サイトカラシン誘導体およびその製造方法
【課題】種々のキャリアタンパク質または標識化合物との複合体を容易に形成できるサイトカラシン誘導体を提供する。
【解決手段】オキシラン環を有するサイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、オキシラン環を開環させ、開環したオキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体を結合させることにより得られるサイトカラシン誘導体である。
【解決手段】オキシラン環を有するサイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、オキシラン環を開環させ、開環したオキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体を結合させることにより得られるサイトカラシン誘導体である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイトカラシン誘導体およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
植物の根に寄生して、自ら分泌する毒性代謝産物によって植物を衰弱・枯死させる土壌伝染性の菌類が存在する。なかでも、白紋羽病菌（Rosellinia necatrix Prillieux）は、極めて宿主範囲が広く、リンゴ、ナシ、モモ、スモモ、ブドウ、ウメ、サクランボ、カンキツ、ビワ、イチジク、カキ、クリなどほとんど全ての果樹、バラ、ツツジ、ジンチョウゲなどの花木、さらにサツマイモなどの草本植物でも感染が確認されている。近年、白紋羽病による果樹の被害が増大しており、果樹生産者の被る経済的被害は年々深刻化している。白紋羽病は、発病後の治療が困難であるため、発病した場合は株ごと取り除き、周囲の土を消毒しなければならない。発見が遅れると果樹園全体に病気が蔓延し、その被害は甚大なものとなる。したがって、簡便で迅速な白紋羽病の早期発見法の確立は極めて重要な課題となっている。
【０００３】
サイトカラシンＥは、白紋羽病菌が産生する毒性代謝産物であり、下記式（Ｉ）で示される。
【０００４】
【化１】
【０００５】
サイトカラシンＥは、樹木等の根部より感染した白紋羽病菌が徐々に樹木等に浸食する過程で分泌され、樹木内に吸収されると考えられる。従って、サイトカラシンＥの高感度検出ができれば、感染を早期に発見し、白紋羽病の蔓延を未然に防ぐことが可能になると期待される。
【０００６】
植物サンプル中のサイトカラシンＥの分析方法としては、植物サンプルから分子インプリントカラムを用いてサイトカラシンＥを抽出し、質量分析計を用いてサイトカラシンＥの測定を行う方法が、本発明者らにより提案されている（特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００７−１８７６５３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記特許文献１に記載の方法によれば、植物サンプル中の微量のサイトカラシンＥを測定できるものの、ＨＰＬＣ／ＭＳやＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどの高感度検出機器を用いる必要があり、果樹園などの現場で簡便に実施することができないという問題がある。そのため、このような高価な高感度検出機器を用いることなく、サイトカラシンＥを高感度測定できる方法の開発が強く望まれている。
【０００８】
標的化合物を簡便かつ高感度に測定できる方法の１つに、標的化合物と特異的に結合する抗体を使用する免疫学的測定法がある。標的化合物との特異性が非常に高い抗体を得ることができれば、迅速かつ低コストに多検体を検査することができる。しかしながら、通常、サイトカラシンＥのような低分子化合物を免疫してもその特異抗体を得ることはできない。このため、低分子化合物（ハプテン）をキャリアタンパク質に結合させて複合体を形成させ、この複合体を免疫原として特異抗体を得る必要がある。
【０００９】
また、サイトカラシンＥはそれ自身に強い吸光や蛍光の性質を持たないため、抗原抗体反応を用いる分析法や高速液体クロマトグラフィーなどの分離分析法において検出感度が低いという問題がある。それゆえ、高感度検出のための標識化合物によるサイトカラシン類の誘導体化の実現も切望されている。
そこで、本発明は、サイトカラシン類の簡便かつ高感度な検出技術の開発のために、サイトカラシンＥと種々のキャリアタンパク質または標識化合物との複合体を容易に形成できるサイトカラシン誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、サイトカラシンＥとアンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、種々のキャリアタンパク質あるいは標識化合物との複合体を容易に形成可能なサイトカラシン誘導体が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
すなわち、本発明に係るサイトカラシン誘導体は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体との反応により、前記オキシラン環を開環させ、開環した該オキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２または前記エチレンジアミンまたは前記イミダゾール誘導体が結合して得られたことを特徴としている。
【００１２】
オキシラン環を有するサイトカラシンは、サイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧであることが好ましい。
【００１３】
本発明に係るサイトカラシン誘導体の製造方法は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させる工程を包含することを特徴としている。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のサイトカラシン誘導体は、種々のキャリアタンパク質あるいは標識化合物と複合体を形成させることができるので、この複合体を免疫原としてサイトカラシンの特異抗体を作製することができる。また、抗原抗体反応を用いる分析法や高速液体クロマトグラフィーなどの分離分析法の高感度検出のための標識化合物によるサイトカラシン類の標識誘導体も作製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明のサイトカラシン誘導体は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、開環したオキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体が結合した構造を有している。オキシラン環を有するサイトカラシンとしては、上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥ以外に、下記式（ＩＩ）で示されるサイトカラシンＦおよび下記式（ＩＩＩ）で示されるサイトカラシンＧが知られている。
