カルジオリピン分子および合成方法
本発明は、様々な鎖長を有し、不飽和を有するか、または有さない、種々の脂肪酸および／またはアルキル鎖を伴ったカルジオリピン、特に短鎖カルジオリピンの新規な合成経路を提供する。本方法は、１，２−Ｏ−ｓｎ−ジアシル／１，２−Ｏ−ｓｎ−ジアルキルグリセロールまたは２−＜Ｉ＞Ｏ＜／Ｉ＞−保護されたグリセロールを、ホスホラミダイト試薬またはリン酸トリエステルと反応させて保護されたカルジオリピンを生成することを含み、当該保護されたカルジオリピンは脱保護されて短鎖カルジオリピンに調製される。反応スキームはカルジオリピンの新規な変異体を産生するために用いることができる。本方法によって調製されたカルジオリピンはリポソームに取り込まれうる。リポソームは疎水性または親水性薬剤などの活性剤も含んでいてもよい。かかるリポソームは疾患を治療するために、あるいは診断および／または分析アッセイに用いられうる。リポソームはさらに特定の細胞タイプまたは特異的な組織を標的とするためのリガンドを含んでいてもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、カルジオリピン類似体／変異体、並びにそれらを含有する組成物を調製するための新規な合成方法に関する。本発明はまた活性剤もしくは薬剤を含有するリポソーム製剤または複合体またはエマルジョン、並びにヒトおよび動物の疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソーム製剤は、水溶液における疎水性薬剤の溶解性を高める能力を有する。それらは多くの場合、薬剤治療に関連した副作用を減らし、活性剤の新規な製剤を開発するための柔軟なツールを提供する。
【０００３】
リポソームは通常、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、およびホスファチジルイノシトールなどの天然のリン脂質から調製される。ホスファチジルグリセロールおよびカルジオリピンなどの陰イオン性リン脂質を加え、コロイド安定化を提供する正味の負表面電荷を産生させてもよい。これらの成分は多くの場合天然源から精製されるが、時には化学的に合成されてもよい。
【０００４】
リポソームの性質および表面電荷の密度は、安定性、動態、生体分布、標的細胞との相互作用、および標的細胞による取り込みに影響する。またリポソーム表面電荷はリポソームの凝集しやすさ（これはリポソームが標的細胞に作用するのを困難にし、また標的細胞による取り込みに影響を及ぼす）にも影響を与える。この点において、中性表面電荷を伴ったリポソームは最も凝集しやすいが、全身投与後の細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞によってより排除されにくい。それに対し、負帯電したリポソームはより少ない凝集およびより高い安定性を示すが、インビボの細胞取り込みが非特異的である。よって、少量の負帯電した脂質が凝集依存的な取り込みメカニズムに対し中性リポソームを安定化しうることが提案されてきた（例えば、Drummond et al.,Pharm.Rev., 51, 691-743(1999)参照）。
【０００５】
カルジオリピン（ジホスファチジルグリセロールとしても知られている）は、心臓のミトコンドリアおよび骨格筋などを含む、高い代謝活性と関連する組織の細胞膜から一般的に精製され、複合陰イオン性リン脂質のクラスを構成する。したがって、カルジオリピンの負表面電荷は、上記したように、凝集依存的な取り込みに対しリポソームを安定化する。動物組織およびミトコンドリアにおいて、カルジオリピンはリノール酸（１８：２）を９０％まで含有する。酵母カルジオリピンはオレイン（１８：１）およびパルミトレイン（１６：１）脂肪酸をより多く有する点で異なっており、一方で細菌の脂質は１４〜１８炭素を伴った飽和モノエン脂肪酸を含有する。しかしながら、短鎖脂肪酸を有するカルジオリピンはこれまで知られていなかった。カルジオリピン脂肪酸鎖（すなわち、飽和または不飽和）の長さおよび性質のリポソーム凝集に対する潜在的な作用はまだ明らかにされていない。
【０００６】
短脂肪酸鎖を含むカルジオリピン（「短鎖カルジオリピン」）を合成するための方法はいまだ記載されていない。一般的に、カルジオリピンを合成する公知の方法は、主に２つのグループに分けられる：（ａ）リン酸化剤を用いて、２−保護されたグリセロールの１級ヒドロキシル基を１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロールと結合させるもの、および（ｂ）２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルフォニルクロリド（ＴＰＳ）またはピリジンの存在下で、２−保護されたグリセロールの両方の１級ヒドロキシル基をホスファチジン酸で縮合させるもの（例えば、Ramirez et al., Synthesis, 11, 769-770 (1976), Duralski et al., Tetrahedron Lett. 39, 1607-1610 (1998), Sanders and Schwarz, J. Am. Chem. Soc. 88, 3844-3847 (1966), Mishina et al., Bioorg. Khim. 11, 992-994 (1985), およびStepanov et al., Zh. Org., Khim. 20, 985-988 (1984)参照）。またカルジオリピンは、１，３−ジヨードプロパノールベンジルエーテルまたは１，３−ジヨードプロパノールｔ−ブチルエーテルを伴ったジアシルグリセロリン酸ベンジルエステルの銀塩間の反応を介して産生されてきた(例えば、De Haas et al., Biochim. Biophys. Acta, 116, 114-124 (1966)およびInoue et al., Chem. Pharm. Bull. 11, 1150-1156 (1963)参照)。該スキームは少量のカルジオリピンの調製には適していたが、これらは多くの工程を含み、中間体を注意深く精製することを要求し、非常に感光性が高い銀塩誘導体および不安定なヨード中間体を使用するため、大量のルーチン調製には向いていなかった。
【０００７】
ホスフェートトリエステルおよびホスホラミダイトエステルはホスフェート結合を形成する核酸合成において広く用いられており、リン脂質合成においてはあまり用いられていない（例えば、Browne et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans, 1, 653-657 (2000)参照）。この点において、Browneら（前述）は、リン脂質類似体、特にホスホリルコリン類似体の、ホスホラミダイト方法論を用いた調製を記載している。ホスファチジルイノシトールＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２およびＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３並びにそれらの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al., Tetrahedron LETT. 35, 123-124 (1994)参照)、ジフルオレニルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al., Tetrahedron LETT. 38, 7407-7410 (1997)参照)、およびジアシルグリセロールを（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィンと反応させることによって生成される試薬（例えば、Chen et al., J. Org. Chem., 61, 6305-6312 (1996)及びPrestwich et al., Acc. Chem. Res., 29, 503-513 (1996)参照)を含む、様々なホスホラミダイト試薬を用いて調製されてきた。加えて、ＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２およびＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３のリン酸トリエステル類似体は、ホスホラミダイト試薬２−シアノ−エチル Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（例えば、Gu et al., J. Org. Chem, 61, 8642-8647 (1996)参照)を使用して調製されてきた。さらに、Murakamiら, J. Org. Chem., 64, 648-651 (1999)は、メチルテトライソプロピルホスホロジアミダイトをリン酸化試薬として使用する、２，５−ジベンジル−Ｄ−マンニトールからのホスファチジルグリセロール合成を記載している。しかしながら、カルジオリピン、特に様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピン類のようなリン脂質の調製における、ホスフェートトリエステルおよびホスホラミダイトエステルの使用は十分には確立されていない。
【０００８】
様々な脂肪酸鎖の長さを有する、大量の飽和および不飽和カルジオリピン類（特に「短鎖カルジオリピン」）を調製するために用いることができる新規な合成方法が必要とされている。かかる方法は、より幅広い種々のカルジオリピン類のアベイラビリティを上げ、現在使用可能なものよりもより確定した組成物を有する、活性剤を包含する新規なリポオソーム製剤の開発に利用される脂質を多様化する。
【０００９】
本発明はかかる組成物および方法を提供する。本発明のこれらの利点およびその他の利点、そして付加的な発明の特性は、以下に提供される発明の詳細から明らかとなるであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の要旨
本発明は、様々な鎖長を有し、飽和または不飽和である、種々の脂肪酸および／またはアルキル鎖を有するカルジオリピンを調製するための新規な合成方法を提供する。本方法は、（ａ）光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールまたは１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬または１つ以上のリン酸トリエステルと反応させること、（ｂ）（ａ）の生成物を２−保護されたグリセロールと結合させ、そこで保護されたカルジオリピンが生成されること、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。本発明はまた様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピンを調製する方法であって、（ａ）２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のホスホラミダイト試薬と反応させてリン酸化剤を生成し、（ｂ）リン酸化剤を光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールまたは１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロールと反応させて保護されたカルジオリピンを生成し、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。
【００１１】
本発明の方法によって調製されるカルジオリピンは、リポソームに取り込まれることができ、それらは、疎水性若しくは親水性薬剤のような活性剤、アンチセンスヌクレオチドあるいは診断薬を含むこともできる。かかるリポソームは疾患を治療するために、あるいは、診断および／または分析アッセイにおいて用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の詳細な説明
本発明は、一般式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩを有するカルジオリピン変異体および類似体、並びにかかる変異体および類似体を含有する組成物を合成する方法を記載する。
【００１３】
【化１】
【００１４】
【化２】
【００１５】
【化３】
【００１６】
式ＩＩＩにおいて、Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などである。式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、飽和および／または不飽和アルキル基であり、好ましくはＣ２〜Ｃ３４飽和および／または不飽和アルキル基である。式ＩＩＩにおいて、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、ｎ＝０〜１５である。式ＩＩＩにおいて、Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖類など）、複素環化合物、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどである。式ＩＩＩにおいて、Ｒ５はリンカーであり、かかるリンカーは必要性または用途によって分子に加えられても（あるいは加えられなくても）よい。しかしながら、加えられる場合、Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルコキシ、ポリアルキルオキシ（約１〜５００のアルキルオキシマーを含有する（および少なくとも約１０アルキルオキシｍｅｒ、少なくとも約５０アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約１００アルキルオキシｍｅｒ、少なくとも約２００アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約３００アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約４００アルキルオキシｍｅｒを有していてもよい）ＰＥＧ化された（pegylated）エーテル、置換されたポリアルキルオキシなど）、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖類などの炭水化物を含んでいてもよい。式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｘは水素または非毒性陽イオンであり、好ましくは、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなどである。
【００１７】
用語「アルキル」は飽和もしくは不飽和直鎖および分岐鎖炭化水素部分を包含する。用語「置換されたアルキル」は、ヒドロキシ、（低級アルキル基の）アルコキシ、（低級アルキル基の）メルカプト、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシルなどから選ばれる１つ以上の置換基をさらに持つアルキル基を含む。
【００１８】
最も好ましい実施態様では、式ＩＩＩにおけるＹ１およびＹ２は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−または−Ｏ−である。Ｒ３は最も好ましくはＣＨ２である。また、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２は同一であり、Ｃ２〜Ｃ１３飽和および／または不飽和アルキル基、より好ましくは４〜１４炭素原子（たとえば６〜１２炭素原子）のものである。Ｘはもっとも好ましくは水素またはアンモニウムイオンである。リンカー（Ｒ５）がない場合、一般式のカルジオリピンが提供される（図１）。
【００１９】
本発明は、式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法を提供し、かかる方法は、式ＶＩＩＩのアルコールと、１つ以上のホスホラミド（phosphoramide）試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールＶＩとを、酸触媒の存在下で反応させることを含む。
【００２０】
【化４】
【００２１】
【化５】
【００２２】
式ＶＩにおけるＹは、ヒドロキシル保護基（好ましくはアルキル基など）またはシリル保護基である。式ＶＩＩＩにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ１およびＹ２は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに関して前述したものであってもよい。本発明の方法によれば、酸触媒は反応を促進できるいかなる適した触媒であってもよい。かかる触媒の例としては、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールが挙げられる。好ましい触媒は、４，５−ジクロロイミダゾールまたは１Ｈ−テトラゾールである。本発明の方法によれば、結合ホスホラミダイトは式ＩＶまたはＶを有していてもよい：
【００２３】
【化６】
【００２４】
【化７】
【００２５】
別の実施態様では、本発明は式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法を提供し、かかる方法は、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む。好ましいリン酸トリエステルは、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩのホスホラミダイトと反応させることにより生成されうる。
【００２６】
【化８】
【００２７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸは、リン酸保護基、好ましくはベンジル基または２−シアノエチルもしくはシリル基である。適した保護基のその他の例としては、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートが挙げられる。
【００２８】
本発明の化合物の合成の一般的な反応順序を図２および３に例示する。本発明は、様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピンＩを調製するための方法を提供し、かかる方法は（ａ）光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２を、一般式ＩＶ（図２）またはＶ（図３）の１つ以上のホスホラミダイト試薬と反応させること、（ｂ）塩化溶媒中（例えばジクロロメタン、クロロホルムなど）で（ａ）の生成物３を２−保護されたグリセロールＶＩと結合させ、次いでｍ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）で酸化して保護されたカルジオリピン４を生成することを含む。その後、保護されたカルジオリピンを脱保護し、アンモニウム塩に変換してカルジオリピン１（アンモニウム塩）を生成する。
【００２９】
光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２との反応には、いかなる適したホスホラミダイト試薬や方法を用いてもよい（例えば、Browneら、（前述）が記載したようなもの）。適したホスホラミダイト試薬の例としては、（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（例えば、Prestwich et al. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 1822-1825参照)、ベンジルオキシビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィン(例えば、Dreef et al. Tetrahedron Lett. 1988, 29, 6513-6516参照)、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、Browne et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 2000, 653-657参照)、（２−シアノエチル）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（例えば、Prestwich et al. J. Org. Chem. 1998, 63, 6511-6522参照)、ジフルオレニル ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 7407-7410参照)、メチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（例えば、Murakami et al. J. Org. Chem. 1999, 64, 648-651参照)、ジメチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 1993, 34, 497-500参照)、ジベンジル ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 2000, 41, 8509-8512参照)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Lindberg et al. J. Org. Chem. 2002, 67, 194-199参照)、２−（ジフェニルメチルシリル）エチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、Chevallier et al. Org. Lett. 2000, 2, 1859-1861参照)、（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ブチルおよび（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ペンチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、wilk et al. J. Org. Chem. 1997, 62, 6712-6713参照)が挙げられる。
【００３０】
本発明のもう１つの実施態様を図４に表す。この方法では、光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２を、ホスホラミダイトＶＩＩを用いてリン酸化し、亜リン酸トリエステル５を産生できる。この亜リン酸トリエステル５を、任意の適した２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩ、例えば、ベンジルオキシ１，３−プロパンジオールまたは２−レブリノイル−１，３−プロパンジオールなどと、ピリジニウムペルブロミドおよびホスホニウム塩法（例えば、Watanabe et al.（前述）参照）を用いて結合させ、保護されたカルジオリピン４を得ることができる。この合成方法における好ましい結合試薬はジベンジルジイソプロピルホスホラミダイトである。
【００３１】
図５で説明する別のストラテジーにおいて、本発明の方法は、（ａ）２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩを１つ以上のホスホラミダイト試薬ＩＶまたはＶと反応させて、リン酸化試薬６を生成すること、（ｂ）リン酸化試薬６を光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２と反応させ、次いでｍ−ＣＰＢＡで酸化して保護されたカルジオリピン４を生成すること、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。この本発明の方法で用いるのに適したホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールは上記の通りである。
【００３２】
図６に表した本発明のもう一つの実施態様は、カルジオリピンのエーテル類似体（アシル基がアルキル鎖で置換されているもの）をもたらす。つまり、（ａ）１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール７をホスホラミダイトＩＶまたはＶで処理してリン酸化試薬８を生成し、（ｂ）リン酸化試薬を２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩと反応させ、次いで酸化して保護されたカルジオリピン９を生成し、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンのエーテル類似体１０を生成する。
【００３３】
本発明の別の実施態様を図７に表す。この方法では、光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール７を、ホスホラミダイトＶＩＩを用いてリン酸化し、亜リン酸トリエステル１１を産生することができ、亜リン酸トリエステル１１を任意の適した２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩ、例えば、ベンジルオキシ１，３−プロパンジオールまたは２−レブリノイル−１，３−プロパンジオールなどと、ピリジニウムペルブロミドおよびホスホニウム塩法（例えば、Watanabe et al.（前述）参照）を用いて結合させ、保護されたカルジオリピンエーテル類似体９を得ることができる。この合成方法における好ましい結合試薬はジベンジルジイソプロピルホスホラミダイトである。
【００３４】
上述した本発明は、カルジオリピンを合成する的確で効率的な方法である。かかる経路は簡潔で高全収率で進行する。脱保護は保護基に合わせた方法によってなされうる。例えば、ベンジル基は触媒水素添加分解またはＮａＩ，２−シアノエチル処理によって、またフルオレニルメチル基はトリエチルアミンなどの三級塩基処理によって除去され、シリル基はフッ化物イオンまたは酸性媒質によって、レブリノイル基はヒドラジン分解によって脱保護される。
【００３５】
本明細書に記載する合成方法はいかなる適した様式に改良されてもよい。例えば、ホスホラミダイトおよびリン酸エステルは、４，５−ジクロロイミダゾール(例えばBrowne et al.参照)、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩(例えばMoriguchi et al.参照)を含む様々な酸触媒を用いて調製されうる。同様に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドを代わりの酸化剤として用いてもよい。記載された方法をさらに当分野で公知のあらゆる適した様式に改良してもよい。
【００３６】
本発明の方法は、様々な長さの飽和／不飽和脂肪酸／アルキル鎖を含むカルジオリピン類を調製するために用いられうる。リン脂質脂肪酸の一般構造は、炭化水素鎖およびカルボン酸基を含む。通常、脂肪酸炭化水素鎖の長さは約２〜約３４炭素原子の範囲であるが、飽和であっても不飽和であってもよい。しかしながら、炭素鎖はより典型的には約１２〜約２４炭素原子の間である。ある実施態様では、炭化水素鎖が、例えば、少なくとも約５炭素原子または少なくとも約１０炭素原子または少なくとも約１５炭素原子を含んでいることが望ましい。一般的に、脂肪酸炭化水素の長さは約２４炭素酸よりも短い（例えば、約２４炭素原子よりも、または約２０炭素原子よりも短い）。
【００３７】
本発明はさらに、本発明の方法によって調製されたカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を提供する。最も好ましくは、本発明の方法で調製されたカルジオリピンは短脂肪酸鎖を含み（すなわち、「短鎖カルジオリピン」）、本発明は短鎖カルジオリピンを提供する。短脂肪酸鎖は約２〜約１４の間の炭素原子を含み、また約４（または約６）〜約１２炭素原子（例えば、約８〜約１０の間の炭素原子）を有していてもよい。あるいは、本発明の方法で生成されるカルジオリピンは、長鎖脂肪酸鎖を含んでいてもよい（すなわち、「長鎖カルジオリピン」）。長脂肪酸鎖は約１４〜約３４の間の炭素原子（例えば、約１４（もしくは約２０）〜約２４の間の炭素原子を含む。本発明の方法は短または長鎖カルジオリピン類の生産だけに制限されない。実際、中間の長さの脂肪酸／アルキル鎖を含有するカルジオリピンもまた本発明の方法によって調製できる。
【００３８】
リン脂質脂肪酸は一般的に炭化水素鎖における二重および／または三重結合の数によって分類される（すなわち不飽和）。飽和脂肪酸は二重または三重結合を一つも含有しておらず、鎖におけるそれぞれの炭素は最大数の水素原子と結合している。脂肪酸の不飽和の程度は炭化水素鎖中に存在する二重または三重結合の数によるものである。この点において、単不飽和脂肪酸は二重結合を１つ含有しているのに対し、多価不飽和脂肪酸は二重結合を２つ以上含有している（例えば、Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology,改訂版, A. D. Smith (ed.), Oxford University Press (2000)、および Molecular Biology of the Cell, ３版, B. A. Alberts (ed.), Garland Publishing, New York (1994)参照)。本発明の方法によって調製されるカルジオリピンの脂肪酸鎖はまた、短くとも長くとも、飽和または不飽和でありうる。
【００３９】
