アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの組成物およびこの使用
直交性のｔＲＮＡ、直交性のアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼおよびｔＲＮＡ／シンテターゼの直交性対を含むタンパク質生合成機構の組成物および成分産生の方法が提供される。これらの直交性対を同定するための方法も、これらの直交性対を用いてタンパク質を生成する方法とともに提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ＲＳ）を含む組成物。
【請求項２】
前記ＲＳが優先的にｔＲＮＡをアミノアシル化する、請求項１の組成物。
【請求項３】
前記ｔＲＮＡが天然にはコードされないアミノ酸でアミノアシル化される、請求項２の組成物。
【請求項４】
前記天然にはコードされないアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項３の組成物。
【請求項５】
請求項１のＲＳおよびｔＲＮＡを含む組成物であり、前記ｔＲＮＡが化学的にアミノアシル化される、組成物。
【請求項６】
請求項１のＲＳおよびｔＲＮＡを含む組成物であり、前記ｔＲＮＡが酵素的にアミノアシル化される、組成物。
【請求項７】
前記ｔＲＮＡがＲＳによって酵素的にアミノアシル化される、請求項６の組成物。
【請求項８】
前記ｔＲＮＡがリボザイムによって酵素的にアミノアシル化される、請求項６の組成物。
【請求項９】
ｔＲＮＡをさらに含み、前記ｔＲＮＡがＲＳによってアミノ酸でアミノアシル化される、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記アミノ酸が、天然にはコードされないアミノ酸である、請求項９の組成物。
【請求項１１】
前記天然にはコードされないアミノ酸がパラアセチルフェニルアラニンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
前記ｔＲＮＡが古細菌ｔＲＮＡ由来である、請求項９の組成物。
【請求項１３】
前記ｔＲＮＡがＭ．ｊａｎｎｅｓｃｈｉｉ由来である、請求項９の組成物。
【請求項１４】
翻訳系をさらに含む、請求項１の組成物。
【請求項１５】
前記翻訳系が無細胞翻訳系である、請求項１４の組成物。
【請求項１６】
前記翻訳系が細胞溶解物である、請求項１４の組成物。
【請求項１７】
前記翻訳系が再構成された系である、請求項１４の組成物。
【請求項１８】
前記翻訳系が細胞翻訳系である、請求項１４の組成物。
【請求項１９】
翻訳系を含む細胞であり、前記翻訳系が、請求項１のＲＳを含む、細胞。
【請求項２０】
細胞が真核生物細胞である、請求項１９の細胞。
【請求項２１】
真核生物細胞が酵母細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２２】
真核生物細胞が真菌細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２３】
真核生物細胞が哺乳動物細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２４】
真核生物細胞が昆虫細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２５】
真核生物細胞が植物細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２６】
細胞が非真核生物細胞である、請求項１９の細胞。
【請求項２７】
非真核生物細胞がＥ．ｃｏｌｉ細胞である、請求項２６の細胞。
【請求項２８】
ＲＳによってアミノアシル化されるｔＲＮＡおよび目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、前記ポリヌクレオチドが、ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンを含む、請求項１９の細胞。
【請求項２９】
前記目的のポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項２８の細胞。
【請求項３０】
請求項１のＲＳを含むＥ．ｃｏｌｉ細胞。
【請求項３１】
請求項１のＲＳを含む酵母細胞。
【請求項３２】
請求項１のＲＳを含む真菌細胞。
【請求項３３】
請求項１のＲＳを含む哺乳動物細胞。
【請求項３４】
請求項１のＲＳを含む昆虫細胞。
【請求項３５】
請求項１のＲＳを含む植物細胞。
【請求項３６】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するＲＳをコードするポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３７】
ベクターが、プラスミド、コスミド、ファージまたはウイルスを含む、請求項３６のベクター。
【請求項３８】
ベクターが発現ベクターである、請求項３６のベクター。
【請求項３９】
請求項３６のベクターを含む細胞。
【請求項４０】
特定の位置で選択されたアミノ酸を用いて細胞中でポリペプチドを産生する方法であって、前記方法は、
適切な培地中で細胞を増殖させる工程であって、前記細胞が少なくとも１つのセレクターコドンを含み、および、あるポリペプチドをコードする核酸を含む工程と；および
前記選択されたアミノ酸を提供する工程と、を含み；
前記細胞がさらに、
前記細胞中で機能する請求項１の直交性ＲＳ（Ｏ−ＲＳ）であって、前記ＲＳが配列番号５、配列番号１７、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的な改変体からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、ＲＳと；および
セレクターコドンを認識する直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）であって、前記Ｏ−ＲＳが選択されたアミノ酸でＯ−ｔＲＮＡをアミノアシル化する、ｔＲＮＡと；
を含む、方法。
【請求項４１】
前記選択されたアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４０の方法。
【請求項４２】
請求項４０の方法によって生成されるポリペプチド。
【請求項４３】
前記選択されたアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４０に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記ポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項４０の方法。
【請求項４５】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するポリヌクレオチド。
【請求項１】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ＲＳ）を含む組成物。
【請求項２】
前記ＲＳが優先的にｔＲＮＡをアミノアシル化する、請求項１の組成物。
【請求項３】
前記ｔＲＮＡが天然にはコードされないアミノ酸でアミノアシル化される、請求項２の組成物。
【請求項４】
前記天然にはコードされないアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項３の組成物。
【請求項５】
