ＴＩＥ１結合リガンド
Ｔｉｅ１は膜貫通ドメインを含むレセプターチロシンキナーゼタンパク質である。Ｔｉｅ１は、内皮細胞上に存在する。本明細書の開示は、内皮細胞活性を阻害する抗体等、Ｔｉｅ１に結合する抗体を記載した。一つの特徴において、本発明は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質（例えば、単離されたタンパク質）により特徴付けられる。タンパク質はＴｉｅ１外部ドメインに結合する。例えば、タンパク質は、１０−８Ｍ、５〜１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍまたは１０−１２Ｍ未満の親和性ＫＤで結合する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、該タンパク質がＴｉｅ１外部ドメインに結合し、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ１：
（ＡＧＳＲ）−Ｙ−（ＧＶＫ）−Ｍ−（ＧＳＶＦ）（配列番号１１７）
（ＡＧＳＩＭＲＨ）−Ｙ−（ＧＶＭＫ）−Ｍ−（ＧＳＶＭＦＨ）（配列番号１１８）または
（ＡＧＳＩＭＲＮＨ）−Ｙ−（ＡＧＴＶＭＫＰＱ）−Ｍ−（ＡＧＳＴＶＭＹＷＦＫＨ）（配列番号１１９）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２：
Ｘ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｘ−Ｔ−Ｘ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号１２０）（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）、
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＱ）−Ｔ−（ＧＹ）（配列番号１２１）、
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＮＱ）−Ｔ−（ＧＹ）（配列番号１６０）
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＱ）−Ｔ−（ＧＹ）−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号１２２）または
（ＧＳＶＷ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＡＧＶＭＹＷＰＱＨ）−Ｔ−（ＡＧＳＴＬＶＭＹＦＫＨ）（配列番号１２３）；
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３：
Ｖ−（４または５残基）−Ｆ−Ｄ−（Ｉ／Ｙ）（配列番号１２４）、
Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｉ−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２５）、
（ＧＶ）−Ｎ−Ｙ−Ｙ−（ＧＹＤ）−Ｓ−（ＳＤ）−Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｉ−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２６）、
（ＧＶＤ）−（ＡＧＬＮ）−（ＬＹＲ）−（ＧＳＴＬＹＨ）−（ＧＹＤ）−（ＡＧＳＹＦＰ）−（ＳＦＤ）−（ＡＧＹＤ）−（ＩＹ）−（ＧＦＤ）−（ＹＤＰ）−（ＩＰ）−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２７）または
ＶＮＹＹＤＳＳＧＹＧＰＩＡＰＧＬＤＹ（配列番号１２８）、
の一つ以上を含む、単離されたタンパク質。
【請求項２】
前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ１：
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＩＶ）−Ｓ−（ＳＲ）−Ｘ１−Ｙ−Ｌ−（ＡＮ）（配列番号１２９）、
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｓ−Ｘ−Ｌ（配列番号１３０）、
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＩＶ）−Ｓ−（ＳＲ）−（ＳＹ）−（ＬＹ）−（ＡＬＮ）（配列番号１３１）または
Ｒ−Ａ−Ｓ−（ＲＥＱ）−（ＧＳＴＲＮ）−（ＩＶ）−（ＧＳＴＩＲＮ）−（ＳＴＩＲＨ）−Ｘ１−（ＳＹＷＮＨ）−（ＬＶ）−（ＡＳＮ）（配列番号１３２）（式中、Ｘ１はセリンであるか、または存在しなくてもよい）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２：
Ｘ−Ａ−Ｓ−Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｔ（配列番号１３３）（式中、Ｘは任意のアミノ酸であり得る）、
（ＡＧＤ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−Ｒ−Ａ−Ｔ（配列番号１３４）、
（ＡＧＤ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−（ＬＲ）−（ＡＥＱ）−（ＳＴ）（配列番号１３５）または
