グラム陰性菌に対して選択的殺菌活性を有するバッファー溶液およびそれを使用する方法
【課題】本発明は概して、静菌活性および／または殺菌活性を有するバッファー溶液の分野に関する。
【解決手段】本発明により、グラム陰性菌に対して選択的に殺菌活性を有する医薬製剤のためのバッファー溶液が提供される。また本発明により、哺乳類に血流感染の発生を減少させる、前記バッファー溶液の使用方法が提供される。
【解決手段】本発明により、グラム陰性菌に対して選択的に殺菌活性を有する医薬製剤のためのバッファー溶液が提供される。また本発明により、哺乳類に血流感染の発生を減少させる、前記バッファー溶液の使用方法が提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年９月７日に出願した米国特許出願６０／９７０，７１６の優先権を主張し、当該出願の内容全体は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は概して、静菌活性および／または殺菌活性を有するバッファー溶液の分野に関する。より具体的には、本発明は、好ましくはグラム陰性菌に対して殺菌活性を有するバッファー溶液に関する。
【背景技術】
【０００３】
ｐＨを維持するために、および投与（例えば、注射による）の前に活性薬剤（「ＡＰＩｓ」）を可溶化または希釈するために、バッファーを使用することはありふれている。しかし、多くのバッファーは、中性のｐＨを維持し、微生物の増殖を助長する成分を含み、これは敗血病およびその他の望ましくない感染に関連する合併症の原因となりうる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
グラム陰性菌は、病院環境中に普通に存在し、根絶および／または制御することが困難であるため、特に厄介な種類の微生物である。一つにはグラム陰性菌はとりわけ処置が困難な細菌であるため、この種類のバクテリアへの感染は、患者が敗血症になった場合の疾病率／死亡率がより高い傾向にある。またグラム陰性菌は、静脈内投与などにおいて使用される長期内在のカテーテルについて起こりうる水の汚染に関与する。よって、グラム陰性菌への特異性を伴う抗菌活性を有するバッファーシステムが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの態様において、活性薬剤を含む医薬製剤においてグラム陰性菌を選択的に殺菌する方法、およびグラム陽性菌の増殖を阻害する方法が提供され、当該方法は、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨ、および低い緩衝能力を有するバッファーとともに活性薬剤を供給することを含み、ここで医薬製剤は、単独の活性薬剤としてエポプロステノールナトリウムを含まない。バクテリア以外に、バッファーはさらに真菌類、カビまたはその両方の増殖を阻害しうる。好ましくは、バッファーは約１０〜約１２のｐＨ、より好ましくは約１０．２〜約１０．８のｐＨを有する。その他の態様において、バッファーは約３〜約４．５のｐＨ、より好ましくは約３．５〜約４．５のｐＨを有する。
【０００６】
バッファーはグリシンを含んでいてもよく、具体的な態様において、バッファーはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤である。すなわち、バッファーは、ｐＨを１０．２〜１０．８に調節するために加えられる、グリシンおよび水酸化ナトリウムを含む。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。活性薬剤は、トレプロスチニルナトリウム（本明細書ではトレプロスチニルと称する場合がある）であってもよく、好ましくは約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルナトリウムが供与されうる。
【０００７】
バッファーは、非経口用のために医薬として許容される、ソルビン酸またはクエン酸またはその他の弱酸を含んでいてもよい。３〜４．５の最終ｐＨを達成するために、ｐＨは塩酸または水酸化ナトリウムにより調節されうる。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。
【０００８】
本発明の別の態様において、活性薬剤で処置される哺乳類において血流感染の発生を抑制する方法が提供され、当該方法は、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨ、および低い緩衝能力を有するバッファーとともに活性薬剤を哺乳類に投与することを含み、ここで医薬製剤はエポプロステノールナトリウムではなく、投与によりグラム陰性菌が抑制され、グラム陽性菌の増殖が阻害される。ある場合において、ヒトである対象は肺動脈高血圧症に罹患している。
【０００９】
好ましくは、バッファーは約１０〜約１２のｐＨ、より好ましくは約１０．２〜約１０．８のｐＨ、および低い緩衝能力を有する。あるいは、バッファーは約３〜約４．５のｐＨ、より好ましくは約３．５〜約４．５のｐＨ、および低い緩衝能力を有する。バッファーはグリシンを含んでいてもよく、具体的な態様において、バッファーはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤である。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。活性薬剤は、トレプロスチニルナトリウムであってもよく、好ましくは約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルが供与されうる。バッファーの選択は望ましいｐＨに基づく。バッファーの成分は望ましいｐＨに近いｐＫａを有するべきであり、注入後の血中でのｐＨの変化を避けるために、緩衝能力は低い方がよい。当該バッファーの好ましい緩衝能力は０．０１以下である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ＢＷＦＩの「ブランク」の注射（Ａ）およびＢＷＦＩにより希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図２】図２は、ＢＮＳの「ブランク」の注射（Ａ）およびＢＮＳにより希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図３】図３は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤（Ａ）およびそれで希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図４】図４は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中の０．００４ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルのＴ０（Ａ）およびＴｉｎｉｔｉａｌ（Ｂ）でのクロマトグラムである。
【図５】図５は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中の０．１３ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルのＴ０（Ａ）およびＴｉｎｉｔｉａｌ（Ｂ）でのクロマトグラムである。