記載した方法を用いて種々の新規なカルジオリピン分子を調製できる。例えば、本方法は、短または長脂肪酸側鎖を含有する純粋な形態のカルジオリピン変異体を調製するために用いることができる。好ましい脂肪酸は、炭素鎖の長さ約Ｃ２〜Ｃ３４、より好ましくは約Ｃ４〜約Ｃ２４の間であり、とりわけ好ましい脂肪酸としては、テトラ酸（Ｃ４：０）、ペタン酸（Ｃ５：０）、ヘキサン酸（Ｃ６：０）、ヘプタン酸（Ｃ７：０）、オクタン酸（Ｃ８：０）、ノナン酸（Ｃ９：０）、デカン酸（Ｃ１０：０）、ウンデカン酸（Ｃ１１：０）、ドデカン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（Ｃ１３：０）、テトラデカン（ミリスチン）酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、ヘキサデカン（パルミチン、palmatic）酸（Ｃ１６：０）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７：０）、オクタデカン（ステアリン）酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、エイコサン（アラキジン）酸（Ｃ２０：０）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）、ドコサン（ベヘン）酸（Ｃ２２：０）、トリコサン酸（Ｃ２３：０）、テトラコサン酸（Ｃ２４：０）、１０−ウンデセン酸（Ｃ１１：１）、１１−ドデセン酸（Ｃ１２：１）、１２−トリデセン酸（Ｃ１３：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、１０−ペンタデセン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、エイコセン酸（Ｃ２０：１）、エイコサジエン酸（eicosdienoic acid）（Ｃ２０：２）、エイコサトリエン酸（eicosatrienoic acid）（Ｃ２０：3）、アラキドン酸（シス−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸）、およびシス−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸が挙げられる。エーテル類似体としては、アルキル鎖もまたＣ２〜Ｃ３４、好ましくは約Ｃ４〜約Ｃ２４の間の範囲である。その他の脂肪酸鎖もまた、Ｒ１および／またはＲ２置換基として用いられうる。かかる例示としては、エタン酸（または酢酸）、プロパン酸（またはプロピオン酸）、ブタン酸（またはブチル酸）、ヘキサコサン酸（またはセロチン酸）、オクタコサン酸（またはモンタン酸）、トリアコンタン酸（またはメリシン酸）、ドトリアコンタン酸（またはラッセル酸）、テトラトリアコンタン酸（またはゲダ酸）、ペンタトリアコンタン酸（またはセロプラスチン酸）などの飽和脂肪酸；トランス−２−ブテン（またはクロトン）酸、シス−２−ブテン（またはイソクロトン）酸、２−ヘキセン（またはイソハイドロソルビン）酸、４−デカン（またはオブツシル）酸、９−デカン（またはカプロール（caproleic））酸、４−ドデセン（またはリンデル）酸、５−ドデセン（またはデンチセチン(denticetic)）酸、９−ドデセン（またはラウロレイン）酸、４−テトラデセン（またはツズ）酸、５−テトラデセン（またはフィセテル（physeteric））酸、６−オクタデセン（またはペトロセレン(petroselenic)）酸、トランス−９−オクタデセン（またはエライジン）酸、トランス−１１−オクタデセン（またはバクシン（vaccinic））酸、９−エイコセン（またはガドレイン）酸、１１−エイコセン（またはゴンドン）酸、１１−ドコセン（またはセトレイン）酸、１３−デコセン（またはエルカ）酸、１５−テトラコセン（またはネルボン）酸、１７−ヘキサコセン（またはキシメン（ximenic））酸、２１−トリアコンテン（triacontenoic）（またはルメキュ(lumequeic)）酸などのモノエテン不飽和脂肪酸；２，４−ペンタジエン（またはβ−ビニルアクリル）酸、２，４−ヘキサジエン（またはソルビン）酸、２，４−デカジエン（またはシチリンジン(stillingic)）酸、２，４−ドデカジエン酸、９，１２−ヘキサデカジエン酸、シス−９，シス−１２−オクタデカジエン（またはα−リノール）酸、トランス−９，トランス−１２−オクタデカジエン（またはリノレレイジン(linolelaidic)）酸、トランス−１０，トランス−１２−オクタデカジエン酸、１１，１４−エイコサジエン酸、１３，１６−ドコサジエン酸、１７，２０−ヘキサコサジエン酸などのジエン不飽和脂肪酸；６，１０，１４−ヘキサデカトリエン（またはヒラゴン(hiragonic)）酸、７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、シス−６，シス−９−シス−１２−オクタデカトリエン（またはγ−リノール）酸、トランス−８，トランス−１０−トランス−１２−オクタデカトリエン（またはβ−カレンド）酸、シス−８，トランス−１０−シス−１２−オクタデカトリエン酸、シス−９，シス−１２−シス−１５−オクタデカトリエン（またはα−リノレン）酸、トランス−９，トランス−１２−トランス−１５−オクタデカトリエン（またはα−リノレンレイジン（linolenelaidic））酸、シス−９，トランス−１１−トランス−１３−オクタデカトリエン（またはα−エレオステアリン）酸、トランス−９，トランス−１１−トランス−１３−オクタデカトリエン（またはβ−エレオステアリン）酸、シス−９，トランス−１１−シス−１３−オクタデカトリエン（またはプニカ）酸、５，８，１１−エイコサトリエン酸、８，１１，１４−エイコサトリエン酸などのトリエン不飽和脂肪酸；４，８，１１，１４−ヘキサデカテトラエン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、４，８，１２，１５−オクタデカテトラエン（またはモロクチン（moroctic））酸、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、９，１１，１３，１５−オクタデカテトラエン（またはα−もしくはβ−パリナリン）酸、９，１２，１５，１８−オクタデカテトラエン酸、４，８，１２，１６−エイコサテトラエン酸、６，１０，１４，１８−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３−ドカサテトラエン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、８，１２，１６，１９−ドコサテトラエン酸などのテトラエン不飽和脂肪酸；４，８，１２，１５，１８−エイコサペンタエン（またはティムノドン（timnodonic））酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、４，８，１２，１５，１９−ドコサペンタエン（またはイワシ）酸、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、４，８，１２，１５，１８，２１−テトラコサヘキサエン（またはニシン（nisinic））酸などのペンタ−およびヘキサ−エン不飽和脂肪酸；３−メチルブタン酸（またはイソ吉草酸）、８−メチルドデカン酸、１０−メチルウンデカン（またはイソラウリン）酸、１１−メチルドデカン（またはイソウンデシル）酸、１２−メチルトリデカン（またはイソミリスチン）酸、１３−メチルテトラデカン（またはイソペンタデシル）酸、１４−メチルペンタデカン（またはイソパルミチン）酸、１５−メチルヘキサデカン、１０−メチルヘプタデカン酸、１６−メチルヘプタデカン（またはイソステアリン）酸、１８−メチルノナデカン（またはイソアラキジン）酸、２０−メチルヘンエイコサン（またはイソベヘン）酸、２２−メチルトリコサン（またはイソリグノセリン）酸、２４−メチルペンタコサン（またはイソセロチン）酸、２６−メチルヘプタコサン（またはイソモナトン（isomonatonic））酸、２，４，６−トリメチルオクタコサン（またはマイコセラン（mycoceranic）もしくはマイコセロシン(mycoserosic)）酸、２−メチル−シス−２−ブテン（アンゲリカ）酸、２−メチル−トランス−２−ブテン（またはチグリン）酸、４−メチル−３−ペンテン（またはピロテレビン（pyroterebic））酸などの側鎖脂肪酸が挙げられる。
【００４０】
本発明において用いられる用語「ヒドロキシル保護基」は、T. W. Greene and P. G. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第三版, John Wiley & Sons, New York (1999)によって開示された、一般的に用いられている保護基を言及するものである。かかる保護基としては、メチルエーテル、メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニルエーテルを含む置換されたメチルエーテル；１−エトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、アリル、プロパルギルなどの置換されたエチルエーテル；ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、トリフェニルメチルを含むベンジルおよび置換されたベンジルエーテル；トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリルを含むシリルエーテル；ホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、ベンゾエート、レブリニレートおよびカルボネートを含むエステルが挙げられる。
【００４１】
本発明において用いられる用語「ホスフェート保護基」は、T. W. Greene and P. G. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第三版, John Wiley & Sons, New York (1999)によって記載された、一般的に用いられている保護基を言及するものである。かかる保護基としては、メチル、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモエチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートが挙げられる。
【００４２】
本明細書に記載されたカルジオリピン分子および本発明の方法によって調製されたカルジオリピンは、リポソーム組成物などの脂質製剤において用いることができる。本発明のカルジオリピンを含む複合体、エマルジョン、およびその他の製剤も本発明の範疇である。本発明のそのような製剤は、あらゆる適切な方法によって調製することができる。本発明はリポソームまたはその他の脂質組成物を調製する方法を提供し、その方法は、本明細書に記載したようにしてカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を調製すること、およびかかるカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソームなどの脂質製剤に含めることを含む。本発明はまた、本発明のカルジオリピンおよび／またはカルジオリピン類似体を含むそのような脂質組成物を含む。
【００４３】
本発明のカルジオリピンに加えて、リポソーム組成物、複合体、エマルジョンなどはその他の脂質を含んでいてもよい。よって、例えば、組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物などの、１つ以上のホスファチジルコリンを含んでいてもよい。あるいは、もしくはさらに、組成物は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物などの１つ以上のホスファチジルグリセロールを含んでいてもよい。あるいは、もしくはさらに組成物はコレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物などの１つ以上のステロールを含んでいてもよい。好ましくは、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体に加えて、組成物はホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェロール（例えば、α−トコフェロール）を含む。
【００４４】
カルジオリピンおよび（任意に加えうる）その他の脂質に加えて、組成物は、その他の成分の中で、安定化剤、吸収促進剤、抗酸化剤、リン脂質、生物分解性ポリマーおよび医薬的に活性な剤を含んでいてもよい。ある実施態様では、本発明の組成物、特にリポソーム組成物は、細胞レセプターを認識するリガンドといった特定の物質に結合する、炭水化物もしくはタンパク質またはその他のリガンドなどの標的剤を１つ以上含んでいるのが好ましい。かかる剤（炭水化物、あるいは、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、細胞レセプターに対する抗体などレセプターリガンド及びそれらの混合物からなるタンパク質群から選ばれる１つ以上のタンパク質）の含有によって、リポソームを所定の組織または細胞タイプへ向かわせることが容易になりえる。
【００４５】
医薬的使用のため、組成物はまた１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。１つの活性剤が含まれていてもよいし、活性剤の混合物（例えば２つ以上の活性剤）が組成物に含まれていてもよい。活性剤（または「薬剤」）は組成物中にどんな適した様式で存在してもよい。例えば、それらは組成物中のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成していてもよい。加えて、またはあるいは、組成物がリポソーム組成物である場合、１つ以上の活性剤がリポソーム内に取り込まれていてもよい。
【００４６】
本発明に適した活性剤としては、例えば、末梢神経、アドレナリンレセプター、コリンレセプター、骨格筋、循環系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、神経効果器接合部位、内分泌およびホルモン系、免疫系、生殖系、骨格系、消化器および排出系、ヒスタミン系ならびに中枢神経系に作用する剤が挙げられる。適した剤は、例えば、タンパク質、酵素、ホルモン、ヌクレオチド（センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む（例えば米国特許6,126,965参照)）、ポリヌクレオチド、核タンパク質、多糖類、糖タンパク質、リポタンパク質、ポリペプチドおよびステロイドから選ばれてもよい。活性剤は、鎮痛薬、麻酔薬、抗不整脈剤、抗生物質、抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗がん剤、抗凝血剤、抗うつ剤、抗糖尿病剤、抗てんかん剤、抗炎症コルチコステロイド、アルツハイマーまたはパーキンソン病の治療剤、抗潰瘍剤、抗原虫剤、抗不安剤、甲状腺剤、抗甲状腺薬、抗ウイルス薬、食欲抑制剤（anoretic）、ビスフォスフォネート、強心剤、心血管作動剤、コルチコステロイド、利尿薬、ドーパミン剤、胃腸剤、止血薬、高コレステロール剤、抗高血圧剤（例えばジヒドロピリジン）、抗うつおよびcox-2阻害剤、免疫抑制剤、抗痛風剤、抗マラリア剤、ステロイド、テルピノイド、トリテルピン、レチノイド；抗潰瘍Ｈ２レセプターアンタゴニスト、低血糖剤、保湿剤、化粧料、抗偏頭痛剤、抗ムスカリン剤、抗炎症剤（例えばリュウマチ、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病の治療剤）；または、多発性硬化症、眼科用の剤、ワクチン(例えば、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、コレラ毒Ｂサブユニット、インフルエンザウイルス、腸チフス、熱帯熱マラリア原虫、ジフテリア、破傷風、ＨＳＶ、結核、ＨＩＶ、ＳＡＲＳウイルス、ポルデテラ（pordetela）百日咳、はしか、おたふく風邪および風疹ワクチン（ＭＭＶ）、バクテリア毒素、ワクチンウイルス、アデノウイルス、カナリア、ポリオウイルス、カルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌などに対する)、ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、催眠薬、腎臓保護剤、脂質調節剤、筋肉弛緩薬、神経安定薬、向神経剤、オピオイドアゴニストおよびアンタゴニスト、副交感神経興奮剤、プロテアーゼ阻害剤、プロスタグランジン、鎮静剤、性ホルモン（例えば、エストロゲン、アンドロゲン）、興奮剤、交感神経興奮剤、血管拡張薬およびキサンチン、並びにこれらの類の合成類似体であってもよい。治療剤は、シクロスポリンおよびアムホテリシンＢなどの腎毒性、またはアムホテリシンＢおよびパクリタキセルなどの心臓毒性であってもよい。典型的な抗がん剤としては、メルファラン、クロルメチン、エクストラムスチンホスフェート（extramustinephosphate）、ウラムスチン（uramustine）、イホスファミド、マンノムスチン（mannomustine）、トリフォスファミド、ストレプトゾトシン、ミトブロニトール、ミトキサントロン（公開された国際特許出願ＷＯ０２／３２４００号参照）、メトトレキサート、フルオロウラシル、シタラビン、テガフール、イドキシド（idoxide）、タキサン（例えば、タキソール、パクリタキセルなど、公開された国際特許出願ＷＯ００／０１３６６参照）、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、アムホテリシン、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ＢＣＮＵ、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビノレルビン（vinorelbine）（例えば公開された国際特許出願ＷＯ０３／０１８０１８号パンフレット参照）など)、カンプトテシンおよびそれらの誘導体（例えばＳＮ３８（公開された国際特許出願ＷＯ０２／０５８６２２号パンフレット参照）、イリノテカン（公開された国際特許出願ＷＯ０３／０３０８６４号パンフレット参照）など）、アントラサイクリン、抗体、サイトキシン（cytoxine）、ドキソルビシン、エトポシド（etopside）、サイトカイン、リボザイム、インターフェロン、オリゴヌクレオチドおよび前述の機能的誘導体が挙げられる。本方法にて送達されうる薬剤のさらなる例としては、プロクロルペラジン エディスレート（prochlorperzine edisylate）、硫酸鉄、アミノカプロン酸、メカミラミン塩酸塩、プロカインアミド塩酸塩、アンフェタミン硫酸塩、メタアンフェタミン塩酸塩、ベンズアンフェタミン塩酸塩、イソプロテレノール硫酸塩、フェンメトラジン塩酸塩、ベタネコール塩化物、メタコリン塩化物、ピロカルピン塩酸塩、アトロピン硫酸塩、スコポラミン臭化物、イソプロパミドヨウ化物、トリジヘキセチル塩化物、フェンフォルミン塩酸塩、メチルフェニデート塩酸塩、テオフェリンコリネート（theophylline cholinate）、セファレキシン塩酸塩、ジフェニドール、メクリジン塩酸塩、プロクロルペラジンマレイン酸塩、フェノキシベンザミン、チエチルペルジンマレイン酸塩、アニシンドン（anisindone）、ジフェナジオンエリトリチルテトラナイトレート、ジゴキシン、イソフルロフェート、アセタゾラミド、メタゾラミド、ベンドロフルメチアジド、クロロプロマイド（chloropromaide）、トラザミド、クロルマジノン酢酸塩、フェナグリコドール、アロプリノール、アスピリンアルミニウム、メトトレキサート、アセチルスルフィソキサゾール、エリスロマイシン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチコステロン酢酸塩、コルチゾン酢酸塩、デキサメタゾン、およびベタメタゾン、トリアムシノロン、メチルテストステロン、１７−Ｓ−エストラジオール、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル、プレドニゾロン、１７−α−ヒドロキシプロゲステロン酢酸塩、１９−ノルプロゲステロン、ノルゲストレル、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチエデロン（norethiederone）、プロゲステロン、ノルゲステロン、ノルエチノドレル、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、スリンダック、インドプロフェン、ニトログリセリン、イソソルビドジニトレート、プロプラノロール、チモロール、アテノロール、アルプレノロール、シメチジン、クロニジン、イミプラミン、レボドーパ、クロルプロマジン、メチルドーパ、ジヒドロキシフェニルアラニン、テオフィリン、グルコン酸カルシウム、ケトプロフェン、イブプロフェン、セファレキシン、エリスロマイシン、ハロペリドール、ゾメピラック、乳酸鉄、ビンカミン、ジアゼパム、フェノキシベンズアミン、ジルチアゼム、ミルリノン、マンドール、クアンベンズ、ヒドロクロロチアジド、ラニチジン、フルルビプロフェン、フェヌフェン（fenufen）、フルプロフェン、トルメチン、アルクロフェナック、メファナミック、フルフェナミック、ジフイナール（difuinal）、ニモジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ニカルジピン、フェロジピン、リドフラジン、チアパミル、ガロパミル、アムロジピン、ミオフラジン、リシノプリル、エナラプリル、エナラプリラートカプトプリル、ラミプリル、ファモチジン、ニザチジン、スクラルフェート、エチンチジン、テトラトロール、ミノキシジル、クロルジアセポキシド、ジアゼパム、アミトリプチリン、およびイミプラミンなどのそれらの誘導体が挙げられる。さらなる例はタンパク質およびペプチドであり、骨形成タンパク質、インスリン、コルヒチン、グルカゴン、甲状腺刺激ホルモン（thyroid stimulating hormone）、副甲状腺および脳下垂体ホルモン、消化ホルモン、カルシトニン、レニン、プロラクチン、コルチコトロフィン、甲状腺刺激ホルモン（thyrotropic hormone）、卵胞刺激ホルモン、絨毛性性腺刺激ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ＧＲＦ、ソマトスタチン、リプレシン、パンクレオチミン、黄体形成ホルモン、ＬＨＲＨ、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、ロイプロリド、インターフェロン（例えば、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα−２a、インターフェロンα−２ｂ、α−、β−、またはγ−インターフェロン）、インターロイキン、ヒト成長ホルモンならびにメチオニン（methione）ヒト成長ホルモンおよびdes-フェニルアラニンヒト成長ホルモンなどの誘導体、ウシ成長ホルモンおよびブタ成長ホルモン、プロスタグランジンなどの生殖阻害剤、生殖促進剤、インスリン様成長因子などの成長因子、凝固因子、膵臓ホルモン放出因子、これらの化合物の類似体および誘導体、並びにこれらの化合物の医薬的に許容される塩、あるいはその類似体または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。治療剤はリポソーム製剤中で有益に併用投与されうる薬または剤の混合物（例えば２つ以上の剤）であってもよい。
【００４７】
一般的に、リポソームは正味の中性、負または正荷電を有していてもよい。例えば、正のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、カルジオリピンおよびカルジオリピンの正味の負電荷を超えるのに十分なステアリルアミンを含有する溶液から形成されうる。負のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、および／または本明細書に記載された方法で調製されるカルジオリピン変異体から形成されうる。
【００４８】
本発明のリポソームは、個々の組成物およびそれらを製造する方法によって、多層ベシクルであっても、単層ベシクルであってもよい。リポソームは、約１ミクロン以下、または約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、もしくは約１００ｎｍ以下といった選ばれたサイズ範囲において、実施的に均一なサイズを有するように調製されてもよい。１つの有効なサイジング方法としては、リポソームの水性懸濁液を、一定の孔サイズを有する一連のポリカーボネート膜を介して押し出すことなどが挙げられ、この膜の孔サイズはその膜を介して押し出されることによって生産させる最も大きなサイズのリポソームにだいたい対応している。
【００４９】
リポソーム（またはその他の脂質）組成物は、どんな所望の形態であってもよい。例えば、医薬的に用いる場合、組成物は患者に投与する準備ができたものであってもよい。あるいは、組成物は乾燥または凍結乾燥された形態であってもよい。組成物が乾燥または凍結乾燥されている場合、組成物は好ましくは凍結防止剤も含む。適した凍結防止剤としては、例えば、トレハロース、マルトース、ラクトース、スクロース、グルコース、およびデキストランのような糖が挙げられ、性能の観点から最も好ましい糖はトレハロースおよびスクロースである。例えば、ストレプトマイシンおよびジヒドロストレプトマイシンといった、その他のより複雑な糖もまた用いることができる。
【００５０】
あらゆる適した方法が、リポソームを形成するために用いられうる。例えば、ホスファチジルコリン、上記した方法で調製されるカルジオリピン、コレステロールおよびα−トコフェノールといった、脂質親和性リポソーム形成成分が、適切な溶媒または溶媒の組み合わせ中に、溶解あるいは分散され、乾燥されてもよい。適した溶媒としては、医薬的に許容されない残渣を残さずに蒸発されうるような、ｔ−ブタノール、エタノール、メタノール、クロロホルム、またはアセトンなどの、あらゆる非極性あるいは微極性溶媒が挙げられる。乾燥は、凍結乾燥などのあらゆる適した手段によってなされうる。脱水は通常真空下でなされ、事前にリポソーム調製物を凍らせてもよいし、凍らせなくてもよい。親水性の成分は、水を含む極性溶媒に溶解されてもよい。
【００５１】
乾燥脂質親和性成分を親水性混合物と混合するとリポソームが形成されうる。極性溶液の乾燥脂質フィルムとの混合は、混合物を強力にホモジナイズするいかなる手段によるものであってもよい。渦動、磁気攪拌、および／または超音波によって均質化をえることができる。
【００５２】
リポソームに活性剤（または活性剤の混合物）が含まれている場合、本発明はリポソームに薬剤を保有させる方法を提供する。本方法によれば、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体は本明細書に記載されたようにして調製され、そしてカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および１つの薬物または複数の薬物（例えば、活性剤、活性剤の混合物）はリポソーム内に含まれる。例えば、活性剤は適した溶媒に溶解または分散されてもよく、また混合の前にリポソーム混合物に加えられてもよい。通常、親水性活性剤は極性溶媒に直接加えられ、また疎水性活性剤はその他の成分を溶解させるために用いられる非極性溶媒に加えられるが、これらは必須条件ではない。活性剤は３つ目の溶媒または溶媒混合物に溶解され、混合物をホモゲナイズする前に極性溶媒の脂質フィルムとの混合物に加えられてもよい。
【００５３】
リポソームは、スクロース、エピクロロヒドリン、スクロースの側鎖親水性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレン酸化物、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ酢酸塩、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレン Ｘ−ラウリルエーテル（式中、Ｘは９〜２０）、およびポリオキシエチレンソルビタンエステルなどの、生物分解可能なポリマーでコートされていてもよい。
【００５４】
抗酸化剤が、本発明の陽イオン性カルジオリピンを含むリポソーム組成物またはその他の脂質製剤に含まれていてもよい。適した抗酸化剤としては、アスコルビン酸、トコフェロール、およびデテロキサイム（deteroxime）メシレートなどの化合物が挙げられる。
【００５５】
吸収促進剤がリポソーム組成物またはその他の脂質製剤に含まれていてもよい。適した吸収促進剤としては、Ｎａ−サリチラート−ケノデオキシコレート、Ｎａデオキシコレート、ポリオキシエチレン ９−ラウリルエーテル、ケノデオキシコレート−デオキシコレートおよびポリオキシエチレン ９−ラウリルエーテル、モノオレイン、Ｎａタウロ−２４，２５−ジヒドロフシデート、Ｎａタウロデオキシコレート、Ｎａグリコケノデオキシコレート、オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸が挙げられる。ポリマー性吸収促進剤もまた含まれていてもよく、例としては、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレン１０−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１６−ラウリルエーテル、およびアゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）である。
【００５６】
本発明の脂質（例えばリポソーム）組成物は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。例えば、医薬的に適した賦形剤としては、固形、半固形、もしくは液状の希釈剤、充填剤、および全ての種類の製剤補助剤が挙げられる。本発明はまた投薬量単位の医薬調製物を含む。つまり、調製物が、例えばバイアル、シリンジ、カプセル、ピル、座薬およびアンプルなどそれぞれの形態におけるものであり、その中で活性剤のリポソーム製剤の含有量が１つまたは複数の各投与量に対応したものである。かかる投薬量単位は、例えば、各投与量の１、２、３または４回分、あるいは各投与量の１／２、１／３または１／４を含有していてもよい。好ましくは、各投与量は、１回の投与量として与えられる、通常、１日の用量の全部、半分、３分の１もしくは４分の１に対応する量の活性剤を含有する。
【００５７】
錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、顆粒、座薬、液剤、懸濁剤およびエマルジョン、ペースト剤、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、散剤およびスプレーが適切な医薬調製物でありうる。座薬は、リポソーム活性剤に加えて、適した水溶性または水不溶性賦形剤を含有していてもよい。適した賦形剤は、本発明のリポソーム活性剤が充分に安定して治療用に使用されるようなものであり、例えば、ポリエチレングリコール、特定の脂肪およびエステル、もしくはこれらの物質の混合物である。軟膏、ペースト剤、クリームおよびゲルもまた、その中でリポソーム活性剤が安定であるような適した賦形剤を含有できる。また、組成物は、注射に適した１つ以上の賦形剤（例えば、緩衝食塩水）を含めることによって、注射用（例えば、静脈、間質、腫瘍内）に製剤することもできる。
【００５８】
活性剤またはその医薬調製物は、静脈内に、皮下に、局所的に、経口で、非経口で、腹膜内に、および／または直腸に、公知または開発された方法で、腫瘍または治療の必要な部位に直接注入することによって、投与されうる。カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体ベースの製剤は、例えば、クリーム、皮膚軟膏、乾燥肌柔軟剤、保湿剤などとして、局所に投与されてもよい。
【００５９】
本発明は疾患を治療するための医薬を調製するための、組成物の使用を提供する。この場合、本発明はまたヒトまたは動物疾患を治療する方法を提供する本発明の方法によれば、本発明の組成物はその治療を必要とするヒトまたは動物患者に触れさせる（投与する）。組成物が１つ以上の活性剤を含む場合、本発明の方法は活性剤の患者への送達を促進する。
【００６０】
本方法は１つ以上の活性剤を投与するために用いられうる。活性剤は界面活性剤の存在下で安定であると一般的に考えられている。親水性活性剤が適しており、リポソーム二重層が拡散バリアを作って体中に活性剤がランダムに拡散するのを防ぐように、リポソームの内側に含まれうる。疎水性活性剤は、毒性を減らすという利点を有するだけでなく、リポソームの脂質二重層によく溶解する傾向があるため、本発明の方法における使用に特に適していると考えられる。
【００６１】
治療するのに適した疾患は、本明細書に記載されたように、活性剤の選択によってきまる。しかしながら、好ましい疾患は癌であり、その場合、組成物に取り込まれる活性剤の少なくとも１つは抗がん剤である。化学療法剤もまたそのような使用によく適している。化学療法剤を含有するリポソーム製剤は、化学療法剤を直接癌細胞へ送達するために、腫瘍組織に直接注射されてもよい。一部の例では、特に腫瘍の摘出後では、リポソーム製剤はその結果得られる空腔に直接埋め込んでもよく、あるいは残りの組織にコーティングとして適用してもよい。リポソーム製剤が手術後に投与される場合は、それらは血管系を通過する必要がないため、約１ミクロンより大きい直径を有するリポソームを使用することが可能である。
【００６２】
ある実施態様では、たとえ組成物がカルジオリピン以外の活性医薬剤を含んでいない場合でも、本方法を患者の疾患、障害または症状を治療するために使用してもよい。本発明は、かかる疾患、障害または症状に効果を示す、または治療する薬物を調製するための、カルジオリピンの使用を提供する。本発明はさらに、治療上有効な量のカルジオリピンを患者に投与することによって、患者内のかかる疾患、障害または症状、並びにかかる疾患、障害または症状の作用を治療する方法を提供する。いかなる特定の理論にも縛られることなく、カルジオリピンは有利な抗酸化作用を提供し、それにより多くの疾患、障害または症状の作用が軽減されると信じられる。本方法によって治療することのできる状態の例としては、例えば、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害（例えば、にきび、乾癬、湿疹など）が挙げられる。本方法はまた、老化の作用を抑えるために使用されうる。この使用において、カルジオリピンは本明細書に記載したようなリポソームまたは非リポソーム製剤（例えば、エマルジョン、クリームなど）として調製でき、またカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含むことができる。使用の際、組成物はあらゆる適した経路で投与されうる。例えば、組成物は皮膚、静脈、またはその他の所望の投与経路によって投与されうる。
【００６３】
さらに本発明は、活性剤（または活性剤の混合物）を細胞へ送達する方法を対象とする。本方法は、活性剤と、上記で開示した方法によって合成されるカルジオリピン変異体／類似体とを含むリポソームを調製することによって行われる。次いでリポソームは１つの細胞または複数の細胞へ送達され、それらの細胞は所望によりインビトロまたはインビボでありうる。インビボ投与は本明細書に記載したように、あるいは当業者に公知のその他の方法でなされうる。インビトロ使用の場合、活性剤の送達は、組成物（例えばリポソーム）を、例えば細胞培養培地に加えることによっておこなうことができる。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は本発明をさらに例示するものであるが、もちろん決して本発明の範疇を制限するものとして解釈されるべきではない。
【００６５】
実施例１．テトラミリストイルカルジオリピンの合成
１Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００６６】
【化９】
【００６７】