（ＡＧＴＫＤＥＨ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−（ＬＲ）−（ＡＶＥＱ）−（ＳＴ）（配列番号１３６）；および
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３：
Ｑ−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−Ｓ−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲ）−（ＴＩＹ）−Ｔ（配列番号１３７）、
Ｑ−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−Ｓ−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲＨ）−（ＴＩＹ）（配列番号１６１）、
（ＬＱ）−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−（ＳＫＮ）−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲ）−（ＴＩＹ）−Ｔ（配列番号１３８）、
Ｑ−Ｑ−（ＹＲ）−（ＧＳ）−Ｓ−（ＳＷ）−Ｐ−Ｒ−Ｘ１−Ｔ（配列番号１３９）（式中、Ｘ１は任意のアミノ酸か、または存在しない）、
（ＬＱ）−（ＬＱ）−（ＳＹＦＲＤ）−（ＧＳＹＮ）−（ＳＴＲＫＮ）−（ＳＴＹＷＦ）−（ＲＰ）−（ＩＬＭＷＲＨ）−（ＴＩＹ）−（ＴＩ）（配列番号１４０）および
（ＬＱ）−（ＬＲＱ）−（ＳＹＦＲＤ）−（ＧＳＹＮ）−（ＡＳＴＲＫＮ）−（ＳＴＹＷＦ）−（ＳＶＲＰ）−（ＳＴＩＬＭＷＲＨ）−（ＴＩＹ）−（ＳＴＩ）（配列番号１４１）、
の一つ以上を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ１：
Ｓ−Ｘ−（ＮＤ）−（ＩＶ）−（ＡＧ）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３（配列番号１４２）または
Ｔ−（ＧＲ）−（ＳＴ）−Ｓ−Ｘ５−（ＮＤ）−（ＩＶ）−（ＡＧ）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｙ−Ｘ４−Ｓ（配列番号１４３）
（式中、Ｘ１は任意のアミノ酸（例えば、ＧまたはＲ）であり、Ｘ２は任意のアミノ酸（例えば、ＹまたはＮ）であり、Ｘ３は任意のアミノ酸（例えば、Ｆ、ＮまたはＫ）であり、Ｘ４は任意のアミノ酸（例えば、脂肪族、例えばＶまたはＡ）である）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２：
（ＤＥ）−Ｖ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ｐ−Ｓ（配列番号１４４）または
（ＤＥ）−（ＶＤ）−（ＳＴＤＮ）−（ＹＲＤＮ）−Ｒ−Ｐ−Ｓ（配列番号１４５）；ならびに
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３：
（ＳＱ）−Ｓ−（ＳＹ）−（ＡＳＩＤ）−（ＧＳＲ）−（ＳＴ）−（ＳＴＲＮ）−（ＳＴＹＲ）−（ＡＴＬＹ）−（ＳＶＷＱ）（配列番号１４６）、
の一つ以上を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記ＨＣ可変ドメイン配列が、配列番号１１８および配列番号１６０を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項５】
ＬＣ可変ドメイン配列が配列番号１３２、配列番号１３６および配列番号１６１を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記ＨＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４のＨＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ＬＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４のＬＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記ＨＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、Ｅ３クローンからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、前記ＬＣ可変ドメイン配列が、Ｅ３クローンからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記ＬＣ可変ドメイン配列が配列番号１５９を含む、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記ＨＣ可変ドメイン配列が配列番号１１４を含む、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記ＨＣおよびＬＣフレームワーク領域がヒトのものである、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項１２】
さらにＦｃドメインを含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４の定常ドメインを含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、該タンパク質は、Ｔｉｅ１外部ドメインおよび内皮細胞に結合するが、血小板には実質的に結合しない、単離されたタンパク質。