【図６】図６は、０．００４ｍｇ／ｍＬを含む医薬製剤での、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（グラム陽性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＷＦＩ、ＮＳ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。 図６〜１５の説明は以下の通りである：（白丸）：ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中のＦＬＯＬＡＮ（登録商標）（黒丸）：ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中のトレプロスチニル（白四角）：注射用滅菌水中のトレプロスチニル（黒四角）：注射用静菌水中のトレプロスチニル（白菱形）：通常の生理食塩水（０．９％）中のトレプロスチニル（黒菱形）：静菌の通常の生理食塩水中のトレプロスチニル（白三角）：５％デキストリンの注射用水溶液中のトレプロスチニル（Ｄ５Ｗ）
【図７】図７は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）の値をＬｏｇ１として記録する。
【図８】図８は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（Ｄ５Ｗ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図９】図９は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌類）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【図１０】図１０は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（カビ）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【図１１】図１１は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（グラム陽性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＷＦＩ、ＮＳ、Ｄ５Ｗ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図１２】図１２は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＮＳ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図１３】図１３は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）の値をＬｏｇ１として記録する。
【図１４】図１４は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌類）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。ＮＳ中のトレプロスチニルについての０．２５時間での≧Ｌｏｇ３．４８の値をＬｏｇ３．４８として記録する。
【図１５】図１５は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（カビ）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、医薬製剤中での抗菌剤としての、特定のｐＨ範囲を保持するためのバッファー系の使用を指向する。本明細書で使用される用語「バッファー」は、固体の（例えば、凍結乾燥した）医薬を溶解させるため、または液体医薬を希釈するための希釈剤として使用されうる、制御されたｐＨを有する任意の溶液を意味する。本発明によれば、本明細書に記載されるバッファーは、細菌類、カビ類および真菌類を含む全てではないが多くの微生物に対して静菌活性を示し、さらにグラム陰性菌に対して殺菌活性を示すｐＨを維持する。グラム陰性菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓが挙げられる。グラム陰性菌は病院環境においてありふれた感染源であり、それ故、緩衝能力が低く、約１０を上回るかまたは約４．５を下回るｐＨを維持し、グラム陰性菌に特異的に殺菌活性を有するバッファーは必要とされている。例として、グラム陽性菌には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、およびＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍが挙げられる。
【００１２】
「静菌的」とは、バッファー溶液中に存在しうる、または存在するようになりうる、微生物の拡大を遅延させるまたは妨げる能力として定義される。言い換えれば、静菌活性は、バッファー溶液中に存在しうる、または存在するようになりうる、微生物殺傷する活性として本明細書に定義される殺菌活性を含まない。微生物は、例えば菌類、カビ類および真菌類などの単細胞生物を含むように本明細書では広く定義される。
【００１３】
本発明者らは、高いｐＨ（＞１０）または低いｐＨ（＜４．５）を有するバッファーがグラム陰性菌に対して特異的な殺菌活性を有し、グラム陽性菌およびその他の微生物に対して静菌活性を有することを知得した。理論に固執するものでなく、また理論に拘束されないが、グラム陰性菌とグラム陽性菌の生化学的、おそらく細胞壁の生化学的な差異が、高いｐＨバッファーへの異なる感受性の主たる原因でありうると現在は考えられている。本発明の背景において、高いｐＨは約９から約１２、好ましくは約１０から約１２のｐＨ値である。本発明の好ましい態様において、バッファーは約１０．２〜１０．８、または約３．５〜約４．５のｐＨを有する。
【００１４】
高いｐＨに加えて、本発明者らは、グリシンを含むバッファーが特に有益であることを知得した。そのような態様において、グリシンは約３０％から約８０％、好ましくは約４５％から約６５％、そして最も好ましくは約５０％から約６０％の濃度（ｗ／ｗ）で存在する。用語「約」は、記載された数字に僅かで許容される変動を含めるために、当該技術分野における計算および測定に内在する誤差の認識において本明細書に使用される。
【００１５】
グリシンに加えて、本明細書に記載したバッファーは、当該技術分野で知られたものを含む、本明細書で述べた範囲にｐＨを保持することができるその他のいかなるバッファー系を含みうる。
【００１６】
本発明の具体的な態様において、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標、エポプロステノールナトリウム）の希釈剤にバッファーの成分としてグリシンを使用する。以下により詳細を記載するように、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の希釈剤が予期せぬことに、グラム陰性菌に対して特異的な殺菌活性を、および残りの微生物に対して静菌活性を有することを発見した。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の希釈剤は、５０ｍＬに９４ｍｇのグリシン、７３．３ｍｇの塩化ナトリウム、およびｐＨを１０．２から１０．８に調製するための水酸化ナトリウムを含む（グリシンに対して約４４％のＮａＣｌ）。
【００１７】
