キネシン阻害化合物の塩及び多形体
本発明は、キネシン阻害化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル（ben2lyl）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩、多形体及び水和物、このような塩、多形体及び水和物の製造方法並びにこれらの塩、多形体及び水和物（１）のうち少なくとも１種を含む液体製剤に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キネシン阻害化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル（benzlyl）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩及び多形体に関する。
【背景技術】
【０００２】
キネシンは、微小管に沿って移動する際にアデノシン三リン酸を加水分解し、機械力を発生するモータータンパク質である。これらのタンパク質は、約３５０個のアミノ酸残基を有するモータードメインを含むことを特徴とする。いくつかのキネシンモータードメインの結晶構造が解明されている。
【０００３】
現在、約１００種のキネシン関連タンパク質（ＫＲＰ）が確認されている。キネシンは、細胞小器官及び小胞の輸送並びに小胞体の維持を含む種々の細胞生物学的プロセスに関与する。いくつかのＫＲＰは、紡錘体の微小管と又は染色体と直接的に相互作用し、細胞周期の有糸分裂期において極めて重要な役割を果たすと思われる。これらの有糸分裂ＫＲＰは、癌治療薬の開発にとって特に重要である。
【０００４】
キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）（Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１、又はＫＩＦ１１としても知られている）は、紡錘体に局在し、双極性紡錘体の形成及び／又は機能に必要であることが知られているいくつかのキネシン様モータータンパク質の１つである。
【０００５】
１９９５年、ＫＳＰのＣ末端に対する抗体を用いるＫＳＰの枯渇が、Ｈｅｌａ細胞の有糸分裂を、モノアストラル（monoastral）微小管配列を有する状態で停止させることが示された（Ｂｌａｎｇｙら、Ｃｅｌｌ ８３、１１５９〜１１６９頁、１９９５年）。ＫＳＰの相同体と考えられるｂｉｍＣ及びｃｕｔ７遺伝子の変異は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ（Ｅｎｏｓ，Ａ．Ｐ．及びＮ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｃｅｌｌ ６０、１０１９〜１０２７頁、１９９０年）及びＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ（Ｈａｇａｎ，Ｉ．及びＭ．Ｙａｎａｇｉｄａ、Ｎａｔｕｒｅ ３４７、５６３〜５６６頁、１９９０年）において中心体分離の失敗を引き起こす。タンパク質レベルでＫＳＰ発現を低下させるＡＴＲＡ（全トランス−レチノイン酸）、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いるＫＳＰの枯渇による細胞処理により、ＤＡＮ−Ｇ膵癌細胞が著しく増殖阻害されることが明らかとなり、ＫＳＰが全トランス−レチノイン酸の抗増殖作用に関与する可能性があることが示された（Ｋａｉｓｅｒ，Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４、１８９２５〜１８９３１頁、１９９９年）。興味深いことに、Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓのＡｕｒｏｒａ関連タンパク質キナーゼｐＥｇ２は、ＸＩＥｇ５と会合し、これをリン酸化することが示された（Ｇｉｅｔ，Ｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４、１５００５〜１５０１３頁、１９９９年）。Ａｕｒｏｒａ関連キナーゼの潜在的基質は、制癌剤の開発にとって特に重要である。例えば、Ａｕｒｏｒａ １及び２キナーゼは、タンパク質及びＲＮＡレベルで過剰発現され、遺伝子は結腸癌（colon cancer）患者において増幅される。
【０００６】
ＫＳＰに対する最初の細胞透過性小分子阻害剤「モノアストラル（monoastral）」は、タキサン及びビンカアルカロイドなどの従来の化学療法剤がなすように、微小管重合に影響を与えずに、単極性紡錘体の状態で細胞を停止させることが示された（Ｍａｙｅｒ，Ｔ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９７１〜９７４頁、１９９９年）。モナストロール（monastrol）は、表現型に基づくスクリーニングにおいて阻害剤として同定され、この化合物は抗癌剤の開発のリード化合物となり得ることが示唆された。この阻害は、アデノシン三リン酸のＫＳＰとの相互作用に関して競合的でないことが確認され、急速な可逆性を示すことが判明した（ＤｅＢｏｎｉｓ，Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４２：３３８〜３４９頁、２００３年、Ｋａｐｏｏｒ，Ｔ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５０：９７５〜９８８頁、２０００年）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
化学療法剤の改善の重要性に鑑みて、ＫＳＰ及びＫＳＰ関連タンパク質の効果的なインビボ阻害剤であるＫＳＰ阻害剤が必要とされている。ＫＳＰのいくつかの阻害剤が以前に報告されている。例えば、ＷＯ２００６／００２２３６及びＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３１１２９は、ＫＳＰの阻害剤であることが示されたいくつかの種類の化合物を開示している。
