ＴＳＧ１０１−ＧＡＧ相互作用およびその使用
【課題】Ｔｓｇ１０１およびＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６を含む単離されたタンパク質複合体の使用。
【解決手段】ヒト腫瘍感受性遺伝子１０１（「Ｔｓｇ１０１」）がＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用する。Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６によって形成されたタンパク質複合体ならびにＴｓｇ１０１のみをスクリーニングアッセイに使用し、Ｔｓｇ１０１ならびにＴｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６とを含むタンパク質複合体の機能および活性を調整することができる化合物であり、同定された化合物は、レンチウイルス増殖（特に、ＨＩＶ増殖）の阻害ならびにＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ治療に有用であり、タンパク質複合体は、タンパク質複合体内でのＴｓｇ１０１−ＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６相互作用の調整に有効な化合物を選択するためのスクリーニングアッセイに利用できる。
【解決手段】ヒト腫瘍感受性遺伝子１０１（「Ｔｓｇ１０１」）がＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用する。Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６によって形成されたタンパク質複合体ならびにＴｓｇ１０１のみをスクリーニングアッセイに使用し、Ｔｓｇ１０１ならびにＴｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６とを含むタンパク質複合体の機能および活性を調整することができる化合物であり、同定された化合物は、レンチウイルス増殖（特に、ＨＩＶ増殖）の阻害ならびにＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ治療に有用であり、タンパク質複合体は、タンパク質複合体内でのＴｓｇ１０１−ＨＩＶ ＧＡＧまたはＧＡＧｐ６相互作用の調整に有効な化合物を選択するためのスクリーニングアッセイに利用できる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを含むレトロウイルスＧＡＧポリペプチドまたは前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである第２のタンパク質と相互作用するＴｓｇ１０１またはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである第１のタンパク質を含む、単離されたタンパク質複合体。
【請求項２】
前記第１のタンパク質が、
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）前記Ｔｓｇ１０１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質のホモログ、または前記Ｔｓｇ１０１タンパク質のフラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択される、請求項１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項３】
前記第２のタンパク質が、
（１）Ｐ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを有するレトロウイルスＧＡＧポリペプチドと、
（２）前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し、Ｔｓｇ１０１と相互作用することができる前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのホモログと、
（３）Ｔｓｇ１０１と相互作用することができる前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのフラグメントと、
（４）前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチド、前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドホモログ、または前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドフラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項４】
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項１、請求項２、または請求項３に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項５】
前記レンチウイルスが霊長類レンチウイルスである、請求項４に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項６】
前記霊長類レンチウイルスが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３、およびサル免疫不全ウイルス類からなる群から選択される、請求項５に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項７】
前記レンチウイルスが、ウシレンチウイルス類、ネコレンチウイルス類、およびヒツジ／ヤギレンチウイルス類からなる群から選択される非霊長類レンチウイルスである、請求項４に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項８】
前記第２のタンパク質が、ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドまたはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項９】
前記第２のタンパク質が（ａ）ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドまたは（ｂ）ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドフラグメントを含む融合タンパク質である、請求項１〜６および８のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１０】
前記第２のタンパク質が、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６またはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである、請求項１〜６、８、および９のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１１】
前記第２のタンパク質が、（ａ）ＨＩＶ ＧＡＧｐ６ポリペプチドまたは（ｂ）ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントを含む融合タンパク質である、請求項１〜６、８、９、および１０のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１２】
前記ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントが配列番号３１または配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項１０または請求項１１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１３】
前記ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントが、天然に存在するＨＩＶ ＧＡＧｐ６の少なくとも１０アミノ酸残基の連続スパンを有し、該連続スパンがＰ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを含む、請求項１０または１１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１４】
前記第１のタンパク質および前記第２のタンパク質を得るステップと、
該第１のタンパク質に該第２のタンパク質を接触させるステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体の産生方法。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体を含むタンパク質マイクロアレイ。
【請求項１６】
