イチョウの抽出物
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)を含有するイチョウ葉からの新規抽出物が開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イチョウ(Ginkgo biloba)の葉の新規抽出物、該抽出物を得るための方法、ならびに、医薬品および／または補助食品および／または食品(機能性食品、特定の栄養目的のための食品、医療食品などを含む)において使用するための経口調製物を製造するための該抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
イチョウの木は驚嘆すべきものである。その性質の全てが長寿と関連しているので、ダーウィンはそれを「生きた化石」と称した。古くから、この木は、中国および日本において寺院庭園に植えられており、そうでなければこの植物は現在まで存在しなかったであろう。
【０００３】
イチョウ(Ginkgo biloba)は、現在イチョウと称されるものの中で唯一現存している種であるが、多くのイチョウと称される類縁体が化石記録において見いだされている。イチョウ目は、ペルム紀にまで遡る裸子植物の群である。この群は、他のいずれの裸子植物よりも球果植物に密接に関連していると考えられている。現在、イチョウは３０メートルまで成長することができ、千年にわたり生きることができる。その葉は漢方薬として使用されるが、その種子はより頻繁に使用されていた。中国では、いわゆる「バイ-グオ-ユェ(Bai-guo-ye)」が、呼吸障害、難聴、白内障、結核、血行不良、記憶障害、淋病、胃痛、皮膚病、白帯下、狭心症、赤痢、高血圧、不安およびその他を処置するために使用されている。粉末化した葉は、喘息、耳、鼻および喉疾患のために吸入されている。
【０００４】
西洋医学において、その葉は５０年代後半に研究対象になった。ウィルマー・シュワーベ(Willmar Schwabe)は、葉の天然物質の構成成分および活性を分析し、イチョウ抽出物の商品化を始めた。ブランドTeboninのもとで、チンキ剤および錠剤が、１０：１の濃度(原料：抽出物の比)で供給されている。その後、他の会社も抽出物を開発した。現在では、濃度はほとんどが５０：１(原料：抽出物の比)である。一方において、葉の化学、薬理学および臨床効果に関する多くの統制された研究および探索が、ほとんど抽出物ＥＧｂ７６１(Kaveri、Tebonin、Tanakan、RoekanまたはGinkgoldとも称される)を用いて行われている。１９８８年に、ハーバード大学のCoreyは、ギンクゴリドＢの合成に対してノーベル賞を獲得した。このギンクゴリドＢは、移植器官の拒絶を妨げるための使用について、ならびに、喘息および毒性ショックに対して研究が行われている。
【０００５】
イチョウ抽出物の主な活性成分は、フラボノイド(ケルセチン、ケンペロール、イソラムネチン、ミリセチンなど)およびそのグリコシド、テルペノイド(ギンクゴリドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｊ、Ｍおよびビロバリドなど)、およびある種の小さいフェノール化合物である。
【化１】
ケルセチン Ｒ2、Ｒ3＝ＯＨ、Ｒ1＝Ｈ；
ケンペロール Ｒ1、Ｒ3＝Ｈ、Ｒ2＝ＯＨ；
イソラムネチン Ｒ1＝ＯＭｅ、Ｒ2＝ＯＨ、Ｒ3＝Ｈ。
【０００６】
最新技術から、イチョウ抽出物およびそれを得るための方法を開示する数多くの文献が既知である。しかし、特に重要であるのは、欧州特許ＥＰ０４３１５３５Ｂ１およびＥＰ０４３１５３６Ｂ１(Schwabe)であり、これらは、(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および(ｅ)１０重量％未満の縮合タンニン、より具体的には(オリゴマー)プロアントシアニジン(ＯＰＣ)を含有するイチョウ葉の抽出物、ならびに、それを得るための方法に関する。実際のところ、Schwabeが記載する明細書は、イチョウ抽出物の全ての医薬応用のための標準として引き継がれている。注目すべきは、化合物(ｄ)および(ｅ)の含有量である。ギンクゴル酸(ginkgolic acid)は刺激(過敏)を引き起こすことが疑われているが、プロアントシアニジン(ＯＰＣ)は、イチョウ抽出物を静脈内または筋肉内で投与したとき、即ち経口経路を回避して投与したときの血球凝集および血清沈降特性の原因である。また、ＯＰＣの負の特性は欧州特許ＥＰ０４７７９６８Ｂ１(Schwabe)にも報告されており、これによれば、これらの化合物を抽出物から特別の方法によって完全に除去することが議論されている。
【０００７】
欧州特許ＥＰ０３６０５５６Ｂ１(Indena)は、実施例１において、２４重量％のフラボングリコシド、３.６重量％のギンクゴリド、３.１重量％のビロバリド、および９重量％のいわゆるプロシアニドール指数(procyanidolic index；これはＯＰＣ含有量に等価であると考えられる)を含有するイチョウ組成物を開示している。欧州特許ＥＰ１０３７６４６Ｂ１およびＥＰ１０８９７４８Ｂ１(Schwabe)は、４'Ｏ-メチルピリドキシン、ビフラボンおよびテルペンラクトンのような他の成分の含有量を減少させたことを特徴とするイチョウ組成物を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
市場に既に存在するイチョウ抽出物は、イチョウのこれまで既知の健康特性に関する必要性は満たしているが、現在の顧客は、改善された特性および／または追加の特性を有する製品を期待している。例えば、イチョウの場合、さらに、フリーラジカルの種々の負の効果に対して、経口投与によって広く生物を保護する新規抽出物を開発することが望ましい。第２の要求は、ヒト身体の全身状態を、例えば血液の微小循環に関して改善するイチョウ抽出物を開発することである。実際のところ、そのような生成物は、既存の抽出物に、例えばラジカル捕捉特性および血液循環刺激特性が周知である特定の活性物質を加えることによって容易に得ることができる。しかし、そのような生成物は、それを製造するための技術的作業の増加のゆえに、より高価なものになる。さらに、そのような抽出物は、もはや医薬標準仕様書の範囲内の真のイチョウ抽出物ではなくなる。従って、本発明が解決しようとする課題は、活性物質を加えることなく、上記のような追加の特性を有するイチョウ抽出物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、イチョウ葉からの新規抽出物であって、以下の成分を含有する抽出物を提供するものである：
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)。
【発明の効果】
【００１０】
種々の実験および試験の結果、驚くべきことに出願人は、オリゴマープロアントシアニジンの含有量を、臨界値１０重量％、特に１１重量％、好ましくは１２重量％以上に高めることによって、イチョウ葉の抽出物が、期待される改善された健康上の利点を完全に満足させることを見いだした。これは、広く受け入れられている科学的知識のゆえに、ＯＰＣ量を１０重量％未満の含有量まで低下させるか、さらにはこれらの化合物を完全に除去しなければならないという最新技術の不利益を克服するものと理解すべきである。具体的には、本発明により開示されるＯＰＣ含有量が増加したイチョウ抽出物の改善された健康上の利点は、抽出物の改善された抗酸化効果であり、これは、抗炎症活性の改善および血管組織の有益効果の改善(毛細血管脆弱性の減少および結合組織の安定化を含む)の結果を与える。これらは、特に、網膜微小循環の改善、ロドプシン再合成の促進、網膜酵素活性の調節などによって、目の健康に関係する。このようなＯＰＣ含有量が増加したイチョウ抽出物の改善された利点は、暗視および暗順応の改善、ならびに、糖尿病性網膜症、他の種類の網膜症、加齢による黄斑変性および緑内障に関係する網膜血流の改善を含む利益を与える(これらに限定はされない)。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
オリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)
オリゴマープロアントシアニジン(プロシアニジン、ロイコアントシアニンまたは縮合タンニンとしても知られる)は、塩基性単位を形成するような(＋)-カテキンまたは(−)-エピカテキンなどのフラバン-３-オールとのオリゴマーまたはポリマーである。その名称は、それらが酸加水分解したときに、着色したアントシアニジンに変換されることを反映している。通常、連続したモノマー間の結合は、Ｃ４からＣ８によるが、Ｃ４からＣ６によるものも生じうる。オリゴマープロアントシアニジンの構造を以下に示す：
【化２】
【００１２】
本発明のイチョウ抽出物のＯＰＣ含有量の分析は、Indenaの欧州特許ＥＰ０３６０５５６Ｂ１に記載されている指図に従って行った(該欧州特許の記載は本明細書の一部を構成する)。
【００１３】
抽出方法
本発明の別の目的は、
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物の製造方法を提供することである。
【００１４】
本発明の方法は、以下の工程を含んでなる：
(ｉ)イチョウの葉または乾燥抽出物のいずれかを、水性極性溶媒による抽出にかけて、第１液体中間体ＬＩ-１を得る工程；
(ii)中間体ＬＩ-１を、有機溶媒から分離させ、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素による液-液抽出にかけて、第２(水性)液体中間体ＬＩ-２を得る工程；
(iii)中間体ＬＩ-２を、ｐＨ２.５〜６.０に調節した後、極性Ｃ2-Ｃ6脂肪族アルコールによる液-液抽出にかけて、ＯＰＣに富む(水性)液体中間体ＬＩ-３およびグリコシドに富む別の(有機)液体中間体ＬＩ-４を得る工程；