活性医薬成分（「ＡＰＩ」）の化学特性が実質的に、例えば約１０より低くなるようにバッファーのｐＨを低下させることがなければ、本明細書に記載のバッファーは、高いｐＨにおいて安定であるいかなるＡＰＩにも好適でありうる。よって以下の実施例によらず、本発明は、いずれか１つまたはいずれか１種類のＡＰＩ、さらにいえば限定された範囲の濃度に限定されるべきではない。さらに、バッファーの新規で予期できない殺菌活性は、注射により投与される医薬にとりわけ好適であり得る。実際、本発明の１つの態様において、本明細書に記載された高いまたは低いｐＨのバッファーの使用は、活性薬剤により処置される哺乳類での血流感染の発生を抑制しうると考えられる。しかし本発明は、注射用（静脈内注射を含む）に処方される医薬に限定されず、溶解および／または希釈（例えば、経口投与用）が必要となるいかなる医薬にも限定されない。
【００１８】
本発明の具体的な態様において、記載されるバッファーシステムはトレプロスチニルナトリウムを使用する。より具体的には、実施例により次に記載されるように、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の希釈剤がトレプロスチニルナトリウムを緩衝するために使用される。
【００１９】
［実施例］
１００ｍＬ ＣＡＤＤデリバリーデバイスによるトレプロスチニルの適合性試験を行った。より具体的には、注射用静菌水（「ＢＷＦＩ」）または静菌の通常の生理食塩水（「ＢＮＳ」）（その両方ともパラベンを含んで保存されている）により希釈したトレプロスチニルの適合性と安定性を確認した。トレプロスチニルが処方されうる濃度全体を含む、トレプロスチニル０．００４ｍｇ／ｍＬおよび０．１３ｍｇ／ｍＬのサンプル溶液を調製し、４０℃および周囲相対湿度（「ＲＨ」）で貯蔵しながら、５２時間の期間にわたり連続的にポンプで送液するＳＩＭＳ Ｄｅｌｔｅｃ，Ｉｎｃ．ＣＡＤＤ−Ｌｅｇａｃｙ（登録商標）１（モデル６４００）ポンプデリバリーデバイスに配置した。
【００２０】
特定の時点において（例えば、開始時Ｔ０、２４時間および５２時間）、サンプルを送液後のチューブの末端から回収し、外観、ｐＨおよびトレプロスチニルの濃度を確認した。さらに、溶液を約２日間ぐらいにわたる抗菌効果試験（「ＡＥＴ」）に付した。同様の実験手法をＦｌｏｌａｎ再構成溶液についても行った。しかし、溶液中での医薬の限られた安定性のために、無菌試験およびＡＥＴ試験は室温で８時間後のみＦＬＯＬＡＮ（登録商標）ついて行った。
【００２１】
トレプロスチニルの安定性は、有効性が十分に確認された安定性測定ＨＰＬＣアッセイにより観測された。トレプロスチニルについてのクロマトグラフィーにおいて「静菌の」溶液に存在するパラベンが影響を及ぼすかどうかを確認するために、予備的な実験によりパラベンのピークがトレプロスチニルのピークまたはいずれかの不純物のピークを妨害しないことを確認した。ＢＷＦＩおよびＢＮＳの溶液、およびＢＷＦＩおよびＢＮＳで希釈されたトレプロスチニルはＨＰＬＣを使用して分析した。図１および２は、メチル−またはエチル−パラベンのいずれかからのパラベンのピークがトレプロスチニルのピークを妨害しない（例えば、重ならない）ことを示す。また、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤とトレプロスチニルのクロマトグラフィーを行う上での支障もなかった（図３）。
【００２２】
また、希釈溶液中でのトレプロスチニルの予想される濃度をカバーするために低レベルの直線性検討も行った。トレプロスチニルの５つの溶液を０．００２、０．０１、０．０５、０．１および０．１５ｍｇ／ｍＬ（１．０ｍｇ／ｍＬ標準溶液から希釈）で調製し、各溶液を２度注入した。目的は、分析中に０．１ｍｇ／ｍＬでの１点の標準を使用するために、希釈濃度範囲内での検出器の応答とトレプロスチニルの濃度の間の直線性を確認することであった。トレプロスチニルについての検出器の応答は、０．００２〜０．１５ｍｇ／ｍＬまでは直線的であることが確認された。本実験の相関係数（ｒ）は０．９９９９９５であり、少なくとも０．９９９との要件に適合した。
【００２３】
ＢＷＦＩ、ＢＮＳ、またはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中の０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルの溶液は、１．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリモジュリンから調製した。ＢＷＦＩ中およびＢＮＳ中の０．１３ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルの溶液は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリモジュリンから調製した。パッケージ中の説明書に概説されている手法を使用して、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のバイアルを、５ｍＬのＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤により再構成した。
【００２４】
４つの溶液の各々の一部（約２ｍＬ）をＴ０分析のために取り出した。残りの溶液を、４つ別々の１００ｍＬ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ＣａｓｓｅｔｔｅＴＭＲｅｓｅｒｖｏｉｒｓ（ＳＩＭＳ Ｄｅｌｔｅｃ，Ｉｎｃ．）に各々充填した。製造者説明書にしたがって、カセットとチューブをＣＡＤＤ−ＬｅｇａｃｙＴＭ１ ポンプに取り付けた。４つのカセット／ＣＡＤＤポンプセットを４０℃／周囲ＲＨのチェンバーに配置した。チューブの末端の針を密封したＨＰＬＣバイアル（針の穴を有する）に設置した。ポンプの流速は４０ｍＬ／２４時間にセットし、送液を開始した。最初のインターバルでの試験のために、各ポンプの溶液を別々のＨＰＬＣバイアルに回収した（約１時間）。その後、針を密封した廃棄物コンテナ（針の穴を有する）に移動させた。２４時間および５２時間の時点で、試験のために再び溶液を密封された新たなＨＰＬＣバイアルに回収した。
【００２５】
Ｔ０、初期、２４時間、および５２時間にて回収された溶液を、物理的外観、ｐＨについて分析し、トレプロスチニルについてＨＰＬＣによりアッセイした。表１および２にて、ＢＷＦＩおよびＢＮＳによりそれぞれ希釈したトレプロスチニルについての結果の概要を示す。全ての溶液の外観は透明で無色であり、目に見える粒子状物質は存在しなかった。よって、これらの結果から、いずれの濃度においてもＢＷＦＩまたはＢＮＳのトレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった。
【表１】
【表２】
【００２６】
ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中のトレプロスチニルの溶液についても同様の結果が得られた。それの概要を表３に示す。全ての溶液の外観は透明で無色であり、目に見える粒子状物質は存在しなかった。よって、これらの結果からもまた、トレプロスチニルのいずれの濃度においてもＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤のトレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった（図４および５）。よって、これらの結果から、いずれの濃度の希釈溶液のいずれにおいても希釈トレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった。