【０００８】
特定のキネシン阻害化合物は、下記化学構造
【０００９】
【化１】
を有するＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドである。
【００１０】
しかし、特定の化合物は、医薬組成物中に使用するための有望な候補として同定された後に、固体状態及び／若しくは液体製剤における安定性、吸湿性、結晶性、毒性学的検討事項、融点又は水及び水性媒体への溶解度などの多数の重要なパラメーターに関してその特性を微調整することが依然として必要である。
【００１１】
塩及び／又は結晶変態の型によって、医薬化合物の重要な特性が影響される。塩又は結晶変態の選択基準は、とりわけ、計画される投与経路（複数可）に左右される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
今回、意外なことに、ある種の条件下では、有利な実用性及び特性を有するＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの新規な塩を提供できることを発見した。
【００１３】
更に、意外なことに、ある種の条件下では、結晶形Ｄ及びＨ並びに非晶形Ａとして以下に説明する、有利な実用性及び特性を有する新規な固体形のＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供できることを発見した。
【００１４】
したがって、第１の態様によれば、本発明は、アニオンがメシル酸、トシル酸、馬尿酸、グリコール酸及び硫酸からなる群から選択されるＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】結晶形DのXRDディフラクトグラムを示す図である。
【図２】結晶形HのXRDディフラクトグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
好ましい一実施形態において、アニオンはメシル酸であり、塩は水和物として存在する。
【００１７】
本発明との関連では、用語「水和物」は、一般に認められている意味に従って解釈すべきである。「水和物」は、水分子がホスト化合物の結晶構造中に組み入れられていることを意味し、化学量論水和物と非化学量論水和物とを包含する。
【００１８】
好ましくは、メシル酸塩の水和物は、水を１ｗｔ％〜６ｗｔ％（熱重量分析で測定）の量で含む。
【００１９】
好ましくは、メシル酸塩の水和物は、半水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・０．５Ｈ２Ｏ）、一水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１Ｈ２Ｏ）、セスキ水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１．５Ｈ２Ｏ）又は二水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・２Ｈ２Ｏ）である。
【００２０】
更なる態様によれば、本発明は、塩を極性溶媒系から沈殿させる、上記で定義した塩の製造方法を提供する。
【００２１】
前述したＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩は、当業者に知られた沈殿法によって製造できる。
【００２２】
上記塩を製造するための出発化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドは、当技術分野で周知の方法及び以下に詳述する方法によって入手できる。例えば、この化合物の製造方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２０６２（ＷＯ２００６／００２２３６）及び対応米国特許出願に記載されている。Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの製造に適用できる更なる合成方法の例は、下記反応スキームで示される。
【００２３】
【化２】
【００２４】
化合物１．１と１．２とを、ＫＩを含むアセトン中でＫ２ＣＯ３を用いて反応させた。Ｋ２ＣＯ３のコストがより低く且つ水の添加時にアセトン溶液から化合物１．３が沈殿し、１．３を抽出するための水性処理の必要性が取り除かれるので、Ｋ２ＣＯ３／アセトンの使用はＣｓ２ＣＯ３／エタノールよりも優れていることが判明した。次に、ケトエステル１．３をトルエン中で酢酸アンモニウム（ＮＨ４ＯＡｃ）と共に還流させて、イミダゾール１．４を得た。Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋトラップを用いたキシレン中での還流は反応混合物からトラップ中への酢酸アンモニウムの除去をもたらすので、このようなキシレン中での還流に比較して、トルエンの使用は、より高収率のイミダゾールが生成することが判明した。ジメチルホルムアミド中における１．４と臭化ベンジル及びＫ２ＣＯ３との反応により、水の添加時に反応溶液から沈殿させることができる１．５を生成した。１．５をメタノール及び塩化アセチルで処理して１．６のＨＣｌ塩を得た。この塩は、その後、ＮａＯＨ／メタノール溶液での滴定時にその遊離塩基に変換される。１．１及び１．２からの１．６の形成は、８１％の収率並びに高い純度（ＨＰＬＣによって測定した場合に＞９７％）及び高い光学純度（＞９９％ｅ．ｅ．）で進行することが判明した。
【００２５】
スキーム２は、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを製造するための還元的アミノ化段階に使用できるアルデヒドの製造を示している。
【００２６】
【化３】
【００２７】
