ステビア発酵液の投与方法
【課題】
家畜用乳牛の体質改善を目的として、抗生物質に代わる安全な体細胞数を減少させる方法を提供する。
【解決手段】
希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返す。具体的には、ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことにする。
家畜用乳牛の体質改善を目的として、抗生物質に代わる安全な体細胞数を減少させる方法を提供する。
【解決手段】
希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返す。具体的には、ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことにする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家畜の各種疾患や体質改善に効能があるとされるステビア発酵液の投与方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般的に体細胞数が多い乳牛は、汚染された乳牛として取り扱われている。乳房の中に炎症が起こると、その炎症が原因となって、乳の細胞が脱落して乳汁に含まれてしまい、その結果として採取される乳にも含まれてしまう。その乳は、腐敗したり、汚染したり、菌の増殖の栄養源となってしまい、その乳を人が飲むと、悪い影響を与えてしまう。
従って、体細胞数が少ない乳牛の方が食の安全性の面で優れており、一般的には１０万個／リットル以下の体細胞数の乳牛が安全な牛とされているが、例えば、兵庫県では体細胞数が３０万個／リットル以下が酪農場から工場へ出荷される際の基準とされている。
また、牛乳集配組合若しくは牛乳取引業者では、安全性を保証するため、体細胞数が基準値を超える場合、酪農家に対して罰金などのペナルティーが課すようにしている。そのため酪農家にとっては、自己の飼育する牛の体細胞数を抑制する努力が必要となる。
【０００３】
ところで、この体細胞数は、飼養条件（餌の条件、温度・湿度等の環境条件）よって変動する。また、外部からのウイルスの混入や環境による体調の良し悪しにも左右される。そして、この体細胞数の増加は、乳房炎の原因となっている。乳房炎の乳牛の治療として、急性乳房炎の場合は、特効薬として抗生物質の投与がなされているが、慢性の乳房炎の場合は、特効薬は存在しない状況である。また、抗生物質の投与期間は、その乳牛から採乳できない。このような状況下、抗生物質に変わる安全な体細胞数を減少させるものが要望されていた。
【０００４】
一方、従来からステビアの茎部から抽出した発酵液を、家畜の各種疾患の治療、体質改善に利用できることが知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００５】
【特許文献１】特開平０５−０７０３６１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、抗生物質に代わる安全な体細胞数を減少させる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ステビア発酵液の投与方法について、試行錯誤を重ねた結果、免疫を高めるような免疫活性な物質を毎日毎日投与するのでなく、一定期間を置いて強い刺激を与えることによって、免疫を高めることができるのではないかという点に着眼し、体細胞数を減少させることに成功し、本発明に係るステビア発酵液の投与方法を完成したものである。
【０００８】
本発明の第１の観点からは、ステビアの茎部から抽出した発酵濃縮液を有効成分とする家畜用体質改善薬剤の投与方法において、希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法が提供される。
【０００９】
ここで、本発明の第１の観点において、希釈したステビア発酵液を１〜５日だけ連続経口投与した後、全く投与しない日数を２０〜５０日設け（繰り返し単位）、再度１〜５日だけ連続経口投与した後、全く投与しない日数を２０〜５０日設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことが好ましい。さらに好ましくは１〜３日だけ連続経口投与する方がよい。
【００１０】
農家の手間がかからないことが好ましく、経口投与する回数が少ないこと方が良い。また、１日の経口投与は農家の作業面から２ショット（１日２回投与）までが常識的な範囲である。上記の１〜５日の連続経口投与は、１日に１ショットを想定しているが、１日に２ショットでも効能は期待できる。
【００１１】