ＣＨ２Ｃｌ２(125 mL)中の１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール(10 g, 19.53 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(9.87 g, 29.29 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(65 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 29.29 mmol)溶液を、室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(20 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(1.18 g, 6.47 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(37.7 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 16.85 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペロキサイド(TBHP, 6.4 mL，デカン中5-6 M sol, 32.35 mmol)を加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(250 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、6.68 g(69%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００６８】
１Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラミリストイルカルジオリピン）
【００６９】
【化１０】
【００７０】
テトラヒドロフラン(40 mL)中の１Ａで得た保護されたカルジオリピン(2.5 g, 1.65 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(900 mg)で１０時間水素化した。セライト床で触媒をろ去し、４ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトラミリストイル(C14:O)カルジオリピン(1.75 g, 83%)を白色固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH4OH (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.50. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 3.06 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1240.2 (M-2NH4++H+), 1011.9 (M-2NH4+- RCOO-), 619.9 (M-2NH4+)2-.
【００７１】
実施例２．テトララウロイルカルジオリピンの合成
２Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００７２】
【化１１】
【００７３】
方法１：ＣＨ２Ｃｌ２(25 mL)中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(2.2 g, 4.82 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(1.95 g, 5.78 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(12.84 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 5.78 mmol)溶液を室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(10 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(352 mg, 1.92 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(12.84 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 5.78 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、３−クロロペロキシペル安息香酸(m-CPBA, 2.77 g, 9.64 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(150 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、1.68 g (62%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 64H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００７４】
方法２：４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(5.0 g, 10.96 mmol)およびテトラゾール(29.2 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 13.15 mmol)攪拌溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(4.54g, 13.15 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を100 mLの ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.68 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.8 g, 4.38 mmol)、ピリジン(4.43 mL, 54.77 mmol)およびEt3N(7.63 mL, 54.77 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(5.25 g, 16.42 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(150 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(CH2Cl2中８％アセトン)、3.8 g(62%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44.
【００７５】
２Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウロイルカルジオリピン）
【００７６】
【化１２】
【００７７】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の２Ａで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.07 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトララウロイル(C1２:O)カルジオリピン(1.0 g, 80%)を白色固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 64H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 2.94 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). 13C NMR δ (CDC13,125 MHz) 14.07, 22.67, 24.87, 24.93, 29.18, 29.22, 29.36, 29.37, 29.40, 29.57, 29.60, 29.66, 29.67, 29.69, 29.72, 31.91, 34.09, 34.28, 62.62, 63.57, 66.77, 69.47, 70.29, 173.25, 173.56. FTIR (ATR) 3207, 3035, 2956, 2918, 2850, 1737, 1467, 1378, 1206, 1092, 1067 cm-1. ESI-MS (negative), m/z 1150 (M- 2NH4++Na+), 1127.4 (M-2NH4+), 1128.4 (M-2NH4++H+), 928.4 (M-2NH4+-RCOO-), 563.7 (M-2NH4+)2-. Anal. Calculated for C57H116N2017P2: C, 58.84; H, 10.05; N, 2.41: P, 5.32.
Found: C, 57.75; H, 9.83; N, 2.34: P, 5.28.
【００７８】
実施例３．テトララウロイルカルジオリピンの合成
この方法においては、テトララウロイルカルジオリピンが２−シアノエチルホスホラミダイトによって合成される。
【００７９】
３Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジシアノエチルエステル
【００８０】
【化１３】
【００８１】
無水エーテル(20 mL)中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(1.74 g, 3.79 mmol)およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(545 mg, 4.22 mmol)の混合物へ、アルゴン雰囲気下２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホラミダイト(1 g, 4.22 mmol)を加えた。混合物を室温で１時間攪拌し、分離したジイソプロピルアミンヒドロクロリドをろ過し、ろ液を真空で濃縮した。残渣をそのままリン酸化に用いた。
【００８２】
無水ＣＨ２Ｃ１２(30 mL)中の上記ホスホラミダイトおよび１Ｈ−テトラゾール(9.4 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 4.22 mmol)混合物に、ＣＨ２Ｃ１２(5 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(312 mg, 1.71 mmol)溶液を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌し、−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ(1.36 g, 4.73 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(200 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(1:4 アセトン:CH2Cl2)、1.48 g(70%)の無色のシロップを得た。
TLC (Si02) EtOAc/CH2Cl2 (1:3) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 64H), 1.53-1.66 (m, 8H), 2.26-2.36 (m, 8H), 2.64-2.75 (m, 4H), 3.83-3.88 (m, 1H), 4.06-4.36 (m, 16H), 4.67 (s, 2H), 5.19-5.28 (m, 2H), 7.28-7.38 (m, 5H).
【００８３】
３Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−ベンジルグリセロールジアンモニウム塩
【００８４】
【化１４】
【００８５】
１０ｍＬのアセトニトリル中の、３Ａで得た前駆体(1.48 g, 1.2 mmol)およびＥｔ３Ｎ(1.66 mL, 12 mmol)溶液を一晩攪拌し（ＴＬＣにより原料物質が残っていないことが示された）、蒸発乾燥した。残渣を、２ｍＬのＮＨ４ＯＨを添加してアンモニウム塩に変換し、Si02カラムで精製して(1% NH40H を含むCH2Cl2中15% MeOH)、ゆっくり固形化する無色のシロップを850 mg(60%)得た。
1H NMR δ (CDCl3,500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 64H), 1.53-1.63 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.66-3.76 (m, 1H), 3.82- 4.06 (m, 8H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.26-4.37 (m, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.14-5.26 (m, 2H), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.49 (bs, 8H).
【００８６】
３Ｃ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウロイルカルジオリピン）
【００８７】
【化１５】
【００８８】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の３Ｂで得た保護されたカルジオリピン(1.12 g, 0.89 mmol)溶液を５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(450 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトララウロイル(C1２:O)カルジオリピン(750 mg, 75%)を白色固体として得た。
TLC (SiO2) カラム CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.48.ここに記載した本方法で得られたテトララウロイルカルジオリピンは、すべての点において２Ｂのものと同一である。
【００８９】
実施例４．テトラデカノイルカルジオリピンの合成
４Ａ．１，２−ジデカノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成
【００９０】
【化１６】
【００９１】
ＣＨ２Ｃｌ２(30 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(2.0 g, 10.97 mmol)およびEt3N(6.89 mL, 49.36 mmol)の氷冷した溶液に、デカノイルクロリド(5.1 mL, 24.69 mmol)を１０分かけて滴下し、次いで４−（ジメチルアミノ）ピリジン(DMAP, 268 mg, 2.19 mmol)を滴下した。反応混合物を室温で１２時間攪拌し、CH2Cl2(200 mL)で希釈し、順に水(100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、4.5 g(83%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.54. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【００９２】
４Ｂ．１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロール
【００９３】
【化１７】
【００９４】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(40 mL)中の４Ａで得た保護されたジデカノイルグリセロール(4.68 g, 9.55 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたＤＤＧ(3.52g, 92%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【００９５】
４Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００９６】
【化１８】
【００９７】
ＣＨ２Ｃｌ２(25 mL)中の、４Ｂで得た１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロール(3.52 g, 8.8 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(3.26 g, 9.68 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(21.51 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 9.68 mmol)溶液を、室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(10 mL)中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(712 mg, 3.9 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(21.51 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 9.68 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ(5.06 g, 17.6 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(200 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、3.21 g(64%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/ EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 48H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００９８】
４Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【００９９】
【化１９】
【０１００】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の４Ｃで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.16 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮してテトラデカノイル(C1０:O)カルジオリピン(1.0 g, 80%)を半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.42. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 48H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 3.62 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1038 (M-2NH4++Na+), 1015 (M-2NH4+), 843.7 (M-2NH4+- RCOO-), 507.5 (M-2NH4+)2-.
【０１０１】
実施例５．テトラオクタノイルカルジオリピンの合成
５Ａ．１，２−ジオクタノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロール
【０１０２】
【化２０】
【０１０３】
無水ピリジン(40 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(4.0 g, 21.95 mmol)溶液に、オクタノイルクロリド(8.93 g, 54.87 mmol)を１０分かけて滴下し、次いでＤＭＡＰ(267 mg, 2.19 mmol)を滴下した。反応混合物を５５℃で４８時間攪拌し、EtOAc(300 mL)で希釈し、順に水(100 mL)、１Ｎ ＨＣｌ(2 x 100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、7.3 g(75%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.52. 1H NMR 8 (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【０１０４】
５Ｂ．１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロール
【０１０５】
【化２１】
【０１０６】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(30 mL)中の、５Ａで得た保護されたジオクタノイルグリセロール(6.8 g, 15.66 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(900 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたＤＯＧ(5.0g, 93%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【０１０７】
５Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１０８】
【化２２】
【０１０９】
５０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の５Ｂで得た１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロール(5.0 g, 14.53 mmol)およびテトラゾール(40.3 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 18.16 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(6.26g, 18.16 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を200 mLのEtOAcで希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.0 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１１０】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.660 g, 3.63 mmol)、ピリジン(10.6 mL, 131.13 mmol)およびEt3N(8.0 mL, 65.65 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(6.3 g, 19.69 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(250 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中10％アセトン)、2.72 g(64%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.52-1.62 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【０１１１】
５Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−ベンジルグリセロールジアンモニウム塩
【０１１２】
【化２３】
【０１１３】
２−ブタノン(15 mL)中の、５Ｃで得た保護されたカルジオリピン(2.5 g, 2.12 mmol)およびヨウ化ナトリウム(956 mg, 6.36 mmol)溶液を９０℃で３時間還流した。揮発物を蒸発させ、残渣をSi02カラムで精製して(１％アンモニウムを含むCH2Cl2中20%エタノール)、1.52 g(75%)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.53. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.66-3.76 (m, 1H), 3.82-4.06 (m, 8H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.26-4.37 (m, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.14-5.26 (m, 2H), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.49 (bs, 8H).
【０１１４】
５Ｅ．１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【０１１５】
【化２４】
【０１１６】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の、５Ｄで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.27 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮してＣ８カルジオリピン(950 mg, 80%)を半固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.43. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 925.7 (M-2NH4++Na+)-, 903.1 (M-2NH4+), 760.6 (M-2NH4+-RCOO-), 451.2 (M-2NH4+)2-.
【０１１７】
実施例６．テトラヘキサノイルカルジオリピン
６Ａ．１，２−ジヘキサノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロール
【０１１８】
【化２５】
【０１１９】
無水ピリジン(30 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(2.6 g, 14.26 mmol)溶液に、ヘキサノイルクロリド(4.8 g, 35.67 mmol)を１０分かけて滴下し、次いでＤＭＡＰ(175 mg, 1.42 mmol)を滴下した。反応混合物を５５℃で４８時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ(200 mL)で希釈し、順に水(100 mL)、１Ｎ ＨＣｌ(2 x 100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、4.1 g(76%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 8H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【０１２０】
６Ｂ．１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロール
【０１２１】
【化２６】
【０１２２】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(30 mL)中の、６Ａで得た保護されたジヘキサノイルグリセロール(3.1 g, 8.2 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたグリセロール(3.52g, 92%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.34. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 8H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 HZ, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【０１２３】
６Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１２４】
【化２７】
【０１２５】
４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の、６Ｂで得た１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロール(3.5g, 13.19 mmol)およびテトラゾール(35.1 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 15.83 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(5.46g, 15.83 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を200 mLのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.0 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１２６】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.957 g, 5.25 mmol)、ピリジン(10.6 mL, 131.13 mmol)およびEt3N(8.0 mL, 65.65 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(6.3 g, 19.69 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(250 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中10％アセトン)、3.57 g(64%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.40. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.62 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【０１２７】
６Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【０１２８】
【化２８】
【０１２９】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の６Ｃで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.41 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、2 mLの30%アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮しＣ６カルジオリピン(940 mg, 81%)を半固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.36. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 813 (M-2NH4++Na+), 791 (M-2NH4++H+), 395 (M-2NH4+)2-.
【０１３０】
実施例７．テトラオレオイルカルジオリピン（不飽和）の合成
７Ａ．シス−５−レブリノイル−２−フェニル−１，３−ジオキサン
【０１３１】
【化２９】
【０１３２】
ＣＨ２Ｃｌ２(80 mL)中のシス−１，３−Ｏ−ベンジリデングリセロール(5.0 g, 27.74 mmol)溶液に、０℃で、ＤＣＣ(8.58 g, 41.61 mmol)、ＤＭＡＰ(3.38 g, 27.74)およびレブリン酸(4.0 g, 34.68 mmol)を順に加えた。混合物を室温で２４時間攪拌した。分離した尿素をろ過し、ろ液を濃縮して、８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶出剤としてフラッシュクロマトグラフィーで精製して生成物を白色固体(5.86 g, 76%)として得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (1:1) Rf〜0.51. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 2.19 (s, 3H), 2.58-2.89 (m, 4H), 4.18 (dd, J= 12.0, 1.5 Hz, 2H), 4.25 (dd, J= 12.0, 1.5 Hz, 2H), 4.71 (dd, J= 1.5, 1.5 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 7.24-7.53 (m, 5H).