(iv)中間体ＬＩ-４を、濃縮し、水で希釈し、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素と混合して、さらなる(有機)液体中間体ＬＩ-５および別の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得る工程(必要に応じてＬＩ-５を乾燥して、最終テルペンラクトン含有量を調節することができる)；
(ｖ)液体中間体ＬＩ-６を乾燥して、第１固体中間体ＳＩ-１を得る工程；
(vi)液体中間体ＬＩ-３を、有機溶媒から分離させ、水で希釈し、ｐＨ６〜８の値に調節し、溶液からＯＰＣが沈殿するに十分な時間、高くとも１０℃の温度に冷却する工程；
(vii)沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥して、第２固体中間体ＳＩ-２を得る工程；そして最後に
(viii)第２固体中間体ＳＩ-２を、第１固体中間体ＳＩ-１に、最終生成物が１０重量％以上のＯＰＣを含有するような量で添加する工程。
【００１５】
より具体的には、本発明に従って得られる抽出物は、通常は１１〜２０重量％、より好ましくは１２〜１８重量％、最も好ましくは１３〜１５重量％のＯＰＣ含有量を示す。
通常、これら抽出物は、
(ｉ)５０ｐｐｍ未満の４'Ｏ-メチルピロキシジン、
(ii)１００ｐｐｍ未満のビフラボン、および
(iii)５〜１０重量％のテルペンラクトン、
を含有する。
抽出物の含水量は、通常は多くとも５重量％である。
【００１６】
この新規方法の特別の利点は、イチョウ葉(通常は、少なくとも１０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示す)または市販の乾燥イチョウ抽出物(通常は、５〜２０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示す)のどちらかから出発して、仕様に合致する最終製品、特に、１０重量％以上、好ましくは約１２重量％のＯＰＣ含有量を示す最終製品にしうることである。
【００１７】
本発明の好ましい態様において、工程(ｉ)の極性溶媒はアセトンまたはエタノールである。アセトンは葉の抽出に非常に適しており、一方、エタノールは市場から購入可能な乾燥中間体の抽出に好ましい溶媒であることがわかった。工程(ii)および(iv)の非極性炭化水素は、好ましくはｎ-ヘプタンであり、これは、全ての望ましくないギンクゴル酸の除去および有機廃棄相中への濃縮を確実にするために有用である。さらに、工程(iii)の極性アルコールは、好ましくはｎ-ブタノールである。先行方法を超える新規方法の主な改善は、主流からＯＰＣに富む分画を分離し、該ＯＰＣを濃縮、精製および単離し、最後にそれを主流に戻して、ＯＰＣ含有量を、通常の４〜８重量％から１０重量％以上に、普通には約１２重量％まで高めることである。
【００１８】
カプセル封入
本発明に従う乾燥混合物を、カプセル中に導入するための粉末、顆粒または半固体として配合することもできる。粉末の形態で使用するときには、組成物をいずれか１つまたはそれ以上の賦形剤と一緒に配合することができるか、あるいは、組成物は未希釈の形態で存在することができる。半固体の形態で提供するために、乾燥混合物を、粘稠液体または半固体ビヒクル、例えばポリエチレングリコール、あるいは、液体担体、例えばグリコール、例えばプロピレングリコール、またはグリセロール、あるいは、植物油または魚油、例えばオリーブ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ダイズ油などから選択される油に、溶解または懸濁させることができる。このような抽出物を、マクロカプセルに封入することができる。これは、硬ゼラチンまたは軟ゼラチン型のカプセル中、あるいは、硬または軟ゼラチン等価物(ゼラチン不含)から作られたカプセル中に充填することを意味する。粘稠液体または半固体充填のためには、軟ゼラチンまたはゼラチン等価カプセルが好ましい。
【００１９】
本発明の特別の態様においては、活性な組成物をミクロカプセルに封入する。「ミクロカプセル」とは、少なくとも１つの連続した膜によって取り囲まれた少なくとも１つの固体または液体のコアを含有する直径が約０.１〜約５ｍｍの球状凝集体であると理解される。より正確には、それは、皮膜形成ポリマーによって被覆された微細分散した液相または固相であり、その製造においてポリマーが、乳化と液滴形成または界面重合の後に、封入すべき材料上に蓄積される。別の方法においては、液体活性成分をマトリックス(「ミクロスポンジ」)に吸収させ、これをミクロ粒子として、皮膜形成ポリマーによってさらに被覆することができる。ナノカプセルとしても知られる顕微鏡的に小さいカプセルを、同じように粉末として乾燥することができる。単一コアのミクロカプセルの他に、微小球としても知られる複数コアの凝集体も存在し、これは、連続した膜材料中に分布した２つまたはそれ以上のコアを含有する。さらに、単一コアまたは複数コアのミクロカプセルは、追加の第２、第３などの膜によって取り囲まれていてもよい。
【００２０】
膜は、天然、半合成または合成の材料からなっていてよい。天然の膜材料は、例えば、アラビアゴム、寒天、アガロース、マルトデキストリン、アルギン酸およびその塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたはカルシウム、脂肪および脂肪酸、セチルアルコール、コラーゲン、キトサン、レシチン、ゼラチン、アルブミン、セラック、多糖、例えばデンプンまたはデキストラン、ポリペプチド、タンパク質加水分解物、スクロースおよびワックスである。半合成の膜材料は、特に、化学的に修飾したセルロース、より具体的にはセルロースエステルおよびエーテル、例えば酢酸セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース、ならびに、デンプン誘導体、より具体的にはデンプンエーテルおよびエステルである。合成の膜材料は、例えばポリマー、例えばポリアクリレート、ポリアミド、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンである。
【００２１】
既知のミクロカプセルの例は、以下の市販製品である(膜材料をカッコ内に示す)：Hallcrest Microcapsules (ゼラチン、アラビアゴム)、Coletica Thalaspheres (海性コラーゲン)、Lipotec Millicapseln (アルギン酸、寒天)、Induchem Unispheres (ラクトース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、Unicerin C30 (ラクトース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、Kobo Glycospheres (修飾デンプン、脂肪酸エステル、リン脂質)、Softspheres (修飾寒天)、Kuhs Probiol Nanospheres (リン脂質)、およびPrimaspheresまたはPrimasponges (キトサン、陰イオン性ポリマー)。
【００２２】
本発明の組成物のカプセル封入は、活性物質が経口投与され、腸の特別の部分において放出されるべきである場合に好ましい。即ち、当業者は、腸の個々の部分のｐＨ条件下でのカプセルの安定性を比較することによって、適切なカプセル封入系を容易に選択することができる。適する方法は、例えば、国際特許出願公開ＷＯ ０１／０１９２６、ＷＯ ０１／０１９２７、ＷＯ ０１／０１９２８、ＷＯ ０１／０１９２９(Primacare)または欧州特許ＥＰ １０６４０８８ Ｂ１(Max Plank Gesellschaft)に開示されている(これらの開示は本明細書の一部を構成する)。
【００２３】
産業上の利用
上記したように、本発明の新規抽出物は、市場で見いだされているイチョウ抽出物の既知の有利な特性と、新規な驚くべき特徴(特にフリーラジカルに対する保護および網膜微小循環の改善の点で、特にヒト身体の全身状態を改善するという特徴)とを合わせ持つ。従って、本発明のさらなる対象は、医薬組成物および／または補助食品および／または食品(機能性食品、特定栄養目的のための食品、医療食品などを含む)を製造するための、ＯＰＣに富む新規抽出物の使用であり、これらにおいて、抽出物は１０〜１０００ｍｇ、好ましくは３０〜５００ｍｇ、より好ましくは６０〜２４０ｍｇの量で存在することができる(最終組成物を基準に算出する)。抽出物を身体に局所または経口適用によって投与する。最後に、本発明の別の対象は、網膜微小循環およびヒト身体状態の改善のための医薬組成物を製造するための該抽出物の使用である。
【実施例】
【００２４】
実施例Ａ１：イチョウ葉からの高ＯＰＣ含有量のイチョウ抽出物の製造
工程Ｉ：
フラボングルコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量が合計して０.８重量％であるイチョウ(Ginkgo biloba)の葉(１０００ｇ)を、撹拌容器に入れ、水性アセトン(６０w/w％)(５Ｌ)を用いて５０℃で２時間抽出した。液相を残留物から分離し、濾過および溶媒蒸発を行って、液体中間体ＬＩ-１(約３０重量％の乾燥残留物を有する)を得た。次に、該相ＬＩ-１をｎ-ヘプタンで抽出して、全ての所望ではないギンクゴル酸(ginkgolic acid)を含む有機相および有用生成物を含む第２の(水性)液体中間体相ＬＩ-２を得た。
【００２５】
工程II：