また、希釈したステビア発酵液は、ステビア発酵原液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したもので良い。ここで、水は水道水でも良い。ここで原液を希釈させる理由は、ステビア発酵原液は粘性なないが非常に濃い液体であり、原液量が３０〜５０ｍｌでは乳牛が飲むときに一気に胃に飲み込ませるのが難しいため水で希釈させるものである。希釈させる溶媒は水に限定されるものではないが、農家にとって扱いが便利な溶媒であることが望ましい。ステビア発酵液の投与量は、投与する牛の体重によって変化されるのが好ましい。ここで想定しているのは、５５０ｋｇ〜７００ｋｇの体重の牛であるが、この範囲外の体重の牛にも本発明に係る投与方法の効能が期待できる。
【００１２】
本発明の第２の観点からは、ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法が提供される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法では、抗生物質を用いず、劇的に体細胞数を減少させる効果を有し、また、慢性乳房炎牛に対して有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について、図表を参照しながら詳細に説明していく。
【実施例１】
【００１５】
実施例１として、ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１ショット、３日間連続で乳牛に経口投与したものについて、その乳牛の体細胞数の変化を測定した結果を示すことにする。
投与する乳牛は、体細胞数が通常の乳牛より遥かに多い、慢性乳房炎の牛を選定した。
体細胞数の測定は、公式の測定方法で、兵庫県の乳牛検査場で実施した。また、測定は搾乳するときの夕方と朝に行った。
【００１６】
ステビア発酵液の投与方法と体細胞数の経過観察については、次の通りである。
・０日目（投与直前）：乳汁検査（体細胞数）
・１日目：ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したもの経口投与
・２日目：同上
・３日目：同上
・３日目：乳汁検査（体細胞数）
・７日目：乳汁検査（体細胞数）
ここで、ステビア発酵液の投与は、１日目〜３日目の夕方に１ショットずつ行っている（３日間３ショットの連続経口投与口径のみ）以外に、ステビア発酵液の投与は行っていない。
【００１７】
以下の表１に、慢性乳房炎牛（Ａ〜Ｇ）に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（単位：万個）を示す。Ａ〜Ｇの慢性乳房炎牛は、同じ酪農家で、同じ餌で飼育されていた牛である。また、Ａ〜Ｇの慢性乳房炎牛は、５５０〜８００ｋｇの体重の牛である。ここで固体識別とは、牛につけられたユニークな番号で、牛を識別するためのものである。上述の通り、ステビア発酵液の投与は、１日目〜３日目の夕方に１ショットずつ行っている。投与後３日の夕方が最終の３回目のショットを行った後の測定である。
【００１８】
【表１】
【００１９】
上記表１から、Ａ〜Ｇのどの慢性乳房炎牛に対しても、ステビア投与によって体細胞数の減少が確認できる。特に、Ｇ（＃８１）の牛は、もともと体細胞数がそれほど多くない牛であるが、このような牛に対してもステビア投与によって体細胞数の減少が確認できている。図１に、表１の投与直前、投与後３日、投与後７日の夕方と朝の平均値をプロットしたグラフを示す。Ａ〜Ｇの全ての慢性乳房炎牛に対して、劇的に体細胞数の減少が確認できる。参考までに、乳牛検査場の現場の声は、今までに、このように劇的に体細胞が減少したのを確認できたことは無いというものであった。
【００２０】
次に、異なる酪農家の慢性乳房炎牛に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（単位：万個）を下記表２に示す。酪農家が異なれば飼育環境、餌の量・種類も異なる。尚、このＡ酪農家とＢ酪農家は、共に以前に体細胞が多すぎるとして牛乳集配組合若しくは牛乳取引業者からペナルティーを受けた経験がある酪農家である。
【００２１】
【表２】
【００２２】
上記表２から、異なる酪農家に飼育された牛であっても、ステビア投与によって体細胞数の減少が確認できる。すなわち、Ａ酪農家の牛（＃２１１１）では、投与直前とステビア発酵液の３日間の連続投与後に、約１７０万個から４５万個に体細胞数が減少しており、その後、投与を行わない状態でも、投与後７日，１７日と４５万個から減少している。同様に、Ｂ酪農家の牛（＃７６０１）では、投与直前とステビア発酵液の３日間の連続投与後に、約９４０万個から９４万個に体細胞数が極端に減少しており、その後、投与を行わない状態でも、投与後７日，１７日と９４万個から減少している。
【００２３】
次に、各々の酪農家における合乳（バルク乳汁）中の体細胞数の変化を下記表３に示す。バルク乳汁とは、酪農家の工場から出荷される牛乳のことであり、これは酪農家が各工場において、多くの乳牛から採取したものを混ぜ合わせたものである。体細胞数の多い牛や体細胞数の少ない牛など様々であるが、このバルク乳汁中の体細胞数の変化を見ることで、マクロ的に効能の有無を知ることができるのである。
【００２４】
【表３】
【００２５】