【請求項１５】
Ｔｉｅ１に５ｎＭ未満のＫｄで結合する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１６】
Ｅ３抗体のＨＣ免疫グロブリン可変ドメインおよびＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン、または該Ｅ３抗体の該ＨＣ免疫グロブリン可変ドメインおよび該ＬＣ免疫グロブリン可変ドメインのそれぞれに、少なくとも８５％同一であるドメインを含む、請求項１４に記載の単離されたタンパク質。
【請求項１７】
ＨＵＶＥＣ細胞による管形成をインビトロで阻害する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１８】
組織学的切片中のメラノーマ関連構造物を認識する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１９】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、該タンパク質がＴｉｅ１外部ドメインに結合し、Ｔｉｅ１への結合に対してＥ３と競合するか、またはＥ３により認識されるエピトープとオーバーラップするエピトープか、またはＥ３により認識されるエピトープと共通する少なくとも一つ、二つまたは三つの残基を有するエピトープに結合する、単離されたタンパク質。
【請求項２０】
単離された核酸であって、該核酸は、免疫グロブリンＨＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードするコード配列を含み、ここで、該コード配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４の該ＨＣ可変ドメインをコードする参照配列と少なくとも８５％同一であるか、または該コード配列が、該参照配列またはその補体にハイブリダイズする、単離された核酸。
【請求項２１】
さらに、免疫グロブリンＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二のコード配列を含む、請求項２０に記載の核酸。
【請求項２２】
単離された核酸であって、該核酸は、免疫グロブリンＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードするコード配列を含み、ここで、該コード配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４の該ＨＣ可変ドメインをコードする参照配列と少なくとも８５％同一であるか、または該コード配列が、該参照配列またはその補体にハイブリダイズする、単離された核酸。
【請求項２３】
さらに、免疫グロブリンＨＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二のコード配列を含む、請求項２２に記載の核酸。
【請求項２４】
宿主細胞であって、該細胞は、抗体のＨＣ可変ドメインを含む、ポリペプチドをコードする第一の核酸配列および該抗体のＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二の核酸配列を包含し、ここで、該抗体が請求項１または１４に記載のタンパク質である、宿主細胞。
【請求項２５】
宿主細胞であって、該細胞は、ＨＣ可変領域を含むポリペプチドをコードする第一の核酸配列およびＬＣ可変領域からなるポリペプチドをコードする第二の核酸配列を包含し、ここで、該ＨＣ可変領域および該ＬＣ可変領域がそれぞれ、Ｅ３、Ｇ２、ｐ−Ａ１、ｐ−Ａ１０、ｐ−Ｂ１、ｐ−Ｂ３、ｐ−Ｃ６、ｐ−Ｄ１２、ｐ−Ｆ３、ｐ−Ｆ４、ｐ−Ｇ３、ｓ−Ａ１０、ｓ−Ｈ１、ｓ−Ａ２、ｓ−Ｂ２、ｓ−Ｂ９、ｓ−Ｃ１０、ｓ−Ｃ２、ｓ−Ｃ７、ｓ−Ｄ１１、ｓ−Ｅ１１、ｓ−Ｇ１０およびｓ−Ｈ４からなる群から選択されるクローンのＨＣ可変ドメインとＬＣ可変ドメインのそれぞれのアミノ酸配列に、少なくとも８５％同一である配列を含む、宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載のタンパク質および薬学的に受容可能なキャリアからなる、薬学的組成物。
【請求項２７】
血管形成の調節方法であって、該方法は、請求項１または１４に記載のタンパク質を含む組成物を、被験体の血管形成を調節するのに有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記タンパク質がＴｉｅ１活性を中和する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体が血管形成関連疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体が腫瘍疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験体が転移性癌を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験体が血管形成に依存する癌または腫瘍を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体が炎症性疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体がリューマチ性関節炎を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体が乾癬を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記タンパク質が全身に送達される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