第２のポリペプチドに共有結合した第１のポリペプチドを有し、前記第１のポリペプチドがＴｓｇ１０１またはそのホモログもしくはフラグメントであり、前記第２のポリペプチドがＨＩＶ ＧＡＧまたはそのホモログもしくはフラグメントである、融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１６に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項１８】
タンパク質複合体を得るステップと、
前記タンパク質複合体に試験化合物を接触させるステップと、
前記試験化合物の前記タンパク質複合体への結合の有無を決定するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項１９】
１つまたは複数の試験化合物の存在下で前記第１のタンパク質に前記第２のタンパク質を接触させるステップと、
前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を検出するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項２０】
前記タンパク質複合体に試験化合物を接触させるステップと、
前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を検出するステップとを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項２１】
前記第１のタンパク質および第２のタンパク質の少なくとも１つが検出可能なタグを有する融合タンパク質である、請求項１８、１９、または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記接触ステップを実質的に無細胞の環境下で行う、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記接触ステップを宿主細胞において行う、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
宿主細胞中に前記第１のタンパク質を有する第１の融合タンパク質と、第２のタンパク質を有する第２の融合タンパク質とを得るステップであって、ＤＮＡ結合ドメインが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との一方に融合し、転写活性化ドメインが前記第１のタンパク質と第２のタンパク質との他方に融合しており、
前記宿主細胞中にレポーター遺伝子を得るステップであって、該レポーター遺伝子の転写を、前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用によって決定し、
試験化合物の存在下、前記宿主細胞内において、前記第１の融合タンパク質と前記第２の融合タンパク質とを相互作用させるステップと、
前記レポーター遺伝子発現の有無を決定するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質複合体の第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用のモジュレーターを選択する方法。
【請求項２６】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第１のタンパク質をコードする核酸を有する第１の発現ベクターと、
（ｂ）請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第２のタンパク質をコードする核酸を有する第２の発現ベクターと
を含む組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の前記第１の発現ベクターと前記第２の発現ベクターとを含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第１のタンパク質をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のプロモーターを有する第１の発現カセットと、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第２のタンパク質をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のプロモーターを有する第２の発現カセットと
を含む宿主細胞。
【請求項３０】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２８または２９に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
前記第１の核酸および第２の核酸の一方がＤＮＡ結合ドメインをコードする核酸に連結され、前記第１の核酸および第２の核酸の他方が転写活性化ドメインをコードする核酸に連結され、それにより２つの融合タンパク質を前記宿主細胞中において産生することができる、請求項２８、２９、または３０の宿主細胞。
【請求項３２】
レポーター遺伝子をさらに含み、該レポーター遺伝子の発現を前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用によって決定する、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３３】
タンパク質複合体の三次元構造を定義する原子座標を得るステップと、
該原子座標に基づいて、第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を設計または選択するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体中の第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を得る方法。
【請求項３４】
試験化合物に、
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）Ｔｓｇ１０１と少なくと９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質ホモログ、またはＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択されるタンパク質を接触させるステップと、
前記試験化合物が前記タンパク質に結合することができるかどうかを決定するステップと
を含む、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を阻害することができる化合物の選択方法。
【請求項３５】
前記タンパク質に結合することができる試験化合物の、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を妨害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記タンパク質に結合することができる試験化合物の、ＨＩＶに感染した宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）Ｔｓｇ１０１と少なくと９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質ホモログ、またはＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択されるタンパク質の三次元構造を定義する原子座標を得るステップと、
該原子座標に基づいて、前記タンパク質と相互作用することができる化合物を設計または選択するステップと
を含む、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を阻害することができる化合物の選択方法。
【請求項３８】
前記タンパク質と相互作用することができる化合物の、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を妨害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記タンパク質と相互作用することができる試験化合物の、ＨＩＶに感染した宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質複合体と選択的に免疫反応性を示す単離された抗体。
【請求項４１】
細胞中のタンパク質複合体の濃度を減少させるステップを含む、ＨＩＶ ＧＡＧである第２のタンパク質と相互作用するＴｓｇ１０１である第１のタンパク質を有するタンパク質複合体を調整する方法。
【請求項４２】