上記表３から、各酪農家における合乳（バルク乳汁）中の体細胞数が減少していることが確認できる。すなわち、Ａ酪農家では、バルク乳汁中の体細胞数が投与前の前月７日と２５日が６８万個と８０万個であるのに対し、ステビア発酵液を３日間連続投与した当月７日と２５日では、４４万個と２８万個と減少している。同様に、Ａ酪農家とは異なるＢ酪農家においても、バルク乳汁中の体細胞数が投与前の前月７日と２５日が６１万個と４９万個であるのに対し、ステビア発酵液を３日間連続投与した当月７日と２５日では、４４万個と３５万個と減少している。
【００２６】
以上説明したように、ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したものを、牛１頭当たり１日に１ショット、３日間連続で経口投与したものについては、その牛の体細胞数を減少させることができることが理解できよう。
これは、毎日毎日ステビア発酵液を投与されている乳牛には、見られなかった効果である。
【００２７】
尚、ステビア発酵液については、ステビア発酵液を有効成分として含んでいるものでよく、例えば、ステビア発酵液を主原料とし、その他ビタミンや糖分を含むものでも同様に体細胞数を減少させる効能があることを確認できている。
【実施例２】
【００２８】
次に実施例２として、ステビア発酵液の抗菌活性作用を確認したデータを示すこととする。これらのデータは、実施例１のように実際の乳牛に対して試験を行ったものではなく、あくまで試験管で細胞に対して試験を行ったもの（in vitro）データである。
供試薬剤は、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を液体のまま使用することとした。
また、使用の前にｐＨ値の測定も行っており、使用したステビア発酵液（品質レベル：KS-15）のｐＨ値は4.9であった。
供試菌は、北海道のウシ乳房炎より分離された Staphylococcus aureus ST-2株（コアグラーゼVI型、toxin gene C、G、I、T、TSST-1）を用いることとした。菌はハートインフュージョンブイヨンで３７℃、１８時間培養したものを使用している。
ステビア発酵液の各希釈溶液で３０分反応させた。各希釈溶液とは、ステビア発酵液を、２倍（X2）、５倍（X5）、１０倍（X10）、１００倍（X100）、１０００倍（X1000）に水で希釈したものである。反応は、２９０ CFU / mlの菌液と室温で３０分間処理した。
【００２９】
図２は、ステビア各希釈溶液で３０分処理したときの抗菌作用を示したグラフである。
図２の中でコントロールとあるのは、特に何もしなかったもので、ステビア各希釈溶液の抗菌作用との比較用として示したものであり、また、このコントロールとの比較で正規化し、図２の縦軸をとっている。
図２から、２倍、５倍の希釈のものが抗菌活性は強く、希釈されていくほど抗菌活性はコントロールのものに近づいていくことが理解できる。２倍、５倍の希釈が強いのは、ステビア発酵液は抗酸化作用があり、また、ｐＨ値も4.9と高い酸性を示しており、殺菌されたものと考えられる。
また、１０倍、１００倍、１０００倍に水で希釈したものも、図２のグラフから抗菌活性があることが理解できる。これは、ステビア発酵液は抗菌活性であることを示すものである。
【実施例３】
【００３０】
次に実施例３として、ステビア発酵液の免疫活性能を確認したデータを示すこととする。これは、実施例２と同様、in vitro のデータである。
先ず供試薬剤は、実施例２と同様、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を液体のまま、或いは、0.2μｍで濾過したものを使用した。
また供試動物は、SPFのマウスでBALB/cおよびICRのオスを用いた。マウスより脾臓を摘出して脾細胞を調整した。３７℃で３０分、前培養をおこなった後、ステビア発酵液を１０倍（X10）、２０倍（X20）、４０倍（X40）、８０倍（X80）、１６０倍（X160）、３２０倍（X320）に水で希釈した各ステビア希釈溶液を細胞に加えた。ステビア希釈溶液を加えた後、３７℃で２時間培養後に細胞を洗浄した。洗浄後、新しい培養液と細胞増殖能を測定するための試薬を添加した。添加した後に吸光度を計測したものである。ここで、２時間としたのは、ステビアの活性がピークになるのが約２時間であるからである。
【００３１】
図３，図４に、それぞれBALB/c，ICRのマウスに対して、上述のステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
図３のBALB/cのマウスに対する場合は、４０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えたものが、免疫活性能が向上していることがわかる。ここで、コントロールとあるのは、ステビア希釈溶液を加えなかったもので、ｃｏｎＡとＬＰＳは、それぞれＴ細胞とＢ細胞を刺激するものである。
