うつ病を処置するための化合物を同定する方法
うつ病の処置において増大した効力を持つ化合物を同定するためのアッセイを開示する。本アッセイは、試験化合物がＳＥＲＴを阻害するかどうかを決定するステップおよび試験化合物がＳＥＲＴ上のアロステリック部位と相互作用するかどうかを決定するステップを含む。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明はうつ病の処置に有用な化合物の同定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）は、うつ病や不安などの気分障害を処置するための薬物にとって、おそらく最も重要なターゲットである。一部の薬物がＳＥＲＴを特異的に阻害するのに対して、他の薬物は追加の薬理学的活性、例えばセロトニン受容体に対するアゴニスト作用またはアンタゴニスト作用を持つ。特異的ＳＥＲＴ阻害剤はしばしばＳＳＲＩと呼ばれ、より広い薬理学的プロファイルを持つ薬物としては三環系薬物が例示される。ＳＳＲＩはセロトニンの再取り込みを遮断することによってその効果を発揮し、これは細胞外セロトニンの増加も引き起こす。
【０００３】
異なるＳＥＲＴ阻害剤がＳＥＲＴ上の異なる部位に結合し、その部位を遮断しうることは、かなり前から知られている。最近になって、（Ｓ）−シタロプラムなどの化合物は二つ以上の部位、すなわち一次部位およびアロステリック部位に結合すること（非特許文献1）、ならびに（Ｓ）−シタロプラムの優れた効果がこのアロステリック結合に起因しうることも見出されている。
【非特許文献１】J. Neurochem, 92, 21-28, 2005
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、驚くべきことに、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）のアロステリック部位に結合し、かつセロトニン再取り込みを阻害する（すなわちＳＥＲＴの一次部位に結合する）化合物が、うつ病の処置にとりわけ有用であることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、ある実施形態において、本発明は、うつ病の処置に有用な化合物を同定するための方法であって、
a）セロトニントランスポーターを一つまたはそれ以上の濃度の試験化合物と接触させるステップ；
b）前記試験化合物がセロトニン再取り込みを阻害するかどうかを決定するステップ；
c）前記試験化合物がセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかを決定するステップ；
d）セロトニン再取り込みを阻害し、かつセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する試験化合物を選択するステップ
を含む方法（ただし、ステップｂ）およびｃ）は任意の順序で行うことができる）を提供する。
【０００６】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本発明の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病を処置するための薬剤の製造における、本発明の方法によって同定される化合物の使用を提供する。
【０００８】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病の処置に使用するための、本発明の方法によって同定される化合物に関する。
【０００９】
もう一つの実施形態において、本発明は、本発明の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
もう一つの実施形態において、本発明は、抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが結合するアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法に関する。
【００１１】
＜発明の詳細な説明＞
ある実施形態では、本発明の方法が、うつ病の処置において改善された効力を持つ化合物の同定に用いられる。フルオキセチンなどの古典的な選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）による、例えばうつ病などの情動障害の処置には、その薬物治療が効き始めるまでに最大数週間の誘導期が伴うことは、よく知られている。この誘導期を説明するための仮説として一般に受け入れられているのは、５−ＨＴ（セロトニン）が治療レベルまで上昇するのが遅いために、ＳＳＲＩの治療効果の開始が遅いというものである。これは、５−ＨＴ陰性自己受容体、具体的には（縫線核における）細胞体樹状突起の５−ＨＴ１Ａ自己受容体およびシナプス前神経終末からの５−ＨＴの放出を抑制する終末５−ＨＴ１Ｂ自己受容体の脱感作が遅いためであると考えられる。
【００１２】
ある実施形態において、「増大した効力」とは、処置の開始後、さまざまな時点で測定した場合に、治療効果が改善されることを示すものとする。治療効果は、典型的には、例えばＭＡＤＲＡＳまたはＨＡＭ−Ｄなどの臨床的に妥当な尺度を使って測定される。典型的には、効果は、処置開始の１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後または６週間後に測定される。効力の改善は、より迅速な作用の開始に反映されるか、長期処置後の臨床応答の増大、非応答者の分率の低下、またはこれらの効果の組み合わせとして反映されうる。
【００１３】
ある実施形態では、例えばフルオキセチンなどの既存の処置よりも優れた化合物を同定するために、本発明の方法が使用される。
【００１４】
本発明の方法は、試験化合物がセロトニンの再取り込みを阻害するかどうか、すなわち試験化合物がセロトニントランスポーターの一次部位に結合するかどうかの決定を含む。セロトニントランスポーターへの試験化合物の結合は、セロトニントランスポーターによるセロトニン輸送の５０％阻害を引き起こす試験化合物の濃度であるＩＣ５０濃度を決定することによって、定量することができる。この値は、例えば本明細書の実施例１に記載するように決定することができる。ある実施形態では、本発明の方法に従って選択された試験化合物が、１００ｎＭ未満、例えば５０ｎＭ未満、例えば２０ｎＭ未満、例えば１０ｎＭ未満、さらには２ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ。
【００１５】
本発明の方法は、試験化合物がセロトニントランスポーター上の一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかの決定を含む。アロステリック部位は、酵素、受容体またはトランスポーターなどのタンパク質上の部位であって、一次部位または活性部位とは異なるが、前記アロステリック部位へのリガンドの結合が活性部位へのリガンドの結合に影響を及ぼすような部位である。アロステリック部位へのリガンドの結合は、一次部位への同じリガンドまたは別のリガンドの結合に影響を及ぼしうる。
【００１６】
本発明の方法では、試験化合物がセロトニントランスポーター上の一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する場合に、その試験化合物が選択される。この文脈において「正に相互作用する」とは、試験化合物がセロトニントランスポーター一次部位と一次部位リガンド（例えば試験化合物そのもの）との間の結合の安定化を引き起こすことを示すものとする。前記結合の安定化は、試験化合物：セロトニントランスポーター一次部位複合体に関する解離速度を測定することによって定量することができる。アロステリック部位への試験化合物の結合が解離速度の低下を引き起こす場合に、前記化合物は前記アロステリック部位と正に相互作用するという。特に解離速度は、低濃度の試験化合物が存在する場合よりも高濃度の試験化合物が存在する場合に、より大きく低下する。解離速度は、広範囲にわたる試験化合物濃度で、例えば１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００００ｎＭ、または１００００００ｎＭなどで測定される。解離速度の決定は本明細書の実施例２で説明するように行うことができる。ある実施形態では、化合物が、例えば１００μＭまで、２００μＭまで、または５００μＭまでなどといった妥当な濃度における測定で、（Ｓ）−シタロプラムの解離速度に、２倍を超える減速、例えば５倍を超える減速、例えば１０倍を超える減速、例えば１００倍を超える減速を引き起こす場合に、その化合物が選択される。
【００１７】
あるいは、試験化合物：セロトニントランスポーター一次部位複合体に関する会合速度を測定することによって、前記結合の安定化を定量することもできる。アロステリック部位への試験化合物の結合が会合速度の増加を引き起こす場合に、前記化合物は前記アロステリック部位と正に相互作用するという。会合速度の決定は実施例７に示すように行うことができる。
【００１８】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物がラットの腹側海馬または前前頭皮質における細胞外セロトニンンレベルの増加を引き起こすかどうかを決定し、そのような増加を引き起こす化合物を選択するという、さらなるステップを含む。細胞外セロトニンンレベルが増加するかどうかの決定は、試験化合物の投与を開始した後に行うことができる。特に、この決定は、試験化合物の投与を開始した３、４、５、６、７もしくは１４日後に行うか、または急性に行うことができる。ある実施形態では、試験化合物が、急性に測定される細胞外セロトニンレベルに、３００％を超える、例えば４００％を超える、例えば５００％を超える増加を引き起こす場合に、その試験化合物が選択される。ある実施形態では、試験化合物が、試験化合物の投与を開始した３日後の細胞外セロトニンレベルに、３００％以上の増加を引き起こす場合に、その試験化合物が選択される。ラットの腹側海馬または前前頭皮質における細胞外セロトニンレベルの決定は、例えば本明細書の実施例５で説明するように、微小透析実験などで行うことができる。
