本発明は、全長アポリポタンパク質(例えば、アポAIおよびアポE)に匹敵するコレステロール流出活性を有し、かつ全長アポリポタンパク質に匹敵するABAC1に対する高い選択性を有する、非天然ポリペプチドのファミリーを提供する。本発明はまた、そのようなポリペプチドを含む組成物、そのようなポリペプチドを同定、スクリーニングおよび合成する方法、ならびに脂質異常症、高コレステロール血症および炎症に関連する疾患および障害を治療、予防または診断する方法も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド：

式中、
X₁、X₇、およびX₁₅は、EおよびDからなる群より独立して選択されるアミノ酸であり；
X₄、X₁₁、およびX₁₈は、E、D、A、およびGからなる群より独立して選択されるアミノ酸であり；
X₂、X₆、X₉、X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₆、X₁₇、およびX₂₀は、F、L、W、I、V、およびAからなる群より独立して選択されるアミノ酸であり；
X₃、X₅、およびX₁₉は、R、K、およびCからなる群より独立して選択されるアミノ酸であり；
X₁₄はアミノ酸R、A、E、またはCであり；かつ
X₈はA、G、またはVである。
【請求項２】
X₁₀、X₁₂、X₁₆、およびX₁₇が、F、L、I、およびWからなる群より独立して選択される、請求項1記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
X₁₀、X₁₂、X₁₆、およびX₁₇が、FおよびLより独立して選択される、請求項2記載の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
X₉がL、F、またはWである、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項５】
X₂位、X₆位、X₁₂位、およびX₁₇位のうちの少なくとも3つがLである、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたペプチド。
【請求項６】
X₄位、X₈位、およびX₁₁位の1つまたは複数がAである、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項７】
X₈がAである、請求項6記載の単離されたポリペプチド。
【請求項８】
X₄、X₁₁、およびX₁₈が、DおよびEからなる群より独立して選択される、請求項1記載の単離されたポリペプチド。
【請求項９】
X₃、X₅、X₁₄、およびX₁₉からなる群より選択される1つの位置にCが存在する、請求項1記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１０】
以下を含む、請求項1記載の単離されたポリペプチド：

式中、
X₁、X₇、X₁₅、およびX₁₈は、DおよびEからなる群より独立して選択され；
X₂はL、I、またはVであり；
X₄およびX₁₁は、D、E、およびAからなる群より独立して選択され；
X₃、X₅、およびX₁₉は、KおよびRからなる群より独立して選択され；
X₉はW、F、またはLであり；
X₁₄はR、E、またはAであり；かつ
X₆、X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₆、X₁₇、およびX₂₀は、F、L、I、およびWからなる群より独立して選択される。
【請求項１１】
X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₆、X₁₇、およびX₂₀が、LおよびFからなる群より独立して選択される、請求項10記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
以下を含む、請求項10記載の単離されたポリペプチド：
X₁LRAX₅LX₇AX₉X₁₀AX₁₂X₁₃RX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈RX₂₀(SEQ ID NO:28)
式中、
X₁、X₇、X₁₅、およびX₁₈は、DおよびEからなる群より独立して選択され；
X₅はKまたはRであり；
X₉はF、L、またはWであり；かつ
X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₆、X₁₇、およびX₂₀は、FおよびLからなる群より独立して選択される。
【請求項１３】
以下を含む、請求項10記載の単離されたポリペプチド：

式中、
X₁、X₄、X₇、X₁₁、X₁₅、およびX₁₈は、DおよびEからなる群より独立して選択され；
X₅はKまたはRであり；
X₉はF、L、またはWであり；かつ
X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₆、X₁₇、およびX₂₀は、FおよびLからなる群より独立して選択される。
【請求項１４】

含む、請求項13記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
C、K、Y、またはLからなる群より選択されるX₂₁をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
SまたはCであるX₂₂をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
X₂₁がKである、請求項15記載の単離されたペプチド。
【請求項１８】
X₂₂がSである、請求項17記載の単離されたペプチド。
【請求項１９】
X₂₁またはX₂₂がCである、請求項16記載の単離されたペプチド。
【請求項２０】
保護基をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２１】