前記減少させるステップが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を妨害するステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記減少させるステップが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を前記細胞に投与するステップを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物がＴｓｇ１０１に結合することができる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物がＴｓｇ１０１タンパク質のＵＥＶドメインに結合することができる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記化合物が前記タンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
前記化合物が、前記タンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記減少させるステップが、前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップが、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物を該細胞に投与するステップを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップが、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するリボザイム化合物を該細胞に投与するステップを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
宿主細胞中のＴｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項５６】
前記妨害するステップが、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害することができる化合物を宿主細胞に投与するステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記妨害するステップが、Ｔｓｇ１０１タンパク質に結合することができる化合物を前記宿主細胞に投与するステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体であり、該抗体がＴｓｇ１０１のＵＥＶドメインに結合することができる、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体を前記宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６１】
Ｔｓｇ１０１免疫反応性を示す抗体をコードする核酸を宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６２】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸を前記宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６４】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物の使用。
【請求項６６】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するリボザイム化合物の使用。
【請求項６７】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１タンパク質に結合することができる化合物の使用。
【請求項６８】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体の使用。
【請求項６９】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１のＵＥＶドメインに結合することができる抗体の使用。
【請求項７０】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害することができる化合物の使用。
【請求項７１】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、ＨＩＶ ＧＡＧと相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体の使用。
【請求項７２】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸の使用。
【請求項７３】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、ＨＩＶ ＧＡＧと相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸の使用。
【請求項１】
Ｐ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを含むレトロウイルスＧＡＧポリペプチドまたは前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである第２のタンパク質と相互作用するＴｓｇ１０１またはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである第１のタンパク質を含む、単離されたタンパク質複合体。
【請求項２】
前記第１のタンパク質が、
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）前記Ｔｓｇ１０１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質のホモログ、または前記Ｔｓｇ１０１タンパク質のフラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択される、請求項１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項３】
前記第２のタンパク質が、
（１）Ｐ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを有するレトロウイルスＧＡＧポリペプチドと、
（２）前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し、Ｔｓｇ１０１と相互作用することができる前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのホモログと、
（３）Ｔｓｇ１０１と相互作用することができる前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドのフラグメントと、
（４）前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチド、前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドホモログ、または前記レトロウイルスＧＡＧポリペプチドフラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項４】
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項１、請求項２、または請求項３に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項５】
前記レンチウイルスが霊長類レンチウイルスである、請求項４に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項６】
前記霊長類レンチウイルスが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３、およびサル免疫不全ウイルス類からなる群から選択される、請求項５に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項７】
前記レンチウイルスが、ウシレンチウイルス類、ネコレンチウイルス類、およびヒツジ／ヤギレンチウイルス類からなる群から選択される非霊長類レンチウイルスである、請求項４に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項８】
前記第２のタンパク質が、ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドまたはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項９】
前記第２のタンパク質が（ａ）ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドまたは（ｂ）ＨＩＶ ＧＡＧポリペプチドフラグメントを含む融合タンパク質である、請求項１〜６および８のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１０】
前記第２のタンパク質が、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６またはそのホモログ、誘導体、もしくはフラグメントである、請求項１〜６、８、および９のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１１】
