案されている。逆に、これらの特性は、ＢＫcaチャネルの活性化を介して神経性炎症に対し有効であるのみならず、抗体−仲介および細胞−仲介炎症性反応をも減少させるＡndolastの場合に証明される。
【００３５】
Ｋ＋チャネルは、気道慢性炎症に必然的に伴なうＴリンパ球、好中球、好塩基球およびマクロファージなどの幾つかの炎症性および免疫性細胞によって発現されるので、これらのチャネルは多分、種々の気道炎症反応の調整に寄与するかもしれないことが提案される。従って、ここで証明されるＫ＋チャネルの開口はこの点でもＡndolastの作用機構を説明することができ、これによって、種々のケモカイン（chemokines）やサイトカインの放出を調整することにより、この総合的で気道特異的な、炎症性細胞漸増（ひょっとしたらＣＯＰＤ炎症の特性を示している好中球やマクロファージを含む）に対する抗炎症性特性および抑制効果が支持されるだろう。
【００３６】
これら全ての証言をひとまとめにすると、本明細書記載の意外な知見に基づき、式（Ｉ）の誘導体、特に式（Ｉａ）の化合物，Ａndolastの、ＣＯＰＤの処置用薬剤の製造のための使用が支持される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
神経性炎症に対するＡndolastの効果およびＫcaチャネル必要の証明：
以下の事項を証明するために、特定の研究を行った。
ａ）Ａndolastは、ラットの後根神経節ニューロンにおいて刺激を脱分極することにより、誘発する細胞内Ｃａ２＋の動員を抑制する。
ｂ）Ａndolastは、一次感覚ニューロンの末梢および中枢神経末端からの神経ペプチド（ＣＧＲＰ）を抑制する。
ｃ）Ａndolastは、単離したモルモットの気管支において、電気刺激（ＥＦＳ）の適用で誘発するアトロピン−耐性ｅＮＡＮＣ収縮を抑制する。この収縮性反応は、一次感覚ニューロンから放出され、かつ平滑筋のタキキニン・レセプタに作用するＳＰ／ＮＫＡによって仲介される。
ｄ）カリブドトキシン（Ｋcaの選択的インヒビター）は、上記のＡndolast活性を逆にする（revert）。
【００３８】
方法
ニューロンの培養実験：
生後１−３日のラットから、後根神経節（ＤＲＧ）を取出し、十分確立した手順に従って単細胞に解離する。細胞をコーティングしたカバーガラスにて平板培養し、これにＦura−２−ＡＭ−エステルを加え、相対細胞内カルシウム（［Ｃａ２＋]ｉ）変化を検出する。
Ｃａ２＋蛍光中、細胞を電気刺激（１０Ｈｚ、１ｍｓ、４０ｍＡ／ｃｍ２、１０秒間）で２回興奮させ、刺激と刺激の休止期間を２０分とする。これらの実験は、１００ｎＭカリブドトキシンの存在または非存在下で行なう。
【００３９】
モルモットの気道およびラツトの背面脊髄のスライス：
モルモットの気管および気管支またはラットの背面脊髄のスライスを用意し、これらを灌流室に移して灌流する。平衡期間の後、興奮性刺激薬（ＫＣｌ ８０ｍＭ）のデリバリーの前、途中および後に、サンプルを収集する。Ａndolastの効果を、そのビヒクルの効果と比較する。ＣＧＲＰ様免疫反応性（ＣＧＲＰ−ＬＩ）を、酵素イムノアッセイで測定する。
【００４０】
ラットの背面脊髄において、Ａndolastを用いる実験も、１００ｎＭカリブドトキシンの存在下で行なう。
単離したモルモット気管支：
モルモット気管支輪を、器官浴（organ baths）に取付ける。平衡期間の後、アトロピン（１μＭ）の存在下、ＥＦＳ（５Ｈｚ、２０秒、４０Ｖで０．５ｍｓパルス幅）に対するｅＮＡＮＣ収縮性反応を調べる。１００ｎＭカリブドトキシンの存在または非存在下の平行実験で、ｅＮＡＮＣに関するＡndolastまたはそのビヒクルの効果を調べる。またＳＰの直接の気管支収縮活性に影響を及ぼすＡndolastの能力も調べる。
【００４１】
結果
ニューロンの培養実験：
ＥＦＳは、［Ｃａ２＋]ｉ動員の増加を誘発する（イオノマイシン（ionomycin）に対する反応の５９±８％）。ＥＦＳに反応する全ての細胞は、０．１μＭカプサイシンに対しても［Ｃａ２＋]ｉの増加で反応し、これによって、これらが一次感覚ニューロン（多形態の（polymodal）侵害受容器）であることが示される。イオノマイシンに対する反応の［Ｃａ２＋]ｉの動員は、Ａndolast（１０μＭ）またはそのビヒクル（Ｖeh）による前処置後と似ている。Ａndolastによる前処置は、Ａndolastビヒクルの効果と対照すれば、濃度に依存して縮小するＥＦＳに対する反応を減少させる。カプサイシンに対する反応は、Ａndolast（１０μＭ）による前処置では影響されない。Ａndolastの抑制効果は、１００ｎＭカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）によって完全に逆転する。データを図１に示す。
図１によれば、Ａndolastは、新生ラットの培養ＤＲＧニューロンにおいて、ＥＦＳ（４０ｍＡ／ｃｍ２、１ｍ秒パルス持続、１０秒間）によって誘発される［Ｃａ２＋]ｉ動員を抑制するが、カプサイシン（０．１μＭ）で誘発される［Ｃａ２＋]ｉ動員は抑制しない。ＥＦＳに関するＡndolastの効果は、０．１μＭカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）によって逆になる（reverted）。
【００４２】
ラットの背面脊髄およびモルモットの気道のスライス：
ラットの背面脊髄のスライスおよびモルモットの気道のスライスの両方において、Ａndolast（０．１〜１μＭ）は、ＣＧＲＰ−ＬＩの流出においていずれの有意の増加も起こさない。
ラットの背面脊髄において、Ａndolastは、高Ｋ＋培地によって誘発されるＣＧＲＰ−ＬＩの流出の濃度依存の抑制を起こす。Ａndolast（１μＭ）によって、最大抑制（ビヒクルの４８％）が得られる。この効果は、１００ｎＭカリブドトキシンによって完全に排除される（図２Ａ参照）。
またモルモットの気道のスライスにおいても、Ａndolast（１μＭ）は、高Ｋ＋培地によって誘発されるＣＧＲＰ−ＬＩ流出の著しい抑制（６７％）を起こす（図２Ｂ参照）。
図２は、ラットの背面脊髄のスライト（Ａ）、およびモルモットの気道のスライス（Ｂ）からの高Ｋ＋によってひき起こすＣＧＲＰの流出に関する、Ａndolastおよびカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）の効果を示す。
【００４３】
単離したモルモットの気管支：
ＥＦＳは、モルモット気管支の輪において、アトロピンの存在下で遅延収縮性反応を起こす。Ａndolastによる前処置は、ＥＦＳに対する収縮性反応を用量に依存して減少させる。１０μＭ−Ａndolastの場合に、最大抑制（４５％）が得られる。Ａndolast（１０μＭ）は、ＳＰに対する収縮性反応に影響を及ぼさず、これによって特異性を示す。Ａndolastの効果は、特定ＢＫcaインヒビター，カリブドトキシン（０．１μＭ）の存在下で、完全に排除される（図３Ａ，Ｂ参照）。
図３は、モルモットの単離した気管支輪において、電界刺激（ＥＦＳ、５Ｈｚ、１ｍｓ幅、１０Ｖ）およびＰ物質によって誘発される収縮に関するＡndolastおよびカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）の効果を示す。
【００４４】
結論
Ａndolastは、
ａ）培養した一次感覚ニューロンにおけるＥＦＳ−誘発Ｃａ２＋動員；
ｂ）ラットの背面脊髄のスライス，一次感覚ニューロンの末端の富化（enriched）組織からの感覚神経ペプチド放出；
ｃ）モルモット気道からの感覚神経ペプチド放出；
ｄ）単離したモルモット気管支におけるＥＦＳで誘発されるｅＮＡＮＣ収縮
の抑制をひき起こす。
【００４５】
これらの知見は、Ａndolastが一次感覚ニューロンの末梢および中枢末端の興奮に対し抑制作用を発揮することを示す。Ａndolastの抑制効果は、カプサイシンに反応し、神経ペプチドを放出する多形態の侵害受容器の母集団の方へ向けられる。これらのニューロンは、保護反射および前炎症性反射の開始に必然的に伴ない、神経性炎症性反応を仲介する。本研究で得た知見によれば、臨床実験設定におけるＡndolastの抗炎症特性の少なくとも一部は、一次ニューロン興奮を抑制するその能力に帰すべきことが示唆される。
【００４６】
２つの観測は、感覚ニューロンに対するＡndolastの抑制作用が特異的であることを示す。Ａndolastは、使用する最大濃度（１０μＭ）では、ＤＲＧニューロンの培養において、イオノマイシンにより誘発される［Ｃａ２＋]ｉの増加に影響を及ぼさない。より重要な点は、Ａndolastは単離したモルモット気管支において、ＳＰによって生じる収縮性反応に関していずれの抑制効果も生じさせない。この観測から、Ａndolastがタキキニンレセプタに作用せず、かつ平滑筋細胞へのＣａ２＋流入に影響を及ぼさないが、最も考えられるのは、感覚神経末端に対する作用の前連結部位（pre−junctional site）で作用することが示される。
【００４７】
これらＡndolastの“抗炎症性”活性の全ては、カリブドトキシンによって逆転される。カリブドトキシンは、Ｋcaのインヒビターである。神経性炎症に関するＡndolastの保護効果（すなわち、ラットＤＲＧにおける［Ｃａ２＋]ｉ変化；ラットの背面脊髄におけるＣＧＲＰ放出；および単離したモルモット気管支輪におけるｅＮＡＮＣ）を完全に拮抗するカリブドトキシンの能力は、Ａndolastの作用の分子機構が、神経性炎症に必要とされる特定のＫcaチャネルの活性化にリンクするという仮説を支持する。
本発明で用いる化合物は、ＷＯ９０／０９９８９に記載の方法に従って製造される。
【００４８】
本発明はその技術的範囲内で、式（Ｉ）の化合物、特に式（Ｉａ）の化合物の医薬的に許容しうる塩を包含する。式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物の医薬製剤（薬剤）で利用される代表的な塩としては、ナトリウム、リチウムまたはカリウムなどのアルカリ金属塩；マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩等が挙げられる。本発明で用いる化合物の好ましい薬剤は、ＵＳ特許Ｎo．５９７６５７６でクレーム化されているものである。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ラットのＤＲＧニューロンにおいてＥＦＳまたはカプサイシン誘発の［Ｃａ２＋］ｉ動員に対するＡndolastの抑制効果を示す。
【図２】Ａはラットの背面脊髄において、高Ｋ＋誘発のＣＧＲＰ−ＬＩ流出に対するＡndolastの抑制効果を示し、およびＢはモルモットの気道において、高Ｋ＋誘発のＣＧＲＰ−ＬＩ流出に対するＡndolastの抑制効果を示す。
【図３】Ａはモルモットの気管支輪において、電界刺激誘発の収縮に関するＡndolastの効果を示し、およびＢはモルモットの気管支輪において、Ｐ物質誘発の収縮に関するＡndolastの効果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体の、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置用薬剤の製造のための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＯＰＤは、重大で増大する世界的な健康問題であり、２０２０年までには世界で廃疾の最も一般的な原因の中で５番目の原因となることが予測され、そのうえ、入院するますます一般的な原因でもある。この病気を処置する有効な治療剤の不足は、この病気と満足に取り組むことができる適切な薬理学的作用物質を認定するために、科学的地域社会内に多くの努力を促した。
【０００３】
最新の情報によれば（Ｎational Ｉnstitute of Ｈealth，Ｎational Ｈeart，
Ｌung and Ｂlood Ｉnstitute：ＧＯＬＤ，Ｇlobal Ｉnitiative for Ｃhronic Ｏbstructive Ｌung Ｄisease：Ｇlobal Ｓtrategy for Ｄiagnosis，Ｍanagement and Ｐrevention of Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease；改訂２００３年）、ＣＯＰＤは、十分には逆転しない空気流の制限が特徴の疾患状態である。空気流の制限は通常、進行性でありかつ最も多くは喫煙に関係するが、有害な粒子またはガスに対する肺の異常な炎症性反応が付随する。ＣＯＰＤの症状、機能不全および合併症は全て、この根元的な炎症および結果として生ずる病状に基づき説明することができる。
【０００４】
ＣＯＰＤの慢性的な空気流制限の特徴は、小さな気道疾患（閉塞性細気管支炎）および実質破壊（気腫）の混合によって起こり、これらの相対的な関与は、人によって変化する。慢性炎症は、小気道を再造形したり、狭くする。肺実質の破壊は、これも炎症プロセスによるが、小気道への肺胞付着のロスを招き、かつ肺の弾力ある反動を縮小し、次いでこれらの変化は、呼気作用中に開いたままでいる気道の能力を減少させる。語句“気腫”および“慢性気管支炎”とは、臨床上頻繁に用いられ、かつＣＯＰＤの定義に含まれる。
【０００５】
肺（肺胞）の気腫、またはガス交換表面の破壊は、ＣＯＰＤを持った患者に存在する幾つかの構造異常の１つを示す。慢性気管支炎、またはそれぞれ２年続いた中で少なくとも３ヶ月にわたる咳および痰生成の出現は、臨床上および免疫上実用的な用語としてとどまる。しかしながら、それはＣＯＰＤ患者における罹病率や死亡率に関して空気流制限の重大な衝撃を反映することはない。このため用語ＣＯＰＤは、この病気全体を正しく規定する。
【０００６】
上記予想の如く、ＣＯＰＤは気道、実質および肺血管系の中の慢性炎症によって示される。炎症の強度並びに細胞および分子特性は、該病気の進行に準じて変化する。時間の経過に伴ない、炎症は肺を損傷し、かつＣＯＰＤの病的変化特性に導く（Ｓutherland Ｅ.Ｒ.ら，Ｍanagement of Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease，Ｎ．Ｅngl．Ｊ．Ｍed．２００４，３５０：２６８９−９７；Ｈogg Ｊ．Ｃ．ら，Ｔhe nature
of small−airway obstruction in Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease，Ｎ．Ｅngl．Ｊ．Ｍed．２００４，３５０：２６４５−５３）。
【０００７】
実際に、ＣＯＰＤは肺の種々の部分における、好中球、マクロファージ、およびＴリンパ球（特にＣＤ８＋）の増加によって特徴づけられる。また幾人かの患者において、特に病状再燃中に好酸球の増加もありうる。これらの増加は、炎症性細胞の漸増（recruitment）、生存および／または活性化の増大によってひき起こされる。多くの研究によって、肺の中の種々タイプの炎症性細胞の数と、ＣＯＰＤの厳しさとに相関関係が明らかにされている。
【０００８】
症状を予防およびコントロールし、病状再燃の頻度や厳しさを縮小し、健康状態を改善し、および運動耐性を改善するのに、薬理学的療法が用いられている。このため、ＣＯＰＤの処置は重々しく、抗炎症性および気管支拡張性薬物に依存している。
現存のＣＯＰＤ用の薬物療法にあって、この病気の顕著な特徴である、肺機能の長期減退を緩和することが認められているものはない。
【０００９】
我々グループの以前に出願した国際特許出願ＷＯ９０／０９９８９に、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１はシアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、メトキシまたはテトラゾール−５−イル基；
Ｒ２は水素、ヒドロキシまたはメトキシ；
Ｒ３はテトラゾール−５−イル基または水素；
Ｒ４およびＲ５は、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；および
Ｒ６は水素またはメチルである］
で示されるＮ−フェニルベンズアミド誘導体が開示されている。
【００１０】
これらの化合物はＷＯ９０／０９９８９において、胃分泌をコントロールし、かつ胃腸粘膜の保護剤としてクレーム化されている。
最終的に、式（Ｉ）の化合物は、アレルゲン、たとえば気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎および結膜炎に対する過敏症に帰すことができる種々病状の薬理学的処置のための適切な作用物質として述べられているにすぎない。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物の中で、下記式（Ｉa）の誘導体，［Ｎ−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル−４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンズアミド］（アンドラスト（Ａndolast、以下同様），ＣＲ２０３９）（ここで、Ｒ２，Ｒ４，Ｒ５およびＲ６は共に水素、およびＲ１およびＲ３は共にテトラゾール−５−イル基である）は、特にぜん息の処置の見込みがある薬理学的性質を持つことが認められた（Ｒevel Ｌ．ら，ＣＲ２０３９，a new bis−（１Ｈ−tetrazolyl−５−ｙｌ）phenylbenzamide derivative with potential for the topical treatment of asthma．Ｅur．Ｊ．Ｐharmacol．１９９２，２２９：４５−５３）。かかるぜん息処置における化合物（Ｉa）の使用のための適当な医薬配合物は、ＵＳ特許Ｎo．５９７６５７６に記載されている。
式（Ｉa）の化合物（Ａndolast，ＣＲ２０３９）：
【化２】
【００１２】
ぜん息は、根元的な気道炎症を特徴とする気道の他の重大な慢性閉塞性疾患である。
ぜん息とＣＯＰＤは、その共通の重大な症状を有するが、これらの症状は概して、ＣＯＰＤよりもぜん息においての方が変わりやすい。加えて、ぜん息における空気流制限は、自発的にあるいは処置によって、非常にたびたび完全に逆転しうるが、一方、ＣＯＰＤにおいては、空気流制限が完全に逆転することは決してなく、通常は、有害な作用物質にさらすのを続けると進行する。ぜん息においては、気道過反応（ＡＨＲ）、すなわち、刺激薬に対する異常な気管支収縮性反応を示す多くの証拠もある。
【００１３】
また根元的な慢性気道炎症も、非常に異なり、すなわち、ぜん息のそれは主に好酸性で、かつ特にＴｈ２副次集団の、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を含む前炎症性（
proinflammatory）サイトカインのファミリーを放出する、ＣＤ４＋Ｔリンパ球によって駆動される。逆に、ＣＯＰＤの慢性炎症は好中球性で、かつ増加した数のマクロファージおよびＣＤ８＋Ｔリンパ球の存在によって特徴づけられる。
結局、ぜん息とＣＯＰＤの処置に対する反応は、劇的に異なる。両病状における主要な慢性炎症性成分（component）であるにも拘らず、コルチコステロイドは、ＣＯＰＤよりもぜん息の方が有意的に有効であり、ＣＯＰＤはβ２アドレナリン作用性アゴニストや抗コリン作用薬などの気管支拡張薬に対する感受性が大きい。
【００１４】
ＣＯＰＤにおける炎症縮小のコルチコステロイドの限界値は、新規タイプの非ステロイド性抗炎症性治療薬が必要となるかもしれないことを示唆する。ＣＯＰＤにおける抗炎症性治療薬への新しい幾つかのアプローチがなされ、たとえば該治療薬として、ホスホジエステラーゼ・インヒビター、転写因子ＮＦ−ｋＢインヒビター、癒着（adhesion）分子ブロッカー、細胞間質メタロプロテイナーゼ・インヒビター、およびカリウム（Ｋ＋）チャネル・インヒビターが含まれる。最後の治療薬は、以下に記載されるように、ＣＯＰＤにおいて有益となる幾つかの特徴を有する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物、特に式（Ｉa）の化合物の薬理学的活性は、主にこの種化合物の抗アレルギー特性に基づくものと考えられており、かかる化合物はヒスタミン放出をブロックすることが証明されており（Ｍakovec Ｆ．ら，Ａntiallergic and cytoprotective activity of new Ｎ−phenylbenzamido acid derivatives．Ｊ．Ｍed．Ｃhem．１９９２，３５：３６３３−４０）、このため、アレルギー性鼻炎およびぜん息処置の臨床指標であることがわかる。
【００１６】
目下の予期しない薬理学的な知見によれば、上述の式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｉa），Ａndolastは、以前に確認されていなかったメカニズムを介して作用し、気道炎症反応の種々の成分を除去する（relieve）。
実際に、Ａndolastは、アトピー性被検者の抗体−仲介および細胞−仲介炎症性反応を共に減少させる。
【００１７】
抗体−仲介炎症性反応に関して、Ａndolastは、アレルギー性ドナーからのヒトＢリンパ球によって、ＩＬ−４依存性ＩgＥ合成に対し強力な抑制効果を示した。この効果は、アレルゲン−誘発肥満細胞感作の減少に導き、その結果として、アトピー性気管支ぜん息における気道炎症およびＡＨＲに反応しうる、ヒスタミンを含め、ＩgＥ−依存性メディエイタ放出の抑制に導く。
【００１８】
細胞−仲介プロセスに関して、軽〜中位のぜん息患者からのデータは、Ａndolastによる標準処置過程が、好酸球漸増薬（recruiter）サイトカイン，ＩＬ−５のＴリンパ球（Ｔｈ２）生成に対し抑制効果を誘発することができ、その結果、痰における好酸球の割合が減少することを示した。これらの細胞−仲介プロセスは、アトピー性および非アトピー性被検者の両方に有効であることから、この効果は、両種の被検者において気道炎症およびＡＨＲの減少に寄与することがある。
【発明の開示】
【００１９】
本発明によれば、上述の式（Ｉ）の化合物は意外にも、カルシウム（Ｃa２＋）−依存性Ｋ＋チャネルにおいて優れた活性を持つことがわかり、このため、以下に詳述の通り、特にＣＯＰＤの処置のための予期しえない適切な薬理学的作用物質として、これらの化合物を強調した。
【００２０】
すなわち、本発明の１つの側面は、上記式（Ｉ）の化合物の、ＣＯＰＤの処置用薬剤の製造のための使用である。
本発明での使用に好ましい化合物は、Ｒ１がテトラゾール−５−イル基である式（Ｉ）の化合物である。特に好ましい化合物は、Ｒ２，Ｒ４，Ｒ５およびＲ６が共に水素、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基である化合物（Ｉa）である。
【００２１】
上記のＫ＋チャネル開口特性については、発明の詳細な説明で報告する実験で示す。これらの実験で、Ａndolastは、迷走神経一次感覚ニューロンの活性化を抑制して（電気刺激，ＥＦＳの脱分極で刺激される細胞内Ｃa２＋動員の抑制によって測定）、タキキニンおよびカルシトニン遺伝子−関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の神経放出によって誘導される、気道におけるいわゆる神経性炎症を抑制し、その結果、気管支収縮を抑制することができた。これらの効果は、選択的高コンダクタンスＣa２＋−活性化Ｋ＋チャネル・インヒビター，カリブドトキシン（charybdotoxin）によって、完全に破壊され、これによって、これらの薬理学的効果がこれらＫ＋チャネルの開口により仲介されることが証明される。
【００２２】
イオンチャネルは、膜内外たん白であって、細胞膜を横切る無機イオンの輸送を触媒する。Ｋ＋チャネルは、イオンチャネルの中で最も大きくかつ最も多様なグループである。Ｋ＋チャネルの活性は、広範にわたる種々の細胞型における休眠膜電位および再分極／過分極電流の発生に、有意的に寄与する。気道平滑筋および神経は、このレベルでの収縮活性および神経反射の調節に必要なＫ＋チャネルを発現する。少なくとも３タイプのかかるチャネル、すなわち、Ｃa２＋−活性化Ｋ＋チャネル、遅延−整流器電圧−依存性Ｋ＋チャネル、およびＡＴＰ−感受性Ｋ＋チャネルが、気道に存在する。
【００２３】
Ｃa２＋−活性化Ｋ＋（Ｋca）チャネルは、ほとんど他のＫ＋チャネルとは、その活性化が二元コントロール下にある点で異なるが、それは、細胞内のＣa２＋濃度増加または膜脱分極のいずれかで活性化されるからである。
Ｋcaチャネルはさらに、それらの単一チャネル・コンダクタンスの生物物理学的特徴に基づき、３つの主なグループ、すなわち、小コンダクタンス（ＳＫca）、中間コンダクタンス（ＩＫca）、および大（高）コンダクタンス（ＢＫca）に下位分類される。これらの３サブグループの中で、ＢＫcaが最も多く研究されているが、最近ではＳＫcaやＩＫcaの薬理学的特性に取り組む研究が幾つかある（Ｊensen Ｂ．Ｓ．ら，ＷＯ００／３３８３４，２０００年６月１５日；Ｕse of isatin derivatives as ion channel activating agents）。
【００２４】
気道平滑筋（ＡＳＭ）細胞において、ＢＫcaチャネルは負のフィードバック機構を活性化することにより、細胞膜の電気安定性を回復させる外部Ｋ＋移動によって生じる過分極の結果として、刺激薬および／またはＣa２＋動員剤を脱分極する作用が弱まったりあるいは終了する。
【００２５】
上記予想の如く、多くのインビトロおよびインビボ研究が動物やヒトの両方で行なわれており、これらの研究により、Ｋ＋チャネルオープナーは、ＡＳＭ細胞の過分極、気管支拡張、気道過反応（ＡＨＲ）の抑制、および神経反射の抑制を誘発しうることが示される。
【００２６】
この最新のポイントに関して、気道神経と炎症間の密な相互作用があることに注目することが重要である。多くの炎症性メディエイタは、神経末端へのレセプタの活性化を介して、気道中のコリン作用性神経および感覚神経を調整しうる（Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，Ｍodulation of neurotransmission in airways．Ｐhysiol．Ｒev．１９９２，７２：６９９−７２９）。感覚神経は主に、神経ペプチド、たとえばタキキニン（Ｐ，ＳＰ物質および神経キニンＡ，ＮＫＡなど）およびＣＧＲＰを放出する。
【００２７】
それらが中枢神経末端（終末）から放出されると、痛み伝達や保護反射（たとえば咳）の活性化が付随する。しかしながら、感覚神経もまた、機械的および化学的刺激（たとえばタバコの煙）で活性化されると、気道の炎症を増幅することにより、逆行性インパルスや、末梢神経末端から同じ神経ペプチドを放出する局所軸索反射を発生させたり、興奮性の非アドレナリン作用性非コリン作用性（ｅＮＡＮＣ）収縮や神経性炎症を招いたりする。
【００２８】
この神経性炎症は、多くの機関紙に記載され、かつ幾つかの種の上および下気道で詳細に報道されている（Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，ＮＡＮＣ nerves and neuropeptides．Ｉn：Ｂarnes Ｐ．Ｊ．，Ｒogers Ｉ．Ｗ．，Ｔhomson Ｎ．Ｃ．（Ｅds．）１９９８，Ａcademic Ｐress，Ｌondon，４２３−５８；Ｍaggi Ｃ．Ａ．ら，Ｎeuropeptides as regulators of airway function：vasoactive intestinal peptide and the tachykinins．Ｐhysiol．Ｒev．１９９５，７５：２７７−３２２）。実際に、平滑筋収縮、すなわち、直接の気管支収縮を除いて、これらの神経ペプチドは、粘膜下腺分泌の刺激、血管透過性の増加、肥満細胞の刺激、ＢおよびＴリンパ球の刺激、マクロファージの刺激、好酸球および好中球の化学誘引、および好中球の血管癒着を含む、一連の炎症性反応を誘発する。
【００２９】
感覚神経が炎症性反応を増幅し、広げうるという考えは、気道疾患、たとえばぜん息やＣＯＰＤにおける炎症に関与しうるので、かなりの注意をひく（Ｊoos Ｇ．Ｆ．ら，Ｔhe role of neural inflammation in asthma and Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease．Ａnn．Ｎ．Ｙ．Ａcad．Ｓci．２００３，９９２：２１８−３０）。またタキキニンは、コリン作用性神経末端でアセチルコリン放出を促進したり、神経節伝達を高めることにより、コリン作用性神経伝達も高める（Ｗatson Ｎ．ら，Ｅndogenous tachykinins facilitate transmission through parasympathetic ganglia in guinea pig trachea．Ｂr．Ｊ．Ｐharmacol．１９９３，１０９：７５１−５９）。
【００３０】
ＣＯＰＤの病因論において、気道神経の役割に関し、他のことはともかくも同様に重要なのは、ＣＯＰＤで狭くなる気道の主要な逆転成分が、コリン作用性の気管支運動の増進した正常状態（increased tone）であるが、さもなければ、ぜん息において気管支閉塞に関与する多くのファクターの１つを構成するにすぎないという事実である。このため、ＣＯＰＤ患者において、抗コリン作用薬がβ２アドレナリン作用性アゴニストよりも極めて有効である。
【００３１】
ＣＯＰＤ患者は、迷走神経において神経節伝達を害し、かつ神経末端からのアセチルコリン放出を縮小しうる、Ｋ＋チャネルオープナーの薬理学的特性から利益を得ることができることが示唆される。これらの薬物のコリン作用性神経伝達に対する調整効果は神経過分極に基づくが、この効果は、迷走神経刺激によって誘発される気管支収縮に対し、モルモットで発揮されるその大きな抑制作用を、アセチルコリンの静脈内注入によって顕現するそれと比較することによって確認される。
【００３２】
幾つかの炎症性メディエイタの放出および神経伝達におけるこれらチャネルの必要（involvement）と共に、気道平滑筋におけるＢＫca活性化作用物質の弛緩薬特性は、Ｋcaチャネルオープナーとして作用する薬理学的作用物質の将来有望な標的としてＣＯＰＤを示唆する（Ｇ．Ｐelaiaら，Ｐotential role of potassium channel openers in the treatment of asthma and Ｃhronic Ｏbstructive Ｐulmonary Ｄisease．Ｌife Ｓci．２００２，７０：９７７−９０）。
【００３３】
指摘すべき点は、他のＫ＋チャネルオープナー、たとえばクロマカリン（Ｃromakalim）が、動物モデルで実験的に誘発される気管支収縮を有意的に抑制することが本当に証明されていることであり、そして、臨床試験でクロマカリンが慢性気道炎症に有効であることを立証した。しかしながら、この薬物並びにその同類のレマカリン（Ｌemakalim）やビマカリン（Ｂimakalim）は、ＢＫcaとは異なるＫ＋チャネルである、別タイプのＫ＋チャネル，ＡＴＰ感受性Ｋ＋チャネル，ＫＡＴＰに作用する。ＫＡＴＰチャネルオープナーは、血管平滑筋の強力な弛緩薬であることが立証されており、従って、その使用は低血圧などの望ましくない副作用によって制限される。
【００３４】
加えて、このチャネルの活性薬は、炎症性メディエイタ放出での抑制特性および気道への炎症性細胞漸増の抑制が欠けており、ＣＯＰＤ処置の基本成分として提案されている。逆に、これらの特性は、ＢＫcaチャネルの活性化を介して神経性炎症に対し有効であるのみならず、抗体−仲介および細胞−仲介炎症性反応をも減少させるＡndolastの場合に証明される。
【００３５】
Ｋ＋チャネルは、気道慢性炎症に必然的に伴なうＴリンパ球、好中球、好塩基球およびマクロファージなどの幾つかの炎症性および免疫性細胞によって発現されるので、これらのチャネルは多分、種々の気道炎症反応の調整に寄与するかもしれないことが提案される。従って、ここで証明されるＫ＋チャネルの開口はこの点でもＡndolastの作用機構を説明することができ、これによって、種々のケモカイン（chemokines）やサイトカインの放出を調整することにより、この総合的で気道特異的な、炎症性細胞漸増（ひょっとしたらＣＯＰＤ炎症の特性を示している好中球やマクロファージを含む）に対する抗炎症性特性および抑制効果が支持されるだろう。
【００３６】
これら全ての証言をひとまとめにすると、本明細書記載の意外な知見に基づき、式（Ｉ）の誘導体、特に式（Ｉａ）の化合物，Ａndolastの、ＣＯＰＤの処置用薬剤の製造のための使用が支持される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
神経性炎症に対するＡndolastの効果およびＫcaチャネル必要の証明：
以下の事項を証明するために、特定の研究を行った。
ａ）Ａndolastは、ラットの後根神経節ニューロンにおいて刺激を脱分極することにより、誘発する細胞内Ｃａ２＋の動員を抑制する。
ｂ）Ａndolastは、一次感覚ニューロンの末梢および中枢神経末端からの神経ペプチド（ＣＧＲＰ）を抑制する。
ｃ）Ａndolastは、単離したモルモットの気管支において、電気刺激（ＥＦＳ）の適用で誘発するアトロピン−耐性ｅＮＡＮＣ収縮を抑制する。この収縮性反応は、一次感覚ニューロンから放出され、かつ平滑筋のタキキニン・レセプタに作用するＳＰ／ＮＫＡによって仲介される。
ｄ）カリブドトキシン（Ｋcaの選択的インヒビター）は、上記のＡndolast活性を逆にする（revert）。
【００３８】
方法
ニューロンの培養実験：
生後１−３日のラットから、後根神経節（ＤＲＧ）を取出し、十分確立した手順に従って単細胞に解離する。細胞をコーティングしたカバーガラスにて平板培養し、これにＦura−２−ＡＭ−エステルを加え、相対細胞内カルシウム（［Ｃａ２＋]ｉ）変化を検出する。
Ｃａ２＋蛍光中、細胞を電気刺激（１０Ｈｚ、１ｍｓ、４０ｍＡ／ｃｍ２、１０秒間）で２回興奮させ、刺激と刺激の休止期間を２０分とする。これらの実験は、１００ｎＭカリブドトキシンの存在または非存在下で行なう。
【００３９】
モルモットの気道およびラツトの背面脊髄のスライス：
モルモットの気管および気管支またはラットの背面脊髄のスライスを用意し、これらを灌流室に移して灌流する。平衡期間の後、興奮性刺激薬（ＫＣｌ ８０ｍＭ）のデリバリーの前、途中および後に、サンプルを収集する。Ａndolastの効果を、そのビヒクルの効果と比較する。ＣＧＲＰ様免疫反応性（ＣＧＲＰ−ＬＩ）を、酵素イムノアッセイで測定する。
【００４０】
ラットの背面脊髄において、Ａndolastを用いる実験も、１００ｎＭカリブドトキシンの存在下で行なう。
単離したモルモット気管支：
モルモット気管支輪を、器官浴（organ baths）に取付ける。平衡期間の後、アトロピン（１μＭ）の存在下、ＥＦＳ（５Ｈｚ、２０秒、４０Ｖで０．５ｍｓパルス幅）に対するｅＮＡＮＣ収縮性反応を調べる。１００ｎＭカリブドトキシンの存在または非存在下の平行実験で、ｅＮＡＮＣに関するＡndolastまたはそのビヒクルの効果を調べる。またＳＰの直接の気管支収縮活性に影響を及ぼすＡndolastの能力も調べる。
【００４１】
結果
ニューロンの培養実験：
ＥＦＳは、［Ｃａ２＋]ｉ動員の増加を誘発する（イオノマイシン（ionomycin）に対する反応の５９±８％）。ＥＦＳに反応する全ての細胞は、０．１μＭカプサイシンに対しても［Ｃａ２＋]ｉの増加で反応し、これによって、これらが一次感覚ニューロン（多形態の（polymodal）侵害受容器）であることが示される。イオノマイシンに対する反応の［Ｃａ２＋]ｉの動員は、Ａndolast（１０μＭ）またはそのビヒクル（Ｖeh）による前処置後と似ている。Ａndolastによる前処置は、Ａndolastビヒクルの効果と対照すれば、濃度に依存して縮小するＥＦＳに対する反応を減少させる。カプサイシンに対する反応は、Ａndolast（１０μＭ）による前処置では影響されない。Ａndolastの抑制効果は、１００ｎＭカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）によって完全に逆転する。データを図１に示す。