【００１９】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物と相互作用するアロステリック部位が、Ｒ−シタロプラムを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位であるかどうかを決定するという、さらなるステップを含む。ある実施形態では、試験化合物が、（Ｒ）−シタロプラムを結合することができるアロステリック部位とだけ正に相互作用する場合には、その試験化合物は選択されない。この決定は、例えば本明細書の実施例３で説明するように行うことができる。
【００２０】
（Ｒ）−シタロプラムおよび（Ｓ）−シタロプラムは、セロトニントランスポーター上の同じアロステリック部位に対するリガンドである。しかし、前記アロステリック部位に対するこれら二つの化合物の結合は、異なる効果を引き起こす。（Ｓ）−シタロプラムの結合は（Ｓ）−シタロプラム：セロトニン一次部位複合体の強化をもたらす。すなわちこれは、セロトニン再取り込みの阻害を増加させる。これに対して、アロステリック部位への（Ｒ）−シタロプラムの結合は、一次部位リガンドの結合（例えばセロトニントランスポーターの一次部位への（Ｓ）−シタロプラムの結合）に、もっと小さな変化をもたらすに過ぎない。これは、同じ投薬量ではラセミ型シタロプラムよりも（Ｓ）−シタロプラムの方が優れている理由であると考えられる［Psychopharm, 174, 163-176, 2004］。
【００２１】
実施例６に提示するデータは、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンがＳＥＲＴにおけるアロステリック部位に結合することを示している。さらにまた、実施例７に提示するデータは、このアロステリック部位が（Ｒ）−シタロプラムのそれとは異なること、すなわちこれら二つの化合物は異なるアロステリック部位に結合することを示している。この概念は、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによってもたらされるセロトニンレベルの増加に（Ｒ）−シタロプラムは影響を及ぼさないことが示されている実施例８のインビボ結果によって裏付けられる。薬理学的に意味のある（Ｒ）−シタロプラムの唯一の結合はＳＥＲＴのアロステリック部位への結合であることを考えると、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと（Ｒ）−シタロプラムは異なるアロステリック部位に結合するというのが、実施例８のデータを正しく解釈する唯一の方法である。実施例９に示すように、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンのアロステリック部位に結合する化合物（この場合はこの化合物そのもの）は、（Ｓ）−シタロプラムなどのそうでない化合物よりも顕著な、セロトニンレベルの増加をもたらす。セロトニンレベルの増加はセロトニン再取り込み阻害剤の臨床効果の根拠であるから、この相違は、結果として、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンのアロステリック部位に結合する化合物の臨床的優位性につながるだろう。
【００２２】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物が［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位と正に相互作用するかどうかを決定し、正に相互作用する化合物を選択するステップを含む。この決定は、例えば本明細書の実施例４で説明するように行うことができる。
【００２３】
本発明の化合物はうつ病の処置に有用である。したがってある実施形態において、本発明は、うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本発明の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含む方法に関する。ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２４】
本明細書にいう化合物の「治療有効量」とは、前記化合物の投与を含む治療的介入において、所与の疾患およびその合併症の臨床症状を治癒させ、軽減し、または部分的に抑止するのに十分な量を意味する。これを達成するのに適した量は「治療有効量」と定義される。各目的に有効な量は疾患または傷害の重症度ならびに対象の体重および全身状態に依存するだろう。適当な投薬量の決定が、値のマトリックスを作成し、そのマトリックス中のさまざまな点を試験することにより、訓練を受けた医師の通常の技術に全て包含される日常的な実験を使って達成されうることは、理解されるだろう。
【００２５】
本明細書で使用する「処置」および「処置する」という用語は、疾患または障害などの状態と闘うためになされる患者の管理および医療を意味する。この用語は、例えば症状もしくは合併症を軽減するため、疾患、障害もしくは状態の進行を遅延させるため、症状および合併症を軽減しもしくは緩和するため、および／または疾患、障害もしくは状態を治癒させもしくは排除するための活性化合物の投与など、患者が患っている所与の状態に関する処置の全範囲を包含するものとし、この場合、防止は、疾患、状態、または障害と闘うためになされる患者の管理および医療であると解釈され、症状または合併症の発生を防止するための活性化合物の投与を包含する。それでもなお、予防的（防止的）処置と治療的（治癒的）処置は、本発明の二つの独立した態様である。処置される患者は、好ましくは哺乳動物、特にヒトである。
【００２６】
ある実施形態において、本発明は、うつ病を処置するための薬剤の製造における、本発明の方法によって同定される化合物の使用に関する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２７】
ある実施形態において、本発明は、抗うつ薬として使用するための、本発明の方法によって同定される化合物に関する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２８】
ある実施形態において、本発明は、本発明の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物を提供する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンではないものとする。
【００２９】
ある実施形態において、本発明は、抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンが結合するセトロニントランスポーター上のアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法に関する。特に、前記抗うつ薬はセロトニントランスポーターの阻害剤である。
【００３０】
ある実施形態において、本発明は、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合する抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、あるアロステリック部位へのその結合、特にセロトニントランスポーター上のアロステリック部位へのその結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的流布を含む方法に関する。特に、前記抗うつ薬はセロトニントランスポーターの阻害剤である。
【００３１】
ある実施形態では、前記情報の配布が、言語によるコミュニケーション、小冊子の配布、印刷媒体、音声テープ、磁気媒体、デジタル媒体、視聴覚媒体、掲示板、広告、新聞、雑誌、ダイレクトメールの送付、ラジオ、テレビ、電子メール、点字、電子媒体、バナー広告、光ファイバー、およびレーザーライトショーからなる群より選択される方法によって達成される。
【実施例】
【００３２】
＜実施例１＞
ラットシナプトソームにおける５−ＨＴ取り込みの阻害
雄ラット（１２５ｇ〜２２５ｇ）から得られるラット前脳を計り取り、１ｍＭニアラミドを含有する０．４０Ｍショ糖緩衝液約１０ｍｌ中、ガラス／テフロンホモジナイザーを使って、冷却した緩衝液と共にホモジナイズする（下記参照）。その懸濁液を、１０００Ｇ／４℃で１０分間遠心分離する。その結果生じた上清を４０，０００Ｇ／４℃で２０分間遠心分離する。ペレットを１８０倍体積のＫＲＰ緩衝液に再懸濁する。この懸濁液を使用時まで氷上に保つ。試験化合物１０μｌ、１０．０ｎＭ ［３Ｈ］−５ＨＴ １０μｌおよび膜１８０μｌ（０．５ｍｇ／ウェル）からなるアリコート（総体積は２００μＬになる）を、３７℃で１５分間インキュベートする。１０μＭシタロプラムの存在下で非特異的結合／取り込み量を決定し、緩衝液の存在下で総取り込み量を決定する。インキュベーション後に、Ｔｏｍｔｅｃ ＣｅｌｌＨａｒｖｅｓｔｅｒプログラム（Ｕｐｔａｋｅ）を使って、結合したリガンドを、０．１％ＰＥＩに３０分間予浸しておいたＵｎｉｆｉｌｔｅｒ ＧＦ／Ｃを通して濾過することによって、未結合のリガンドから分離した。フィルターを氷冷緩衝液１ｍｌで１回洗浄し、５０℃で乾燥し、シンチレーション液３５μｌをフィルターに加える。結合している放射能をＷａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａでカウントする。
【００３３】
＜実施例２＞
解離速度
