グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤
【課題】グルカゴン様ペプチド−１の分泌を促進するのに有用な因子を提供すること。
【解決手段】本発明は、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供し、これは、甘藷茎葉加工物を含む。本発明のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得、そして医薬品および飲食品に好適に利用され得る。
【解決手段】本発明は、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供し、これは、甘藷茎葉加工物を含む。本発明のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得、そして医薬品および飲食品に好適に利用され得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管に散在するＬ細胞から分泌されるホルモンのグルカゴン様ペプチド−１（以下、「ＧＬＰ−１」ともいう）は、食物の刺激による、インスリン分泌促進、満腹中枢の刺激、消化管の蠕動運動抑制などの作用を有することが確認されている。これらのＧＬＰ−１の作用はいずれも、摂食による急激な血糖値の上昇を抑制する効果に関連すると考えられており、糖尿病の治療へのＧＬＰ−１の利用について研究がなされている。また、ＧＬＰ−１は、肥満抑制作用についても注目されている。
【０００３】
したがって、ＧＬＰ−１の抗糖尿病作用または抗肥満作用を利用した治療薬の開発が期待されている。しかし、ＧＬＰ−１は、体内での安定性が非常に低いので、投与法および投与経路の至適化、体内での安定性が高い機能的アナログの探索などが必要である。
【０００４】
そこで、ＧＬＰ−１を直接投与するのではなく、消化管でＧＬＰ−１の分泌を促進させる物質についても研究がなされている。ＧＬＰ−１の分泌促進作用を有するいくつかの天然由来成分が知られている。例えば、特許文献１には、酸カゼインなどにＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。特許文献２には、カゼイングリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）にＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。特許文献３には、κ−カゼインを有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進剤が開示されている。非特許文献１には、トウモロコシの難消化性タンパク質Ｚｅｉｎをパパインで加水分解して得られるペプチドＺｅｉｎＨにＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。
【０００５】
ところで、甘藷茎葉が、ビタミン、ミネラルなどの健康に有効な成分を含有することが明らかにされ、生活習慣病予防を目的とした食品原料として利用され始めている。甘藷茎葉は、クロロゲン酸、トリカフェオイルキナ酸、およびジカフェオイルキナ酸などのポリフェノールを含有することも明らかにされている（特許文献４）。甘藷茎葉の機能性について注目され、その有効利用が鋭意検討されつつある。これまでに、甘藷茎葉加工物の調製および利用（特許文献５）；甘藷茎葉の抽出物（特許文献４）；ならびに甘藷茎葉加工物の抗高血圧剤（特許文献６）、味覚修飾剤（特許文献７）、抗肥満剤（特許文献８）、糖尿病または糖尿病合併症予防剤（特許文献９）、および肝中脂質蓄積抑制剤（特許文献１０）としての利用などが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】欧州特許出願公開第１３６７０６５号明細書
【特許文献２】国際公開第０１／３７８５０号
【特許文献３】国際公開第２００７／０３７４１３号
【特許文献４】特開２００６−８６６５号公報
【特許文献５】再表２００５／１１２６６５号公報
【特許文献６】特開２００５−３３０２４０号公報
【特許文献７】特開２００６−６３１７号公報
【特許文献８】特開２００６−３０６８５２号公報
【特許文献９】特開２００７−１１９３４６号公報
【特許文献１０】特開２００８−２０８０３０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】比良 徹, 「33. インスリン分泌を促進する消化管ホルモンGLP-1 の分泌を刺激する食品ペプチドの探索と, 消化管における受容機構の解明」, 上原記念生命科学財団研究報告集, 22(2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、有用なグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、甘藷茎葉加工物を含む、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供する。
【００１０】
１つの実施態様では、上記甘藷茎葉加工物は、甘藷茎葉を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物である。
【００１１】
さらなる実施態様では、上記含水エタノールが、エタノールの含有量が８０容量％未満の含水エタノールである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、新規なグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤が提供される。このグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得、そして医薬品および飲食品に好適に利用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】甘藷茎葉粉末、甘藷茎葉熱水抽出物、甘藷茎葉含水エタノール抽出物、および甘藷茎葉ペプシン分解物のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。
【図２】甘藷茎葉熱水抽出物、画分１（水溶性−活性炭吸着画分）、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）、画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）、および画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明のグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）分泌促進剤は、甘藷茎葉加工物を含有する。本発明で用いられる甘藷茎葉加工物について、以下に説明する。
【００１５】
（１）甘藷茎葉
甘藷とは、ヒルガオ科に属する植物をいい、一般にサツマイモと呼ばれる。甘藷の品種は、特に限定されない。例えば、すいおう、ジョイホワイト、コガネセンガン、シロユタカ、サツマスターチ、アヤムラサキなどの品種が挙げられる。本明細書において「甘藷茎葉」とは、「甘藷の茎および甘藷の葉の少なくともいずれか」を指し、甘藷の葉のみ、甘藷の茎のみ、および甘藷の茎と葉との両方を含む。葉部と茎部とに篩別したものを用いてもよく、篩別しないものを用いてもよい。
【００１６】
甘藷茎葉としては、甘藷の栽培時に、地面から外に出ている茎または葉を用いることが好ましい。特に、地上から５ｃｍ以上、好ましくは１０ｃｍ以上、より好ましくは２０ｃｍ以上に成長した甘藷茎葉が好ましい。また、甘藷の茎が地面から外に出ている位置から甘藷茎葉の先端までの長さを測定した場合に、その長さが３００ｃｍ以下、好ましくは２００ｃｍ以下、より好ましくは１５０ｃｍ以下である甘藷茎葉が好ましい。
【００１７】
さらに、甘藷茎葉としては、甘藷茎葉の先端部分（「甘藷の若茎葉」）が好ましく、他の茎葉に比べて、黄味がかった緑色を保持している状態の甘藷の若茎葉がさらに好ましい。甘藷の若茎葉としては、甘藷茎葉の先端から６０ｃｍ以内の部位の茎葉が好ましく用いられる。甘藷の若茎葉は、植物体自身がやわらかいため、加工が容易である。さらに、甘藷茎葉の若茎葉は、乾燥粉末とした場合、舌触りがよく、様々な食品に利用しやすくなる。
【００１８】
本発明では、ポリフェノール含有量が高い「すいおう」の茎葉が特に好ましい。すいおうは、一度茎葉を収穫した後であっても、同じ茎の先端から甘藷の若茎葉が再生するという特徴があるため、すいおうの茎葉が好適に用いられ得る。
【００１９】
甘藷（特にすいおう）の茎または葉には、ポリフェノールの一種であるジカフェオイルキナ酸およびトリカフェオイルキナ酸が豊富に含まれている。例えば、すいおうの葉には、乾燥質量１００ｇあたり、トリカフェオイルキナ酸が１ｍｇ〜３００ｍｇ含まれている。甘藷茎葉（特にすいおうの茎葉）は、他の植物と比較して、特にトリカフェオイルキナ酸を多く含んでいる。
【００２０】
（２）甘藷茎葉加工物
甘藷茎葉は、品質安定性、長期保存性などの点から、加工（処理）が施され得る。本明細書において「甘藷茎葉加工物」とは、何らかの加工（処理）が施された甘藷茎葉をいう。処理としては、例えば、加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理、抽出処理などが挙げられる。これらの処理は、１種のみを行ってもよく、２種以上を行ってもよい。収穫した甘藷茎葉は、付着した泥などを水で洗浄した後にこれらの処理に供され得る。以下、甘藷茎葉の処理について具体的に説明する。
【００２１】
（２−１）加熱処理
加熱処理は、甘藷茎葉中の酵素の失活による品質の安定化、および甘藷茎葉の褪色を防ぐ目的で行われる。加熱処理としては、例えば、ブランチング処理、乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、水蒸気処理などが挙げられる。これら加熱処理のうち、ブランチング処理および水蒸気処理が好ましく用いられる。さらに、処理工程の便宜上、必要に応じて、甘藷茎葉を長径３〜３０ｃｍ程度に裁断してから、各処理を行ってもよい。
【００２２】
ブランチング処理を行う場合、緑色植物の色素であるクロロフィル（甘藷茎葉）の色が褪色しないようにするために、当業者が通常用いる方法を用いればよい。そのようなブランチング処理としては、例えば、湯通し、噴霧処理などが挙げられる。ブランチング処理は、用いる植物体によって、最適条件が大きく異なる。場合によっては、ブランチング処理によって、風味および栄養素が損なわれ、有用成分の生理活性が失われることもある。したがって、本発明では、ｐＨ５．４〜８．５、好ましくは６．０〜８．０、より好ましくは７．０に調整された熱水（例えば８５℃以上）で加熱処理（例えば１〜１０分間）を行い得る。