また、図４のICRのマウスに対する場合は、８０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えたものが、コントロールと比較して、免疫活性能が同等、或いは若干向上している。
以上の結果から、８０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えることで、免疫活性能が向上することが理解できよう。
【００３２】
次に、更に希釈したステビア希釈溶液を加えた後、活性がピークとなる２時間以上、長時間培養させて免疫活性能がどのようになるかを調べた結果を示す。
供試薬剤は、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を0.2μｍで濾過したものを使用した。また供試動物は、SPFのマウスでBALB/cおよびICRのオスを用いた。マウスより脾臓を摘出して脾細胞を調整した。３７℃で３０分、前培養をおこなった後、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を細胞に加えた。各ステビア希釈溶液を加えた後、３７℃で２０時間培養後、細胞を洗浄した。洗浄後、新しい培養液と細胞増殖能を測定するための試薬を添加した。添加した後に吸光度を計測したものである。
【００３３】
図５の（１），（２）に、BALB/c，ICRのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えて、２０時間培養後のデータ結果を示す。
図５の（１）でBALB/cのマウスに対して、５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を加えた細胞全てについて、２０時間後、コントロールとの相対において免疫活性能が大きく向上していることが理解できる。
同様に図５の（２）でICRのマウスに対して、５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を加えた細胞全てについて、２０時間後、コントロールとの相対において免疫活性能が大きく向上していることが理解できる。
【００３４】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、ステビア発酵液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したものを経口投与することであるが、これは、口から飲ませたステビア発酵液は、胃（牛の場合、胃は１００リットル程度の容量がある）で唾液、胃液などと攪拌され、第１の胃から第４の胃まで通り、血中に入るころには、数１０００倍に希釈されていることが想定され、図５に示した結果から、逆に、本発明に係るステビア発酵液の投与方法の妥当性が理解されよう。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、抗生物質に代わる体細胞数を減少させる方法として有用であり、また、慢性乳房炎牛に対して改善方法としても有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】慢性乳房炎牛（Ａ〜Ｇ）に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（表１）の投与直前、投与後３日、投与後７日の夕方と朝の平均値をプロットしたグラフを示している。
【図２】ステビア各希釈溶液で３０分処理したときの抗菌作用を示したグラフを示している。
【図３】BALB/cのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
【図４】ICRのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
【図５】ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えて、２０時間培養後のデータ結果を示したもの。（１）はBALB/cのマウスに対してのデータ結果で、（２）はICRのマウスに対してのデータ結果である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家畜の各種疾患や体質改善に効能があるとされるステビア発酵液の投与方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般的に体細胞数が多い乳牛は、汚染された乳牛として取り扱われている。乳房の中に炎症が起こると、その炎症が原因となって、乳の細胞が脱落して乳汁に含まれてしまい、その結果として採取される乳にも含まれてしまう。その乳は、腐敗したり、汚染したり、菌の増殖の栄養源となってしまい、その乳を人が飲むと、悪い影響を与えてしまう。
従って、体細胞数が少ない乳牛の方が食の安全性の面で優れており、一般的には１０万個／リットル以下の体細胞数の乳牛が安全な牛とされているが、例えば、兵庫県では体細胞数が３０万個／リットル以下が酪農場から工場へ出荷される際の基準とされている。