【００１６】
【化２】
【００１７】
例えば、上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥとアンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、下記式（ＩＶ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００１８】
【化３】
【００１９】
（式中、ＸはＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体を表す。）
なお、Ｘは上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、本発明のサイトカラシン誘導体は、上記式（ＩＶ）の構造に限定されない。
【００２０】
ここで、オキシラン環（エポキシ環）は、アミンにより開環することが報告されている（参考文献１：Najmodin Azizi and Mohammad R. Saidi, Highly Chemoselective Addition of Amines to Epoxides in Water, Org. Lett., 7 (17), 3649 -3651, 2005. 参考文献２：Shivani, Brahmam Pujala, and Asit K. Chakraborti, Zinc(II) Perchlorate Hexahydrate Catalyzed Opening of Epoxide Ring by Amines: Applications to Synthesis of (RS)/(R)-Propranolols and (RS)/(R)/(S)-Naftopidils, J. Org. Chem., 72 (10), 3713 -3722, 2007）。そこで、本発明者らは、サイトカラシンＥのオキシラン環を開環させて反応性の高い官能基が導入されたサイトカラシン誘導体を合成すべく、種々のアミン類とサイトカラシンＥとの反応を試みた。しかしながら、予想に反して、サイトカラシンＥと各種アミンとを反応させても、目的化合物が得られない場合がほとんどであった（後段の参考例参照）。つまり、サイトカラシンＥのオキシラン環は、従来の報告と異なり、アミン類によっても容易に開環しないことが明らかとなった。ところが、本発明者らは、意外にも、サイトカラシンＥとアンモニア水またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させた場合に、サイトカラシンＥのオキシラン環が開環し、オキシラン環を構成する２つの炭素原子のいずれか一方にＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体が結合することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００２１】
サイトカラシンとアンモニアとを反応させる場合には、アンモニア水が用いられる。サイトカラシンに対するアンモニアの添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、アンモニアが室温以上の反応温度で揮発し反応系中のアンモニア濃度が低下するため、円滑な反応進行のため過剰に加えることが好ましいからである。ただし、反応後処理の簡便化を図る理由と、大過剰量でなくても十分に反応が進行するという理由で、添加アンモニア量はサイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量程度の過剰量が好適である。溶媒としては、アセトニトリル、アセトニトリルと水の混合溶媒などを使用することができる。触媒は使用してもよく、使用しなくてもよい。好ましい触媒としては、亜鉛、リチウム、マグネシウム、カルシウムなどの過塩素酸塩が挙げられる。触媒を使用する場合、その添加量はサイトカラシンの物質量の０．１〜０．５倍等量が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下がより好ましい。反応時間は、０．５時間以上が好ましい。
【００２２】
サイトカラシンＥとアンモニアとの反応により、下記式（Ｖ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００２３】
【化４】
【００２４】
なお、ＮＨ２は上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとアンモニアとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（Ｖ）の構造に限定されない。
【００２５】
サイトカラシンとエチレンジアミンとを反応させる場合、サイトカラシンに対するエチレンジアミンの添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、円滑な反応の進行のためと、大過剰のエチレンジアミンの存在下ではエチレンジアミンにサイトカラシン類が２当量反応してしまうためである。溶媒としては、アセトニトリル、アセトニトリルと水の混合溶媒などを使用することができる。触媒は使用してもよく、使用しなくてもよい。好ましい触媒としては、亜鉛、リチウム、マグネシウム、カルシウムなどの過塩素酸塩が挙げられる。触媒を使用する場合、その添加量はサイトカラシンの物質量の０．１〜０．５倍等量が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下がより好ましい。反応時間は、０．５時間以上が好ましい。
【００２６】
サイトカラシンＥとエチレンジアミンとの反応により、下記式（ＶＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００２７】
【化５】
【００２８】
なお、エチレンジアミンは上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとエチレンジアミンとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩ）の構造に限定されない。
【００２９】
サイトカラシンとイミダゾール誘導体とを反応させる場合、イミダゾール誘導体としては、イミダゾール基を有する化合物であればよく、例えば、イミダゾール、ナフチルメチルイミダゾールなどが挙げられる。サイトカラシンに対するイミダゾール誘導体の添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、当量条件での反応速度が遅いためである。溶媒としては、サイトカラシン類とイミダゾール化合物を溶解することができるものであればよく、例えばアセトニトリルが挙げられる。触媒を使用することが好まく、例えば、亜鉛、シリカなどが挙げられる。触媒の添加量は亜鉛触媒であればサイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量、シリカであればサイトカラシンの質量に対して当量以上が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下が好ましい。反応時間は、４８時間以上が好ましい。