【表３】
【００２７】
トレプロスチニル溶液について、４０℃／周囲ＲＨのカセットで５２時間後に溶液を取り出し、全ての微生物についての４８時間プレーティングを含むＡＥＴをＵＳＰ ＮＦ２４ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ２＜５１＞にしたがって行った。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液について、同じ手法にしたがって試験を行ったが、溶液は室温で８時間カセット中にあったものであった。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）についても無菌性について試験を行った。
【００２８】
非経口溶液を含むカテゴリー１製品についてのＡＥＴ ＵＳＰ要件は以下の通りである：バクテリアについて、７日目に当初の算出値から１．０ｌｏｇが少なくとも減少しなければならず、１４日目に当初の算出値から３．０ｌｏｇが少なくとも減少しなければならず、２８日目に１４日目の値から増加してはならない。イーストおよびカビについて、７、１４および２８日目に当初の算出値から増加があるべきではない。
【００２９】
Ｆｌｏｒａｎ用の無菌希釈剤に希釈したＦＬＯＬＡＮ（登録商標）がＡＥＴについてのＵＳＰ要件に適合する一方で、ＢＷＦＩおよびＢＮＳ中のトレプロスチニル溶液は適合しない。これらの希釈したトレプロスチニル溶液がＡＥＴに適合しない理由は、主にグラム陰性菌について菌の減少率が十分ではないからである。しかし、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中のトレプロスチニルはＵＳＰの基準に適合する。図６〜１５を参照されたい。
【００３０】
本発明がその具体的な態様と関連して記載されているが、当該発明はさらなる変更が可能であり、この出願により本発明のいかなるバリエーション、使用および変更をも保護することが意図されることが了解されるであろう。一般的に、本発明の本質は、本発明が属する技術分野において既知で普通のプラクティス内で生じる、および本明細書で既に記載した本質的特徴を適用してもよい、および添付の特許請求の範囲にしたがって、この開示からの逸脱も包含する。
【００３１】
以上は具体的な望ましい態様に言及するが、本発明はそのように限定されないことが了解されよう。当該技術分野の当業者は、開示された態様に種々の変更を施すことができ、当該変更は本発明の範囲内にあることが意図されることに気付くであろう。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年９月７日に出願した米国特許出願６０／９７０，７１６の優先権を主張し、当該出願の内容全体は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は概して、静菌活性および／または殺菌活性を有するバッファー溶液の分野に関する。より具体的には、本発明は、好ましくはグラム陰性菌に対して殺菌活性を有するバッファー溶液に関する。
【背景技術】
【０００３】
ｐＨを維持するために、および投与（例えば、注射による）の前に活性薬剤（「ＡＰＩｓ」）を可溶化または希釈するために、バッファーを使用することはありふれている。しかし、多くのバッファーは、中性のｐＨを維持し、微生物の増殖を助長する成分を含み、これは敗血病およびその他の望ましくない感染に関連する合併症の原因となりうる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
グラム陰性菌は、病院環境中に普通に存在し、根絶および／または制御することが困難であるため、特に厄介な種類の微生物である。一つにはグラム陰性菌はとりわけ処置が困難な細菌であるため、この種類のバクテリアへの感染は、患者が敗血症になった場合の疾病率／死亡率がより高い傾向にある。またグラム陰性菌は、静脈内投与などにおいて使用される長期内在のカテーテルについて起こりうる水の汚染に関与する。よって、グラム陰性菌への特異性を伴う抗菌活性を有するバッファーシステムが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの態様において、活性薬剤を含む医薬製剤においてグラム陰性菌を選択的に殺菌する方法、およびグラム陽性菌の増殖を阻害する方法が提供され、当該方法は、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨ、および低い緩衝能力を有するバッファーとともに活性薬剤を供給することを含み、ここで医薬製剤は、単独の活性薬剤としてエポプロステノールナトリウムを含まない。バクテリア以外に、バッファーはさらに真菌類、カビまたはその両方の増殖を阻害しうる。好ましくは、バッファーは約１０〜約１２のｐＨ、より好ましくは約１０．２〜約１０．８のｐＨを有する。その他の態様において、バッファーは約３〜約４．５のｐＨ、より好ましくは約３．５〜約４．５のｐＨを有する。
【０００６】
バッファーはグリシンを含んでいてもよく、具体的な態様において、バッファーはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤である。すなわち、バッファーは、ｐＨを１０．２〜１０．８に調節するために加えられる、グリシンおよび水酸化ナトリウムを含む。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。活性薬剤は、トレプロスチニルナトリウム（本明細書ではトレプロスチニルと称する場合がある）であってもよく、好ましくは約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルナトリウムが供与されうる。
【０００７】
バッファーは、非経口用のために医薬として許容される、ソルビン酸またはクエン酸またはその他の弱酸を含んでいてもよい。３〜４．５の最終ｐＨを達成するために、ｐＨは塩酸または水酸化ナトリウムにより調節されうる。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。
【０００８】
本発明の別の態様において、活性薬剤で処置される哺乳類において血流感染の発生を抑制する方法が提供され、当該方法は、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨ、および低い緩衝能力を有するバッファーとともに活性薬剤を哺乳類に投与することを含み、ここで医薬製剤はエポプロステノールナトリウムではなく、投与によりグラム陰性菌が抑制され、グラム陽性菌の増殖が阻害される。ある場合において、ヒトである対象は肺動脈高血圧症に罹患している。
【０００９】