上記のようにして得た中間体相ＬＩ-２をｐＨ２.５〜６に調節した後、ｎ-ブタノールによる抽出を３回行って、ＯＰＣに富む第３の(水性)液体中間体相ＬＩ-３および第４の(有機)液体中間体相ＬＩ-４を得た(この後者を水で２〜３回洗浄して、所望ではない副生成物を除去した)。次に、該相ＬＩ-４を濃縮して、約２０重量％の乾燥残留物を示す濃縮分画を得た。次に、この濃縮物を約１０重量％の乾燥残留物まで水で希釈し、ｎ-ヘプタンと混合した(７０：３０ w/w)。分離の後、ギンクゴリドおよびビロバリドに富む第５の(有機)液体中間体ＬＩ-５ならびに有用生成物に富む第６の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得た。最後に、分画ＬＩ-６を濃縮および乾燥した。最終の固体は、約７重量％ＯＰＣ含有量を示した。
【００２６】
工程III：
工程IIで得られた液体中間体ＬＩ-３から有機溶媒の全ての痕跡を除き、それを水で希釈して約３０重量％の乾燥残留物とし、水酸化ナトリウム水溶液の添加によってｐＨ値を約６.８〜７.２に調節した。次に、この液体分画を一晩８℃に冷却した。翌日、主にＯＰＣからなる沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥し、そして工程IIの最終生成物として得られた固体に加えた。合わせた生成物は、以下の仕様を示した(カッコ内は３試料の平均)。
ギンクゴフラボングリコシド：２２〜２７(２４)重量％；
ビロバリド：２.６〜３.２(２.９)重量％；
ギンクゴリド：２.８〜３.４(３.０)重量％；
ＯＰＣ：１２〜１３(１２.２)重量％；
ギンクゴル酸：＜１０ｐｐｍ。
【００２７】
実施例Ａ２：乾燥イチョウ抽出物からの高ＯＰＣ含有量のイチョウ抽出物の製造
黄色ないし褐色の外観を有し、４.５重量％未満のフラボングリコシドを含有する市販の乾燥イチョウ抽出物(１０００ｇ)を、撹拌容器に入れ、水性エタノール(８０w/w％)を用いて抽出した。このようにして得た液体分画を濾過し、溶媒を除去した。このようにして得た中間体を水で希釈して約１０重量％の乾燥残留物とし、次にｎ-ヘプタンで抽出してギンクゴル酸を除去した。次に、このようにして得た水相を、実施例Ａ１の工程IIおよび工程IIIに記載したように処理した。
【００２８】
応用例：酸化防止特性の証明
反応性酸素種(ＲＯＳ)および反応性窒素種(ＲＮＳ)は、いわゆる酸化防止剤によって相殺されなければ、タンパク質、脂質、炭水化物およびＤＮＡなどの重要な生体分子を傷つけうる反応性化合物である。ＲＯＳおよびＲＮＳの一部(全部ではない)は、フリーラジカル、即ち、１つまたはそれ以上の不対電子を含む原子または分子である。ＲＯＳおよびＲＮＳの生成は、ヒト代謝の不可欠な部分として起こる。即ち、例えば、ミトコンドリア呼吸鎖によって、免疫系の正常な機能の一部として活性化食細胞の酸化的破壊中に、あるいは、キサンチンオキシダーゼなどの酵素によって起こる。外因性因子、例えば日光、タバコの煙、またはある種の環境汚染物質が、ＲＯＳおよびＲＮＳへのヒト身体の暴露の一因になることもある。ＲＯＳ／ＲＮＳは、過剰の酸化防止剤によって相殺され、このバランスがＲＯＳ／ＲＮＳの方に移動したときにのみ、酸化的ストレスが起こる。次いで、生体分子および生物学的系の損傷が誘発され、このような損傷が長期間にわたって蓄積したときに、多くの退行性疾患の発生ならびに老化それ自体の過程に関与することになる。
【００２９】
本発明に係るイチョウ抽出物などの活性物質の酸化防止特性は、インビトロまたは細胞培養系またはその他での種々の試験によって測定することができる。それぞれの試験は、ある種のＲＯＳおよび／またはＲＮＳに特異的であるのが普通である。ヒト身体は、全スペクトルのこれら反応性物質(「プロオキシダント」とも称される)に暴露されるので、酸化防止剤は、種々のプロオキシダントに対して有効であるのが望ましいであろう。従って、生成物の特性を評価するために、イチョウ抽出物を種々の試験に、即ち、ラジカルカチオンを減少させる能力を測定する試験(ＤＰＰＨ試験)、ヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)、スーパーオキシド(Ｏ2・-)、過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)を除去する能力を測定する試験、および、一重項酸素を失活させる能力を測定する試験にかけることができる。さらに、金属キレート化特性を評価することができる。
【００３０】
Ｉ．ＤＰＰＨ試験
ＤＰＰＨ試験は、フリーラジカルを除去する試験物質の能力、具体的にはラジカルカチオンを減少させる試験物質の能力を測定する。この試験は、ＤＰＰＨ(２,２-ジフェニル-１-ピクリルヒドラジル)を使用する。この物質は、吸収極大が５１５ｎｍにあることにより「紫色」に見える安定なラジカルであり、酸化防止剤によって還元されたときに無色化合物に転換される。従って、試験物質の酸化防止活性を、５１５ｎｍにおける吸収の減少によって追跡する。この試験の結果を、以下の表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】
II．ヒドロキシルラジカル除去活性
ヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)を除去する能力を、いわゆる「デオキシリボース試験」によりインビトロで評価することができる。ＨＯ・は、全ＲＯＳ／ＲＮＳの中で最も反応性が高いと考えられており、デオキシリボースなどのＤＮＡ構成成分を含むほとんど全ての細胞化合物を攻撃することができる。この試験においては、アスコルビン酸、Ｈ2Ｏ2、およびＦｅ3+-ＥＤＴＡの混合物によって、即ち、フェントン反応(鉄の存在下でのＨ2Ｏ2)によって、ＨＯ・を生成させる。ＨＯ・はデオキシリボースを攻撃し、それをフラグメントに分解し、該フラグメントは、低ｐＨでチオバルビツール酸(ＴＢＡ)と一緒に加熱したときにピンク色の色原体を生成する。添加したヒドロキシルラジカル「スカベンジャー」は、生成したヒドロキシルラジカルを、デオキシリボースと競合し、色原体の生成を減少させる。この試験を、ＥＤＴＡの存在下および非存在下の両方で行って、鉄などの遷移金属イオンをキレート化(結合)するＯＰＣの能力を調べる。この結果を、以下の表２に示す(２つの試験の平均を示す)。
【００３３】
【表２】
【００３４】
III．スーパーオキシドおよび過酸化水素除去活性
２つのさらなるＲＯＳは、スーパーオキシド(Ｏ2・-)および過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)である。インビボで生成したスーパーオキシド(例えば、活性化食細胞の酸化的破壊中に、あるいは、シトクロムＰ４５０オキシダーゼが関与する反応において生成する)は、酵素(ＳＯＤ、スーパーオキシドジスムターゼ)によって、または酵素によらない不均化によって、ほとんどがＨ2Ｏ2に変換され、これは荷電しておらず、細胞膜を容易に横切るものと考えられている。例えば、脈管組織におけるＯ2・-およびＨ2Ｏ2の生成の増加は、脈管機能障害に関連する前炎症性および他の症状ならびに関連の疾患の一因になる。
【００３５】
Ｏ2・-およびＨ2Ｏ2を除去する本発明のイチョウ抽出物の能力を試験する目的で、これらのＲＯＳを、キサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系を用いて生成させ、化学発光(ルミノール)を用いて検出することができる。
【表３】
【００３６】
IV．一重項酸素失活活性
一重項酸素(1Ｏ2)は、分子酸素の電子的に励起された形態であり、光化学的に、即ち光に暴露したときに、または代謝的に、例えば活性化された好中球によって、脂質の過酸化の過程において、および抗炎症性媒介物質(プロスタグランジン)および解毒(シトクロムＰ４５０オキシゲナーゼ)に関連する酵素反応において、インビボで生成することができる。本発明のイチョウ抽出物の一重項酸素の失活活性を評価する目的で、皮膚に対する光誘発損傷における一重項酸素の関与を使用した。一重項酸素による皮膚に対する光誘発損傷(例えば皮膚の早期老化としても知られる光老化)は、皮膚細胞外マトリックスの分解に関与する酵素の誘発、ならびに、皮膚細胞外マトリックスタンパク質の１つであるコラーゲンとの直接反応の両方によって媒介される。この反応には、異常架橋を形成すること、従って皮膚マトリックスの完全性を乱すことが含まれる。この1Ｏ2誘発のコラーゲン損傷を評価するために、光増感剤としてリボフラビンを用いてＵＶＡ照射により1Ｏ2をインビトロで生成させ、コラーゲン損傷を、コラーゲンおよびグルコースの水溶液の粘度の増大によって測定した。この結果を、以下の表４に示す。
【００３７】
【表４】
【００３８】
種々の試験の結果は、本発明の高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物が、種々の関連ＲＯＳ(これらは、ヒト身体および外因性供給源によって生成し、ヒト健康に関係する重要な生体分子および生体系に対する酸化的ストレス誘発損傷の一因になる)に対して酸化防止剤として働くことを示す。有利な特性の増大が、単に比例的なものではなく、約１１〜１２重量％の臨界ＯＰＣ濃度が存在することが観察されることを十分に知るべきである。
【００３９】