還元的アミノ化後、既知のアシル化剤及び条件を用いて、第２級アミンをアシル化させて、出発化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを生成する。スキーム３は、還元的アミノ化を示している。アミンのアシル化と、それに続くフタルイミドの脱保護及び遊離ヒドロキシル基上の保護基の除去により、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドが得られる。ヒドロキシルに好適な保護基としては、例えば、水素化分解によって除去され得るベンジルエーテル、及びトリメチルシリルヨージドなどの試薬を用いて選択的に除去され得るアルキルカーボネートが挙げられる。
【００２８】
【化４】
【００２９】
上記で示される通り、前述したＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩は、基本的には当業者に知られている沈殿法によって製造できる。
【００３０】
好ましくは、極性溶媒系は、アルコール、好ましくはイソプロパノール及び／若しくはｔｅｒｔ−ブタノール、ニトリル、好ましくはアセトニトリル、アセトン又はそれらの任意の混合物から選択された極性溶媒を含む。極性溶媒系は水を更に含むことができる。
【００３１】
静脈内（ｉ．ｖ．）適用の場合には、上記塩は、十分な安定性を有する液体製剤の形で提供される必要がある。
【００３２】
したがって、更なる態様によれば、本発明は、上記で定義した塩を溶媒又は懸濁媒中に溶解又は懸濁させることによって調製される液体製剤を提供する。好ましくは、使用する塩は、以下で更に定義する水和物形Ｄ又は水和物形Ｈである。
【００３３】
好ましくは、溶媒又は懸濁媒は、ｐＨが７未満、より好ましくは６以下、さらに好ましくは５．５以下であり、任意選択で、水中に溶解する、医薬として許容され得る追加有機溶媒を更に含む水である。
【００３４】
上記で示される通り、固体状態における安定性、吸湿性、加工性、溶解度などの、医薬化合物の関連する特性は、結晶変態の型によって影響され得る。
【００３５】
更なる態様によれば、本発明は、結晶性水和物形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供する。好ましい一実施形態において、結晶形Ｄは、図１に示されるＸ線回折図を示す。
【００３６】
更なる態様によれば、本発明は、結晶性水和物形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供する。好ましい一実施形態において、結晶形Ｈは、図２に示されるＸ線回折図を示す。
【００３７】
好ましくは、結晶形Ｈは、例えば、実施例中に記載するように、アセトニトリル、好ましくは乾燥アセトニトリル中での結晶化とそれに続く湿潤空気中での単離とによって製造する。
【００３８】
好ましくは、結晶形Ｄは、例えば、実施例中に記載するように、アセトニトリル／水溶媒系中で製造する。
【００３９】
更なる態様によれば、本発明は、上記で定義されたような塩から選択される活性成分を含む医薬組成物を提供する。
【００４０】
好ましくは、医薬組成物は、癌などの増殖性疾患の治療に使用される。
【００４１】
より好ましくは、増殖性疾患は、哺乳動物の固形腫瘍又は血液癌から選択される。
【００４２】
好ましくは、固形腫瘍は、肺癌、乳癌、卵巣癌、皮膚癌、結腸癌（colon carcinoma）、膀胱癌、肝癌、胃癌、前立腺癌、腎細胞癌、上咽頭癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、子宮頚癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌、膵癌、頭頸部扁平上皮癌及び肉腫からなる群から選択される。
【００４３】
次に、本発明を、以下の実施例によって更に詳細に説明する。
【００４４】
（実施例）
結晶形のＸ線ディフラクトグラム（diffractogram）は、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ粉末回折計（銅Ｋα線）を用いて測定した。
【実施例１】
【００４５】
トシル酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのトシル酸塩を、溶媒としてのアセトニトリル中で製造した。
【００４６】
トシル酸塩は、２０７℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【００４７】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、１．１２％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は１．７１％であった。これは、トシル酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例２】
【００４８】
メシル酸塩非晶形
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのメシル酸塩を、溶媒としてのアセトニトリル中で製造する。
【００４９】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、２．０８％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は２．２１％であった。これは、メシル酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例３】
【００５０】
馬尿酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの馬尿酸塩を、アセトン／水溶媒系中で製造した。馬尿酸塩は、８０℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【００５１】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、１．７６％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は２．１４％であった。これは、馬尿酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例４】