【０１３３】
７Ｂ．２−レブリノイル−１，３−プロパンジオール
【０１３４】
【化３０】
【０１３５】
EtOH:EtOAc(1:1)(100 mL)中の、７Ａで得た保護されたグリセロール(5.8 g, 20.86 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(800 mg, 10%)で８時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られた２−レブリノイルグリセロールを６％MeOH/CH2Cl2を溶出剤としてフラッシュクロマトグラフィーで精製して生成物を白色固体(2.82 g, 70%)として得た。
TLC (Si02) MeOH/CH2Cl2 (1:9) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDC13, 300 MHz) 2.19 (s, 3H), 2.58 (dd, J= 6.0, 6.0 Hz, 2H), 2.80 (dd, J= 6.0, 6.0 Hz, 2H),3.09 (bs, 2H), 3.72-3.87 (m, 4H), 4.90 (q, J= 5.1 Hz).
【０１３６】
７Ｃ．２−レブリノイル−１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１３７】
【化３１】
【０１３８】
２０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール(1.5 g, 2.41 mmol)およびテトラゾール(8 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 3.62 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(1.25g, 3.62 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(2.08 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１３９】
ＣＨ２Ｃｌ２(20 mL)中の、上記ホスファイト、２−レブリノイル−１，３−プロパンジオール(0.185 g, 0.96 mmol)、ピリジン(2 mL, 24.1 mmol)およびEt3N(1.2 mL, 12.05 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(1.15 g, 3.61 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(10 mL)で処理した。内容物をEtOAc(100 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中5％アセトン)、1.09 g(66%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (1:2) Rf〜0.64. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.15 (s, 3H), 2.22-2.31 (m, 8H), 2.52-2.57 (m, 2H), 2.66-2.74 (m, 2H), 4.01-4.32 (m, 12H), 5.01-5.10 (m, 5H), 5.15-5.18 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.28-7.39 (m, 10H).
【０１４０】
７Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−レブリノイルグリセロールジアンモニウム塩
【０１４１】
【化３２】
【０１４２】
２−ブタノン(8 mL)中の、７Ｃで得た保護されたカルジオリピン(0.525 g, 0.324 mmol)およびヨウ化ナトリウム(145 mg, 0.972 mmol)溶液を９０℃で３時間還流した。揮発物を蒸発させ、残渣をSi02カラムで精製して(１％アンモニウムを含むＣＨ２Ｃｌ２中10%メタノール)、240 mg(50%)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) CHC13/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.63. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 80H), 1.52-1.65 (m, 8H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.18 (s, 3H), 2.23-2.35 (m, 8H), 2.52-2.59 (m, 2H), 2.71-2.79 (m, 2H), 3.83-4.04 (m, 6H), 4.12-4.23 (m, 4H), 4.31-4.39 (m, 2H), 5.01-5.09 (m, 1H), 5.17-5.26 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.41-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1576.5 (M-2NH4++Na+)-, 1554 (M-2NH4+), 1272.2 (M-2NH4+-RCOO-), 776 (M-2NH4+)2-.
【０１４３】
７Ｅ．１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラオレオイルカルジオリピンの合成）
【０１４４】
【化３３】
【０１４５】
ピリジン：酢酸(3 mL, 4:1)中の、７Ｄで得たlev-保護されたカルジオリピン(140 mg, 0.088 mmol)溶液にヒドラジン（hydazine）(14 mg, 0.44 mmol)を加え、３０分攪拌した。揮発物をロータベイパー（rotavapor）中で除去し、残渣をSi02で精製して(１％アンモニアを含むＣＨ２Ｃｌ２中10%メタノール)、80 mg(61 %)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.55. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 80H), 1.52-1.65 (m, 8H), 1.82 (bs, 1H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.23-2.35 (m, 8H), 3.83-3.94 (m, 7H), 4.12-4.23 (m, 4H), 4.33-4.39 (m, 2H), 5.17-5.23 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.41-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1478 (M-2NH4++Na+)-, 1456 (M-2NH4+), 1174.2 (M-2NH4+-RCOO-), 727.5 (M-2NH4+)2-.
【０１４６】
カルジオリピンエーテル類似体
実施例８．テトララウリルカルジオリピンの合成
８Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１４７】
【化３４】
【０１４８】
４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロール(3.0 g, 7.00 mmol)およびテトラゾール(19.5 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 8.76 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(3.02g, 8.76 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を100 mLのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(4.5 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１４９】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.48 g, 2.67 mmol)、ピリジン(5.43 mL, 66.8 mmol)およびEt3N(4.63 mL, 33.4 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(3.25 g, 10.02 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(150 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中３０％酢酸エチル)、2.34 g(67%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0. 47. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 72H), 1.47-1.56 (m, 8H), 3.35-3.58 (m, 14H), 3.72-3.78 (m, 1H), 3.95-4.18 (m, 8H), 4.59-4.61 (m, 2H), 5.02-5.07 (m, 4H), 7.26-7.34 (m, 15H).
【０１５０】
８Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウリルカルジオリピン）
【０１５１】
【化３５】
【０１５２】
テトラヒドロフラン(20 mL)中の、８Ａで得た保護されたカルジオリピン(650 mg, 0.48 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(200 mg)で６時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてＣ１２カルジオリピン(400 mg, 75%)を白色半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 72H), 1.52-1.66 (m, 8H), 3.39-3.48 (m, 9H), 3.51-3.61 (m, 6H), 3.80-3.96 (m, 8H), 7.31-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1094.1 (M-2NH4++Na+), 1072.0 (M-2NH4++H+), 535.5 (M-2NH4+)2-.
【０１５３】
実施例９．テトラヘキシルカルジオリピンの合成
９Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジヘキシル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１５４】
【化３６】
【０１５５】
標題化合物を実施例８Ａで記載した方法によって調製した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 12H), 1.22-1.37 (m, 24H), 1.47-1.58 (m, 8H), 3.34-3.58 (m, 14H), 3.72-3.78 (m, 1H), 3.94-4.18 (m, 8H), 4.59-4.61 (m, 2H), 5.02-5.08 (m, 4H), 7.26-7.34 (m, 15H).
【０１５６】
９Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジヘキシル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラへキシルカルジオリピン）
【０１５７】
【化３７】
【０１５８】
標題化合物を実施例８Ｂで記載した方法によって調製した。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDC13, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.50-1.61 (m, 8H), 1.88 (bs, 1H), 3.39-3.48 (m, 9H), 3.51-3.61 (m, 6H), 3.80-3.96 (m, 8H), 7.31-7.69 (bs, 8H).
【０１５９】
実施例１０．
本実施例は、本発明によるカルジオリピン含有リポソーム組成物の調製を例示する。小さな単層ベシクルを、本明細書に記載した方法によって生成した１９．１μモルのカルジオリピン、９６．２μモルのホスファチジルコリンおよび６４．６μモルのコレステロールを混合することによって形成する。完全に攪拌した後、ロータリーエバポレーターを用いて、５０ｍＬ丸底フラスコ中で混合物を蒸発乾燥する。得られた乾燥脂質フィルムを１０ｍＬ無菌の発熱物質を含まない水に再懸濁する。３０分膨潤させた後、得られた懸濁液を固定温度浴中、２５℃で１５分超音波処理する。次いでリポソーム調製物をトレハロースとともに凍結乾燥する。
【０１６０】
本明細書中で引用された刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照により、一つ一つ具体的に援用されることが示され、本明細書にその参考文献の全体が記述されているのと同程度まで、参照によって本明細書中に援用されるものとする。
【０１６１】
本明細書に他に記述がないか又は文脈に明らかに矛盾していない限り、本発明を表す文脈における用語「a」、「an」、「the」および類似表現の使用は（特に請求の範囲中の文脈において）、単数および複数の両方を包含していると解釈されるものとする。他に注釈がなければ、用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、及び「含有する(containing)」は制限のない用語（つまり、「含むがそれに制限されない」という意味）として解釈されるものとする。本明細書における値の範囲の言及は、本明細書に他に記述がない限り、範囲内に含まれるそれぞれ個々の値を個別に言及する簡略な方法として働くことを単に意図されたもので、それぞれ個々の値は個別に本明細書中に記述されたものの如く本明細書中に包含される。本明細書中他に記述がないか、又は文脈に明らかに矛盾していない限り、本明細書中に記載した全ての方法はどんな適当な順序でも行われうる。本明細書中に出されたいずれのそして全ての実施例、又は例示的な言葉（例えば「〜のような（such as）」）の使用は、単に発明をより明らかにするよう意図したものであり、他に主張がない限り、本発明の範囲に制限をもたらすようなものではない。明細書中のどの言葉も、未請求の要素を本発明の実施に必須であると示唆していると解釈されるべきではない。
【０１６２】
本発明の好ましい実施態様を本明細書に記載し、それには本発明者らが知る本発明を実施するための最良の態様が含まれている。それらの好ましい実施態様の改変は、前述の説明を読むことによって当業者に明らかになるだろう。本発明者らは当業者がそのような改変を適切に使用することを予期し、さらに本発明がここに具体的に記載した以外の方法で実施されることを意図している。したがって本発明は、適用法で許可されている通り、ここに添付する特許請求の範囲において言及した主題の全ての変更や等価物を含む。さらには、本明細書中に他に記述がないか、又は文脈に明らかに矛盾していない限り、それらの全ての可能な改変において、上述の要素のいかなる組み合わせも、本発明によって包含されている。
【０１６３】
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【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１はカルジオリピンの一般構造を表す。
【図２】図２はカルジオリピンを合成する１つのスキームを表す。
【図３】図３はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図４】図４はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図５】図５はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図６】図６はカルジオリピンエーテル類似体を合成する別のスキームを表す。
【図７】図７はカルジオリピンエーテル類似体を合成する別のスキームを表す。
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、カルジオリピン類似体／変異体、並びにそれらを含有する組成物を調製するための新規な合成方法に関する。本発明はまた活性剤もしくは薬剤を含有するリポソーム製剤または複合体またはエマルジョン、並びにヒトおよび動物の疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソーム製剤は、水溶液における疎水性薬剤の溶解性を高める能力を有する。それらは多くの場合、薬剤治療に関連した副作用を減らし、活性剤の新規な製剤を開発するための柔軟なツールを提供する。
【０００３】
リポソームは通常、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、およびホスファチジルイノシトールなどの天然のリン脂質から調製される。ホスファチジルグリセロールおよびカルジオリピンなどの陰イオン性リン脂質を加え、コロイド安定化を提供する正味の負表面電荷を産生させてもよい。これらの成分は多くの場合天然源から精製されるが、時には化学的に合成されてもよい。
【０００４】
リポソームの性質および表面電荷の密度は、安定性、動態、生体分布、標的細胞との相互作用、および標的細胞による取り込みに影響する。またリポソーム表面電荷はリポソームの凝集しやすさ（これはリポソームが標的細胞に作用するのを困難にし、また標的細胞による取り込みに影響を及ぼす）にも影響を与える。この点において、中性表面電荷を伴ったリポソームは最も凝集しやすいが、全身投与後の細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞によってより排除されにくい。それに対し、負帯電したリポソームはより少ない凝集およびより高い安定性を示すが、インビボの細胞取り込みが非特異的である。よって、少量の負帯電した脂質が凝集依存的な取り込みメカニズムに対し中性リポソームを安定化しうることが提案されてきた（例えば、Drummond et al.,Pharm.Rev., 51, 691-743(1999)参照）。
【０００５】
カルジオリピン（ジホスファチジルグリセロールとしても知られている）は、心臓のミトコンドリアおよび骨格筋などを含む、高い代謝活性と関連する組織の細胞膜から一般的に精製され、複合陰イオン性リン脂質のクラスを構成する。したがって、カルジオリピンの負表面電荷は、上記したように、凝集依存的な取り込みに対しリポソームを安定化する。動物組織およびミトコンドリアにおいて、カルジオリピンはリノール酸（１８：２）を９０％まで含有する。酵母カルジオリピンはオレイン（１８：１）およびパルミトレイン（１６：１）脂肪酸をより多く有する点で異なっており、一方で細菌の脂質は１４〜１８炭素を伴った飽和モノエン脂肪酸を含有する。しかしながら、短鎖脂肪酸を有するカルジオリピンはこれまで知られていなかった。カルジオリピン脂肪酸鎖（すなわち、飽和または不飽和）の長さおよび性質のリポソーム凝集に対する潜在的な作用はまだ明らかにされていない。
【０００６】
短脂肪酸鎖を含むカルジオリピン（「短鎖カルジオリピン」）を合成するための方法はいまだ記載されていない。一般的に、カルジオリピンを合成する公知の方法は、主に２つのグループに分けられる：（ａ）リン酸化剤を用いて、２−保護されたグリセロールの１級ヒドロキシル基を１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロールと結合させるもの、および（ｂ）２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルフォニルクロリド（ＴＰＳ）またはピリジンの存在下で、２−保護されたグリセロールの両方の１級ヒドロキシル基をホスファチジン酸で縮合させるもの（例えば、Ramirez et al., Synthesis, 11, 769-770 (1976), Duralski et al., Tetrahedron Lett. 39, 1607-1610 (1998), Sanders and Schwarz, J. Am. Chem. Soc. 88, 3844-3847 (1966), Mishina et al., Bioorg. Khim. 11, 992-994 (1985), およびStepanov et al., Zh. Org., Khim. 20, 985-988 (1984)参照）。またカルジオリピンは、１，３−ジヨードプロパノールベンジルエーテルまたは１，３−ジヨードプロパノールｔ−ブチルエーテルを伴ったジアシルグリセロリン酸ベンジルエステルの銀塩間の反応を介して産生されてきた(例えば、De Haas et al., Biochim. Biophys. Acta, 116, 114-124 (1966)およびInoue et al., Chem. Pharm. Bull. 11, 1150-1156 (1963)参照)。該スキームは少量のカルジオリピンの調製には適していたが、これらは多くの工程を含み、中間体を注意深く精製することを要求し、非常に感光性が高い銀塩誘導体および不安定なヨード中間体を使用するため、大量のルーチン調製には向いていなかった。
【０００７】
ホスフェートトリエステルおよびホスホラミダイトエステルはホスフェート結合を形成する核酸合成において広く用いられており、リン脂質合成においてはあまり用いられていない（例えば、Browne et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans, 1, 653-657 (2000)参照）。この点において、Browneら（前述）は、リン脂質類似体、特にホスホリルコリン類似体の、ホスホラミダイト方法論を用いた調製を記載している。ホスファチジルイノシトールＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２およびＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３並びにそれらの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al., Tetrahedron LETT. 35, 123-124 (1994)参照)、ジフルオレニルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al., Tetrahedron LETT. 38, 7407-7410 (1997)参照)、およびジアシルグリセロールを（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィンと反応させることによって生成される試薬（例えば、Chen et al., J. Org. Chem., 61, 6305-6312 (1996)及びPrestwich et al., Acc. Chem. Res., 29, 503-513 (1996)参照)を含む、様々なホスホラミダイト試薬を用いて調製されてきた。加えて、ＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２およびＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３のリン酸トリエステル類似体は、ホスホラミダイト試薬２−シアノ−エチル Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（例えば、Gu et al., J. Org. Chem, 61, 8642-8647 (1996)参照)を使用して調製されてきた。さらに、Murakamiら, J. Org. Chem., 64, 648-651 (1999)は、メチルテトライソプロピルホスホロジアミダイトをリン酸化試薬として使用する、２，５−ジベンジル−Ｄ−マンニトールからのホスファチジルグリセロール合成を記載している。しかしながら、カルジオリピン、特に様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピン類のようなリン脂質の調製における、ホスフェートトリエステルおよびホスホラミダイトエステルの使用は十分には確立されていない。
【０００８】
様々な脂肪酸鎖の長さを有する、大量の飽和および不飽和カルジオリピン類（特に「短鎖カルジオリピン」）を調製するために用いることができる新規な合成方法が必要とされている。かかる方法は、より幅広い種々のカルジオリピン類のアベイラビリティを上げ、現在使用可能なものよりもより確定した組成物を有する、活性剤を包含する新規なリポオソーム製剤の開発に利用される脂質を多様化する。
【０００９】
本発明はかかる組成物および方法を提供する。本発明のこれらの利点およびその他の利点、そして付加的な発明の特性は、以下に提供される発明の詳細から明らかとなるであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の要旨
本発明は、様々な鎖長を有し、飽和または不飽和である、種々の脂肪酸および／またはアルキル鎖を有するカルジオリピンを調製するための新規な合成方法を提供する。本方法は、（ａ）光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールまたは１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬または１つ以上のリン酸トリエステルと反応させること、（ｂ）（ａ）の生成物を２−保護されたグリセロールと結合させ、そこで保護されたカルジオリピンが生成されること、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。本発明はまた様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピンを調製する方法であって、（ａ）２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のホスホラミダイト試薬と反応させてリン酸化剤を生成し、（ｂ）リン酸化剤を光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロールまたは１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロールと反応させて保護されたカルジオリピンを生成し、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。
【００１１】
本発明の方法によって調製されるカルジオリピンは、リポソームに取り込まれることができ、それらは、疎水性若しくは親水性薬剤のような活性剤、アンチセンスヌクレオチドあるいは診断薬を含むこともできる。かかるリポソームは疾患を治療するために、あるいは、診断および／または分析アッセイにおいて用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の詳細な説明
本発明は、一般式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩを有するカルジオリピン変異体および類似体、並びにかかる変異体および類似体を含有する組成物を合成する方法を記載する。
【００１３】
【化１】
【００１４】
【化２】
【００１５】
【化３】
【００１６】
式ＩＩＩにおいて、Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−などである。式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、飽和および／または不飽和アルキル基であり、好ましくはＣ２〜Ｃ３４飽和および／または不飽和アルキル基である。式ＩＩＩにおいて、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎであり、ｎ＝０〜１５である。式ＩＩＩにおいて、Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖類など）、複素環化合物、ヌクレオシド、ポリヌクレオチドなどである。式ＩＩＩにおいて、Ｒ５はリンカーであり、かかるリンカーは必要性または用途によって分子に加えられても（あるいは加えられなくても）よい。しかしながら、加えられる場合、Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルコキシ、ポリアルキルオキシ（約１〜５００のアルキルオキシマーを含有する（および少なくとも約１０アルキルオキシｍｅｒ、少なくとも約５０アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約１００アルキルオキシｍｅｒ、少なくとも約２００アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約３００アルキルオキシｍｅｒまたは少なくとも約４００アルキルオキシｍｅｒを有していてもよい）ＰＥＧ化された（pegylated）エーテル、置換されたポリアルキルオキシなど）、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、グルコース、マンノース、ガラクトース、多糖類などの炭水化物を含んでいてもよい。式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｘは水素または非毒性陽イオンであり、好ましくは、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオンなどである。
