クリル由来のリン脂質を用いて、アスタキサンチンとＤＡＨ−及び／又はＥＰＡ−結合したホスファチジルセリンとを含有する組成物を製造する方法、ならびにこの方法により製造された組成物
【課題】酸化安定性に優れ、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合されたホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法、および該ホスファチジルセリンを含有する脳機能及び認知機能改善用組成物の提供。
【解決手段】高い抗酸化効果を有するアスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくも１つを構成脂肪酸として結合するリン脂質を含有する、クリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを混合してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む、アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくとも１つが構成脂肪酸として結合するホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法、及び該方法により製造された、アスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物。
【解決手段】高い抗酸化効果を有するアスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくも１つを構成脂肪酸として結合するリン脂質を含有する、クリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを混合してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む、アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくとも１つが構成脂肪酸として結合するホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法、及び該方法により製造された、アスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然のアスタキサンチンを含有するクリル由来のリン脂質を用いて、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及びＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の少なくとも１つと結合されたホスファチジルセリンを含有する組成物を製造する方法、ならびにこの方法により製造された組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルセリンは、天然に存在する脂肪質の一種で、セリン基（親水部分）、リン酸基、グリセロール及び２つの脂肪酸基（疎水部）が結合された物質である。
【０００３】
ヒトの脳は、乾燥重量の約半分をレシチンが占めており、このようなレシチンの大部分は、神経細胞膜を形成している。ホスファチジルセリンは、細胞膜の重要な成分であるレシチン誘導体の一種であって、特に脳の中に多く存在しており、神経細胞膜において生命維持活動のためのエネルギーの出入り、神経伝達物質の放出やシナプスの活動などの情報伝達といった、神経細胞の機能発現に深く関与していることが報告されている。そのためホスファチジルセリンは、「脳の栄養素」（ブレインフード）と呼ばれている。
【０００４】
ホスファチジルセリンは、１９４８年にＦｏｌｃｈにより分離された後、多くの研究が行われている。１９９７年まで３４件の臨床試験（この中、ブラインドテストが１７件）が行われ、その結果として、アルツハイマー病を初めとした痴呆症を改善する機能及び脳機能を活性化する機能があることが知られた。この脳機能改善効果については多くの研究結果が報告され、癲癇に対する効果、ストレスに対する耐性及びホルモン分泌リズムの回復機能などが知られている。
【０００５】
ウシ脳（bovine cerebrum）由来のホスファチジルセリンが、脳内のグルコース濃度を増大させる作用を持っているという報告を初めとして、ホスファチジルセリンの痴呆改善、記憶力改善機能が多く報告されている。しかし、ウシ脳からホスファチジルセリンを抽出する場合、ウシ一匹分の脳からホスファチジルセリンを１ｇ程度しか抽出することができず、またウシ脳由来のホスファチジルセリンは、英国で初めて発見され世界的に大きな問題となっている狂牛病を発病させる恐れもある。
【０００６】
最近、大豆由来のレシチンから酵素によるホスファチジル基転移反応を用いて得たホスファチジルセリンが、脳内のグルコース濃度を増大させ、記憶障害回復効果を奏することが確認され、現在、大豆由来のホスファチジルセリンが市販されている。
【０００７】
しかし、大豆レシチン由来のホスファチジルセリンは、ウシ脳由来のホスファチジルセリンとは異なる脂肪酸組成を有している。実際に、動物の脳に存在するホスファチジルセリンは、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）が約１０％程度含有され、結合された構造を有する。
【０００８】
ＤＨＡは、脳機能において非常に重要な役割を果たすことが知られている。また、ＤＨＡは、オメガ３欠乏動物に対する実験において、脳内のホスファチジルセリン生成に重要な役割を果たすことが報告され、脳内の重要な栄養素であるとみなされている。
【０００９】
また、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）は、血栓溶解などの効能を持ち、血流改善剤などで多く利用されており、血管性痴呆症にも役に立つことが知られている。
【００１０】
なお、このようなＤＨＡ及びＥＰＡは、トリグリセリド形態よりは、リン脂質形態で存在する場合、脳へ効率良く伝達されることが報告されている（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．１９９８：６７、９７〜１０３）。
【００１１】
従って、ＤＨＡが結合されたホスファチジルセリンは、ＤＨＡを含まない大豆レシチン由来のホスファチジルセリンに比べて脳内へのＤＨＡ伝達が可能であると言える。
【００１２】
特許第３７９１９５１号では、ＤＨＡ、ＥＰＡのような高度不飽和脂肪酸を有するホスファチジルセリン含有組成物の製造方法が開示されている。この特許では、天然レシチン原料として（i）海産魚類の頭部組織から抽出したレシチン、または（ii）高度不飽和脂肪酸を含有した魚油または植物油が添加された飼料を摂取した鶏の卵黄から抽出したレシチンが使用されている。
【００１３】