【００２３】
乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、および水蒸気処理により加熱処理を行う場合は、ｐＨが調整された溶液を甘藷茎葉に噴霧するなどのｐＨ調整処理を行った後、加熱処理をすることが好ましい。
【００２４】
ｐＨ調整処理は、当業者が通常用いる方法で行なわれる。例えば、塩基性条件下に調整する場合は、水酸化ナトリウム、重曹、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム（卵殻カルシウム、ホタテ貝殻カルシウム、サンゴカルシウムなど）、酸化カルシウム（炭酸カルシウムを焼成して得られる）などの溶液を用いればよい。もちろん、アルカリイオン水などを用いてもよい。一方、酸性条件下に調整する場合は、酢酸、クエン酸、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸などの有機酸の溶液を用いればよい。これらのｐＨ調整剤の量は、用いる調整剤によって適宜調整すればよい。
【００２５】
加熱処理における加熱温度は、８０℃より高い温度、好ましくは８５℃以上、より好ましくは９０℃以上の温度とするのがよい。加熱処理における加熱時間は、１０分以下、好ましくは５分以下、より好ましくは３分以下、さらにより好ましくは１０秒〜１分とするのがよい。
【００２６】
加熱処理後の甘藷茎葉は、緑色および風味を維持する上で、直ちに冷却することが好ましい。冷却は、加熱処理後の甘藷茎葉を冷却水中に浸漬する、冷風を当てて急冷するなど、当業者が通常用いる方法で行なえばよい。例えば、冷却水に浸漬して冷却する場合、３０℃以下の水を用いればよい。
【００２７】
（２−２）乾燥処理
乾燥処理は、加工前の甘藷茎葉の品質を保持するために、好ましく行われる。乾燥処理は、甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、そのまま、またはペースト状および圧搾して搾汁にした後、当業者が通常用いる任意の乾燥方法を用いて行われる。乾燥処理は、乾燥方法に応じた乾燥機、例えば、熱風乾燥機、高圧蒸気乾燥機、電磁波乾燥機、凍結乾燥機、減圧濃縮機、噴霧乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機などを用いて行われる。
【００２８】
この中でも、甘藷茎葉の乾燥処理には、製造コストや乾燥の効率の面から、熱風乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機が好ましく用いられる。
【００２９】
常圧での乾燥処理は、６０℃〜１５０℃、好ましくは７０℃〜１００℃で行うことが、風味が良く、色鮮やかな甘藷茎乾燥粉末が得られる点で好ましい。減圧下での乾燥処理は、６０℃以下、好ましくは甘藷茎葉、そのペーストまたは搾汁が凍結する温度以上でかつ６０℃以下で行うことが、栄養成分の損失を少なくすることができる点で好ましい。
【００３０】
乾燥処理は、乾燥後の産物中の水分含量が５質量％以下となるように行うことが好ましい。
【００３１】
甘藷茎葉をそのまま乾燥する場合は、２段階で行うことが好ましい。２段階乾燥は、例えば、熱風乾燥機などを用いて行うことができる。２段階乾燥では、まず、水分含有量が２５質量％以下となるまで、６０〜８０℃の温度で一次乾燥する。次いで、一次乾燥した甘藷茎葉の水分含有量が５質量％以下となるまで、一次乾燥よりも高い温度で二次乾燥する。
【００３２】
このとき、一次乾燥の乾燥温度が６０℃未満の場合は、乾燥速度が遅くなり、二次乾燥の乾燥温度が１００℃を超える場合は、焦げを生じることがある。したがって、二次乾燥の温度は、１００℃以下であることが好ましく、９０℃以下であることがより好ましく、８５℃以下、さらに好ましくは８０℃前後に調整し得る。
【００３３】
なお、一次乾燥と二次乾燥との温度差は、約５〜１５℃であることが好ましく、約１０℃であることがより好ましい。例えば、９０℃で二次乾燥する場合、一次乾燥の温度は、７５〜８５℃であることが好ましく、約８０℃であることがより好ましい。
【００３４】
この２段階の乾燥処理を行うことにより、乾燥時間が短縮されると同時に、甘藷茎葉の緑色および風味が維持される。温度差を上記のように一定範囲に設定することにより、乾燥処理における甘藷茎葉（特に緑葉）の水分管理が容易になり、効率的に乾燥が行われる。
【００３５】
回転式乾燥機を用いる場合は、例えば、甘藷茎葉を、一度フードプロセッサまたはマスコロイダーを用いて破砕し、ペースト状にしてから行う。この場合、甘藷茎葉を粉末化する場合と同様に、フードプロセッサで一度破砕した後に、マスコロイダーを用いてさらに細かくすることが好ましい。１００℃〜１５０℃、好ましくは１１０℃〜１３０℃の加熱温度で回転ドラムへ投入することで、水分含有量が５質量％以下の甘藷茎葉粉末を得ることができる。さらに、加熱温度が高温であるため同時に殺菌も行うことができる。この場合の加熱時間は、甘藷茎葉が変色するおそれがあるため、３０秒〜２分程度とすることが好ましい。
【００３６】
（２−３）粉末化処理
粉末化処理は、乾燥後または未乾燥の甘藷茎葉のいずれに対しても行われ得る。甘藷茎葉は、上記の加熱処理が施されていることが好ましい。乾燥した甘藷茎葉を粉末化処理に供し、甘藷茎葉乾燥粉末とし得る。未乾燥の甘藷茎葉を粉砕して細片状、ペースト状などにしてから、乾燥処理に供し、甘藷茎葉粉末を生成し得る。甘藷茎葉は、茎部と葉部（葉身部および葉柄部を含む）とからなるので、粉末化処理は、粉砕の効率を上げる観点から、粗粉砕工程または微粉砕工程を経ることが好ましい。
【００３７】
粗粉砕は、例えば、甘藷茎葉の乾燥物をカッター、スライサー、ダイサー等の当業者が通常用いる機械または道具によりカットする工程である。カットされた大きさは、長径が好ましくは２０ｍｍ以下であり、より好ましくは０．１〜１０ｍｍである。なお、ペースト状の破砕物を用いる場合は、この工程を省略してもよい。
【００３８】
粗粉砕工程に続いて微粉砕工程を行い得るが、微粉砕工程の前に殺菌工程を経てもよい。殺菌を施すことにより、粗粉砕した甘藷茎葉を均一に加熱することができ、甘藷茎葉（特に緑葉）の香味を良好にしつつ、効率の良い殺菌を行うことができる。殺菌は、高圧殺菌機、加熱殺菌機、加圧蒸気殺菌機などを用いて１１０℃以上で行われる。例えば、加圧蒸気殺菌機による殺菌の場合、粗粉砕した甘藷茎葉を、例えば、０．５〜１０ｋｇ／ｃｍ２の加圧下、１１０〜２００℃の飽和水蒸気に２〜１０秒間曝露する。必要に応じて、殺菌工程で甘藷茎葉に付着した水分をさらに除去する。
【００３９】
微粉砕の工程は、９０質量％が２００メッシュ区分を通過するように行われる。微粉砕は、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの当業者が通常用いる機械または装置を用いて行われる。微粉砕することにより甘藷茎葉の食感がよくなり、好ましくは、粗粉砕、殺菌、および微粉砕の工程を順に経ることにより、さらに食感がよくなる。
【００４０】
（２−４）圧搾処理
甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、圧搾機などに供し、搾汁を得ることもできる。
【００４１】
得られた搾汁を、上記の乾燥処理および粉末化処理を施さずそのまま用いる場合は、上記（２−３）に記載の殺菌工程（例えば８０℃〜１３０℃で加熱殺菌機による殺菌）を経ることが好ましい。
【００４２】
搾汁から乾燥粉末を得る場合は、得られた搾汁を、加熱乾燥機、減圧濃縮機、凍結乾燥機などを用いて乾燥する。得られた乾燥物を粉砕して粉末化すればよい。例えば、スプレードライヤーなどの噴霧乾燥機を用いれば、乾燥すると同時に粉末化される。噴霧乾燥を行なう場合は、回収率を上げるために、必要に応じて、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、マルトースのような賦形剤を添加する。好ましくはデキストリンが用いられる。搾汁とデキストリンとの質量比は、特に限定されないが、デキストリンの添加により粉末化を容易にするために、１：１０〜５：１が好ましい。
【００４３】
（２−５）抽出処理
抽出は、甘藷茎葉の生茎葉または上記の加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理などのいずれか少なくとも１つの処理が施された甘藷茎葉を溶媒と接触させることにより行われ得る。
【００４４】
抽出用の溶媒としては、水、有機溶媒または含水有機溶媒が挙げられる。好ましくは、水または含水有機溶媒が用いられ得る。本明細書において「含水有機溶媒」とは、水を含む有機溶媒をいい、水と有機溶媒とが相溶性であっても非相溶性であってもよい。すなわち、含水有機溶媒は、抽出前に水と有機溶媒とが予め混合されたものであっても、あるいは抽出の間に（例えば撹拌により）水と有機溶媒とが混合されるものでもよい。
【００４５】
水は、特に限定されない。例えば、湧水、井戸水、蒸留水、水道水、純水などを用いることができる。
【００４６】
有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエタンなどが挙げられる。本発明においては、これらの有機溶媒の中でも、アルコール（メタノール、エタノールなど）などの極性有機溶媒が好ましい。エタノールがさらに好ましい。
【００４７】
含水有機溶媒としては、好ましくは含水アルコールなどの含水極性有機溶媒、より好ましくは含水エタノールが挙げられる。含水有機溶媒中に含まれる有機溶媒の割合は、特に限定されないが、好ましくは８０容量％未満、より好ましくは７０容量％未満であり得る。
【００４８】
含水エタノールの場合、エタノールを８０容量％未満、好ましくは１０容量％〜７０容量％、より好ましくは２０容量％〜６０容量％含有する含水エタノールが用いられ得る。
【００４９】
抽出温度は、抽出溶媒に依存し得るが、４℃以上が好ましく、１０℃以上がより好ましい。例えば、２５℃以上、５０℃以上、７０℃以上、９０℃以上、９５℃以上、１００℃以上、１２１℃以上、および１３０℃以上の温度で抽出を行ない得る。また、１５０℃以下が好ましく、１００℃以下がより好ましい。用いる溶媒によって大気圧下で沸点に達する場合は、圧力をかけることによって、所定の温度で抽出を行えばよい。
【００５０】
抽出時間は、抽出温度および抽出溶媒に依存し得るが、好ましくは５分以上、より好ましくは１０分以上、さらにより好ましくは３０分以上である。また、好ましくは７２時間以下、より好ましくは４８時間以下である。
【００５１】
例えば、抽出は、抽出溶媒が水または含水エタノールの場合、４℃〜１００℃、好ましくは１０℃〜１００℃にて、１０分〜７２時間、好ましくは３０分〜４８時間、より好ましくは２時間〜４８時間保持することによって行い得る。