【００３０】
サイトカラシンＥとイミダゾールとの反応により、下記式（ＶＩＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。また、サイトカラシンＥとナフチルメチルイミダゾールとの反応により、下記式（ＶＩＩＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００３１】
【化６】
【００３２】
なお、イミダゾール誘導体は上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとイミダゾールとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩＩ）の構造に限定されず、サイトカラシンＥとナフチルメチルイミダゾールとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩＩＩ）の構造に限定されない。
【００３３】
〔本発明のサイトカラシン誘導体の用途〕
本発明のサイトカラシン誘導体は、種々のキャリアタンパク質と複合体を形成させることができるので、この複合体を免疫原としてサイトカラシンの特異抗体作製に利用することができる。また、本発明のサイトカラシン誘導体は、標識化合物と容易に反応させることができ、蛍光標識、酵素標識、ビオチン誘導体標識などの非放射性標識化を容易に達成することができ、標識誘導体化サイトカラシン類を利用したサイトカラシン類の高感度検出技術にも応用可能である。
【００３４】
もともと、サイトカラシン類のオキシラン部位は、サイトカラシン類の他の部位である水酸基、アミド基、ケトン基、炭酸エステルの各部位と比較して非共有結合を形成する能力に乏しく、オキシラン部位は抗体の結合部位中の抗原決定部位には相互作用しないことが予想される。従って、このオキシラン部分をリンカーに用いた誘導体化によって得られるサイトカラシン類とタンパク質や標識化合物の複合体は、抗体作成の際障害とはならず、作成した抗体への標識化サイトカラシン類の結合性は損なわれないなど、本発明によって得られるサイトカラシン類の誘導体は極めて有用である。
【実施例】
【００３５】
〔実施例１〕
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、２８％アンモニア水を２００μＬ加えた（不溶）。続いて、室温下で０．５μｍｏｌのＺｎ（ＣｌＯ４）２アセトニトリル溶液を５０μＬ滴下した。ボルテックスで攪拌し、サイトカラシンＥを完全に溶解させた。薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと記す。）およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングしながら室温下で攪拌した。ＴＬＣは、展開溶媒にエチルアセトン／ヘキサン＝２／１を用い、ヨウ素蒸気に曝して検出した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによる測定は、マトリクスにｃｙａｎｏ−４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄを用い、リニアモード、極性はポジティブ、加速電圧は１５０００Ｖで行った。
【００３６】
図１に、２４時間後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートを示した。図１から明らかなように、目的物（Ｃ２８Ｈ３６Ｎ２Ｏ７、Ｍｏｌ．Ｗｔ．：５１２．５９）のピークが観察された。
【００３７】
〔実施例２〕
アンモニアの添加量を変更して、目的物が得られるか否かを検討した。なお、本実施例では、Ｚｎ（ＣｌＯ４）２を添加しなかった。
【００３８】
（２−１）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取った。２８％のアンモニア水をアセトニトリルで希釈し２５ｍＭのＮＨ３溶液を調製した。２５ｍＭのＮＨ３溶液を１００μＬ（２．５μｍｏｌ）をサイトカラシンＥに加えた。室温下で攪拌し、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングした。０．５時間後、３時間後、１６時間後に反応を確認したが原料成分だけが確認された。
【００３９】
（２−２）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取った。２８％のアンモニア水をアセトニトリルで希釈し２５０ｍＭのＮＨ３溶液を調製した。２５０ｍＭのＮＨ３溶液を１００μＬ（２５μｍｏｌ）をサイトカラシンＥに加えた。室温下で攪拌し、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングした。０．５時間後には反応の進行が見られなかった。しかし、３時間後には目的物のピークが見られ、５時間後には目的物がメインピークとして観察された。
【００４０】
図２に、１５時間後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートを示した。図２から明らかなように、目的物（Ｃ２８Ｈ３６Ｎ２Ｏ７、Ｍｏｌ．Ｗｔ．：５１２．５９）ピーク以外に原料のピーク（４９６、５１９、５３５）も観察され、原料が残存していることが示された。
【００４１】
（２−３）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）に対して、２８％アンモニア水を２００μＬ加えた（不溶）。続いて、室温下でアセトニトリルを５０μＬ滴下した。この場合は、０．５時間後に反応の進行が認められた。
【００４２】
以上の結果を、表１に示した。
【００４３】
【表１】
【００４４】
〔参考例１〕
サイトカラシンＥ１．５ｍｇ（３．２μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＩＸ）で示されるアミノスチレン（９．６μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液６０μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し溶解を確認した後、Ｚｎ（ＯＴｆ）２を固体状態で０．５ｍｇ添加した。サーモミキサーにて一晩攪拌した（２５℃、１０００ｒｐｍ)。１２時間後、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００４５】
【化７】
【００４６】
〔参考例２〕