一次部位において結合している試験化合物とセロトニントランスポーターとの間に形成される複合体に関する解離速度は、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜調製物で決定される。化合物−ＳＥＲＴ複合体の解離の速度論は、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜１０μｇと［３Ｈ］試験化合物１０μＬとからなるアリコート（平衡に達するまでプレインキュベートしたもの）の大規模な溶解（３００倍）後に決定される。［３Ｈ］試験化合物の濃度はＫｄの約６倍である。解離は、非放射標識試験化合物（０〜３００μＭ）の存在下または非存在下でアリコートの大規模な溶解（３００倍）を行うことによって開始される。結合している［３Ｈ］試験化合物を０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分後に測定する。
【００３４】
＜実施例３＞
Ｒ−シタロプラム
会合速度はｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜調製物で決定される。［３Ｈ］化合物−ＳＥＲＴ複合体の会合の速度論は、平衡に達するまでプレインキュベートした、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３から得られる膜１０μｇと［３Ｈ］試験化合物２９０μｌとからなるアリコートのインキュベーション後に決定される。会合は、Ｒ−シタロプラム（０〜３００μＭ）の非存在下または存在下で放射性リガンドを添加することによって開始される。結合している［３Ｈ］試験化合物を、０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分後に測定する。Ｒ−シタロプラム（０〜３００μＭ）の添加によって左右されない［３Ｈ］試験化合物を選択する。
【００３５】
＜実施例４＞
［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンアロステリック部位における相互作用
［３Ｈ］［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを使用し、基本的に上記実施例３で述べたようにして、決定を行う。
【００３６】
＜実施例５＞
微小透析
動物
当初体重２７５〜３００ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用する。
【００３７】
外科手術および微小透析実験
ラットをヒプノルム（ｈｙｐｎｏｒｍ）／ドルミカム（２ｍｌ／ｋｇ）で麻酔し、腹側海馬（座標：ブレグマから後方５．６ｍｍ、側方−５．０ｍｍ、硬膜から腹側７．０ｍｍ）または前頭皮質（座標：ブレグマから前方３．２ｍｍ；側方０．８ｍｍ；硬膜から腹側４．０ｍｍ）に透析プローブチップを配置することを目指して、脳内ガイドカニューレ（ＣＭＡ／１２）を海馬に定位的に植え込む。ガイドカニューレの固定には固定ネジおよびアクリルセメントを使用する。動物の体温を直腸プローブで監視し、３７℃に維持する。ラットをケージで単独飼育して外科手術から２日間回復させる。実験の日に、ガイドカニューレを通して、微小透析プローブ（ＣＭＡ／１２、直径０．５ｍｍ、長さ３ｍｍ）を挿入する。
【００３８】
２チャンネルスイベルを介してプローブを微量注入ポンプに接続する。濾過したリンゲル液（１４５ｍｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１．２ｍＭ ＣａＣｌ２）による微小透析プローブの潅流を、１μＬ／分の一定流速で、プローブを脳に挿入する直前に開始し、実験の継続中はその潅流を続ける。１８０分間安定化した後、実験を開始する。透析液を２０分ごとに収集した。
【００３９】
急性処置；単回注射
細胞外５−ＨＴの基礎レベルを決定するために四つの画分を試料採取する。その後、試験化合物を投与し、試料採取を約３時間続ける。
【００４０】
データ提示：単回注射実験では、化合物を投与する直前の３連続５−ＨＴ試料の平均値を各実験の基礎レベルとし、データを基礎値の割合に変換する（平均基礎注射前値を１００％に標準化する）。
【００４１】
３日処置；ミニポンプ
３日処置実験には浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ、２ＭＬ１）を使用する。ポンプに無菌条件下で賦形剤／試験化合物を充填し、麻酔下で皮下に植え込む。実験は組み込まれたミニポンプを使って行われる。３日にわたる処置後の化合物の血漿レベルを測定するために、実験の最後に血液試料を収集する。
【００４２】
データ提示：ミニポンプ実験では、処置動物から得られるベースライン５−ＨＴ試料の平均を、賦形剤動物から得られるベースライン５−ＨＴ試料の平均と比較し、賦形剤群を１００％に標準化する。
【００４３】
実験後に動物を屠殺し、その脳を摘出し、凍結し、プローブ配置確認用に薄切する。
【００４４】
透析液５−ＨＴの分析
透析液中の５−ＨＴの濃度は電気化学的検出によるＨＰＬＣを利用して分析される。５−ＨＴは逆相液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ １５０×３ｍｍ、３μＭ）によって分離される。５−ＨＴ：流速０．４ｍｌ／分の７５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、１５０ｍｌ／ｌオクタンスルホン酸ナトリウム、１００μｌ／ｌトリエチルアミンおよび１０％アセトニトリル（ｐＨ３．０）からなる移動相。電気化学的検出は電量検出器を使用して行った；電位は２５０ｍＶに設定（ガードセルは３５０ｍＶ）（Ｃｏｕｌｏｃｈｅｍ ＩＩ、ＥＳＡ）。
【００４５】
＜実施例６＞
ＳＥＲＴ上のアロステリック部位への［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの結合
「Pharmacol. Toxicol., 80, 197-201, 1997」および「J. Neurochem., 92, 21-28, 2005」に記載されている方法に基づいてアッセイ手法を改変した。
【００４６】
１０％ウシ胎児血清、４ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃、５％ＣＯ２で、ＰｅａｋＲａｐｉｄ ２９３細胞（Ｅｄｇｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、メリーランド州ゲイサーズバーグ）を培養した。１０μｇの全ＤＮＡを使用し、１５０ｃｍ２フラスコ中で、リポフェクトアミン法（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）により、哺乳動物細胞発現ベクター中のヒトＳＥＲＴ ｃＤＮＡをＰｅａｋＲａｐｉｄ ２９３細胞中に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの２日後に、膜を収集した。
【００４７】
結合アッセイは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、および５ｍＭ ＫＣｌを含有する緩衝液（ｐＨ７．４）で行った。解離結合に先だって、［３Ｈ］−（Ｓ）−シタロプラム（４０ｎＭ）をｈＳＥＲＴ膜（５μｇ／１０μｌ）と共に室温で２時間インキュベートした。この反応混合物を９６穴形式のミニチューブに１０μｌ／ウェルずつ分注し、氷上に保った。解離結合は室温で行い、８００μｌの緩衝液またはさまざまな濃度の試験化合物を添加することにより、異なる時点で開始させた。Ｂｒａｎｄｅｌハーベスターを使って迅速濾過した後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４）で３回洗浄することにより、アッセイを停止した。Ｔｒｉｌｕｘカウンターを使って、結合しているリガンドをカウントした。
【００４８】
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）およびＸｌｆｉｔ ４（ＩＤＢＳ、英国サリー州ギルフォード）を使って解離結合データを解析した。一相指数関数的減衰式を使って、さまざまな時点における結合値を当てはめ、解離半減期（ｔ１／２）および速度（ｋ）値を得た。化合物存在下での速度（ｋ）と化合物非存在下での速度（ｋ０）との比（ｋ／ｋ０）を各化合物濃度について算出した。シグモイド用量応答曲線において、ｋ／ｋ０およびｌｏｇ濃度を当てはめることによって、ＩＣ５０値を得た。最高濃度における最大ｋ／ｋ０（変調倍率）も報告した。結果をＮ＝2のアッセイから平均する。
【００４９】
得られたデータを図１ａおよび１ｂに図示する。２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは、２６μＭのＩＣ５０でアロステリック部位に結合し、２００μＭにおいて３Ｈ（Ｓ）−シタロプラムを５．４倍の比で減速させた。
【００５０】
＜実施例７＞
（Ｒ）−シタロプラムの存在下におけるＳＥＲＴへの［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（Ｓ）−シタロプラムの会合
ｈＳＥＲＴを発現させるＨＥＫ２９３細胞を収集し、ＨＥＫ２９３−ｈＳＥＲＴ膜１０μｇを９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに入れる。［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラム＋試験化合物２９０μＬを加えることによって、会合を開始させる。最終体積は３００μＬであり、［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラムの濃度は約６ｎＭである。試験化合物の濃度はｎＭ域からμＭ域まで変化させる。インキュベーション時間は、氷上または室温（２２℃）で、０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分である。膜を、氷冷ＥＬＧＡ水中、ＧＦ／Ｃガラス繊維フィルター（０．５％ＰＥＩで３０分間予浸）上に収集する。フィルターを２×０．５ｍｌ氷冷ＥＬＧＡ水で２回すすぐ。フィルターを乾燥させ、４０μＬのシンチレーション液を加える。２時間後に、結合している［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラムをシンチレーションカウンターで測定する。
【００５１】
得られたデータを図２に示す。このデータは、［３Ｈ］（Ｓ）−シタロプラムと［３Ｈ］２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンがＳＥＲＴに対して異なる結合特性を示すことを、明確に示している。ＳＥＲＴに対する［３Ｈ］（Ｓ）−シタロプラムの会合は明らかに（Ｒ）−シタロプラムの影響を受け、（Ｒ）−シタロプラムの濃度が増加するにつれて会合が減少するのに対して、［３Ｈ］［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの会合は、同じ濃度範囲で、（Ｒ）−シタロプラムによる影響をほとんど受けなかった。このことから、（Ｓ）−シタロプラムと［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンとは異なるアロステリック部位に結合するという結論が導かれる。
【００５２】
＜実施例８＞
ラットにおける亜慢性微小透析
実験の詳細は基本的に実施例５で説明したとおりである。得られたデータを図３に示す。［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは腹側海馬における細胞外セロトニンの著しい増加を引き起こすことが、明確に示されている。さらにまた、この増加は（Ｒ）−シタロプラムの同時投与による影響を受けない。このことから、（Ｒ）−シタロプラムと［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは同じ結合部位において競合しない、すなわちこれら二つの化合物は異なるアロステリック部位に結合するという結論が導かれる。これらのデータは、実施例７から得られる結論を、インビボ環境で裏付けている。
【００５３】
＜実施例９＞
ラットにおける３日微小透析
実験データについては実施例５を参照されたい。化合物を以下のように投薬した：１０ｍｇ／ｋｇ （Ｓ）−シタロプラムおよび４ｍｇ／ｋｇ ［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン；どちらもシュウ酸塩として。図４に提示するデータは、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが、（Ｓ）−シタロプラムよりも迅速かつ顕著なセロトニンレベルの増加を引き起こすことを示している。これらの発見は、結果として、臨床状況における改善された効力につながるだろうと予想される。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１ａ】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによるＳＥＲＴからの３Ｈ−（Ｓ）−シタロプラムの解離。
【図１ｂ】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによるＳＥＲＴからの３Ｈ−（Ｓ）−シタロプラムの解離。
【図２】さまざまな濃度の（Ｒ）−シタロプラムの存在下におけるＳＥＲＴに対する［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（Ｓ）−シタロプラムの会合。
【図３】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン±（Ｒ）−シタロプラムの投与後に急性微小透析によって測定されるラットにおける細胞外セロトニンレベル（腹側海馬）。
【図４】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンまたは（Ｓ）−シタロプラムの投与後に３日微小透析によって測定されるラットにおける細胞外セロトニンレベル（腹側海馬）。
【発明の分野】
【０００１】
本発明はうつ病の処置に有用な化合物の同定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）は、うつ病や不安などの気分障害を処置するための薬物にとって、おそらく最も重要なターゲットである。一部の薬物がＳＥＲＴを特異的に阻害するのに対して、他の薬物は追加の薬理学的活性、例えばセロトニン受容体に対するアゴニスト作用またはアンタゴニスト作用を持つ。特異的ＳＥＲＴ阻害剤はしばしばＳＳＲＩと呼ばれ、より広い薬理学的プロファイルを持つ薬物としては三環系薬物が例示される。ＳＳＲＩはセロトニンの再取り込みを遮断することによってその効果を発揮し、これは細胞外セロトニンの増加も引き起こす。
【０００３】
異なるＳＥＲＴ阻害剤がＳＥＲＴ上の異なる部位に結合し、その部位を遮断しうることは、かなり前から知られている。最近になって、（Ｓ）−シタロプラムなどの化合物は二つ以上の部位、すなわち一次部位およびアロステリック部位に結合すること（非特許文献1）、ならびに（Ｓ）−シタロプラムの優れた効果がこのアロステリック結合に起因しうることも見出されている。
【非特許文献１】J. Neurochem, 92, 21-28, 2005
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、驚くべきことに、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）のアロステリック部位に結合し、かつセロトニン再取り込みを阻害する（すなわちＳＥＲＴの一次部位に結合する）化合物が、うつ病の処置にとりわけ有用であることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、ある実施形態において、本発明は、うつ病の処置に有用な化合物を同定するための方法であって、
a）セロトニントランスポーターを一つまたはそれ以上の濃度の試験化合物と接触させるステップ；
b）前記試験化合物がセロトニン再取り込みを阻害するかどうかを決定するステップ；
c）前記試験化合物がセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかを決定するステップ；
d）セロトニン再取り込みを阻害し、かつセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する試験化合物を選択するステップ
を含む方法（ただし、ステップｂ）およびｃ）は任意の順序で行うことができる）を提供する。
【０００６】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本発明の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病を処置するための薬剤の製造における、本発明の方法によって同定される化合物の使用を提供する。
【０００８】
もう一つの実施形態において、本発明は、うつ病の処置に使用するための、本発明の方法によって同定される化合物に関する。
【０００９】
もう一つの実施形態において、本発明は、本発明の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
もう一つの実施形態において、本発明は、抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが結合するアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法に関する。
【００１１】
＜発明の詳細な説明＞
ある実施形態では、本発明の方法が、うつ病の処置において改善された効力を持つ化合物の同定に用いられる。フルオキセチンなどの古典的な選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）による、例えばうつ病などの情動障害の処置には、その薬物治療が効き始めるまでに最大数週間の誘導期が伴うことは、よく知られている。この誘導期を説明するための仮説として一般に受け入れられているのは、５−ＨＴ（セロトニン）が治療レベルまで上昇するのが遅いために、ＳＳＲＩの治療効果の開始が遅いというものである。これは、５−ＨＴ陰性自己受容体、具体的には（縫線核における）細胞体樹状突起の５−ＨＴ１Ａ自己受容体およびシナプス前神経終末からの５−ＨＴの放出を抑制する終末５−ＨＴ１Ｂ自己受容体の脱感作が遅いためであると考えられる。
【００１２】
ある実施形態において、「増大した効力」とは、処置の開始後、さまざまな時点で測定した場合に、治療効果が改善されることを示すものとする。治療効果は、典型的には、例えばＭＡＤＲＡＳまたはＨＡＭ−Ｄなどの臨床的に妥当な尺度を使って測定される。典型的には、効果は、処置開始の１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後または６週間後に測定される。効力の改善は、より迅速な作用の開始に反映されるか、長期処置後の臨床応答の増大、非応答者の分率の低下、またはこれらの効果の組み合わせとして反映されうる。
【００１３】
ある実施形態では、例えばフルオキセチンなどの既存の処置よりも優れた化合物を同定するために、本発明の方法が使用される。
【００１４】
本発明の方法は、試験化合物がセロトニンの再取り込みを阻害するかどうか、すなわち試験化合物がセロトニントランスポーターの一次部位に結合するかどうかの決定を含む。セロトニントランスポーターへの試験化合物の結合は、セロトニントランスポーターによるセロトニン輸送の５０％阻害を引き起こす試験化合物の濃度であるＩＣ５０濃度を決定することによって、定量することができる。この値は、例えば本明細書の実施例１に記載するように決定することができる。ある実施形態では、本発明の方法に従って選択された試験化合物が、１００ｎＭ未満、例えば５０ｎＭ未満、例えば２０ｎＭ未満、例えば１０ｎＭ未満、さらには２ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ。