好ましくは、バッファーは約１０〜約１２のｐＨ、より好ましくは約１０．２〜約１０．８のｐＨ、および低い緩衝能力を有する。あるいは、バッファーは約３〜約４．５のｐＨ、より好ましくは約３．５〜約４．５のｐＨ、および低い緩衝能力を有する。バッファーはグリシンを含んでいてもよく、具体的な態様において、バッファーはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤である。活性薬剤は、バッファーによる溶解または希釈を要するいかなる活性薬剤であってもよく、注射されうる（例えば、静脈内）。活性薬剤は、トレプロスチニルナトリウムであってもよく、好ましくは約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルが供与されうる。バッファーの選択は望ましいｐＨに基づく。バッファーの成分は望ましいｐＨに近いｐＫａを有するべきであり、注入後の血中でのｐＨの変化を避けるために、緩衝能力は低い方がよい。当該バッファーの好ましい緩衝能力は０．０１以下である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ＢＷＦＩの「ブランク」の注射（Ａ）およびＢＷＦＩにより希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図２】図２は、ＢＮＳの「ブランク」の注射（Ａ）およびＢＮＳにより希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図３】図３は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤（Ａ）およびそれで希釈したトレプロスチニル（Ｂ）のクロマトグラムである。
【図４】図４は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中の０．００４ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルのＴ０（Ａ）およびＴｉｎｉｔｉａｌ（Ｂ）でのクロマトグラムである。
【図５】図５は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中の０．１３ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルのＴ０（Ａ）およびＴｉｎｉｔｉａｌ（Ｂ）でのクロマトグラムである。
【図６】図６は、０．００４ｍｇ／ｍＬを含む医薬製剤での、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（グラム陽性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＷＦＩ、ＮＳ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。 図６〜１５の説明は以下の通りである：（白丸）：ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中のＦＬＯＬＡＮ（登録商標）（黒丸）：ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のための無菌希釈剤中のトレプロスチニル（白四角）：注射用滅菌水中のトレプロスチニル（黒四角）：注射用静菌水中のトレプロスチニル（白菱形）：通常の生理食塩水（０．９％）中のトレプロスチニル（黒菱形）：静菌の通常の生理食塩水中のトレプロスチニル（白三角）：５％デキストリンの注射用水溶液中のトレプロスチニル（Ｄ５Ｗ）
【図７】図７は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）の値をＬｏｇ１として記録する。
【図８】図８は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（Ｄ５Ｗ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図９】図９は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌類）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【図１０】図１０は、０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（カビ）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【図１１】図１１は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（グラム陽性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＷＦＩ、ＮＳ、Ｄ５Ｗ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図１２】図１２は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）または≧Ｌｏｇ６．４８（ＮＳ中のトレプロスチニル）の値をそれぞれＬｏｇ１およびＬｏｇ６．４８として記録する。
【図１３】図１３は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（グラム陰性菌）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。≦Ｌｏｇ１（無菌希釈剤中のトレプロスチニル）の値をＬｏｇ１として記録する。
【図１４】図１４は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌類）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。ＮＳ中のトレプロスチニルについての０．２５時間での≧Ｌｏｇ３．４８の値をＬｏｇ３．４８として記録する。
【図１５】図１５は、０．１３ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルを含む医薬製剤での、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（カビ）に対する種々のバッファー系の、時間（日）に対する抗菌活性（ＣＦＵ）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、医薬製剤中での抗菌剤としての、特定のｐＨ範囲を保持するためのバッファー系の使用を指向する。本明細書で使用される用語「バッファー」は、固体の（例えば、凍結乾燥した）医薬を溶解させるため、または液体医薬を希釈するための希釈剤として使用されうる、制御されたｐＨを有する任意の溶液を意味する。本発明によれば、本明細書に記載されるバッファーは、細菌類、カビ類および真菌類を含む全てではないが多くの微生物に対して静菌活性を示し、さらにグラム陰性菌に対して殺菌活性を示すｐＨを維持する。グラム陰性菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓが挙げられる。グラム陰性菌は病院環境においてありふれた感染源であり、それ故、緩衝能力が低く、約１０を上回るかまたは約４．５を下回るｐＨを維持し、グラム陰性菌に特異的に殺菌活性を有するバッファーは必要とされている。例として、グラム陽性菌には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、およびＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍが挙げられる。
【００１２】
「静菌的」とは、バッファー溶液中に存在しうる、または存在するようになりうる、微生物の拡大を遅延させるまたは妨げる能力として定義される。言い換えれば、静菌活性は、バッファー溶液中に存在しうる、または存在するようになりうる、微生物殺傷する活性として本明細書に定義される殺菌活性を含まない。微生物は、例えば菌類、カビ類および真菌類などの単細胞生物を含むように本明細書では広く定義される。