高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物の酸化防止効果が、ＤＰＰＨ試験において示されるように、一般にラジカルに対して示される。さらに、これらは、ヒト代謝の多くの経路において生成し、スーパーオキシド(Ｏ2・-)および過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)による損傷を媒介する実際の活性種であると考えられ、全ＲＯＳの中で最も反応性が高いと考えられているヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)の除去に関与している。また、高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物は、金属キレート化特性を有し、従って遷移金属イオンによって触媒されるＲＯＳの生成を妨げることができることがわかった。さらに、試験結果は、本抽出物のスーパーオキシドおよび過酸化水素の除去特性ならびに一重項酸素(1Ｏ2)の失活特性を示す。即ち、本抽出物は、ヒト身体の細胞および組織に対するフリーラジカル損傷の多くの側面の原因であるさらなるＲＯＳに対して酸化防止活性を示す。種々の試験の結果は、明らかに、改善された酸化防止活性を有する本発明の新規抽出物が、低いＯＰＣ含有量を示す最新技術から既知の抽出物よりも、老化の徴候、環境ストレス、炎症、および他の健康状態、特に目の健康に関連する状態の制御を意図する経口調製物において使用するのに適していることを示す。
【００４０】
実施例Ｂ１：新規イチョウ抽出物のカプセル封入
撹拌機および還流コンデンサーを装備した５００ｍｌの三口フラスコにおいて、寒天(３ｇ)を沸騰水(２００ｍｌ)に溶解した。初めに、水(１００ｇまで)中のグリセロール(１０ｇ)の均一分散液を、次いで、水(１００ｇまで)中のキトサン(HydagenR DCMF、グリコール酸中１重量％、Cognis Deutschland GmbH & Co. KG、デュッセルドルフ／独国)(２５ｇ)、実施例Ａ１によるイチョウの噴霧乾燥抽出物(１０ｇ)、PhenonipR (フェノキシエタノールおよびパラベンを含有する防腐混合物)(０.５ｇ)、およびPolysorbate-20(TweenR 20、ＩＣＩ)(０.５ｇ)の調製物を、激しく撹拌しながら約３０分間で混合物に加えた。得られたマトリックスを濾過し、５０℃に加熱し、予め１５℃に冷却した２.５倍容量のパラフィン油中に激しく撹拌しながら分散させた。次いで、この分散液を、１重量％のラウリル硫酸ナトリウムおよび０.５重量％のアルギン酸ナトリウムを含有する水溶液で洗浄し、続いて０.５重量％のPhenonip水溶液で繰り返し洗浄し、その過程で油相を除いた。ふるい分けの後に、８重量％のミクロカプセル(平均直径１ｍｍ)を含有する水性調製物が得られた。
【００４１】
実施例Ｂ２：新規イチョウ抽出物のカプセル封入
撹拌機および還流コンデンサーを装備した５００ｍｌの三口フラスコにおいて、寒天(１ｇ)を水(３３ｇ)に溶解し、１００℃に加熱した。次いで、アルギン酸カルシウムの２重量％水溶液(５０ｇ)およびGellan Gum(Kelgocel、Degussa AG)の１重量％水溶液(５ｇ)を加えた。激しく撹拌した後、水(１００ｇまで)中の実施例Ａ１によるイチョウの噴霧乾燥抽出物(１０ｇ)、PhenonipR (０.５ｇ)、およびPolysorbate-20(TweenR 20、ＩＣＩ)(０.５ｇ)を、約３０分間で混合物に加えた。このようにして得られた組成物を、カプリンカプリルトリグリセリド(Myritol 331、Cognis Deutschland GmbH & Co. KG)からなる浴中に滴下した。得られた寒天／ジェランガム／アルギン酸塩タイプのミクロカプセルを分離し、１重量％のPolysorbate-20を含有する水溶液で洗浄して、油成分の痕跡を除去した。次いで、この軟カプセルを、カプセル壁の架橋および硬化のために、塩化カルシウムの０.５重量％水溶液からなる浴中に導入した。ふるい分けの後に、８重量％のミクロカプセル(平均直径０.２５ｍｍ)を含有する水性調製物が得られた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イチョウ(Ginkgo biloba)の葉の新規抽出物、該抽出物を得るための方法、ならびに、医薬品および／または補助食品および／または食品(機能性食品、特定の栄養目的のための食品、医療食品などを含む)において使用するための経口調製物を製造するための該抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
イチョウの木は驚嘆すべきものである。その性質の全てが長寿と関連しているので、ダーウィンはそれを「生きた化石」と称した。古くから、この木は、中国および日本において寺院庭園に植えられており、そうでなければこの植物は現在まで存在しなかったであろう。
【０００３】
イチョウ(Ginkgo biloba)は、現在イチョウと称されるものの中で唯一現存している種であるが、多くのイチョウと称される類縁体が化石記録において見いだされている。イチョウ目は、ペルム紀にまで遡る裸子植物の群である。この群は、他のいずれの裸子植物よりも球果植物に密接に関連していると考えられている。現在、イチョウは３０メートルまで成長することができ、千年にわたり生きることができる。その葉は漢方薬として使用されるが、その種子はより頻繁に使用されていた。中国では、いわゆる「バイ-グオ-ユェ(Bai-guo-ye)」が、呼吸障害、難聴、白内障、結核、血行不良、記憶障害、淋病、胃痛、皮膚病、白帯下、狭心症、赤痢、高血圧、不安およびその他を処置するために使用されている。粉末化した葉は、喘息、耳、鼻および喉疾患のために吸入されている。
【０００４】
西洋医学において、その葉は５０年代後半に研究対象になった。ウィルマー・シュワーベ(Willmar Schwabe)は、葉の天然物質の構成成分および活性を分析し、イチョウ抽出物の商品化を始めた。ブランドTeboninのもとで、チンキ剤および錠剤が、１０：１の濃度(原料：抽出物の比)で供給されている。その後、他の会社も抽出物を開発した。現在では、濃度はほとんどが５０：１(原料：抽出物の比)である。一方において、葉の化学、薬理学および臨床効果に関する多くの統制された研究および探索が、ほとんど抽出物ＥＧｂ７６１(Kaveri、Tebonin、Tanakan、RoekanまたはGinkgoldとも称される)を用いて行われている。１９８８年に、ハーバード大学のCoreyは、ギンクゴリドＢの合成に対してノーベル賞を獲得した。このギンクゴリドＢは、移植器官の拒絶を妨げるための使用について、ならびに、喘息および毒性ショックに対して研究が行われている。
【０００５】
イチョウ抽出物の主な活性成分は、フラボノイド(ケルセチン、ケンペロール、イソラムネチン、ミリセチンなど)およびそのグリコシド、テルペノイド(ギンクゴリドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｊ、Ｍおよびビロバリドなど)、およびある種の小さいフェノール化合物である。
【化１】
ケルセチン Ｒ2、Ｒ3＝ＯＨ、Ｒ1＝Ｈ；
ケンペロール Ｒ1、Ｒ3＝Ｈ、Ｒ2＝ＯＨ；
イソラムネチン Ｒ1＝ＯＭｅ、Ｒ2＝ＯＨ、Ｒ3＝Ｈ。
【０００６】
最新技術から、イチョウ抽出物およびそれを得るための方法を開示する数多くの文献が既知である。しかし、特に重要であるのは、欧州特許ＥＰ０４３１５３５Ｂ１およびＥＰ０４３１５３６Ｂ１(Schwabe)であり、これらは、(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および(ｅ)１０重量％未満の縮合タンニン、より具体的には(オリゴマー)プロアントシアニジン(ＯＰＣ)を含有するイチョウ葉の抽出物、ならびに、それを得るための方法に関する。実際のところ、Schwabeが記載する明細書は、イチョウ抽出物の全ての医薬応用のための標準として引き継がれている。注目すべきは、化合物(ｄ)および(ｅ)の含有量である。ギンクゴル酸(ginkgolic acid)は刺激(過敏)を引き起こすことが疑われているが、プロアントシアニジン(ＯＰＣ)は、イチョウ抽出物を静脈内または筋肉内で投与したとき、即ち経口経路を回避して投与したときの血球凝集および血清沈降特性の原因である。また、ＯＰＣの負の特性は欧州特許ＥＰ０４７７９６８Ｂ１(Schwabe)にも報告されており、これによれば、これらの化合物を抽出物から特別の方法によって完全に除去することが議論されている。
【０００７】
欧州特許ＥＰ０３６０５５６Ｂ１(Indena)は、実施例１において、２４重量％のフラボングリコシド、３.６重量％のギンクゴリド、３.１重量％のビロバリド、および９重量％のいわゆるプロシアニドール指数(procyanidolic index；これはＯＰＣ含有量に等価であると考えられる)を含有するイチョウ組成物を開示している。欧州特許ＥＰ１０３７６４６Ｂ１およびＥＰ１０８９７４８Ｂ１(Schwabe)は、４'Ｏ-メチルピリドキシン、ビフラボンおよびテルペンラクトンのような他の成分の含有量を減少させたことを特徴とするイチョウ組成物を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
市場に既に存在するイチョウ抽出物は、イチョウのこれまで既知の健康特性に関する必要性は満たしているが、現在の顧客は、改善された特性および／または追加の特性を有する製品を期待している。例えば、イチョウの場合、さらに、フリーラジカルの種々の負の効果に対して、経口投与によって広く生物を保護する新規抽出物を開発することが望ましい。第２の要求は、ヒト身体の全身状態を、例えば血液の微小循環に関して改善するイチョウ抽出物を開発することである。実際のところ、そのような生成物は、既存の抽出物に、例えばラジカル捕捉特性および血液循環刺激特性が周知である特定の活性物質を加えることによって容易に得ることができる。しかし、そのような生成物は、それを製造するための技術的作業の増加のゆえに、より高価なものになる。さらに、そのような抽出物は、もはや医薬標準仕様書の範囲内の真のイチョウ抽出物ではなくなる。従って、本発明が解決しようとする課題は、活性物質を加えることなく、上記のような追加の特性を有するイチョウ抽出物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、イチョウ葉からの新規抽出物であって、以下の成分を含有する抽出物を提供するものである：