サイトカラシンＥ５ｍｇ（１０μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（Ｘ）で示される５−フェニルペンチルアミン（１０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液１００μＬを加えた。室温で６時間、ミキサーで攪拌した。さらに、Ｚｎ（ＯＴｆ）２を固体状態で５ｍｇ添加して１２時間攪拌した。さらに、これを７０℃に昇温して２日間攪拌を続けた。この間、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００４７】
【化８】
【００４８】
〔参考例３〕
参考例２において、５−フェニルペンチルアミンを下記式（ＸＩ）で示されるピレンメチルアミンに変更した以外は、参考例２と同様に行った。目的物のピークは観察できなかった。
【００４９】
【化９】
【００５０】
〔参考例４〕
サイトカラシンＥ２．５ｍｇ（５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＸＩＩ）で示されるフェネチルアミン（５μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液１００μＬを加えた。シリカゲルを約１０ｍｇ加え、５０℃、３６時間サーモミキサー内で攪拌した。ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００５１】
【化１０】
【００５２】
〔実施例３〕
サイトカラシンＥ７ｍｇ（１４μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＸＩＩＩ）で示されるイミダゾール（１４０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液５００μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し（２５℃、１０００ｒｐｍ）溶解を確認した。シリカゲル（ＷＡＫＯ−３００ＨＧ）を適量添加し攪拌し反応させた。１時間後、２時間後および６時間後にＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の追跡を行ったが原料の残存のみが確認された。そのまま２日間攪拌を続けた。ＴＬＣで確認したところ原料サイトカラシンＥのスポットが消失し、新たに極性の高い（Ｒｆ＝０．１、ＥＡ／Ｈｘ＝２／１、ｖ／ｖ）スポットが見られた。ＭＡＬＤ−ＴＯＦ ＭＳで確認したところ、目的物（ＭＷ＝５６３．２６）のピークがほぼシングルピークとして観測された。
【００５３】
【化１１】
【００５４】
〔参考例５〕
サイトカラシンＥ２．５ｍｇ（５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、上記式（ＩＸ）で示されるアミノスチレン（５０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液２００μＬを加えた。室温下で触媒Ｚｎ（ＣｌＯ４）２を３．８μｍｏｌ加えミキサーで攪拌した。７２時間後、生成した沈殿物を桐山ろ過で除き、アセトニトリルでよく洗浄してから、ろ液を回収した。このろ液について、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。ＴＬＣでサイトカラシンＥの消失を確認したが、ＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで目的物のピークは観察できなかった。
【００５５】
〔参考例６〕
参考例５において、アミノスチレンを下記式（ＸＩＶ）で示されるｐ−キシレンジアミンに変更した以外は、参考例５と同様に行った。参考例５と同様に、ＴＬＣでサイトカラシンＥの消失を確認したが、ＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで目的物のピークは観察できなかった。
【００５６】
【化１２】
【００５７】
〔実施例４〕
参考例５において、アミノスチレンを下記式（ＸＶ）で示されるナフチルメチルイミダゾールに変更した以外は、参考例５と同様に行った。目的物分子量（ＭＷ＝７０３）の二価イオン体と予想されるイオンピーク（７０５．６２５４）がメインピークとして観察された。
【００５８】
【化１３】
【００５９】
〔実施例５〕
サイトカラシンＥ０．９４ｍｇ（１．９０μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、エチレンジアミン０．３４ｍｇ（５．６９μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液３００μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し溶解を確認した後、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。その結果、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳでは、生成物と考えられる分子量５８０付近のピークが反応開始直後から確認できた。また、ＴＬＣでは反応開始から３時間後まではサイトカラシンＥのスポットが残っていたが、一夜（約１２時間）反応させたところサイトカラシンＥのスポットは消失した。エチレンジアミンを５倍等量加えて反応させた場合には、３時間後にサイトカラシンＥのスポットが消失した。サイトカラシンＥのスポット消失後、ＣＨ２Ｃｌ２／水で抽出を行い原料のエチレンジアミンを取り除き、ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳで測定したところ、目的物の分子量（Ｍｗ＝５５５）が確認された。
【００６０】
上記参考例１〜６、実施例３〜５の結果を表２に示した。
【００６１】
【表２】
【００６２】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】実施例１において本発明のサイトカラシンＥ誘導体が得られたことを示すＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートである。
【図２】実施例２において本発明のサイトカラシンＥ誘導体が得られたことを示すＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイトカラシン誘導体およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
植物の根に寄生して、自ら分泌する毒性代謝産物によって植物を衰弱・枯死させる土壌伝染性の菌類が存在する。なかでも、白紋羽病菌（Rosellinia necatrix Prillieux）は、極めて宿主範囲が広く、リンゴ、ナシ、モモ、スモモ、ブドウ、ウメ、サクランボ、カンキツ、ビワ、イチジク、カキ、クリなどほとんど全ての果樹、バラ、ツツジ、ジンチョウゲなどの花木、さらにサツマイモなどの草本植物でも感染が確認されている。近年、白紋羽病による果樹の被害が増大しており、果樹生産者の被る経済的被害は年々深刻化している。白紋羽病は、発病後の治療が困難であるため、発病した場合は株ごと取り除き、周囲の土を消毒しなければならない。発見が遅れると果樹園全体に病気が蔓延し、その被害は甚大なものとなる。したがって、簡便で迅速な白紋羽病の早期発見法の確立は極めて重要な課題となっている。