【００１５】
本発明の方法は、試験化合物がセロトニントランスポーター上の一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかの決定を含む。アロステリック部位は、酵素、受容体またはトランスポーターなどのタンパク質上の部位であって、一次部位または活性部位とは異なるが、前記アロステリック部位へのリガンドの結合が活性部位へのリガンドの結合に影響を及ぼすような部位である。アロステリック部位へのリガンドの結合は、一次部位への同じリガンドまたは別のリガンドの結合に影響を及ぼしうる。
【００１６】
本発明の方法では、試験化合物がセロトニントランスポーター上の一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する場合に、その試験化合物が選択される。この文脈において「正に相互作用する」とは、試験化合物がセロトニントランスポーター一次部位と一次部位リガンド（例えば試験化合物そのもの）との間の結合の安定化を引き起こすことを示すものとする。前記結合の安定化は、試験化合物：セロトニントランスポーター一次部位複合体に関する解離速度を測定することによって定量することができる。アロステリック部位への試験化合物の結合が解離速度の低下を引き起こす場合に、前記化合物は前記アロステリック部位と正に相互作用するという。特に解離速度は、低濃度の試験化合物が存在する場合よりも高濃度の試験化合物が存在する場合に、より大きく低下する。解離速度は、広範囲にわたる試験化合物濃度で、例えば１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００００ｎＭ、または１００００００ｎＭなどで測定される。解離速度の決定は本明細書の実施例２で説明するように行うことができる。ある実施形態では、化合物が、例えば１００μＭまで、２００μＭまで、または５００μＭまでなどといった妥当な濃度における測定で、（Ｓ）−シタロプラムの解離速度に、２倍を超える減速、例えば５倍を超える減速、例えば１０倍を超える減速、例えば１００倍を超える減速を引き起こす場合に、その化合物が選択される。
【００１７】
あるいは、試験化合物：セロトニントランスポーター一次部位複合体に関する会合速度を測定することによって、前記結合の安定化を定量することもできる。アロステリック部位への試験化合物の結合が会合速度の増加を引き起こす場合に、前記化合物は前記アロステリック部位と正に相互作用するという。会合速度の決定は実施例７に示すように行うことができる。
【００１８】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物がラットの腹側海馬または前前頭皮質における細胞外セロトニンンレベルの増加を引き起こすかどうかを決定し、そのような増加を引き起こす化合物を選択するという、さらなるステップを含む。細胞外セロトニンンレベルが増加するかどうかの決定は、試験化合物の投与を開始した後に行うことができる。特に、この決定は、試験化合物の投与を開始した３、４、５、６、７もしくは１４日後に行うか、または急性に行うことができる。ある実施形態では、試験化合物が、急性に測定される細胞外セロトニンレベルに、３００％を超える、例えば４００％を超える、例えば５００％を超える増加を引き起こす場合に、その試験化合物が選択される。ある実施形態では、試験化合物が、試験化合物の投与を開始した３日後の細胞外セロトニンレベルに、３００％以上の増加を引き起こす場合に、その試験化合物が選択される。ラットの腹側海馬または前前頭皮質における細胞外セロトニンレベルの決定は、例えば本明細書の実施例５で説明するように、微小透析実験などで行うことができる。
【００１９】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物と相互作用するアロステリック部位が、Ｒ−シタロプラムを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位であるかどうかを決定するという、さらなるステップを含む。ある実施形態では、試験化合物が、（Ｒ）−シタロプラムを結合することができるアロステリック部位とだけ正に相互作用する場合には、その試験化合物は選択されない。この決定は、例えば本明細書の実施例３で説明するように行うことができる。
【００２０】
（Ｒ）−シタロプラムおよび（Ｓ）−シタロプラムは、セロトニントランスポーター上の同じアロステリック部位に対するリガンドである。しかし、前記アロステリック部位に対するこれら二つの化合物の結合は、異なる効果を引き起こす。（Ｓ）−シタロプラムの結合は（Ｓ）−シタロプラム：セロトニン一次部位複合体の強化をもたらす。すなわちこれは、セロトニン再取り込みの阻害を増加させる。これに対して、アロステリック部位への（Ｒ）−シタロプラムの結合は、一次部位リガンドの結合（例えばセロトニントランスポーターの一次部位への（Ｓ）−シタロプラムの結合）に、もっと小さな変化をもたらすに過ぎない。これは、同じ投薬量ではラセミ型シタロプラムよりも（Ｓ）−シタロプラムの方が優れている理由であると考えられる［Psychopharm, 174, 163-176, 2004］。
【００２１】
実施例６に提示するデータは、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンがＳＥＲＴにおけるアロステリック部位に結合することを示している。さらにまた、実施例７に提示するデータは、このアロステリック部位が（Ｒ）−シタロプラムのそれとは異なること、すなわちこれら二つの化合物は異なるアロステリック部位に結合することを示している。この概念は、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによってもたらされるセロトニンレベルの増加に（Ｒ）−シタロプラムは影響を及ぼさないことが示されている実施例８のインビボ結果によって裏付けられる。薬理学的に意味のある（Ｒ）−シタロプラムの唯一の結合はＳＥＲＴのアロステリック部位への結合であることを考えると、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと（Ｒ）−シタロプラムは異なるアロステリック部位に結合するというのが、実施例８のデータを正しく解釈する唯一の方法である。実施例９に示すように、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンのアロステリック部位に結合する化合物（この場合はこの化合物そのもの）は、（Ｓ）−シタロプラムなどのそうでない化合物よりも顕著な、セロトニンレベルの増加をもたらす。セロトニンレベルの増加はセロトニン再取り込み阻害剤の臨床効果の根拠であるから、この相違は、結果として、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンのアロステリック部位に結合する化合物の臨床的優位性につながるだろう。
【００２２】
ある実施形態において、本発明の方法は、試験化合物が［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位と正に相互作用するかどうかを決定し、正に相互作用する化合物を選択するステップを含む。この決定は、例えば本明細書の実施例４で説明するように行うことができる。
【００２３】
本発明の化合物はうつ病の処置に有用である。したがってある実施形態において、本発明は、うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本発明の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含む方法に関する。ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２４】
本明細書にいう化合物の「治療有効量」とは、前記化合物の投与を含む治療的介入において、所与の疾患およびその合併症の臨床症状を治癒させ、軽減し、または部分的に抑止するのに十分な量を意味する。これを達成するのに適した量は「治療有効量」と定義される。各目的に有効な量は疾患または傷害の重症度ならびに対象の体重および全身状態に依存するだろう。適当な投薬量の決定が、値のマトリックスを作成し、そのマトリックス中のさまざまな点を試験することにより、訓練を受けた医師の通常の技術に全て包含される日常的な実験を使って達成されうることは、理解されるだろう。
【００２５】
本明細書で使用する「処置」および「処置する」という用語は、疾患または障害などの状態と闘うためになされる患者の管理および医療を意味する。この用語は、例えば症状もしくは合併症を軽減するため、疾患、障害もしくは状態の進行を遅延させるため、症状および合併症を軽減しもしくは緩和するため、および／または疾患、障害もしくは状態を治癒させもしくは排除するための活性化合物の投与など、患者が患っている所与の状態に関する処置の全範囲を包含するものとし、この場合、防止は、疾患、状態、または障害と闘うためになされる患者の管理および医療であると解釈され、症状または合併症の発生を防止するための活性化合物の投与を包含する。それでもなお、予防的（防止的）処置と治療的（治癒的）処置は、本発明の二つの独立した態様である。処置される患者は、好ましくは哺乳動物、特にヒトである。
【００２６】
ある実施形態において、本発明は、うつ病を処置するための薬剤の製造における、本発明の方法によって同定される化合物の使用に関する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２７】
ある実施形態において、本発明は、抗うつ薬として使用するための、本発明の方法によって同定される化合物に関する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないものとする。
【００２８】