しかし、魚類由来のレシチンは、未だ量産または商業的に販売されていない。また酸化安定性が著しく劣るため、酸敗しやすく、ＤＨＡ、ＥＰＡのような多価不飽和脂肪酸を有するリン脂質が得られないため、全量廃棄されている。卵黄由来のレシチンは、動脈硬化などをもたらすコレステロールが多量含有され、卵黄を用いて製造されるホスファチジルセリンにはコレステロールが含まれるようになり、好ましくない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明者らは、上記のような問題点を解決するため、非常に高い抗酸化効果を有する天然のアスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ、ＥＰＡのような高度不飽和脂肪酸と結合したホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンなどを含む、クリル由来のリン脂質に着目した。ＤＨＡまたはＥＰＡが結合されているリン脂質は、そうでないリン脂質に比べて酸化安定性が劣ることがあるが、クリル由来のリン脂質は、高い抗酸化能を有するアスタキサンチンを含んでいるため、リン脂質の酸化安定性を高めることができる。このようなクリル由来のリン脂質を原料として、セリン及びホスホリパーゼＤで処理して反応させると、脳内に存在するホスファチジルセリンと同様程度のＤＨＡ含量を有するホスファチジルセリン含有組成物を製造することができる。
【００１５】
従って本発明の目的は、アスタキサンチンを含有するクリル由来のリン脂質を用いて、アスタキサンチンとＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合しいるホスファチジルセリンとを含有する組成物を製造する方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の他の目的は、上記の方法により製造され、アスタキサンチンとＤＨＡ−及び／又はＥＰＡ−結合したホスファチジルセリンとを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明のまた他の目的は、上記のような組成物を含む脳機能及び認知機能改善用健康補助食品及び薬剤学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記の目的を達成するため、本発明は、アスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択される少なくとも１つと結合したクリル由来のリン脂質を、ホスホリパーゼＤ及びセリンで処理してリン脂質とセリンとを反応させるステップを含む、アスタキサンチンとＤＨＡ及びＥＰＡから選択される少なくとも１つと結合されたホスファチジルセリンとを含有する組成物の製造方法を提供する。
【００１９】
また上記の目的を達成するために、本発明は、上記の方法により製造され、アスタキサンチンとＤＨＡ−及び／又はＥＰＡ−から選択される少なくとも１つと結合したホスファチジルセリンとを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供する。
【００２０】
さらに、上記の目的を達成するため、本発明は、上記のような組成物を含む脳機能及び認知機能改善用健康補助食品、ならびに薬剤学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の製造方法によれば、クリル由来のリン脂質を利用することで、従来の、多くの臨床結果が立証されているたウシ脳内に存在するホスファチジルセリンと同程度含量の、１０％程度のＤＨＡが結合された形態のホスファチジルセリンを含有すると共に、酸化安定性の低下を防止するための天然のアスタキサンチンを含有するため、別に抗酸化剤で処理することなく非常に安定した組成物を容易に提供することができ、非常に効率的である。従って、上記のような方法により製造された、アスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したホスファチジルセリンを含有する組成物は、既存の、多くの臨床試験で効能が立証されているウシ脳由来のホスファチジルセリンと同程度のＤＨＡを含有しているため、ＤＨＡが結合されていない大豆由来のホスファチジルセリンなどに比べ脳機能改善効果が非常に優れているだけでなく、別の抗酸化剤を添加することなく天然のアスタキサンチンそれ自体によって高い抗酸化効果が得られると共に、貯蔵安定性及び脳細胞保護機能に優れているという長所を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の実施例１における組成物の室温（２５℃）での酸化安定性試験の結果を示すグラフである。
【図２】大豆由来のホスファチジルセリン投与群及びクリル由来のホスファチジルセリン投与群に対する水中迷路試験（６日間）において、１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定した獲得施行の結果を示す。
【図３】大豆由来のホスファチジルセリン投与群及びクリル由来のホスファチジルセリン投与群に対する水中迷路試験の最終日（７日目）に、逃避台を除去し、逃避台領域に留まる程度を測定する把持施行の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明に係るアスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡと結合したホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法は、アスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したクリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを処理してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む。
【００２４】
クリルとは、オキアミ目（ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ Ｅｕｐｈａｕｓｉａｃｅａ）に属する、エビによく似た海洋無脊椎動物である。
【００２５】
クリル由来のリン脂質は、当業界で周知の方法により得ることができ、例えばクリルを粉砕した後、ヘキサン、酒精などの溶媒を用いて抽出及び濃縮して得ることができる。特に、クリル由来のリン脂質はホスファチジルコリンの含量が高いため、酒精のみで抽出した後、濃縮することができる。具体的には、乾燥クリルを粉砕し、９５％酒精を用いて２０℃で１時間窒素充填下で抽出した後、抽出液を冷蔵状態で１２時間静置した。次いで上澄み液を採取して減圧濃縮及び乾燥し、クリル由来のリン脂質を得た。
【００２６】
このようにして得られたクリル由来のリン脂質は、アスタキサンチンと、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡと結合したホスファチジルコリンとを大部分含む。またアスタキサンチンは、リン脂質の総重量を基準に０．０２〜０．０８重量％の量で含まれ得る。ＤＨＡ及びＥＰＡは、クリル由来のリン脂質内のホスファチジルコリンに含まれた脂肪酸の総重量を基準にそれぞれ１０〜２０重量％及び２５〜３５重量％の量で含まれ得る。
【００２７】
前記クリル由来のリン脂質に対するホスホリパーゼＤは、０．０５〜０．２重量比、好ましくは、０．１〜０．１５重量比で使用され、セリンは、０．５〜３重量比、好ましくは、１〜２重量比で使用され得る。
【００２８】
上記の酵素反応は、当業界で公知の方法で行うことができ、例えば、３５〜４５℃で２０〜２４時間、酢酸エチルなどの溶媒を用いて行うことができる。
【００２９】