請求項１のＲＳおよびｔＲＮＡを含む組成物であり、前記ｔＲＮＡが化学的にアミノアシル化される、組成物。
【請求項６】
請求項１のＲＳおよびｔＲＮＡを含む組成物であり、前記ｔＲＮＡが酵素的にアミノアシル化される、組成物。
【請求項７】
前記ｔＲＮＡがＲＳによって酵素的にアミノアシル化される、請求項６の組成物。
【請求項８】
前記ｔＲＮＡがリボザイムによって酵素的にアミノアシル化される、請求項６の組成物。
【請求項９】
ｔＲＮＡをさらに含み、前記ｔＲＮＡがＲＳによってアミノ酸でアミノアシル化される、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記アミノ酸が、天然にはコードされないアミノ酸である、請求項９の組成物。
【請求項１１】
前記天然にはコードされないアミノ酸がパラアセチルフェニルアラニンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
前記ｔＲＮＡが古細菌ｔＲＮＡ由来である、請求項９の組成物。
【請求項１３】
前記ｔＲＮＡがＭ．ｊａｎｎｅｓｃｈｉｉ由来である、請求項９の組成物。
【請求項１４】
翻訳系をさらに含む、請求項１の組成物。
【請求項１５】
前記翻訳系が無細胞翻訳系である、請求項１４の組成物。
【請求項１６】
前記翻訳系が細胞溶解物である、請求項１４の組成物。
【請求項１７】
前記翻訳系が再構成された系である、請求項１４の組成物。
【請求項１８】
前記翻訳系が細胞翻訳系である、請求項１４の組成物。
【請求項１９】
翻訳系を含む細胞であり、前記翻訳系が、請求項１のＲＳを含む、細胞。
【請求項２０】
細胞が真核生物細胞である、請求項１９の細胞。
【請求項２１】
真核生物細胞が酵母細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２２】
真核生物細胞が真菌細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２３】
真核生物細胞が哺乳動物細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２４】
真核生物細胞が昆虫細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２５】
真核生物細胞が植物細胞である、請求項２０の細胞。
【請求項２６】
細胞が非真核生物細胞である、請求項１９の細胞。
【請求項２７】
非真核生物細胞がＥ．ｃｏｌｉ細胞である、請求項２６の細胞。
【請求項２８】
ＲＳによってアミノアシル化されるｔＲＮＡおよび目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、前記ポリヌクレオチドが、ｔＲＮＡによって認識されるセレクターコドンを含む、請求項１９の細胞。
【請求項２９】
前記目的のポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項２８の細胞。
【請求項３０】
請求項１のＲＳを含むＥ．ｃｏｌｉ細胞。
【請求項３１】
請求項１のＲＳを含む酵母細胞。
【請求項３２】
請求項１のＲＳを含む真菌細胞。
【請求項３３】
請求項１のＲＳを含む哺乳動物細胞。
【請求項３４】
請求項１のＲＳを含む昆虫細胞。
【請求項３５】
請求項１のＲＳを含む植物細胞。
【請求項３６】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するＲＳをコードするポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３７】
ベクターが、プラスミド、コスミド、ファージまたはウイルスを含む、請求項３６のベクター。
【請求項３８】
ベクターが発現ベクターである、請求項３６のベクター。
【請求項３９】
請求項３６のベクターを含む細胞。
【請求項４０】
特定の位置で選択されたアミノ酸を用いて細胞中でポリペプチドを産生する方法であって、前記方法は、
適切な培地中で細胞を増殖させる工程であって、前記細胞が少なくとも１つのセレクターコドンを含み、および、あるポリペプチドをコードする核酸を含む工程と；および
前記選択されたアミノ酸を提供する工程と、を含み；
前記細胞がさらに、
前記細胞中で機能する請求項１の直交性ＲＳ（Ｏ−ＲＳ）であって、前記ＲＳが配列番号５、配列番号１７、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的な改変体からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、ＲＳと；および
セレクターコドンを認識する直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）であって、前記Ｏ−ＲＳが選択されたアミノ酸でＯ−ｔＲＮＡをアミノアシル化する、ｔＲＮＡと；
を含む、方法。
【請求項４１】
前記選択されたアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４０の方法。
【請求項４２】
請求項４０の方法によって生成されるポリペプチド。
【請求項４３】
前記選択されたアミノ酸がパラ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４０に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記ポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項４０の方法。
【請求項４５】
配列番号４、配列番号５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、この相補的なポリヌクレオチド配列、およびこの保存的改変体からなる群より選択される核酸配列を有するポリヌクレオチド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００８−５２５０２４（Ｐ２００８−５２５０２４Ａ）
【公表日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４８２５０（Ｐ２００７−５４８２５０）
【出願日】平成１７年１２月１日（２００５．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４３６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６８８０２
【国際公開日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【出願人】（５０６１１７０５７）アンブレツクス・インコーポレイテツド (14)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月１日（２００５．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４３６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６８８０２
【国際公開日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【出願人】（５０６１１７０５７）アンブレツクス・インコーポレイテツド (14)
【Ｆターム（参考）】
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