【０００３】
サイトカラシンＥは、白紋羽病菌が産生する毒性代謝産物であり、下記式（Ｉ）で示される。
【０００４】
【化１】
【０００５】
サイトカラシンＥは、樹木等の根部より感染した白紋羽病菌が徐々に樹木等に浸食する過程で分泌され、樹木内に吸収されると考えられる。従って、サイトカラシンＥの高感度検出ができれば、感染を早期に発見し、白紋羽病の蔓延を未然に防ぐことが可能になると期待される。
【０００６】
植物サンプル中のサイトカラシンＥの分析方法としては、植物サンプルから分子インプリントカラムを用いてサイトカラシンＥを抽出し、質量分析計を用いてサイトカラシンＥの測定を行う方法が、本発明者らにより提案されている（特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００７−１８７６５３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記特許文献１に記載の方法によれば、植物サンプル中の微量のサイトカラシンＥを測定できるものの、ＨＰＬＣ／ＭＳやＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどの高感度検出機器を用いる必要があり、果樹園などの現場で簡便に実施することができないという問題がある。そのため、このような高価な高感度検出機器を用いることなく、サイトカラシンＥを高感度測定できる方法の開発が強く望まれている。
【０００８】
標的化合物を簡便かつ高感度に測定できる方法の１つに、標的化合物と特異的に結合する抗体を使用する免疫学的測定法がある。標的化合物との特異性が非常に高い抗体を得ることができれば、迅速かつ低コストに多検体を検査することができる。しかしながら、通常、サイトカラシンＥのような低分子化合物を免疫してもその特異抗体を得ることはできない。このため、低分子化合物（ハプテン）をキャリアタンパク質に結合させて複合体を形成させ、この複合体を免疫原として特異抗体を得る必要がある。
【０００９】
また、サイトカラシンＥはそれ自身に強い吸光や蛍光の性質を持たないため、抗原抗体反応を用いる分析法や高速液体クロマトグラフィーなどの分離分析法において検出感度が低いという問題がある。それゆえ、高感度検出のための標識化合物によるサイトカラシン類の誘導体化の実現も切望されている。
そこで、本発明は、サイトカラシン類の簡便かつ高感度な検出技術の開発のために、サイトカラシンＥと種々のキャリアタンパク質または標識化合物との複合体を容易に形成できるサイトカラシン誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、サイトカラシンＥとアンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、種々のキャリアタンパク質あるいは標識化合物との複合体を容易に形成可能なサイトカラシン誘導体が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
すなわち、本発明に係るサイトカラシン誘導体は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体との反応により、前記オキシラン環を開環させ、開環した該オキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２または前記エチレンジアミンまたは前記イミダゾール誘導体が結合して得られたことを特徴としている。
【００１２】
オキシラン環を有するサイトカラシンは、サイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧであることが好ましい。
【００１３】
本発明に係るサイトカラシン誘導体の製造方法は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させる工程を包含することを特徴としている。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のサイトカラシン誘導体は、種々のキャリアタンパク質あるいは標識化合物と複合体を形成させることができるので、この複合体を免疫原としてサイトカラシンの特異抗体を作製することができる。また、抗原抗体反応を用いる分析法や高速液体クロマトグラフィーなどの分離分析法の高感度検出のための標識化合物によるサイトカラシン類の標識誘導体も作製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明のサイトカラシン誘導体は、オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、開環したオキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体が結合した構造を有している。オキシラン環を有するサイトカラシンとしては、上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥ以外に、下記式（ＩＩ）で示されるサイトカラシンＦおよび下記式（ＩＩＩ）で示されるサイトカラシンＧが知られている。
【００１６】
【化２】
【００１７】
例えば、上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥとアンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させることにより、下記式（ＩＶ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００１８】
【化３】
【００１９】
（式中、ＸはＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体を表す。）
なお、Ｘは上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、本発明のサイトカラシン誘導体は、上記式（ＩＶ）の構造に限定されない。
【００２０】