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)。
【発明の効果】
【００１０】
種々の実験および試験の結果、驚くべきことに出願人は、オリゴマープロアントシアニジンの含有量を、臨界値１０重量％、特に１１重量％、好ましくは１２重量％以上に高めることによって、イチョウ葉の抽出物が、期待される改善された健康上の利点を完全に満足させることを見いだした。これは、広く受け入れられている科学的知識のゆえに、ＯＰＣ量を１０重量％未満の含有量まで低下させるか、さらにはこれらの化合物を完全に除去しなければならないという最新技術の不利益を克服するものと理解すべきである。具体的には、本発明により開示されるＯＰＣ含有量が増加したイチョウ抽出物の改善された健康上の利点は、抽出物の改善された抗酸化効果であり、これは、抗炎症活性の改善および血管組織の有益効果の改善(毛細血管脆弱性の減少および結合組織の安定化を含む)の結果を与える。これらは、特に、網膜微小循環の改善、ロドプシン再合成の促進、網膜酵素活性の調節などによって、目の健康に関係する。このようなＯＰＣ含有量が増加したイチョウ抽出物の改善された利点は、暗視および暗順応の改善、ならびに、糖尿病性網膜症、他の種類の網膜症、加齢による黄斑変性および緑内障に関係する網膜血流の改善を含む利益を与える(これらに限定はされない)。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
オリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)
オリゴマープロアントシアニジン(プロシアニジン、ロイコアントシアニンまたは縮合タンニンとしても知られる)は、塩基性単位を形成するような(＋)-カテキンまたは(−)-エピカテキンなどのフラバン-３-オールとのオリゴマーまたはポリマーである。その名称は、それらが酸加水分解したときに、着色したアントシアニジンに変換されることを反映している。通常、連続したモノマー間の結合は、Ｃ４からＣ８によるが、Ｃ４からＣ６によるものも生じうる。オリゴマープロアントシアニジンの構造を以下に示す：
【化２】
【００１２】
本発明のイチョウ抽出物のＯＰＣ含有量の分析は、Indenaの欧州特許ＥＰ０３６０５５６Ｂ１に記載されている指図に従って行った(該欧州特許の記載は本明細書の一部を構成する)。
【００１３】
抽出方法
本発明の別の目的は、
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物の製造方法を提供することである。
【００１４】
本発明の方法は、以下の工程を含んでなる：
(ｉ)イチョウの葉または乾燥抽出物のいずれかを、水性極性溶媒による抽出にかけて、第１液体中間体ＬＩ-１を得る工程；
(ii)中間体ＬＩ-１を、有機溶媒から分離させ、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素による液-液抽出にかけて、第２(水性)液体中間体ＬＩ-２を得る工程；
(iii)中間体ＬＩ-２を、ｐＨ２.５〜６.０に調節した後、極性Ｃ2-Ｃ6脂肪族アルコールによる液-液抽出にかけて、ＯＰＣに富む(水性)液体中間体ＬＩ-３およびグリコシドに富む別の(有機)液体中間体ＬＩ-４を得る工程；
(iv)中間体ＬＩ-４を、濃縮し、水で希釈し、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素と混合して、さらなる(有機)液体中間体ＬＩ-５および別の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得る工程(必要に応じてＬＩ-５を乾燥して、最終テルペンラクトン含有量を調節することができる)；
(ｖ)液体中間体ＬＩ-６を乾燥して、第１固体中間体ＳＩ-１を得る工程；
(vi)液体中間体ＬＩ-３を、有機溶媒から分離させ、水で希釈し、ｐＨ６〜８の値に調節し、溶液からＯＰＣが沈殿するに十分な時間、高くとも１０℃の温度に冷却する工程；
(vii)沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥して、第２固体中間体ＳＩ-２を得る工程；そして最後に
(viii)第２固体中間体ＳＩ-２を、第１固体中間体ＳＩ-１に、最終生成物が１０重量％以上のＯＰＣを含有するような量で添加する工程。
【００１５】
より具体的には、本発明に従って得られる抽出物は、通常は１１〜２０重量％、より好ましくは１２〜１８重量％、最も好ましくは１３〜１５重量％のＯＰＣ含有量を示す。
通常、これら抽出物は、
(ｉ)５０ｐｐｍ未満の４'Ｏ-メチルピロキシジン、
(ii)１００ｐｐｍ未満のビフラボン、および
(iii)５〜１０重量％のテルペンラクトン、
を含有する。
抽出物の含水量は、通常は多くとも５重量％である。
【００１６】
この新規方法の特別の利点は、イチョウ葉(通常は、少なくとも１０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示す)または市販の乾燥イチョウ抽出物(通常は、５〜２０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示す)のどちらかから出発して、仕様に合致する最終製品、特に、１０重量％以上、好ましくは約１２重量％のＯＰＣ含有量を示す最終製品にしうることである。
【００１７】
本発明の好ましい態様において、工程(ｉ)の極性溶媒はアセトンまたはエタノールである。アセトンは葉の抽出に非常に適しており、一方、エタノールは市場から購入可能な乾燥中間体の抽出に好ましい溶媒であることがわかった。工程(ii)および(iv)の非極性炭化水素は、好ましくはｎ-ヘプタンであり、これは、全ての望ましくないギンクゴル酸の除去および有機廃棄相中への濃縮を確実にするために有用である。さらに、工程(iii)の極性アルコールは、好ましくはｎ-ブタノールである。先行方法を超える新規方法の主な改善は、主流からＯＰＣに富む分画を分離し、該ＯＰＣを濃縮、精製および単離し、最後にそれを主流に戻して、ＯＰＣ含有量を、通常の４〜８重量％から１０重量％以上に、普通には約１２重量％まで高めることである。
【００１８】
カプセル封入
本発明に従う乾燥混合物を、カプセル中に導入するための粉末、顆粒または半固体として配合することもできる。粉末の形態で使用するときには、組成物をいずれか１つまたはそれ以上の賦形剤と一緒に配合することができるか、あるいは、組成物は未希釈の形態で存在することができる。半固体の形態で提供するために、乾燥混合物を、粘稠液体または半固体ビヒクル、例えばポリエチレングリコール、あるいは、液体担体、例えばグリコール、例えばプロピレングリコール、またはグリセロール、あるいは、植物油または魚油、例えばオリーブ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ダイズ油などから選択される油に、溶解または懸濁させることができる。このような抽出物を、マクロカプセルに封入することができる。これは、硬ゼラチンまたは軟ゼラチン型のカプセル中、あるいは、硬または軟ゼラチン等価物(ゼラチン不含)から作られたカプセル中に充填することを意味する。粘稠液体または半固体充填のためには、軟ゼラチンまたはゼラチン等価カプセルが好ましい。
【００１９】
本発明の特別の態様においては、活性な組成物をミクロカプセルに封入する。「ミクロカプセル」とは、少なくとも１つの連続した膜によって取り囲まれた少なくとも１つの固体または液体のコアを含有する直径が約０.１〜約５ｍｍの球状凝集体であると理解される。より正確には、それは、皮膜形成ポリマーによって被覆された微細分散した液相または固相であり、その製造においてポリマーが、乳化と液滴形成または界面重合の後に、封入すべき材料上に蓄積される。別の方法においては、液体活性成分をマトリックス(「ミクロスポンジ」)に吸収させ、これをミクロ粒子として、皮膜形成ポリマーによってさらに被覆することができる。ナノカプセルとしても知られる顕微鏡的に小さいカプセルを、同じように粉末として乾燥することができる。単一コアのミクロカプセルの他に、微小球としても知られる複数コアの凝集体も存在し、これは、連続した膜材料中に分布した２つまたはそれ以上のコアを含有する。さらに、単一コアまたは複数コアのミクロカプセルは、追加の第２、第３などの膜によって取り囲まれていてもよい。
【００２０】
膜は、天然、半合成または合成の材料からなっていてよい。天然の膜材料は、例えば、アラビアゴム、寒天、アガロース、マルトデキストリン、アルギン酸およびその塩、例えばアルギン酸ナトリウムまたはカルシウム、脂肪および脂肪酸、セチルアルコール、コラーゲン、キトサン、レシチン、ゼラチン、アルブミン、セラック、多糖、例えばデンプンまたはデキストラン、ポリペプチド、タンパク質加水分解物、スクロースおよびワックスである。半合成の膜材料は、特に、化学的に修飾したセルロース、より具体的にはセルロースエステルおよびエーテル、例えば酢酸セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース、ならびに、デンプン誘導体、より具体的にはデンプンエーテルおよびエステルである。合成の膜材料は、例えばポリマー、例えばポリアクリレート、ポリアミド、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンである。
【００２１】