ある実施形態において、本発明は、本発明の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物を提供する。ただし、前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンではないものとする。
【００２９】
ある実施形態において、本発明は、抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル-アミンが結合するセトロニントランスポーター上のアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法に関する。特に、前記抗うつ薬はセロトニントランスポーターの阻害剤である。
【００３０】
ある実施形態において、本発明は、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合する抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、あるアロステリック部位へのその結合、特にセロトニントランスポーター上のアロステリック部位へのその結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的流布を含む方法に関する。特に、前記抗うつ薬はセロトニントランスポーターの阻害剤である。
【００３１】
ある実施形態では、前記情報の配布が、言語によるコミュニケーション、小冊子の配布、印刷媒体、音声テープ、磁気媒体、デジタル媒体、視聴覚媒体、掲示板、広告、新聞、雑誌、ダイレクトメールの送付、ラジオ、テレビ、電子メール、点字、電子媒体、バナー広告、光ファイバー、およびレーザーライトショーからなる群より選択される方法によって達成される。
【実施例】
【００３２】
＜実施例１＞
ラットシナプトソームにおける５−ＨＴ取り込みの阻害
雄ラット（１２５ｇ〜２２５ｇ）から得られるラット前脳を計り取り、１ｍＭニアラミドを含有する０．４０Ｍショ糖緩衝液約１０ｍｌ中、ガラス／テフロンホモジナイザーを使って、冷却した緩衝液と共にホモジナイズする（下記参照）。その懸濁液を、１０００Ｇ／４℃で１０分間遠心分離する。その結果生じた上清を４０，０００Ｇ／４℃で２０分間遠心分離する。ペレットを１８０倍体積のＫＲＰ緩衝液に再懸濁する。この懸濁液を使用時まで氷上に保つ。試験化合物１０μｌ、１０．０ｎＭ ［３Ｈ］−５ＨＴ １０μｌおよび膜１８０μｌ（０．５ｍｇ／ウェル）からなるアリコート（総体積は２００μＬになる）を、３７℃で１５分間インキュベートする。１０μＭシタロプラムの存在下で非特異的結合／取り込み量を決定し、緩衝液の存在下で総取り込み量を決定する。インキュベーション後に、Ｔｏｍｔｅｃ ＣｅｌｌＨａｒｖｅｓｔｅｒプログラム（Ｕｐｔａｋｅ）を使って、結合したリガンドを、０．１％ＰＥＩに３０分間予浸しておいたＵｎｉｆｉｌｔｅｒ ＧＦ／Ｃを通して濾過することによって、未結合のリガンドから分離した。フィルターを氷冷緩衝液１ｍｌで１回洗浄し、５０℃で乾燥し、シンチレーション液３５μｌをフィルターに加える。結合している放射能をＷａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａでカウントする。
【００３３】
＜実施例２＞
解離速度
一次部位において結合している試験化合物とセロトニントランスポーターとの間に形成される複合体に関する解離速度は、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜調製物で決定される。化合物−ＳＥＲＴ複合体の解離の速度論は、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜１０μｇと［３Ｈ］試験化合物１０μＬとからなるアリコート（平衡に達するまでプレインキュベートしたもの）の大規模な溶解（３００倍）後に決定される。［３Ｈ］試験化合物の濃度はＫｄの約６倍である。解離は、非放射標識試験化合物（０〜３００μＭ）の存在下または非存在下でアリコートの大規模な溶解（３００倍）を行うことによって開始される。結合している［３Ｈ］試験化合物を０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分後に測定する。
【００３４】
＜実施例３＞
Ｒ−シタロプラム
会合速度はｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３細胞から得られる膜調製物で決定される。［３Ｈ］化合物−ＳＥＲＴ複合体の会合の速度論は、平衡に達するまでプレインキュベートした、ｈＳＥＲＴを一過性に発現させるＨＥＫ２９３から得られる膜１０μｇと［３Ｈ］試験化合物２９０μｌとからなるアリコートのインキュベーション後に決定される。会合は、Ｒ−シタロプラム（０〜３００μＭ）の非存在下または存在下で放射性リガンドを添加することによって開始される。結合している［３Ｈ］試験化合物を、０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分後に測定する。Ｒ−シタロプラム（０〜３００μＭ）の添加によって左右されない［３Ｈ］試験化合物を選択する。
【００３５】
＜実施例４＞
［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンアロステリック部位における相互作用
［３Ｈ］［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを使用し、基本的に上記実施例３で述べたようにして、決定を行う。
【００３６】
＜実施例５＞
微小透析
動物
当初体重２７５〜３００ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用する。
【００３７】
外科手術および微小透析実験
ラットをヒプノルム（ｈｙｐｎｏｒｍ）／ドルミカム（２ｍｌ／ｋｇ）で麻酔し、腹側海馬（座標：ブレグマから後方５．６ｍｍ、側方−５．０ｍｍ、硬膜から腹側７．０ｍｍ）または前頭皮質（座標：ブレグマから前方３．２ｍｍ；側方０．８ｍｍ；硬膜から腹側４．０ｍｍ）に透析プローブチップを配置することを目指して、脳内ガイドカニューレ（ＣＭＡ／１２）を海馬に定位的に植え込む。ガイドカニューレの固定には固定ネジおよびアクリルセメントを使用する。動物の体温を直腸プローブで監視し、３７℃に維持する。ラットをケージで単独飼育して外科手術から２日間回復させる。実験の日に、ガイドカニューレを通して、微小透析プローブ（ＣＭＡ／１２、直径０．５ｍｍ、長さ３ｍｍ）を挿入する。
【００３８】
２チャンネルスイベルを介してプローブを微量注入ポンプに接続する。濾過したリンゲル液（１４５ｍｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１．２ｍＭ ＣａＣｌ２）による微小透析プローブの潅流を、１μＬ／分の一定流速で、プローブを脳に挿入する直前に開始し、実験の継続中はその潅流を続ける。１８０分間安定化した後、実験を開始する。透析液を２０分ごとに収集した。
【００３９】
急性処置；単回注射
細胞外５−ＨＴの基礎レベルを決定するために四つの画分を試料採取する。その後、試験化合物を投与し、試料採取を約３時間続ける。
【００４０】
データ提示：単回注射実験では、化合物を投与する直前の３連続５−ＨＴ試料の平均値を各実験の基礎レベルとし、データを基礎値の割合に変換する（平均基礎注射前値を１００％に標準化する）。
【００４１】
３日処置；ミニポンプ
３日処置実験には浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ、２ＭＬ１）を使用する。ポンプに無菌条件下で賦形剤／試験化合物を充填し、麻酔下で皮下に植え込む。実験は組み込まれたミニポンプを使って行われる。３日にわたる処置後の化合物の血漿レベルを測定するために、実験の最後に血液試料を収集する。
【００４２】
データ提示：ミニポンプ実験では、処置動物から得られるベースライン５−ＨＴ試料の平均を、賦形剤動物から得られるベースライン５−ＨＴ試料の平均と比較し、賦形剤群を１００％に標準化する。
【００４３】
実験後に動物を屠殺し、その脳を摘出し、凍結し、プローブ配置確認用に薄切する。
【００４４】
透析液５−ＨＴの分析
透析液中の５−ＨＴの濃度は電気化学的検出によるＨＰＬＣを利用して分析される。５−ＨＴは逆相液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ １５０×３ｍｍ、３μＭ）によって分離される。５−ＨＴ：流速０．４ｍｌ／分の７５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、１５０ｍｌ／ｌオクタンスルホン酸ナトリウム、１００μｌ／ｌトリエチルアミンおよび１０％アセトニトリル（ｐＨ３．０）からなる移動相。電気化学的検出は電量検出器を使用して行った；電位は２５０ｍＶに設定（ガードセルは３５０ｍＶ）（Ｃｏｕｌｏｃｈｅｍ ＩＩ、ＥＳＡ）。
【００４５】
＜実施例６＞
ＳＥＲＴ上のアロステリック部位への［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの結合
「Pharmacol. Toxicol., 80, 197-201, 1997」および「J. Neurochem., 92, 21-28, 2005」に記載されている方法に基づいてアッセイ手法を改変した。
【００４６】
１０％ウシ胎児血清、４ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃、５％ＣＯ２で、ＰｅａｋＲａｐｉｄ ２９３細胞（Ｅｄｇｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、メリーランド州ゲイサーズバーグ）を培養した。１０μｇの全ＤＮＡを使用し、１５０ｃｍ２フラスコ中で、リポフェクトアミン法（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）により、哺乳動物細胞発現ベクター中のヒトＳＥＲＴ ｃＤＮＡをＰｅａｋＲａｐｉｄ ２９３細胞中に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの２日後に、膜を収集した。