前記第２のタンパク質が、（ａ）ＨＩＶ ＧＡＧｐ６ポリペプチドまたは（ｂ）ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントを含む融合タンパク質である、請求項１〜６、８、９、および１０のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１２】
前記ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントが配列番号３１または配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項１０または請求項１１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１３】
前記ＨＩＶ ＧＡＧｐ６フラグメントが、天然に存在するＨＩＶ ＧＡＧｐ６の少なくとも１０アミノ酸残基の連続スパンを有し、該連続スパンがＰ（Ｔ／Ｓ）ＡＰ後期ドメインモチーフを含む、請求項１０または１１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項１４】
前記第１のタンパク質および前記第２のタンパク質を得るステップと、
該第１のタンパク質に該第２のタンパク質を接触させるステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体の産生方法。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体を含むタンパク質マイクロアレイ。
【請求項１６】
第２のポリペプチドに共有結合した第１のポリペプチドを有し、前記第１のポリペプチドがＴｓｇ１０１またはそのホモログもしくはフラグメントであり、前記第２のポリペプチドがＨＩＶ ＧＡＧまたはそのホモログもしくはフラグメントである、融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１６に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項１８】
タンパク質複合体を得るステップと、
前記タンパク質複合体に試験化合物を接触させるステップと、
前記試験化合物の前記タンパク質複合体への結合の有無を決定するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項１９】
１つまたは複数の試験化合物の存在下で前記第１のタンパク質に前記第２のタンパク質を接触させるステップと、
前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を検出するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項２０】
前記タンパク質複合体に試験化合物を接触させるステップと、
前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を検出するステップとを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体のモジュレーターの選択方法。
【請求項２１】
前記第１のタンパク質および第２のタンパク質の少なくとも１つが検出可能なタグを有する融合タンパク質である、請求項１８、１９、または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記接触ステップを実質的に無細胞の環境下で行う、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記接触ステップを宿主細胞において行う、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
宿主細胞中に前記第１のタンパク質を有する第１の融合タンパク質と、第２のタンパク質を有する第２の融合タンパク質とを得るステップであって、ＤＮＡ結合ドメインが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との一方に融合し、転写活性化ドメインが前記第１のタンパク質と第２のタンパク質との他方に融合しており、
前記宿主細胞中にレポーター遺伝子を得るステップであって、該レポーター遺伝子の転写を、前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用によって決定し、
試験化合物の存在下、前記宿主細胞内において、前記第１の融合タンパク質と前記第２の融合タンパク質とを相互作用させるステップと、
前記レポーター遺伝子発現の有無を決定するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質複合体の第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用のモジュレーターを選択する方法。
【請求項２６】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第１のタンパク質をコードする核酸を有する第１の発現ベクターと、
（ｂ）請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第２のタンパク質をコードする核酸を有する第２の発現ベクターと
を含む組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の前記第１の発現ベクターと前記第２の発現ベクターとを含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第１のタンパク質をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のプロモーターを有する第１の発現カセットと、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の前記第２のタンパク質をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のプロモーターを有する第２の発現カセットと
を含む宿主細胞。
【請求項３０】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項２８または２９に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
前記第１の核酸および第２の核酸の一方がＤＮＡ結合ドメインをコードする核酸に連結され、前記第１の核酸および第２の核酸の他方が転写活性化ドメインをコードする核酸に連結され、それにより２つの融合タンパク質を前記宿主細胞中において産生することができる、請求項２８、２９、または３０の宿主細胞。
【請求項３２】
レポーター遺伝子をさらに含み、該レポーター遺伝子の発現を前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用によって決定する、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３３】
タンパク質複合体の三次元構造を定義する原子座標を得るステップと、
該原子座標に基づいて、第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を設計または選択するステップと
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質複合体中の第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を得る方法。
【請求項３４】
試験化合物に、
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）Ｔｓｇ１０１と少なくと９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質ホモログ、またはＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択されるタンパク質を接触させるステップと、
前記試験化合物が前記タンパク質に結合することができるかどうかを決定するステップと
を含む、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を阻害することができる化合物の選択方法。
【請求項３５】
前記タンパク質に結合することができる試験化合物の、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を妨害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記タンパク質に結合することができる試験化合物の、ＨＩＶに感染した宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
（ｉ）Ｔｓｇ１０１タンパク質と、