前記保護基が、アセチル(Ac)、アミド、炭素3〜20個のアルキル基、Fmoc、t-ブトキシカルボニル(Tboc)、9-フルオレンアセチル基、1-フルオレンカルボン酸基、9-フルオレンカルボン酸基、9-フルオレノン-1-カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル(Xan)、トリチル(Trt)、4-メチルトリチル(Mtt)、4-メトキシトリチル(Mmt)、4-メトキシ-2,3,6-トリメチル-ベンゼンスルホニル(Mtr)、メシチレン-2-スルホニル(Mts)、4,4-ジメトキシベンズヒドリル(Mbh)、トシル(Tos)、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルホニル(Pmc)、4-メチルベンジル(MeBzl)、4-メトキシベンジル(MeOBzl)、ベンジルオキシ(BzlO)、ベンジル(Bzl)、ベンゾイル(Bz)、3-ニトロ-2-ピリジンスルフェニル(Npys)、1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)エチル(Dde)、2,6-ジクロロベンジル(2,6-DiCl-Bzl)、2-クロロベンジルオキシカルボニル(2-Cl-Z)、2-ブロモベンジルオキシカルボニル(2-Br-Z)、ベンジルオキシメチル(Bom)、シクロヘキシルオキシ(cHxO)、t-ブトキシメチル(Bum)、t-ブトキシ(tBuO)、t-ブチル(tBu)、およびトリフルオロアセチル(TFA)からなる群より選択される保護基である、請求項20記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２２】
前記保護基がアミノ末端またはカルボキシ末端に結合している、請求項20または21記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２３】
アミノ末端に結合している第1保護基、およびカルボキシル末端に結合している第2保護基を含む、請求項20、21、または22記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２４】
前記第1保護基が、アセチル、プロピオニル、および炭素3〜20個のアルキルからなる群より選択される保護基である、請求項23記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２５】
前記第1保護基がアセチルである、請求項24記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２６】
前記第2保護基がアミドである、請求項23、24または25記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２７】
鏡像異性アミノ酸がすべて「D」アミノ酸である、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２８】
鏡像異性アミノ酸が「L」アミノ酸と「D」アミノ酸との混合物である、請求項1〜26のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２９】
請求項1記載の配列を有する第2ペプチドに結合している、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３０】
前記第2ペプチドが第1ペプチドと同じ配列を有する、請求項29記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３１】
コレステロール流出活性を有する、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３２】
ヒト血漿中でプレβ形成を誘導した、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３３】
ABCA1安定化活性を有する、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３４】
酸化剤による酸化からリン脂質を保護する、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３５】
薬学的に許容される担体と混合される、前記請求項のいずれか一項記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３６】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドと実質的に類似している三次元高次構造を有する、ペプチド模倣体。
【請求項３７】
レトロ-インベルソ(retro-inverso)類似体である、請求項36記載のペプチド模倣体。
【請求項３８】
レトロ-エナンチオ類似体である、請求項36記載のペプチド模倣体。
【請求項３９】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体、および薬学的に許容される担体
を含む、組成物。
【請求項４０】
心血管疾患を治療するための治療剤をさらに含む、請求項39記載の組成物。
【請求項４１】
前記治療剤が、スタチン、胆汁酸結合剤、血小板凝集阻害剤、ニコチンアミド、PPAR活性化剤、ビタミンE、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項40記載の組成物。
【請求項４２】
脂質と複合体化された請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体を含む、組成物。
【請求項４３】
前記脂質がリン脂質である、請求項42記載の組成物。
【請求項４４】
前記リン脂質が1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロール-3-ホスファチジルコリン(「POPC」)である、請求項43記載の組成物。
【請求項４５】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項42〜44のいずれか一項記載の組成物。
【請求項４６】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドを哺乳動物に投与し、それによってコレステロール流出が媒介される段階
を含む、哺乳動物におけるコレステロール流出を媒介する方法。
【請求項４７】
前記ポリペプチドがABCAを安定化する、請求項46記載の方法。
【請求項４８】
前記ABCAがABCA1である、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
前記ポリペプチドが抗酸化活性を有する、請求項46記載の方法。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが抗炎症活性を有する、請求項46記載の方法。
【請求項５１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項46記載の方法。
【請求項５２】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項46記載の方法。