【００１７】
用語「アルキル」は飽和もしくは不飽和直鎖および分岐鎖炭化水素部分を包含する。用語「置換されたアルキル」は、ヒドロキシ、（低級アルキル基の）アルコキシ、（低級アルキル基の）メルカプト、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシルなどから選ばれる１つ以上の置換基をさらに持つアルキル基を含む。
【００１８】
最も好ましい実施態様では、式ＩＩＩにおけるＹ１およびＹ２は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−または−Ｏ−である。Ｒ３は最も好ましくはＣＨ２である。また、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ２は同一であり、Ｃ２〜Ｃ１３飽和および／または不飽和アルキル基、より好ましくは４〜１４炭素原子（たとえば６〜１２炭素原子）のものである。Ｘはもっとも好ましくは水素またはアンモニウムイオンである。リンカー（Ｒ５）がない場合、一般式のカルジオリピンが提供される（図１）。
【００１９】
本発明は、式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法を提供し、かかる方法は、式ＶＩＩＩのアルコールと、１つ以上のホスホラミド（phosphoramide）試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールＶＩとを、酸触媒の存在下で反応させることを含む。
【００２０】
【化４】
【００２１】
【化５】
【００２２】
式ＶＩにおけるＹは、ヒドロキシル保護基（好ましくはアルキル基など）またはシリル保護基である。式ＶＩＩＩにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ１およびＹ２は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに関して前述したものであってもよい。本発明の方法によれば、酸触媒は反応を促進できるいかなる適した触媒であってもよい。かかる触媒の例としては、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールが挙げられる。好ましい触媒は、４，５−ジクロロイミダゾールまたは１Ｈ−テトラゾールである。本発明の方法によれば、結合ホスホラミダイトは式ＩＶまたはＶを有していてもよい：
【００２３】
【化６】
【００２４】
【化７】
【００２５】
別の実施態様では、本発明は式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法を提供し、かかる方法は、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む。好ましいリン酸トリエステルは、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩのホスホラミダイトと反応させることにより生成されうる。
【００２６】
【化８】
【００２７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸは、リン酸保護基、好ましくはベンジル基または２−シアノエチルもしくはシリル基である。適した保護基のその他の例としては、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートが挙げられる。
【００２８】
本発明の化合物の合成の一般的な反応順序を図２および３に例示する。本発明は、様々な脂肪酸鎖長を有するカルジオリピンＩを調製するための方法を提供し、かかる方法は（ａ）光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２を、一般式ＩＶ（図２）またはＶ（図３）の１つ以上のホスホラミダイト試薬と反応させること、（ｂ）塩化溶媒中（例えばジクロロメタン、クロロホルムなど）で（ａ）の生成物３を２−保護されたグリセロールＶＩと結合させ、次いでｍ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）で酸化して保護されたカルジオリピン４を生成することを含む。その後、保護されたカルジオリピンを脱保護し、アンモニウム塩に変換してカルジオリピン１（アンモニウム塩）を生成する。
【００２９】
光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２との反応には、いかなる適したホスホラミダイト試薬や方法を用いてもよい（例えば、Browneら、（前述）が記載したようなもの）。適したホスホラミダイト試薬の例としては、（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（例えば、Prestwich et al. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 1822-1825参照)、ベンジルオキシビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィン(例えば、Dreef et al. Tetrahedron Lett. 1988, 29, 6513-6516参照)、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、Browne et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 2000, 653-657参照)、（２−シアノエチル）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（例えば、Prestwich et al. J. Org. Chem. 1998, 63, 6511-6522参照)、ジフルオレニル ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 7407-7410参照)、メチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（例えば、Murakami et al. J. Org. Chem. 1999, 64, 648-651参照)、ジメチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 1993, 34, 497-500参照)、ジベンジル ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Watanabe et al. Tetrahedron Lett. 2000, 41, 8509-8512参照)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト（例えば、Lindberg et al. J. Org. Chem. 2002, 67, 194-199参照)、２−（ジフェニルメチルシリル）エチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、Chevallier et al. Org. Lett. 2000, 2, 1859-1861参照)、（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ブチルおよび（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ペンチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト（例えば、wilk et al. J. Org. Chem. 1997, 62, 6712-6713参照)が挙げられる。
【００３０】
本発明のもう１つの実施態様を図４に表す。この方法では、光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２を、ホスホラミダイトＶＩＩを用いてリン酸化し、亜リン酸トリエステル５を産生できる。この亜リン酸トリエステル５を、任意の適した２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩ、例えば、ベンジルオキシ１，３−プロパンジオールまたは２−レブリノイル−１，３−プロパンジオールなどと、ピリジニウムペルブロミドおよびホスホニウム塩法（例えば、Watanabe et al.（前述）参照）を用いて結合させ、保護されたカルジオリピン４を得ることができる。この合成方法における好ましい結合試薬はジベンジルジイソプロピルホスホラミダイトである。
【００３１】
図５で説明する別のストラテジーにおいて、本発明の方法は、（ａ）２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩを１つ以上のホスホラミダイト試薬ＩＶまたはＶと反応させて、リン酸化試薬６を生成すること、（ｂ）リン酸化試薬６を光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−グリセロール２と反応させ、次いでｍ−ＣＰＢＡで酸化して保護されたカルジオリピン４を生成すること、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンを調製することを含む。この本発明の方法で用いるのに適したホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールは上記の通りである。
【００３２】
図６に表した本発明のもう一つの実施態様は、カルジオリピンのエーテル類似体（アシル基がアルキル鎖で置換されているもの）をもたらす。つまり、（ａ）１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール７をホスホラミダイトＩＶまたはＶで処理してリン酸化試薬８を生成し、（ｂ）リン酸化試薬を２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩと反応させ、次いで酸化して保護されたカルジオリピン９を生成し、および（ｃ）保護されたカルジオリピンを脱保護してカルジオリピンのエーテル類似体１０を生成する。
【００３３】
本発明の別の実施態様を図７に表す。この方法では、光学的に純粋な１，２−Ｏ−ジアルキル−ｓｎ−グリセロール７を、ホスホラミダイトＶＩＩを用いてリン酸化し、亜リン酸トリエステル１１を産生することができ、亜リン酸トリエステル１１を任意の適した２−Ｏ−保護されたグリセロールＶＩ、例えば、ベンジルオキシ１，３−プロパンジオールまたは２−レブリノイル−１，３−プロパンジオールなどと、ピリジニウムペルブロミドおよびホスホニウム塩法（例えば、Watanabe et al.（前述）参照）を用いて結合させ、保護されたカルジオリピンエーテル類似体９を得ることができる。この合成方法における好ましい結合試薬はジベンジルジイソプロピルホスホラミダイトである。
【００３４】
上述した本発明は、カルジオリピンを合成する的確で効率的な方法である。かかる経路は簡潔で高全収率で進行する。脱保護は保護基に合わせた方法によってなされうる。例えば、ベンジル基は触媒水素添加分解またはＮａＩ，２−シアノエチル処理によって、またフルオレニルメチル基はトリエチルアミンなどの三級塩基処理によって除去され、シリル基はフッ化物イオンまたは酸性媒質によって、レブリノイル基はヒドラジン分解によって脱保護される。
【００３５】
本明細書に記載する合成方法はいかなる適した様式に改良されてもよい。例えば、ホスホラミダイトおよびリン酸エステルは、４，５−ジクロロイミダゾール(例えばBrowne et al.参照)、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩(例えばMoriguchi et al.参照)を含む様々な酸触媒を用いて調製されうる。同様に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドを代わりの酸化剤として用いてもよい。記載された方法をさらに当分野で公知のあらゆる適した様式に改良してもよい。
【００３６】
本発明の方法は、様々な長さの飽和／不飽和脂肪酸／アルキル鎖を含むカルジオリピン類を調製するために用いられうる。リン脂質脂肪酸の一般構造は、炭化水素鎖およびカルボン酸基を含む。通常、脂肪酸炭化水素鎖の長さは約２〜約３４炭素原子の範囲であるが、飽和であっても不飽和であってもよい。しかしながら、炭素鎖はより典型的には約１２〜約２４炭素原子の間である。ある実施態様では、炭化水素鎖が、例えば、少なくとも約５炭素原子または少なくとも約１０炭素原子または少なくとも約１５炭素原子を含んでいることが望ましい。一般的に、脂肪酸炭化水素の長さは約２４炭素酸よりも短い（例えば、約２４炭素原子よりも、または約２０炭素原子よりも短い）。
【００３７】
本発明はさらに、本発明の方法によって調製されたカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を提供する。最も好ましくは、本発明の方法で調製されたカルジオリピンは短脂肪酸鎖を含み（すなわち、「短鎖カルジオリピン」）、本発明は短鎖カルジオリピンを提供する。短脂肪酸鎖は約２〜約１４の間の炭素原子を含み、また約４（または約６）〜約１２炭素原子（例えば、約８〜約１０の間の炭素原子）を有していてもよい。あるいは、本発明の方法で生成されるカルジオリピンは、長鎖脂肪酸鎖を含んでいてもよい（すなわち、「長鎖カルジオリピン」）。長脂肪酸鎖は約１４〜約３４の間の炭素原子（例えば、約１４（もしくは約２０）〜約２４の間の炭素原子を含む。本発明の方法は短または長鎖カルジオリピン類の生産だけに制限されない。実際、中間の長さの脂肪酸／アルキル鎖を含有するカルジオリピンもまた本発明の方法によって調製できる。
【００３８】
リン脂質脂肪酸は一般的に炭化水素鎖における二重および／または三重結合の数によって分類される（すなわち不飽和）。飽和脂肪酸は二重または三重結合を一つも含有しておらず、鎖におけるそれぞれの炭素は最大数の水素原子と結合している。脂肪酸の不飽和の程度は炭化水素鎖中に存在する二重または三重結合の数によるものである。この点において、単不飽和脂肪酸は二重結合を１つ含有しているのに対し、多価不飽和脂肪酸は二重結合を２つ以上含有している（例えば、Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology,改訂版, A. D. Smith (ed.), Oxford University Press (2000)、および Molecular Biology of the Cell, ３版, B. A. Alberts (ed.), Garland Publishing, New York (1994)参照)。本発明の方法によって調製されるカルジオリピンの脂肪酸鎖はまた、短くとも長くとも、飽和または不飽和でありうる。
【００３９】
記載した方法を用いて種々の新規なカルジオリピン分子を調製できる。例えば、本方法は、短または長脂肪酸側鎖を含有する純粋な形態のカルジオリピン変異体を調製するために用いることができる。好ましい脂肪酸は、炭素鎖の長さ約Ｃ２〜Ｃ３４、より好ましくは約Ｃ４〜約Ｃ２４の間であり、とりわけ好ましい脂肪酸としては、テトラ酸（Ｃ４：０）、ペタン酸（Ｃ５：０）、ヘキサン酸（Ｃ６：０）、ヘプタン酸（Ｃ７：０）、オクタン酸（Ｃ８：０）、ノナン酸（Ｃ９：０）、デカン酸（Ｃ１０：０）、ウンデカン酸（Ｃ１１：０）、ドデカン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（Ｃ１３：０）、テトラデカン（ミリスチン）酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、ヘキサデカン（パルミチン、palmatic）酸（Ｃ１６：０）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７：０）、オクタデカン（ステアリン）酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、エイコサン（アラキジン）酸（Ｃ２０：０）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）、ドコサン（ベヘン）酸（Ｃ２２：０）、トリコサン酸（Ｃ２３：０）、テトラコサン酸（Ｃ２４：０）、１０−ウンデセン酸（Ｃ１１：１）、１１−ドデセン酸（Ｃ１２：１）、１２−トリデセン酸（Ｃ１３：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、１０−ペンタデセン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、エイコセン酸（Ｃ２０：１）、エイコサジエン酸（eicosdienoic acid）（Ｃ２０：２）、エイコサトリエン酸（eicosatrienoic acid）（Ｃ２０：3）、アラキドン酸（シス−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸）、およびシス−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸が挙げられる。エーテル類似体としては、アルキル鎖もまたＣ２〜Ｃ３４、好ましくは約Ｃ４〜約Ｃ２４の間の範囲である。その他の脂肪酸鎖もまた、Ｒ１および／またはＲ２置換基として用いられうる。かかる例示としては、エタン酸（または酢酸）、プロパン酸（またはプロピオン酸）、ブタン酸（またはブチル酸）、ヘキサコサン酸（またはセロチン酸）、オクタコサン酸（またはモンタン酸）、トリアコンタン酸（またはメリシン酸）、ドトリアコンタン酸（またはラッセル酸）、テトラトリアコンタン酸（またはゲダ酸）、ペンタトリアコンタン酸（またはセロプラスチン酸）などの飽和脂肪酸；トランス−２−ブテン（またはクロトン）酸、シス−２−ブテン（またはイソクロトン）酸、２−ヘキセン（またはイソハイドロソルビン）酸、４−デカン（またはオブツシル）酸、９−デカン（またはカプロール（caproleic））酸、４−ドデセン（またはリンデル）酸、５−ドデセン（またはデンチセチン(denticetic)）酸、９−ドデセン（またはラウロレイン）酸、４−テトラデセン（またはツズ）酸、５−テトラデセン（またはフィセテル（physeteric））酸、６−オクタデセン（またはペトロセレン(petroselenic)）酸、トランス−９−オクタデセン（またはエライジン）酸、トランス−１１−オクタデセン（またはバクシン（vaccinic））酸、９−エイコセン（またはガドレイン）酸、１１−エイコセン（またはゴンドン）酸、１１−ドコセン（またはセトレイン）酸、１３−デコセン（またはエルカ）酸、１５−テトラコセン（またはネルボン）酸、１７−ヘキサコセン（またはキシメン（ximenic））酸、２１−トリアコンテン（triacontenoic）（またはルメキュ(lumequeic)）酸などのモノエテン不飽和脂肪酸；２，４−ペンタジエン（またはβ−ビニルアクリル）酸、２，４−ヘキサジエン（またはソルビン）酸、２，４−デカジエン（またはシチリンジン(stillingic)）酸、２，４−ドデカジエン酸、９，１２−ヘキサデカジエン酸、シス−９，シス−１２−オクタデカジエン（またはα−リノール）酸、トランス−９，トランス−１２−オクタデカジエン（またはリノレレイジン(linolelaidic)）酸、トランス−１０，トランス−１２−オクタデカジエン酸、１１，１４−エイコサジエン酸、１３，１６−ドコサジエン酸、１７，２０−ヘキサコサジエン酸などのジエン不飽和脂肪酸；６，１０，１４−ヘキサデカトリエン（またはヒラゴン(hiragonic)）酸、７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、シス−６，シス−９−シス−１２−オクタデカトリエン（またはγ−リノール）酸、トランス−８，トランス−１０−トランス−１２−オクタデカトリエン（またはβ−カレンド）酸、シス−８，トランス−１０−シス−１２−オクタデカトリエン酸、シス−９，シス−１２−シス−１５−オクタデカトリエン（またはα−リノレン）酸、トランス−９，トランス−１２−トランス−１５−オクタデカトリエン（またはα−リノレンレイジン（linolenelaidic））酸、シス−９，トランス−１１−トランス−１３−オクタデカトリエン（またはα−エレオステアリン）酸、トランス−９，トランス−１１−トランス−１３−オクタデカトリエン（またはβ−エレオステアリン）酸、シス−９，トランス−１１−シス−１３−オクタデカトリエン（またはプニカ）酸、５，８，１１−エイコサトリエン酸、８，１１，１４−エイコサトリエン酸などのトリエン不飽和脂肪酸；４，８，１１，１４−ヘキサデカテトラエン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、４，８，１２，１５−オクタデカテトラエン（またはモロクチン（moroctic））酸、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、９，１１，１３，１５−オクタデカテトラエン（またはα−もしくはβ−パリナリン）酸、９，１２，１５，１８−オクタデカテトラエン酸、４，８，１２，１６−エイコサテトラエン酸、６，１０，１４，１８−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３−ドカサテトラエン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、８，１２，１６，１９−ドコサテトラエン酸などのテトラエン不飽和脂肪酸；４，８，１２，１５，１８−エイコサペンタエン（またはティムノドン（timnodonic））酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、４，８，１２，１５，１９−ドコサペンタエン（またはイワシ）酸、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、４，８，１２，１５，１８，２１−テトラコサヘキサエン（またはニシン（nisinic））酸などのペンタ−およびヘキサ−エン不飽和脂肪酸；３−メチルブタン酸（またはイソ吉草酸）、８−メチルドデカン酸、１０−メチルウンデカン（またはイソラウリン）酸、１１−メチルドデカン（またはイソウンデシル）酸、１２−メチルトリデカン（またはイソミリスチン）酸、１３−メチルテトラデカン（またはイソペンタデシル）酸、１４−メチルペンタデカン（またはイソパルミチン）酸、１５−メチルヘキサデカン、１０−メチルヘプタデカン酸、１６−メチルヘプタデカン（またはイソステアリン）酸、１８−メチルノナデカン（またはイソアラキジン）酸、２０−メチルヘンエイコサン（またはイソベヘン）酸、２２−メチルトリコサン（またはイソリグノセリン）酸、２４−メチルペンタコサン（またはイソセロチン）酸、２６−メチルヘプタコサン（またはイソモナトン（isomonatonic））酸、２，４，６−トリメチルオクタコサン（またはマイコセラン（mycoceranic）もしくはマイコセロシン(mycoserosic)）酸、２−メチル−シス−２−ブテン（アンゲリカ）酸、２−メチル−トランス−２−ブテン（またはチグリン）酸、４−メチル−３−ペンテン（またはピロテレビン（pyroterebic））酸などの側鎖脂肪酸が挙げられる。
【００４０】
本発明において用いられる用語「ヒドロキシル保護基」は、T. W. Greene and P. G. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第三版, John Wiley & Sons, New York (1999)によって開示された、一般的に用いられている保護基を言及するものである。かかる保護基としては、メチルエーテル、メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニルエーテルを含む置換されたメチルエーテル；１−エトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、アリル、プロパルギルなどの置換されたエチルエーテル；ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、トリフェニルメチルを含むベンジルおよび置換されたベンジルエーテル；トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリルを含むシリルエーテル；ホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、ベンゾエート、レブリニレートおよびカルボネートを含むエステルが挙げられる。
【００４１】
本発明において用いられる用語「ホスフェート保護基」は、T. W. Greene and P. G. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第三版, John Wiley & Sons, New York (1999)によって記載された、一般的に用いられている保護基を言及するものである。かかる保護基としては、メチル、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモエチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートが挙げられる。
【００４２】
本明細書に記載されたカルジオリピン分子および本発明の方法によって調製されたカルジオリピンは、リポソーム組成物などの脂質製剤において用いることができる。本発明のカルジオリピンを含む複合体、エマルジョン、およびその他の製剤も本発明の範疇である。本発明のそのような製剤は、あらゆる適切な方法によって調製することができる。本発明はリポソームまたはその他の脂質組成物を調製する方法を提供し、その方法は、本明細書に記載したようにしてカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を調製すること、およびかかるカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソームなどの脂質製剤に含めることを含む。本発明はまた、本発明のカルジオリピンおよび／またはカルジオリピン類似体を含むそのような脂質組成物を含む。
【００４３】
本発明のカルジオリピンに加えて、リポソーム組成物、複合体、エマルジョンなどはその他の脂質を含んでいてもよい。よって、例えば、組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物などの、１つ以上のホスファチジルコリンを含んでいてもよい。あるいは、もしくはさらに、組成物は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物などの１つ以上のホスファチジルグリセロールを含んでいてもよい。あるいは、もしくはさらに組成物はコレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物などの１つ以上のステロールを含んでいてもよい。好ましくは、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体に加えて、組成物はホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェロール（例えば、α−トコフェロール）を含む。
【００４４】
カルジオリピンおよび（任意に加えうる）その他の脂質に加えて、組成物は、その他の成分の中で、安定化剤、吸収促進剤、抗酸化剤、リン脂質、生物分解性ポリマーおよび医薬的に活性な剤を含んでいてもよい。ある実施態様では、本発明の組成物、特にリポソーム組成物は、細胞レセプターを認識するリガンドといった特定の物質に結合する、炭水化物もしくはタンパク質またはその他のリガンドなどの標的剤を１つ以上含んでいるのが好ましい。かかる剤（炭水化物、あるいは、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、細胞レセプターに対する抗体などレセプターリガンド及びそれらの混合物からなるタンパク質群から選ばれる１つ以上のタンパク質）の含有によって、リポソームを所定の組織または細胞タイプへ向かわせることが容易になりえる。
【００４５】
医薬的使用のため、組成物はまた１つ以上の活性剤を含んでいてもよい。１つの活性剤が含まれていてもよいし、活性剤の混合物（例えば２つ以上の活性剤）が組成物に含まれていてもよい。活性剤（または「薬剤」）は組成物中にどんな適した様式で存在してもよい。例えば、それらは組成物中のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成していてもよい。加えて、またはあるいは、組成物がリポソーム組成物である場合、１つ以上の活性剤がリポソーム内に取り込まれていてもよい。
【００４６】