ここで、オキシラン環（エポキシ環）は、アミンにより開環することが報告されている（参考文献１：Najmodin Azizi and Mohammad R. Saidi, Highly Chemoselective Addition of Amines to Epoxides in Water, Org. Lett., 7 (17), 3649 -3651, 2005. 参考文献２：Shivani, Brahmam Pujala, and Asit K. Chakraborti, Zinc(II) Perchlorate Hexahydrate Catalyzed Opening of Epoxide Ring by Amines: Applications to Synthesis of (RS)/(R)-Propranolols and (RS)/(R)/(S)-Naftopidils, J. Org. Chem., 72 (10), 3713 -3722, 2007）。そこで、本発明者らは、サイトカラシンＥのオキシラン環を開環させて反応性の高い官能基が導入されたサイトカラシン誘導体を合成すべく、種々のアミン類とサイトカラシンＥとの反応を試みた。しかしながら、予想に反して、サイトカラシンＥと各種アミンとを反応させても、目的化合物が得られない場合がほとんどであった（後段の参考例参照）。つまり、サイトカラシンＥのオキシラン環は、従来の報告と異なり、アミン類によっても容易に開環しないことが明らかとなった。ところが、本発明者らは、意外にも、サイトカラシンＥとアンモニア水またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させた場合に、サイトカラシンＥのオキシラン環が開環し、オキシラン環を構成する２つの炭素原子のいずれか一方にＮＨ２またはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体が結合することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００２１】
サイトカラシンとアンモニアとを反応させる場合には、アンモニア水が用いられる。サイトカラシンに対するアンモニアの添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、アンモニアが室温以上の反応温度で揮発し反応系中のアンモニア濃度が低下するため、円滑な反応進行のため過剰に加えることが好ましいからである。ただし、反応後処理の簡便化を図る理由と、大過剰量でなくても十分に反応が進行するという理由で、添加アンモニア量はサイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量程度の過剰量が好適である。溶媒としては、アセトニトリル、アセトニトリルと水の混合溶媒などを使用することができる。触媒は使用してもよく、使用しなくてもよい。好ましい触媒としては、亜鉛、リチウム、マグネシウム、カルシウムなどの過塩素酸塩が挙げられる。触媒を使用する場合、その添加量はサイトカラシンの物質量の０．１〜０．５倍等量が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下がより好ましい。反応時間は、０．５時間以上が好ましい。
【００２２】
サイトカラシンＥとアンモニアとの反応により、下記式（Ｖ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００２３】
【化４】
【００２４】
なお、ＮＨ２は上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとアンモニアとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（Ｖ）の構造に限定されない。
【００２５】
サイトカラシンとエチレンジアミンとを反応させる場合、サイトカラシンに対するエチレンジアミンの添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、円滑な反応の進行のためと、大過剰のエチレンジアミンの存在下ではエチレンジアミンにサイトカラシン類が２当量反応してしまうためである。溶媒としては、アセトニトリル、アセトニトリルと水の混合溶媒などを使用することができる。触媒は使用してもよく、使用しなくてもよい。好ましい触媒としては、亜鉛、リチウム、マグネシウム、カルシウムなどの過塩素酸塩が挙げられる。触媒を使用する場合、その添加量はサイトカラシンの物質量の０．１〜０．５倍等量が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下がより好ましい。反応時間は、０．５時間以上が好ましい。
【００２６】
サイトカラシンＥとエチレンジアミンとの反応により、下記式（ＶＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００２７】
【化５】
【００２８】
なお、エチレンジアミンは上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとエチレンジアミンとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩ）の構造に限定されない。
【００２９】
サイトカラシンとイミダゾール誘導体とを反応させる場合、イミダゾール誘導体としては、イミダゾール基を有する化合物であればよく、例えば、イミダゾール、ナフチルメチルイミダゾールなどが挙げられる。サイトカラシンに対するイミダゾール誘導体の添加量は、反応が進行する量であれば特に限定されないが、過剰量が好ましく、サイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量がより好ましい。その理由は、当量条件での反応速度が遅いためである。溶媒としては、サイトカラシン類とイミダゾール化合物を溶解することができるものであればよく、例えばアセトニトリルが挙げられる。触媒を使用することが好まく、例えば、亜鉛、シリカなどが挙げられる。触媒の添加量は亜鉛触媒であればサイトカラシンの物質量に対して２〜２０倍等量、シリカであればサイトカラシンの質量に対して当量以上が好ましい。反応温度は、室温以上が好ましく、室温以上７０℃以下が好ましい。反応時間は、４８時間以上が好ましい。
【００３０】
サイトカラシンＥとイミダゾールとの反応により、下記式（ＶＩＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。また、サイトカラシンＥとナフチルメチルイミダゾールとの反応により、下記式（ＶＩＩＩ）で示されるサイトカラシン誘導体を製造することができる。
【００３１】
【化６】
【００３２】
なお、イミダゾール誘導体は上記式（Ｉ）で示されるサイトカラシンＥのオキシラン環を構成するいずれか一方の炭素原子に結合すればよく、サイトカラシンＥとイミダゾールとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩＩ）の構造に限定されず、サイトカラシンＥとナフチルメチルイミダゾールとの反応により得られるサイトカラシン誘導体は、上記式（ＶＩＩＩ）の構造に限定されない。
【００３３】
〔本発明のサイトカラシン誘導体の用途〕
本発明のサイトカラシン誘導体は、種々のキャリアタンパク質と複合体を形成させることができるので、この複合体を免疫原としてサイトカラシンの特異抗体作製に利用することができる。また、本発明のサイトカラシン誘導体は、標識化合物と容易に反応させることができ、蛍光標識、酵素標識、ビオチン誘導体標識などの非放射性標識化を容易に達成することができ、標識誘導体化サイトカラシン類を利用したサイトカラシン類の高感度検出技術にも応用可能である。
【００３４】