【００５２】
硫酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの硫酸塩を、溶媒としてのイソプロパノール中で製造した。
【００５３】
硫酸塩は、９８℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【実施例５】
【００５４】
グリコール酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのグリコール酸塩を、溶媒としてのイソプロパノール中で製造した。
【実施例６】
【００５５】
固体状態での塩の安定性
固体状態安定性の試験を、上記で製造したメシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩について行った。結果を以下の表１に示す。
【００５６】
【表１】
【００５７】
色：
Ａ：変色なし、Ｂ：わずかな変色、Ｃ：中程度の変色、Ｄ：強い変色
【００５８】
表１の結果は、塩が固体状態で安定であることを明白に示している。
【実施例７】
【００５９】
塩の溶解／懸濁による液体製剤の調製
静脈内（ｉ．ｖ．）適用についても、液体製剤中の塩の安定性が同様に関連する。
【００６０】
上記で製造したメシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩から、これらの塩を溶媒／懸濁媒中に溶解／懸濁させることによって液体製剤を調製した。これらの液体製剤について、安定性試験を行った。分解生成物の量及び変色度を確認した。結果を、以下の表２に示す。
【００６１】
【表２】
【００６２】
色：
Ａ：変色なし、Ｂ：わずかな変色、Ｃ：中程度の変色、Ｄ：強い変色
【００６３】
溶媒系のｐＨが７未満である場合には、安定性は十分に高いレベルに保つことができる。
【００６４】
メタノール中では、メシル酸塩及びトシル酸塩は非常に安定である。ＤＭＳＯ中では、メシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩は、希釈されていてもいなくても非常に安定である。
【実施例８】
【００６５】
結晶形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレートの製造
非晶質Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミド２．４０ｇを、５０℃において、０．６の水分活性を有する９５：５ｖ／ｖのアセトニトリル／水９ｍｌ中に溶解させ、撹拌した。約１分以内に、懸濁液が形成された。９５：５ｖ／ｖのアセトニトリル／水を更に６ｍｌ加えた。続いて、約１時間で懸濁液を室温まで冷却させ、１４時間撹拌した。次いで、懸濁液を濾過し、約５分間風乾させた。収率１．８２ｇ（７５％）。得られた物質をＸ線回折によって分析した（図１）。得られた物質の水への溶解度は４．４ｍｇ／ｍｌであり、ｐＨ６．８の緩衝液中への溶解度は０．０１０ｍｇ／ｍｌであり、０．１Ｎ ＨＣｌ中への溶解度は１．４ｍｇ／ｍｌである。
【実施例９】
【００６６】
結晶形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレートの製造
非晶質Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミド１２３ｍｇをメタノール／水（１：１、ｖ／ｖ）０．５ｍｌ中に溶解させ、室温で１日撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、約２分間風乾させた。得られた物質をＸ線回折によって分析した（図２）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キネシン阻害化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル（benzlyl）−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩及び多形体に関する。
【背景技術】
【０００２】
キネシンは、微小管に沿って移動する際にアデノシン三リン酸を加水分解し、機械力を発生するモータータンパク質である。これらのタンパク質は、約３５０個のアミノ酸残基を有するモータードメインを含むことを特徴とする。いくつかのキネシンモータードメインの結晶構造が解明されている。
【０００３】
現在、約１００種のキネシン関連タンパク質（ＫＲＰ）が確認されている。キネシンは、細胞小器官及び小胞の輸送並びに小胞体の維持を含む種々の細胞生物学的プロセスに関与する。いくつかのＫＲＰは、紡錘体の微小管と又は染色体と直接的に相互作用し、細胞周期の有糸分裂期において極めて重要な役割を果たすと思われる。これらの有糸分裂ＫＲＰは、癌治療薬の開発にとって特に重要である。
【０００４】
キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）（Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１、又はＫＩＦ１１としても知られている）は、紡錘体に局在し、双極性紡錘体の形成及び／又は機能に必要であることが知られているいくつかのキネシン様モータータンパク質の１つである。
【０００５】