ホスホリパーゼＤは、微生物由来、キャベツなどの植物由来のものであり得る。
【００３０】
最終的に得られた組成物は、粉末状またはペースト状または液状であり得る。
【００３１】
アスタキサンチンとは、クリル、エビ、カニなどに分布する天然カロチノイド系色素の一種で、甲殻類を初めとした水生動物に広く分布する。多くの場合、赤味を帯び、脂溶性色素でタンパク質と結合した色素タンパク質として存在する。カニを煮ると赤くなるのは、色素タンパク質が分解されてアスタキサンチンの色が現われるためである。アスタキサンチンの抗酸化能は、ビタミンＥの１００倍程度であることが知られている。このようなアスタキサンチンの抗酸化効果は、ＤＨＡ及びＥＰＡが結合し、酸化安定性に劣るリン脂質の酸化安定性の低下を防止すると共に、脳細胞保護にも肯定的である。
【００３２】
またクリル由来のリン脂質には、脳機能に重要なＤＨＡが１０％程度結合したホスファチジルコリンのようなリン脂質が含まれているため、本発明の方法によりホスホリパーゼＤ及びセリンを加えて酵素反応させると、認知能力、初期痴呆の改善などにおいて多くの臨床結果が報告されているウシ脳由来のホスファチジルセリンと同程度の、１０％水準以上のＤＨＡが結合したホスファチジルセリン含有組成物を得ることができる。また、ＤＨＡの他に、血流を円滑にして血管性疾患などに有効なＥＰＡなどが結合したホスファチジルセリンを含むこともできる。この方法によれば、血流に関連した有用な効能を示し得る組成物が高収率かつ容易に得られ、非常に効率的である。
【００３３】
本発明は、また、上記のような製造方法により製造され、天然のアスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供する。
【００３４】
前記組成物において、アスタキサンチンの含量は、好ましくは組成物の総重量を基準に０．０２〜０．０８重量％である。前記組成物において、ホスファチジルセリンの含量は、組成物の総重量を基準に２０〜９０重量％、特に２０〜４０重量％であり得る。前記ホスファチジルセリンに結合したＤＨＡの含量は、ホスファチジルセリンに結合した脂肪酸の総重量を基準に１０〜２０重量％であり、ＥＰＡの含量は、２５〜３５重量％であり得る。
【００３５】
本発明の組成物は、脳機能及び認知機能改善の効果を奏し、記憶力喪失、記憶力損傷、特に習得力の欠陥及び／又は活動記憶喪失に関連した記憶力の損傷、痴呆、健忘症、アルツハイマー病などの予防及び治療に効果的に使用することができる。
【００３６】
また、本発明の組成物は、脳機能障害の予防及び治療を目的として使用することができると共に、健康なヒトの学習能力、記憶力または反射反応能力などの脳機能をさらに向上させることを目的として使用することもできる。
【００３７】
本発明の組成物は、薬剤学または食品学分野で公知の方法によって製剤化することができ、それ自体または薬剤学的に許容可能な担体、賦形剤などと混合して、薬剤学的または食品学的に通常許容される製剤、例えば、液剤、シロップ剤、カプセル剤などに製剤化することができる。これらは、経口または非経口で投与することができる。
【００３８】
上記のような本発明の組成物を含む液剤、カプセル剤などは、健康補助食品として使用することができる。なお「健康補助食品」とは、人体に有用な機能性を有する原料や成分を使用して、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液状剤、丸剤などの剤形として製造加工した健康食品または飲料、ヨーグルト、チーズなどの機能性食品を意味する。
【００３９】
本発明の組成物は、体内での活性成分の吸収度、排泄速度、患者の年齢及び体重、性別及び状態、治療すべき病気の重症度などによって適切に選択されるが、通常成人一日当たり１００〜４００ｍｇ／６０ｋｇ、好ましくは、２００〜３００ｍｇ／６０ｋｇ投与することが好ましい。このように剤形化した単位投与タイプの製剤は、必要によって一定時間ごとに数回投与することができる。
【００４０】
本発明の組成物は、常温での酸化安定性試験において、１３ヶ月間酸敗が発生せず（試験例１参照）、老化ラットを用いた水中迷路学習試験において、大豆由来のホスファチジルセリンに比べて空間記憶力増進効果が非常に優れていることが示された（試験例２参照）。従って、本発明で製造した組成物は、脳機能改善用組成物として効果的に使用することができる。
【００４１】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらは、本発明の理解を容易にするためのもので、本発明は、これらに限定されない。
【実施例】
【００４２】
＜実施例１＞
Ｌ−セリン２００ｇを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌに入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。ここに、アスタキサンチン含量３４０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量が３５重量％であるクリル由来のリン脂質（ＤＳ−Ｋｒｉｌｌ ＰＣ３０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１００ｇを酢酸エチル５００ｍｌに溶解させた溶液を混合し、２００ｒｐｍで攪拌しながら４０℃で２４時間反応させた。
【００４３】
次いで、反応溶液を静置した後、上層部を回収して水で３回洗浄して残余のセリンと酵素を除去した後、溶媒層を濃縮してアスタキサンチンとホスファチジルセリンとを含有した組成物（８５．２ｇ、リン脂質に対する収率：８５．２％）を得た。得られた組成物において、ホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ３０．５重量及び３３０ｐｐｍであった。
【００４４】
＜実施例２＞
Ｌ−セリン２００ｇを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌに入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。ここに、アスタキサンチン含量が４５０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量が５５重量％である、クリル由来のリン脂質（ＤＳ−ｋｒｉｌｌ ＰＣ５０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１００ｇを酢酸エチル５００ｍｌに溶解させた溶液を混合した後、２００ｒｐｍで攪拌しながら４０℃で２４時間反応させた。
【００４５】
次いで、反応溶液を静置した後、溶媒相を回収して水で３回洗浄し残余のセリンと酵素を除去した。次いで溶媒相を濃縮してアスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有した組成物（８５．９ｇ、リン脂質に対する収率：８５．９％）を得た。得られた組成物におけるホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ５０．１重量％及び４４８ｐｐｍであった。
【００４６】
＜実施例３＞