既知のミクロカプセルの例は、以下の市販製品である(膜材料をカッコ内に示す)：Hallcrest Microcapsules (ゼラチン、アラビアゴム)、Coletica Thalaspheres (海性コラーゲン)、Lipotec Millicapseln (アルギン酸、寒天)、Induchem Unispheres (ラクトース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、Unicerin C30 (ラクトース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、Kobo Glycospheres (修飾デンプン、脂肪酸エステル、リン脂質)、Softspheres (修飾寒天)、Kuhs Probiol Nanospheres (リン脂質)、およびPrimaspheresまたはPrimasponges (キトサン、陰イオン性ポリマー)。
【００２２】
本発明の組成物のカプセル封入は、活性物質が経口投与され、腸の特別の部分において放出されるべきである場合に好ましい。即ち、当業者は、腸の個々の部分のｐＨ条件下でのカプセルの安定性を比較することによって、適切なカプセル封入系を容易に選択することができる。適する方法は、例えば、国際特許出願公開ＷＯ ０１／０１９２６、ＷＯ ０１／０１９２７、ＷＯ ０１／０１９２８、ＷＯ ０１／０１９２９(Primacare)または欧州特許ＥＰ １０６４０８８ Ｂ１(Max Plank Gesellschaft)に開示されている(これらの開示は本明細書の一部を構成する)。
【００２３】
産業上の利用
上記したように、本発明の新規抽出物は、市場で見いだされているイチョウ抽出物の既知の有利な特性と、新規な驚くべき特徴(特にフリーラジカルに対する保護および網膜微小循環の改善の点で、特にヒト身体の全身状態を改善するという特徴)とを合わせ持つ。従って、本発明のさらなる対象は、医薬組成物および／または補助食品および／または食品(機能性食品、特定栄養目的のための食品、医療食品などを含む)を製造するための、ＯＰＣに富む新規抽出物の使用であり、これらにおいて、抽出物は１０〜１０００ｍｇ、好ましくは３０〜５００ｍｇ、より好ましくは６０〜２４０ｍｇの量で存在することができる(最終組成物を基準に算出する)。抽出物を身体に局所または経口適用によって投与する。最後に、本発明の別の対象は、網膜微小循環およびヒト身体状態の改善のための医薬組成物を製造するための該抽出物の使用である。
【実施例】
【００２４】
実施例Ａ１：イチョウ葉からの高ＯＰＣ含有量のイチョウ抽出物の製造
工程Ｉ：
フラボングルコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量が合計して０.８重量％であるイチョウ(Ginkgo biloba)の葉(１０００ｇ)を、撹拌容器に入れ、水性アセトン(６０w/w％)(５Ｌ)を用いて５０℃で２時間抽出した。液相を残留物から分離し、濾過および溶媒蒸発を行って、液体中間体ＬＩ-１(約３０重量％の乾燥残留物を有する)を得た。次に、該相ＬＩ-１をｎ-ヘプタンで抽出して、全ての所望ではないギンクゴル酸(ginkgolic acid)を含む有機相および有用生成物を含む第２の(水性)液体中間体相ＬＩ-２を得た。
【００２５】
工程II：
上記のようにして得た中間体相ＬＩ-２をｐＨ２.５〜６に調節した後、ｎ-ブタノールによる抽出を３回行って、ＯＰＣに富む第３の(水性)液体中間体相ＬＩ-３および第４の(有機)液体中間体相ＬＩ-４を得た(この後者を水で２〜３回洗浄して、所望ではない副生成物を除去した)。次に、該相ＬＩ-４を濃縮して、約２０重量％の乾燥残留物を示す濃縮分画を得た。次に、この濃縮物を約１０重量％の乾燥残留物まで水で希釈し、ｎ-ヘプタンと混合した(７０：３０ w/w)。分離の後、ギンクゴリドおよびビロバリドに富む第５の(有機)液体中間体ＬＩ-５ならびに有用生成物に富む第６の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得た。最後に、分画ＬＩ-６を濃縮および乾燥した。最終の固体は、約７重量％ＯＰＣ含有量を示した。
【００２６】
工程III：
工程IIで得られた液体中間体ＬＩ-３から有機溶媒の全ての痕跡を除き、それを水で希釈して約３０重量％の乾燥残留物とし、水酸化ナトリウム水溶液の添加によってｐＨ値を約６.８〜７.２に調節した。次に、この液体分画を一晩８℃に冷却した。翌日、主にＯＰＣからなる沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥し、そして工程IIの最終生成物として得られた固体に加えた。合わせた生成物は、以下の仕様を示した(カッコ内は３試料の平均)。
ギンクゴフラボングリコシド：２２〜２７(２４)重量％；
ビロバリド：２.６〜３.２(２.９)重量％；
ギンクゴリド：２.８〜３.４(３.０)重量％；
ＯＰＣ：１２〜１３(１２.２)重量％；
ギンクゴル酸：＜１０ｐｐｍ。
【００２７】
実施例Ａ２：乾燥イチョウ抽出物からの高ＯＰＣ含有量のイチョウ抽出物の製造
黄色ないし褐色の外観を有し、４.５重量％未満のフラボングリコシドを含有する市販の乾燥イチョウ抽出物(１０００ｇ)を、撹拌容器に入れ、水性エタノール(８０w/w％)を用いて抽出した。このようにして得た液体分画を濾過し、溶媒を除去した。このようにして得た中間体を水で希釈して約１０重量％の乾燥残留物とし、次にｎ-ヘプタンで抽出してギンクゴル酸を除去した。次に、このようにして得た水相を、実施例Ａ１の工程IIおよび工程IIIに記載したように処理した。
【００２８】
応用例：酸化防止特性の証明
反応性酸素種(ＲＯＳ)および反応性窒素種(ＲＮＳ)は、いわゆる酸化防止剤によって相殺されなければ、タンパク質、脂質、炭水化物およびＤＮＡなどの重要な生体分子を傷つけうる反応性化合物である。ＲＯＳおよびＲＮＳの一部(全部ではない)は、フリーラジカル、即ち、１つまたはそれ以上の不対電子を含む原子または分子である。ＲＯＳおよびＲＮＳの生成は、ヒト代謝の不可欠な部分として起こる。即ち、例えば、ミトコンドリア呼吸鎖によって、免疫系の正常な機能の一部として活性化食細胞の酸化的破壊中に、あるいは、キサンチンオキシダーゼなどの酵素によって起こる。外因性因子、例えば日光、タバコの煙、またはある種の環境汚染物質が、ＲＯＳおよびＲＮＳへのヒト身体の暴露の一因になることもある。ＲＯＳ／ＲＮＳは、過剰の酸化防止剤によって相殺され、このバランスがＲＯＳ／ＲＮＳの方に移動したときにのみ、酸化的ストレスが起こる。次いで、生体分子および生物学的系の損傷が誘発され、このような損傷が長期間にわたって蓄積したときに、多くの退行性疾患の発生ならびに老化それ自体の過程に関与することになる。
【００２９】
本発明に係るイチョウ抽出物などの活性物質の酸化防止特性は、インビトロまたは細胞培養系またはその他での種々の試験によって測定することができる。それぞれの試験は、ある種のＲＯＳおよび／またはＲＮＳに特異的であるのが普通である。ヒト身体は、全スペクトルのこれら反応性物質(「プロオキシダント」とも称される)に暴露されるので、酸化防止剤は、種々のプロオキシダントに対して有効であるのが望ましいであろう。従って、生成物の特性を評価するために、イチョウ抽出物を種々の試験に、即ち、ラジカルカチオンを減少させる能力を測定する試験(ＤＰＰＨ試験)、ヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)、スーパーオキシド(Ｏ2・-)、過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)を除去する能力を測定する試験、および、一重項酸素を失活させる能力を測定する試験にかけることができる。さらに、金属キレート化特性を評価することができる。
【００３０】
Ｉ．ＤＰＰＨ試験
ＤＰＰＨ試験は、フリーラジカルを除去する試験物質の能力、具体的にはラジカルカチオンを減少させる試験物質の能力を測定する。この試験は、ＤＰＰＨ(２,２-ジフェニル-１-ピクリルヒドラジル)を使用する。この物質は、吸収極大が５１５ｎｍにあることにより「紫色」に見える安定なラジカルであり、酸化防止剤によって還元されたときに無色化合物に転換される。従って、試験物質の酸化防止活性を、５１５ｎｍにおける吸収の減少によって追跡する。この試験の結果を、以下の表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】
II．ヒドロキシルラジカル除去活性
ヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)を除去する能力を、いわゆる「デオキシリボース試験」によりインビトロで評価することができる。ＨＯ・は、全ＲＯＳ／ＲＮＳの中で最も反応性が高いと考えられており、デオキシリボースなどのＤＮＡ構成成分を含むほとんど全ての細胞化合物を攻撃することができる。この試験においては、アスコルビン酸、Ｈ2Ｏ2、およびＦｅ3+-ＥＤＴＡの混合物によって、即ち、フェントン反応(鉄の存在下でのＨ2Ｏ2)によって、ＨＯ・を生成させる。ＨＯ・はデオキシリボースを攻撃し、それをフラグメントに分解し、該フラグメントは、低ｐＨでチオバルビツール酸(ＴＢＡ)と一緒に加熱したときにピンク色の色原体を生成する。添加したヒドロキシルラジカル「スカベンジャー」は、生成したヒドロキシルラジカルを、デオキシリボースと競合し、色原体の生成を減少させる。この試験を、ＥＤＴＡの存在下および非存在下の両方で行って、鉄などの遷移金属イオンをキレート化(結合)するＯＰＣの能力を調べる。この結果を、以下の表２に示す(２つの試験の平均を示す)。
【００３３】
【表２】
【００３４】
III．スーパーオキシドおよび過酸化水素除去活性