また、牛乳集配組合若しくは牛乳取引業者では、安全性を保証するため、体細胞数が基準値を超える場合、酪農家に対して罰金などのペナルティーが課すようにしている。そのため酪農家にとっては、自己の飼育する牛の体細胞数を抑制する努力が必要となる。
【０００３】
ところで、この体細胞数は、飼養条件（餌の条件、温度・湿度等の環境条件）よって変動する。また、外部からのウイルスの混入や環境による体調の良し悪しにも左右される。そして、この体細胞数の増加は、乳房炎の原因となっている。乳房炎の乳牛の治療として、急性乳房炎の場合は、特効薬として抗生物質の投与がなされているが、慢性の乳房炎の場合は、特効薬は存在しない状況である。また、抗生物質の投与期間は、その乳牛から採乳できない。このような状況下、抗生物質に変わる安全な体細胞数を減少させるものが要望されていた。
【０００４】
一方、従来からステビアの茎部から抽出した発酵液を、家畜の各種疾患の治療、体質改善に利用できることが知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００５】
【特許文献１】特開平０５−０７０３６１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、抗生物質に代わる安全な体細胞数を減少させる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ステビア発酵液の投与方法について、試行錯誤を重ねた結果、免疫を高めるような免疫活性な物質を毎日毎日投与するのでなく、一定期間を置いて強い刺激を与えることによって、免疫を高めることができるのではないかという点に着眼し、体細胞数を減少させることに成功し、本発明に係るステビア発酵液の投与方法を完成したものである。
【０００８】
本発明の第１の観点からは、ステビアの茎部から抽出した発酵濃縮液を有効成分とする家畜用体質改善薬剤の投与方法において、希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法が提供される。
【０００９】
ここで、本発明の第１の観点において、希釈したステビア発酵液を１〜５日だけ連続経口投与した後、全く投与しない日数を２０〜５０日設け（繰り返し単位）、再度１〜５日だけ連続経口投与した後、全く投与しない日数を２０〜５０日設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことが好ましい。さらに好ましくは１〜３日だけ連続経口投与する方がよい。
【００１０】
農家の手間がかからないことが好ましく、経口投与する回数が少ないこと方が良い。また、１日の経口投与は農家の作業面から２ショット（１日２回投与）までが常識的な範囲である。上記の１〜５日の連続経口投与は、１日に１ショットを想定しているが、１日に２ショットでも効能は期待できる。
【００１１】
また、希釈したステビア発酵液は、ステビア発酵原液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したもので良い。ここで、水は水道水でも良い。ここで原液を希釈させる理由は、ステビア発酵原液は粘性なないが非常に濃い液体であり、原液量が３０〜５０ｍｌでは乳牛が飲むときに一気に胃に飲み込ませるのが難しいため水で希釈させるものである。希釈させる溶媒は水に限定されるものではないが、農家にとって扱いが便利な溶媒であることが望ましい。ステビア発酵液の投与量は、投与する牛の体重によって変化されるのが好ましい。ここで想定しているのは、５５０ｋｇ〜７００ｋｇの体重の牛であるが、この範囲外の体重の牛にも本発明に係る投与方法の効能が期待できる。
【００１２】
本発明の第２の観点からは、ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法が提供される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法では、抗生物質を用いず、劇的に体細胞数を減少させる効果を有し、また、慢性乳房炎牛に対して有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について、図表を参照しながら詳細に説明していく。
【実施例１】
【００１５】
実施例１として、ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１ショット、３日間連続で乳牛に経口投与したものについて、その乳牛の体細胞数の変化を測定した結果を示すことにする。
投与する乳牛は、体細胞数が通常の乳牛より遥かに多い、慢性乳房炎の牛を選定した。
体細胞数の測定は、公式の測定方法で、兵庫県の乳牛検査場で実施した。また、測定は搾乳するときの夕方と朝に行った。
【００１６】
ステビア発酵液の投与方法と体細胞数の経過観察については、次の通りである。
・０日目（投与直前）：乳汁検査（体細胞数）
・１日目：ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したもの経口投与
・２日目：同上
・３日目：同上