前記タンパク質が、血管の発芽、分裂および再構築の、一つ以上の活性を減少するのに有効な量で投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
前記タンパク質が、脈管形成または細管形成を減少するのに有効な量で投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
被験体において内皮細胞活性を調節する方法であって、該方法は、
請求項１４に記載のタンパク質を含む組成物を、該被験体において内皮細胞活性を調節するのに有効な量で該被験体に投与する工程
を包含する、方法。
【請求項４０】
インビトロでサンプル中のＴｉｅ１タンパク質の存在を検出する方法であって、該方法は、
ｉ）該サンプルを、請求項１に記載のＴｉｅ１結合タンパク質に、該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該Ｔｉｅ１タンパク質との相互作用が起こる条件下で接触させる工程；および
（ｉｉ）該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該サンプルとの間の複合体の形成を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項４１】
インビボでＴｉｅ１の存在を検出する方法であって、該方法は、
ｉ）ヒト被験体に、Ｔｉｅ１結合タンパク質を、Ｔｉｅ１結合リガンドと該Ｔｉｅ１タンパク質の相互作用が起こる条件下で接触させる工程；および
（ｉｉ）該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該被験体のＴｉｅ１分子との間の複合体の形成を検出するか、または該被験体中のＴｉｅ１結合タンパク質の分布または該Ｔｉｅ１結合タンパク質の少なくとも一つの位置を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項１】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、該タンパク質がＴｉｅ１外部ドメインに結合し、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ１：
（ＡＧＳＲ）−Ｙ−（ＧＶＫ）−Ｍ−（ＧＳＶＦ）（配列番号１１７）
（ＡＧＳＩＭＲＨ）−Ｙ−（ＧＶＭＫ）−Ｍ−（ＧＳＶＭＦＨ）（配列番号１１８）または
（ＡＧＳＩＭＲＮＨ）−Ｙ−（ＡＧＴＶＭＫＰＱ）−Ｍ−（ＡＧＳＴＶＭＹＷＦＫＨ）（配列番号１１９）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２：
Ｘ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｘ−Ｔ−Ｘ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号１２０）（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）、
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＱ）−Ｔ−（ＧＹ）（配列番号１２１）、
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＮＱ）−Ｔ−（ＧＹ）（配列番号１６０）
（ＧＳＶ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＷＱ）−Ｔ−（ＧＹ）−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号１２２）または
（ＧＳＶＷ）−Ｉ−（ＳＹ）−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−（ＡＧＶＭＹＷＰＱＨ）−Ｔ−（ＡＧＳＴＬＶＭＹＦＫＨ）（配列番号１２３）；
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３：
Ｖ−（４または５残基）−Ｆ−Ｄ−（Ｉ／Ｙ）（配列番号１２４）、
Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｉ−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２５）、
（ＧＶ）−Ｎ−Ｙ−Ｙ−（ＧＹＤ）−Ｓ−（ＳＤ）−Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｉ−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２６）、
（ＧＶＤ）−（ＡＧＬＮ）−（ＬＹＲ）−（ＧＳＴＬＹＨ）−（ＧＹＤ）−（ＡＧＳＹＦＰ）−（ＳＦＤ）−（ＡＧＹＤ）−（ＩＹ）−（ＧＦＤ）−（ＹＤＰ）−（ＩＰ）−Ａ−Ｐ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号１２７）または
ＶＮＹＹＤＳＳＧＹＧＰＩＡＰＧＬＤＹ（配列番号１２８）、
の一つ以上を含む、単離されたタンパク質。