（ｉｉ）Ｔｓｇ１０１と少なくと９０％同一のアミノ酸配列を有し、ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用することができるＴｓｇ１０１タンパク質ホモログと、
（ｉｉｉ）Ｔｓｇ１０１ ＵＥＶドメインを含むＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントと、
（ｉｖ）前記Ｔｓｇ１０１タンパク質、前記Ｔｓｇ１０１タンパク質ホモログ、またはＴｓｇ１０１タンパク質フラグメントを含む融合タンパク質と
からなる群から選択されるタンパク質の三次元構造を定義する原子座標を得るステップと、
該原子座標に基づいて、前記タンパク質と相互作用することができる化合物を設計または選択するステップと
を含む、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を阻害することができる化合物の選択方法。
【請求項３８】
前記タンパク質と相互作用することができる化合物の、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧｐ６との間のタンパク質−タンパク質相互作用を妨害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記タンパク質と相互作用することができる試験化合物の、ＨＩＶに感染した宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する能力を試験するステップをさらに含む、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質複合体と選択的に免疫反応性を示す単離された抗体。
【請求項４１】
細胞中のタンパク質複合体の濃度を減少させるステップを含む、ＨＩＶ ＧＡＧである第２のタンパク質と相互作用するＴｓｇ１０１である第１のタンパク質を有するタンパク質複合体を調整する方法。
【請求項４２】
前記減少させるステップが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を妨害するステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記減少させるステップが前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を妨害することができる化合物を前記細胞に投与するステップを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物がＴｓｇ１０１に結合することができる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物がＴｓｇ１０１タンパク質のＵＥＶドメインに結合することができる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記化合物が前記タンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
前記化合物が、前記タンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記減少させるステップが、前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップが、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物を該細胞に投与するステップを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞中のＴｇｓ１０１濃度を減少させるステップが、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するリボザイム化合物を該細胞に投与するステップを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
宿主細胞中のＴｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項５６】
前記妨害するステップが、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害することができる化合物を宿主細胞に投与するステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記妨害するステップが、Ｔｓｇ１０１タンパク質に結合することができる化合物を前記宿主細胞に投与するステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記化合物がＴｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体であり、該抗体がＴｓｇ１０１のＵＥＶドメインに結合することができる、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体を前記宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６１】
Ｔｓｇ１０１免疫反応性を示す抗体をコードする核酸を宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６２】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＨＩＶ ＧＡＧｐ６と相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸を前記宿主細胞に投与するステップを含む、宿主細胞からのＨＩＶウイルスの出芽を阻害する方法。
【請求項６４】
前記抗体が一本鎖抗体である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物の使用。
【請求項６６】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１核酸と特異的にハイブリッド形成するリボザイム化合物の使用。
【請求項６７】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１タンパク質に結合することができる化合物の使用。
【請求項６８】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体の使用。
【請求項６９】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１のＵＥＶドメインに結合することができる抗体の使用。
【請求項７０】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１とＨＩＶ ＧＡＧとの間の相互作用を妨害することができる化合物の使用。
【請求項７１】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、ＨＩＶ ＧＡＧと相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体の使用。
【請求項７２】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、Ｔｓｇ１０１に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸の使用。
【請求項７３】
ＨＩＶ出芽の阻害、ＨＩＶ感染の治療、またはＡＩＤＳの予防における、ＨＩＶ ＧＡＧと相互作用するＴｓｇ１０１を含むタンパク質複合体に選択的に免疫反応性を示す抗体をコードする核酸の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００９−２６９９１８（Ｐ２００９−２６９９１８Ａ）
【公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１４０１３２（Ｐ２００９−１４０１３２）
【出願日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【分割の表示】特願２００２−５７１８４６（Ｐ２００２−５７１８４６）の分割
【原出願日】平成１４年３月１４日（２００２．３．１４）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．フロッピー
【出願人】（５０００８６５１５）ミリアド・ジェネティックス・インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【分割の表示】特願２００２−５７１８４６（Ｐ２００２−５７１８４６）の分割
【原出願日】平成１４年３月１４日（２００２．３．１４）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．フロッピー
【出願人】（５０００８６５１５）ミリアド・ジェネティックス・インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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