１９９５年、ＫＳＰのＣ末端に対する抗体を用いるＫＳＰの枯渇が、Ｈｅｌａ細胞の有糸分裂を、モノアストラル（monoastral）微小管配列を有する状態で停止させることが示された（Ｂｌａｎｇｙら、Ｃｅｌｌ ８３、１１５９〜１１６９頁、１９９５年）。ＫＳＰの相同体と考えられるｂｉｍＣ及びｃｕｔ７遺伝子の変異は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ（Ｅｎｏｓ，Ａ．Ｐ．及びＮ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｃｅｌｌ ６０、１０１９〜１０２７頁、１９９０年）及びＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ（Ｈａｇａｎ，Ｉ．及びＭ．Ｙａｎａｇｉｄａ、Ｎａｔｕｒｅ ３４７、５６３〜５６６頁、１９９０年）において中心体分離の失敗を引き起こす。タンパク質レベルでＫＳＰ発現を低下させるＡＴＲＡ（全トランス−レチノイン酸）、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いるＫＳＰの枯渇による細胞処理により、ＤＡＮ−Ｇ膵癌細胞が著しく増殖阻害されることが明らかとなり、ＫＳＰが全トランス−レチノイン酸の抗増殖作用に関与する可能性があることが示された（Ｋａｉｓｅｒ，Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４、１８９２５〜１８９３１頁、１９９９年）。興味深いことに、Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓのＡｕｒｏｒａ関連タンパク質キナーゼｐＥｇ２は、ＸＩＥｇ５と会合し、これをリン酸化することが示された（Ｇｉｅｔ，Ｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４、１５００５〜１５０１３頁、１９９９年）。Ａｕｒｏｒａ関連キナーゼの潜在的基質は、制癌剤の開発にとって特に重要である。例えば、Ａｕｒｏｒａ １及び２キナーゼは、タンパク質及びＲＮＡレベルで過剰発現され、遺伝子は結腸癌（colon cancer）患者において増幅される。
【０００６】
ＫＳＰに対する最初の細胞透過性小分子阻害剤「モノアストラル（monoastral）」は、タキサン及びビンカアルカロイドなどの従来の化学療法剤がなすように、微小管重合に影響を与えずに、単極性紡錘体の状態で細胞を停止させることが示された（Ｍａｙｅｒ，Ｔ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９７１〜９７４頁、１９９９年）。モナストロール（monastrol）は、表現型に基づくスクリーニングにおいて阻害剤として同定され、この化合物は抗癌剤の開発のリード化合物となり得ることが示唆された。この阻害は、アデノシン三リン酸のＫＳＰとの相互作用に関して競合的でないことが確認され、急速な可逆性を示すことが判明した（ＤｅＢｏｎｉｓ，Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４２：３３８〜３４９頁、２００３年、Ｋａｐｏｏｒ，Ｔ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５０：９７５〜９８８頁、２０００年）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
化学療法剤の改善の重要性に鑑みて、ＫＳＰ及びＫＳＰ関連タンパク質の効果的なインビボ阻害剤であるＫＳＰ阻害剤が必要とされている。ＫＳＰのいくつかの阻害剤が以前に報告されている。例えば、ＷＯ２００６／００２２３６及びＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３１１２９は、ＫＳＰの阻害剤であることが示されたいくつかの種類の化合物を開示している。
【０００８】
特定のキネシン阻害化合物は、下記化学構造
【０００９】
【化１】
を有するＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドである。
【００１０】
しかし、特定の化合物は、医薬組成物中に使用するための有望な候補として同定された後に、固体状態及び／若しくは液体製剤における安定性、吸湿性、結晶性、毒性学的検討事項、融点又は水及び水性媒体への溶解度などの多数の重要なパラメーターに関してその特性を微調整することが依然として必要である。
【００１１】
塩及び／又は結晶変態の型によって、医薬化合物の重要な特性が影響される。塩又は結晶変態の選択基準は、とりわけ、計画される投与経路（複数可）に左右される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
今回、意外なことに、ある種の条件下では、有利な実用性及び特性を有するＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの新規な塩を提供できることを発見した。
【００１３】
更に、意外なことに、ある種の条件下では、結晶形Ｄ及びＨ並びに非晶形Ａとして以下に説明する、有利な実用性及び特性を有する新規な固体形のＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供できることを発見した。
【００１４】
したがって、第１の態様によれば、本発明は、アニオンがメシル酸、トシル酸、馬尿酸、グリコール酸及び硫酸からなる群から選択されるＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】結晶形DのXRDディフラクトグラムを示す図である。
【図２】結晶形HのXRDディフラクトグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
好ましい一実施形態において、アニオンはメシル酸であり、塩は水和物として存在する。
【００１７】
本発明との関連では、用語「水和物」は、一般に認められている意味に従って解釈すべきである。「水和物」は、水分子がホスト化合物の結晶構造中に組み入れられていることを意味し、化学量論水和物と非化学量論水和物とを包含する。
【００１８】
好ましくは、メシル酸塩の水和物は、水を１ｗｔ％〜６ｗｔ％（熱重量分析で測定）の量で含む。
【００１９】
好ましくは、メシル酸塩の水和物は、半水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・０．５Ｈ２Ｏ）、一水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１Ｈ２Ｏ）、セスキ水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１．５Ｈ２Ｏ）又は二水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・２Ｈ２Ｏ）である。