本発明に適した活性剤としては、例えば、末梢神経、アドレナリンレセプター、コリンレセプター、骨格筋、循環系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、神経効果器接合部位、内分泌およびホルモン系、免疫系、生殖系、骨格系、消化器および排出系、ヒスタミン系ならびに中枢神経系に作用する剤が挙げられる。適した剤は、例えば、タンパク質、酵素、ホルモン、ヌクレオチド（センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む（例えば米国特許6,126,965参照)）、ポリヌクレオチド、核タンパク質、多糖類、糖タンパク質、リポタンパク質、ポリペプチドおよびステロイドから選ばれてもよい。活性剤は、鎮痛薬、麻酔薬、抗不整脈剤、抗生物質、抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗がん剤、抗凝血剤、抗うつ剤、抗糖尿病剤、抗てんかん剤、抗炎症コルチコステロイド、アルツハイマーまたはパーキンソン病の治療剤、抗潰瘍剤、抗原虫剤、抗不安剤、甲状腺剤、抗甲状腺薬、抗ウイルス薬、食欲抑制剤（anoretic）、ビスフォスフォネート、強心剤、心血管作動剤、コルチコステロイド、利尿薬、ドーパミン剤、胃腸剤、止血薬、高コレステロール剤、抗高血圧剤（例えばジヒドロピリジン）、抗うつおよびcox-2阻害剤、免疫抑制剤、抗痛風剤、抗マラリア剤、ステロイド、テルピノイド、トリテルピン、レチノイド；抗潰瘍Ｈ２レセプターアンタゴニスト、低血糖剤、保湿剤、化粧料、抗偏頭痛剤、抗ムスカリン剤、抗炎症剤（例えばリュウマチ、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病の治療剤）；または、多発性硬化症、眼科用の剤、ワクチン(例えば、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、コレラ毒Ｂサブユニット、インフルエンザウイルス、腸チフス、熱帯熱マラリア原虫、ジフテリア、破傷風、ＨＳＶ、結核、ＨＩＶ、ＳＡＲＳウイルス、ポルデテラ（pordetela）百日咳、はしか、おたふく風邪および風疹ワクチン（ＭＭＶ）、バクテリア毒素、ワクチンウイルス、アデノウイルス、カナリア、ポリオウイルス、カルメット・ゲラン菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌などに対する)、ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、催眠薬、腎臓保護剤、脂質調節剤、筋肉弛緩薬、神経安定薬、向神経剤、オピオイドアゴニストおよびアンタゴニスト、副交感神経興奮剤、プロテアーゼ阻害剤、プロスタグランジン、鎮静剤、性ホルモン（例えば、エストロゲン、アンドロゲン）、興奮剤、交感神経興奮剤、血管拡張薬およびキサンチン、並びにこれらの類の合成類似体であってもよい。治療剤は、シクロスポリンおよびアムホテリシンＢなどの腎毒性、またはアムホテリシンＢおよびパクリタキセルなどの心臓毒性であってもよい。典型的な抗がん剤としては、メルファラン、クロルメチン、エクストラムスチンホスフェート（extramustinephosphate）、ウラムスチン（uramustine）、イホスファミド、マンノムスチン（mannomustine）、トリフォスファミド、ストレプトゾトシン、ミトブロニトール、ミトキサントロン（公開された国際特許出願ＷＯ０２／３２４００号参照）、メトトレキサート、フルオロウラシル、シタラビン、テガフール、イドキシド（idoxide）、タキサン（例えば、タキソール、パクリタキセルなど、公開された国際特許出願ＷＯ００／０１３６６参照）、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、アムホテリシン、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ＢＣＮＵ、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビノレルビン（vinorelbine）（例えば公開された国際特許出願ＷＯ０３／０１８０１８号パンフレット参照）など)、カンプトテシンおよびそれらの誘導体（例えばＳＮ３８（公開された国際特許出願ＷＯ０２／０５８６２２号パンフレット参照）、イリノテカン（公開された国際特許出願ＷＯ０３／０３０８６４号パンフレット参照）など）、アントラサイクリン、抗体、サイトキシン（cytoxine）、ドキソルビシン、エトポシド（etopside）、サイトカイン、リボザイム、インターフェロン、オリゴヌクレオチドおよび前述の機能的誘導体が挙げられる。本方法にて送達されうる薬剤のさらなる例としては、プロクロルペラジン エディスレート（prochlorperzine edisylate）、硫酸鉄、アミノカプロン酸、メカミラミン塩酸塩、プロカインアミド塩酸塩、アンフェタミン硫酸塩、メタアンフェタミン塩酸塩、ベンズアンフェタミン塩酸塩、イソプロテレノール硫酸塩、フェンメトラジン塩酸塩、ベタネコール塩化物、メタコリン塩化物、ピロカルピン塩酸塩、アトロピン硫酸塩、スコポラミン臭化物、イソプロパミドヨウ化物、トリジヘキセチル塩化物、フェンフォルミン塩酸塩、メチルフェニデート塩酸塩、テオフェリンコリネート（theophylline cholinate）、セファレキシン塩酸塩、ジフェニドール、メクリジン塩酸塩、プロクロルペラジンマレイン酸塩、フェノキシベンザミン、チエチルペルジンマレイン酸塩、アニシンドン（anisindone）、ジフェナジオンエリトリチルテトラナイトレート、ジゴキシン、イソフルロフェート、アセタゾラミド、メタゾラミド、ベンドロフルメチアジド、クロロプロマイド（chloropromaide）、トラザミド、クロルマジノン酢酸塩、フェナグリコドール、アロプリノール、アスピリンアルミニウム、メトトレキサート、アセチルスルフィソキサゾール、エリスロマイシン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチコステロン酢酸塩、コルチゾン酢酸塩、デキサメタゾン、およびベタメタゾン、トリアムシノロン、メチルテストステロン、１７−Ｓ−エストラジオール、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル、プレドニゾロン、１７−α−ヒドロキシプロゲステロン酢酸塩、１９−ノルプロゲステロン、ノルゲストレル、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチエデロン（norethiederone）、プロゲステロン、ノルゲステロン、ノルエチノドレル、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、スリンダック、インドプロフェン、ニトログリセリン、イソソルビドジニトレート、プロプラノロール、チモロール、アテノロール、アルプレノロール、シメチジン、クロニジン、イミプラミン、レボドーパ、クロルプロマジン、メチルドーパ、ジヒドロキシフェニルアラニン、テオフィリン、グルコン酸カルシウム、ケトプロフェン、イブプロフェン、セファレキシン、エリスロマイシン、ハロペリドール、ゾメピラック、乳酸鉄、ビンカミン、ジアゼパム、フェノキシベンズアミン、ジルチアゼム、ミルリノン、マンドール、クアンベンズ、ヒドロクロロチアジド、ラニチジン、フルルビプロフェン、フェヌフェン（fenufen）、フルプロフェン、トルメチン、アルクロフェナック、メファナミック、フルフェナミック、ジフイナール（difuinal）、ニモジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ニカルジピン、フェロジピン、リドフラジン、チアパミル、ガロパミル、アムロジピン、ミオフラジン、リシノプリル、エナラプリル、エナラプリラートカプトプリル、ラミプリル、ファモチジン、ニザチジン、スクラルフェート、エチンチジン、テトラトロール、ミノキシジル、クロルジアセポキシド、ジアゼパム、アミトリプチリン、およびイミプラミンなどのそれらの誘導体が挙げられる。さらなる例はタンパク質およびペプチドであり、骨形成タンパク質、インスリン、コルヒチン、グルカゴン、甲状腺刺激ホルモン（thyroid stimulating hormone）、副甲状腺および脳下垂体ホルモン、消化ホルモン、カルシトニン、レニン、プロラクチン、コルチコトロフィン、甲状腺刺激ホルモン（thyrotropic hormone）、卵胞刺激ホルモン、絨毛性性腺刺激ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ＧＲＦ、ソマトスタチン、リプレシン、パンクレオチミン、黄体形成ホルモン、ＬＨＲＨ、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、ロイプロリド、インターフェロン（例えば、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα−２a、インターフェロンα−２ｂ、α−、β−、またはγ−インターフェロン）、インターロイキン、ヒト成長ホルモンならびにメチオニン（methione）ヒト成長ホルモンおよびdes-フェニルアラニンヒト成長ホルモンなどの誘導体、ウシ成長ホルモンおよびブタ成長ホルモン、プロスタグランジンなどの生殖阻害剤、生殖促進剤、インスリン様成長因子などの成長因子、凝固因子、膵臓ホルモン放出因子、これらの化合物の類似体および誘導体、並びにこれらの化合物の医薬的に許容される塩、あるいはその類似体または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。治療剤はリポソーム製剤中で有益に併用投与されうる薬または剤の混合物（例えば２つ以上の剤）であってもよい。
【００４７】
一般的に、リポソームは正味の中性、負または正荷電を有していてもよい。例えば、正のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、カルジオリピンおよびカルジオリピンの正味の負電荷を超えるのに十分なステアリルアミンを含有する溶液から形成されうる。負のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、および／または本明細書に記載された方法で調製されるカルジオリピン変異体から形成されうる。
【００４８】
本発明のリポソームは、個々の組成物およびそれらを製造する方法によって、多層ベシクルであっても、単層ベシクルであってもよい。リポソームは、約１ミクロン以下、または約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、もしくは約１００ｎｍ以下といった選ばれたサイズ範囲において、実施的に均一なサイズを有するように調製されてもよい。１つの有効なサイジング方法としては、リポソームの水性懸濁液を、一定の孔サイズを有する一連のポリカーボネート膜を介して押し出すことなどが挙げられ、この膜の孔サイズはその膜を介して押し出されることによって生産させる最も大きなサイズのリポソームにだいたい対応している。
【００４９】
リポソーム（またはその他の脂質）組成物は、どんな所望の形態であってもよい。例えば、医薬的に用いる場合、組成物は患者に投与する準備ができたものであってもよい。あるいは、組成物は乾燥または凍結乾燥された形態であってもよい。組成物が乾燥または凍結乾燥されている場合、組成物は好ましくは凍結防止剤も含む。適した凍結防止剤としては、例えば、トレハロース、マルトース、ラクトース、スクロース、グルコース、およびデキストランのような糖が挙げられ、性能の観点から最も好ましい糖はトレハロースおよびスクロースである。例えば、ストレプトマイシンおよびジヒドロストレプトマイシンといった、その他のより複雑な糖もまた用いることができる。
【００５０】
あらゆる適した方法が、リポソームを形成するために用いられうる。例えば、ホスファチジルコリン、上記した方法で調製されるカルジオリピン、コレステロールおよびα−トコフェノールといった、脂質親和性リポソーム形成成分が、適切な溶媒または溶媒の組み合わせ中に、溶解あるいは分散され、乾燥されてもよい。適した溶媒としては、医薬的に許容されない残渣を残さずに蒸発されうるような、ｔ−ブタノール、エタノール、メタノール、クロロホルム、またはアセトンなどの、あらゆる非極性あるいは微極性溶媒が挙げられる。乾燥は、凍結乾燥などのあらゆる適した手段によってなされうる。脱水は通常真空下でなされ、事前にリポソーム調製物を凍らせてもよいし、凍らせなくてもよい。親水性の成分は、水を含む極性溶媒に溶解されてもよい。
【００５１】
乾燥脂質親和性成分を親水性混合物と混合するとリポソームが形成されうる。極性溶液の乾燥脂質フィルムとの混合は、混合物を強力にホモジナイズするいかなる手段によるものであってもよい。渦動、磁気攪拌、および／または超音波によって均質化をえることができる。
【００５２】
リポソームに活性剤（または活性剤の混合物）が含まれている場合、本発明はリポソームに薬剤を保有させる方法を提供する。本方法によれば、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体は本明細書に記載されたようにして調製され、そしてカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および１つの薬物または複数の薬物（例えば、活性剤、活性剤の混合物）はリポソーム内に含まれる。例えば、活性剤は適した溶媒に溶解または分散されてもよく、また混合の前にリポソーム混合物に加えられてもよい。通常、親水性活性剤は極性溶媒に直接加えられ、また疎水性活性剤はその他の成分を溶解させるために用いられる非極性溶媒に加えられるが、これらは必須条件ではない。活性剤は３つ目の溶媒または溶媒混合物に溶解され、混合物をホモゲナイズする前に極性溶媒の脂質フィルムとの混合物に加えられてもよい。
【００５３】
リポソームは、スクロース、エピクロロヒドリン、スクロースの側鎖親水性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレン酸化物、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ酢酸塩、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレン Ｘ−ラウリルエーテル（式中、Ｘは９〜２０）、およびポリオキシエチレンソルビタンエステルなどの、生物分解可能なポリマーでコートされていてもよい。
【００５４】
抗酸化剤が、本発明の陽イオン性カルジオリピンを含むリポソーム組成物またはその他の脂質製剤に含まれていてもよい。適した抗酸化剤としては、アスコルビン酸、トコフェロール、およびデテロキサイム（deteroxime）メシレートなどの化合物が挙げられる。
【００５５】
吸収促進剤がリポソーム組成物またはその他の脂質製剤に含まれていてもよい。適した吸収促進剤としては、Ｎａ−サリチラート−ケノデオキシコレート、Ｎａデオキシコレート、ポリオキシエチレン ９−ラウリルエーテル、ケノデオキシコレート−デオキシコレートおよびポリオキシエチレン ９−ラウリルエーテル、モノオレイン、Ｎａタウロ−２４，２５−ジヒドロフシデート、Ｎａタウロデオキシコレート、Ｎａグリコケノデオキシコレート、オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸が挙げられる。ポリマー性吸収促進剤もまた含まれていてもよく、例としては、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレン１０−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１６−ラウリルエーテル、およびアゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）である。
【００５６】
本発明の脂質（例えばリポソーム）組成物は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。例えば、医薬的に適した賦形剤としては、固形、半固形、もしくは液状の希釈剤、充填剤、および全ての種類の製剤補助剤が挙げられる。本発明はまた投薬量単位の医薬調製物を含む。つまり、調製物が、例えばバイアル、シリンジ、カプセル、ピル、座薬およびアンプルなどそれぞれの形態におけるものであり、その中で活性剤のリポソーム製剤の含有量が１つまたは複数の各投与量に対応したものである。かかる投薬量単位は、例えば、各投与量の１、２、３または４回分、あるいは各投与量の１／２、１／３または１／４を含有していてもよい。好ましくは、各投与量は、１回の投与量として与えられる、通常、１日の用量の全部、半分、３分の１もしくは４分の１に対応する量の活性剤を含有する。
【００５７】
錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、顆粒、座薬、液剤、懸濁剤およびエマルジョン、ペースト剤、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、散剤およびスプレーが適切な医薬調製物でありうる。座薬は、リポソーム活性剤に加えて、適した水溶性または水不溶性賦形剤を含有していてもよい。適した賦形剤は、本発明のリポソーム活性剤が充分に安定して治療用に使用されるようなものであり、例えば、ポリエチレングリコール、特定の脂肪およびエステル、もしくはこれらの物質の混合物である。軟膏、ペースト剤、クリームおよびゲルもまた、その中でリポソーム活性剤が安定であるような適した賦形剤を含有できる。また、組成物は、注射に適した１つ以上の賦形剤（例えば、緩衝食塩水）を含めることによって、注射用（例えば、静脈、間質、腫瘍内）に製剤することもできる。
【００５８】
活性剤またはその医薬調製物は、静脈内に、皮下に、局所的に、経口で、非経口で、腹膜内に、および／または直腸に、公知または開発された方法で、腫瘍または治療の必要な部位に直接注入することによって、投与されうる。カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体ベースの製剤は、例えば、クリーム、皮膚軟膏、乾燥肌柔軟剤、保湿剤などとして、局所に投与されてもよい。
【００５９】
本発明は疾患を治療するための医薬を調製するための、組成物の使用を提供する。この場合、本発明はまたヒトまたは動物疾患を治療する方法を提供する本発明の方法によれば、本発明の組成物はその治療を必要とするヒトまたは動物患者に触れさせる（投与する）。組成物が１つ以上の活性剤を含む場合、本発明の方法は活性剤の患者への送達を促進する。
【００６０】
本方法は１つ以上の活性剤を投与するために用いられうる。活性剤は界面活性剤の存在下で安定であると一般的に考えられている。親水性活性剤が適しており、リポソーム二重層が拡散バリアを作って体中に活性剤がランダムに拡散するのを防ぐように、リポソームの内側に含まれうる。疎水性活性剤は、毒性を減らすという利点を有するだけでなく、リポソームの脂質二重層によく溶解する傾向があるため、本発明の方法における使用に特に適していると考えられる。
【００６１】
治療するのに適した疾患は、本明細書に記載されたように、活性剤の選択によってきまる。しかしながら、好ましい疾患は癌であり、その場合、組成物に取り込まれる活性剤の少なくとも１つは抗がん剤である。化学療法剤もまたそのような使用によく適している。化学療法剤を含有するリポソーム製剤は、化学療法剤を直接癌細胞へ送達するために、腫瘍組織に直接注射されてもよい。一部の例では、特に腫瘍の摘出後では、リポソーム製剤はその結果得られる空腔に直接埋め込んでもよく、あるいは残りの組織にコーティングとして適用してもよい。リポソーム製剤が手術後に投与される場合は、それらは血管系を通過する必要がないため、約１ミクロンより大きい直径を有するリポソームを使用することが可能である。
【００６２】
ある実施態様では、たとえ組成物がカルジオリピン以外の活性医薬剤を含んでいない場合でも、本方法を患者の疾患、障害または症状を治療するために使用してもよい。本発明は、かかる疾患、障害または症状に効果を示す、または治療する薬物を調製するための、カルジオリピンの使用を提供する。本発明はさらに、治療上有効な量のカルジオリピンを患者に投与することによって、患者内のかかる疾患、障害または症状、並びにかかる疾患、障害または症状の作用を治療する方法を提供する。いかなる特定の理論にも縛られることなく、カルジオリピンは有利な抗酸化作用を提供し、それにより多くの疾患、障害または症状の作用が軽減されると信じられる。本方法によって治療することのできる状態の例としては、例えば、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害（例えば、にきび、乾癬、湿疹など）が挙げられる。本方法はまた、老化の作用を抑えるために使用されうる。この使用において、カルジオリピンは本明細書に記載したようなリポソームまたは非リポソーム製剤（例えば、エマルジョン、クリームなど）として調製でき、またカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含むことができる。使用の際、組成物はあらゆる適した経路で投与されうる。例えば、組成物は皮膚、静脈、またはその他の所望の投与経路によって投与されうる。
【００６３】
さらに本発明は、活性剤（または活性剤の混合物）を細胞へ送達する方法を対象とする。本方法は、活性剤と、上記で開示した方法によって合成されるカルジオリピン変異体／類似体とを含むリポソームを調製することによって行われる。次いでリポソームは１つの細胞または複数の細胞へ送達され、それらの細胞は所望によりインビトロまたはインビボでありうる。インビボ投与は本明細書に記載したように、あるいは当業者に公知のその他の方法でなされうる。インビトロ使用の場合、活性剤の送達は、組成物（例えばリポソーム）を、例えば細胞培養培地に加えることによっておこなうことができる。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は本発明をさらに例示するものであるが、もちろん決して本発明の範疇を制限するものとして解釈されるべきではない。
【００６５】
実施例１．テトラミリストイルカルジオリピンの合成
１Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００６６】
【化９】
【００６７】
ＣＨ２Ｃｌ２(125 mL)中の１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール(10 g, 19.53 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(9.87 g, 29.29 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(65 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 29.29 mmol)溶液を、室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(20 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(1.18 g, 6.47 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(37.7 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 16.85 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペロキサイド(TBHP, 6.4 mL，デカン中5-6 M sol, 32.35 mmol)を加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(250 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、6.68 g(69%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００６８】
１Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラミリストイルカルジオリピン）
【００６９】
【化１０】
【００７０】
テトラヒドロフラン(40 mL)中の１Ａで得た保護されたカルジオリピン(2.5 g, 1.65 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(900 mg)で１０時間水素化した。セライト床で触媒をろ去し、４ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトラミリストイル(C14:O)カルジオリピン(1.75 g, 83%)を白色固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH4OH (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.50. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 3.06 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1240.2 (M-2NH4++H+), 1011.9 (M-2NH4+- RCOO-), 619.9 (M-2NH4+)2-.
【００７１】
実施例２．テトララウロイルカルジオリピンの合成
２Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００７２】
【化１１】
【００７３】
方法１：ＣＨ２Ｃｌ２(25 mL)中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(2.2 g, 4.82 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(1.95 g, 5.78 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(12.84 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 5.78 mmol)溶液を室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(10 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(352 mg, 1.92 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(12.84 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 5.78 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、３−クロロペロキシペル安息香酸(m-CPBA, 2.77 g, 9.64 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(150 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、1.68 g (62%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 64H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００７４】
方法２：４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(5.0 g, 10.96 mmol)およびテトラゾール(29.2 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 13.15 mmol)攪拌溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(4.54g, 13.15 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を100 mLの ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.68 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.8 g, 4.38 mmol)、ピリジン(4.43 mL, 54.77 mmol)およびEt3N(7.63 mL, 54.77 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(5.25 g, 16.42 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(150 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(CH2Cl2中８％アセトン)、3.8 g(62%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44.
【００７５】
２Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウロイルカルジオリピン）
【００７６】
【化１２】
【００７７】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の２Ａで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.07 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトララウロイル(C1２:O)カルジオリピン(1.0 g, 80%)を白色固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 64H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 2.94 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). 13C NMR δ (CDC13,125 MHz) 14.07, 22.67, 24.87, 24.93, 29.18, 29.22, 29.36, 29.37, 29.40, 29.57, 29.60, 29.66, 29.67, 29.69, 29.72, 31.91, 34.09, 34.28, 62.62, 63.57, 66.77, 69.47, 70.29, 173.25, 173.56. FTIR (ATR) 3207, 3035, 2956, 2918, 2850, 1737, 1467, 1378, 1206, 1092, 1067 cm-1. ESI-MS (negative), m/z 1150 (M- 2NH4++Na+), 1127.4 (M-2NH4+), 1128.4 (M-2NH4++H+), 928.4 (M-2NH4+-RCOO-), 563.7 (M-2NH4+)2-. Anal. Calculated for C57H116N2017P2: C, 58.84; H, 10.05; N, 2.41: P, 5.32.