【請求項２】
前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ１：
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＩＶ）−Ｓ−（ＳＲ）−Ｘ１−Ｙ−Ｌ−（ＡＮ）（配列番号１２９）、
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｓ−Ｘ−Ｌ（配列番号１３０）、
Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＩＶ）−Ｓ−（ＳＲ）−（ＳＹ）−（ＬＹ）−（ＡＬＮ）（配列番号１３１）または
Ｒ−Ａ−Ｓ−（ＲＥＱ）−（ＧＳＴＲＮ）−（ＩＶ）−（ＧＳＴＩＲＮ）−（ＳＴＩＲＨ）−Ｘ１−（ＳＹＷＮＨ）−（ＬＶ）−（ＡＳＮ）（配列番号１３２）（式中、Ｘ１はセリンであるか、または存在しなくてもよい）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２：
Ｘ−Ａ−Ｓ−Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｔ（配列番号１３３）（式中、Ｘは任意のアミノ酸であり得る）、
（ＡＧＤ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−Ｒ−Ａ−Ｔ（配列番号１３４）、
（ＡＧＤ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−（ＬＲ）−（ＡＥＱ）−（ＳＴ）（配列番号１３５）または
（ＡＧＴＫＤＥＨ）−Ａ−Ｓ−（ＳＴＮ）−（ＬＲ）−（ＡＶＥＱ）−（ＳＴ）（配列番号１３６）；および
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３：
Ｑ−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−Ｓ−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲ）−（ＴＩＹ）−Ｔ（配列番号１３７）、
Ｑ−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−Ｓ−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲＨ）−（ＴＩＹ）（配列番号１６１）、
（ＬＱ）−Ｑ−（ＳＹＦＲ）−（ＧＳＹＮ）−（ＳＫＮ）−（ＳＴＹＷ）−（ＲＰ）−（ＬＷＲ）−（ＴＩＹ）−Ｔ（配列番号１３８）、
Ｑ−Ｑ−（ＹＲ）−（ＧＳ）−Ｓ−（ＳＷ）−Ｐ−Ｒ−Ｘ１−Ｔ（配列番号１３９）（式中、Ｘ１は任意のアミノ酸か、または存在しない）、
（ＬＱ）−（ＬＱ）−（ＳＹＦＲＤ）−（ＧＳＹＮ）−（ＳＴＲＫＮ）−（ＳＴＹＷＦ）−（ＲＰ）−（ＩＬＭＷＲＨ）−（ＴＩＹ）−（ＴＩ）（配列番号１４０）および
（ＬＱ）−（ＬＲＱ）−（ＳＹＦＲＤ）−（ＧＳＹＮ）−（ＡＳＴＲＫＮ）−（ＳＴＹＷＦ）−（ＳＶＲＰ）−（ＳＴＩＬＭＷＲＨ）−（ＴＩＹ）−（ＳＴＩ）（配列番号１４１）、
の一つ以上を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が以下の特徴：
ｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ１：
Ｓ−Ｘ−（ＮＤ）−（ＩＶ）−（ＡＧ）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３（配列番号１４２）または
Ｔ−（ＧＲ）−（ＳＴ）−Ｓ−Ｘ５−（ＮＤ）−（ＩＶ）−（ＡＧ）−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｙ−Ｘ４−Ｓ（配列番号１４３）
（式中、Ｘ１は任意のアミノ酸（例えば、ＧまたはＲ）であり、Ｘ２は任意のアミノ酸（例えば、ＹまたはＮ）であり、Ｘ３は任意のアミノ酸（例えば、Ｆ、ＮまたはＫ）であり、Ｘ４は任意のアミノ酸（例えば、脂肪族、例えばＶまたはＡ）である）；
ｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２：
（ＤＥ）−Ｖ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ｐ−Ｓ（配列番号１４４）または
（ＤＥ）−（ＶＤ）−（ＳＴＤＮ）−（ＹＲＤＮ）−Ｒ−Ｐ−Ｓ（配列番号１４５）；ならびに
ｉｉｉ）下記のアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３：
（ＳＱ）−Ｓ−（ＳＹ）−（ＡＳＩＤ）−（ＧＳＲ）−（ＳＴ）−（ＳＴＲＮ）−（ＳＴＹＲ）−（ＡＴＬＹ）−（ＳＶＷＱ）（配列番号１４６）、
の一つ以上を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記ＨＣ可変ドメイン配列が、配列番号１１８および配列番号１６０を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項５】