【００１３】
本発明者らは、高いｐＨ（＞１０）または低いｐＨ（＜４．５）を有するバッファーがグラム陰性菌に対して特異的な殺菌活性を有し、グラム陽性菌およびその他の微生物に対して静菌活性を有することを知得した。理論に固執するものでなく、また理論に拘束されないが、グラム陰性菌とグラム陽性菌の生化学的、おそらく細胞壁の生化学的な差異が、高いｐＨバッファーへの異なる感受性の主たる原因でありうると現在は考えられている。本発明の背景において、高いｐＨは約９から約１２、好ましくは約１０から約１２のｐＨ値である。本発明の好ましい態様において、バッファーは約１０．２〜１０．８、または約３．５〜約４．５のｐＨを有する。
【００１４】
高いｐＨに加えて、本発明者らは、グリシンを含むバッファーが特に有益であることを知得した。そのような態様において、グリシンは約３０％から約８０％、好ましくは約４５％から約６５％、そして最も好ましくは約５０％から約６０％の濃度（ｗ／ｗ）で存在する。用語「約」は、記載された数字に僅かで許容される変動を含めるために、当該技術分野における計算および測定に内在する誤差の認識において本明細書に使用される。
【００１５】
グリシンに加えて、本明細書に記載したバッファーは、当該技術分野で知られたものを含む、本明細書で述べた範囲にｐＨを保持することができるその他のいかなるバッファー系を含みうる。
【００１６】
本発明の具体的な態様において、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標、エポプロステノールナトリウム）の希釈剤にバッファーの成分としてグリシンを使用する。以下により詳細を記載するように、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の希釈剤が予期せぬことに、グラム陰性菌に対して特異的な殺菌活性を、および残りの微生物に対して静菌活性を有することを発見した。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の希釈剤は、５０ｍＬに９４ｍｇのグリシン、７３．３ｍｇの塩化ナトリウム、およびｐＨを１０．２から１０．８に調製するための水酸化ナトリウムを含む（グリシンに対して約４４％のＮａＣｌ）。
【００１７】
活性医薬成分（「ＡＰＩ」）の化学特性が実質的に、例えば約１０より低くなるようにバッファーのｐＨを低下させることがなければ、本明細書に記載のバッファーは、高いｐＨにおいて安定であるいかなるＡＰＩにも好適でありうる。よって以下の実施例によらず、本発明は、いずれか１つまたはいずれか１種類のＡＰＩ、さらにいえば限定された範囲の濃度に限定されるべきではない。さらに、バッファーの新規で予期できない殺菌活性は、注射により投与される医薬にとりわけ好適であり得る。実際、本発明の１つの態様において、本明細書に記載された高いまたは低いｐＨのバッファーの使用は、活性薬剤により処置される哺乳類での血流感染の発生を抑制しうると考えられる。しかし本発明は、注射用（静脈内注射を含む）に処方される医薬に限定されず、溶解および／または希釈（例えば、経口投与用）が必要となるいかなる医薬にも限定されない。
【００１８】
本発明の具体的な態様において、記載されるバッファーシステムはトレプロスチニルナトリウムを使用する。より具体的には、実施例により次に記載されるように、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の希釈剤がトレプロスチニルナトリウムを緩衝するために使用される。
【００１９】
［実施例］
１００ｍＬ ＣＡＤＤデリバリーデバイスによるトレプロスチニルの適合性試験を行った。より具体的には、注射用静菌水（「ＢＷＦＩ」）または静菌の通常の生理食塩水（「ＢＮＳ」）（その両方ともパラベンを含んで保存されている）により希釈したトレプロスチニルの適合性と安定性を確認した。トレプロスチニルが処方されうる濃度全体を含む、トレプロスチニル０．００４ｍｇ／ｍＬおよび０．１３ｍｇ／ｍＬのサンプル溶液を調製し、４０℃および周囲相対湿度（「ＲＨ」）で貯蔵しながら、５２時間の期間にわたり連続的にポンプで送液するＳＩＭＳ Ｄｅｌｔｅｃ，Ｉｎｃ．ＣＡＤＤ−Ｌｅｇａｃｙ（登録商標）１（モデル６４００）ポンプデリバリーデバイスに配置した。
【００２０】
特定の時点において（例えば、開始時Ｔ０、２４時間および５２時間）、サンプルを送液後のチューブの末端から回収し、外観、ｐＨおよびトレプロスチニルの濃度を確認した。さらに、溶液を約２日間ぐらいにわたる抗菌効果試験（「ＡＥＴ」）に付した。同様の実験手法をＦｌｏｌａｎ再構成溶液についても行った。しかし、溶液中での医薬の限られた安定性のために、無菌試験およびＡＥＴ試験は室温で８時間後のみＦＬＯＬＡＮ（登録商標）ついて行った。
【００２１】
トレプロスチニルの安定性は、有効性が十分に確認された安定性測定ＨＰＬＣアッセイにより観測された。トレプロスチニルについてのクロマトグラフィーにおいて「静菌の」溶液に存在するパラベンが影響を及ぼすかどうかを確認するために、予備的な実験によりパラベンのピークがトレプロスチニルのピークまたはいずれかの不純物のピークを妨害しないことを確認した。ＢＷＦＩおよびＢＮＳの溶液、およびＢＷＦＩおよびＢＮＳで希釈されたトレプロスチニルはＨＰＬＣを使用して分析した。図１および２は、メチル−またはエチル−パラベンのいずれかからのパラベンのピークがトレプロスチニルのピークを妨害しない（例えば、重ならない）ことを示す。また、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤とトレプロスチニルのクロマトグラフィーを行う上での支障もなかった（図３）。
【００２２】
また、希釈溶液中でのトレプロスチニルの予想される濃度をカバーするために低レベルの直線性検討も行った。トレプロスチニルの５つの溶液を０．００２、０．０１、０．０５、０．１および０．１５ｍｇ／ｍＬ（１．０ｍｇ／ｍＬ標準溶液から希釈）で調製し、各溶液を２度注入した。目的は、分析中に０．１ｍｇ／ｍＬでの１点の標準を使用するために、希釈濃度範囲内での検出器の応答とトレプロスチニルの濃度の間の直線性を確認することであった。トレプロスチニルについての検出器の応答は、０．００２〜０．１５ｍｇ／ｍＬまでは直線的であることが確認された。本実験の相関係数（ｒ）は０．９９９９９５であり、少なくとも０．９９９との要件に適合した。
【００２３】
ＢＷＦＩ、ＢＮＳ、またはＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中の０．００４ｍｇ／ｍＬトレプロスチニルの溶液は、１．０ｍｇ／ｍＬの濃度のリモジュリンから調製した。ＢＷＦＩ中およびＢＮＳ中の０．１３ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルの溶液は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度のリモジュリンから調製した。パッケージ中の説明書に概説されている手法を使用して、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のバイアルを、５ｍＬのＦＬＯＬＡＮ（登録商標）の無菌希釈剤により再構成した。
【００２４】