・３日目：乳汁検査（体細胞数）
・７日目：乳汁検査（体細胞数）
ここで、ステビア発酵液の投与は、１日目〜３日目の夕方に１ショットずつ行っている（３日間３ショットの連続経口投与口径のみ）以外に、ステビア発酵液の投与は行っていない。
【００１７】
以下の表１に、慢性乳房炎牛（Ａ〜Ｇ）に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（単位：万個）を示す。Ａ〜Ｇの慢性乳房炎牛は、同じ酪農家で、同じ餌で飼育されていた牛である。また、Ａ〜Ｇの慢性乳房炎牛は、５５０〜８００ｋｇの体重の牛である。ここで固体識別とは、牛につけられたユニークな番号で、牛を識別するためのものである。上述の通り、ステビア発酵液の投与は、１日目〜３日目の夕方に１ショットずつ行っている。投与後３日の夕方が最終の３回目のショットを行った後の測定である。
【００１８】
【表１】
【００１９】
上記表１から、Ａ〜Ｇのどの慢性乳房炎牛に対しても、ステビア投与によって体細胞数の減少が確認できる。特に、Ｇ（＃８１）の牛は、もともと体細胞数がそれほど多くない牛であるが、このような牛に対してもステビア投与によって体細胞数の減少が確認できている。図１に、表１の投与直前、投与後３日、投与後７日の夕方と朝の平均値をプロットしたグラフを示す。Ａ〜Ｇの全ての慢性乳房炎牛に対して、劇的に体細胞数の減少が確認できる。参考までに、乳牛検査場の現場の声は、今までに、このように劇的に体細胞が減少したのを確認できたことは無いというものであった。
【００２０】
次に、異なる酪農家の慢性乳房炎牛に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（単位：万個）を下記表２に示す。酪農家が異なれば飼育環境、餌の量・種類も異なる。尚、このＡ酪農家とＢ酪農家は、共に以前に体細胞が多すぎるとして牛乳集配組合若しくは牛乳取引業者からペナルティーを受けた経験がある酪農家である。
【００２１】
【表２】
【００２２】
上記表２から、異なる酪農家に飼育された牛であっても、ステビア投与によって体細胞数の減少が確認できる。すなわち、Ａ酪農家の牛（＃２１１１）では、投与直前とステビア発酵液の３日間の連続投与後に、約１７０万個から４５万個に体細胞数が減少しており、その後、投与を行わない状態でも、投与後７日，１７日と４５万個から減少している。同様に、Ｂ酪農家の牛（＃７６０１）では、投与直前とステビア発酵液の３日間の連続投与後に、約９４０万個から９４万個に体細胞数が極端に減少しており、その後、投与を行わない状態でも、投与後７日，１７日と９４万個から減少している。
【００２３】
次に、各々の酪農家における合乳（バルク乳汁）中の体細胞数の変化を下記表３に示す。バルク乳汁とは、酪農家の工場から出荷される牛乳のことであり、これは酪農家が各工場において、多くの乳牛から採取したものを混ぜ合わせたものである。体細胞数の多い牛や体細胞数の少ない牛など様々であるが、このバルク乳汁中の体細胞数の変化を見ることで、マクロ的に効能の有無を知ることができるのである。
【００２４】
【表３】
【００２５】
上記表３から、各酪農家における合乳（バルク乳汁）中の体細胞数が減少していることが確認できる。すなわち、Ａ酪農家では、バルク乳汁中の体細胞数が投与前の前月７日と２５日が６８万個と８０万個であるのに対し、ステビア発酵液を３日間連続投与した当月７日と２５日では、４４万個と２８万個と減少している。同様に、Ａ酪農家とは異なるＢ酪農家においても、バルク乳汁中の体細胞数が投与前の前月７日と２５日が６１万個と４９万個であるのに対し、ステビア発酵液を３日間連続投与した当月７日と２５日では、４４万個と３５万個と減少している。
【００２６】
以上説明したように、ステビア発酵原液１００ｍｌを水道水で２倍に希釈したものを、牛１頭当たり１日に１ショット、３日間連続で経口投与したものについては、その牛の体細胞数を減少させることができることが理解できよう。
これは、毎日毎日ステビア発酵液を投与されている乳牛には、見られなかった効果である。
【００２７】
尚、ステビア発酵液については、ステビア発酵液を有効成分として含んでいるものでよく、例えば、ステビア発酵液を主原料とし、その他ビタミンや糖分を含むものでも同様に体細胞数を減少させる効能があることを確認できている。
【実施例２】
【００２８】
次に実施例２として、ステビア発酵液の抗菌活性作用を確認したデータを示すこととする。これらのデータは、実施例１のように実際の乳牛に対して試験を行ったものではなく、あくまで試験管で細胞に対して試験を行ったもの（in vitro）データである。
供試薬剤は、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を液体のまま使用することとした。
また、使用の前にｐＨ値の測定も行っており、使用したステビア発酵液（品質レベル：KS-15）のｐＨ値は4.9であった。