ＬＣ可変ドメイン配列が配列番号１３２、配列番号１３６および配列番号１６１を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記ＨＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４のＨＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ＬＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４のＬＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記ＨＣ可変ドメイン配列の前記アミノ酸配列が、Ｅ３クローンからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、前記ＬＣ可変ドメイン配列が、Ｅ３クローンからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記ＬＣ可変ドメイン配列が配列番号１５９を含む、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記ＨＣ可変ドメイン配列が配列番号１１４を含む、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記ＨＣおよびＬＣフレームワーク領域がヒトのものである、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項１２】
さらにＦｃドメインを含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４の定常ドメインを含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、該タンパク質は、Ｔｉｅ１外部ドメインおよび内皮細胞に結合するが、血小板には実質的に結合しない、単離されたタンパク質。
【請求項１５】
Ｔｉｅ１に５ｎＭ未満のＫｄで結合する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１６】
Ｅ３抗体のＨＣ免疫グロブリン可変ドメインおよびＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン、または該Ｅ３抗体の該ＨＣ免疫グロブリン可変ドメインおよび該ＬＣ免疫グロブリン可変ドメインのそれぞれに、少なくとも８５％同一であるドメインを含む、請求項１４に記載の単離されたタンパク質。
【請求項１７】
ＨＵＶＥＣ細胞による管形成をインビトロで阻害する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１８】
組織学的切片中のメラノーマ関連構造物を認識する、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１９】
単離されたタンパク質であって、該タンパク質は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、該タンパク質がＴｉｅ１外部ドメインに結合し、Ｔｉｅ１への結合に対してＥ３と競合するか、またはＥ３により認識されるエピトープとオーバーラップするエピトープか、またはＥ３により認識されるエピトープと共通する少なくとも一つ、二つまたは三つの残基を有するエピトープに結合する、単離されたタンパク質。
【請求項２０】
単離された核酸であって、該核酸は、免疫グロブリンＨＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードするコード配列を含み、ここで、該コード配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４の該ＨＣ可変ドメインをコードする参照配列と少なくとも８５％同一であるか、または該コード配列が、該参照配列またはその補体にハイブリダイズする、単離された核酸。
【請求項２１】
さらに、免疫グロブリンＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二のコード配列を含む、請求項２０に記載の核酸。
【請求項２２】
単離された核酸であって、該核酸は、免疫グロブリンＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードするコード配列を含み、ここで、該コード配列が、クローンＥ３、クローンＧ２、クローンｐ−Ａ１、クローンｐ−Ａ１０、クローンｐ−Ｂ１、クローンｐ−Ｂ３、クローンｐ−Ｃ６、クローンｐ−Ｄ１２、クローンｐ−Ｆ３、クローンｐ−Ｆ４、クローンｐ−Ｇ３、クローンｓ−Ａ１０、クローンｓ−Ｈ１、クローンｓ−Ａ２、クローンｓ−Ｂ２、クローンｓ−Ｂ９、クローンｓ−Ｃ１０、クローンｓ−Ｃ２、クローンｓ−Ｃ７、クローンｓ−Ｄ１１、クローンｓ−Ｅ１１、クローンｓ−Ｇ１０またはクローンｓ−Ｈ４の該ＨＣ可変ドメインをコードする参照配列と少なくとも８５％同一であるか、または該コード配列が、該参照配列またはその補体にハイブリダイズする、単離された核酸。
【請求項２３】
さらに、免疫グロブリンＨＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二のコード配列を含む、請求項２２に記載の核酸。
【請求項２４】
宿主細胞であって、該細胞は、抗体のＨＣ可変ドメインを含む、ポリペプチドをコードする第一の核酸配列および該抗体のＬＣ可変ドメインを含むポリペプチドをコードする第二の核酸配列を包含し、ここで、該抗体が請求項１または１４に記載のタンパク質である、宿主細胞。
【請求項２５】