【００５２】
次に、甘藷茎葉と溶媒とを用いて、抽出物を製造する方法について説明する。抽出物を製造するためには、甘藷茎葉と溶媒とを接触させる必要がある。その接触の方法は、特に限定されないが、例えば、化学工学的な抽出方法（固液抽出法）を用いて、甘藷茎葉と溶媒とを接触させ得る。そして、化学工学的な抽出方法としては、例えば、下記の方法１および方法２が挙げられる。
【００５３】
方法１：静止した固体層内（甘藷茎葉の層内）を溶媒が浸透還流することにより、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させる方法。
【００５４】
方法２：固体（甘藷茎葉）を溶媒中に分散または浸漬させて、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させる方法。
【００５５】
「方法２」においては、所定の温度に調整された溶媒中に、甘藷茎葉を分散または浸漬させて、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させ得る。所定の温度に調整された溶媒の温度は、その溶媒が還流する温度（すなわち沸点）が好ましいが、これに限定されない。抽出中においても、溶媒の温度を保持し、溶媒を還流させながら、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させることが好ましい。溶媒の温度を保持すれば、得られる抽出物の品質および量が安定化するからである。
【００５６】
抽出溶媒は、甘藷茎葉の乾燥質量５０ｇに対して、適量、好ましくは１００ｍＬ以上、より好ましくは４００ｍＬ以上で、また、好ましくは２５００ｍＬ以下で用いられ得る。用いる溶媒の量を分割して複数回の抽出に用いてもよい。具体的には、１０００ｍＬの溶媒を１回の抽出に用いてもよく、５００ｍＬずつ分けて２回の抽出に用いてもよい。
【００５７】
甘藷茎葉抽出物は、例えば、甘藷茎葉１質量部に対して、水もしくはエタノール含有量が８０容量％未満、好ましくは１０容量％〜７０容量％の含水エタノール、より好ましくは２０容量％〜６０容量％の含水エタノールを０．５質量部〜１００質量部、好ましくは０．５質量部〜５０質量部添加し得る。なお、６０容量％の含水エタノールを用いることで、低極性成分および高極性成分を効率的に抽出することが可能である。
【００５８】
１つの実施態様では、甘藷茎葉抽出物は、以下の調製例１または２に準じて調製され得るが、いくらかの改変を伴い得る。簡単に説明すると、上記の加熱処理、乾燥処理および粉末化処理を施して得られた甘藷茎葉乾燥粉末５０ｇに対して、適量の純水を添加し、常温（例えば２０℃）にて、または沸点付近の温度（例えば９８℃）のオイルバスによる沸騰水浴中にて充分置き、固液分離後の液体を回収することにより、抽出物が製造され得る。さらに以下の調製例５に準じて、得られた上記液体（水溶性画分）を活性炭処理し、水溶性−活性炭吸着画分と水溶性−活性炭非吸着画分とに分画するか、または以下の調製例６に準じて、上記固液分離後の残渣（水不溶性画分）に適量の含水エタノールを添加し、水不溶性−エタノール溶解画分と水不溶性−エタノール不溶画分とに分画することによっても、抽出物が製造され得る。あるいは、上記の加熱処理、乾燥処理および粉末化処理を施して得られた甘藷茎葉乾燥粉末５０ｇに対して、適量の含水エタノールを添加し、常温（例えば２０℃）にて充分置き、固液分離後の液体を回収することにより、抽出物が製造され得る。
【００５９】
得られた抽出物は、さらに、抽出の終了後に溶媒を蒸発させて、濃縮抽出物または抽出物粉末として用いてもよい。濃縮抽出物は、減圧濃縮機などを用いて調製され得る。抽出物粉末は、上記の乾燥粉末化処理を用いて調製され得る。
【００６０】
甘藷茎葉加工物の一例として、株式会社東洋新薬製の「甘藷若葉末」が、好ましく用いられ得る。これは、すいおうの甘藷茎葉を加熱処理後、乾燥処理および粉末化処理を施した甘藷茎葉粉末である。
【００６１】
（３）グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）分泌促進剤
甘藷茎葉（特に「すいおう」の甘藷茎葉）中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、（ｉ）甘藷茎葉加工物に含まれ、（ii）甘藷茎葉抽出物（特に、水抽出物（例えば、以下の調製例１の「熱水抽出物」）および含水エタノール抽出物（例えば、以下の調製例２の「含水エタノール抽出物」））中に含まれ、そして（iii）経口摂取後に胃内消化（ペプシン分解）を受けても、ＧＬＰ−１分泌活性を維持し得る。さらに、ＧＬＰ−１分泌促進成分は、甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着画分（例えば、以下の調製例５に記載の「画分２」）および、水不溶性であるが含水エタノールに可溶性の画分（例えば、以下の調製例６に記載の「画分３」）中に含まれる。
【００６２】
本発明によれば、甘藷茎葉加工物、好ましくは、甘藷茎葉（甘藷茎葉の生茎葉または上記の加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理などのいずれか少なくとも１つの処理が施された甘藷茎葉）を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物を、ＧＬＰ−１分泌促進剤として使用し得る。甘藷茎葉抽出物に関しては、甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着画分および、水不溶性であるが含水エタノールに可溶性の画分もまた、ＧＬＰ−１分泌促進剤として使用し得る。
【００６３】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、甘藷茎葉加工物を含有し得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤中の甘藷茎葉加工物の量は特に限定されない。
【００６４】
ＧＬＰ−１は、食物の刺激による、インスリン分泌促進、満腹中枢の刺激、消化管の蠕動運動抑制などの作用を有する。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得る。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、ＧＬＰ−１分泌の増大によって改善される任意の症状の予防および治療にも有用であり得る。
【００６５】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の配合量は、配合される製品の種類または剤形、投与または摂取の対象の年齢、性別、体重または状態、投与または摂取の方法、時期または時間などに応じて適宜設定され得る。
【００６６】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の投与量は、例えば、有効成分として、通常成人１人につき１日１回当たり１０〜２０００ｍｇ、好ましくは１００〜１０００ｍｇ、特に好ましくは３００〜１０００ｍｇであり得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤の投与時期は、食前、食間および食後のいずれでもよく、数回に分けて投与してもよい。
【００６７】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、経口投与または摂取用の組成物として調製され得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤は、需要者の嗜好に合わせて、ハードカプセル、ソフトカプセルのようなカプセル剤、錠剤、丸剤などの剤形、または粉末状、顆粒状、飴状などの形状に成形され得る。また、溶液、懸濁液、または乳液のような液状の剤形もしくは形状にも調製され得る。
【００６８】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、医薬品、医薬部外品、特定保健用食品、栄養補助食品、その他の飲食品などとして、あるいはこれらに配合して用いることができる。
【００６９】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤あるいはその配合製品は、剤形もしくは形状または好みに応じて、そのまま摂取しても良いし、水、湯、牛乳、豆乳、茶、ジュースなどに溶かして摂取しても良い。
【００７０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００７１】
本実施例において、「甘藷茎葉粉末」とは、「すいおう」の甘藷茎葉粉末（株式会社東洋新薬製、商品名「甘藷若葉末」）をいう。
【００７２】
（調製例１：甘藷茎葉熱水抽出物の調製）
甘藷茎葉粉末５０ｇを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の純水に懸濁した。フラスコをオイルバス（９８℃）上の沸騰水浴中に配置し、１５〜２０分おきに振り混ぜながら、２時間加熱した。粗熱を取った後、フラスコ内容物を吸引ろ過した。ろ液を回収し、減圧濃縮した（水温５０℃）。得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「熱水抽出物」または「甘藷茎葉熱水抽出物」ともいう）。
【００７３】
（調製例２：甘藷茎葉含水エタノール抽出物の調製）
甘藷茎葉粉末５０ｇを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の６０容量％含水エタノールに懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温（２０℃）にて充分浸漬した（遮光はしなかった）。フラスコ内容物を吸引ろ過し、ろ液を回収し、減圧濃縮（水温４０℃）した後、凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「含水エタノール抽出物」または「甘藷茎葉含水エタノール抽出物」ともいう）。
【００７４】
（調製例３：甘藷茎葉ペプシン分解物の調製）
甘藷茎葉粉末１０ｇをpH1.85のリン酸緩衝液に懸濁し、ペプシン（シグマ社製）をこの乾燥粉末に対して０．５質量％の割合で添加した。この混合液を３７℃にて１０分間保持し、ペプシン処理を行った。沸騰浴中で２０分間処理して酵素反応を停止後、水酸化カルシウムで中和し、遠心分離後の上清を凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「ペプシン分解物（１０分）」または「甘藷茎葉ペプシン分解物（１０分）」ともいう）。