【００２０】
更なる態様によれば、本発明は、塩を極性溶媒系から沈殿させる、上記で定義した塩の製造方法を提供する。
【００２１】
前述したＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩は、当業者に知られた沈殿法によって製造できる。
【００２２】
上記塩を製造するための出発化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドは、当技術分野で周知の方法及び以下に詳述する方法によって入手できる。例えば、この化合物の製造方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２０６２（ＷＯ２００６／００２２３６）及び対応米国特許出願に記載されている。Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの製造に適用できる更なる合成方法の例は、下記反応スキームで示される。
【００２３】
【化２】
【００２４】
化合物１．１と１．２とを、ＫＩを含むアセトン中でＫ２ＣＯ３を用いて反応させた。Ｋ２ＣＯ３のコストがより低く且つ水の添加時にアセトン溶液から化合物１．３が沈殿し、１．３を抽出するための水性処理の必要性が取り除かれるので、Ｋ２ＣＯ３／アセトンの使用はＣｓ２ＣＯ３／エタノールよりも優れていることが判明した。次に、ケトエステル１．３をトルエン中で酢酸アンモニウム（ＮＨ４ＯＡｃ）と共に還流させて、イミダゾール１．４を得た。Ｄｅａｎ Ｓｔａｒｋトラップを用いたキシレン中での還流は反応混合物からトラップ中への酢酸アンモニウムの除去をもたらすので、このようなキシレン中での還流に比較して、トルエンの使用は、より高収率のイミダゾールが生成することが判明した。ジメチルホルムアミド中における１．４と臭化ベンジル及びＫ２ＣＯ３との反応により、水の添加時に反応溶液から沈殿させることができる１．５を生成した。１．５をメタノール及び塩化アセチルで処理して１．６のＨＣｌ塩を得た。この塩は、その後、ＮａＯＨ／メタノール溶液での滴定時にその遊離塩基に変換される。１．１及び１．２からの１．６の形成は、８１％の収率並びに高い純度（ＨＰＬＣによって測定した場合に＞９７％）及び高い光学純度（＞９９％ｅ．ｅ．）で進行することが判明した。
【００２５】
スキーム２は、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを製造するための還元的アミノ化段階に使用できるアルデヒドの製造を示している。
【００２６】
【化３】
【００２７】
還元的アミノ化後、既知のアシル化剤及び条件を用いて、第２級アミンをアシル化させて、出発化合物Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを生成する。スキーム３は、還元的アミノ化を示している。アミンのアシル化と、それに続くフタルイミドの脱保護及び遊離ヒドロキシル基上の保護基の除去により、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドが得られる。ヒドロキシルに好適な保護基としては、例えば、水素化分解によって除去され得るベンジルエーテル、及びトリメチルシリルヨージドなどの試薬を用いて選択的に除去され得るアルキルカーボネートが挙げられる。
【００２８】
【化４】
【００２９】
上記で示される通り、前述したＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩は、基本的には当業者に知られている沈殿法によって製造できる。
【００３０】
好ましくは、極性溶媒系は、アルコール、好ましくはイソプロパノール及び／若しくはｔｅｒｔ−ブタノール、ニトリル、好ましくはアセトニトリル、アセトン又はそれらの任意の混合物から選択された極性溶媒を含む。極性溶媒系は水を更に含むことができる。
【００３１】
静脈内（ｉ．ｖ．）適用の場合には、上記塩は、十分な安定性を有する液体製剤の形で提供される必要がある。
【００３２】
したがって、更なる態様によれば、本発明は、上記で定義した塩を溶媒又は懸濁媒中に溶解又は懸濁させることによって調製される液体製剤を提供する。好ましくは、使用する塩は、以下で更に定義する水和物形Ｄ又は水和物形Ｈである。
【００３３】
好ましくは、溶媒又は懸濁媒は、ｐＨが７未満、より好ましくは６以下、さらに好ましくは５．５以下であり、任意選択で、水中に溶解する、医薬として許容され得る追加有機溶媒を更に含む水である。
【００３４】
上記で示される通り、固体状態における安定性、吸湿性、加工性、溶解度などの、医薬化合物の関連する特性は、結晶変態の型によって影響され得る。
【００３５】
更なる態様によれば、本発明は、結晶性水和物形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供する。好ましい一実施形態において、結晶形Ｄは、図１に示されるＸ線回折図を示す。
【００３６】
更なる態様によれば、本発明は、結晶性水和物形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドを提供する。好ましい一実施形態において、結晶形Ｈは、図２に示されるＸ線回折図を示す。
【００３７】
好ましくは、結晶形Ｈは、例えば、実施例中に記載するように、アセトニトリル、好ましくは乾燥アセトニトリル中での結晶化とそれに続く湿潤空気中での単離とによって製造する。
【００３８】
好ましくは、結晶形Ｄは、例えば、実施例中に記載するように、アセトニトリル／水溶媒系中で製造する。
【００３９】
更なる態様によれば、本発明は、上記で定義されたような塩から選択される活性成分を含む医薬組成物を提供する。
【００４０】
好ましくは、医薬組成物は、癌などの増殖性疾患の治療に使用される。