２つのさらなるＲＯＳは、スーパーオキシド(Ｏ2・-)および過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)である。インビボで生成したスーパーオキシド(例えば、活性化食細胞の酸化的破壊中に、あるいは、シトクロムＰ４５０オキシダーゼが関与する反応において生成する)は、酵素(ＳＯＤ、スーパーオキシドジスムターゼ)によって、または酵素によらない不均化によって、ほとんどがＨ2Ｏ2に変換され、これは荷電しておらず、細胞膜を容易に横切るものと考えられている。例えば、脈管組織におけるＯ2・-およびＨ2Ｏ2の生成の増加は、脈管機能障害に関連する前炎症性および他の症状ならびに関連の疾患の一因になる。
【００３５】
Ｏ2・-およびＨ2Ｏ2を除去する本発明のイチョウ抽出物の能力を試験する目的で、これらのＲＯＳを、キサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系を用いて生成させ、化学発光(ルミノール)を用いて検出することができる。
【表３】
【００３６】
IV．一重項酸素失活活性
一重項酸素(1Ｏ2)は、分子酸素の電子的に励起された形態であり、光化学的に、即ち光に暴露したときに、または代謝的に、例えば活性化された好中球によって、脂質の過酸化の過程において、および抗炎症性媒介物質(プロスタグランジン)および解毒(シトクロムＰ４５０オキシゲナーゼ)に関連する酵素反応において、インビボで生成することができる。本発明のイチョウ抽出物の一重項酸素の失活活性を評価する目的で、皮膚に対する光誘発損傷における一重項酸素の関与を使用した。一重項酸素による皮膚に対する光誘発損傷(例えば皮膚の早期老化としても知られる光老化)は、皮膚細胞外マトリックスの分解に関与する酵素の誘発、ならびに、皮膚細胞外マトリックスタンパク質の１つであるコラーゲンとの直接反応の両方によって媒介される。この反応には、異常架橋を形成すること、従って皮膚マトリックスの完全性を乱すことが含まれる。この1Ｏ2誘発のコラーゲン損傷を評価するために、光増感剤としてリボフラビンを用いてＵＶＡ照射により1Ｏ2をインビトロで生成させ、コラーゲン損傷を、コラーゲンおよびグルコースの水溶液の粘度の増大によって測定した。この結果を、以下の表４に示す。
【００３７】
【表４】
【００３８】
種々の試験の結果は、本発明の高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物が、種々の関連ＲＯＳ(これらは、ヒト身体および外因性供給源によって生成し、ヒト健康に関係する重要な生体分子および生体系に対する酸化的ストレス誘発損傷の一因になる)に対して酸化防止剤として働くことを示す。有利な特性の増大が、単に比例的なものではなく、約１１〜１２重量％の臨界ＯＰＣ濃度が存在することが観察されることを十分に知るべきである。
【００３９】
高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物の酸化防止効果が、ＤＰＰＨ試験において示されるように、一般にラジカルに対して示される。さらに、これらは、ヒト代謝の多くの経路において生成し、スーパーオキシド(Ｏ2・-)および過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)による損傷を媒介する実際の活性種であると考えられ、全ＲＯＳの中で最も反応性が高いと考えられているヒドロキシルラジカル(ＨＯ・)の除去に関与している。また、高いＯＰＣ含有量を有するイチョウ抽出物は、金属キレート化特性を有し、従って遷移金属イオンによって触媒されるＲＯＳの生成を妨げることができることがわかった。さらに、試験結果は、本抽出物のスーパーオキシドおよび過酸化水素の除去特性ならびに一重項酸素(1Ｏ2)の失活特性を示す。即ち、本抽出物は、ヒト身体の細胞および組織に対するフリーラジカル損傷の多くの側面の原因であるさらなるＲＯＳに対して酸化防止活性を示す。種々の試験の結果は、明らかに、改善された酸化防止活性を有する本発明の新規抽出物が、低いＯＰＣ含有量を示す最新技術から既知の抽出物よりも、老化の徴候、環境ストレス、炎症、および他の健康状態、特に目の健康に関連する状態の制御を意図する経口調製物において使用するのに適していることを示す。
【００４０】
実施例Ｂ１：新規イチョウ抽出物のカプセル封入
撹拌機および還流コンデンサーを装備した５００ｍｌの三口フラスコにおいて、寒天(３ｇ)を沸騰水(２００ｍｌ)に溶解した。初めに、水(１００ｇまで)中のグリセロール(１０ｇ)の均一分散液を、次いで、水(１００ｇまで)中のキトサン(HydagenR DCMF、グリコール酸中１重量％、Cognis Deutschland GmbH & Co. KG、デュッセルドルフ／独国)(２５ｇ)、実施例Ａ１によるイチョウの噴霧乾燥抽出物(１０ｇ)、PhenonipR (フェノキシエタノールおよびパラベンを含有する防腐混合物)(０.５ｇ)、およびPolysorbate-20(TweenR 20、ＩＣＩ)(０.５ｇ)の調製物を、激しく撹拌しながら約３０分間で混合物に加えた。得られたマトリックスを濾過し、５０℃に加熱し、予め１５℃に冷却した２.５倍容量のパラフィン油中に激しく撹拌しながら分散させた。次いで、この分散液を、１重量％のラウリル硫酸ナトリウムおよび０.５重量％のアルギン酸ナトリウムを含有する水溶液で洗浄し、続いて０.５重量％のPhenonip水溶液で繰り返し洗浄し、その過程で油相を除いた。ふるい分けの後に、８重量％のミクロカプセル(平均直径１ｍｍ)を含有する水性調製物が得られた。
【００４１】
実施例Ｂ２：新規イチョウ抽出物のカプセル封入
撹拌機および還流コンデンサーを装備した５００ｍｌの三口フラスコにおいて、寒天(１ｇ)を水(３３ｇ)に溶解し、１００℃に加熱した。次いで、アルギン酸カルシウムの２重量％水溶液(５０ｇ)およびGellan Gum(Kelgocel、Degussa AG)の１重量％水溶液(５ｇ)を加えた。激しく撹拌した後、水(１００ｇまで)中の実施例Ａ１によるイチョウの噴霧乾燥抽出物(１０ｇ)、PhenonipR (０.５ｇ)、およびPolysorbate-20(TweenR 20、ＩＣＩ)(０.５ｇ)を、約３０分間で混合物に加えた。このようにして得られた組成物を、カプリンカプリルトリグリセリド(Myritol 331、Cognis Deutschland GmbH & Co. KG)からなる浴中に滴下した。得られた寒天／ジェランガム／アルギン酸塩タイプのミクロカプセルを分離し、１重量％のPolysorbate-20を含有する水溶液で洗浄して、油成分の痕跡を除去した。次いで、この軟カプセルを、カプセル壁の架橋および硬化のために、塩化カルシウムの０.５重量％水溶液からなる浴中に導入した。ふるい分けの後に、８重量％のミクロカプセル(平均直径０.２５ｍｍ)を含有する水性調製物が得られた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物。
【請求項２】
１１〜２０重量％のＯＰＣを含有することを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
１２〜１８重量％のＯＰＣを含有することを特徴とする請求項１または２に記載の抽出物。
【請求項４】
５０ｐｐｍ未満の４'Ｏ-メチルピロキシジンを含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の抽出物。
【請求項５】
１００ｐｐｍ未満のビフラボンを含有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の抽出物。
【請求項６】
５〜１０重量％のテルペンラクトンを含有することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の抽出物。
【請求項７】
多くとも５重量％の水を含有することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の抽出物。
【請求項８】
請求項１に記載の抽出物を含有するカプセル。
【請求項９】
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物の製造方法であって、以下の工程を特徴とする方法：
(ｉ)イチョウの葉または乾燥抽出物のいずれかを、水性極性溶媒による抽出にかけて、第１液体中間体ＬＩ-１を得る工程；
(ii)中間体ＬＩ-１を、有機溶媒から分離させ、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素による液-液抽出にかけて、第２(水性)液体中間体ＬＩ-２を得る工程；
(iii)中間体ＬＩ-２を、ｐＨ２.５〜６に調節した後、極性Ｃ2-Ｃ6脂肪族アルコールによる液-液抽出にかけて、ＯＰＣに富む(水性)液体中間体ＬＩ-３およびグリコシドに富む別の(有機)液体中間体ＬＩ-４を得る工程；
(iv)中間体ＬＩ-４を、濃縮し、水で希釈し、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素と混合して、さらなる(有機)液体中間体ＬＩ-５および別の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得る工程；
(ｖ)液体中間体ＬＩ-６を乾燥して、第１固体中間体ＳＩ-１を得る工程；
(vi)液体中間体ＬＩ-３を、有機溶媒から分離させ、水で希釈し、ｐＨ６〜８の値に調節し、溶液からＯＰＣが沈殿するに十分な時間、高くとも１０℃の温度に冷却する工程；
(vii)沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥して、第２固体中間体ＳＩ-２を得る工程；そして最後に
(viii)第２固体中間体ＳＩ-２を、第１固体中間体ＳＩ-１に、最終生成物が１０重量％以上のＯＰＣを含有するような量で添加する工程。
【請求項１０】
イチョウ葉が、少なくとも１０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示すことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
