細菌またはＢＴＰを用いて、真核細胞に１つ以上の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を送達するための方法が記載されている。また、この細菌を使用して、ＲＮＡ干渉を用いて真核細胞内での遺伝子発現を制御するための方法ならびにウイルス疾患および障害の治療のための方法も記載されている。細菌またはＢＴＰは、１つ以上のｓｉＲＮＡまたは１つ以上のｓｉＲＮＡをコードする１つ以上のＤＮＡ分子を含む。また、本発明の細菌を用いて真核細胞においてＲＮＡ干渉を引き起こすためのベクターも記載されている。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
原核生物ベクターを含む侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌であって、前記ベクターが１つ以上のｓｉＲＮＡをコードする１つ以上のＤＮＡ分子と、改変Ｐ_{ｌａｃＵＶ５}プロモーターと、少なくとも１つのＩｎｖ遺伝子座と、少なくとも１つのＨｌｙＡ遺伝子とを含み、前記ｓｉＲＮＡがβ−カテニンのｍＲＮＡを阻害し、かつ前記侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌が野生型大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌と比べてＲＮアーゼIII活性が減少している侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項２】
１つ以上のｓｉＲＮＡをコードする１つ以上のＤＮＡ分子と、改変Ｐ_{ｌａｃＵＶ５}プロモーターと、少なくとも１つのＩｎｖ遺伝子座と、少なくとも１つのＨｌｙＡ遺伝子とを含み、前記ｓｉＲＮＡがβ−カテニンのｍＲＮＡを阻害する原核生物ベクター。
【請求項３】
哺乳動物細胞に１つ以上のｓｉＲＮＡを送達する方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌を前記哺乳動物細胞に導入することを含む方法。
【請求項４】
哺乳動物細胞における遺伝子発現を制御する方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌を前記哺乳動物細胞に導入することを含む方法。
【請求項５】
β−カテニンの過剰発現に関連した疾患または障害の治療または予防を、それを必要とする哺乳動物において行う方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌を前記哺乳動物細胞に導入することを含む、前記哺乳動物におけるβ−カテニン発現の制御を含む方法。
【請求項６】
前記細菌が、ＲＮアーゼIIIをコードするｒｎｃ遺伝子の欠失を含む、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項７】
前記ＲＮアーゼIII活性が野生型大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌に比べて少なくとも９０％減少している、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項８】
前記ＲＮアーゼIII活性が野生型大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌に比べて少なくとも９５％減少している、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項９】
前記ＲＮアーゼIII活性が野生型大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌に比べて少なくとも９９％減少している、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１０】
前記１つ以上のＤＮＡ分子が侵襲性細菌内で１つ以上のｓｈＲＮＡに転写される、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１１】
前記１つ以上のｓｈＲＮＡが３’突出または平滑末端を含む、請求項１０に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１２】
前記３’突出が２〜５塩基対である、請求項１１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１３】
前記３’突出が２塩基対以下である、請求項１１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１４】
前記１つ以上のｓｈＲＮＡが１つ以上のｓｉＲＮＡにプロセシングされる、請求項１０に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１５】
前記原核生物ベクターが少なくとも１つのターミネーター配列をさらに含む、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのターミネーター配列が、少なくとも５つの連続したチミジン塩基対を含む、請求項１５に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１７】
前記細菌が第二のターミネーター配列をさらに含む、請求項１５に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１８】
前記第二のターミネーター配列がｒｒｎＣターミネーター配列である、請求項１７に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項１９】
前記原核生物プロモーターが少なくとも１つのＵＰエレメントをさらに含む、請求項１に記載の侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌。
【請求項２０】
前記侵襲性細菌が弱毒化、非病原性または非毒性細菌である、請求項１に記載の侵襲性細菌。
【請求項２１】
請求項１に記載の侵襲性細菌と薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項２２】
前記哺乳動物細胞を約１０^３〜１０^１１個の侵襲性細菌に感染させる、請求項５に記載の方法。
【請求項２３】
前記哺乳動物細胞を約１０^５〜１０^９個の侵襲性細菌に感染させる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物細胞を約０．１〜１０^６の範囲の感染多重度で感染させる、請求項５に記載の方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物細胞を約１０^２〜１０^４の範囲の感染多重度で感染させる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２６】
前記β−カテニン発現が、野生型のβ−カテニン発現に比べて、または前記侵襲性細菌の前記細胞への導入前のβ−カテニン発現に比べて減少する、請求項５に記載の方法。
【請求項２７】
前記β−カテニン発現減少がβ−カテニンｍＲＮＡの発現減少である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記β−カテニン発現減少がβ−カテニンタンパク質の発現減少である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記β−カテニン発現が、野生型のβ−カテニン発現に比べて、または前記侵襲性細菌の前記細胞への導入前のβ−カテニン発現に比べて少なくとも５０％減少する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記β−カテニン発現が、野生型のβ−カテニン発現に比べて、または前記侵襲性細菌の前記細胞への導入前のβ−カテニン発現に比べて少なくとも７５％減少する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記β−カテニン発現が、野生型のβ−カテニン発現に比べて、または前記侵襲性細菌の前記細胞への導入前のβ−カテニン発現に比べて少なくとも９０％減少する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳動物におけるβ−カテニンの過剰発現に関連した前記疾患または障害が、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、クローン病、潰瘍性大腸炎、家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）、ガードナー症候群、肝細胞癌（ＨＣＣ）、基底細胞癌、毛母腫、髄芽腫および卵巣癌からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項３３】
前記哺乳動物細胞が、結腸上皮細胞、直腸上皮細胞、腸上皮細胞、肝細胞、皮膚上皮細胞、有毛細胞、神経細胞および卵巣細胞からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項３４】
前記哺乳動物が、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、ヤギュウ、イヌ、ヤギ、ウマ、ロバ、シカおよび霊長類からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項３５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３４に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【公表番号】特表２０１２−５０８５８２（Ｐ２０１２−５０８５８２Ａ）
【公表日】平成２４年４月１２日（２０１２．４．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３６５２３（Ｐ２０１１−５３６５２３）
【出願日】平成２１年１１月１３日（２００９．１１．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６４４０９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０５７００９
【国際公開日】平成２２年５月２０日（２０１０．５．２０）
【出願人】（５０７３２８１８４）マリーナ　バイオテック，インコーポレイテッド (29)
【Ｆターム（参考）】