アスタキサンチン含量３４０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量３５重量％であるクリル由来のリン脂質（ＤＳ−Ｋｒｉｌｌ ＰＣ３０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１５０ｇをアセトンで洗浄して中性脂質を除去した。次いで得られた沈殿物を濃縮して得たリン脂質５０ｇに酢酸エチル５００ｍｌを入れ、溶解させた。
【００４７】
ここに、Ｌ−セリン２００ｇと酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌを入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃において２００ｒｐｍで攪拌しながら、４０℃で２４時間反応させた。
【００４８】
反応溶液を静置した後、上層部を回収して水で３回洗浄して残余のセリンと酵素を除去した。次いで溶媒層を濃縮し、アセトンを添加してろ過した後、減圧乾燥して粉末状のアスタキサンチン及びホスファチジルセリン含有組成物（３５．１ｇ、収率：７０．２％）を得た。得られた粉末組成物において、ホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ９０．５重量％及び２０５ｐｐｍであった。
【００４９】
実施例１及び３で得られた組成物におけるＤＨＡ及びＥＰＡの含量は、下記の表１に示す。
【００５０】
【表１】
【００５１】
＜試験例１＞酸化安定化試験
実施例１で製造されたアスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有した組成物３ｇを使用し、酸化安定度測定装置（Ｒａｎｃｉｍａｔ）を用いて８５、９０、１００℃での時間経過に従う誘導期間を求めた。得られた結果をアレニウス方程式に導入して誘導期間と温度との相関関係を求め、常温（２５℃）での誘導期間を計算した。
【００５２】
その結果を図１に示す。図１からわかるように、常温で１３ヶ月間酸敗が発生しなかった。これにより、本発明の組成物の流通期限は、常温で１年間以上であることができると判断され、非常に安定した組成物であると言える。
【００５３】
＜試験例２＞水中迷路試験（獲得施行＋把持施行）
１２ヶ月齢の老化雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（体重：５００〜５３０ｇ、投与１群当たり６匹）を対象に、大豆由来のホスファチジルセリン（ＤＳ−ＰＳ ６０、以下「大豆ＰＳ」と略する）及び実施例３で得られた組成物（以下「クリルＰＳ」と略する）を、それぞれ毎日５０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇで１週間摂取させた後、水中迷路学習試験を行った。
【００５４】
具体的には、大豆ＰＳ投与群とクリルＰＳ投与群に対して、６日間１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定した。獲得施行の結果を図２に示す。図２において、ＮＯＲＭＡＬは、正常群を示し、ＡＧは、何等摂取しなかった対照群（老化ラット）を示し、ＡＧ−ＳＯＹ−ＰＳ５０は、老化ラットに毎日大豆ＰＳを５０ｍｇ／ｋｇずつ投与した大豆ＰＳ投与群を示し、ＡＧ−ＫＲＩＬＬ−ＰＳ２０は、老化ラットに毎日実施例３のクリルＰＳを２０ｍｇ／ｋｇずつ投与したクリルＰＳ投与群を示す。図２に示すように、１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定する獲得施行において、一日目には有意な差が認められなかったが、学習が進行するに従い、最終日（６日目）には逃避台に到達するまでの時間について、グループ間で有意な差が認められた。測定日に従うグループ別の死後検定の結果、大豆ＰＳ投与群と実施例３のクリルＰＳ投与群では、逃避台に到達するまでの時間が統計的に有意に減少し、空間認知記憶学習遂行能力に対して増進効果が示された。特に、クリルＰＳ投与群は、大豆ＰＳ投与群に比べて少量の摂取にもかかわらず、逃避台への到達時間が相対的に短くなり、これは、本発明のクリルＰＳが通常の大豆ＰＳに比べて脳機能及び認知機能改善に一層効果的であることを示している。
【００５５】
なお、水中迷路学習において、最後日（７日目）に逃避台を除去し、逃避台に留まる時間を測定する把持施行を行った。その結果を図３に示す。逃避台を除去しても、記憶力が良いラットは、逃避台が置かれていた区間で留まる時間が長くなる。クリルＰＳの方が大豆ＰＳより逃避台区間に留まる時間が長いという結果が得られ、本発明のクリルＰＳが大豆ＰＳに比べて空間記憶効果に優れていることがわかる。
【００５６】
本発明の組成物を使用して次のように製剤または食品を製造することができる。
製造例１：カプセル剤の製造
実施例１の組成物 ２００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
澱粉 ９３ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合し、通常のカプセル製造法に従ってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５７】
製造例２：カプセル剤の製造
実施例２の組成物 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
澱粉 ９３ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合し、通常のカプセル製造法に従ってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５８】
製造例３：液剤の製造
実施例２の組成物 ２００ｍｇ
砂糖 ２０ｇ
異性化糖 ２０ｇ
レモン香り 適量
精製水（を加えて全体１００ｍｌ）
上記の成分を液剤の製造方法に従って混合し、１００ｍｌ褐色瓶に充填し、滅菌して液剤を製造する。
【００５９】
製造例４：飲料の製造
実施例１の組成物 ５重量％、食用色素 ０．０５重量％、オレンジエッセンス ０．０５重量％、果糖 ５．０重量％、クエン酸 ０．１重量％、ビタミンＣ ０．０５重量％を含む一般機能性飲料ベースを添加した組成物を製造した後、精製水を適量加えて飲料を製造した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然のアスタキサンチンを含有するクリル由来のリン脂質を用いて、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及びＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の少なくとも１つと結合されたホスファチジルセリンを含有する組成物を製造する方法、ならびにこの方法により製造された組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルセリンは、天然に存在する脂肪質の一種で、セリン基（親水部分）、リン酸基、グリセロール及び２つの脂肪酸基（疎水部）が結合された物質である。
【０００３】
ヒトの脳は、乾燥重量の約半分をレシチンが占めており、このようなレシチンの大部分は、神経細胞膜を形成している。ホスファチジルセリンは、細胞膜の重要な成分であるレシチン誘導体の一種であって、特に脳の中に多く存在しており、神経細胞膜において生命維持活動のためのエネルギーの出入り、神経伝達物質の放出やシナプスの活動などの情報伝達といった、神経細胞の機能発現に深く関与していることが報告されている。そのためホスファチジルセリンは、「脳の栄養素」（ブレインフード）と呼ばれている。