４つの溶液の各々の一部（約２ｍＬ）をＴ０分析のために取り出した。残りの溶液を、４つ別々の１００ｍＬ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ＣａｓｓｅｔｔｅＴＭＲｅｓｅｒｖｏｉｒｓ（ＳＩＭＳ Ｄｅｌｔｅｃ，Ｉｎｃ．）に各々充填した。製造者説明書にしたがって、カセットとチューブをＣＡＤＤ−ＬｅｇａｃｙＴＭ１ ポンプに取り付けた。４つのカセット／ＣＡＤＤポンプセットを４０℃／周囲ＲＨのチェンバーに配置した。チューブの末端の針を密封したＨＰＬＣバイアル（針の穴を有する）に設置した。ポンプの流速は４０ｍＬ／２４時間にセットし、送液を開始した。最初のインターバルでの試験のために、各ポンプの溶液を別々のＨＰＬＣバイアルに回収した（約１時間）。その後、針を密封した廃棄物コンテナ（針の穴を有する）に移動させた。２４時間および５２時間の時点で、試験のために再び溶液を密封された新たなＨＰＬＣバイアルに回収した。
【００２５】
Ｔ０、初期、２４時間、および５２時間にて回収された溶液を、物理的外観、ｐＨについて分析し、トレプロスチニルについてＨＰＬＣによりアッセイした。表１および２にて、ＢＷＦＩおよびＢＮＳによりそれぞれ希釈したトレプロスチニルについての結果の概要を示す。全ての溶液の外観は透明で無色であり、目に見える粒子状物質は存在しなかった。よって、これらの結果から、いずれの濃度においてもＢＷＦＩまたはＢＮＳのトレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった。
【表１】
【表２】
【００２６】
ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中のトレプロスチニルの溶液についても同様の結果が得られた。それの概要を表３に示す。全ての溶液の外観は透明で無色であり、目に見える粒子状物質は存在しなかった。よって、これらの結果からもまた、トレプロスチニルのいずれの濃度においてもＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤のトレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった（図４および５）。よって、これらの結果から、いずれの濃度の希釈溶液のいずれにおいても希釈トレプロスチニル溶液についての適合性の問題は認められなかった。
【表３】
【００２７】
トレプロスチニル溶液について、４０℃／周囲ＲＨのカセットで５２時間後に溶液を取り出し、全ての微生物についての４８時間プレーティングを含むＡＥＴをＵＳＰ ＮＦ２４ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ２＜５１＞にしたがって行った。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液について、同じ手法にしたがって試験を行ったが、溶液は室温で８時間カセット中にあったものであった。ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）についても無菌性について試験を行った。
【００２８】
非経口溶液を含むカテゴリー１製品についてのＡＥＴ ＵＳＰ要件は以下の通りである：バクテリアについて、７日目に当初の算出値から１．０ｌｏｇが少なくとも減少しなければならず、１４日目に当初の算出値から３．０ｌｏｇが少なくとも減少しなければならず、２８日目に１４日目の値から増加してはならない。イーストおよびカビについて、７、１４および２８日目に当初の算出値から増加があるべきではない。
【００２９】
Ｆｌｏｒａｎ用の無菌希釈剤に希釈したＦＬＯＬＡＮ（登録商標）がＡＥＴについてのＵＳＰ要件に適合する一方で、ＢＷＦＩおよびＢＮＳ中のトレプロスチニル溶液は適合しない。これらの希釈したトレプロスチニル溶液がＡＥＴに適合しない理由は、主にグラム陰性菌について菌の減少率が十分ではないからである。しかし、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤中のトレプロスチニルはＵＳＰの基準に適合する。図６〜１５を参照されたい。
【００３０】
本発明がその具体的な態様と関連して記載されているが、当該発明はさらなる変更が可能であり、この出願により本発明のいかなるバリエーション、使用および変更をも保護することが意図されることが了解されるであろう。一般的に、本発明の本質は、本発明が属する技術分野において既知で普通のプラクティス内で生じる、および本明細書で既に記載した本質的特徴を適用してもよい、および添付の特許請求の範囲にしたがって、この開示からの逸脱も包含する。
【００３１】
以上は具体的な望ましい態様に言及するが、本発明はそのように限定されないことが了解されよう。当該技術分野の当業者は、開示された態様に種々の変更を施すことができ、当該変更は本発明の範囲内にあることが意図されることに気付くであろう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性薬剤を含む医薬製剤においてグラム陰性菌を選択的に殺菌し、グラム陽性菌の増殖を阻害する方法であって、約１０を上回るかまたは約４．５未満のｐＨを有し、緩衝能力が低いバッファーとともに活性薬剤を供給することを含む方法であって、医薬製剤が単独の活性薬剤としてエポプロステノールナトリウムを含まない、前記方法。
【請求項２】
活性薬剤がトレプロスチニルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
バッファーがグリシンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
バッファーがグリシンおよび水酸化ナトリウムを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
バッファーが約１０〜約１２のｐＨ、または２〜４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
バッファーが約１０．２〜約１０．８のｐＨ、または約３〜約４のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
さらに真菌類、カビ、またはその両方の増殖を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
活性薬剤が、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
トレプロスチニルが、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
それを必要とする哺乳類に医薬製剤を注射することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
医薬製剤がそれを必要とする哺乳類に静脈内注射される、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
活性薬剤により処置される哺乳類の血流感染の発生を減少させる方法であって、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨを有するバッファーとともに活性薬剤を哺乳類に投与することを含む方法であって、活性薬剤がエポプロステノールナトリウムではなく、血流への投与の前に投与がグラム陰性菌を減少させ、グラム陽性菌の増殖を阻害する、前記方法。
【請求項１３】