乾燥イチョウ抽出物が、５〜２０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示すことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
工程(ｉ)の極性溶媒がアセトンまたはエタノールであることを特徴とする請求項９〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
工程(ii)および(iv)の非極性炭化水素がｎ-ヘプタンであることを特徴とする請求項９〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
工程(iii)の極性アルコールがｎ-ブタノールであることを特徴とする請求項９〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
医薬組成物および／または補助食品および／または食品を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【請求項１６】
組成物が、機能性食品、栄養目的食品および医療食品であることを特徴とする請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
抽出物が、最終組成物を基準に算出して、１０〜１０００ｍｇの量で存在することを特徴とする請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１８】
抽出物を、経口適用によって身体に投与することを特徴とする請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１９】
網膜微小循環の改善のための医薬組成物を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【請求項２０】
ヒト身体状態の改善のための医薬組成物を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【請求項１】
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物。
【請求項２】
１１〜２０重量％のＯＰＣを含有することを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
１２〜１８重量％のＯＰＣを含有することを特徴とする請求項１または２に記載の抽出物。
【請求項４】
５０ｐｐｍ未満の４'Ｏ-メチルピロキシジンを含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の抽出物。
【請求項５】
１００ｐｐｍ未満のビフラボンを含有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の抽出物。
【請求項６】
５〜１０重量％のテルペンラクトンを含有することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の抽出物。
【請求項７】
多くとも５重量％の水を含有することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の抽出物。
【請求項８】
請求項１に記載の抽出物を含有するカプセル。
【請求項９】
(ａ)２０〜３０重量％のフラボングリコシド、
(ｂ)２.５〜４.５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ(合計して)、
(ｃ)２.０〜４.０重量％のビロバリド、
(ｄ)１０ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物、および
(ｅ)１０重量％以上のオリゴマープロアントシアニジン(ＯＰＣ)、
を含有するイチョウ葉からの抽出物の製造方法であって、以下の工程を特徴とする方法：
(ｉ)イチョウの葉または乾燥抽出物のいずれかを、水性極性溶媒による抽出にかけて、第１液体中間体ＬＩ-１を得る工程；
(ii)中間体ＬＩ-１を、有機溶媒から分離させ、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素による液-液抽出にかけて、第２(水性)液体中間体ＬＩ-２を得る工程；
(iii)中間体ＬＩ-２を、ｐＨ２.５〜６に調節した後、極性Ｃ2-Ｃ6脂肪族アルコールによる液-液抽出にかけて、ＯＰＣに富む(水性)液体中間体ＬＩ-３およびグリコシドに富む別の(有機)液体中間体ＬＩ-４を得る工程；
(iv)中間体ＬＩ-４を、濃縮し、水で希釈し、非極性Ｃ4-Ｃ10炭化水素と混合して、さらなる(有機)液体中間体ＬＩ-５および別の(水性)液体中間体ＬＩ-６を得る工程；
(ｖ)液体中間体ＬＩ-６を乾燥して、第１固体中間体ＳＩ-１を得る工程；
(vi)液体中間体ＬＩ-３を、有機溶媒から分離させ、水で希釈し、ｐＨ６〜８の値に調節し、溶液からＯＰＣが沈殿するに十分な時間、高くとも１０℃の温度に冷却する工程；
(vii)沈殿を濾過し、洗浄し、乾燥して、第２固体中間体ＳＩ-２を得る工程；そして最後に
(viii)第２固体中間体ＳＩ-２を、第１固体中間体ＳＩ-１に、最終生成物が１０重量％以上のＯＰＣを含有するような量で添加する工程。
【請求項１０】
イチョウ葉が、少なくとも１０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示すことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
乾燥イチョウ抽出物が、５〜２０重量％のフラボングリコシド、ギンクゴリドおよびビロバリドの含有量を示すことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
工程(ｉ)の極性溶媒がアセトンまたはエタノールであることを特徴とする請求項９〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
工程(ii)および(iv)の非極性炭化水素がｎ-ヘプタンであることを特徴とする請求項９〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
工程(iii)の極性アルコールがｎ-ブタノールであることを特徴とする請求項９〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
医薬組成物および／または補助食品および／または食品を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【請求項１６】
組成物が、機能性食品、栄養目的食品および医療食品であることを特徴とする請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
抽出物が、最終組成物を基準に算出して、１０〜１０００ｍｇの量で存在することを特徴とする請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１８】
抽出物を、経口適用によって身体に投与することを特徴とする請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１９】
網膜微小循環の改善のための医薬組成物を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【請求項２０】
ヒト身体状態の改善のための医薬組成物を製造するための請求項１に記載の抽出物の使用。
【公表番号】特表２００９−５０１１６９（Ｐ２００９−５０１１６９Ａ）
【公表日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２０７４７（Ｐ２００８−５２０７４７）
【出願日】平成１８年７月１日（２００６．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００６４２９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／００６４４３
【国際公開日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【出願人】（５０５０６６７１８）コグニス・アイピー・マネージメント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング (191)
【氏名又は名称原語表記】Ｃｏｇｎｉｓ ＩＰ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ＧｍｂＨ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月１日（２００６．７．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００６４２９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／００６４４３
【国際公開日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【出願人】（５０５０６６７１８）コグニス・アイピー・マネージメント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング (191)
【氏名又は名称原語表記】Ｃｏｇｎｉｓ ＩＰ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ＧｍｂＨ
【Ｆターム（参考）】
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