Found: C, 57.75; H, 9.83; N, 2.34: P, 5.28.
【００７８】
実施例３．テトララウロイルカルジオリピンの合成
この方法においては、テトララウロイルカルジオリピンが２−シアノエチルホスホラミダイトによって合成される。
【００７９】
３Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジシアノエチルエステル
【００８０】
【化１３】
【００８１】
無水エーテル(20 mL)中の１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール(1.74 g, 3.79 mmol)およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(545 mg, 4.22 mmol)の混合物へ、アルゴン雰囲気下２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホラミダイト(1 g, 4.22 mmol)を加えた。混合物を室温で１時間攪拌し、分離したジイソプロピルアミンヒドロクロリドをろ過し、ろ液を真空で濃縮した。残渣をそのままリン酸化に用いた。
【００８２】
無水ＣＨ２Ｃ１２(30 mL)中の上記ホスホラミダイトおよび１Ｈ−テトラゾール(9.4 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 4.22 mmol)混合物に、ＣＨ２Ｃ１２(5 mL)中の２−ベンジルオキシ１，３−プロパンジオール(312 mg, 1.71 mmol)溶液を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌し、−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ(1.36 g, 4.73 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(200 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(1:4 アセトン:CH2Cl2)、1.48 g(70%)の無色のシロップを得た。
TLC (Si02) EtOAc/CH2Cl2 (1:3) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 64H), 1.53-1.66 (m, 8H), 2.26-2.36 (m, 8H), 2.64-2.75 (m, 4H), 3.83-3.88 (m, 1H), 4.06-4.36 (m, 16H), 4.67 (s, 2H), 5.19-5.28 (m, 2H), 7.28-7.38 (m, 5H).
【００８３】
３Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−ベンジルグリセロールジアンモニウム塩
【００８４】
【化１４】
【００８５】
１０ｍＬのアセトニトリル中の、３Ａで得た前駆体(1.48 g, 1.2 mmol)およびＥｔ３Ｎ(1.66 mL, 12 mmol)溶液を一晩攪拌し（ＴＬＣにより原料物質が残っていないことが示された）、蒸発乾燥した。残渣を、２ｍＬのＮＨ４ＯＨを添加してアンモニウム塩に変換し、Si02カラムで精製して(1% NH40H を含むCH2Cl2中15% MeOH)、ゆっくり固形化する無色のシロップを850 mg(60%)得た。
1H NMR δ (CDCl3,500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 64H), 1.53-1.63 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.66-3.76 (m, 1H), 3.82- 4.06 (m, 8H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.26-4.37 (m, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.14-5.26 (m, 2H), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.49 (bs, 8H).
【００８６】
３Ｃ．１，３−ビス［（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウロイルカルジオリピン）
【００８７】
【化１５】
【００８８】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の３Ｂで得た保護されたカルジオリピン(1.12 g, 0.89 mmol)溶液を５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(450 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてテトララウロイル(C1２:O)カルジオリピン(750 mg, 75%)を白色固体として得た。
TLC (SiO2) カラム CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.48.ここに記載した本方法で得られたテトララウロイルカルジオリピンは、すべての点において２Ｂのものと同一である。
【００８９】
実施例４．テトラデカノイルカルジオリピンの合成
４Ａ．１，２−ジデカノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成
【００９０】
【化１６】
【００９１】
ＣＨ２Ｃｌ２(30 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(2.0 g, 10.97 mmol)およびEt3N(6.89 mL, 49.36 mmol)の氷冷した溶液に、デカノイルクロリド(5.1 mL, 24.69 mmol)を１０分かけて滴下し、次いで４−（ジメチルアミノ）ピリジン(DMAP, 268 mg, 2.19 mmol)を滴下した。反応混合物を室温で１２時間攪拌し、CH2Cl2(200 mL)で希釈し、順に水(100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、4.5 g(83%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.54. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【００９２】
４Ｂ．１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロール
【００９３】
【化１７】
【００９４】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(40 mL)中の４Ａで得た保護されたジデカノイルグリセロール(4.68 g, 9.55 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたＤＤＧ(3.52g, 92%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【００９５】
４Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【００９６】
【化１８】
【００９７】
ＣＨ２Ｃｌ２(25 mL)中の、４Ｂで得た１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロール(3.52 g, 8.8 mmol)、ベンジルＮ，Ｎ−テトライソプロピルホスホラミダイト(3.26 g, 9.68 mmol)および１Ｈ−テトラゾール(21.51 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 9.68 mmol)溶液を、室温でアルゴン下３時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２(10 mL)中の２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(712 mg, 3.9 mmol)溶液、次いで１Ｈ−テトラゾール(21.51 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 9.68 mmol)を加え、３時間攪拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ(5.06 g, 17.6 mmol)を部分的に加えた。−４０℃で３０分攪拌した後、反応混合物を室温にまで加温し、ＣＨ２Ｃｌ２(200 mL)で希釈し、洗浄し（飽和Na2S03水溶液(2 x 50 mL),飽和NaHCO3水溶液(2 x 50 mL),食塩水(2 x 50 mL)）、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(2:3 EtOAc:ヘキサン)、3.21 g(64%)の保護されたカルジオリピンを無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/ EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 48H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【００９８】
４Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【００９９】
【化１９】
【０１００】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の４Ｃで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.16 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮してテトラデカノイル(C1０:O)カルジオリピン(1.0 g, 80%)を半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.42. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (br s, 48H), 1.52-1.66 (m, 8H), 2.26-2.34 (m, 8H), 3.62 (bs, 1H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1038 (M-2NH4++Na+), 1015 (M-2NH4+), 843.7 (M-2NH4+- RCOO-), 507.5 (M-2NH4+)2-.
【０１０１】
実施例５．テトラオクタノイルカルジオリピンの合成
５Ａ．１，２−ジオクタノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロール
【０１０２】
【化２０】
【０１０３】
無水ピリジン(40 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(4.0 g, 21.95 mmol)溶液に、オクタノイルクロリド(8.93 g, 54.87 mmol)を１０分かけて滴下し、次いでＤＭＡＰ(267 mg, 2.19 mmol)を滴下した。反応混合物を５５℃で４８時間攪拌し、EtOAc(300 mL)で希釈し、順に水(100 mL)、１Ｎ ＨＣｌ(2 x 100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、7.3 g(75%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.52. 1H NMR 8 (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【０１０４】
５Ｂ．１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロール
【０１０５】
【化２１】
【０１０６】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(30 mL)中の、５Ａで得た保護されたジオクタノイルグリセロール(6.8 g, 15.66 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(900 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたＤＯＧ(5.0g, 93%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【０１０７】
５Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１０８】
【化２２】
【０１０９】
５０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の５Ｂで得た１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロール(5.0 g, 14.53 mmol)およびテトラゾール(40.3 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 18.16 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(6.26g, 18.16 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を200 mLのEtOAcで希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.0 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１１０】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.660 g, 3.63 mmol)、ピリジン(10.6 mL, 131.13 mmol)およびEt3N(8.0 mL, 65.65 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(6.3 g, 19.69 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(250 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中10％アセトン)、2.72 g(64%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.44. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.52-1.62 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【０１１１】
５Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−ベンジルグリセロールジアンモニウム塩
【０１１２】
【化２３】
【０１１３】
２−ブタノン(15 mL)中の、５Ｃで得た保護されたカルジオリピン(2.5 g, 2.12 mmol)およびヨウ化ナトリウム(956 mg, 6.36 mmol)溶液を９０℃で３時間還流した。揮発物を蒸発させ、残渣をSi02カラムで精製して(１％アンモニウムを含むCH2Cl2中20%エタノール)、1.52 g(75%)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.53. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.66-3.76 (m, 1H), 3.82-4.06 (m, 8H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.26-4.37 (m, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.14-5.26 (m, 2H), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.49 (bs, 8H).
【０１１４】
５Ｅ．１，３−ビス［（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【０１１５】
【化２４】
【０１１６】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の、５Ｄで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.27 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮してＣ８カルジオリピン(950 mg, 80%)を半固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.43. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 32H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 925.7 (M-2NH4++Na+)-, 903.1 (M-2NH4+), 760.6 (M-2NH4+-RCOO-), 451.2 (M-2NH4+)2-.
【０１１７】
実施例６．テトラヘキサノイルカルジオリピン
６Ａ．１，２−ジヘキサノイル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロール
【０１１８】
【化２５】
【０１１９】
無水ピリジン(30 mL)中の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオール(2.6 g, 14.26 mmol)溶液に、ヘキサノイルクロリド(4.8 g, 35.67 mmol)を１０分かけて滴下し、次いでＤＭＡＰ(175 mg, 1.42 mmol)を滴下した。反応混合物を５５℃で４８時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ(200 mL)で希釈し、順に水(100 mL)、１Ｎ ＨＣｌ(2 x 100 mL)および食塩水(100 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中3% EtOAc)、4.1 g(76%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (9:1) Rf〜0.48. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 8H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.22-2.34 (m, 4H), 3.58 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 4.18 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 6.4 and 11.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 5.21-5.28 (m, 1H), 7.28-7.36 (m, 5H).
【０１２０】
６Ｂ．１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロール
【０１２１】
【化２６】
【０１２２】
EtOH:EtOAc:AcOH (9:1:0.1)(30 mL)中の、６Ａで得た保護されたジヘキサノイルグリセロール(3.1 g, 8.2 mmol)溶液を、４０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg, 10%)で３時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られたグリセロール(3.52g, 92%)を高真空で乾燥した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.34. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 8H), 1.52-1.66 (m, 4H), 2.03 (t, J= 6.2 Hz, 1H, D20 exchangeable), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 2H) 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H)), 4.22 (dd, J= 5.8 and 11.9 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.8 and 11.9 HZ, 1H), 5.08 (quintet, J= 5.1 Hz, 1H).
【０１２３】
６Ｃ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１２４】
【化２７】
【０１２５】
４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の、６Ｂで得た１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロール(3.5g, 13.19 mmol)およびテトラゾール(35.1 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 15.83 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(5.46g, 15.83 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を200 mLのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(7.0 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１２６】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.957 g, 5.25 mmol)、ピリジン(10.6 mL, 131.13 mmol)およびEt3N(8.0 mL, 65.65 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(6.3 g, 19.69 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(250 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中10％アセトン)、3.57 g(64%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.40. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.87 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.52-1.62 (m, 8H), 2.22-2.29 (m, 8H), 3.70-3.78 (m, 1H), 4.01-4.16 (m, 10H), 4.22-4.28 (m, 2H), 4.60 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.01-5.05 (m, 4H), 5.15-5.18 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 15H).
【０１２７】
６Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩
【０１２８】
【化２８】
【０１２９】
テトラヒドロフラン(25 mL)中の６Ｃで得た保護されたカルジオリピン(1.5 g, 1.41 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(600 mg)で１０時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、2 mLの30%アンモニア溶液で処理し、濃縮した。残渣をＣＨＣ１３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、濃縮しＣ６カルジオリピン(940 mg, 81%)を半固体として得た。
TLC (SiO2) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.36. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 16H), 1.56-1.64 (m, 8H), 2.22-2.34 (m, 8H), 3.82-3.98 (m, 9H), 4.12-4.18 (m, 2H), 4.35-4.42 (m, 2H), 5.14-5.24 (m, 2H), 7.41 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 813 (M-2NH4++Na+), 791 (M-2NH4++H+), 395 (M-2NH4+)2-.
【０１３０】
実施例７．テトラオレオイルカルジオリピン（不飽和）の合成
７Ａ．シス−５−レブリノイル−２−フェニル−１，３−ジオキサン
【０１３１】
【化２９】
【０１３２】
ＣＨ２Ｃｌ２(80 mL)中のシス−１，３−Ｏ−ベンジリデングリセロール(5.0 g, 27.74 mmol)溶液に、０℃で、ＤＣＣ(8.58 g, 41.61 mmol)、ＤＭＡＰ(3.38 g, 27.74)およびレブリン酸(4.0 g, 34.68 mmol)を順に加えた。混合物を室温で２４時間攪拌した。分離した尿素をろ過し、ろ液を濃縮して、８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶出剤としてフラッシュクロマトグラフィーで精製して生成物を白色固体(5.86 g, 76%)として得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (1:1) Rf〜0.51. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 2.19 (s, 3H), 2.58-2.89 (m, 4H), 4.18 (dd, J= 12.0, 1.5 Hz, 2H), 4.25 (dd, J= 12.0, 1.5 Hz, 2H), 4.71 (dd, J= 1.5, 1.5 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 7.24-7.53 (m, 5H).
【０１３３】
７Ｂ．２−レブリノイル−１，３−プロパンジオール
【０１３４】
【化３０】
【０１３５】
EtOH:EtOAc(1:1)(100 mL)中の、７Ａで得た保護されたグリセロール(5.8 g, 20.86 mmol)溶液を、５０ｐｓｉにて１０％Ｐｄ／Ｃ(800 mg, 10%)で８時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、濃縮した。得られた２−レブリノイルグリセロールを６％MeOH/CH2Cl2を溶出剤としてフラッシュクロマトグラフィーで精製して生成物を白色固体(2.82 g, 70%)として得た。
TLC (Si02) MeOH/CH2Cl2 (1:9) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDC13, 300 MHz) 2.19 (s, 3H), 2.58 (dd, J= 6.0, 6.0 Hz, 2H), 2.80 (dd, J= 6.0, 6.0 Hz, 2H),3.09 (bs, 2H), 3.72-3.87 (m, 4H), 4.90 (q, J= 5.1 Hz).
【０１３６】
７Ｃ．２−レブリノイル−１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１３７】
【化３１】
【０１３８】
２０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール(1.5 g, 2.41 mmol)およびテトラゾール(8 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 3.62 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(1.25g, 3.62 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(2.08 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１３９】
ＣＨ２Ｃｌ２(20 mL)中の、上記ホスファイト、２−レブリノイル−１，３−プロパンジオール(0.185 g, 0.96 mmol)、ピリジン(2 mL, 24.1 mmol)およびEt3N(1.2 mL, 12.05 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(1.15 g, 3.61 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(10 mL)で処理した。内容物をEtOAc(100 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ＣＨ２Ｃｌ２中5％アセトン)、1.09 g(66%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (1:2) Rf〜0.64. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 80H), 1.52-1.66 (m, 8H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.15 (s, 3H), 2.22-2.31 (m, 8H), 2.52-2.57 (m, 2H), 2.66-2.74 (m, 2H), 4.01-4.32 (m, 12H), 5.01-5.10 (m, 5H), 5.15-5.18 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.28-7.39 (m, 10H).
【０１４０】
７Ｄ．１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］−２−レブリノイルグリセロールジアンモニウム塩
【０１４１】
【化３２】
【０１４２】
２−ブタノン(8 mL)中の、７Ｃで得た保護されたカルジオリピン(0.525 g, 0.324 mmol)およびヨウ化ナトリウム(145 mg, 0.972 mmol)溶液を９０℃で３時間還流した。揮発物を蒸発させ、残渣をSi02カラムで精製して(１％アンモニウムを含むＣＨ２Ｃｌ２中10%メタノール)、240 mg(50%)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) CHC13/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.63. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 80H), 1.52-1.65 (m, 8H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.18 (s, 3H), 2.23-2.35 (m, 8H), 2.52-2.59 (m, 2H), 2.71-2.79 (m, 2H), 3.83-4.04 (m, 6H), 4.12-4.23 (m, 4H), 4.31-4.39 (m, 2H), 5.01-5.09 (m, 1H), 5.17-5.26 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.41-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1576.5 (M-2NH4++Na+)-, 1554 (M-2NH4+), 1272.2 (M-2NH4+-RCOO-), 776 (M-2NH4+)2-.
【０１４３】
７Ｅ．１，３−ビス［（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラオレオイルカルジオリピンの合成）
【０１４４】
【化３３】
【０１４５】
ピリジン：酢酸(3 mL, 4:1)中の、７Ｄで得たlev-保護されたカルジオリピン(140 mg, 0.088 mmol)溶液にヒドラジン（hydazine）(14 mg, 0.44 mmol)を加え、３０分攪拌した。揮発物をロータベイパー（rotavapor）中で除去し、残渣をSi02で精製して(１％アンモニアを含むＣＨ２Ｃｌ２中10%メタノール)、80 mg(61 %)の生成物を無色の半固体として得た。
TLC (Si02) (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.55. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.39 (m, 80H), 1.52-1.65 (m, 8H), 1.82 (bs, 1H), 1.96-2.07 (m, 16H), 2.23-2.35 (m, 8H), 3.83-3.94 (m, 7H), 4.12-4.23 (m, 4H), 4.33-4.39 (m, 2H), 5.17-5.23 (m, 2H), 5.28-5.39 (m, 8H), 7.41-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1478 (M-2NH4++Na+)-, 1456 (M-2NH4+), 1174.2 (M-2NH4+-RCOO-), 727.5 (M-2NH4+)2-.
【０１４６】
カルジオリピンエーテル類似体
実施例８．テトララウリルカルジオリピンの合成
８Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１４７】
【化３４】
【０１４８】
４０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロール(3.0 g, 7.00 mmol)およびテトラゾール(19.5 mL、アセトニトリル中0.45 M sol, 8.76 mmol)溶液に、ジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト(3.02g, 8.76 mmol)を加え、室温で２時間攪拌した。内容物を100 mLのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで５％ＮａＨＣＯ３水溶液（2 x 50 mL）、食塩水（2 x 50 mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮し、油状残渣(4.5 g)をデシケーター中で８時間乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【０１４９】
ＣＨ２Ｃｌ２(40 mL)中の、上記ホスファイト、２−ベンジルオキシ−１，３−プロパンジオール(0.48 g, 2.67 mmol)、ピリジン(5.43 mL, 66.8 mmol)およびEt3N(4.63 mL, 33.4 mmol)溶液を−４０℃に冷却して、同時にピリジニウムトリブロミド(3.25 g, 10.02 mmol)を加えた。混合物を同温で１時間攪拌し、２時間かけて徐々に室温にして、水(30 mL)で処理した。内容物をEtOAc(150 mL)で希釈して、有機相を順に5% NaHCO3水溶液(2 x 50 mL)、水(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。残渣をSi02カラムで精製して(ヘキサン中３０％酢酸エチル)、2.34 g(67%)の生成物を無色のシロップとして得た。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0. 47. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 72H), 1.47-1.56 (m, 8H), 3.35-3.58 (m, 14H), 3.72-3.78 (m, 1H), 3.95-4.18 (m, 8H), 4.59-4.61 (m, 2H), 5.02-5.07 (m, 4H), 7.26-7.34 (m, 15H).
【０１５０】
８Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジラウリル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトララウリルカルジオリピン）
【０１５１】
【化３５】
【０１５２】
テトラヒドロフラン(20 mL)中の、８Ａで得た保護されたカルジオリピン(650 mg, 0.48 mmol)溶液を、５０ｐｓｉで１０％Ｐｄ／Ｃ(200 mg)で６時間水素化した。触媒をセライト床でろ去し、２ｍＬの３０％アンモニア溶液で処理し、濃縮し、残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、０．２５μフィルターでろ過し、アセトンで沈殿させてＣ１２カルジオリピン(400 mg, 75%)を白色半固体として得た。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 72H), 1.52-1.66 (m, 8H), 3.39-3.48 (m, 9H), 3.51-3.61 (m, 6H), 3.80-3.96 (m, 8H), 7.31-7.59 (bs, 8H). ESI-MS (negative), m/z 1094.1 (M-2NH4++Na+), 1072.0 (M-2NH4++H+), 535.5 (M-2NH4+)2-.
【０１５３】
実施例９．テトラヘキシルカルジオリピンの合成
９Ａ．２−ベンジル−１，３−ビス［（１，２−ジヘキシル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジベンジルエステル
【０１５４】
【化３６】
【０１５５】
標題化合物を実施例８Ａで記載した方法によって調製した。
TLC (Si02) ヘキサン/EtOAc (3:2) Rf〜0.39. 1H NMR δ (CDCl3, 300 MHz) 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 12H), 1.22-1.37 (m, 24H), 1.47-1.58 (m, 8H), 3.34-3.58 (m, 14H), 3.72-3.78 (m, 1H), 3.94-4.18 (m, 8H), 4.59-4.61 (m, 2H), 5.02-5.08 (m, 4H), 7.26-7.34 (m, 15H).
【０１５６】
９Ｂ．１，３−ビス［（１，２−ジヘキシル−ｓｎ−グリセロ−３）−ホスフォリル］グリセロールジアンモニウム塩（テトラへキシルカルジオリピン）
【０１５７】
【化３７】
【０１５８】
標題化合物を実施例８Ｂで記載した方法によって調製した。
TLC (Si02) CHCl3/MeOH/NH40H (6.5:2.5:0.5) Rf〜0.31. 1H NMR δ (CDC13, 500 MHz) 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 12H), 1.22-1.34 (m, 24H), 1.50-1.61 (m, 8H), 1.88 (bs, 1H), 3.39-3.48 (m, 9H), 3.51-3.61 (m, 6H), 3.80-3.96 (m, 8H), 7.31-7.69 (bs, 8H).