もともと、サイトカラシン類のオキシラン部位は、サイトカラシン類の他の部位である水酸基、アミド基、ケトン基、炭酸エステルの各部位と比較して非共有結合を形成する能力に乏しく、オキシラン部位は抗体の結合部位中の抗原決定部位には相互作用しないことが予想される。従って、このオキシラン部分をリンカーに用いた誘導体化によって得られるサイトカラシン類とタンパク質や標識化合物の複合体は、抗体作成の際障害とはならず、作成した抗体への標識化サイトカラシン類の結合性は損なわれないなど、本発明によって得られるサイトカラシン類の誘導体は極めて有用である。
【実施例】
【００３５】
〔実施例１〕
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、２８％アンモニア水を２００μＬ加えた（不溶）。続いて、室温下で０．５μｍｏｌのＺｎ（ＣｌＯ４）２アセトニトリル溶液を５０μＬ滴下した。ボルテックスで攪拌し、サイトカラシンＥを完全に溶解させた。薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと記す。）およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングしながら室温下で攪拌した。ＴＬＣは、展開溶媒にエチルアセトン／ヘキサン＝２／１を用い、ヨウ素蒸気に曝して検出した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによる測定は、マトリクスにｃｙａｎｏ−４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄを用い、リニアモード、極性はポジティブ、加速電圧は１５０００Ｖで行った。
【００３６】
図１に、２４時間後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートを示した。図１から明らかなように、目的物（Ｃ２８Ｈ３６Ｎ２Ｏ７、Ｍｏｌ．Ｗｔ．：５１２．５９）のピークが観察された。
【００３７】
〔実施例２〕
アンモニアの添加量を変更して、目的物が得られるか否かを検討した。なお、本実施例では、Ｚｎ（ＣｌＯ４）２を添加しなかった。
【００３８】
（２−１）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取った。２８％のアンモニア水をアセトニトリルで希釈し２５ｍＭのＮＨ３溶液を調製した。２５ｍＭのＮＨ３溶液を１００μＬ（２．５μｍｏｌ）をサイトカラシンＥに加えた。室温下で攪拌し、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングした。０．５時間後、３時間後、１６時間後に反応を確認したが原料成分だけが確認された。
【００３９】
（２−２）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取った。２８％のアンモニア水をアセトニトリルで希釈し２５０ｍＭのＮＨ３溶液を調製した。２５０ｍＭのＮＨ３溶液を１００μＬ（２５μｍｏｌ）をサイトカラシンＥに加えた。室温下で攪拌し、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応をモニタリングした。０．５時間後には反応の進行が見られなかった。しかし、３時間後には目的物のピークが見られ、５時間後には目的物がメインピークとして観察された。
【００４０】
図２に、１５時間後のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートを示した。図２から明らかなように、目的物（Ｃ２８Ｈ３６Ｎ２Ｏ７、Ｍｏｌ．Ｗｔ．：５１２．５９）ピーク以外に原料のピーク（４９６、５１９、５３５）も観察され、原料が残存していることが示された。
【００４１】
（２−３）
サイトカラシンＥ１．２５ｍｇ（２．５μｍｏｌ）に対して、２８％アンモニア水を２００μＬ加えた（不溶）。続いて、室温下でアセトニトリルを５０μＬ滴下した。この場合は、０．５時間後に反応の進行が認められた。
【００４２】
以上の結果を、表１に示した。
【００４３】
【表１】
【００４４】
〔参考例１〕
サイトカラシンＥ１．５ｍｇ（３．２μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＩＸ）で示されるアミノスチレン（９．６μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液６０μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し溶解を確認した後、Ｚｎ（ＯＴｆ）２を固体状態で０．５ｍｇ添加した。サーモミキサーにて一晩攪拌した（２５℃、１０００ｒｐｍ)。１２時間後、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００４５】
【化７】
【００４６】
〔参考例２〕
サイトカラシンＥ５ｍｇ（１０μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（Ｘ）で示される５−フェニルペンチルアミン（１０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液１００μＬを加えた。室温で６時間、ミキサーで攪拌した。さらに、Ｚｎ（ＯＴｆ）２を固体状態で５ｍｇ添加して１２時間攪拌した。さらに、これを７０℃に昇温して２日間攪拌を続けた。この間、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００４７】
【化８】
【００４８】
〔参考例３〕
参考例２において、５−フェニルペンチルアミンを下記式（ＸＩ）で示されるピレンメチルアミンに変更した以外は、参考例２と同様に行った。目的物のピークは観察できなかった。
【００４９】
【化９】
【００５０】
〔参考例４〕
サイトカラシンＥ２．５ｍｇ（５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＸＩＩ）で示されるフェネチルアミン（５μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液１００μＬを加えた。シリカゲルを約１０ｍｇ加え、５０℃、３６時間サーモミキサー内で攪拌した。ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。目的物のピークは観察できなかった。
【００５１】
【化１０】
【００５２】
〔実施例３〕
サイトカラシンＥ７ｍｇ（１４μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、下記式（ＸＩＩＩ）で示されるイミダゾール（１４０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液５００μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し（２５℃、１０００ｒｐｍ）溶解を確認した。シリカゲル（ＷＡＫＯ−３００ＨＧ）を適量添加し攪拌し反応させた。１時間後、２時間後および６時間後にＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の追跡を行ったが原料の残存のみが確認された。そのまま２日間攪拌を続けた。ＴＬＣで確認したところ原料サイトカラシンＥのスポットが消失し、新たに極性の高い（Ｒｆ＝０．１、ＥＡ／Ｈｘ＝２／１、ｖ／ｖ）スポットが見られた。ＭＡＬＤ−ＴＯＦ ＭＳで確認したところ、目的物（ＭＷ＝５６３．２６）のピークがほぼシングルピークとして観測された。