【０００４】
ホスファチジルセリンは、１９４８年にＦｏｌｃｈにより分離された後、多くの研究が行われている。１９９７年まで３４件の臨床試験（この中、ブラインドテストが１７件）が行われ、その結果として、アルツハイマー病を初めとした痴呆症を改善する機能及び脳機能を活性化する機能があることが知られた。この脳機能改善効果については多くの研究結果が報告され、癲癇に対する効果、ストレスに対する耐性及びホルモン分泌リズムの回復機能などが知られている。
【０００５】
ウシ脳（bovine cerebrum）由来のホスファチジルセリンが、脳内のグルコース濃度を増大させる作用を持っているという報告を初めとして、ホスファチジルセリンの痴呆改善、記憶力改善機能が多く報告されている。しかし、ウシ脳からホスファチジルセリンを抽出する場合、ウシ一匹分の脳からホスファチジルセリンを１ｇ程度しか抽出することができず、またウシ脳由来のホスファチジルセリンは、英国で初めて発見され世界的に大きな問題となっている狂牛病を発病させる恐れもある。
【０００６】
最近、大豆由来のレシチンから酵素によるホスファチジル基転移反応を用いて得たホスファチジルセリンが、脳内のグルコース濃度を増大させ、記憶障害回復効果を奏することが確認され、現在、大豆由来のホスファチジルセリンが市販されている。
【０００７】
しかし、大豆レシチン由来のホスファチジルセリンは、ウシ脳由来のホスファチジルセリンとは異なる脂肪酸組成を有している。実際に、動物の脳に存在するホスファチジルセリンは、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）が約１０％程度含有され、結合された構造を有する。
【０００８】
ＤＨＡは、脳機能において非常に重要な役割を果たすことが知られている。また、ＤＨＡは、オメガ３欠乏動物に対する実験において、脳内のホスファチジルセリン生成に重要な役割を果たすことが報告され、脳内の重要な栄養素であるとみなされている。
【０００９】
また、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）は、血栓溶解などの効能を持ち、血流改善剤などで多く利用されており、血管性痴呆症にも役に立つことが知られている。
【００１０】
なお、このようなＤＨＡ及びＥＰＡは、トリグリセリド形態よりは、リン脂質形態で存在する場合、脳へ効率良く伝達されることが報告されている（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．１９９８：６７、９７〜１０３）。
【００１１】
従って、ＤＨＡが結合されたホスファチジルセリンは、ＤＨＡを含まない大豆レシチン由来のホスファチジルセリンに比べて脳内へのＤＨＡ伝達が可能であると言える。
【００１２】
特許第３７９１９５１号では、ＤＨＡ、ＥＰＡのような高度不飽和脂肪酸を有するホスファチジルセリン含有組成物の製造方法が開示されている。この特許では、天然レシチン原料として（i）海産魚類の頭部組織から抽出したレシチン、または（ii）高度不飽和脂肪酸を含有した魚油または植物油が添加された飼料を摂取した鶏の卵黄から抽出したレシチンが使用されている。
【００１３】
しかし、魚類由来のレシチンは、未だ量産または商業的に販売されていない。また酸化安定性が著しく劣るため、酸敗しやすく、ＤＨＡ、ＥＰＡのような多価不飽和脂肪酸を有するリン脂質が得られないため、全量廃棄されている。卵黄由来のレシチンは、動脈硬化などをもたらすコレステロールが多量含有され、卵黄を用いて製造されるホスファチジルセリンにはコレステロールが含まれるようになり、好ましくない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明者らは、上記のような問題点を解決するため、非常に高い抗酸化効果を有する天然のアスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ、ＥＰＡのような高度不飽和脂肪酸と結合したホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンなどを含む、クリル由来のリン脂質に着目した。ＤＨＡまたはＥＰＡが結合されているリン脂質は、そうでないリン脂質に比べて酸化安定性が劣ることがあるが、クリル由来のリン脂質は、高い抗酸化能を有するアスタキサンチンを含んでいるため、リン脂質の酸化安定性を高めることができる。このようなクリル由来のリン脂質を原料として、セリン及びホスホリパーゼＤで処理して反応させると、脳内に存在するホスファチジルセリンと同様程度のＤＨＡ含量を有するホスファチジルセリン含有組成物を製造することができる。
【００１５】
従って本発明の目的は、アスタキサンチンを含有するクリル由来のリン脂質を用いて、アスタキサンチンとＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合しいるホスファチジルセリンとを含有する組成物を製造する方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の他の目的は、上記の方法により製造され、アスタキサンチンとＤＨＡ−及び／又はＥＰＡ−結合したホスファチジルセリンとを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供することにある。
【００１７】
本発明のまた他の目的は、上記のような組成物を含む脳機能及び認知機能改善用健康補助食品及び薬剤学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記の目的を達成するため、本発明は、アスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択される少なくとも１つと結合したクリル由来のリン脂質を、ホスホリパーゼＤ及びセリンで処理してリン脂質とセリンとを反応させるステップを含む、アスタキサンチンとＤＨＡ及びＥＰＡから選択される少なくとも１つと結合されたホスファチジルセリンとを含有する組成物の製造方法を提供する。
【００１９】
また上記の目的を達成するために、本発明は、上記の方法により製造され、アスタキサンチンとＤＨＡ−及び／又はＥＰＡ−から選択される少なくとも１つと結合したホスファチジルセリンとを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供する。
【００２０】
さらに、上記の目的を達成するため、本発明は、上記のような組成物を含む脳機能及び認知機能改善用健康補助食品、ならびに薬剤学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の製造方法によれば、クリル由来のリン脂質を利用することで、従来の、多くの臨床結果が立証されているたウシ脳内に存在するホスファチジルセリンと同程度含量の、１０％程度のＤＨＡが結合された形態のホスファチジルセリンを含有すると共に、酸化安定性の低下を防止するための天然のアスタキサンチンを含有するため、別に抗酸化剤で処理することなく非常に安定した組成物を容易に提供することができ、非常に効率的である。従って、上記のような方法により製造された、アスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したホスファチジルセリンを含有する組成物は、既存の、多くの臨床試験で効能が立証されているウシ脳由来のホスファチジルセリンと同程度のＤＨＡを含有しているため、ＤＨＡが結合されていない大豆由来のホスファチジルセリンなどに比べ脳機能改善効果が非常に優れているだけでなく、別の抗酸化剤を添加することなく天然のアスタキサンチンそれ自体によって高い抗酸化効果が得られると共に、貯蔵安定性及び脳細胞保護機能に優れているという長所を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の実施例１における組成物の室温（２５℃）での酸化安定性試験の結果を示すグラフである。