【００７５】
（調製例４：甘藷茎葉ペプシン分解物の調製）
ペプシン処理時間を６０分間としたこと以外は、調製例３と同様にして甘藷茎葉ペプシン分解物の粉末を得た（以下、単に「ペプシン分解物（６０分）」または「甘藷茎葉ペプシン分解物（６０分）」ともいう）。
【００７６】
（実施例１：ＧＬＰ−１分泌試験１）
ＧＬＰ−１分泌試験を以下の手順で行った。まず、マウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇ（Dr. Daniel J. Drucker, Mount Sinai Hospital Samuel Lunenfeld Research Institute Banting and Best Diabetes Centre, University of Torontoより提供）を、４８ウェルプレート中で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ改変イーグル培地にて、３７℃、５％ＣＯ２存在下、サブコンフルエントになるまで２〜３日間培養した。続いて、ウェルから培養培地を取り除き、Ｈｅｐｅｓバッファー（140mM NaCl、4.5mM KCl、20mM Hepes、1.2mM CaCl2、1.2mM MgCl2、10mM D-グルコース、0.1% ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、pH 7.4）にてウェル中で細胞を洗浄した後、同Ｈｅｐｅｓバッファーに溶解した試験物質溶液80μＬを各ウェルに添加し、３７℃にて６０分間インキュベートした。上清を回収し、８００×ｇで４℃にて５分間、遠心分離して細胞を沈殿させ、その上清70μＬを回収し、凍結保存した。凍結保存した上清を適宜解凍し、上清中のＧＬＰ−１濃度を、市販のEnzyme immuno assay kit（矢内原研究所製）を用いて定量した。上清中のＧＬＰ−１濃度（ｎＭ）をＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇからのＧＬＰ−１分泌量とした。
【００７７】
試験物質として、以下を用いた（いずれも１０ｍｇ／ｍＬ）：
ＺｅｉｎＨ（トウモロコシ難消化性タンパク質Ｚｅｉｎのパパイン加水分解物：トウモロコシ由来ゼイン（東京化成工業株式会社製）を脱塩水に懸濁してpH７に調整し、パパイン（アサヒビール株式会社製）を基質に対して０．５質量％の割合で添加して５５℃にて６０分間処理し、煮沸によりパパインを失活させた後、遠心上清を凍結乾燥したもの；陽性コントロールとして使用）；
甘藷茎葉粉末；
調製例１の熱水抽出物；
調製例２の含水エタノール抽出物；
調製例３の甘藷茎葉ペプシン分解物（１０分）；
調製例４の甘藷茎葉ペプシン分解物（６０分）。
【００７８】
結果を図１に示す。図１は、甘藷茎葉粉末、甘藷茎葉熱水抽出物、甘藷茎葉含水エタノール抽出物、および甘藷茎葉ペプシン分解物のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。陰性コントロールとして未処理のブランクおよび陽性コントロールとしてＺｅｉｎＨ処理の結果を併せて示す。縦軸は、ＧＬＰ−１分泌量をｎＭ単位で表し、そして横軸は、左から順に、「ブランク」が陰性コントロール区（未処理区）の結果、「ＺｅｉｎＨ」が陽性コントロール区（ＺｅｉｎＨ添加区）の結果、「甘藷茎葉粉末」が甘藷茎葉粉末処理区の結果、「熱水抽出物」が熱水抽出物処理区の結果、「含水エタノール抽出物」が含水エタノール抽出物処理区の結果、「ペプシン分解物（１０分）」がペプシン分解物（１０分）処理区の結果、そして「ペプシン分解物（６０分）」がペプシン分解物（６０分）処理区の結果を示す。結果の値は、平均値＋標準誤差で表す（ｎ＝３〜４）。図中のａ、ｂ、ｃおよびｄは、ダンカンの多群間有意差検定において、異なるアルファベットを有する記号の表示で、処理群の間に有意差があることを示す（Ｐ＜0.05）。
【００７９】
図１に示されるように、甘藷茎葉粉末については、陽性コントロールのＺｅｉｎＨと同等のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。熱水抽出物および含水エタノール抽出物については、ともにＺｅｉｎＨよりも有意に高いＧＬＰ−１分泌活性が見られた。
【００８０】
ペプシン分解物については、１０分処理および６０分処理のいずれも、陽性コントロールのＺｅｉｎＨと同等のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。ＧＬＰ−１分泌活性にはペプシン処理時間の影響は見られなかった。したがって、「すいおう」の甘藷茎葉中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、経口摂取後に胃内消化を受けてもＧＬＰ−１分泌活性を維持し得ることが分かった。
【００８１】
以上より、「すいおう」の甘藷茎葉中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、（ｉ）甘藷茎葉粉末に含まれ、（ii）特に、熱水抽出物および含水エタノール抽出物中に含まれ、そして（iii）経口摂取後に胃内消化を受けてもＧＬＰ−１分泌活性を維持し得るものであることが分かった。
【００８２】
（調製例５：甘藷茎葉水溶性画分の活性炭吸着処理による分画）
甘藷茎葉粉末１００gを量りとり、粉末をスパチュラで攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の純水に懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温（２０℃）にて充分浸漬した。その後遠心して上清を回収し、吸引ろ過して、ろ液および残渣を得た。ろ液を減圧濃縮して、得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末状の「水溶性画分」を得た。この「水溶性画分」を水に溶解させた後、活性炭カラムクロマトグラフィーに供し、次の２つの画分を得た。１つは、活性炭吸着物をメタノールおよびアセトンを用いて脱着させて溶出させた画分であり、これを画分１とする（「水溶性−活性炭吸着画分」）。もう１つは、活性炭に吸着せずに素通りした画分であり、これを、画分２とする（「水溶性−活性炭非吸着画分」）。
【００８３】
（調製例６：甘藷茎葉水不溶性画分の含水エタノールによる分画）
調製例５で得られた、吸引ろ過後の残渣を凍結乾燥し、粉末状の「水不溶性画分」を得た。この「水不溶性画分」に６０容量％含水エタノールを添加して、次の２つの画分を得た。１つは、「水不溶性画分」を６０容量％含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られたろ液であり、これを画分３とする（「水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分」）。もう１つは、「水不溶性画分」を６０容量％含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られた残渣であり、これを画分４とする（「水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分」）。
【００８４】
（実施例２：ＧＬＰ−１分泌試験２）
試験物質として、ＺｅｉｎＨ（陽性コントロールとして使用）、調製例１の熱水抽出物、調製例５の画分１および２、ならびに調製例６の画分３および４を用いたこと以外は、実施例１と同様にしてＧＬＰ−１分泌試験を行った。なお、試験物質は、熱水抽出物およびＺｅｉｎＨについては１０ｍｇ／ｍＬ、そして画分１〜４については熱水抽出物１０ｍｇ／ｍＬ相当量となるように調製した。
【００８５】
結果を図２に示す。図２は、甘藷茎葉熱水抽出物、画分１（水溶性−活性炭吸着画分）、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）、画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）、および画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。陰性コントロールとして未処理のブランクおよび陽性コントロールとしてＺｅｉｎＨ処理の結果を併せて示す。縦軸は、ＧＬＰ−１分泌量をｎＭ単位で表し、そして横軸は、左から順に、「ブランク」が陰性コントロール区（未処理区）の結果、「ＺｅｉｎＨ」が陽性コントロール区（ＺｅｉｎＨ添加区）の結果、「熱水抽出物」が調製例１の甘藷茎葉熱水抽出物処理区の結果、「画分１」が画分１（水溶性−活性炭吸着画分）処理区の結果、「画分２」が画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）処理区の結果、「画分３」が画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）処理区の結果、そして「画分４」が画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）処理区の結果を示す。結果の値は、平均値＋標準誤差で表す（ｎ＝４）。図中のａ、ｂおよびｃは、ダンカンの多群間有意差検定において、異なるアルファベットを有する記号の表示で、処理群の間に有意差があることを示す（Ｐ＜0.05）。
【００８６】
図２に示されるように、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）および画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）について、ともにＺｅｉｎＨよりも有意に高く、熱水抽出物と同程度のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
甘藷茎葉加工物は、そのＧＬＰ−１分泌促進作用に基づき、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得る。このような甘藷茎葉加工物を含むＧＬＰ−１分泌促進剤は、医薬品および飲食品への広範な利用が可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管に散在するＬ細胞から分泌されるホルモンのグルカゴン様ペプチド−１（以下、「ＧＬＰ−１」ともいう）は、食物の刺激による、インスリン分泌促進、満腹中枢の刺激、消化管の蠕動運動抑制などの作用を有することが確認されている。これらのＧＬＰ−１の作用はいずれも、摂食による急激な血糖値の上昇を抑制する効果に関連すると考えられており、糖尿病の治療へのＧＬＰ−１の利用について研究がなされている。また、ＧＬＰ−１は、肥満抑制作用についても注目されている。