【００５３】
【化１１】
【００５４】
〔参考例５〕
サイトカラシンＥ２．５ｍｇ（５μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、上記式（ＩＸ）で示されるアミノスチレン（５０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液２００μＬを加えた。室温下で触媒Ｚｎ（ＣｌＯ４）２を３．８μｍｏｌ加えミキサーで攪拌した。７２時間後、生成した沈殿物を桐山ろ過で除き、アセトニトリルでよく洗浄してから、ろ液を回収した。このろ液について、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。ＴＬＣでサイトカラシンＥの消失を確認したが、ＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで目的物のピークは観察できなかった。
【００５５】
〔参考例６〕
参考例５において、アミノスチレンを下記式（ＸＩＶ）で示されるｐ−キシレンジアミンに変更した以外は、参考例５と同様に行った。参考例５と同様に、ＴＬＣでサイトカラシンＥの消失を確認したが、ＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで目的物のピークは観察できなかった。
【００５６】
【化１２】
【００５７】
〔実施例４〕
参考例５において、アミノスチレンを下記式（ＸＶ）で示されるナフチルメチルイミダゾールに変更した以外は、参考例５と同様に行った。目的物分子量（ＭＷ＝７０３）の二価イオン体と予想されるイオンピーク（７０５．６２５４）がメインピークとして観察された。
【００５８】
【化１３】
【００５９】
〔実施例５〕
サイトカラシンＥ０．９４ｍｇ（１．９０μｍｏｌ）を１．５ｍＬのスクリューバイアルに取り、エチレンジアミン０．３４ｍｇ（５．６９μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液３００μＬを加えた。ボルテックスでよく混合し溶解を確認した後、ＴＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで反応の進行を確認した。その結果、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳでは、生成物と考えられる分子量５８０付近のピークが反応開始直後から確認できた。また、ＴＬＣでは反応開始から３時間後まではサイトカラシンＥのスポットが残っていたが、一夜（約１２時間）反応させたところサイトカラシンＥのスポットは消失した。エチレンジアミンを５倍等量加えて反応させた場合には、３時間後にサイトカラシンＥのスポットが消失した。サイトカラシンＥのスポット消失後、ＣＨ２Ｃｌ２／水で抽出を行い原料のエチレンジアミンを取り除き、ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳで測定したところ、目的物の分子量（Ｍｗ＝５５５）が確認された。
【００６０】
上記参考例１〜６、実施例３〜５の結果を表２に示した。
【００６１】
【表２】
【００６２】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】実施例１において本発明のサイトカラシンＥ誘導体が得られたことを示すＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートである。
【図２】実施例２において本発明のサイトカラシンＥ誘導体が得られたことを示すＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳのチャートである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体との反応により、前記オキシラン環を開環させ、開環した該オキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２または前記エチレンジアミンまたは前記イミダゾール誘導体が結合して得られたサイトカラシン誘導体。
【請求項２】
前記オキシラン環を有するサイトカラシンが、サイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧである請求項１に記載のサイトカラシン誘導体。
【請求項３】
オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させる工程を包含する請求項１または２に記載のサイトカラシン誘導体の製造方法。
【請求項１】
オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体との反応により、前記オキシラン環を開環させ、開環した該オキシラン環のいずれか一方の炭素原子に、ＮＨ２または前記エチレンジアミンまたは前記イミダゾール誘導体が結合して得られたサイトカラシン誘導体。
【請求項２】
前記オキシラン環を有するサイトカラシンが、サイトカラシンＥ、サイトカラシンＦまたはサイトカラシンＧである請求項１に記載のサイトカラシン誘導体。
【請求項３】
オキシラン環を有するサイトカラシンと、アンモニアまたはエチレンジアミンまたはイミダゾール誘導体とを反応させる工程を包含する請求項１または２に記載のサイトカラシン誘導体の製造方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−４７６２（Ｐ２０１０−４７６２Ａ）
【公開日】平成２２年１月１４日（２０１０．１．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１６５１５１（Ｐ２００８−１６５１５１）
【出願日】平成２０年６月２４日（２００８．６．２４）
【出願人】（５０４１５０４５０）国立大学法人神戸大学 (421)
【出願人】（０００１５６５８１）日鉄環境エンジニアリング株式会社 (67)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１月１４日（２０１０．１．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２４日（２００８．６．２４）
【出願人】（５０４１５０４５０）国立大学法人神戸大学 (421)
【出願人】（０００１５６５８１）日鉄環境エンジニアリング株式会社 (67)
【Ｆターム（参考）】
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