【０１５９】
実施例１０．
本実施例は、本発明によるカルジオリピン含有リポソーム組成物の調製を例示する。小さな単層ベシクルを、本明細書に記載した方法によって生成した１９．１μモルのカルジオリピン、９６．２μモルのホスファチジルコリンおよび６４．６μモルのコレステロールを混合することによって形成する。完全に攪拌した後、ロータリーエバポレーターを用いて、５０ｍＬ丸底フラスコ中で混合物を蒸発乾燥する。得られた乾燥脂質フィルムを１０ｍＬ無菌の発熱物質を含まない水に再懸濁する。３０分膨潤させた後、得られた懸濁液を固定温度浴中、２５℃で１５分超音波処理する。次いでリポソーム調製物をトレハロースとともに凍結乾燥する。
【０１６０】
本明細書中で引用された刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照により、一つ一つ具体的に援用されることが示され、本明細書にその参考文献の全体が記述されているのと同程度まで、参照によって本明細書中に援用されるものとする。
【０１６１】
本明細書に他に記述がないか又は文脈に明らかに矛盾していない限り、本発明を表す文脈における用語「a」、「an」、「the」および類似表現の使用は（特に請求の範囲中の文脈において）、単数および複数の両方を包含していると解釈されるものとする。他に注釈がなければ、用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、及び「含有する(containing)」は制限のない用語（つまり、「含むがそれに制限されない」という意味）として解釈されるものとする。本明細書における値の範囲の言及は、本明細書に他に記述がない限り、範囲内に含まれるそれぞれ個々の値を個別に言及する簡略な方法として働くことを単に意図されたもので、それぞれ個々の値は個別に本明細書中に記述されたものの如く本明細書中に包含される。本明細書中他に記述がないか、又は文脈に明らかに矛盾していない限り、本明細書中に記載した全ての方法はどんな適当な順序でも行われうる。本明細書中に出されたいずれのそして全ての実施例、又は例示的な言葉（例えば「〜のような（such as）」）の使用は、単に発明をより明らかにするよう意図したものであり、他に主張がない限り、本発明の範囲に制限をもたらすようなものではない。明細書中のどの言葉も、未請求の要素を本発明の実施に必須であると示唆していると解釈されるべきではない。
【０１６２】
本発明の好ましい実施態様を本明細書に記載し、それには本発明者らが知る本発明を実施するための最良の態様が含まれている。それらの好ましい実施態様の改変は、前述の説明を読むことによって当業者に明らかになるだろう。本発明者らは当業者がそのような改変を適切に使用することを予期し、さらに本発明がここに具体的に記載した以外の方法で実施されることを意図している。したがって本発明は、適用法で許可されている通り、ここに添付する特許請求の範囲において言及した主題の全ての変更や等価物を含む。さらには、本明細書中に他に記述がないか、又は文脈に明らかに矛盾していない限り、それらの全ての可能な改変において、上述の要素のいかなる組み合わせも、本発明によって包含されている。
【０１６３】
（参考文献）
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【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１はカルジオリピンの一般構造を表す。
【図２】図２はカルジオリピンを合成する１つのスキームを表す。
【図３】図３はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図４】図４はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図５】図５はカルジオリピンを合成する別のスキームを表す。
【図６】図６はカルジオリピンエーテル類似体を合成する別のスキームを表す。
【図７】図７はカルジオリピンエーテル類似体を合成する別のスキームを表す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミド（phosphoramide）試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
Ｒ１および／またはＲ２の少なくとも１つが、４〜１４の炭素を有する飽和または不飽和アルキル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンが、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンが、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンが、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンが、１４〜２４の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
カルジオリピンが飽和および／または不飽和である、請求項１〜１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の方法によって調製される、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体。
【請求項１５】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１７】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１８】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法で調製されるリポソーム組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれかに記載の方法によって調製されるカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む脂質組成物。
【請求項２１】
リポソームである、請求項２０の組成物。
【請求項２２】
単層ベシクル、多層ベシクルまたはそれらの混合物を含む、請求項１９または２１に記載の組成物。
【請求項２３】
リポソームが約１ミクロン以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２４】
リポソームが約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２５】
リポソームが約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２６】
リポソームが約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２７】
リポソーム以外のものである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１９〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１９〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１９〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１９〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
１つ以上の標的剤を含む、請求項１９〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
標的剤がタンパク質である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、およびそれらの混合物からなるタンパク質である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
凍結された形態におけるものである、請求項１９〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
さらに凍結防止剤を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
さらにリガンドを含む、請求項１９〜３６のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項３７に記載のリポソーム組成物。
【請求項３９】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１９〜３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
さらに活性剤を含む、請求項１８〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４１】
さらに活性剤の混合物を含む、請求項１９〜４０のいずれかに記載の組成物。
【請求項４２】
混合物が２つ以上の活性剤を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項１９〜４２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４４】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項１９〜４３のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
疾患の治療のための薬物を調製するための、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４６】
疾患が癌である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項４８】
細胞がインビトロのものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
細胞がインビボのものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
ヒトまたは動物疾患を治療するための方法であって、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を治療の必要のあるヒトまたは動物に触れさせて、活性剤をヒトまたは動物患者に送達することを含む方法。
【請求項５１】
疾患が癌であり、活性剤の少なくとも１つが抗がん剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
老化に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５３】
哺乳類の疾患に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５４】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓障害、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
カルジオリピンがリポソーム組成物の形態である、請求項５２〜５４のいずれかに記載の使用。
【請求項５６】
カルジオリピンがリポソーム組成物以外の形態である、請求項５２〜５５のいずれかに記載の使用。
【請求項５７】
患者における老化の影響を治療する方法であって、患者に治療上有効な量のカルジオリピンを投与し、患者において老化の作用を抑えることを含む方法。
【請求項５８】
哺乳類の疾患を治療する方法であって、治療の必要な患者に該疾患を治療するのに十分なある量のカルジオリピンを投与することを含む方法。
【請求項５９】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
組成物がカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含む、請求項５７〜５９のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
組成物が皮膚に投与される、請求項５７〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
組成物が静脈内に投与される、請求項５７〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
組成物がリポソーム組成物以外のものである、請求項５７〜６２のいずれかに記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
Ｒ１および／またはＲ２の少なくとも１つが、４〜１４の炭素を有する飽和または不飽和アルキル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンが、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンが、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンが、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンが、１４〜２４の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
カルジオリピンが飽和および／または不飽和である、請求項１〜１２に記載の方法。
【請求項１４】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１５】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１７】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１４〜１７のいずれかに記載の方法で調製されるリポソーム組成物。
【請求項１９】
単層ベシクル、多層ベシクルまたはそれらの混合物を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
リポソームが約１ミクロン以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２１】
リポソームが約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２２】
リポソームが約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２３】
リポソームが約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２４】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１８〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１８〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１８〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１８〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
さらに１つ以上の標的剤を含む、請求項１８〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
標的剤がタンパク質である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、およびそれらの混合物からなるタンパク質である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
凍結された形態におけるものである、請求項１８〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
さらに凍結防止剤を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
さらにリガンドを含む、請求項１８〜３２のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項３３に記載のリポソーム組成物。
【請求項３５】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１８〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
さらに活性剤を含む、請求項１８〜３５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３７】
さらに活性剤の混合物を含む、請求項１８〜３６のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
混合物が２つ以上の活性剤を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項１８〜３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項１８〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４１】
疾患の治療のための薬物を調製するための、請求項３６〜４０のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４２】
疾患が癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項１４〜１７のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項４４】
細胞がインビトロのものである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
細胞がインビボのものである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
ヒトまたは動物疾患を治療するための方法であって、請求項１４〜１７のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を治療の必要のあるヒトまたは動物に触れさせて、活性剤をヒトまたは動物患者に送達することを含む方法。
【請求項４７】
疾患が癌であり、活性剤の少なくとも１つが抗がん剤である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
老化に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項４９】
哺乳類の疾患に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５０】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
カルジオリピンがリポソーム組成物の形態である、請求項４８〜５０のいずれかに記載の使用。
【請求項５２】
カルジオリピンがリポソーム組成物以外の形態である、請求項４８〜５１のいずれかに記載の使用。
【請求項５３】
患者における老化の作用を治療する方法であって、患者に治療上有効な量のカルジオリピンを投与し、患者において老化の作用を抑えることを含む方法。
【請求項５４】
哺乳類の疾患を治療する方法であって、治療の必要な患者に該疾患を治療するのに十分なある量のカルジオリピンを投与することを含む方法。
【請求項５５】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
組成物がカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含む、請求項５３〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
組成物が皮膚に投与される、請求項５３〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
組成物が静脈内に投与される、請求項５３〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
組成物がリポソーム組成物以外のものである、請求項５３〜５８のいずれかに記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ホスホラミダイト試薬の少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ホスホラミダイト試薬の少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
カルジオリピンまたはその類似体が、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンまたはその類似体が、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンまたはその類似体が、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンまたはその類似体が、１４〜２４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンまたはその類似体が飽和および／または不飽和である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１４】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１５】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の方法で調製される組成物。
【請求項１８】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１７または１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１７、１９または２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
さらに１つ以上の標的剤を含む、請求項１７〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
さらに凍結防止剤を含む、請求項１７〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
さらにリガンドを含む、請求項１７〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
凍結された形態におけるものである、請求項１７〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１７〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
さらに１つ以上の活性剤を含む、請求項１７〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法で組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項３２】
細胞がインビトロのものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１７−３０のいずれかに記載のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む、老化に効く治療剤。
【請求項３４】
請求項１７−３０のいずれかに記載のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む、哺乳類の疾患に効く治療剤。
【請求項３５】
疾患が、加齢に関連した疾患、癌、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項３４に記載の治療剤。
【請求項３６】
カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体がリポソーム組成物の形態である、請求項３３〜３５のいずれかに記載の治療剤。
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミド（phosphoramide）試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
Ｒ１および／またはＲ２の少なくとも１つが、４〜１４の炭素を有する飽和または不飽和アルキル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンが、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンが、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンが、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンが、１４〜２４の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
カルジオリピンが飽和および／または不飽和である、請求項１〜１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の方法によって調製される、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体。
【請求項１５】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１７】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１８】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法で調製されるリポソーム組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれかに記載の方法によって調製されるカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む脂質組成物。
【請求項２１】
リポソームである、請求項２０の組成物。
【請求項２２】
単層ベシクル、多層ベシクルまたはそれらの混合物を含む、請求項１９または２１に記載の組成物。
【請求項２３】
リポソームが約１ミクロン以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２４】
リポソームが約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２５】
リポソームが約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２６】
リポソームが約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１９または２１に記載のリポソーム組成物。
【請求項２７】
リポソーム以外のものである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１９〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１９〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１９〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１９〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
１つ以上の標的剤を含む、請求項１９〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
標的剤がタンパク質である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、およびそれらの混合物からなるタンパク質である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
凍結された形態におけるものである、請求項１９〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
さらに凍結防止剤を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
さらにリガンドを含む、請求項１９〜３６のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項３７に記載のリポソーム組成物。
【請求項３９】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１９〜３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
さらに活性剤を含む、請求項１８〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４１】
さらに活性剤の混合物を含む、請求項１９〜４０のいずれかに記載の組成物。
【請求項４２】
混合物が２つ以上の活性剤を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項１９〜４２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４４】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項１９〜４３のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
疾患の治療のための薬物を調製するための、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４６】
疾患が癌である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項４８】
細胞がインビトロのものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
細胞がインビボのものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
ヒトまたは動物疾患を治療するための方法であって、請求項４０〜４４のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を治療の必要のあるヒトまたは動物に触れさせて、活性剤をヒトまたは動物患者に送達することを含む方法。
【請求項５１】
疾患が癌であり、活性剤の少なくとも１つが抗がん剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
老化に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５３】
哺乳類の疾患に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５４】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓障害、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
カルジオリピンがリポソーム組成物の形態である、請求項５２〜５４のいずれかに記載の使用。
【請求項５６】
カルジオリピンがリポソーム組成物以外の形態である、請求項５２〜５５のいずれかに記載の使用。
【請求項５７】
患者における老化の影響を治療する方法であって、患者に治療上有効な量のカルジオリピンを投与し、患者において老化の作用を抑えることを含む方法。
【請求項５８】
哺乳類の疾患を治療する方法であって、治療の必要な患者に該疾患を治療するのに十分なある量のカルジオリピンを投与することを含む方法。
【請求項５９】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
組成物がカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含む、請求項５７〜５９のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
組成物が皮膚に投与される、請求項５７〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
組成物が静脈内に投与される、請求項５７〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
組成物がリポソーム組成物以外のものである、請求項５７〜６２のいずれかに記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
結合ホスホラミダイトの少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
Ｒ１および／またはＲ２の少なくとも１つが、４〜１４の炭素を有する飽和または不飽和アルキル基である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンが、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンが、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンが、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンが、１４〜２４の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
カルジオリピンが飽和および／または不飽和である、請求項１〜１２に記載の方法。
【請求項１４】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１５】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１３に記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１７】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１４〜１７のいずれかに記載の方法で調製されるリポソーム組成物。
【請求項１９】
単層ベシクル、多層ベシクルまたはそれらの混合物を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
リポソームが約１ミクロン以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２１】
リポソームが約５００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２２】
リポソームが約２００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２３】
リポソームが約１００ｎｍ以下の直径を有する、請求項１８または１９に記載のリポソーム組成物。
【請求項２４】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１８〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１８〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１８〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１８〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
さらに１つ以上の標的剤を含む、請求項１８〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
標的剤がタンパク質である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
タンパク質が、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、レセプターリガンド、およびそれらの混合物からなるタンパク質である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
凍結された形態におけるものである、請求項１８〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
さらに凍結防止剤を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
さらにリガンドを含む、請求項１８〜３２のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項３３に記載のリポソーム組成物。
【請求項３５】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１８〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
さらに活性剤を含む、請求項１８〜３５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３７】
さらに活性剤の混合物を含む、請求項１８〜３６のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
混合物が２つ以上の活性剤を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項１８〜３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項１８〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４１】
疾患の治療のための薬物を調製するための、請求項３６〜４０のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項４２】
疾患が癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項１４〜１７のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項４４】
細胞がインビトロのものである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
細胞がインビボのものである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
ヒトまたは動物疾患を治療するための方法であって、請求項１４〜１７のいずれかに記載の組成物を調製すること、および組成物を治療の必要のあるヒトまたは動物に触れさせて、活性剤をヒトまたは動物患者に送達することを含む方法。
【請求項４７】
疾患が癌であり、活性剤の少なくとも１つが抗がん剤である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
老化に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項４９】
哺乳類の疾患に効く薬物を調製するためのカルジオリピンの使用。
【請求項５０】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
カルジオリピンがリポソーム組成物の形態である、請求項４８〜５０のいずれかに記載の使用。
【請求項５２】
カルジオリピンがリポソーム組成物以外の形態である、請求項４８〜５１のいずれかに記載の使用。
【請求項５３】
患者における老化の作用を治療する方法であって、患者に治療上有効な量のカルジオリピンを投与し、患者において老化の作用を抑えることを含む方法。
【請求項５４】
哺乳類の疾患を治療する方法であって、治療の必要な患者に該疾患を治療するのに十分なある量のカルジオリピンを投与することを含む方法。
【請求項５５】
疾患が、加齢に関連した疾患、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
組成物がカルジオリピンに加えて、１つ以上の医薬的に許容される担体を含む、請求項５３〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
組成物が皮膚に投与される、請求項５３〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
組成物が静脈内に投与される、請求項５３〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
組成物がリポソーム組成物以外のものである、請求項５３〜５８のいずれかに記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩを有するカルジオリピン類似体：
【化１】
【化２】
【化３】
を調製するための方法であって、式ＶＩＩＩ：
【化４】
のアルコールを、１つ以上のホスホラミダイト試薬および２−Ｏ−保護されたグリセロールまたは２−Ｏ−置換されたグリセロールと、酸触媒の存在下で反応させることを含む方法（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶＩＩＩ中、
Ｙ１およびＹ２は同一または異なって−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｈ、Ｃ２〜Ｃ３４飽和または不飽和アルキル基であり；
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎおよびｎ＝０〜１５であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ぺプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物、複素環化合物、ヌクレオシド、またはポリヌクレオチドであり；
Ｒ５は、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルキルオキシ、ポリアルキルオキシ、ペプチド、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、炭水化物を含むリンカーであり；
Ｘは水素、非毒性陽イオンである）。
【請求項２】
酸触媒が、４，５−ジクロロイミダゾール、１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３，５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウムトリフレート、およびＮ−メチルイミダゾリウム過塩素酸塩、４，５−ジシアノイミダゾール、５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール、および５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールからなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ホスホラミダイト試薬の少なくとも１つが式ＩＶ：
【化５】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ホスホラミダイト試薬の少なくとも１つが式Ｖ：
【化６】
である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩのカルジオリピンまたはその類似体を調製する方法であって、２−Ｏ−保護されたグリセロールを１つ以上のリン酸トリエステルと、ピリジニウムトリブロミドの存在下で反応させることを含む方法。
【請求項６】
１つ以上のリン酸トリエステルが、式ＶＩＩＩのアルコールを一般式ＶＩＩ：
【化７】
のホスホラミダイトと反応させることによって生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＶ、ＶまたはＶＩＩにおけるＸが、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルホスフェート；２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む２−置換されたエチルホスフェート；２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモメチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含むハロエチルホスフェート；４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチルを含むベンジルホスフェートおよびアミダートを含むホスフェート保護基である、請求項３、４または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
カルジオリピンまたはその類似体が、２〜１４の炭素を有する短鎖脂肪酸を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
カルジオリピンまたはその類似体が、４〜１２の炭素を有する脂肪酸を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
カルジオリピンまたはその類似体が、１４〜３４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
カルジオリピンまたはその類似体が、１４〜２４の炭素を有する長鎖脂肪酸を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
カルジオリピンまたはその類似体が飽和および／または不飽和である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
リポソームを調製する方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、およびカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１４】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１５】
リポソームに薬剤を保有させる方法であって、カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって調製すること、ならびにカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体および薬剤混合物をリポソーム中に含めることを含む方法。
【請求項１６】
混合物が２つ以上の薬剤を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の方法で調製される組成物。
【請求項１８】
さらにホスファチジルコリン、ステロールおよびトコフェノールを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水添大豆ホスファチジルコリン、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるホスファチジルグリセロールをさらに含む、請求項１７または１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
コレステロール、コレステロールの誘導体、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コレステロールヘミスクシナート、コレステロール硫酸、およびそれらの混合物からなる群より選ばれるステロールをさらに含む、請求項１７、１９または２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
さらに１つ以上の標的剤を含む、請求項１７〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
さらに凍結防止剤を含む、請求項１７〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
さらにリガンドを含む、請求項１７〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
リガンドが抗体または細胞レセプターのためのリガンドである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
凍結された形態におけるものである、請求項１７〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項１７〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
さらに１つ以上の活性剤を含む、請求項１７〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
活性剤の少なくとも１つがカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体と複合体を形成する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
活性剤の少なくとも１つがリポソーム内に取り込まれている、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
活性剤または活性剤の混合物を細胞へ送達する方法であって、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法で組成物を調製すること、および組成物を細胞に触れさせることを含む方法。
【請求項３２】
細胞がインビトロのものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１７−３０のいずれかに記載のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む、老化に効く治療剤。
【請求項３４】
請求項１７−３０のいずれかに記載のカルジオリピンまたはカルジオリピン類似体を含む、哺乳類の疾患に効く治療剤。
【請求項３５】
疾患が、加齢に関連した疾患、癌、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心臓疾患、虚血、および皮膚障害からなる群より選ばれる、請求項３４に記載の治療剤。
【請求項３６】
カルジオリピンまたはカルジオリピン類似体がリポソーム組成物の形態である、請求項３３〜３５のいずれかに記載の治療剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２００６−５１０７３３（Ｐ２００６−５１０７３３Ａ）
【公表日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５０１８７３（Ｐ２００５−５０１８７３）
【出願日】平成１５年９月５日（２００３．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２７８０６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３９８１７
【国際公開日】平成１６年５月１３日（２００４．５．１３）
【出願人】（５０３１４００７８）ネオファーム、インコーポレイティッド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年９月５日（２００３．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２７８０６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３９８１７
【国際公開日】平成１６年５月１３日（２００４．５．１３）
【出願人】（５０３１４００７８）ネオファーム、インコーポレイティッド (6)
【Ｆターム（参考）】
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