ヒトである対象が肺動脈高血圧症である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
活性薬剤が静脈内投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
活性薬剤がトレプロスチニルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
バッファーがグリシンを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
バッファーがＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
バッファーが約１０〜約１２のｐＨ、または約２〜約４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
バッファーが約１０．２〜約１０．８のｐＨ、または約３〜約４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
さらに真菌類、カビ、またはその両方の増殖を阻害する、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
活性薬剤が、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
トレプロスチニルナトリウムが、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
投与が、それを必要とする哺乳類への医薬製剤の注射である、請求項１に記載の方法。
【請求項１】
活性薬剤を含む医薬製剤においてグラム陰性菌を選択的に殺菌し、グラム陽性菌の増殖を阻害する方法であって、約１０を上回るかまたは約４．５未満のｐＨを有し、緩衝能力が低いバッファーとともに活性薬剤を供給することを含む方法であって、医薬製剤が単独の活性薬剤としてエポプロステノールナトリウムを含まない、前記方法。
【請求項２】
活性薬剤がトレプロスチニルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
バッファーがグリシンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
バッファーがグリシンおよび水酸化ナトリウムを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
バッファーが約１０〜約１２のｐＨ、または２〜４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
バッファーが約１０．２〜約１０．８のｐＨ、または約３〜約４のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
さらに真菌類、カビ、またはその両方の増殖を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
活性薬剤が、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
トレプロスチニルが、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
それを必要とする哺乳類に医薬製剤を注射することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
医薬製剤がそれを必要とする哺乳類に静脈内注射される、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
活性薬剤により処置される哺乳類の血流感染の発生を減少させる方法であって、約１０を上回るか、または約４．５を下回るｐＨを有するバッファーとともに活性薬剤を哺乳類に投与することを含む方法であって、活性薬剤がエポプロステノールナトリウムではなく、血流への投与の前に投与がグラム陰性菌を減少させ、グラム陽性菌の増殖を阻害する、前記方法。
【請求項１３】
ヒトである対象が肺動脈高血圧症である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
活性薬剤が静脈内投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
活性薬剤がトレプロスチニルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
バッファーがグリシンを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
バッファーがＦＬＯＬＡＮ（登録商標）用の無菌希釈剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
バッファーが約１０〜約１２のｐＨ、または約２〜約４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
バッファーが約１０．２〜約１０．８のｐＨ、または約３〜約４．５のｐＨを有し、緩衝能力が低い、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
さらに真菌類、カビ、またはその両方の増殖を阻害する、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
活性薬剤が、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
トレプロスチニルナトリウムが、約０．００４ｍｇ／ｍＬ〜約０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
投与が、それを必要とする哺乳類への医薬製剤の注射である、請求項１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２０１０−５３８０９２（Ｐ２０１０−５３８０９２Ａ）
【公表日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２４１９０（Ｐ２０１０−５２４１９０）
【出願日】平成２０年９月５日（２００８．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７５４２５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３３０３９
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０２２７８７６９）ユナイテッド セラピューティクス コーポレーション (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月５日（２００８．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７５４２５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３３０３９
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０２２７８７６９）ユナイテッド セラピューティクス コーポレーション (10)
【Ｆターム（参考）】
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