【００４７】
結合アッセイは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、および５ｍＭ ＫＣｌを含有する緩衝液（ｐＨ７．４）で行った。解離結合に先だって、［３Ｈ］−（Ｓ）−シタロプラム（４０ｎＭ）をｈＳＥＲＴ膜（５μｇ／１０μｌ）と共に室温で２時間インキュベートした。この反応混合物を９６穴形式のミニチューブに１０μｌ／ウェルずつ分注し、氷上に保った。解離結合は室温で行い、８００μｌの緩衝液またはさまざまな濃度の試験化合物を添加することにより、異なる時点で開始させた。Ｂｒａｎｄｅｌハーベスターを使って迅速濾過した後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４）で３回洗浄することにより、アッセイを停止した。Ｔｒｉｌｕｘカウンターを使って、結合しているリガンドをカウントした。
【００４８】
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）およびＸｌｆｉｔ ４（ＩＤＢＳ、英国サリー州ギルフォード）を使って解離結合データを解析した。一相指数関数的減衰式を使って、さまざまな時点における結合値を当てはめ、解離半減期（ｔ１／２）および速度（ｋ）値を得た。化合物存在下での速度（ｋ）と化合物非存在下での速度（ｋ０）との比（ｋ／ｋ０）を各化合物濃度について算出した。シグモイド用量応答曲線において、ｋ／ｋ０およびｌｏｇ濃度を当てはめることによって、ＩＣ５０値を得た。最高濃度における最大ｋ／ｋ０（変調倍率）も報告した。結果をＮ＝2のアッセイから平均する。
【００４９】
得られたデータを図１ａおよび１ｂに図示する。２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは、２６μＭのＩＣ５０でアロステリック部位に結合し、２００μＭにおいて３Ｈ（Ｓ）−シタロプラムを５．４倍の比で減速させた。
【００５０】
＜実施例７＞
（Ｒ）−シタロプラムの存在下におけるＳＥＲＴへの［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（Ｓ）−シタロプラムの会合
ｈＳＥＲＴを発現させるＨＥＫ２９３細胞を収集し、ＨＥＫ２９３−ｈＳＥＲＴ膜１０μｇを９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに入れる。［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラム＋試験化合物２９０μＬを加えることによって、会合を開始させる。最終体積は３００μＬであり、［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラムの濃度は約６ｎＭである。試験化合物の濃度はｎＭ域からμＭ域まで変化させる。インキュベーション時間は、氷上または室温（２２℃）で、０、２、５、１０、１５、２０、３０、５０、７０および９０分である。膜を、氷冷ＥＬＧＡ水中、ＧＦ／Ｃガラス繊維フィルター（０．５％ＰＥＩで３０分間予浸）上に収集する。フィルターを２×０．５ｍｌ氷冷ＥＬＧＡ水で２回すすぐ。フィルターを乾燥させ、４０μＬのシンチレーション液を加える。２時間後に、結合している［３Ｈ］（Ｓ）シタロプラムをシンチレーションカウンターで測定する。
【００５１】
得られたデータを図２に示す。このデータは、［３Ｈ］（Ｓ）−シタロプラムと［３Ｈ］２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンがＳＥＲＴに対して異なる結合特性を示すことを、明確に示している。ＳＥＲＴに対する［３Ｈ］（Ｓ）−シタロプラムの会合は明らかに（Ｒ）−シタロプラムの影響を受け、（Ｒ）−シタロプラムの濃度が増加するにつれて会合が減少するのに対して、［３Ｈ］［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの会合は、同じ濃度範囲で、（Ｒ）−シタロプラムによる影響をほとんど受けなかった。このことから、（Ｓ）−シタロプラムと［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンとは異なるアロステリック部位に結合するという結論が導かれる。
【００５２】
＜実施例８＞
ラットにおける亜慢性微小透析
実験の詳細は基本的に実施例５で説明したとおりである。得られたデータを図３に示す。［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは腹側海馬における細胞外セロトニンの著しい増加を引き起こすことが、明確に示されている。さらにまた、この増加は（Ｒ）−シタロプラムの同時投与による影響を受けない。このことから、（Ｒ）−シタロプラムと［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは同じ結合部位において競合しない、すなわちこれら二つの化合物は異なるアロステリック部位に結合するという結論が導かれる。これらのデータは、実施例７から得られる結論を、インビボ環境で裏付けている。
【００５３】
＜実施例９＞
ラットにおける３日微小透析
実験データについては実施例５を参照されたい。化合物を以下のように投薬した：１０ｍｇ／ｋｇ （Ｓ）−シタロプラムおよび４ｍｇ／ｋｇ ［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン；どちらもシュウ酸塩として。図４に提示するデータは、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが、（Ｓ）−シタロプラムよりも迅速かつ顕著なセロトニンレベルの増加を引き起こすことを示している。これらの発見は、結果として、臨床状況における改善された効力につながるだろうと予想される。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１ａ】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによるＳＥＲＴからの３Ｈ−（Ｓ）−シタロプラムの解離。
【図１ｂ】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンによるＳＥＲＴからの３Ｈ−（Ｓ）−シタロプラムの解離。
【図２】さまざまな濃度の（Ｒ）−シタロプラムの存在下におけるＳＥＲＴに対する［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（Ｓ）−シタロプラムの会合。
【図３】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン±（Ｒ）−シタロプラムの投与後に急性微小透析によって測定されるラットにおける細胞外セロトニンレベル（腹側海馬）。
【図４】［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンまたは（Ｓ）−シタロプラムの投与後に３日微小透析によって測定されるラットにおける細胞外セロトニンレベル（腹側海馬）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
情動障害の処置に有用な化合物を同定するための方法であって、
a）セロトニントランスポーターを一つまたはそれ以上の濃度の試験化合物と接触させるステップ；
b）前記試験化合物がセロトニン再取り込みを阻害するかどうかを決定するステップ；
c）前記試験化合物がセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかを決定するステップ；
d）セロトニン再取り込みを阻害し、かつセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する試験化合物を選択するステップ；
を含み、ただし、ステップｂ）およびｃ）は任意の順序で行うことができる、前記方法。
【請求項２】
うつ病の処置においてフルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎ（登録商標））より優れている化合物を同定するための、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
ステップｄ）において試験化合物がセロトニントランスポーターの阻害に関して１００ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ場合にその試験化合物が選択される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
試験化合物と相互作用するアロステリック部位が、Ｒ−シタロプラムを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位であるかどうかを決定するという、さらなるステップを含み、前記部位と正に相互作用する試験化合物は選択されない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ラットの海馬または前頭皮質における細胞外セロトニンレベルが増加するかどうかを決定するという、さらなるステップを含み、そのような増加を引き起こす試験化合物が選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
試験化合物が急性の測定で３００％以上の細胞外セロトニンレベルの増加を引き起こす場合にその試験化合物が選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
