タンパク質を選択的に修飾するための組成物と方法
本発明は一般にタンパク質に性質改変基を導入する新規方法に関する。特に、本発明は、リジン残基の誘導体化、並びに改善された薬理特性を有する成長ホルモンの新規コンジュゲート、及びその調製及び治療における使用のための方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質を補助タンパク質及び次の式：
Ｒ１−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｒ２
を有する性質改変基と接触させることを含む、タンパク質の部位選択的修飾方法。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２が更なる修飾に適した基である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１が芳香族又はヘテロ芳香族基を含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１がカルボベンジルオキシ基（ＰｈＣＨ２ＯＣ＝Ｏ）である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ２が更なる修飾に適した基である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
タンパク質がサイトカインである請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項９】
タンパク質が４−ヘリックスバンドルタンパク質のクラスに属する請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
タンパク質がｈＧＨである請求項１から９の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
補助タンパク質がグルタミン残基を修飾する酵素である請求項１から１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
補助タンパク質がトランスグルタミナーゼである請求項１から１１の何れかに記載の方法。
【請求項１３】
トランスグルタミナーゼがストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
トランスグルタミナーゼが、８０％以上の配列相同性を有するストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼ変異体である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
性質改変基が
から選択される請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質を補助タンパク質及び次の式：
Ｒ１−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｒ２
を有する性質改変基と接触させることを含む、成長ホルモンの部位選択的修飾方法。
【請求項１７】
Ｒ１及びＲ２が更なる修飾に適した基である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１が芳香族又はヘテロ芳香族基を含む請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１がカルボベンジルオキシ基（ＰｈＣＨ２ＯＣ＝Ｏ）である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２が更なる修飾に適した基である請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２，アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
成長ホルモンがヒト成長ホルモンである請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
補助タンパク質がトランスグルタミナーゼである請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
トランスグルタミナーゼがストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
トランスグルタミナーゼが、８０％以上の配列相同性を有するストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼ変異体である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
性質改変基が
から選択される請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
ヒト成長ホルモンがリジン残基で修飾される請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
ヒト成長ホルモンがリジン１４５で修飾される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ヒト成長ホルモンがリジン１４５で修飾され、ついでｈＧＨと比較してコンジュゲートのインビボ半減期を延長する延長基に結合させる請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
延長基が親水性ポリマーである請求項１５に記載の方法。
【請求項３３】
延長基がＰＥＧである請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
延長基がアルブミンに可逆的に結合する部分を含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
延長基は脂肪酸残基又は脂肪二酸残基を含む請求項３１に記載の方法。
【請求項１】
タンパク質を補助タンパク質及び次の式：
Ｒ１−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｒ２
を有する性質改変基と接触させることを含む、タンパク質の部位選択的修飾方法。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２が更なる修飾に適した基である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１が芳香族又はヘテロ芳香族基を含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１がカルボベンジルオキシ基（ＰｈＣＨ２ＯＣ＝Ｏ）である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ２が更なる修飾に適した基である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
タンパク質がサイトカインである請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項９】
タンパク質が４−ヘリックスバンドルタンパク質のクラスに属する請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
タンパク質がｈＧＨである請求項１から９の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
補助タンパク質がグルタミン残基を修飾する酵素である請求項１から１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
補助タンパク質がトランスグルタミナーゼである請求項１から１１の何れかに記載の方法。
【請求項１３】
トランスグルタミナーゼがストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
トランスグルタミナーゼが、８０％以上の配列相同性を有するストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼ変異体である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
性質改変基が
から選択される請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質を補助タンパク質及び次の式：
Ｒ１−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｒ２
を有する性質改変基と接触させることを含む、成長ホルモンの部位選択的修飾方法。
【請求項１７】
Ｒ１及びＲ２が更なる修飾に適した基である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１が芳香族又はヘテロ芳香族基を含む請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１がカルボベンジルオキシ基（ＰｈＣＨ２ＯＣ＝Ｏ）である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２が更なる修飾に適した基である請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２、アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ２が、−ＣＨＯ、−ＯＮＨ２、Ａｒ−ＮＨ２，アルキニル、アジド、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨＸ−ＣＨ２Ｙ又は−ＣＨＹ−ＣＨ２Ｘ（ここで、ＸがＯ又はＮであり、ＹがＯである）、アセタール又は異なった潜在アルデヒド、−ＳