ＳＮＳ−５９５、及びその使用方法
【課題】ＳＮＳ−５９５、及びガン治療におけるＳＮＳ−５９５の治療可能性を最大限にする方法の提供。
【解決手段】治療すべきガンがＳＮＳ−５９５治療に応答する可能性が高いかどうか、並びに該治療を進めた場合に、該ガンがＳＮＳ−５９５治療に応答する可能性が高いかどうかを決定する方法、および、該方法は、治療すべきガンの細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパク質の始めの量を決定すること、及び始めの量と２回目の量とを比較することを含む治療方法。
【解決手段】治療すべきガンがＳＮＳ−５９５治療に応答する可能性が高いかどうか、並びに該治療を進めた場合に、該ガンがＳＮＳ−５９５治療に応答する可能性が高いかどうかを決定する方法、および、該方法は、治療すべきガンの細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパク質の始めの量を決定すること、及び始めの量と２回目の量とを比較することを含む治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＳＮＳ−５９５は、新規のナフチリジン細胞毒性剤であり、以前はＡＧ−７３５２とし
て知られていた（Tsuzukiらの論文「Tetrahedron-Asymmetry」 12: 1793-1799 (2001)、
及び米国特許第5,817,669号）。ＳＮＳ−５９５の化学名は、（＋）−１，４−ジヒドロ
−７[（３Ｓ，４Ｓ）−３−メトキシ−４−（メチルアミノ）−１−ピロリジニル]−４−
オキソ−１−（２−チアゾイル）１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸であり、該構造
は以下に示される：
【０００２】
【化１】
本発明は、ＳＮＳ−５９５、及びガン治療におけるＳＮＳ−５９５の治療可能性を最大
限にする方法に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
（詳細な説明）
増殖細胞は、細胞周期の４つの段階―Ｇ１、Ｓ、Ｇ２、及びＭ―を経る。これらの段階
は、まず細胞分裂を観察することによって同定され、細胞は、細胞周期の合成、又はＳ期
として知られるようになったＤＮＡ合成、及び細胞周期の有糸、又はＭ期、又はＳ期とし
て知られる有糸分裂を介して発達した。ＤＮＡ合成の完了から有糸分裂までの間、及び有
糸分裂から次のＤＮＡ合成の周期までの間に観察された間期は、それぞれＧ１期、及びＧ
２期として知られるようになった。適切な条件下において増殖能力を保持する非増殖型の
細胞は、静止期、すなわちG0期にあり、及び細胞周期から逸脱しているものとして典型的
に特徴付けられる。
【０００４】
細胞周期は複数のチェックポイントを有し、これらの指定された地点でその細胞を停止
することによって、不適切な環境下で細胞周期を介して細胞が発達しようとするのを防ぐ
。ある重要なチェックポイントは、細胞がS期に入る前に発生し、例えば、環境が（例え
ば、十分な栄養）細胞分裂に適しているかどうかテストする。G１期にチェックポイント
で落第した細胞は、それゆえ、G1停止と呼ばれ、S期に入ることを妨げられる。別のチェ
ックポイントは、細胞がM期に入る前に発生し、例えば、合成されたDNAの完全性をテスト
する。G2期においてチェックポイントで落第し、それゆえM期に入ることが妨げられた細
胞は、G2停止にあると言われる。別のチェックポイントは細胞質分裂が起こる直前のM期
に発生し、例えば、染色体が適切に並んでいるかテストする。M期においてチェックポイ
ントで落第し、それゆえ分裂が妨げられる細胞は、M停止にあると言われる。
【０００５】
実際のところ、細胞周期停止はしばしばDNA内容物によって特徴付けられ、チェックポ
イントの失敗によるものではない。結果として、最も頻繁に報告されている細胞停止は、
２N DNA内容物に基づくG1停止と、４N DNA内容物に基づいたG2／M停止である。
ＳＮＳ−５９５は、細胞周期阻害剤であり、Ｇ２期において細胞を停止させる。始めは
、ＳＮＳ−５９５の活性は、トポイソメラーゼIIの阻害によるものと考えられていた。Ｓ
ＮＳ−５９５は、約５μＭのＩＣ５０を有するトポイソメラーゼIIの触媒阻害剤であり（
開裂可能な複合体の形成を伴わずに、スーパーコイル状DNAの分離、又は弛緩を防ぐ）、
量依存的な相互関係を、そのトポイソメラーゼII活性と、その細胞への効果との間に確立
することができなかった。例えば、様々な細胞内のEC５０は、２００ｎM〜３００ｎMの範
囲であり、効力増大において、トポイソメラーゼIIの生化学的阻害かとは、少なくとも約
１０倍異なる。さらに、細胞におけるトポイソメラーゼIIのレベルが２−デオキシグルコ
ース（該酵素の分解を導く）の使用によって調節された場合、２−デオキシグルコース処
理細胞と未処理細胞との間で、本質的に活性に何の違いも見られなかった。
【０００６】
G2停止の誘導もまた、ＳＮＳ−５９５の細胞毒性の重要な原因ではないようである。例
えば、Ｇ２停止が（ＡＴＭとＡＴＲの両方を阻害するカフェインで処理することによって
）無効にされた細胞内において、ＳＮＳ−５９５処理後、未処理の群の細胞（カフェイン
処理が行われず、Ｇ２停止が見られる）と比較した場合、ＥＣ５０値に本質的には何の違
いも観察されなかった。図１に示されているように、ＡＴＭ、ＡＴＲ、及びＤＮＡ−ＰＫ
は、３つの中心的なＤＮＡセンサー／エフェクターであり、個々の細胞において検出され
たＤＮＡ損傷のレベルにより、DNA修復、G2停止、又はアポトーシスを含む、いくつかの
うちのある結果に該細胞を導く。
最初の特徴づけとは反対に、ＳＮＳ−５９５は、やがてアポトーシス細胞死を導くＤＮ
Ａ−ＰＫ経路の活性化を仲介する。とりわけ、これらの出来事がＳ期に特有であるという
ことは、細胞周期のＳ期の間のみに起こることを特異的に意味している。
【０００７】
ＳＮＳ−５９５を用いた処理は、Ｓ期に形成される二重鎖ＤＮＡ切断の増加をもたらす
。この損傷は、細胞のＤＮＡ合成能を阻害し、Ｓ期において細胞が費やす時間を長引かせ
る。
図２が例示する通り、ＳＮＳ−５９５の投与量に応じて、二重鎖切断の形成が、ＤＮＡ
−ＰＫの媒介する修復、及び以下を含むがそれらに限定されないアポトーシス細胞の働き
：i)ＤＮＡ−ＰＫ発現；ii）Ｈ２ＡＸリン酸化；iii）ｃ−Ａｂｌリン酸化；iv）ｐ５３
リン酸化；v）ｐ７３リン酸化；vi）ｐ２１発現；vii）カスパーゼ−９活性化；及びviii
）カスパーゼ−３活性化、を活性化する。非相同的末端結合（ＮＨＥＪ）を介して二重鎖
切断を修復することができないほど、ＤＮＡ損傷が十分に深刻な場合、該細胞は速やかに
アポトーシスに入る。いくつかの細胞は、Ｇ２期に達することができるが、Ｍ期に入るに
は該細胞はあまりに損傷がひどいため、その次に停止され（ｃｄｃ２／サイクリンＢによ
って仲介され）、やがてまたアポトーシスとなる。特に、ＳＮＳ−５９５はＳ期選択的な
ので、ＳＮＳ−５９５の量は、増殖細胞に細胞毒性であり（それゆえ、Ｓ期を含む細胞周
期を介して進行する）、非増殖細胞にとって非致死的である。
【０００８】
この機構相応に、ＳＮＳ−５９５に対する誘導抵抗性を有する細胞は、ＤＮＡ−ＰＫ経
路において代替をも有している。例えば、ＨＣＴ−１１６細胞に比べて、約１０倍ＳＮＳ
−５９５感受性が低いＨＣＴ−１１６の安定的変異株は、例えば、活性化されたＤＮＡ−
ＰＫ複合体の不可欠な構成要素タンパクである、Ｋｕ７０のレベルが増加していることを
示す。反対に、ＤＮＡ−ＰＫのレベルの低下、又はその活性の減少は（例えば、阻害剤の
存在下において）、ＳＮＳ−５９５に対する感受性の増加に関連する。
【０００９】
ＳＮＳ−５９５のＤＮＡ−ＰＫ媒介性細胞毒性は、一般的ではない。ＤＮＡ合成を妨げ
る既知の化合物は、通常ＡＴＲを介して、又はＡＴＭとＤＮＡ−ＰＫの両方を介して作動
する。ＡＴＲ媒介性細胞毒性化合物の実例は、代謝拮抗剤、及びＤＮＡポリメラーゼ阻害
剤を含む。ＡＴＲ媒介性、及びＤＮＡ−ＰＫ媒介性細胞毒性化合物によって媒介されたＡ
ＴＭ、及びＤＮＡ−ＰＫの実例は、トポイソメラーゼII毒と、ブレオマイシンのような抗
腫瘍性抗生物質を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＳＮＳ−５９５に関連し、その作用の機構を使用して、ヒトのガン治療にお
いて、その治療可能性を最大化する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
それゆえ、本発明の一つの態様において、治療すべきガンがＳＮＳ−５９５治療に応答
する可能性が高いかどうか、並びに該治療を進めた場合に、該ガンがＳＮＳ−５９５治療
に応答する可能性が高いかどうかを決定する方法を提供する。ＳＮＳ−５９５を用いた治
療に適したガンの種類は、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、結腸ガン（直腸結腸ガンを含
む）、食道ガン、頸頭部ガン、白血病、肝臓ガン、肺ガン（小細胞、及び非小細胞の両方
）、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、腎臓
ガン、肉腫（骨肉腫を含む）、皮膚ガン（扁平上皮細胞ガンを含む）、胃ガン、精巣ガン
、甲状腺ガン、及び子宮ガンを含むが、それらに限定されない。
該方法は、治療すべきガンの細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパ
ク質の始めの量を決定すること、及び始めの量と２回目の量とを比較することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
ガンがＳＮＳ−５９５処理に応答する可能性が高いかどうかを決定するとき、始めの量
とは、治療すべき細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパク質の量（治
療前の量）である。２回目の量とは、対照細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパ
ク質の量（対照量）である。適切な対照細胞は、治療されたガンとして同じ細胞に由来す
る通常の細胞を含むが、限定されない。例えば、治療すべきガンが卵巣ガンの場合、適切
な対照細胞は非ガン性の卵巣細胞を含む。対照細胞は、治療すべき患者から得るか、又は
治療すべきガンと同じ型の通常組織から得ることができる。あるいは、ＨＣＴ１１６結腸
ガン細胞（ＳＮＳ−５９５に対する耐性を示すために誘導されない）におけるＤＮＡ−Ｐ
Ｋ経路の任意の構成タンパク質の量は、一般的に対照量として使用され得る。
【００１３】
本発明の実施におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の適切な構成タンパク質は、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋ
ｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲＥ１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２
ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５３、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３を含
むが、限定されない。ある実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質は、Ｄ
ＮＡ−ＰＫである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＫｕ７
０である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＫｕ８０である
。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＭＲＥ１１である。別の
実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＮＢＳ１である。別の実施態様
において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＲＡＤ５０である。別の実施態様におい
て、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＸＲＣＣ４である。別の実施態様において、Ｄ
ＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はリガーゼIVである。別の実施態様において、ＤＮＡ−
ＰＫ経路の構成タンパク質はＨ２ＡＸである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路
の構成タンパク質はｃ−Ａｂｌである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成
タンパク質はｐ５３である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質
はｐ７３である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はｐ２１で
ある。さらに別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はカスパーゼ−
９である。さらに別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はカスパー
ゼ−３である。
【００１４】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量は、細胞内に存在するタンパク質レベルの定量
化のように、直接的に算出され得る。ある特定の構成タンパク質の量もまた、それに対応
するＤＮＡ，又はｍＲＮＡレベルを測定することによって、間接的に算出され得る。ある
いは、ある特定の構成タンパク質の量もまた、活性レベルを使用して間接的に測定される
。活性定量は、酵素活性が酵素の量の代わりとして使用されるため、間接的測定となる。
例えば、測定された構成タンパク質がキナーゼである場合、そのキナーゼ量は、そのリン
酸化産物のレベルを決定することによって、間接的に決定され得る（例えば、ＤＮＡ−Ｐ
Ｋレベルの量の決定は、Ｈ２ＡＸリン酸化レベルの量によって行われる）。上記に加えて
、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量は、免疫組織化学を含む、当業者に周知の任意
の方法を使用して測定され得る。
【００１５】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の処理前の量が、対照量よりも少ない、又はほとん
ど同じである場合、該ガンは１０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２のＳＮＳ−５９５の量に
好ましく反応する可能性が高い。体表面積（ＢＳＡ）は、例えばMosteller式を用いて計
算される：
ＢＳＡ（ｍ２）＝[高さ（ｃｍ）×重さ（ｋｇ）／３６００]の平方根
【００１６】
別の実施態様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９５の量は、１０ｍｇ／ｍ２
〜１００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９
５の量は、３０ｍｇ／ｍ２〜７５ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ガン治療に
用いられるＳＮＳ−５９５の量は、４０ｍｇ／ｍ２〜８０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態
様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９５の量は、５０ｍｇ／ｍ２〜９０ｍｇ／
ｍ２である。
【００１７】
ＳＮＳ−５９５の投与量は、ｍｇ／ｍ２以外の単位として表現され得る。例えば、量は
ｍｇ／ｋｇとして表現され得る。当業者は、対象の既知の高さ、もしくは重さのうちのい
ずれか、又はその両方に対して、ｍｇ／ｍ２からｍｇ／ｋｇへの量の変換の仕方を容易に
理解するであろう（例えば、http:///www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htmを参照
されたい）。例えば、６５ｋｇの人に対して１０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２の量は、
ほぼ０．２６ｍｇ／ｋｇ〜３．９５ｍｇ／ｋｇに等しい。
【００１８】
投与量は、同時に、又は２４時間の期間にわたって運ばれる可能性があり、患者の病状
が安定、又は退行するまで、若しくは患者の病状が進行、又は許容できない毒性を呈する
まで繰り返される場合がある。例えば、固形ガンにおける疾病の安定とは、測定可能な病
巣の垂直の直径が、前回の測定から２５％以上増加していないことを一般的に意味する。
例えば、「固形ガンの反応評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）のガイドライン」、『Journal of t
he National Cancer Institute』92(3): 205-216 (2000)を参照されたい。疾病の安定、
又はその欠如は、患者の症状の評価、健康診断、Ｘ線、ＣＡＴ、ＰＥＴ、又はＭＲＩスキ
ャンを用いたガン細胞の可視化、及び他の一般に是認されている評価様式のような、当業
者に周知の方法で決定される。
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の前処理量が、対照量よりも多ければ、単一剤とし
てのＳＮＳ−５９５は十分ではあり得ないだろうし、ＳＮＳ−５９５を含んだ組み合わせ
治療を検討すべきである。
【００１９】
ガンがＳＮＳ−５９５治療に反応しているかどうかを決定するとき、始めの量とは、Ｓ
ＮＳ−５９５を用いて治療したガン細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路中の、少なくとも１種
の構成タンパク質の量（処理後量）である。二番目の量とは、対照細胞におけるＤＮＡ−
ＰＫ経路のある構成タンパク質の量（対照量）である。好ましくは、該対照量は、ＳＮＳ
−５９５を用いた治療を行う前のガンの細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク
質の量（処理前量）である。他の適切な対照細胞は、治療すべきガンと同じ細胞に由来す
る通常の細胞を含むが、それに限定されない。例えば、治療中のガンが卵巣ガンであれば
、適切な対照細胞は非ガン性の卵巣細胞を含む。対照細胞は、治療される患者から得るか
、又は治療中のガンと同じ型の通常組織から得ることができる。あるいは、ＨＣＴ１１６
結腸ガン細胞（ＳＮＳ−５９５への耐性を示すために誘導されない）におけるＤＮＡ−Ｐ
Ｋ経路の任意の構成タンパク質の量は、一般的に対照量として使用され得る。
【００２０】
処理後の量が対照量以上である場合、該ガンは好ましく応答しており、ＳＮＳ−５９５
を用いた処理（単一、又は組み合わせの一部として）を続けるべきである。
本発明の別の態様として、ＳＮＳ−５９５の機構を利用して、ＳＮＳ−５９５の治療可
能性を最大化させる組み合わせを提供する。ある実施態様において、組み合わせは以下の
ａ、及びｂを含んで提供する：
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５；
ｂ）治療的有効量の、ＤＮＡ合成阻害効果のある２番目の薬剤。
【００２１】
加算性、又は相互作用の可能性を最大化するには、異なる作用機構を有する薬剤を選択
する、という一般原則とは対照的に（例えば、R. Page、及びC.Takimotoの『化学療法の
基礎』 、ガンの管理：多くの専門分野にわたるアプローチ(2001), p. 23を参照されたい
）、ＳＮＳ−５９５、及び同じくDNA合成を妨げる２番目の薬剤を含む組み合わせが、加
算的である、又は相互作用をもたらすことがわかった。
【００２２】
本明細書中に用いられているように、薬剤が、直接的、又は間接的に、細胞のＤＮＡ合
成能力、又はＤＮＡ損傷修復能力に影響を与える場合、該薬剤はＤＮＡ合成を妨げる。該
薬剤は直接的にＤＮＡと相互作用することができ（例えば、結合する、又は間に入る）、
又はＤＮＡ合成、或いはＤＮＡ修復に関与するＤＮＡ結合タンパクに結合し得る。一般的
に、ＤＮＡ合成を妨げる薬剤は、Ｓ期の間、活性であるが、Ｓ期に特異的にとは限らない
。
【００２３】
適切な２番目の薬剤は、ＤＮＡ−ＰＫ経路を介してそれ自体の細胞毒性をも媒介する別
の薬剤を含む。１つの例は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤のように非相同的末端結合修復を阻害す
る薬剤である。本明細書で用いられているように、ＤＮＡ−ＰＫ経路阻害剤は、ＤＮＡ−
ＰＫによって媒介されるシグナル経路を阻害する薬剤である。ＤＮＡ−ＰＫの活性の阻害
は、ＤＮＡ−ＰＫ自身の触媒阻害剤のような直接的であり得るかもしれず、又はＤＮＡ−
ＰＫ、Ｋｕ７０、及びＫｕ８０を含む活性ＤＮＡ−ＰＫ複合体の形成を阻害する薬剤とし
て間接的であるかもしれない。ＤＮＡ−ＰＫ経路を介してそれ自体の細胞毒性を媒介する
薬剤の他の例は、カスパーゼ−９アクチベーター、カスパーゼ−３アクチベーター、及び
Ｈｓｐ９０阻害剤のようなアポトーシス増幅剤と同様、リガーゼIV阻害剤を含む。
【００２４】
ＤＮＡ合成を阻害する薬剤の他の例は、アルキル化剤、抗腫瘍性抗生物質、抗代謝剤、
プラチナ配位複合体、トポイソメラーゼII阻害剤、及び放射線のような他の抗ガン剤を含
む。これらのタイプの化合物にふさわしい標準用量、及び投薬管理は知られている（例え
ば、『医師用卓上参考書』, Medical Economics Company, Inc. Montvale, N.J., 59版,
(2005)を参照されたい）。しかしながら、説明の目的のために、いくつかの例を以下に提
供する。
【００２５】
アルキル化剤は、非相特異的抗ガン剤であり、強い求電子試薬である。典型的に、アル
キル化剤は、リン酸、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル、及びイミ
ダゾール基のようなアルキル化DNA部分によって共有結合を形成する。アルキル化剤の例
は、ブスルファンのようなスルホン酸アルキル、クロラムブシル、シクロフォスファミド
、及びメルファランのようなナイトロジェンマスタード、カルムスチンのようなニトロソ
尿素、及びダカルバジンのようなトリアジンを含むが、限定されない。
抗腫瘍性抗生物質は、一般的に非相特異的な抗ガン剤であり、ＤＮＡに結合、又は間に
挿入される。典型的に、そのような作用は安定なＤＮＡ複合体、又は鎖の切断をもたらす
。抗生物質抗ガン剤の例は、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、及び
ドキソルビシンを含むが、それらに限定されない。
【００２６】
抗代謝剤はＤＮＡ合成、又はその中間体を阻害することによって、細胞周期のＳ、又は
ＤＮＡ合成期に作用する。Ｓ期は進行しないので、細胞死が起こる。抗代謝剤の実例は、
葉酸類似体、プリン類似体、アデノシン類似体、ピリミジン類似体、及び置換した尿素を
含むが、それらに限定されない。葉酸類似体の例は、メトトレキサート、及びペメトレキ
セドを含む。プリン類似体の例は、メルカプトプリン、及びチオグアニジンを含む。アデ
ノシン類似体の例は、クラドリビイン、及びペントスタチンを含む。ピリミジン類似体の
例は、シタラビン、カペシタブリン、及びフルオロウラシルを含む。
【００２７】
プラチナ配位複合体はＤＮＡと相互作用する、非相特異的抗ガン剤である。プラチナ複
合体は、腫瘍細胞に入り、ＤＮＡと、鎖内、又は鎖間クロスリンクを形成する。そのよう
な細胞におけるＤＮＡ損傷の蓄積は、最終的に細胞死を導く。プラチナ配位複合体の例は
、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンを含むが、限定されない。
【００２８】
トポイソメラーゼII阻害剤は、典型的にトポイソメラーゼとＤＮＡと共に３量体構造を
形成することによって、細胞周期のＧ２期に影響を与える。例えば、トポイソメラーゼII
毒は、やがて細胞死に繋がるＤＮＡ鎖切断の蓄積をもたらす。トポイソメラーゼII阻害剤
の例は、エトポシド、及びテニポシドのようなエピポドフィロトキシンを含むが、それら
に限定されない。
【００２９】
ある実施態様において、２回目の薬剤は、アルキル化剤である。別の実施態様において
、該アルキル化剤はスルホン酸アルキルであり、治療中のガンは白血病、又はリンパ腫で
ある。別の実施態様において、スルホン酸アルキルはブスルファンである。別の実施態様
において、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、治療的有効量は１日につき少なく
とも１ｍｇである。別の実施態様において、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、
治療的有効量は、１日につき約２ｍｇ〜約８ｍｇの経口使用量である。別の実施態様にお
いて、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、治療的有効量は、１日につき約１ｍｇ
〜約３ｍｇの経口使用量である。
【００３０】
別の実施態様において、アルキル化剤はナイトロジェンマスタードであり、治療中のガ
ンは、膀胱ガン、乳ガン、ホジキン病、白血病、肺ガン、黒色腫、卵巣ガン、又は精巣ガ
ンである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはクロラムブシルである。
別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはクロラムブシルであり、治療的有効
量は、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、ナイトロジェンマス
タードはクロラムブシルであり、治療的有効量は、３〜６週間、１日につき約０．１ｍｇ
／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実施態様において、ナイトロジェ
ンマスタードはクロラムブシルであり、治療的有効量は、３〜４週間ごとに、０．４ｍｇ
／ｋｇの投与量である。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォ
スファミドである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスフ
ァミドであり、治療的有効量は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の
実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスファミドであり、治療的有
効量は、７〜１０日毎に、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。
別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスファミドであり、治療
的有効量は、１日につき、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実
施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファランである。別の実施態様におい
て、ナイトロジェンマスタードはメルファランであり、治療的有効量は、１日につき、少
なくとも２ｍｇである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファラ
ンであり、治療的有効量は、２〜３週間、１日につき、６ｍｇの経口投与量であり、２〜
４週間はメルファランがなく、それから１日につき、２ｍｇ〜４ｍｇの経口投与量である
。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファランであり、治療的有効
量は、４〜６週間毎に４日間、１日につき１０ｍｇ／ｍ２の経口投与量である。
【００３１】
別の実施態様において、アルキル化剤はニトロソ尿素であり、治療中のガンが、脳腫瘍
、直腸結腸ガン、ホジキン病、肝臓ガン、肺ガン、リンパ腫、又は黒色腫である。別の実
施態様において、ニトロソ尿素はカルムスチンである。別の実施態様において、ニトロソ
尿素はカルムスチンであり、治療的有効量は少なくとも１５０ｍｇ／ｍ２である。別の実
施態様において、ニトロソ尿素はカルムスチンであり、治療的有効量は、６〜８週間毎に
、約１５０ｍｇ／ｍ２〜２００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３２】
別の実施態様において、アルキル化剤はトリアジンであり、治療中のガンが、ホジキン
病、黒色腫、神経芽細胞腫、又は軟部組織の肉腫である。別の実施態様において、トリア
ジンはダカルバジンである。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジンであり、
治療的有効量は、４週間毎の１０日間において、１日につき、約２．０ｍｇ／ｋｇ〜約４
．５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジ
ンであり、治療的有効量は、３週間毎の５日間において、１日につき２５０ｍｇ／ｍ２の
静脈内投与量である。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジンであり、治療的
有効量は、１６日毎に３７５ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、
トリアジンはダカルバジンであり、治療的有効量は、４週間毎の５日間において、１５０
ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３３】
別の実施態様において、該２番目の薬剤が抗腫瘍性の抗生物質であり、治療中のガンが
、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、頭頸部ガン、ホジキン病、白血病、多発性骨髄腫、神
経芽細胞腫、卵巣ガン、肉腫、皮膚ガン、精巣ガン、又は甲状腺ガンである。別の実施態
様において、抗生物質がブレオマイシンである。別の実施態様において、抗生物質はブレ
オマイシンであり、治療的有効量は、少なくとも１０ユニット／ｍ２である。他の実施態
様において、抗生物質はブレオマイシンであり、治療的有効量は、週毎、又は２週毎に、
約１０ユニット／ｍ２〜約２０ユニット／ｍ２の静脈内、皮下、又は筋肉内投与量である
。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンである。別の実施態様において、
抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有効量は少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇであ
る。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有効量は、３週
間毎の５日間において、１日につき０．０１０ｍｇ／ｋｇ〜０．０１５ｍｇ／ｋｇの静脈
内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有
効量は３、又は４週間毎に２ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、
抗生物質はダウノルビシンである。別の実施態様において、抗生物質はダウノルビシンで
あり、治療的有効量は、少なくとも３０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、抗生
物質はダウノルビシンであり、治療的有効量は３日間の１日につき、約３０ｍｇ／ｍ２〜
約４５ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はリポソーム
調製のダウノルビシンであり、治療的有効量は、２週間毎に４０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与
量である。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンである。別の実施態様にお
いて、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は、少なくとも１５ｍｇ／ｍ２で
ある。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は３週間
毎に、約６０ｍｇ／ｍ２〜９０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において
、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は、毎週、約１５ｍｇ／ｍ２〜約２０
ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンで
あり、治療的有効量は、２週間のドキソルビシンの非投与に続いて２週間、毎週３０ｍｇ
／ｍ２の静脈内投与量を含むサイクルである。
【００３４】
別の実施態様において、該２番目の薬剤は、代謝拮抗剤である。別の実施態様において
、代謝拮抗剤は葉酸類似体であり、かつ治療中のガンは乳ガン、頭頸部ガン、白血病、肺
ガン、非ホジキンリンパ腫、又は骨肉腫である。別の実施態様において、葉酸類似体はメ
トトレキセートである。別の実施態様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、
治療的有効量は、少なくとも２．５ｍｇである。別の実施態様において、葉酸類似体はメ
トトレキセートであり、治療的有効量は、１日につき、約２．５ｍｇ〜約５ｍｇの経口投
与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、治療的有効
量は、１週につき２回、約５ｍｇ／ｍ２〜約２５ｍｇ／ｍ２の投与量である。別の実施態
様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、治療的有効量は、２〜３週間毎に、
１週につき５０ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はペ
メトレキセドである。別の実施態様において、葉酸類似体はペメトレキセドであり、治療
的有効量は少なくとも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、葉酸類似体はペ
メトレキセドであり、治療的有効量は２、又は３週間毎に約３００ｍｇ／ｍ２〜約６００
ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はペメトレキセドで
ああり、治療的有効量は３週間毎に、５００ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。
【００３５】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はプリン類似体であり、治療中のガンは結腸直腸ガ
ン、白血病、又は骨髄腫である。別の実施態様において、プリン類似体はメルカプトプリ
ンである。別の実施態様において、プリン類似体はメルカプトプリンであり、治療的有効
量は少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、プリン類似体はメルカ
プトプリンであり、治療的有効量は、１日につき約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの
経口投与量である。別の実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンである。他の
実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンであり、治療的有効量は、少なくとも
２ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンであり、治
療的有効量は、約２ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。
【００３６】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はアデノシン類似体であり、治療中のガンは、白血
病、又はリンパ腫である。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインで
ある。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインであり、治療的有効量
は、少なくとも０．０９ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、アデノシン類似体は
クラドリビインであり、治療的有効量は７日間の１日につき、０．０９ｍｇ／ｋｇの静脈
内投与量である。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインであり、治
療的効果量は、７日間の１日につき４ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様に
おいて、アデノシン類似体はペントスタチンである。別の実施態様において、アデノシン
類似体はペントスタチンであり、治療的有効量は４ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様にお
いて、アデノシン類似体はペントスタチンであり、治療的効果量は隔週毎に、４ｍｇ／ｍ
２の静脈内投与量である。別の実施態様において、アデノシン類似体はペントスタチンで
あり、治療的有効量は、３週間毎に４ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３７】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はピリミジン類似体であり、治療すべきガンは、膀
胱ガン、乳ガン、結腸直腸ガン、食道ガン、頭頸部ガン、白血病、肝臓ガン、リンパ腫、
卵巣ガン、膵臓ガン、皮膚ガン、又は胃ガンである。別の実施態様において、ピリミジン
類似体はシタラビンである。別の実施態様において、ピリミジン類似体はシタラビンであ
り、治療的効果量は、少なくとも１００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ピリ
ミジン類似体はシタラビンであり、治療的有効量は７日間の１日につき１００ｍｇ／ｍ２
の静脈内投与量である。別の実施態様において、ピリミジン類似体はカペシタビンである
。別の実施態様において、ピリミジン類似体はカペシタビンであり、治療的有効量は、少
なくとも一日につき２０００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ピリミジン類似
体はカペシタビンであり、治療的有効量は、１４日間、約１２００ｍｇ／ｍ２〜約１３０
０ｍｇ／ｍ２の１日２回の経口投与量である。別の実施態様において、ピリミジン類似体
はカペシタビンであり、治療的有効量は３週間サイクルであり、約１２５０ｍｇ／ｍ２の
１日２回投与量は、１週間の休息の後に１４日間与えられる。別の実施態様において、ピ
リミジン類似体はフルオロウラシルである。別の実施態様において、ピリミジン類似体は
フルオロウラシルであり、治療的有効量は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇである。別の実施
態様において、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は、少なくと
も３日間の１日につき、約３００ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である
。別の実施態様において、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は
、３〜５日間の１日につき１２ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の実施態様において
、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は、毎週、約１０ｍｇ／ｋ
ｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。
【００３８】
別の実施態様において、代謝拮抗剤は置換尿素であり、治療すべきガンが、頭頸部ガン
、白血病、黒色腫、又は卵巣ガンである。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ
尿素である。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ尿素であり、治療的有効量は
、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ尿素
であり、治療的有効量は３日毎、８０ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実施態様にお
いて、置換尿素はヒドロキシ尿素であり、治療的有効量は、１日につき、約２０ｍｇ／ｋ
ｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の経口投与量である。
【００３９】
別の実施態様において、該２回目の薬剤がプラチナ配位複合体であり、治療中のガンが
、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、結腸ガン、頭頸部ガン、白血病、肺ガン、リンパ腫、
卵巣ガン、肉腫、精巣ガン、又は子宮ガンである。別の実施態様において、プラチナ配位
複合体はカルボプラチンである。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はカルボプ
ラチンであり、治療的有効量は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様にお
いて、プラチナ配位複合体はカルボプラチンであり、治療的有効量は、４週毎に、少なく
とも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はカルボプラ
チンであり、治療的効果量は４週毎に３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、
プラチナ配位複合体はカルボプラチンであり、治療的有効量は４週毎に、少なくとも３６
０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンである
。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンであり、治療的有効量は、
少なくとも２０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプ
ラチンであり、治療的有効量は３〜４週毎の４〜５日において、１日につき２０ｍｇ／ｍ
２の静脈投与量である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンであ
り、治療的有効量は、３週毎に５０ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様におい
て、プラチナ配位複合体はオキサリプラチンである。別の実施態様において、プラチナ配
位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量は、少なくとも７５ｍｇ／ｍ２である
。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量
は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態様において、プラチ
ナ配位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量は、２週毎に、約５０ｍｇ／ｍ２
〜約１００ｍｇ／ｍ２の間のIV注入である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体
はオキサリプラチンであり、治療的有効量は２週毎に、約８０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／
ｍ２の間のIV注入である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はオキサリプラチ
ンであり、治療的有効量は、２週毎に８５ｍｇ／ｍ２の２〜４時間にわたるIV注入である
。
【００４０】
別の実施態様において、該２番目の薬剤はトポイソメラーゼII阻害剤であり、治療中の
ガンが、ホジキン病、白血病、小細胞肺ガン、肉腫、又は精巣ガンである。別の実施態様
において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドである。別の実施態様において、トポ
イソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的有効量は、少なくとも３５ｍｇ／ｍ２
である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的
有効量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態様において、
トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的効果量は、３〜４週毎の５日にお
いて、少なくとも３回、一日につき、約３５ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与
量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療
的効果量は３〜４週毎の５日において少なくとも３回、１日につき約５０ｍｇ／ｍ２〜約
１００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻
害剤はエトポシドであり、治療的有効量は、３、又は４週につき５日間において少なくと
も３回、１日につき１００ｍｇ／ｍ２の経口投与量である。別の実施態様において、トポ
イソメラーゼII阻害剤はテニポシドである。別の実施態様において、トポイソメラーゼII
阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、少なくとも２０ｍｇ／ｍ２である。別の実
施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、一週
につき１００ｍｇ／ｍ２の投与量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻
害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、週に２回、１００ｍｇ／ｍ２の投与量である
。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量
は、５日間で、一日につき、約２０ｍｇ／ｍ２〜６０ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態
様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、５日間で
、一日につき約８０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２の間の投与量である。
すべての引用文献は、引用によって本明細書中に組み込まれる。
【実施例】
【００４１】
（実施例１）
（注射、又は静脈内注入に適した医薬組成物）
酸性組成物（＜ｐＨ４）が、ＳＮＳ−５９５の可溶性を適切なバランスで増加させ、好
ましい医薬特性を与えた（例えば、輸送部位における刺激を少なくすることによって、患
者の快適性を増加させる）。適切な組成物の実例は、メタンスルホン酸を用いてｐＨを２
．５に調製した、４．５％ソルビトール溶液の水溶液１ｍＬに対して１０ｍｇのＳＮＳ−
５９５を含む。そのような１００ｍｇ／１０ｍＬの濃度の溶液を作る一つの手順は：１０
０ｍｇのＳＮＳ−５９５、及び４５０ｍｇのＤ−ソルビトールを蒸留水に加え；該体積を
１０ｍＬの容量に合わせ；出来た溶液のｐＨを、メタンスルホン酸を用いて２．５に調製
することを含む。出来た組成物は、凍結乾燥にも適している。凍結乾燥された形態は、使
用に先立って、蒸留水を用いてその後適切な濃度にまでもどされる。
【００４２】
（実施例２）
（ガン患者におけるＳＮＳ−５９５の薬物動態）
ＳＮＳ−５９５を、最高６回周期まで被験患者へ投与した。１周期を３週間として定義
し、各周期の最初の日（０日）にＳＮＳ−５９５を投与して、その後少なくとも２１日間
観察した。ＳＮＳ−５９５を少なくとも３名の患者の集団に投与し、また投与量の段階的
増加を順次集団ごとに行った。ＳＮＳ−５９５の用量は、濃度曲線下面積が無限大の直線
であり、その薬物動態特性は、同集団内の患者間で著しく一致していた。表１は、患者の
経時的なＳＮＳ−５９５の血漿濃度から算出した薬物動態パラメータを示している。
【００４３】
【表１】
【００４４】
（実施例３）
（薬力学研究）
Ｎｕ／ｎｕマウス（約２５グラム）に、５０％マトリゲル(Becton-Dickinson)と共に、
５００万個のＨＣＴＩ細胞（ＡＴＣＣから獲得された）をわき腹に注入した。腫瘍は、４
００ｍｍ３までの成長が許された。異種移植片を有した動物に、それから尾の静脈にＳＮ
Ｓ−５９５（２０、又は４０ｍｇ／ｋｇ）のIVボーラス注入、又は生理食塩水のどちらか
を与えた。所定の時間（投与から１、２、４、８、１６、及び２４時間後）において、動
物をＣＯ２で麻酔し、血液を末端心臓穿刺を介して摂取し、動物は犠牲になった。腫瘍を
切除し、液体窒素で冷却した乳鉢、及び乳棒を用いて粉々にし、液体窒素中で急速冷凍し
た。腫瘍溶解物を、溶解バッファーの添加によって、粉々にされたサンプルから作成した
。
【００４５】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質のタンパク濃度を、ウエスタンブロットによって決
定した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの1レーンにつき、約２５マイクログラムのタンパクを充
填した。タンパクを電気泳動ゲルによって分離し、ニトロセルロース膜上に吸い取らせ、
下記の抗体を用いて検出した：S１３９でリン酸化した、H2AX (Cell Signaling, catalog
no. 2577L)；S１５でリン酸化した、ｐ５３(Cell Signaling, catalog no. 9284S)；S３
７でリン酸化した、ｐ５３(Cell Signaling, catalog no. 9289S)；ｐ２１(Cell Signali
ng, catalog no. 2946)；Y１５でリン酸化した、ｃｄｃ２ (Calbiochem, catalog no. 21
9437)；ｃｙｃｌｉｎＢ(Santa Cruz, catalog no.sc- 594 (H-20))；Ｙ９９でリン酸化し
た、ｐ７３(Cell Signaling, catalog no.4665L)；Ｔ７３５でリン酸化した、ｃＡｂｌ(C
ell Signaling, catalog no. 2864S)；及び、Ｓ３１７でリン酸化した、ＣＨＫ１(Cell S
ignaling, catalog no. 2344L)。
図３は、ＳＮＳ−５９５で治療する腫瘍において活性化されたＤＮＡ−ＰＫ経路の典型
的な構成タンパク質のレベルを示している。
【００４６】
（実施例４）
（ＳＮＳ−５９５を用いた組み合わせ研究）
ＨＣＴ１１６細胞を、１００μｌ／ウェルのＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％ウシ胎児
仔血清、１％抗生物質／抗カビ剤、及び１．５％重炭酸ナトリウムを与えられている）と
共に、透明な９６ウェルプレートに約４ｅ５細胞／ウェルの密度で植え、５％ＣＯ２、３
７℃で２４時間培養処理した。ＳＮＳ−５９５を、単独、または一定の割合で別の細胞毒
性化合物と混合して、終濃度が５μＭ〜５ｎＭの間になるように加えた。ＤＭＳＯの終濃
度は、アッセイプレートにおいて１％であった。処理された細胞を、２０μｌ／ウェルの
３−[４，５−ジメチルチアゾール−２−イル]−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化
物（ＭＴＴ）を１時間加える前に、５％ＣＯ２、３７℃で７２時間インキュベートされ、
続いて１００μｌ／ウェルのｎ，ｎ−ジメチルフォルムアミド／ＳＤＳ溶解バッファーに
、少なくとも１６時間インキュベートした。該プレートの吸光度は５９５ｎｍの波長で読
まれる。該データはコンビネーションインデックス（線量効果解析のソフトウエア、Calc
usyn V2(Biosoft)を用いて計算された）を用いた相互作用を定量化する半有効法を用いて
詳しく調べる。コンビネーションインデックスが、０．９０〜１．１０である場合、組み
合わせは、加算的であると言われる。コンビネーションインデックスが０．９０未満であ
る場合、組み合わせは、相乗的であると言われ、コンビネーションインデックスが１．１
０以上の場合、組み合わせが、対立的であると言われる。全てのコンビネーションインデ
ックスが０．５のFa値であった時、細胞の５０％は死んでいた。表２を参照されたい。
【００４７】
【表２】
【００４８】
（実施例５）
ＨＣＴ−１１６結腸ガン細胞を、５％ＣＯ２、１００μｌ／ウェルのＲＰＭＩ−１６４
０培地（１０％ウシ胎児仔血清、１％抗生物質／抗カビ剤、及び１．５％重炭酸ナトリウ
ムを与えられている）と共に、透明な９６ウェルプレートに約４ｅ５細胞／ウェルの密度
で植え、３７℃で２４時間培養処理した。いくつかの細胞は、１００ｎＭのウォートマン
ニンで、８〜１６時間処理した。ＳＮＳ−５９５をそれから連続希釈法として加え、細胞
は、５％ＣＯ２、３７℃で７２時間、インキュベートされた。ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌスト
ック溶液の、２０μｌ／ウェル）を１時間加え、次に少なくとも１６時間、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド／ＳＤＳ溶解バッファーを加えた。吸光度を５９５ｎｍで監視し、デー
タを非線形回帰によって適合し、ウォートマンニンの存在、及び非存在下において、ＳＮ
Ｓ−５９５による細胞の成長（ＩＣ５０）の阻害を決定する。ＨＣＴ−１１６細胞中のＳ
ＮＳ−５９５のためのＩＣ５０は、ウォートマンニン非存在下よりも、存在下において、
３〜６倍低かった。同様な結果は、ＨＣＴ−１１６細胞の代わりにＤＮＡ−ＰＫ欠失細胞
株（約１０倍の感作）を使用した場合に見られた。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、３つの主要なＤＮＡダメージ、及び修復経路を説明している。
【図２】図２は、ＳＮＳ−５９５で処理したＨＣＴ １１６細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の典型的な構成タンパク質の用量依存的な反応を示している。
【図３】図３はマウスの腫瘍における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の典型的な構成タンパク質の活性化を示している。
【技術分野】
【０００１】
ＳＮＳ−５９５は、新規のナフチリジン細胞毒性剤であり、以前はＡＧ−７３５２とし
て知られていた（Tsuzukiらの論文「Tetrahedron-Asymmetry」 12: 1793-1799 (2001)、
及び米国特許第5,817,669号）。ＳＮＳ−５９５の化学名は、（＋）−１，４−ジヒドロ
−７[（３Ｓ，４Ｓ）−３−メトキシ−４−（メチルアミノ）−１−ピロリジニル]−４−
オキソ−１−（２−チアゾイル）１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸であり、該構造
は以下に示される：
【０００２】
【化１】
本発明は、ＳＮＳ−５９５、及びガン治療におけるＳＮＳ−５９５の治療可能性を最大
限にする方法に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
（詳細な説明）
増殖細胞は、細胞周期の４つの段階―Ｇ１、Ｓ、Ｇ２、及びＭ―を経る。これらの段階
は、まず細胞分裂を観察することによって同定され、細胞は、細胞周期の合成、又はＳ期
として知られるようになったＤＮＡ合成、及び細胞周期の有糸、又はＭ期、又はＳ期とし
て知られる有糸分裂を介して発達した。ＤＮＡ合成の完了から有糸分裂までの間、及び有
糸分裂から次のＤＮＡ合成の周期までの間に観察された間期は、それぞれＧ１期、及びＧ
２期として知られるようになった。適切な条件下において増殖能力を保持する非増殖型の
細胞は、静止期、すなわちG0期にあり、及び細胞周期から逸脱しているものとして典型的
に特徴付けられる。
【０００４】
細胞周期は複数のチェックポイントを有し、これらの指定された地点でその細胞を停止
することによって、不適切な環境下で細胞周期を介して細胞が発達しようとするのを防ぐ
。ある重要なチェックポイントは、細胞がS期に入る前に発生し、例えば、環境が（例え
ば、十分な栄養）細胞分裂に適しているかどうかテストする。G１期にチェックポイント
で落第した細胞は、それゆえ、G1停止と呼ばれ、S期に入ることを妨げられる。別のチェ
ックポイントは、細胞がM期に入る前に発生し、例えば、合成されたDNAの完全性をテスト
する。G2期においてチェックポイントで落第し、それゆえM期に入ることが妨げられた細
胞は、G2停止にあると言われる。別のチェックポイントは細胞質分裂が起こる直前のM期
に発生し、例えば、染色体が適切に並んでいるかテストする。M期においてチェックポイ
ントで落第し、それゆえ分裂が妨げられる細胞は、M停止にあると言われる。
【０００５】
実際のところ、細胞周期停止はしばしばDNA内容物によって特徴付けられ、チェックポ
イントの失敗によるものではない。結果として、最も頻繁に報告されている細胞停止は、
２N DNA内容物に基づくG1停止と、４N DNA内容物に基づいたG2／M停止である。
ＳＮＳ−５９５は、細胞周期阻害剤であり、Ｇ２期において細胞を停止させる。始めは
、ＳＮＳ−５９５の活性は、トポイソメラーゼIIの阻害によるものと考えられていた。Ｓ
ＮＳ−５９５は、約５μＭのＩＣ５０を有するトポイソメラーゼIIの触媒阻害剤であり（
開裂可能な複合体の形成を伴わずに、スーパーコイル状DNAの分離、又は弛緩を防ぐ）、
量依存的な相互関係を、そのトポイソメラーゼII活性と、その細胞への効果との間に確立
することができなかった。例えば、様々な細胞内のEC５０は、２００ｎM〜３００ｎMの範
囲であり、効力増大において、トポイソメラーゼIIの生化学的阻害かとは、少なくとも約
１０倍異なる。さらに、細胞におけるトポイソメラーゼIIのレベルが２−デオキシグルコ
ース（該酵素の分解を導く）の使用によって調節された場合、２−デオキシグルコース処
理細胞と未処理細胞との間で、本質的に活性に何の違いも見られなかった。
【０００６】
G2停止の誘導もまた、ＳＮＳ−５９５の細胞毒性の重要な原因ではないようである。例
えば、Ｇ２停止が（ＡＴＭとＡＴＲの両方を阻害するカフェインで処理することによって
）無効にされた細胞内において、ＳＮＳ−５９５処理後、未処理の群の細胞（カフェイン
処理が行われず、Ｇ２停止が見られる）と比較した場合、ＥＣ５０値に本質的には何の違
いも観察されなかった。図１に示されているように、ＡＴＭ、ＡＴＲ、及びＤＮＡ−ＰＫ
は、３つの中心的なＤＮＡセンサー／エフェクターであり、個々の細胞において検出され
たＤＮＡ損傷のレベルにより、DNA修復、G2停止、又はアポトーシスを含む、いくつかの
うちのある結果に該細胞を導く。
最初の特徴づけとは反対に、ＳＮＳ−５９５は、やがてアポトーシス細胞死を導くＤＮ
Ａ−ＰＫ経路の活性化を仲介する。とりわけ、これらの出来事がＳ期に特有であるという
ことは、細胞周期のＳ期の間のみに起こることを特異的に意味している。
【０００７】
ＳＮＳ−５９５を用いた処理は、Ｓ期に形成される二重鎖ＤＮＡ切断の増加をもたらす
。この損傷は、細胞のＤＮＡ合成能を阻害し、Ｓ期において細胞が費やす時間を長引かせ
る。
図２が例示する通り、ＳＮＳ−５９５の投与量に応じて、二重鎖切断の形成が、ＤＮＡ
−ＰＫの媒介する修復、及び以下を含むがそれらに限定されないアポトーシス細胞の働き
：i)ＤＮＡ−ＰＫ発現；ii）Ｈ２ＡＸリン酸化；iii）ｃ−Ａｂｌリン酸化；iv）ｐ５３
リン酸化；v）ｐ７３リン酸化；vi）ｐ２１発現；vii）カスパーゼ−９活性化；及びviii
）カスパーゼ−３活性化、を活性化する。非相同的末端結合（ＮＨＥＪ）を介して二重鎖
切断を修復することができないほど、ＤＮＡ損傷が十分に深刻な場合、該細胞は速やかに
アポトーシスに入る。いくつかの細胞は、Ｇ２期に達することができるが、Ｍ期に入るに
は該細胞はあまりに損傷がひどいため、その次に停止され（ｃｄｃ２／サイクリンＢによ
って仲介され）、やがてまたアポトーシスとなる。特に、ＳＮＳ−５９５はＳ期選択的な
ので、ＳＮＳ−５９５の量は、増殖細胞に細胞毒性であり（それゆえ、Ｓ期を含む細胞周
期を介して進行する）、非増殖細胞にとって非致死的である。
【０００８】
この機構相応に、ＳＮＳ−５９５に対する誘導抵抗性を有する細胞は、ＤＮＡ−ＰＫ経
路において代替をも有している。例えば、ＨＣＴ−１１６細胞に比べて、約１０倍ＳＮＳ
−５９５感受性が低いＨＣＴ−１１６の安定的変異株は、例えば、活性化されたＤＮＡ−
ＰＫ複合体の不可欠な構成要素タンパクである、Ｋｕ７０のレベルが増加していることを
示す。反対に、ＤＮＡ−ＰＫのレベルの低下、又はその活性の減少は（例えば、阻害剤の
存在下において）、ＳＮＳ−５９５に対する感受性の増加に関連する。
【０００９】
ＳＮＳ−５９５のＤＮＡ−ＰＫ媒介性細胞毒性は、一般的ではない。ＤＮＡ合成を妨げ
る既知の化合物は、通常ＡＴＲを介して、又はＡＴＭとＤＮＡ−ＰＫの両方を介して作動
する。ＡＴＲ媒介性細胞毒性化合物の実例は、代謝拮抗剤、及びＤＮＡポリメラーゼ阻害
剤を含む。ＡＴＲ媒介性、及びＤＮＡ−ＰＫ媒介性細胞毒性化合物によって媒介されたＡ
ＴＭ、及びＤＮＡ−ＰＫの実例は、トポイソメラーゼII毒と、ブレオマイシンのような抗
腫瘍性抗生物質を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＳＮＳ−５９５に関連し、その作用の機構を使用して、ヒトのガン治療にお
いて、その治療可能性を最大化する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
それゆえ、本発明の一つの態様において、治療すべきガンがＳＮＳ−５９５治療に応答
する可能性が高いかどうか、並びに該治療を進めた場合に、該ガンがＳＮＳ−５９５治療
に応答する可能性が高いかどうかを決定する方法を提供する。ＳＮＳ−５９５を用いた治
療に適したガンの種類は、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、結腸ガン（直腸結腸ガンを含
む）、食道ガン、頸頭部ガン、白血病、肝臓ガン、肺ガン（小細胞、及び非小細胞の両方
）、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、腎臓
ガン、肉腫（骨肉腫を含む）、皮膚ガン（扁平上皮細胞ガンを含む）、胃ガン、精巣ガン
、甲状腺ガン、及び子宮ガンを含むが、それらに限定されない。
該方法は、治療すべきガンの細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパ
ク質の始めの量を決定すること、及び始めの量と２回目の量とを比較することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
ガンがＳＮＳ−５９５処理に応答する可能性が高いかどうかを決定するとき、始めの量
とは、治療すべき細胞中のＤＮＡ−ＰＫ経路の少なくとも１つの構成タンパク質の量（治
療前の量）である。２回目の量とは、対照細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパ
ク質の量（対照量）である。適切な対照細胞は、治療されたガンとして同じ細胞に由来す
る通常の細胞を含むが、限定されない。例えば、治療すべきガンが卵巣ガンの場合、適切
な対照細胞は非ガン性の卵巣細胞を含む。対照細胞は、治療すべき患者から得るか、又は
治療すべきガンと同じ型の通常組織から得ることができる。あるいは、ＨＣＴ１１６結腸
ガン細胞（ＳＮＳ−５９５に対する耐性を示すために誘導されない）におけるＤＮＡ−Ｐ
Ｋ経路の任意の構成タンパク質の量は、一般的に対照量として使用され得る。
【００１３】
本発明の実施におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の適切な構成タンパク質は、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋ
ｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲＥ１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２
ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５３、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３を含
むが、限定されない。ある実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質は、Ｄ
ＮＡ−ＰＫである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＫｕ７
０である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＫｕ８０である
。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＭＲＥ１１である。別の
実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＮＢＳ１である。別の実施態様
において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＲＡＤ５０である。別の実施態様におい
て、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はＸＲＣＣ４である。別の実施態様において、Ｄ
ＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はリガーゼIVである。別の実施態様において、ＤＮＡ−
ＰＫ経路の構成タンパク質はＨ２ＡＸである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路
の構成タンパク質はｃ−Ａｂｌである。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成
タンパク質はｐ５３である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質
はｐ７３である。別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はｐ２１で
ある。さらに別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はカスパーゼ−
９である。さらに別の実施態様において、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質はカスパー
ゼ−３である。
【００１４】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量は、細胞内に存在するタンパク質レベルの定量
化のように、直接的に算出され得る。ある特定の構成タンパク質の量もまた、それに対応
するＤＮＡ，又はｍＲＮＡレベルを測定することによって、間接的に算出され得る。ある
いは、ある特定の構成タンパク質の量もまた、活性レベルを使用して間接的に測定される
。活性定量は、酵素活性が酵素の量の代わりとして使用されるため、間接的測定となる。
例えば、測定された構成タンパク質がキナーゼである場合、そのキナーゼ量は、そのリン
酸化産物のレベルを決定することによって、間接的に決定され得る（例えば、ＤＮＡ−Ｐ
Ｋレベルの量の決定は、Ｈ２ＡＸリン酸化レベルの量によって行われる）。上記に加えて
、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量は、免疫組織化学を含む、当業者に周知の任意
の方法を使用して測定され得る。
【００１５】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の処理前の量が、対照量よりも少ない、又はほとん
ど同じである場合、該ガンは１０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２のＳＮＳ−５９５の量に
好ましく反応する可能性が高い。体表面積（ＢＳＡ）は、例えばMosteller式を用いて計
算される：
ＢＳＡ（ｍ２）＝[高さ（ｃｍ）×重さ（ｋｇ）／３６００]の平方根
【００１６】
別の実施態様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９５の量は、１０ｍｇ／ｍ２
〜１００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９
５の量は、３０ｍｇ／ｍ２〜７５ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ガン治療に
用いられるＳＮＳ−５９５の量は、４０ｍｇ／ｍ２〜８０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態
様において、ガン治療に用いられるＳＮＳ−５９５の量は、５０ｍｇ／ｍ２〜９０ｍｇ／
ｍ２である。
【００１７】
ＳＮＳ−５９５の投与量は、ｍｇ／ｍ２以外の単位として表現され得る。例えば、量は
ｍｇ／ｋｇとして表現され得る。当業者は、対象の既知の高さ、もしくは重さのうちのい
ずれか、又はその両方に対して、ｍｇ／ｍ２からｍｇ／ｋｇへの量の変換の仕方を容易に
理解するであろう（例えば、http:///www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htmを参照
されたい）。例えば、６５ｋｇの人に対して１０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２の量は、
ほぼ０．２６ｍｇ／ｋｇ〜３．９５ｍｇ／ｋｇに等しい。
【００１８】
投与量は、同時に、又は２４時間の期間にわたって運ばれる可能性があり、患者の病状
が安定、又は退行するまで、若しくは患者の病状が進行、又は許容できない毒性を呈する
まで繰り返される場合がある。例えば、固形ガンにおける疾病の安定とは、測定可能な病
巣の垂直の直径が、前回の測定から２５％以上増加していないことを一般的に意味する。
例えば、「固形ガンの反応評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）のガイドライン」、『Journal of t
he National Cancer Institute』92(3): 205-216 (2000)を参照されたい。疾病の安定、
又はその欠如は、患者の症状の評価、健康診断、Ｘ線、ＣＡＴ、ＰＥＴ、又はＭＲＩスキ
ャンを用いたガン細胞の可視化、及び他の一般に是認されている評価様式のような、当業
者に周知の方法で決定される。
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の前処理量が、対照量よりも多ければ、単一剤とし
てのＳＮＳ−５９５は十分ではあり得ないだろうし、ＳＮＳ−５９５を含んだ組み合わせ
治療を検討すべきである。
【００１９】
ガンがＳＮＳ−５９５治療に反応しているかどうかを決定するとき、始めの量とは、Ｓ
ＮＳ−５９５を用いて治療したガン細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路中の、少なくとも１種
の構成タンパク質の量（処理後量）である。二番目の量とは、対照細胞におけるＤＮＡ−
ＰＫ経路のある構成タンパク質の量（対照量）である。好ましくは、該対照量は、ＳＮＳ
−５９５を用いた治療を行う前のガンの細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク
質の量（処理前量）である。他の適切な対照細胞は、治療すべきガンと同じ細胞に由来す
る通常の細胞を含むが、それに限定されない。例えば、治療中のガンが卵巣ガンであれば
、適切な対照細胞は非ガン性の卵巣細胞を含む。対照細胞は、治療される患者から得るか
、又は治療中のガンと同じ型の通常組織から得ることができる。あるいは、ＨＣＴ１１６
結腸ガン細胞（ＳＮＳ−５９５への耐性を示すために誘導されない）におけるＤＮＡ−Ｐ
Ｋ経路の任意の構成タンパク質の量は、一般的に対照量として使用され得る。
【００２０】
処理後の量が対照量以上である場合、該ガンは好ましく応答しており、ＳＮＳ−５９５
を用いた処理（単一、又は組み合わせの一部として）を続けるべきである。
本発明の別の態様として、ＳＮＳ−５９５の機構を利用して、ＳＮＳ−５９５の治療可
能性を最大化させる組み合わせを提供する。ある実施態様において、組み合わせは以下の
ａ、及びｂを含んで提供する：
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５；
ｂ）治療的有効量の、ＤＮＡ合成阻害効果のある２番目の薬剤。
【００２１】
加算性、又は相互作用の可能性を最大化するには、異なる作用機構を有する薬剤を選択
する、という一般原則とは対照的に（例えば、R. Page、及びC.Takimotoの『化学療法の
基礎』 、ガンの管理：多くの専門分野にわたるアプローチ(2001), p. 23を参照されたい
）、ＳＮＳ−５９５、及び同じくDNA合成を妨げる２番目の薬剤を含む組み合わせが、加
算的である、又は相互作用をもたらすことがわかった。
【００２２】
本明細書中に用いられているように、薬剤が、直接的、又は間接的に、細胞のＤＮＡ合
成能力、又はＤＮＡ損傷修復能力に影響を与える場合、該薬剤はＤＮＡ合成を妨げる。該
薬剤は直接的にＤＮＡと相互作用することができ（例えば、結合する、又は間に入る）、
又はＤＮＡ合成、或いはＤＮＡ修復に関与するＤＮＡ結合タンパクに結合し得る。一般的
に、ＤＮＡ合成を妨げる薬剤は、Ｓ期の間、活性であるが、Ｓ期に特異的にとは限らない
。
【００２３】
適切な２番目の薬剤は、ＤＮＡ−ＰＫ経路を介してそれ自体の細胞毒性をも媒介する別
の薬剤を含む。１つの例は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤のように非相同的末端結合修復を阻害す
る薬剤である。本明細書で用いられているように、ＤＮＡ−ＰＫ経路阻害剤は、ＤＮＡ−
ＰＫによって媒介されるシグナル経路を阻害する薬剤である。ＤＮＡ−ＰＫの活性の阻害
は、ＤＮＡ−ＰＫ自身の触媒阻害剤のような直接的であり得るかもしれず、又はＤＮＡ−
ＰＫ、Ｋｕ７０、及びＫｕ８０を含む活性ＤＮＡ−ＰＫ複合体の形成を阻害する薬剤とし
て間接的であるかもしれない。ＤＮＡ−ＰＫ経路を介してそれ自体の細胞毒性を媒介する
薬剤の他の例は、カスパーゼ−９アクチベーター、カスパーゼ−３アクチベーター、及び
Ｈｓｐ９０阻害剤のようなアポトーシス増幅剤と同様、リガーゼIV阻害剤を含む。
【００２４】
ＤＮＡ合成を阻害する薬剤の他の例は、アルキル化剤、抗腫瘍性抗生物質、抗代謝剤、
プラチナ配位複合体、トポイソメラーゼII阻害剤、及び放射線のような他の抗ガン剤を含
む。これらのタイプの化合物にふさわしい標準用量、及び投薬管理は知られている（例え
ば、『医師用卓上参考書』, Medical Economics Company, Inc. Montvale, N.J., 59版,
(2005)を参照されたい）。しかしながら、説明の目的のために、いくつかの例を以下に提
供する。
【００２５】
アルキル化剤は、非相特異的抗ガン剤であり、強い求電子試薬である。典型的に、アル
キル化剤は、リン酸、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル、及びイミ
ダゾール基のようなアルキル化DNA部分によって共有結合を形成する。アルキル化剤の例
は、ブスルファンのようなスルホン酸アルキル、クロラムブシル、シクロフォスファミド
、及びメルファランのようなナイトロジェンマスタード、カルムスチンのようなニトロソ
尿素、及びダカルバジンのようなトリアジンを含むが、限定されない。
抗腫瘍性抗生物質は、一般的に非相特異的な抗ガン剤であり、ＤＮＡに結合、又は間に
挿入される。典型的に、そのような作用は安定なＤＮＡ複合体、又は鎖の切断をもたらす
。抗生物質抗ガン剤の例は、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、及び
ドキソルビシンを含むが、それらに限定されない。
【００２６】
抗代謝剤はＤＮＡ合成、又はその中間体を阻害することによって、細胞周期のＳ、又は
ＤＮＡ合成期に作用する。Ｓ期は進行しないので、細胞死が起こる。抗代謝剤の実例は、
葉酸類似体、プリン類似体、アデノシン類似体、ピリミジン類似体、及び置換した尿素を
含むが、それらに限定されない。葉酸類似体の例は、メトトレキサート、及びペメトレキ
セドを含む。プリン類似体の例は、メルカプトプリン、及びチオグアニジンを含む。アデ
ノシン類似体の例は、クラドリビイン、及びペントスタチンを含む。ピリミジン類似体の
例は、シタラビン、カペシタブリン、及びフルオロウラシルを含む。
【００２７】
プラチナ配位複合体はＤＮＡと相互作用する、非相特異的抗ガン剤である。プラチナ複
合体は、腫瘍細胞に入り、ＤＮＡと、鎖内、又は鎖間クロスリンクを形成する。そのよう
な細胞におけるＤＮＡ損傷の蓄積は、最終的に細胞死を導く。プラチナ配位複合体の例は
、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンを含むが、限定されない。
【００２８】
トポイソメラーゼII阻害剤は、典型的にトポイソメラーゼとＤＮＡと共に３量体構造を
形成することによって、細胞周期のＧ２期に影響を与える。例えば、トポイソメラーゼII
毒は、やがて細胞死に繋がるＤＮＡ鎖切断の蓄積をもたらす。トポイソメラーゼII阻害剤
の例は、エトポシド、及びテニポシドのようなエピポドフィロトキシンを含むが、それら
に限定されない。
【００２９】
ある実施態様において、２回目の薬剤は、アルキル化剤である。別の実施態様において
、該アルキル化剤はスルホン酸アルキルであり、治療中のガンは白血病、又はリンパ腫で
ある。別の実施態様において、スルホン酸アルキルはブスルファンである。別の実施態様
において、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、治療的有効量は１日につき少なく
とも１ｍｇである。別の実施態様において、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、
治療的有効量は、１日につき約２ｍｇ〜約８ｍｇの経口使用量である。別の実施態様にお
いて、スルホン酸アルキルはブスルファンであり、治療的有効量は、１日につき約１ｍｇ
〜約３ｍｇの経口使用量である。
【００３０】
別の実施態様において、アルキル化剤はナイトロジェンマスタードであり、治療中のガ
ンは、膀胱ガン、乳ガン、ホジキン病、白血病、肺ガン、黒色腫、卵巣ガン、又は精巣ガ
ンである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはクロラムブシルである。
別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはクロラムブシルであり、治療的有効
量は、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、ナイトロジェンマス
タードはクロラムブシルであり、治療的有効量は、３〜６週間、１日につき約０．１ｍｇ
／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実施態様において、ナイトロジェ
ンマスタードはクロラムブシルであり、治療的有効量は、３〜４週間ごとに、０．４ｍｇ
／ｋｇの投与量である。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォ
スファミドである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスフ
ァミドであり、治療的有効量は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の
実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスファミドであり、治療的有
効量は、７〜１０日毎に、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。
別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはシクロフォスファミドであり、治療
的有効量は、１日につき、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実
施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファランである。別の実施態様におい
て、ナイトロジェンマスタードはメルファランであり、治療的有効量は、１日につき、少
なくとも２ｍｇである。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファラ
ンであり、治療的有効量は、２〜３週間、１日につき、６ｍｇの経口投与量であり、２〜
４週間はメルファランがなく、それから１日につき、２ｍｇ〜４ｍｇの経口投与量である
。別の実施態様において、ナイトロジェンマスタードはメルファランであり、治療的有効
量は、４〜６週間毎に４日間、１日につき１０ｍｇ／ｍ２の経口投与量である。
【００３１】
別の実施態様において、アルキル化剤はニトロソ尿素であり、治療中のガンが、脳腫瘍
、直腸結腸ガン、ホジキン病、肝臓ガン、肺ガン、リンパ腫、又は黒色腫である。別の実
施態様において、ニトロソ尿素はカルムスチンである。別の実施態様において、ニトロソ
尿素はカルムスチンであり、治療的有効量は少なくとも１５０ｍｇ／ｍ２である。別の実
施態様において、ニトロソ尿素はカルムスチンであり、治療的有効量は、６〜８週間毎に
、約１５０ｍｇ／ｍ２〜２００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３２】
別の実施態様において、アルキル化剤はトリアジンであり、治療中のガンが、ホジキン
病、黒色腫、神経芽細胞腫、又は軟部組織の肉腫である。別の実施態様において、トリア
ジンはダカルバジンである。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジンであり、
治療的有効量は、４週間毎の１０日間において、１日につき、約２．０ｍｇ／ｋｇ〜約４
．５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジ
ンであり、治療的有効量は、３週間毎の５日間において、１日につき２５０ｍｇ／ｍ２の
静脈内投与量である。別の実施態様において、トリアジンはダカルバジンであり、治療的
有効量は、１６日毎に３７５ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、
トリアジンはダカルバジンであり、治療的有効量は、４週間毎の５日間において、１５０
ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３３】
別の実施態様において、該２番目の薬剤が抗腫瘍性の抗生物質であり、治療中のガンが
、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、頭頸部ガン、ホジキン病、白血病、多発性骨髄腫、神
経芽細胞腫、卵巣ガン、肉腫、皮膚ガン、精巣ガン、又は甲状腺ガンである。別の実施態
様において、抗生物質がブレオマイシンである。別の実施態様において、抗生物質はブレ
オマイシンであり、治療的有効量は、少なくとも１０ユニット／ｍ２である。他の実施態
様において、抗生物質はブレオマイシンであり、治療的有効量は、週毎、又は２週毎に、
約１０ユニット／ｍ２〜約２０ユニット／ｍ２の静脈内、皮下、又は筋肉内投与量である
。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンである。別の実施態様において、
抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有効量は少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇであ
る。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有効量は、３週
間毎の５日間において、１日につき０．０１０ｍｇ／ｋｇ〜０．０１５ｍｇ／ｋｇの静脈
内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はダクチノマイシンであり、治療的有
効量は３、又は４週間毎に２ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、
抗生物質はダウノルビシンである。別の実施態様において、抗生物質はダウノルビシンで
あり、治療的有効量は、少なくとも３０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、抗生
物質はダウノルビシンであり、治療的有効量は３日間の１日につき、約３０ｍｇ／ｍ２〜
約４５ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はリポソーム
調製のダウノルビシンであり、治療的有効量は、２週間毎に４０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与
量である。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンである。別の実施態様にお
いて、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は、少なくとも１５ｍｇ／ｍ２で
ある。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は３週間
毎に、約６０ｍｇ／ｍ２〜９０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において
、抗生物質はドキソルビシンであり、治療的有効量は、毎週、約１５ｍｇ／ｍ２〜約２０
ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、抗生物質はドキソルビシンで
あり、治療的有効量は、２週間のドキソルビシンの非投与に続いて２週間、毎週３０ｍｇ
／ｍ２の静脈内投与量を含むサイクルである。
【００３４】
別の実施態様において、該２番目の薬剤は、代謝拮抗剤である。別の実施態様において
、代謝拮抗剤は葉酸類似体であり、かつ治療中のガンは乳ガン、頭頸部ガン、白血病、肺
ガン、非ホジキンリンパ腫、又は骨肉腫である。別の実施態様において、葉酸類似体はメ
トトレキセートである。別の実施態様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、
治療的有効量は、少なくとも２．５ｍｇである。別の実施態様において、葉酸類似体はメ
トトレキセートであり、治療的有効量は、１日につき、約２．５ｍｇ〜約５ｍｇの経口投
与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、治療的有効
量は、１週につき２回、約５ｍｇ／ｍ２〜約２５ｍｇ／ｍ２の投与量である。別の実施態
様において、葉酸類似体はメトトレキセートであり、治療的有効量は、２〜３週間毎に、
１週につき５０ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はペ
メトレキセドである。別の実施態様において、葉酸類似体はペメトレキセドであり、治療
的有効量は少なくとも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、葉酸類似体はペ
メトレキセドであり、治療的有効量は２、又は３週間毎に約３００ｍｇ／ｍ２〜約６００
ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様において、葉酸類似体はペメトレキセドで
ああり、治療的有効量は３週間毎に、５００ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。
【００３５】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はプリン類似体であり、治療中のガンは結腸直腸ガ
ン、白血病、又は骨髄腫である。別の実施態様において、プリン類似体はメルカプトプリ
ンである。別の実施態様において、プリン類似体はメルカプトプリンであり、治療的有効
量は少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、プリン類似体はメルカ
プトプリンであり、治療的有効量は、１日につき約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの
経口投与量である。別の実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンである。他の
実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンであり、治療的有効量は、少なくとも
２ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、プリン類似体はチオグアニジンであり、治
療的有効量は、約２ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。
【００３６】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はアデノシン類似体であり、治療中のガンは、白血
病、又はリンパ腫である。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインで
ある。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインであり、治療的有効量
は、少なくとも０．０９ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、アデノシン類似体は
クラドリビインであり、治療的有効量は７日間の１日につき、０．０９ｍｇ／ｋｇの静脈
内投与量である。別の実施態様において、アデノシン類似体はクラドリビインであり、治
療的効果量は、７日間の１日につき４ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様に
おいて、アデノシン類似体はペントスタチンである。別の実施態様において、アデノシン
類似体はペントスタチンであり、治療的有効量は４ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様にお
いて、アデノシン類似体はペントスタチンであり、治療的効果量は隔週毎に、４ｍｇ／ｍ
２の静脈内投与量である。別の実施態様において、アデノシン類似体はペントスタチンで
あり、治療的有効量は、３週間毎に４ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。
【００３７】
別の実施態様において、代謝拮抗剤はピリミジン類似体であり、治療すべきガンは、膀
胱ガン、乳ガン、結腸直腸ガン、食道ガン、頭頸部ガン、白血病、肝臓ガン、リンパ腫、
卵巣ガン、膵臓ガン、皮膚ガン、又は胃ガンである。別の実施態様において、ピリミジン
類似体はシタラビンである。別の実施態様において、ピリミジン類似体はシタラビンであ
り、治療的効果量は、少なくとも１００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ピリ
ミジン類似体はシタラビンであり、治療的有効量は７日間の１日につき１００ｍｇ／ｍ２
の静脈内投与量である。別の実施態様において、ピリミジン類似体はカペシタビンである
。別の実施態様において、ピリミジン類似体はカペシタビンであり、治療的有効量は、少
なくとも一日につき２０００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、ピリミジン類似
体はカペシタビンであり、治療的有効量は、１４日間、約１２００ｍｇ／ｍ２〜約１３０
０ｍｇ／ｍ２の１日２回の経口投与量である。別の実施態様において、ピリミジン類似体
はカペシタビンであり、治療的有効量は３週間サイクルであり、約１２５０ｍｇ／ｍ２の
１日２回投与量は、１週間の休息の後に１４日間与えられる。別の実施態様において、ピ
リミジン類似体はフルオロウラシルである。別の実施態様において、ピリミジン類似体は
フルオロウラシルであり、治療的有効量は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇである。別の実施
態様において、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は、少なくと
も３日間の１日につき、約３００ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である
。別の実施態様において、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は
、３〜５日間の１日につき１２ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。別の実施態様において
、ピリミジン類似体はフルオロウラシルであり、治療的有効量は、毎週、約１０ｍｇ／ｋ
ｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与量である。
【００３８】
別の実施態様において、代謝拮抗剤は置換尿素であり、治療すべきガンが、頭頸部ガン
、白血病、黒色腫、又は卵巣ガンである。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ
尿素である。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ尿素であり、治療的有効量は
、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇである。別の実施態様において、置換尿素はヒドロキシ尿素
であり、治療的有効量は３日毎、８０ｍｇ／ｋｇの経口投与量である。別の実施態様にお
いて、置換尿素はヒドロキシ尿素であり、治療的有効量は、１日につき、約２０ｍｇ／ｋ
ｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の経口投与量である。
【００３９】
別の実施態様において、該２回目の薬剤がプラチナ配位複合体であり、治療中のガンが
、膀胱ガン、乳ガン、子宮頸ガン、結腸ガン、頭頸部ガン、白血病、肺ガン、リンパ腫、
卵巣ガン、肉腫、精巣ガン、又は子宮ガンである。別の実施態様において、プラチナ配位
複合体はカルボプラチンである。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はカルボプ
ラチンであり、治療的有効量は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様にお
いて、プラチナ配位複合体はカルボプラチンであり、治療的有効量は、４週毎に、少なく
とも３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はカルボプラ
チンであり、治療的効果量は４週毎に３００ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、
プラチナ配位複合体はカルボプラチンであり、治療的有効量は４週毎に、少なくとも３６
０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンである
。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンであり、治療的有効量は、
少なくとも２０ｍｇ／ｍ２である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプ
ラチンであり、治療的有効量は３〜４週毎の４〜５日において、１日につき２０ｍｇ／ｍ
２の静脈投与量である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はシスプラチンであ
り、治療的有効量は、３週毎に５０ｍｇ／ｍ２の静脈投与量である。別の実施態様におい
て、プラチナ配位複合体はオキサリプラチンである。別の実施態様において、プラチナ配
位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量は、少なくとも７５ｍｇ／ｍ２である
。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量
は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態様において、プラチ
ナ配位複合体はオキサリプラチンであり、治療的有効量は、２週毎に、約５０ｍｇ／ｍ２
〜約１００ｍｇ／ｍ２の間のIV注入である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体
はオキサリプラチンであり、治療的有効量は２週毎に、約８０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／
ｍ２の間のIV注入である。別の実施態様において、プラチナ配位複合体はオキサリプラチ
ンであり、治療的有効量は、２週毎に８５ｍｇ／ｍ２の２〜４時間にわたるIV注入である
。
【００４０】
別の実施態様において、該２番目の薬剤はトポイソメラーゼII阻害剤であり、治療中の
ガンが、ホジキン病、白血病、小細胞肺ガン、肉腫、又は精巣ガンである。別の実施態様
において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドである。別の実施態様において、トポ
イソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的有効量は、少なくとも３５ｍｇ／ｍ２
である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的
有効量は、約５０ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態様において、
トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療的効果量は、３〜４週毎の５日にお
いて、少なくとも３回、一日につき、約３５ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２の静脈内投与
量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はエトポシドであり、治療
的効果量は３〜４週毎の５日において少なくとも３回、１日につき約５０ｍｇ／ｍ２〜約
１００ｍｇ／ｍ２の静脈内投与量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻
害剤はエトポシドであり、治療的有効量は、３、又は４週につき５日間において少なくと
も３回、１日につき１００ｍｇ／ｍ２の経口投与量である。別の実施態様において、トポ
イソメラーゼII阻害剤はテニポシドである。別の実施態様において、トポイソメラーゼII
阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、少なくとも２０ｍｇ／ｍ２である。別の実
施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、一週
につき１００ｍｇ／ｍ２の投与量である。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻
害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、週に２回、１００ｍｇ／ｍ２の投与量である
。別の実施態様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量
は、５日間で、一日につき、約２０ｍｇ／ｍ２〜６０ｍｇ／ｍ２の間である。別の実施態
様において、トポイソメラーゼII阻害剤はテニポシドであり、治療的有効量は、５日間で
、一日につき約８０ｍｇ／ｍ２〜約９０ｍｇ／ｍ２の間の投与量である。
すべての引用文献は、引用によって本明細書中に組み込まれる。
【実施例】
【００４１】
（実施例１）
（注射、又は静脈内注入に適した医薬組成物）
酸性組成物（＜ｐＨ４）が、ＳＮＳ−５９５の可溶性を適切なバランスで増加させ、好
ましい医薬特性を与えた（例えば、輸送部位における刺激を少なくすることによって、患
者の快適性を増加させる）。適切な組成物の実例は、メタンスルホン酸を用いてｐＨを２
．５に調製した、４．５％ソルビトール溶液の水溶液１ｍＬに対して１０ｍｇのＳＮＳ−
５９５を含む。そのような１００ｍｇ／１０ｍＬの濃度の溶液を作る一つの手順は：１０
０ｍｇのＳＮＳ−５９５、及び４５０ｍｇのＤ−ソルビトールを蒸留水に加え；該体積を
１０ｍＬの容量に合わせ；出来た溶液のｐＨを、メタンスルホン酸を用いて２．５に調製
することを含む。出来た組成物は、凍結乾燥にも適している。凍結乾燥された形態は、使
用に先立って、蒸留水を用いてその後適切な濃度にまでもどされる。
【００４２】
（実施例２）
（ガン患者におけるＳＮＳ−５９５の薬物動態）
ＳＮＳ−５９５を、最高６回周期まで被験患者へ投与した。１周期を３週間として定義
し、各周期の最初の日（０日）にＳＮＳ−５９５を投与して、その後少なくとも２１日間
観察した。ＳＮＳ−５９５を少なくとも３名の患者の集団に投与し、また投与量の段階的
増加を順次集団ごとに行った。ＳＮＳ−５９５の用量は、濃度曲線下面積が無限大の直線
であり、その薬物動態特性は、同集団内の患者間で著しく一致していた。表１は、患者の
経時的なＳＮＳ−５９５の血漿濃度から算出した薬物動態パラメータを示している。
【００４３】
【表１】
【００４４】
（実施例３）
（薬力学研究）
Ｎｕ／ｎｕマウス（約２５グラム）に、５０％マトリゲル(Becton-Dickinson)と共に、
５００万個のＨＣＴＩ細胞（ＡＴＣＣから獲得された）をわき腹に注入した。腫瘍は、４
００ｍｍ３までの成長が許された。異種移植片を有した動物に、それから尾の静脈にＳＮ
Ｓ−５９５（２０、又は４０ｍｇ／ｋｇ）のIVボーラス注入、又は生理食塩水のどちらか
を与えた。所定の時間（投与から１、２、４、８、１６、及び２４時間後）において、動
物をＣＯ２で麻酔し、血液を末端心臓穿刺を介して摂取し、動物は犠牲になった。腫瘍を
切除し、液体窒素で冷却した乳鉢、及び乳棒を用いて粉々にし、液体窒素中で急速冷凍し
た。腫瘍溶解物を、溶解バッファーの添加によって、粉々にされたサンプルから作成した
。
【００４５】
ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質のタンパク濃度を、ウエスタンブロットによって決
定した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの1レーンにつき、約２５マイクログラムのタンパクを充
填した。タンパクを電気泳動ゲルによって分離し、ニトロセルロース膜上に吸い取らせ、
下記の抗体を用いて検出した：S１３９でリン酸化した、H2AX (Cell Signaling, catalog
no. 2577L)；S１５でリン酸化した、ｐ５３(Cell Signaling, catalog no. 9284S)；S３
７でリン酸化した、ｐ５３(Cell Signaling, catalog no. 9289S)；ｐ２１(Cell Signali
ng, catalog no. 2946)；Y１５でリン酸化した、ｃｄｃ２ (Calbiochem, catalog no. 21
9437)；ｃｙｃｌｉｎＢ(Santa Cruz, catalog no.sc- 594 (H-20))；Ｙ９９でリン酸化し
た、ｐ７３(Cell Signaling, catalog no.4665L)；Ｔ７３５でリン酸化した、ｃＡｂｌ(C
ell Signaling, catalog no. 2864S)；及び、Ｓ３１７でリン酸化した、ＣＨＫ１(Cell S
ignaling, catalog no. 2344L)。
図３は、ＳＮＳ−５９５で治療する腫瘍において活性化されたＤＮＡ−ＰＫ経路の典型
的な構成タンパク質のレベルを示している。
【００４６】
（実施例４）
（ＳＮＳ−５９５を用いた組み合わせ研究）
ＨＣＴ１１６細胞を、１００μｌ／ウェルのＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％ウシ胎児
仔血清、１％抗生物質／抗カビ剤、及び１．５％重炭酸ナトリウムを与えられている）と
共に、透明な９６ウェルプレートに約４ｅ５細胞／ウェルの密度で植え、５％ＣＯ２、３
７℃で２４時間培養処理した。ＳＮＳ−５９５を、単独、または一定の割合で別の細胞毒
性化合物と混合して、終濃度が５μＭ〜５ｎＭの間になるように加えた。ＤＭＳＯの終濃
度は、アッセイプレートにおいて１％であった。処理された細胞を、２０μｌ／ウェルの
３−[４，５−ジメチルチアゾール−２−イル]−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化
物（ＭＴＴ）を１時間加える前に、５％ＣＯ２、３７℃で７２時間インキュベートされ、
続いて１００μｌ／ウェルのｎ，ｎ−ジメチルフォルムアミド／ＳＤＳ溶解バッファーに
、少なくとも１６時間インキュベートした。該プレートの吸光度は５９５ｎｍの波長で読
まれる。該データはコンビネーションインデックス（線量効果解析のソフトウエア、Calc
usyn V2(Biosoft)を用いて計算された）を用いた相互作用を定量化する半有効法を用いて
詳しく調べる。コンビネーションインデックスが、０．９０〜１．１０である場合、組み
合わせは、加算的であると言われる。コンビネーションインデックスが０．９０未満であ
る場合、組み合わせは、相乗的であると言われ、コンビネーションインデックスが１．１
０以上の場合、組み合わせが、対立的であると言われる。全てのコンビネーションインデ
ックスが０．５のFa値であった時、細胞の５０％は死んでいた。表２を参照されたい。
【００４７】
【表２】
【００４８】
（実施例５）
ＨＣＴ−１１６結腸ガン細胞を、５％ＣＯ２、１００μｌ／ウェルのＲＰＭＩ−１６４
０培地（１０％ウシ胎児仔血清、１％抗生物質／抗カビ剤、及び１．５％重炭酸ナトリウ
ムを与えられている）と共に、透明な９６ウェルプレートに約４ｅ５細胞／ウェルの密度
で植え、３７℃で２４時間培養処理した。いくつかの細胞は、１００ｎＭのウォートマン
ニンで、８〜１６時間処理した。ＳＮＳ−５９５をそれから連続希釈法として加え、細胞
は、５％ＣＯ２、３７℃で７２時間、インキュベートされた。ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌスト
ック溶液の、２０μｌ／ウェル）を１時間加え、次に少なくとも１６時間、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド／ＳＤＳ溶解バッファーを加えた。吸光度を５９５ｎｍで監視し、デー
タを非線形回帰によって適合し、ウォートマンニンの存在、及び非存在下において、ＳＮ
Ｓ−５９５による細胞の成長（ＩＣ５０）の阻害を決定する。ＨＣＴ−１１６細胞中のＳ
ＮＳ−５９５のためのＩＣ５０は、ウォートマンニン非存在下よりも、存在下において、
３〜６倍低かった。同様な結果は、ＨＣＴ−１１６細胞の代わりにＤＮＡ−ＰＫ欠失細胞
株（約１０倍の感作）を使用した場合に見られた。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、３つの主要なＤＮＡダメージ、及び修復経路を説明している。
【図２】図２は、ＳＮＳ−５９５で処理したＨＣＴ １１６細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の典型的な構成タンパク質の用量依存的な反応を示している。
【図３】図３はマウスの腫瘍における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の典型的な構成タンパク質の活性化を示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療すべきガン細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の、少なくとも１つの構成タンパク質の
始めの量を測定すること、及び該始めの量と２回目の量とを比較することを含む方法。
【請求項２】
前記始めの量が治療前の量であり、前記２回目の量が治療すべきガンと同じ組織に由来
する正常細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量である、請求項１記載の
方法。
【請求項３】
前記ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質が、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲ
Ｅ１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５
３、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３から選択される、請求項２記
載の方法。
【請求項４】
前記始めの量が治療前の量であり、かつ前記２回目の量が治療後の量である、請求項１
記載の方法。
【請求項５】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質が、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲＥ
１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５３
、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３から選択される、請求項４記載
の方法。
【請求項６】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＤＮＡ−ＰＫである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＫｕ７０である、請求項４記載の方法。
【請求項８】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＫｕ８０である、請求項４記載の方法。
【請求項９】
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５、及びｂ）細胞毒性が、また、ＤＮＡ−ＰＫ経路を
媒介した、治療的有効量の２番目の薬剤を含む組み合わせ。
【請求項１０】
前記２番目の薬剤が、非相同的末端結合修復を阻害する薬剤である、請求項９記載の組
み合わせ。
【請求項１１】
前記２番目の薬剤が、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤である、請求項１０記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記２番目の薬剤が、リガーゼIV阻害剤である、請求項１０記載の組み合わせ。
【請求項１３】
前記２番目の薬剤が、アポトーシス増進剤である、請求項９記載の組み合わせ。
【請求項１４】
前記２番目の薬剤が、カスパーゼ−９活性化剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１５】
前記２番目の薬剤が、カスパーゼ−３活性化剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記２番目の薬剤が、Ｈｓｐ９０阻害剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１７】
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５、及びｂ）DNA合成を妨げることのできる、治療的
有効量の２番目の薬剤を含む組み合わせ。
【請求項１８】
前記２番目の薬剤が、アルキル化剤である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項１９】
前記アルキル化剤が、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素
、又はトリアゼンである、請求項１８記載の組み合わせ。
【請求項２０】
前記２番目の薬剤が、抗腫瘍性抗生物質である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２１】
前記２番目の薬剤が、代謝拮抗剤である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２２】
前記代謝拮抗剤が、葉酸類似物質、プリン類似物質、アデノシン類似物質、ピリミジン
類似物質、又はヒドロキシ尿素である、請求項２１記載の組み合わせ。
【請求項２３】
前記２番目の薬剤が、プラチナ配位複合体である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２４】
前記２番目の薬剤が、トポイソメラーゼII阻害剤である、請求項１７記載の組み合わせ
。
【請求項２５】
前記２番目の薬剤が、放射物である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項１】
治療すべきガン細胞におけるＤＮＡ−ＰＫ経路の、少なくとも１つの構成タンパク質の
始めの量を測定すること、及び該始めの量と２回目の量とを比較することを含む方法。
【請求項２】
前記始めの量が治療前の量であり、前記２回目の量が治療すべきガンと同じ組織に由来
する正常細胞における、ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質の量である、請求項１記載の
方法。
【請求項３】
前記ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質が、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲ
Ｅ１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５
３、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３から選択される、請求項２記
載の方法。
【請求項４】
前記始めの量が治療前の量であり、かつ前記２回目の量が治療後の量である、請求項１
記載の方法。
【請求項５】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質が、ＤＮＡ−ＰＫ、Ｋｕ７０、Ｋｕ８０、ＭＲＥ
１１、ＮＢＳ１、ＲＡＤ５０、ＸＲＣＣ４、リガーゼIV、Ｈ２ＡＸ、ｃ−Ａｂｌ、ｐ５３
、ｐ７３、ｐ２１、カスパーゼ−９、及びカスパーゼ−３から選択される、請求項４記載
の方法。
【請求項６】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＤＮＡ−ＰＫである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＫｕ７０である、請求項４記載の方法。
【請求項８】
該ＤＮＡ−ＰＫ経路の構成タンパク質がＫｕ８０である、請求項４記載の方法。
【請求項９】
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５、及びｂ）細胞毒性が、また、ＤＮＡ−ＰＫ経路を
媒介した、治療的有効量の２番目の薬剤を含む組み合わせ。
【請求項１０】
前記２番目の薬剤が、非相同的末端結合修復を阻害する薬剤である、請求項９記載の組
み合わせ。
【請求項１１】
前記２番目の薬剤が、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤である、請求項１０記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記２番目の薬剤が、リガーゼIV阻害剤である、請求項１０記載の組み合わせ。
【請求項１３】
前記２番目の薬剤が、アポトーシス増進剤である、請求項９記載の組み合わせ。
【請求項１４】
前記２番目の薬剤が、カスパーゼ−９活性化剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１５】
前記２番目の薬剤が、カスパーゼ−３活性化剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記２番目の薬剤が、Ｈｓｐ９０阻害剤である、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１７】
ａ）治療的有効量のＳＮＳ−５９５、及びｂ）DNA合成を妨げることのできる、治療的
有効量の２番目の薬剤を含む組み合わせ。
【請求項１８】
前記２番目の薬剤が、アルキル化剤である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項１９】
前記アルキル化剤が、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素
、又はトリアゼンである、請求項１８記載の組み合わせ。
【請求項２０】
前記２番目の薬剤が、抗腫瘍性抗生物質である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２１】
前記２番目の薬剤が、代謝拮抗剤である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２２】
前記代謝拮抗剤が、葉酸類似物質、プリン類似物質、アデノシン類似物質、ピリミジン
類似物質、又はヒドロキシ尿素である、請求項２１記載の組み合わせ。
【請求項２３】
前記２番目の薬剤が、プラチナ配位複合体である、請求項１７記載の組み合わせ。
【請求項２４】
前記２番目の薬剤が、トポイソメラーゼII阻害剤である、請求項１７記載の組み合わせ
。
【請求項２５】
前記２番目の薬剤が、放射物である、請求項１７記載の組み合わせ。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−１４０４４２（Ｐ２０１２−１４０４４２Ａ）
【公開日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−３６９１９（Ｐ２０１２−３６９１９）
【出願日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【分割の表示】特願２００７−５０３９７２（Ｐ２００７−５０３９７２）の分割
【原出願日】平成１７年３月１４日（２００５．３．１４）
【出願人】（５００５８６６３５）サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【分割の表示】特願２００７−５０３９７２（Ｐ２００７−５０３９７２）の分割
【原出願日】平成１７年３月１４日（２００５．３．１４）
【出願人】（５００５８６６３５）サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
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