宿主細胞であって、該細胞は、ＨＣ可変領域を含むポリペプチドをコードする第一の核酸配列およびＬＣ可変領域からなるポリペプチドをコードする第二の核酸配列を包含し、ここで、該ＨＣ可変領域および該ＬＣ可変領域がそれぞれ、Ｅ３、Ｇ２、ｐ−Ａ１、ｐ−Ａ１０、ｐ−Ｂ１、ｐ−Ｂ３、ｐ−Ｃ６、ｐ−Ｄ１２、ｐ−Ｆ３、ｐ−Ｆ４、ｐ−Ｇ３、ｓ−Ａ１０、ｓ−Ｈ１、ｓ−Ａ２、ｓ−Ｂ２、ｓ−Ｂ９、ｓ−Ｃ１０、ｓ−Ｃ２、ｓ−Ｃ７、ｓ−Ｄ１１、ｓ−Ｅ１１、ｓ−Ｇ１０およびｓ−Ｈ４からなる群から選択されるクローンのＨＣ可変ドメインとＬＣ可変ドメインのそれぞれのアミノ酸配列に、少なくとも８５％同一である配列を含む、宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載のタンパク質および薬学的に受容可能なキャリアからなる、薬学的組成物。
【請求項２７】
血管形成の調節方法であって、該方法は、請求項１または１４に記載のタンパク質を含む組成物を、被験体の血管形成を調節するのに有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記タンパク質がＴｉｅ１活性を中和する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体が血管形成関連疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体が腫瘍疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験体が転移性癌を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験体が血管形成に依存する癌または腫瘍を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体が炎症性疾患を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体がリューマチ性関節炎を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体が乾癬を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記タンパク質が全身に送達される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
前記タンパク質が、血管の発芽、分裂および再構築の、一つ以上の活性を減少するのに有効な量で投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
前記タンパク質が、脈管形成または細管形成を減少するのに有効な量で投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
被験体において内皮細胞活性を調節する方法であって、該方法は、
請求項１４に記載のタンパク質を含む組成物を、該被験体において内皮細胞活性を調節するのに有効な量で該被験体に投与する工程
を包含する、方法。
【請求項４０】
インビトロでサンプル中のＴｉｅ１タンパク質の存在を検出する方法であって、該方法は、
ｉ）該サンプルを、請求項１に記載のＴｉｅ１結合タンパク質に、該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該Ｔｉｅ１タンパク質との相互作用が起こる条件下で接触させる工程；および
（ｉｉ）該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該サンプルとの間の複合体の形成を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項４１】
インビボでＴｉｅ１の存在を検出する方法であって、該方法は、
ｉ）ヒト被験体に、Ｔｉｅ１結合タンパク質を、Ｔｉｅ１結合リガンドと該Ｔｉｅ１タンパク質の相互作用が起こる条件下で接触させる工程；および
（ｉｉ）該Ｔｉｅ１結合タンパク質と該被験体のＴｉｅ１分子との間の複合体の形成を検出するか、または該被験体中のＴｉｅ１結合タンパク質の分布または該Ｔｉｅ１結合タンパク質の少なくとも一つの位置を検出する工程
を包含する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００７−５２８７２０（Ｐ２００７−５２８７２０Ａ）
【公表日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２３３５７（Ｐ２００６−５２３３５７）
【出願日】平成１６年８月１２日（２００４．８．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６１１６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１９２６７
【国際公開日】平成１７年３月３日（２００５．３．３）
【出願人】（５０４３２６８０４）ダイアックス コーポレイション (8)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月１２日（２００４．８．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６１１６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１９２６７
【国際公開日】平成１７年３月３日（２００５．３．３）
【出願人】（５０４３２６８０４）ダイアックス コーポレイション (8)
【Ｆターム（参考）】
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