【０００３】
したがって、ＧＬＰ−１の抗糖尿病作用または抗肥満作用を利用した治療薬の開発が期待されている。しかし、ＧＬＰ−１は、体内での安定性が非常に低いので、投与法および投与経路の至適化、体内での安定性が高い機能的アナログの探索などが必要である。
【０００４】
そこで、ＧＬＰ−１を直接投与するのではなく、消化管でＧＬＰ−１の分泌を促進させる物質についても研究がなされている。ＧＬＰ−１の分泌促進作用を有するいくつかの天然由来成分が知られている。例えば、特許文献１には、酸カゼインなどにＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。特許文献２には、カゼイングリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）にＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。特許文献３には、κ−カゼインを有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進剤が開示されている。非特許文献１には、トウモロコシの難消化性タンパク質Ｚｅｉｎをパパインで加水分解して得られるペプチドＺｅｉｎＨにＧＬＰ−１分泌促進作用があることが開示されている。
【０００５】
ところで、甘藷茎葉が、ビタミン、ミネラルなどの健康に有効な成分を含有することが明らかにされ、生活習慣病予防を目的とした食品原料として利用され始めている。甘藷茎葉は、クロロゲン酸、トリカフェオイルキナ酸、およびジカフェオイルキナ酸などのポリフェノールを含有することも明らかにされている（特許文献４）。甘藷茎葉の機能性について注目され、その有効利用が鋭意検討されつつある。これまでに、甘藷茎葉加工物の調製および利用（特許文献５）；甘藷茎葉の抽出物（特許文献４）；ならびに甘藷茎葉加工物の抗高血圧剤（特許文献６）、味覚修飾剤（特許文献７）、抗肥満剤（特許文献８）、糖尿病または糖尿病合併症予防剤（特許文献９）、および肝中脂質蓄積抑制剤（特許文献１０）としての利用などが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】欧州特許出願公開第１３６７０６５号明細書
【特許文献２】国際公開第０１／３７８５０号
【特許文献３】国際公開第２００７／０３７４１３号
【特許文献４】特開２００６−８６６５号公報
【特許文献５】再表２００５／１１２６６５号公報
【特許文献６】特開２００５−３３０２４０号公報
【特許文献７】特開２００６−６３１７号公報
【特許文献８】特開２００６−３０６８５２号公報
【特許文献９】特開２００７−１１９３４６号公報
【特許文献１０】特開２００８−２０８０３０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】比良 徹, 「33. インスリン分泌を促進する消化管ホルモンGLP-1 の分泌を刺激する食品ペプチドの探索と, 消化管における受容機構の解明」, 上原記念生命科学財団研究報告集, 22(2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、有用なグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、甘藷茎葉加工物を含む、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤を提供する。
【００１０】
１つの実施態様では、上記甘藷茎葉加工物は、甘藷茎葉を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物である。
【００１１】
さらなる実施態様では、上記含水エタノールが、エタノールの含有量が８０容量％未満の含水エタノールである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、新規なグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤が提供される。このグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得、そして医薬品および飲食品に好適に利用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】甘藷茎葉粉末、甘藷茎葉熱水抽出物、甘藷茎葉含水エタノール抽出物、および甘藷茎葉ペプシン分解物のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。
【図２】甘藷茎葉熱水抽出物、画分１（水溶性−活性炭吸着画分）、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）、画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）、および画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明のグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）分泌促進剤は、甘藷茎葉加工物を含有する。本発明で用いられる甘藷茎葉加工物について、以下に説明する。
【００１５】
（１）甘藷茎葉
甘藷とは、ヒルガオ科に属する植物をいい、一般にサツマイモと呼ばれる。甘藷の品種は、特に限定されない。例えば、すいおう、ジョイホワイト、コガネセンガン、シロユタカ、サツマスターチ、アヤムラサキなどの品種が挙げられる。本明細書において「甘藷茎葉」とは、「甘藷の茎および甘藷の葉の少なくともいずれか」を指し、甘藷の葉のみ、甘藷の茎のみ、および甘藷の茎と葉との両方を含む。葉部と茎部とに篩別したものを用いてもよく、篩別しないものを用いてもよい。
【００１６】
甘藷茎葉としては、甘藷の栽培時に、地面から外に出ている茎または葉を用いることが好ましい。特に、地上から５ｃｍ以上、好ましくは１０ｃｍ以上、より好ましくは２０ｃｍ以上に成長した甘藷茎葉が好ましい。また、甘藷の茎が地面から外に出ている位置から甘藷茎葉の先端までの長さを測定した場合に、その長さが３００ｃｍ以下、好ましくは２００ｃｍ以下、より好ましくは１５０ｃｍ以下である甘藷茎葉が好ましい。
【００１７】
さらに、甘藷茎葉としては、甘藷茎葉の先端部分（「甘藷の若茎葉」）が好ましく、他の茎葉に比べて、黄味がかった緑色を保持している状態の甘藷の若茎葉がさらに好ましい。甘藷の若茎葉としては、甘藷茎葉の先端から６０ｃｍ以内の部位の茎葉が好ましく用いられる。甘藷の若茎葉は、植物体自身がやわらかいため、加工が容易である。さらに、甘藷茎葉の若茎葉は、乾燥粉末とした場合、舌触りがよく、様々な食品に利用しやすくなる。
【００１８】
本発明では、ポリフェノール含有量が高い「すいおう」の茎葉が特に好ましい。すいおうは、一度茎葉を収穫した後であっても、同じ茎の先端から甘藷の若茎葉が再生するという特徴があるため、すいおうの茎葉が好適に用いられ得る。
【００１９】
甘藷（特にすいおう）の茎または葉には、ポリフェノールの一種であるジカフェオイルキナ酸およびトリカフェオイルキナ酸が豊富に含まれている。例えば、すいおうの葉には、乾燥質量１００ｇあたり、トリカフェオイルキナ酸が１ｍｇ〜３００ｍｇ含まれている。甘藷茎葉（特にすいおうの茎葉）は、他の植物と比較して、特にトリカフェオイルキナ酸を多く含んでいる。
【００２０】
（２）甘藷茎葉加工物
甘藷茎葉は、品質安定性、長期保存性などの点から、加工（処理）が施され得る。本明細書において「甘藷茎葉加工物」とは、何らかの加工（処理）が施された甘藷茎葉をいう。処理としては、例えば、加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理、抽出処理などが挙げられる。これらの処理は、１種のみを行ってもよく、２種以上を行ってもよい。収穫した甘藷茎葉は、付着した泥などを水で洗浄した後にこれらの処理に供され得る。以下、甘藷茎葉の処理について具体的に説明する。
【００２１】
（２−１）加熱処理
加熱処理は、甘藷茎葉中の酵素の失活による品質の安定化、および甘藷茎葉の褪色を防ぐ目的で行われる。加熱処理としては、例えば、ブランチング処理、乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、水蒸気処理などが挙げられる。これら加熱処理のうち、ブランチング処理および水蒸気処理が好ましく用いられる。さらに、処理工程の便宜上、必要に応じて、甘藷茎葉を長径３〜３０ｃｍ程度に裁断してから、各処理を行ってもよい。
【００２２】
ブランチング処理を行う場合、緑色植物の色素であるクロロフィル（甘藷茎葉）の色が褪色しないようにするために、当業者が通常用いる方法を用いればよい。そのようなブランチング処理としては、例えば、湯通し、噴霧処理などが挙げられる。ブランチング処理は、用いる植物体によって、最適条件が大きく異なる。場合によっては、ブランチング処理によって、風味および栄養素が損なわれ、有用成分の生理活性が失われることもある。したがって、本発明では、ｐＨ５．４〜８．５、好ましくは６．０〜８．０、より好ましくは７．０に調整された熱水（例えば８５℃以上）で加熱処理（例えば１〜１０分間）を行い得る。
【００２３】
乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、および水蒸気処理により加熱処理を行う場合は、ｐＨが調整された溶液を甘藷茎葉に噴霧するなどのｐＨ調整処理を行った後、加熱処理をすることが好ましい。
【００２４】
ｐＨ調整処理は、当業者が通常用いる方法で行なわれる。例えば、塩基性条件下に調整する場合は、水酸化ナトリウム、重曹、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム（卵殻カルシウム、ホタテ貝殻カルシウム、サンゴカルシウムなど）、酸化カルシウム（炭酸カルシウムを焼成して得られる）などの溶液を用いればよい。もちろん、アルカリイオン水などを用いてもよい。一方、酸性条件下に調整する場合は、酢酸、クエン酸、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸などの有機酸の溶液を用いればよい。これらのｐＨ調整剤の量は、用いる調整剤によって適宜調整すればよい。
【００２５】
加熱処理における加熱温度は、８０℃より高い温度、好ましくは８５℃以上、より好ましくは９０℃以上の温度とするのがよい。加熱処理における加熱時間は、１０分以下、好ましくは５分以下、より好ましくは３分以下、さらにより好ましくは１０秒〜１分とするのがよい。
【００２６】