供試菌は、北海道のウシ乳房炎より分離された Staphylococcus aureus ST-2株（コアグラーゼVI型、toxin gene C、G、I、T、TSST-1）を用いることとした。菌はハートインフュージョンブイヨンで３７℃、１８時間培養したものを使用している。
ステビア発酵液の各希釈溶液で３０分反応させた。各希釈溶液とは、ステビア発酵液を、２倍（X2）、５倍（X5）、１０倍（X10）、１００倍（X100）、１０００倍（X1000）に水で希釈したものである。反応は、２９０ CFU / mlの菌液と室温で３０分間処理した。
【００２９】
図２は、ステビア各希釈溶液で３０分処理したときの抗菌作用を示したグラフである。
図２の中でコントロールとあるのは、特に何もしなかったもので、ステビア各希釈溶液の抗菌作用との比較用として示したものであり、また、このコントロールとの比較で正規化し、図２の縦軸をとっている。
図２から、２倍、５倍の希釈のものが抗菌活性は強く、希釈されていくほど抗菌活性はコントロールのものに近づいていくことが理解できる。２倍、５倍の希釈が強いのは、ステビア発酵液は抗酸化作用があり、また、ｐＨ値も4.9と高い酸性を示しており、殺菌されたものと考えられる。
また、１０倍、１００倍、１０００倍に水で希釈したものも、図２のグラフから抗菌活性があることが理解できる。これは、ステビア発酵液は抗菌活性であることを示すものである。
【実施例３】
【００３０】
次に実施例３として、ステビア発酵液の免疫活性能を確認したデータを示すこととする。これは、実施例２と同様、in vitro のデータである。
先ず供試薬剤は、実施例２と同様、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を液体のまま、或いは、0.2μｍで濾過したものを使用した。
また供試動物は、SPFのマウスでBALB/cおよびICRのオスを用いた。マウスより脾臓を摘出して脾細胞を調整した。３７℃で３０分、前培養をおこなった後、ステビア発酵液を１０倍（X10）、２０倍（X20）、４０倍（X40）、８０倍（X80）、１６０倍（X160）、３２０倍（X320）に水で希釈した各ステビア希釈溶液を細胞に加えた。ステビア希釈溶液を加えた後、３７℃で２時間培養後に細胞を洗浄した。洗浄後、新しい培養液と細胞増殖能を測定するための試薬を添加した。添加した後に吸光度を計測したものである。ここで、２時間としたのは、ステビアの活性がピークになるのが約２時間であるからである。
【００３１】
図３，図４に、それぞれBALB/c，ICRのマウスに対して、上述のステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
図３のBALB/cのマウスに対する場合は、４０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えたものが、免疫活性能が向上していることがわかる。ここで、コントロールとあるのは、ステビア希釈溶液を加えなかったもので、ｃｏｎＡとＬＰＳは、それぞれＴ細胞とＢ細胞を刺激するものである。
また、図４のICRのマウスに対する場合は、８０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えたものが、コントロールと比較して、免疫活性能が同等、或いは若干向上している。
以上の結果から、８０倍の希釈以上のステビア希釈溶液を加えることで、免疫活性能が向上することが理解できよう。
【００３２】
次に、更に希釈したステビア希釈溶液を加えた後、活性がピークとなる２時間以上、長時間培養させて免疫活性能がどのようになるかを調べた結果を示す。
供試薬剤は、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を0.2μｍで濾過したものを使用した。また供試動物は、SPFのマウスでBALB/cおよびICRのオスを用いた。マウスより脾臓を摘出して脾細胞を調整した。３７℃で３０分、前培養をおこなった後、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を細胞に加えた。各ステビア希釈溶液を加えた後、３７℃で２０時間培養後、細胞を洗浄した。洗浄後、新しい培養液と細胞増殖能を測定するための試薬を添加した。添加した後に吸光度を計測したものである。
【００３３】
図５の（１），（２）に、BALB/c，ICRのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えて、２０時間培養後のデータ結果を示す。
図５の（１）でBALB/cのマウスに対して、５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を加えた細胞全てについて、２０時間後、コントロールとの相対において免疫活性能が大きく向上していることが理解できる。
同様に図５の（２）でICRのマウスに対して、５００倍（X500）、１０００倍（X1000）、２０００倍（X2000）、４０００倍（X4000）、８０００倍（X8000）、１６０００倍（X16000）に水で希釈したステビア希釈溶液を加えた細胞全てについて、２０時間後、コントロールとの相対において免疫活性能が大きく向上していることが理解できる。