【請求項５３】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドの治療的有効量を哺乳動物に投与する段階
を含む、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化の症状を治療するための方法。
【請求項５４】
前記哺乳動物が、アテローム性動脈硬化の1つまたは複数の症状を有すると診断された哺乳動物である、請求項53記載の方法。
【請求項５５】
前記哺乳動物が、アテローム性動脈硬化のリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項53記載の方法。
【請求項５６】
前記哺乳動物がヒトである、請求項53記載の方法。
【請求項５７】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項53記載の方法。
【請求項５８】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドを哺乳動物に投与する段階
を含む、哺乳動物の管腔壁内の不安定プラークを安定化するための方法。
【請求項５９】
前記哺乳動物が、1つまたは複数の不安定プラークを有すると診断された哺乳動物である、請求項58記載の方法。
【請求項６０】
前記哺乳動物が、1つまたは複数の不安定プラークを有するリスクがあると診断された哺乳動物である、請求項58記載の方法。
【請求項６１】
両親媒性αヘリックスを含むポリペプチド変種を作製する方法であって、
該変種がコレステロール流出活性および/またはABCA安定化活性を有し、
該方法が、
(a) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を有するポリペプチドを提供する段階；
(b)ポリペプチド変種を生成するために、該ポリペプチドの少なくとも1つのアミノ酸位を置換する段階；
(d) コレステロール流出活性および/またはABCA安定化活性について該ポリペプチド変種をスクリーニングする段階；
(e) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を有する該ポリペプチドのコレステロール流出活性の少なくとも80%を有する該ポリペプチド変種を選択する、および/またはSEQ ID NO:2のアミノ酸配列を有する該ポリペプチドのABCA安定化活性の少なくとも80%を有する該ポリペプチド変種を選択する段階；ならびに
(f) 選択された該ポリペプチド変種を合成する段階
を含む、
方法。
【請求項６２】
前記ポリペプチド変種がDアミノ酸を少なくとも1つ含む、請求項61記載の方法。
【請求項６３】
前記ポリペプチド変種のカルボキシ末端がDアミノ酸を含み、かつ該ポリペプチド変種のアミノ末端がDアミノ酸を含む、請求項61記載の方法。
【請求項６４】
前記ポリペプチド変種がすべてDアミノ酸を含む、請求項61記載の方法。
【請求項６５】
請求項1〜34のいずれか一項記載のポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体を含む容器を含む、アテローム性動脈硬化の症状を治療するためのキット。
【請求項６６】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項65記載のキット。
【請求項６７】
単位剤形中で、前記ポリペプチドが薬学的に許容される担体と混合されている、請求項65記載のキット。
【請求項６８】
薬剤として使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項６９】
脂質異常症に関連する障害の治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７０】
コレステロール流出障害の治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７１】
高コレステロール血症の治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７２】
炎症の治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７３】
アテローム性動脈硬化の治療においてまたはアテローム性動脈硬化の症状を予防するための治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７４】
プラークの安定化に関する治療において使用するための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体。
【請求項７５】
インビトロでABCAに結合させるための、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体の使用。
【請求項７６】
検出可能な部分に直接または間接的に結合している、請求項1〜34のいずれか一項記載の単離されたポリペプチドまたは請求項36〜38のいずれか一項記載のペプチド模倣体
を含む、検出可能な親和性リガンド。
【請求項７７】
標識が、蛍光色素、金属、発色団色素、化学発光化合物、生物発光タンパク質、酵素、放射性同位体、磁性酸化鉄粒子、気体含有小胞、および量子ドットからなる群より選択される、請求項76記載の検出可能な親和性リガンド。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【公表番号】特表２０１１−５２５１８１（Ｐ２０１１−５２５１８１Ａ）
【公表日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１４７７８（Ｐ２０１１−５１４７７８）
【出願日】平成２１年６月１７日（２００９．６．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４７６９４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５５３６６
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５９２１３０６９９）ザ　リージェンツ　オブ　ザ　ユニバーシティ　オブ　カリフォルニア (364)
【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ　Ｒｅｇｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ
【Ｆターム（参考）】