【００４１】
より好ましくは、増殖性疾患は、哺乳動物の固形腫瘍又は血液癌から選択される。
【００４２】
好ましくは、固形腫瘍は、肺癌、乳癌、卵巣癌、皮膚癌、結腸癌（colon carcinoma）、膀胱癌、肝癌、胃癌、前立腺癌、腎細胞癌、上咽頭癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、子宮頚癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌、膵癌、頭頸部扁平上皮癌及び肉腫からなる群から選択される。
【００４３】
次に、本発明を、以下の実施例によって更に詳細に説明する。
【００４４】
（実施例）
結晶形のＸ線ディフラクトグラム（diffractogram）は、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ粉末回折計（銅Ｋα線）を用いて測定した。
【実施例１】
【００４５】
トシル酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのトシル酸塩を、溶媒としてのアセトニトリル中で製造した。
【００４６】
トシル酸塩は、２０７℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【００４７】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、１．１２％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は１．７１％であった。これは、トシル酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例２】
【００４８】
メシル酸塩非晶形
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのメシル酸塩を、溶媒としてのアセトニトリル中で製造する。
【００４９】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、２．０８％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は２．２１％であった。これは、メシル酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例３】
【００５０】
馬尿酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの馬尿酸塩を、アセトン／水溶媒系中で製造した。馬尿酸塩は、８０℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【００５１】
製造された塩の、熱重量分析によって測定された乾燥時の重量損失（％）は、１．７６％であった。相対湿度９２％に１日保持した場合には、重量損失は２．１４％であった。これは、馬尿酸塩が低吸湿性であることを明白に示している。
【実施例４】
【００５２】
硫酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの硫酸塩を、溶媒としてのイソプロパノール中で製造した。
【００５３】
硫酸塩は、９８℃の融解温度Ｔｍ（ＤＳＣによって融解開始として測定）を有する。
【実施例５】
【００５４】
グリコール酸塩
Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドのグリコール酸塩を、溶媒としてのイソプロパノール中で製造した。
【実施例６】
【００５５】
固体状態での塩の安定性
固体状態安定性の試験を、上記で製造したメシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩について行った。結果を以下の表１に示す。
【００５６】
【表１】
【００５７】
色：
Ａ：変色なし、Ｂ：わずかな変色、Ｃ：中程度の変色、Ｄ：強い変色
【００５８】
表１の結果は、塩が固体状態で安定であることを明白に示している。
【実施例７】
【００５９】
塩の溶解／懸濁による液体製剤の調製
静脈内（ｉ．ｖ．）適用についても、液体製剤中の塩の安定性が同様に関連する。
【００６０】
上記で製造したメシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩から、これらの塩を溶媒／懸濁媒中に溶解／懸濁させることによって液体製剤を調製した。これらの液体製剤について、安定性試験を行った。分解生成物の量及び変色度を確認した。結果を、以下の表２に示す。
【００６１】
【表２】
【００６２】
色：
Ａ：変色なし、Ｂ：わずかな変色、Ｃ：中程度の変色、Ｄ：強い変色
【００６３】
溶媒系のｐＨが７未満である場合には、安定性は十分に高いレベルに保つことができる。
【００６４】
メタノール中では、メシル酸塩及びトシル酸塩は非常に安定である。ＤＭＳＯ中では、メシル酸塩、トシル酸塩及び馬尿酸塩は、希釈されていてもいなくても非常に安定である。
【実施例８】
【００６５】
結晶形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレートの製造
非晶質Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミド２．４０ｇを、５０℃において、０．６の水分活性を有する９５：５ｖ／ｖのアセトニトリル／水９ｍｌ中に溶解させ、撹拌した。約１分以内に、懸濁液が形成された。９５：５ｖ／ｖのアセトニトリル／水を更に６ｍｌ加えた。続いて、約１時間で懸濁液を室温まで冷却させ、１４時間撹拌した。次いで、懸濁液を濾過し、約５分間風乾させた。収率１．８２ｇ（７５％）。得られた物質をＸ線回折によって分析した（図１）。得られた物質の水への溶解度は４．４ｍｇ／ｍｌであり、ｐＨ６．８の緩衝液中への溶解度は０．０１０ｍｇ／ｍｌであり、０．１Ｎ ＨＣｌ中への溶解度は１．４ｍｇ／ｍｌである。
【実施例９】
【００６６】