【００３４】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、ステビア発酵液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したものを経口投与することであるが、これは、口から飲ませたステビア発酵液は、胃（牛の場合、胃は１００リットル程度の容量がある）で唾液、胃液などと攪拌され、第１の胃から第４の胃まで通り、血中に入るころには、数１０００倍に希釈されていることが想定され、図５に示した結果から、逆に、本発明に係るステビア発酵液の投与方法の妥当性が理解されよう。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明に係るステビア発酵液の投与方法は、抗生物質に代わる体細胞数を減少させる方法として有用であり、また、慢性乳房炎牛に対して改善方法としても有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】慢性乳房炎牛（Ａ〜Ｇ）に対するステビア発酵液の投与前後の体細胞数の変化（表１）の投与直前、投与後３日、投与後７日の夕方と朝の平均値をプロットしたグラフを示している。
【図２】ステビア各希釈溶液で３０分処理したときの抗菌作用を示したグラフを示している。
【図３】BALB/cのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
【図４】ICRのマウスに対して、ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えたデータ結果を示す。
【図５】ステビア発酵液（品質レベル：KS-15）を加えて、２０時間培養後のデータ結果を示したもの。（１）はBALB/cのマウスに対してのデータ結果で、（２）はICRのマウスに対してのデータ結果である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビアの茎部から抽出した発酵濃縮液を有効成分とする家畜用体質改善薬剤の投与方法において、希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法。
【請求項２】
前記所定日数が１〜５日であり、かつ、前記全く投与しない日数が２０〜５０日であることを特徴とする請求項１に記載のステビア発酵液の投与方法。
【請求項３】
前記希釈したステビア発酵液は、ステビア発酵原液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したものであることを特徴とする請求項１又は２に記載のステビア発酵液の投与方法。
【請求項４】
ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法。
【請求項１】
ステビアの茎部から抽出した発酵濃縮液を有効成分とする家畜用体質改善薬剤の投与方法において、希釈したステビア発酵液を所定日数だけ経口投与した後全く投与しない日数を設け（繰り返し単位）、再度所定日数だけ経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法。
【請求項２】
前記所定日数が１〜５日であり、かつ、前記全く投与しない日数が２０〜５０日であることを特徴とする請求項１に記載のステビア発酵液の投与方法。
【請求項３】
前記希釈したステビア発酵液は、ステビア発酵原液５０〜２００ｍｌを水で２〜３倍に希釈したものであることを特徴とする請求項１又は２に記載のステビア発酵液の投与方法。
【請求項４】
ステビア発酵原液１００ｍｌを水で２倍に希釈したものを、家畜１頭当たり１日に１〜２ショット、３日間連続で経口投与し、その後、２０日以上の間隔をあけて、再度３日間連続で経口投与することを繰り返すことを特徴とするステビア発酵液の投与方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００６−３１６０２１（Ｐ２００６−３１６０２１Ａ）
【公開日】平成１８年１１月２４日（２００６．１１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１４２１５５（Ｐ２００５−１４２１５５）
【出願日】平成１７年５月１６日（２００５．５．１６）
【出願人】（５０５１７８１３６）有限会社バイセン (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１１月２４日（２００６．１１．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月１６日（２００５．５．１６）
【出願人】（５０５１７８１３６）有限会社バイセン (1)
【Ｆターム（参考）】
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