加熱処理後の甘藷茎葉は、緑色および風味を維持する上で、直ちに冷却することが好ましい。冷却は、加熱処理後の甘藷茎葉を冷却水中に浸漬する、冷風を当てて急冷するなど、当業者が通常用いる方法で行なえばよい。例えば、冷却水に浸漬して冷却する場合、３０℃以下の水を用いればよい。
【００２７】
（２−２）乾燥処理
乾燥処理は、加工前の甘藷茎葉の品質を保持するために、好ましく行われる。乾燥処理は、甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、そのまま、またはペースト状および圧搾して搾汁にした後、当業者が通常用いる任意の乾燥方法を用いて行われる。乾燥処理は、乾燥方法に応じた乾燥機、例えば、熱風乾燥機、高圧蒸気乾燥機、電磁波乾燥機、凍結乾燥機、減圧濃縮機、噴霧乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機などを用いて行われる。
【００２８】
この中でも、甘藷茎葉の乾燥処理には、製造コストや乾燥の効率の面から、熱風乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機が好ましく用いられる。
【００２９】
常圧での乾燥処理は、６０℃〜１５０℃、好ましくは７０℃〜１００℃で行うことが、風味が良く、色鮮やかな甘藷茎乾燥粉末が得られる点で好ましい。減圧下での乾燥処理は、６０℃以下、好ましくは甘藷茎葉、そのペーストまたは搾汁が凍結する温度以上でかつ６０℃以下で行うことが、栄養成分の損失を少なくすることができる点で好ましい。
【００３０】
乾燥処理は、乾燥後の産物中の水分含量が５質量％以下となるように行うことが好ましい。
【００３１】
甘藷茎葉をそのまま乾燥する場合は、２段階で行うことが好ましい。２段階乾燥は、例えば、熱風乾燥機などを用いて行うことができる。２段階乾燥では、まず、水分含有量が２５質量％以下となるまで、６０〜８０℃の温度で一次乾燥する。次いで、一次乾燥した甘藷茎葉の水分含有量が５質量％以下となるまで、一次乾燥よりも高い温度で二次乾燥する。
【００３２】
このとき、一次乾燥の乾燥温度が６０℃未満の場合は、乾燥速度が遅くなり、二次乾燥の乾燥温度が１００℃を超える場合は、焦げを生じることがある。したがって、二次乾燥の温度は、１００℃以下であることが好ましく、９０℃以下であることがより好ましく、８５℃以下、さらに好ましくは８０℃前後に調整し得る。
【００３３】
なお、一次乾燥と二次乾燥との温度差は、約５〜１５℃であることが好ましく、約１０℃であることがより好ましい。例えば、９０℃で二次乾燥する場合、一次乾燥の温度は、７５〜８５℃であることが好ましく、約８０℃であることがより好ましい。
【００３４】
この２段階の乾燥処理を行うことにより、乾燥時間が短縮されると同時に、甘藷茎葉の緑色および風味が維持される。温度差を上記のように一定範囲に設定することにより、乾燥処理における甘藷茎葉（特に緑葉）の水分管理が容易になり、効率的に乾燥が行われる。
【００３５】
回転式乾燥機を用いる場合は、例えば、甘藷茎葉を、一度フードプロセッサまたはマスコロイダーを用いて破砕し、ペースト状にしてから行う。この場合、甘藷茎葉を粉末化する場合と同様に、フードプロセッサで一度破砕した後に、マスコロイダーを用いてさらに細かくすることが好ましい。１００℃〜１５０℃、好ましくは１１０℃〜１３０℃の加熱温度で回転ドラムへ投入することで、水分含有量が５質量％以下の甘藷茎葉粉末を得ることができる。さらに、加熱温度が高温であるため同時に殺菌も行うことができる。この場合の加熱時間は、甘藷茎葉が変色するおそれがあるため、３０秒〜２分程度とすることが好ましい。
【００３６】
（２−３）粉末化処理
粉末化処理は、乾燥後または未乾燥の甘藷茎葉のいずれに対しても行われ得る。甘藷茎葉は、上記の加熱処理が施されていることが好ましい。乾燥した甘藷茎葉を粉末化処理に供し、甘藷茎葉乾燥粉末とし得る。未乾燥の甘藷茎葉を粉砕して細片状、ペースト状などにしてから、乾燥処理に供し、甘藷茎葉粉末を生成し得る。甘藷茎葉は、茎部と葉部（葉身部および葉柄部を含む）とからなるので、粉末化処理は、粉砕の効率を上げる観点から、粗粉砕工程または微粉砕工程を経ることが好ましい。
【００３７】
粗粉砕は、例えば、甘藷茎葉の乾燥物をカッター、スライサー、ダイサー等の当業者が通常用いる機械または道具によりカットする工程である。カットされた大きさは、長径が好ましくは２０ｍｍ以下であり、より好ましくは０．１〜１０ｍｍである。なお、ペースト状の破砕物を用いる場合は、この工程を省略してもよい。
【００３８】
粗粉砕工程に続いて微粉砕工程を行い得るが、微粉砕工程の前に殺菌工程を経てもよい。殺菌を施すことにより、粗粉砕した甘藷茎葉を均一に加熱することができ、甘藷茎葉（特に緑葉）の香味を良好にしつつ、効率の良い殺菌を行うことができる。殺菌は、高圧殺菌機、加熱殺菌機、加圧蒸気殺菌機などを用いて１１０℃以上で行われる。例えば、加圧蒸気殺菌機による殺菌の場合、粗粉砕した甘藷茎葉を、例えば、０．５〜１０ｋｇ／ｃｍ２の加圧下、１１０〜２００℃の飽和水蒸気に２〜１０秒間曝露する。必要に応じて、殺菌工程で甘藷茎葉に付着した水分をさらに除去する。
【００３９】
微粉砕の工程は、９０質量％が２００メッシュ区分を通過するように行われる。微粉砕は、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの当業者が通常用いる機械または装置を用いて行われる。微粉砕することにより甘藷茎葉の食感がよくなり、好ましくは、粗粉砕、殺菌、および微粉砕の工程を順に経ることにより、さらに食感がよくなる。
【００４０】
（２−４）圧搾処理
甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、圧搾機などに供し、搾汁を得ることもできる。
【００４１】
得られた搾汁を、上記の乾燥処理および粉末化処理を施さずそのまま用いる場合は、上記（２−３）に記載の殺菌工程（例えば８０℃〜１３０℃で加熱殺菌機による殺菌）を経ることが好ましい。
【００４２】
搾汁から乾燥粉末を得る場合は、得られた搾汁を、加熱乾燥機、減圧濃縮機、凍結乾燥機などを用いて乾燥する。得られた乾燥物を粉砕して粉末化すればよい。例えば、スプレードライヤーなどの噴霧乾燥機を用いれば、乾燥すると同時に粉末化される。噴霧乾燥を行なう場合は、回収率を上げるために、必要に応じて、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、マルトースのような賦形剤を添加する。好ましくはデキストリンが用いられる。搾汁とデキストリンとの質量比は、特に限定されないが、デキストリンの添加により粉末化を容易にするために、１：１０〜５：１が好ましい。
【００４３】
（２−５）抽出処理
抽出は、甘藷茎葉の生茎葉または上記の加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理などのいずれか少なくとも１つの処理が施された甘藷茎葉を溶媒と接触させることにより行われ得る。
【００４４】
抽出用の溶媒としては、水、有機溶媒または含水有機溶媒が挙げられる。好ましくは、水または含水有機溶媒が用いられ得る。本明細書において「含水有機溶媒」とは、水を含む有機溶媒をいい、水と有機溶媒とが相溶性であっても非相溶性であってもよい。すなわち、含水有機溶媒は、抽出前に水と有機溶媒とが予め混合されたものであっても、あるいは抽出の間に（例えば撹拌により）水と有機溶媒とが混合されるものでもよい。
【００４５】
水は、特に限定されない。例えば、湧水、井戸水、蒸留水、水道水、純水などを用いることができる。
【００４６】
有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエタンなどが挙げられる。本発明においては、これらの有機溶媒の中でも、アルコール（メタノール、エタノールなど）などの極性有機溶媒が好ましい。エタノールがさらに好ましい。
【００４７】
含水有機溶媒としては、好ましくは含水アルコールなどの含水極性有機溶媒、より好ましくは含水エタノールが挙げられる。含水有機溶媒中に含まれる有機溶媒の割合は、特に限定されないが、好ましくは８０容量％未満、より好ましくは７０容量％未満であり得る。
【００４８】
含水エタノールの場合、エタノールを８０容量％未満、好ましくは１０容量％〜７０容量％、より好ましくは２０容量％〜６０容量％含有する含水エタノールが用いられ得る。
【００４９】
抽出温度は、抽出溶媒に依存し得るが、４℃以上が好ましく、１０℃以上がより好ましい。例えば、２５℃以上、５０℃以上、７０℃以上、９０℃以上、９５℃以上、１００℃以上、１２１℃以上、および１３０℃以上の温度で抽出を行ない得る。また、１５０℃以下が好ましく、１００℃以下がより好ましい。用いる溶媒によって大気圧下で沸点に達する場合は、圧力をかけることによって、所定の温度で抽出を行えばよい。
【００５０】
抽出時間は、抽出温度および抽出溶媒に依存し得るが、好ましくは５分以上、より好ましくは１０分以上、さらにより好ましくは３０分以上である。また、好ましくは７２時間以下、より好ましくは４８時間以下である。
【００５１】
例えば、抽出は、抽出溶媒が水または含水エタノールの場合、４℃〜１００℃、好ましくは１０℃〜１００℃にて、１０分〜７２時間、好ましくは３０分〜４８時間、より好ましくは２時間〜４８時間保持することによって行い得る。
【００５２】
次に、甘藷茎葉と溶媒とを用いて、抽出物を製造する方法について説明する。抽出物を製造するためには、甘藷茎葉と溶媒とを接触させる必要がある。その接触の方法は、特に限定されないが、例えば、化学工学的な抽出方法（固液抽出法）を用いて、甘藷茎葉と溶媒とを接触させ得る。そして、化学工学的な抽出方法としては、例えば、下記の方法１および方法２が挙げられる。
【００５３】
方法１：静止した固体層内（甘藷茎葉の層内）を溶媒が浸透還流することにより、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させる方法。
【００５４】
方法２：固体（甘藷茎葉）を溶媒中に分散または浸漬させて、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させる方法。
【００５５】
「方法２」においては、所定の温度に調整された溶媒中に、甘藷茎葉を分散または浸漬させて、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させ得る。所定の温度に調整された溶媒の温度は、その溶媒が還流する温度（すなわち沸点）が好ましいが、これに限定されない。抽出中においても、溶媒の温度を保持し、溶媒を還流させながら、甘藷茎葉の成分を溶媒に溶解させることが好ましい。溶媒の温度を保持すれば、得られる抽出物の品質および量が安定化するからである。
【００５６】