【図２】大豆由来のホスファチジルセリン投与群及びクリル由来のホスファチジルセリン投与群に対する水中迷路試験（６日間）において、１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定した獲得施行の結果を示す。
【図３】大豆由来のホスファチジルセリン投与群及びクリル由来のホスファチジルセリン投与群に対する水中迷路試験の最終日（７日目）に、逃避台を除去し、逃避台領域に留まる程度を測定する把持施行の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明に係るアスタキサンチンを含有し、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡと結合したホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法は、アスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したクリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを処理してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む。
【００２４】
クリルとは、オキアミ目（ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ Ｅｕｐｈａｕｓｉａｃｅａ）に属する、エビによく似た海洋無脊椎動物である。
【００２５】
クリル由来のリン脂質は、当業界で周知の方法により得ることができ、例えばクリルを粉砕した後、ヘキサン、酒精などの溶媒を用いて抽出及び濃縮して得ることができる。特に、クリル由来のリン脂質はホスファチジルコリンの含量が高いため、酒精のみで抽出した後、濃縮することができる。具体的には、乾燥クリルを粉砕し、９５％酒精を用いて２０℃で１時間窒素充填下で抽出した後、抽出液を冷蔵状態で１２時間静置した。次いで上澄み液を採取して減圧濃縮及び乾燥し、クリル由来のリン脂質を得た。
【００２６】
このようにして得られたクリル由来のリン脂質は、アスタキサンチンと、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡと結合したホスファチジルコリンとを大部分含む。またアスタキサンチンは、リン脂質の総重量を基準に０．０２〜０．０８重量％の量で含まれ得る。ＤＨＡ及びＥＰＡは、クリル由来のリン脂質内のホスファチジルコリンに含まれた脂肪酸の総重量を基準にそれぞれ１０〜２０重量％及び２５〜３５重量％の量で含まれ得る。
【００２７】
前記クリル由来のリン脂質に対するホスホリパーゼＤは、０．０５〜０．２重量比、好ましくは、０．１〜０．１５重量比で使用され、セリンは、０．５〜３重量比、好ましくは、１〜２重量比で使用され得る。
【００２８】
上記の酵素反応は、当業界で公知の方法で行うことができ、例えば、３５〜４５℃で２０〜２４時間、酢酸エチルなどの溶媒を用いて行うことができる。
【００２９】
ホスホリパーゼＤは、微生物由来、キャベツなどの植物由来のものであり得る。
【００３０】
最終的に得られた組成物は、粉末状またはペースト状または液状であり得る。
【００３１】
アスタキサンチンとは、クリル、エビ、カニなどに分布する天然カロチノイド系色素の一種で、甲殻類を初めとした水生動物に広く分布する。多くの場合、赤味を帯び、脂溶性色素でタンパク質と結合した色素タンパク質として存在する。カニを煮ると赤くなるのは、色素タンパク質が分解されてアスタキサンチンの色が現われるためである。アスタキサンチンの抗酸化能は、ビタミンＥの１００倍程度であることが知られている。このようなアスタキサンチンの抗酸化効果は、ＤＨＡ及びＥＰＡが結合し、酸化安定性に劣るリン脂質の酸化安定性の低下を防止すると共に、脳細胞保護にも肯定的である。
【００３２】
またクリル由来のリン脂質には、脳機能に重要なＤＨＡが１０％程度結合したホスファチジルコリンのようなリン脂質が含まれているため、本発明の方法によりホスホリパーゼＤ及びセリンを加えて酵素反応させると、認知能力、初期痴呆の改善などにおいて多くの臨床結果が報告されているウシ脳由来のホスファチジルセリンと同程度の、１０％水準以上のＤＨＡが結合したホスファチジルセリン含有組成物を得ることができる。また、ＤＨＡの他に、血流を円滑にして血管性疾患などに有効なＥＰＡなどが結合したホスファチジルセリンを含むこともできる。この方法によれば、血流に関連した有用な効能を示し得る組成物が高収率かつ容易に得られ、非常に効率的である。
【００３３】
本発明は、また、上記のような製造方法により製造され、天然のアスタキサンチンを含有し、かつＤＨＡ及び／又はＥＰＡが結合したホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物を提供する。
【００３４】
前記組成物において、アスタキサンチンの含量は、好ましくは組成物の総重量を基準に０．０２〜０．０８重量％である。前記組成物において、ホスファチジルセリンの含量は、組成物の総重量を基準に２０〜９０重量％、特に２０〜４０重量％であり得る。前記ホスファチジルセリンに結合したＤＨＡの含量は、ホスファチジルセリンに結合した脂肪酸の総重量を基準に１０〜２０重量％であり、ＥＰＡの含量は、２５〜３５重量％であり得る。
【００３５】
本発明の組成物は、脳機能及び認知機能改善の効果を奏し、記憶力喪失、記憶力損傷、特に習得力の欠陥及び／又は活動記憶喪失に関連した記憶力の損傷、痴呆、健忘症、アルツハイマー病などの予防及び治療に効果的に使用することができる。
【００３６】
また、本発明の組成物は、脳機能障害の予防及び治療を目的として使用することができると共に、健康なヒトの学習能力、記憶力または反射反応能力などの脳機能をさらに向上させることを目的として使用することもできる。
【００３７】
本発明の組成物は、薬剤学または食品学分野で公知の方法によって製剤化することができ、それ自体または薬剤学的に許容可能な担体、賦形剤などと混合して、薬剤学的または食品学的に通常許容される製剤、例えば、液剤、シロップ剤、カプセル剤などに製剤化することができる。これらは、経口または非経口で投与することができる。
【００３８】
上記のような本発明の組成物を含む液剤、カプセル剤などは、健康補助食品として使用することができる。なお「健康補助食品」とは、人体に有用な機能性を有する原料や成分を使用して、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液状剤、丸剤などの剤形として製造加工した健康食品または飲料、ヨーグルト、チーズなどの機能性食品を意味する。