図１によれば、Ａndolastは、新生ラットの培養ＤＲＧニューロンにおいて、ＥＦＳ（４０ｍＡ／ｃｍ２、１ｍ秒パルス持続、１０秒間）によって誘発される［Ｃａ２＋]ｉ動員を抑制するが、カプサイシン（０．１μＭ）で誘発される［Ｃａ２＋]ｉ動員は抑制しない。ＥＦＳに関するＡndolastの効果は、０．１μＭカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）によって逆になる（reverted）。
【００４２】
ラットの背面脊髄およびモルモットの気道のスライス：
ラットの背面脊髄のスライスおよびモルモットの気道のスライスの両方において、Ａndolast（０．１〜１μＭ）は、ＣＧＲＰ−ＬＩの流出においていずれの有意の増加も起こさない。
ラットの背面脊髄において、Ａndolastは、高Ｋ＋培地によって誘発されるＣＧＲＰ−ＬＩの流出の濃度依存の抑制を起こす。Ａndolast（１μＭ）によって、最大抑制（ビヒクルの４８％）が得られる。この効果は、１００ｎＭカリブドトキシンによって完全に排除される（図２Ａ参照）。
またモルモットの気道のスライスにおいても、Ａndolast（１μＭ）は、高Ｋ＋培地によって誘発されるＣＧＲＰ−ＬＩ流出の著しい抑制（６７％）を起こす（図２Ｂ参照）。
図２は、ラットの背面脊髄のスライト（Ａ）、およびモルモットの気道のスライス（Ｂ）からの高Ｋ＋によってひき起こすＣＧＲＰの流出に関する、Ａndolastおよびカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）の効果を示す。
【００４３】
単離したモルモットの気管支：
ＥＦＳは、モルモット気管支の輪において、アトロピンの存在下で遅延収縮性反応を起こす。Ａndolastによる前処置は、ＥＦＳに対する収縮性反応を用量に依存して減少させる。１０μＭ−Ａndolastの場合に、最大抑制（４５％）が得られる。Ａndolast（１０μＭ）は、ＳＰに対する収縮性反応に影響を及ぼさず、これによって特異性を示す。Ａndolastの効果は、特定ＢＫcaインヒビター，カリブドトキシン（０．１μＭ）の存在下で、完全に排除される（図３Ａ，Ｂ参照）。
図３は、モルモットの単離した気管支輪において、電界刺激（ＥＦＳ、５Ｈｚ、１ｍｓ幅、１０Ｖ）およびＰ物質によって誘発される収縮に関するＡndolastおよびカリブドトキシン（ＣｈＴＸ）の効果を示す。
【００４４】
結論
Ａndolastは、
ａ）培養した一次感覚ニューロンにおけるＥＦＳ−誘発Ｃａ２＋動員；
ｂ）ラットの背面脊髄のスライス，一次感覚ニューロンの末端の富化（enriched）組織からの感覚神経ペプチド放出；
ｃ）モルモット気道からの感覚神経ペプチド放出；
ｄ）単離したモルモット気管支におけるＥＦＳで誘発されるｅＮＡＮＣ収縮
の抑制をひき起こす。
【００４５】
これらの知見は、Ａndolastが一次感覚ニューロンの末梢および中枢末端の興奮に対し抑制作用を発揮することを示す。Ａndolastの抑制効果は、カプサイシンに反応し、神経ペプチドを放出する多形態の侵害受容器の母集団の方へ向けられる。これらのニューロンは、保護反射および前炎症性反射の開始に必然的に伴ない、神経性炎症性反応を仲介する。本研究で得た知見によれば、臨床実験設定におけるＡndolastの抗炎症特性の少なくとも一部は、一次ニューロン興奮を抑制するその能力に帰すべきことが示唆される。
【００４６】
２つの観測は、感覚ニューロンに対するＡndolastの抑制作用が特異的であることを示す。Ａndolastは、使用する最大濃度（１０μＭ）では、ＤＲＧニューロンの培養において、イオノマイシンにより誘発される［Ｃａ２＋]ｉの増加に影響を及ぼさない。より重要な点は、Ａndolastは単離したモルモット気管支において、ＳＰによって生じる収縮性反応に関していずれの抑制効果も生じさせない。この観測から、Ａndolastがタキキニンレセプタに作用せず、かつ平滑筋細胞へのＣａ２＋流入に影響を及ぼさないが、最も考えられるのは、感覚神経末端に対する作用の前連結部位（pre−junctional site）で作用することが示される。
【００４７】
これらＡndolastの“抗炎症性”活性の全ては、カリブドトキシンによって逆転される。カリブドトキシンは、Ｋcaのインヒビターである。神経性炎症に関するＡndolastの保護効果（すなわち、ラットＤＲＧにおける［Ｃａ２＋]ｉ変化；ラットの背面脊髄におけるＣＧＲＰ放出；および単離したモルモット気管支輪におけるｅＮＡＮＣ）を完全に拮抗するカリブドトキシンの能力は、Ａndolastの作用の分子機構が、神経性炎症に必要とされる特定のＫcaチャネルの活性化にリンクするという仮説を支持する。
本発明で用いる化合物は、ＷＯ９０／０９９８９に記載の方法に従って製造される。
【００４８】
本発明はその技術的範囲内で、式（Ｉ）の化合物、特に式（Ｉａ）の化合物の医薬的に許容しうる塩を包含する。式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物の医薬製剤（薬剤）で利用される代表的な塩としては、ナトリウム、リチウムまたはカリウムなどのアルカリ金属塩；マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩等が挙げられる。本発明で用いる化合物の好ましい薬剤は、ＵＳ特許Ｎo．５９７６５７６でクレーム化されているものである。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ラットのＤＲＧニューロンにおいてＥＦＳまたはカプサイシン誘発の［Ｃａ２＋］ｉ動員に対するＡndolastの抑制効果を示す。
【図２】Ａはラットの背面脊髄において、高Ｋ＋誘発のＣＧＲＰ−ＬＩ流出に対するＡndolastの抑制効果を示し、およびＢはモルモットの気道において、高Ｋ＋誘発のＣＧＲＰ−ＬＩ流出に対するＡndolastの抑制効果を示す。