結晶形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレートの製造
非晶質Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミド１２３ｍｇをメタノール／水（１：１、ｖ／ｖ）０．５ｍｌ中に溶解させ、室温で１日撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、約２分間風乾させた。得られた物質をＸ線回折によって分析した（図２）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アニオンがメシル酸、トシル酸、馬尿酸、グリコール酸及び硫酸からなる群から選択される、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩。
【請求項２】
前記アニオンがメシル酸であり、塩が水和物である、請求項１に記載の塩。
【請求項３】
前記水和物が、半水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・０．５Ｈ２Ｏ）、一水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１Ｈ２Ｏ）、セスキ水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１．５Ｈ２Ｏ）又は二水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・２Ｈ２Ｏ）である、請求項２に記載の塩。
【請求項４】
結晶性水和物形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート。
【請求項５】
結晶性水和物形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート。
【請求項６】
結晶形を、アセトニトリル中での結晶化とそれに続く湿潤空気中での単離とによって製造する、請求項５に記載の結晶形Ｈの１つの製造方法。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか一項に記載の少なくとも１種の塩を、ｐＨ７未満の水を含む溶媒又は懸濁媒中に溶解又は懸濁させることによって調製される液体製剤。
【請求項１】
アニオンがメシル酸、トシル酸、馬尿酸、グリコール酸及び硫酸からなる群から選択される、Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドの塩。
【請求項２】
前記アニオンがメシル酸であり、塩が水和物である、請求項１に記載の塩。
【請求項３】
前記水和物が、半水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・０．５Ｈ２Ｏ）、一水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１Ｈ２Ｏ）、セスキ水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・１．５Ｈ２Ｏ）又は二水和物（Ｎ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート・２Ｈ２Ｏ）である、請求項２に記載の塩。
【請求項４】
結晶性水和物形ＤのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート。
【請求項５】
結晶性水和物形ＨのＮ−（（Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロブチル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１−ベンズリル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピル）−２−ヒドロキシアセトアミドメシレート。
【請求項６】
結晶形を、アセトニトリル中での結晶化とそれに続く湿潤空気中での単離とによって製造する、請求項５に記載の結晶形Ｈの１つの製造方法。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか一項に記載の少なくとも１種の塩を、ｐＨ７未満の水を含む溶媒又は懸濁媒中に溶解又は懸濁させることによって調製される液体製剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５１５７４９（Ｐ２０１２−５１５７４９Ａ）
【公表日】平成２４年７月１２日（２０１２．７．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４６８０３（Ｐ２０１１−５４６８０３）
【出願日】平成２２年１月２５日（２０１０．１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５０７７０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０８４１８６
【国際公開日】平成２２年７月２９日（２０１０．７．２９）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年７月１２日（２０１２．７．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１月２５日（２０１０．１．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５０７７０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０８４１８６
【国際公開日】平成２２年７月２９日（２０１０．７．２９）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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