抽出溶媒は、甘藷茎葉の乾燥質量５０ｇに対して、適量、好ましくは１００ｍＬ以上、より好ましくは４００ｍＬ以上で、また、好ましくは２５００ｍＬ以下で用いられ得る。用いる溶媒の量を分割して複数回の抽出に用いてもよい。具体的には、１０００ｍＬの溶媒を１回の抽出に用いてもよく、５００ｍＬずつ分けて２回の抽出に用いてもよい。
【００５７】
甘藷茎葉抽出物は、例えば、甘藷茎葉１質量部に対して、水もしくはエタノール含有量が８０容量％未満、好ましくは１０容量％〜７０容量％の含水エタノール、より好ましくは２０容量％〜６０容量％の含水エタノールを０．５質量部〜１００質量部、好ましくは０．５質量部〜５０質量部添加し得る。なお、６０容量％の含水エタノールを用いることで、低極性成分および高極性成分を効率的に抽出することが可能である。
【００５８】
１つの実施態様では、甘藷茎葉抽出物は、以下の調製例１または２に準じて調製され得るが、いくらかの改変を伴い得る。簡単に説明すると、上記の加熱処理、乾燥処理および粉末化処理を施して得られた甘藷茎葉乾燥粉末５０ｇに対して、適量の純水を添加し、常温（例えば２０℃）にて、または沸点付近の温度（例えば９８℃）のオイルバスによる沸騰水浴中にて充分置き、固液分離後の液体を回収することにより、抽出物が製造され得る。さらに以下の調製例５に準じて、得られた上記液体（水溶性画分）を活性炭処理し、水溶性−活性炭吸着画分と水溶性−活性炭非吸着画分とに分画するか、または以下の調製例６に準じて、上記固液分離後の残渣（水不溶性画分）に適量の含水エタノールを添加し、水不溶性−エタノール溶解画分と水不溶性−エタノール不溶画分とに分画することによっても、抽出物が製造され得る。あるいは、上記の加熱処理、乾燥処理および粉末化処理を施して得られた甘藷茎葉乾燥粉末５０ｇに対して、適量の含水エタノールを添加し、常温（例えば２０℃）にて充分置き、固液分離後の液体を回収することにより、抽出物が製造され得る。
【００５９】
得られた抽出物は、さらに、抽出の終了後に溶媒を蒸発させて、濃縮抽出物または抽出物粉末として用いてもよい。濃縮抽出物は、減圧濃縮機などを用いて調製され得る。抽出物粉末は、上記の乾燥粉末化処理を用いて調製され得る。
【００６０】
甘藷茎葉加工物の一例として、株式会社東洋新薬製の「甘藷若葉末」が、好ましく用いられ得る。これは、すいおうの甘藷茎葉を加熱処理後、乾燥処理および粉末化処理を施した甘藷茎葉粉末である。
【００６１】
（３）グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）分泌促進剤
甘藷茎葉（特に「すいおう」の甘藷茎葉）中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、（ｉ）甘藷茎葉加工物に含まれ、（ii）甘藷茎葉抽出物（特に、水抽出物（例えば、以下の調製例１の「熱水抽出物」）および含水エタノール抽出物（例えば、以下の調製例２の「含水エタノール抽出物」））中に含まれ、そして（iii）経口摂取後に胃内消化（ペプシン分解）を受けても、ＧＬＰ−１分泌活性を維持し得る。さらに、ＧＬＰ−１分泌促進成分は、甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着画分（例えば、以下の調製例５に記載の「画分２」）および、水不溶性であるが含水エタノールに可溶性の画分（例えば、以下の調製例６に記載の「画分３」）中に含まれる。
【００６２】
本発明によれば、甘藷茎葉加工物、好ましくは、甘藷茎葉（甘藷茎葉の生茎葉または上記の加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理などのいずれか少なくとも１つの処理が施された甘藷茎葉）を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物を、ＧＬＰ−１分泌促進剤として使用し得る。甘藷茎葉抽出物に関しては、甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着画分および、水不溶性であるが含水エタノールに可溶性の画分もまた、ＧＬＰ−１分泌促進剤として使用し得る。
【００６３】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、甘藷茎葉加工物を含有し得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤中の甘藷茎葉加工物の量は特に限定されない。
【００６４】
ＧＬＰ−１は、食物の刺激による、インスリン分泌促進、満腹中枢の刺激、消化管の蠕動運動抑制などの作用を有する。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得る。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、ＧＬＰ−１分泌の増大によって改善される任意の症状の予防および治療にも有用であり得る。
【００６５】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の配合量は、配合される製品の種類または剤形、投与または摂取の対象の年齢、性別、体重または状態、投与または摂取の方法、時期または時間などに応じて適宜設定され得る。
【００６６】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の投与量は、例えば、有効成分として、通常成人１人につき１日１回当たり１０〜２０００ｍｇ、好ましくは１００〜１０００ｍｇ、特に好ましくは３００〜１０００ｍｇであり得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤の投与時期は、食前、食間および食後のいずれでもよく、数回に分けて投与してもよい。
【００６７】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、経口投与または摂取用の組成物として調製され得る。ＧＬＰ−１分泌促進剤は、需要者の嗜好に合わせて、ハードカプセル、ソフトカプセルのようなカプセル剤、錠剤、丸剤などの剤形、または粉末状、顆粒状、飴状などの形状に成形され得る。また、溶液、懸濁液、または乳液のような液状の剤形もしくは形状にも調製され得る。
【００６８】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、医薬品、医薬部外品、特定保健用食品、栄養補助食品、その他の飲食品などとして、あるいはこれらに配合して用いることができる。
【００６９】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤あるいはその配合製品は、剤形もしくは形状または好みに応じて、そのまま摂取しても良いし、水、湯、牛乳、豆乳、茶、ジュースなどに溶かして摂取しても良い。
【００７０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００７１】
本実施例において、「甘藷茎葉粉末」とは、「すいおう」の甘藷茎葉粉末（株式会社東洋新薬製、商品名「甘藷若葉末」）をいう。
【００７２】
（調製例１：甘藷茎葉熱水抽出物の調製）
甘藷茎葉粉末５０ｇを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の純水に懸濁した。フラスコをオイルバス（９８℃）上の沸騰水浴中に配置し、１５〜２０分おきに振り混ぜながら、２時間加熱した。粗熱を取った後、フラスコ内容物を吸引ろ過した。ろ液を回収し、減圧濃縮した（水温５０℃）。得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「熱水抽出物」または「甘藷茎葉熱水抽出物」ともいう）。
【００７３】
（調製例２：甘藷茎葉含水エタノール抽出物の調製）
甘藷茎葉粉末５０ｇを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の６０容量％含水エタノールに懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温（２０℃）にて充分浸漬した（遮光はしなかった）。フラスコ内容物を吸引ろ過し、ろ液を回収し、減圧濃縮（水温４０℃）した後、凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「含水エタノール抽出物」または「甘藷茎葉含水エタノール抽出物」ともいう）。
【００７４】
（調製例３：甘藷茎葉ペプシン分解物の調製）
甘藷茎葉粉末１０ｇをpH1.85のリン酸緩衝液に懸濁し、ペプシン（シグマ社製）をこの乾燥粉末に対して０．５質量％の割合で添加した。この混合液を３７℃にて１０分間保持し、ペプシン処理を行った。沸騰浴中で２０分間処理して酵素反応を停止後、水酸化カルシウムで中和し、遠心分離後の上清を凍結乾燥し、粉末を得た（以下、単に「ペプシン分解物（１０分）」または「甘藷茎葉ペプシン分解物（１０分）」ともいう）。
【００７５】
（調製例４：甘藷茎葉ペプシン分解物の調製）
ペプシン処理時間を６０分間としたこと以外は、調製例３と同様にして甘藷茎葉ペプシン分解物の粉末を得た（以下、単に「ペプシン分解物（６０分）」または「甘藷茎葉ペプシン分解物（６０分）」ともいう）。
【００７６】
（実施例１：ＧＬＰ−１分泌試験１）
ＧＬＰ−１分泌試験を以下の手順で行った。まず、マウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇ（Dr. Daniel J. Drucker, Mount Sinai Hospital Samuel Lunenfeld Research Institute Banting and Best Diabetes Centre, University of Torontoより提供）を、４８ウェルプレート中で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ改変イーグル培地にて、３７℃、５％ＣＯ２存在下、サブコンフルエントになるまで２〜３日間培養した。続いて、ウェルから培養培地を取り除き、Ｈｅｐｅｓバッファー（140mM NaCl、4.5mM KCl、20mM Hepes、1.2mM CaCl2、1.2mM MgCl2、10mM D-グルコース、0.1% ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、pH 7.4）にてウェル中で細胞を洗浄した後、同Ｈｅｐｅｓバッファーに溶解した試験物質溶液80μＬを各ウェルに添加し、３７℃にて６０分間インキュベートした。上清を回収し、８００×ｇで４℃にて５分間、遠心分離して細胞を沈殿させ、その上清70μＬを回収し、凍結保存した。凍結保存した上清を適宜解凍し、上清中のＧＬＰ−１濃度を、市販のEnzyme immuno assay kit（矢内原研究所製）を用いて定量した。上清中のＧＬＰ−１濃度（ｎＭ）をＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇからのＧＬＰ−１分泌量とした。