【００３９】
本発明の組成物は、体内での活性成分の吸収度、排泄速度、患者の年齢及び体重、性別及び状態、治療すべき病気の重症度などによって適切に選択されるが、通常成人一日当たり１００〜４００ｍｇ／６０ｋｇ、好ましくは、２００〜３００ｍｇ／６０ｋｇ投与することが好ましい。このように剤形化した単位投与タイプの製剤は、必要によって一定時間ごとに数回投与することができる。
【００４０】
本発明の組成物は、常温での酸化安定性試験において、１３ヶ月間酸敗が発生せず（試験例１参照）、老化ラットを用いた水中迷路学習試験において、大豆由来のホスファチジルセリンに比べて空間記憶力増進効果が非常に優れていることが示された（試験例２参照）。従って、本発明で製造した組成物は、脳機能改善用組成物として効果的に使用することができる。
【００４１】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらは、本発明の理解を容易にするためのもので、本発明は、これらに限定されない。
【実施例】
【００４２】
＜実施例１＞
Ｌ−セリン２００ｇを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌに入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。ここに、アスタキサンチン含量３４０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量が３５重量％であるクリル由来のリン脂質（ＤＳ−Ｋｒｉｌｌ ＰＣ３０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１００ｇを酢酸エチル５００ｍｌに溶解させた溶液を混合し、２００ｒｐｍで攪拌しながら４０℃で２４時間反応させた。
【００４３】
次いで、反応溶液を静置した後、上層部を回収して水で３回洗浄して残余のセリンと酵素を除去した後、溶媒層を濃縮してアスタキサンチンとホスファチジルセリンとを含有した組成物（８５．２ｇ、リン脂質に対する収率：８５．２％）を得た。得られた組成物において、ホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ３０．５重量及び３３０ｐｐｍであった。
【００４４】
＜実施例２＞
Ｌ−セリン２００ｇを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌに入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。ここに、アスタキサンチン含量が４５０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量が５５重量％である、クリル由来のリン脂質（ＤＳ−ｋｒｉｌｌ ＰＣ５０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１００ｇを酢酸エチル５００ｍｌに溶解させた溶液を混合した後、２００ｒｐｍで攪拌しながら４０℃で２４時間反応させた。
【００４５】
次いで、反応溶液を静置した後、溶媒相を回収して水で３回洗浄し残余のセリンと酵素を除去した。次いで溶媒相を濃縮してアスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有した組成物（８５．９ｇ、リン脂質に対する収率：８５．９％）を得た。得られた組成物におけるホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ５０．１重量％及び４４８ｐｐｍであった。
【００４６】
＜実施例３＞
アスタキサンチン含量３４０ｐｐｍ、ホスファチジルコリン含量３５重量％であるクリル由来のリン脂質（ＤＳ−Ｋｒｉｌｌ ＰＣ３０、（株）ＤＯＯＳＡＮ社）１５０ｇをアセトンで洗浄して中性脂質を除去した。次いで得られた沈殿物を濃縮して得たリン脂質５０ｇに酢酸エチル５００ｍｌを入れ、溶解させた。
【００４７】
ここに、Ｌ−セリン２００ｇと酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．６）４００ｍｌを入れ、放線菌由来のホスホリパーゼＤ２ｇ（４０００ｕｎｉｔ／ｇ）を加えた後、４０℃において２００ｒｐｍで攪拌しながら、４０℃で２４時間反応させた。
【００４８】
反応溶液を静置した後、上層部を回収して水で３回洗浄して残余のセリンと酵素を除去した。次いで溶媒層を濃縮し、アセトンを添加してろ過した後、減圧乾燥して粉末状のアスタキサンチン及びホスファチジルセリン含有組成物（３５．１ｇ、収率：７０．２％）を得た。得られた粉末組成物において、ホスファチジルセリン及びアスタキサンチンの含量は、ＨＰＬＣ分析を行った結果、それぞれ９０．５重量％及び２０５ｐｐｍであった。
【００４９】
実施例１及び３で得られた組成物におけるＤＨＡ及びＥＰＡの含量は、下記の表１に示す。
【００５０】
【表１】
【００５１】
＜試験例１＞酸化安定化試験
実施例１で製造されたアスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有した組成物３ｇを使用し、酸化安定度測定装置（Ｒａｎｃｉｍａｔ）を用いて８５、９０、１００℃での時間経過に従う誘導期間を求めた。得られた結果をアレニウス方程式に導入して誘導期間と温度との相関関係を求め、常温（２５℃）での誘導期間を計算した。
【００５２】
その結果を図１に示す。図１からわかるように、常温で１３ヶ月間酸敗が発生しなかった。これにより、本発明の組成物の流通期限は、常温で１年間以上であることができると判断され、非常に安定した組成物であると言える。
【００５３】
＜試験例２＞水中迷路試験（獲得施行＋把持施行）
１２ヶ月齢の老化雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（体重：５００〜５３０ｇ、投与１群当たり６匹）を対象に、大豆由来のホスファチジルセリン（ＤＳ−ＰＳ ６０、以下「大豆ＰＳ」と略する）及び実施例３で得られた組成物（以下「クリルＰＳ」と略する）を、それぞれ毎日５０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇで１週間摂取させた後、水中迷路学習試験を行った。
【００５４】
具体的には、大豆ＰＳ投与群とクリルＰＳ投与群に対して、６日間１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定した。獲得施行の結果を図２に示す。図２において、ＮＯＲＭＡＬは、正常群を示し、ＡＧは、何等摂取しなかった対照群（老化ラット）を示し、ＡＧ−ＳＯＹ−ＰＳ５０は、老化ラットに毎日大豆ＰＳを５０ｍｇ／ｋｇずつ投与した大豆ＰＳ投与群を示し、ＡＧ−ＫＲＩＬＬ−ＰＳ２０は、老化ラットに毎日実施例３のクリルＰＳを２０ｍｇ／ｋｇずつ投与したクリルＰＳ投与群を示す。図２に示すように、１８０秒内に逃避台に到達するまでの時間を測定する獲得施行において、一日目には有意な差が認められなかったが、学習が進行するに従い、最終日（６日目）には逃避台に到達するまでの時間について、グループ間で有意な差が認められた。測定日に従うグループ別の死後検定の結果、大豆ＰＳ投与群と実施例３のクリルＰＳ投与群では、逃避台に到達するまでの時間が統計的に有意に減少し、空間認知記憶学習遂行能力に対して増進効果が示された。特に、クリルＰＳ投与群は、大豆ＰＳ投与群に比べて少量の摂取にもかかわらず、逃避台への到達時間が相対的に短くなり、これは、本発明のクリルＰＳが通常の大豆ＰＳに比べて脳機能及び認知機能改善に一層効果的であることを示している。