試験化合物が試験化合物の投与を開始してから３日後の測定で３００％以上の細胞外セロトニンレベルの増加を引き起こす場合にその試験化合物が選択される、請求項５の方法。
【請求項８】
前記増加が海馬において決定される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記増加が前前頭皮質において測定される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記アロステリック部位が２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができる部位である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含み、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記方法。
【請求項１２】
うつ病を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物の使用であって、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記使用。
【請求項１３】
抗うつ薬として使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物であって、ただし［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物であって、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記医薬組成物。
【請求項１５】
抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが結合するセロトニントランスポーター上のアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法。
【請求項１６】
［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合する抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、あるアロステリック部位へのその結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的流布を含む方法。
【請求項１７】
前記抗うつ薬がセロトニントランスポーターを阻害する、請求項１５または１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
情動障害の処置に有用な化合物を同定するための方法であって、
a）セロトニントランスポーターを一つまたはそれ以上の濃度の試験化合物と接触させるステップ；
b）前記試験化合物がセロトニン再取り込みを阻害するかどうかを決定するステップ；
c）前記試験化合物がセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と相互作用するかどうかを決定するステップ；
d）セロトニン再取り込みを阻害し、かつセロトニントランスポーターにおける一つまたはそれ以上のアロステリック部位と正に相互作用する試験化合物を選択するステップ；
を含み、ただし、ステップｂ）およびｃ）は任意の順序で行うことができる、前記方法。
【請求項２】
うつ病の処置においてフルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎ（登録商標））より優れている化合物を同定するための、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
ステップｄ）において試験化合物がセロトニントランスポーターの阻害に関して１００ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ場合にその試験化合物が選択される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
試験化合物と相互作用するアロステリック部位が、Ｒ−シタロプラムを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位であるかどうかを決定するという、さらなるステップを含み、前記部位と正に相互作用する試験化合物は選択されない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ラットの海馬または前頭皮質における細胞外セロトニンレベルが増加するかどうかを決定するという、さらなるステップを含み、そのような増加を引き起こす試験化合物が選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
試験化合物が急性の測定で３００％以上の細胞外セロトニンレベルの増加を引き起こす場合にその試験化合物が選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
試験化合物が試験化合物の投与を開始してから３日後の測定で３００％以上の細胞外セロトニンレベルの増加を引き起こす場合にその試験化合物が選択される、請求項５の方法。
【請求項８】
前記増加が海馬において決定される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記増加が前前頭皮質において測定される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記アロステリック部位が２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができる部位である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
うつ病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物の治療有効量を投与することを含み、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記方法。
【請求項１２】
うつ病を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物の使用であって、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記使用。
【請求項１３】
抗うつ薬として使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物であって、ただし［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物であって、ただし前記化合物は［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンではないことを条件とする、前記医薬組成物。
【請求項１５】
抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンが結合するセロトニントランスポーター上のアロステリック部位への前記抗うつ薬の結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的配布を含む方法。
【請求項１６】
［２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを結合することができるセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合する抗うつ薬の販売を促進するための方法であって、前記抗うつ薬の効果が、あるアロステリック部位へのその結合に、完全にまたは部分的に起因すると考えられることを示す情報の公的流布を含む方法。
【請求項１７】
前記抗うつ薬がセロトニントランスポーターを阻害する、請求項１５または１６のいずれか一項に記載の方法。
【図１ａ】
【図１ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図１ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２００９−５３８１１７（Ｐ２００９−５３８１１７Ａ）
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５００７０３（Ｐ２００９−５００７０３）
【出願日】平成１９年３月２１日（２００７．３．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００７／０５００３６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０７１６５
【国際公開日】平成１９年９月２７日（２００７．９．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５９１１４３０６５）ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット (129)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２１日（２００７．３．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００７／０５００３６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０７１６５
【国際公開日】平成１９年９月２７日（２００７．９．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５９１１４３０６５）ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット (129)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]