【００７７】
試験物質として、以下を用いた（いずれも１０ｍｇ／ｍＬ）：
ＺｅｉｎＨ（トウモロコシ難消化性タンパク質Ｚｅｉｎのパパイン加水分解物：トウモロコシ由来ゼイン（東京化成工業株式会社製）を脱塩水に懸濁してpH７に調整し、パパイン（アサヒビール株式会社製）を基質に対して０．５質量％の割合で添加して５５℃にて６０分間処理し、煮沸によりパパインを失活させた後、遠心上清を凍結乾燥したもの；陽性コントロールとして使用）；
甘藷茎葉粉末；
調製例１の熱水抽出物；
調製例２の含水エタノール抽出物；
調製例３の甘藷茎葉ペプシン分解物（１０分）；
調製例４の甘藷茎葉ペプシン分解物（６０分）。
【００７８】
結果を図１に示す。図１は、甘藷茎葉粉末、甘藷茎葉熱水抽出物、甘藷茎葉含水エタノール抽出物、および甘藷茎葉ペプシン分解物のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。陰性コントロールとして未処理のブランクおよび陽性コントロールとしてＺｅｉｎＨ処理の結果を併せて示す。縦軸は、ＧＬＰ−１分泌量をｎＭ単位で表し、そして横軸は、左から順に、「ブランク」が陰性コントロール区（未処理区）の結果、「ＺｅｉｎＨ」が陽性コントロール区（ＺｅｉｎＨ添加区）の結果、「甘藷茎葉粉末」が甘藷茎葉粉末処理区の結果、「熱水抽出物」が熱水抽出物処理区の結果、「含水エタノール抽出物」が含水エタノール抽出物処理区の結果、「ペプシン分解物（１０分）」がペプシン分解物（１０分）処理区の結果、そして「ペプシン分解物（６０分）」がペプシン分解物（６０分）処理区の結果を示す。結果の値は、平均値＋標準誤差で表す（ｎ＝３〜４）。図中のａ、ｂ、ｃおよびｄは、ダンカンの多群間有意差検定において、異なるアルファベットを有する記号の表示で、処理群の間に有意差があることを示す（Ｐ＜0.05）。
【００７９】
図１に示されるように、甘藷茎葉粉末については、陽性コントロールのＺｅｉｎＨと同等のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。熱水抽出物および含水エタノール抽出物については、ともにＺｅｉｎＨよりも有意に高いＧＬＰ−１分泌活性が見られた。
【００８０】
ペプシン分解物については、１０分処理および６０分処理のいずれも、陽性コントロールのＺｅｉｎＨと同等のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。ＧＬＰ−１分泌活性にはペプシン処理時間の影響は見られなかった。したがって、「すいおう」の甘藷茎葉中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、経口摂取後に胃内消化を受けてもＧＬＰ−１分泌活性を維持し得ることが分かった。
【００８１】
以上より、「すいおう」の甘藷茎葉中のＧＬＰ−１分泌促進成分は、（ｉ）甘藷茎葉粉末に含まれ、（ii）特に、熱水抽出物および含水エタノール抽出物中に含まれ、そして（iii）経口摂取後に胃内消化を受けてもＧＬＰ−１分泌活性を維持し得るものであることが分かった。
【００８２】
（調製例５：甘藷茎葉水溶性画分の活性炭吸着処理による分画）
甘藷茎葉粉末１００gを量りとり、粉末をスパチュラで攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温（２０℃）の純水に懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温（２０℃）にて充分浸漬した。その後遠心して上清を回収し、吸引ろ過して、ろ液および残渣を得た。ろ液を減圧濃縮して、得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末状の「水溶性画分」を得た。この「水溶性画分」を水に溶解させた後、活性炭カラムクロマトグラフィーに供し、次の２つの画分を得た。１つは、活性炭吸着物をメタノールおよびアセトンを用いて脱着させて溶出させた画分であり、これを画分１とする（「水溶性−活性炭吸着画分」）。もう１つは、活性炭に吸着せずに素通りした画分であり、これを、画分２とする（「水溶性−活性炭非吸着画分」）。
【００８３】
（調製例６：甘藷茎葉水不溶性画分の含水エタノールによる分画）
調製例５で得られた、吸引ろ過後の残渣を凍結乾燥し、粉末状の「水不溶性画分」を得た。この「水不溶性画分」に６０容量％含水エタノールを添加して、次の２つの画分を得た。１つは、「水不溶性画分」を６０容量％含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られたろ液であり、これを画分３とする（「水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分」）。もう１つは、「水不溶性画分」を６０容量％含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られた残渣であり、これを画分４とする（「水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分」）。
【００８４】
（実施例２：ＧＬＰ−１分泌試験２）
試験物質として、ＺｅｉｎＨ（陽性コントロールとして使用）、調製例１の熱水抽出物、調製例５の画分１および２、ならびに調製例６の画分３および４を用いたこと以外は、実施例１と同様にしてＧＬＰ−１分泌試験を行った。なお、試験物質は、熱水抽出物およびＺｅｉｎＨについては１０ｍｇ／ｍＬ、そして画分１〜４については熱水抽出物１０ｍｇ／ｍＬ相当量となるように調製した。
【００８５】
結果を図２に示す。図２は、甘藷茎葉熱水抽出物、画分１（水溶性−活性炭吸着画分）、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）、画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）、および画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）のそれぞれの処理によるマウス大腸由来のＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇのＧＬＰ−１分泌量を棒グラフにて表した図である。陰性コントロールとして未処理のブランクおよび陽性コントロールとしてＺｅｉｎＨ処理の結果を併せて示す。縦軸は、ＧＬＰ−１分泌量をｎＭ単位で表し、そして横軸は、左から順に、「ブランク」が陰性コントロール区（未処理区）の結果、「ＺｅｉｎＨ」が陽性コントロール区（ＺｅｉｎＨ添加区）の結果、「熱水抽出物」が調製例１の甘藷茎葉熱水抽出物処理区の結果、「画分１」が画分１（水溶性−活性炭吸着画分）処理区の結果、「画分２」が画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）処理区の結果、「画分３」が画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）処理区の結果、そして「画分４」が画分４（水不溶性−６０容量％エタノール不溶画分）処理区の結果を示す。結果の値は、平均値＋標準誤差で表す（ｎ＝４）。図中のａ、ｂおよびｃは、ダンカンの多群間有意差検定において、異なるアルファベットを有する記号の表示で、処理群の間に有意差があることを示す（Ｐ＜0.05）。
【００８６】
図２に示されるように、画分２（水溶性−活性炭非吸着画分）および画分３（水不溶性−６０容量％エタノール溶解画分）について、ともにＺｅｉｎＨよりも有意に高く、熱水抽出物と同程度のＧＬＰ−１分泌活性が見られた。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
甘藷茎葉加工物は、そのＧＬＰ−１分泌促進作用に基づき、糖尿病および肥満の予防および改善に有用であり得る。このような甘藷茎葉加工物を含むＧＬＰ−１分泌促進剤は、医薬品および飲食品への広範な利用が可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘藷茎葉加工物を含む、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【請求項２】
前記甘藷茎葉加工物が、甘藷茎葉を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物である、請求項１に記載のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【請求項３】
前記含水エタノールが、エタノールの含有量が８０容量％未満の含水エタノールである、請求項２に記載のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【請求項１】
甘藷茎葉加工物を含む、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【請求項２】
前記甘藷茎葉加工物が、甘藷茎葉を水または含水エタノールで抽出して得られる甘藷茎葉抽出物である、請求項１に記載のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【請求項３】
前記含水エタノールが、エタノールの含有量が８０容量％未満の含水エタノールである、請求項２に記載のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−２０９９３（Ｐ２０１２−２０９９３Ａ）
【公開日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１３３８９８（Ｐ２０１１−１３３８９８）
【出願日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（３９８０２８５０３）株式会社東洋新薬 (182)
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人北海道大学 (971)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年６月１６日（２０１１．６．１６）
【出願人】（３９８０２８５０３）株式会社東洋新薬 (182)
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人北海道大学 (971)
【Ｆターム（参考）】
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