【図３】Ａはモルモットの気管支輪において、電界刺激誘発の収縮に関するＡndolastの効果を示し、およびＢはモルモットの気管支輪において、Ｐ物質誘発の収縮に関するＡndolastの効果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１はシアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、メトキシまたはテトラゾール−５−イル基；
Ｒ２は水素、ヒドロキシまたはメトキシ；
Ｒ３はテトラゾール−５−イル基または水素；
Ｒ４およびＲ５は、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；および
Ｒ６は水素またはメチルである］
で示されるＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項２】
Ｒ１がテトラゾール−５−イル基；Ｒ２が水素、ヒドロキシまたはメトキシ；Ｒ３がテトラゾール−５−イル基または水素；Ｒ４およびＲ５が、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５がそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；およびＲ６が水素またはメチルである請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｎ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体が、式：
【化２】
で示される化合物（Ｉａ）である請求項１に記載の使用。
【請求項４】
治療上有効量の請求項１乃至３のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、ＣＯＰＤの処置用医薬組成物。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、肺気腫の処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、慢性気管支炎の処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項７】
治療上有効量の請求項１または２に記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、肺気腫の処置用医薬組成物。
【請求項８】
治療上有効量の請求項１または２に記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、慢性気管支炎の処置用医薬組成物。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１はシアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、メトキシまたはテトラゾール−５−イル基；
Ｒ２は水素、ヒドロキシまたはメトキシ；
Ｒ３はテトラゾール−５−イル基または水素；
Ｒ４およびＲ５は、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；および
Ｒ６は水素またはメチルである］
で示されるＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項２】
Ｒ１がテトラゾール−５−イル基；Ｒ２が水素、ヒドロキシまたはメトキシ；Ｒ３がテトラゾール−５−イル基または水素；Ｒ４およびＲ５が、Ｒ３がテトラゾール−５−イル基のときは共に水素、またはＲ４およびＲ５がそれぞれ独立して、Ｒ３が水素のときはカルボキシ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびカルバモイルからなる群から選ばれ；およびＲ６が水素またはメチルである請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｎ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体が、式：
【化２】
で示される化合物（Ｉａ）である請求項１に記載の使用。
【請求項４】
治療上有効量の請求項１乃至３のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、ＣＯＰＤの処置用医薬組成物。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、肺気腫の処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩の、慢性気管支炎の処置用薬剤の製造のための使用。
【請求項７】
治療上有効量の請求項１または２に記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、肺気腫の処置用医薬組成物。
【請求項８】
治療上有効量の請求項１または２に記載のＮ−フェニルベンズアミドの医薬的に活性な誘導体またはその医薬的に許容しうる塩を含有する、慢性気管支炎の処置用医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００６−５６８９０（Ｐ２００６−５６８９０Ａ）
【公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２３６６４４（Ｐ２００５−２３６６４４）
【出願日】平成１７年８月１７日（２００５．８．１７）
【出願人】（５９８１０５８２４）ロッタファルム・ソシエタ・ペル・アチオニ (18)
【氏名又は名称原語表記】ＲＯＴＴＡＰＨＡＲＭ Ｓ．ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月１７日（２００５．８．１７）
【出願人】（５９８１０５８２４）ロッタファルム・ソシエタ・ペル・アチオニ (18)
【氏名又は名称原語表記】ＲＯＴＴＡＰＨＡＲＭ Ｓ．ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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