【００５５】
なお、水中迷路学習において、最後日（７日目）に逃避台を除去し、逃避台に留まる時間を測定する把持施行を行った。その結果を図３に示す。逃避台を除去しても、記憶力が良いラットは、逃避台が置かれていた区間で留まる時間が長くなる。クリルＰＳの方が大豆ＰＳより逃避台区間に留まる時間が長いという結果が得られ、本発明のクリルＰＳが大豆ＰＳに比べて空間記憶効果に優れていることがわかる。
【００５６】
本発明の組成物を使用して次のように製剤または食品を製造することができる。
製造例１：カプセル剤の製造
実施例１の組成物 ２００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
澱粉 ９３ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合し、通常のカプセル製造法に従ってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５７】
製造例２：カプセル剤の製造
実施例２の組成物 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
澱粉 ９３ｍｇ
タルク ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合し、通常のカプセル製造法に従ってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５８】
製造例３：液剤の製造
実施例２の組成物 ２００ｍｇ
砂糖 ２０ｇ
異性化糖 ２０ｇ
レモン香り 適量
精製水（を加えて全体１００ｍｌ）
上記の成分を液剤の製造方法に従って混合し、１００ｍｌ褐色瓶に充填し、滅菌して液剤を製造する。
【００５９】
製造例４：飲料の製造
実施例１の組成物 ５重量％、食用色素 ０．０５重量％、オレンジエッセンス ０．０５重量％、果糖 ５．０重量％、クエン酸 ０．１重量％、ビタミンＣ ０．０５重量％を含む一般機能性飲料ベースを添加した組成物を製造した後、精製水を適量加えて飲料を製造した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくも１つを構成脂肪酸として結合するリン脂質を含有する、クリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを混合してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む、アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくとも１つが構成脂肪酸として結合するホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法。
【請求項２】
前記組成物が、ＤＨＡと結合したホスファチジルセリン、ＥＰＡと結合したホスファチジルセリン、ならびにＤＨＡ及びＥＰＡと結合したホスファチジルセリンから選択された２種以上を含有することを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法により製造された、アスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物。
【請求項１】
アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくも１つを構成脂肪酸として結合するリン脂質を含有する、クリル由来のリン脂質に、ホスホリパーゼＤ及びセリンを混合してリン脂質とセリンを反応させるステップを含む、アスタキサンチンを含有し、かつ、ＤＨＡ及びＥＰＡから選択された少なくとも１つが構成脂肪酸として結合するホスファチジルセリンを含有する組成物の製造方法。
【請求項２】
前記組成物が、ＤＨＡと結合したホスファチジルセリン、ＥＰＡと結合したホスファチジルセリン、ならびにＤＨＡ及びＥＰＡと結合したホスファチジルセリンから選択された２種以上を含有することを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法により製造された、アスタキサンチン及びホスファチジルセリンを含有する、脳機能及び認知機能改善用組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−１０２０７０（Ｐ２０１２−１０２０７０Ａ）
【公開日】平成２４年５月３１日（２０１２．５．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２７０６７３（Ｐ２０１０−２７０６７３）
【出願日】平成２２年１２月３日（２０１０．１２．３）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２２年６月４日 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ？＿ｏｂ＝ＭＩｍｇ＆＿ｉｍａｇｅｋｅｙ＝Ｂ６ＴＢＲ−５０７ＢＨＶＦ−５−Ｃ＆＿ｃｄｉ＝５１４９＆＿ｕｓｅｒ＝１０＆＿ｐｉｉ＝Ｓ０２７８５８４６１０００２１５０＆＿ｏｒｉｇｉｎ＝ｂｒｏｗｓｅ＆＿ｚｏｎｅ＝ｒｓｌｔ＿ｌｉｓｔ＿ｉｔｅｍ＆＿ｃｏｖｅｒＤａｔｅ＝０８％２Ｆ１６％２Ｆ２０１０＆＿ｓｋ＝９９９６５９９９３＆ｗｃｈｐ＝ｄＧＬｚＶｔｚ−ｚＳｋｚＳ＆ｍｄ５＝ａｄ７１ｆｅ９ｂ１７ｆａａｄ２５５０ｂ８９２ｄｄ５５７０１ｄｄ７＆ｉｅ＝／ｓｄａｒｔｉｃｌｅ．ｐｄｆを通じて発表。
【出願人】（５０７２９９３６７）ドゥサン コーポレーション (10)
【出願人】（５１０３２０６０１）北海道ファインケミカル株式会社 (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年５月３１日（２０１２．５．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月３日（２０１０．１２．３）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２２年６月４日 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ？＿ｏｂ＝ＭＩｍｇ＆＿ｉｍａｇｅｋｅｙ＝Ｂ６ＴＢＲ−５０７ＢＨＶＦ−５−Ｃ＆＿ｃｄｉ＝５１４９＆＿ｕｓｅｒ＝１０＆＿ｐｉｉ＝Ｓ０２７８５８４６１０００２１５０＆＿ｏｒｉｇｉｎ＝ｂｒｏｗｓｅ＆＿ｚｏｎｅ＝ｒｓｌｔ＿ｌｉｓｔ＿ｉｔｅｍ＆＿ｃｏｖｅｒＤａｔｅ＝０８％２Ｆ１６％２Ｆ２０１０＆＿ｓｋ＝９９９６５９９９３＆ｗｃｈｐ＝ｄＧＬｚＶｔｚ−ｚＳｋｚＳ＆ｍｄ５＝ａｄ７１ｆｅ９ｂ１７ｆａａｄ２５５０ｂ８９２ｄｄ５５７０１ｄｄ７＆ｉｅ＝／ｓｄａｒｔｉｃｌｅ．ｐｄｆを通じて発表。
【出願人】（５０７２９９３６７）ドゥサン コーポレーション (10)
【出願人】（５１０３２０６０１）北海道ファインケミカル株式会社 (1)
【Ｆターム（参考）】
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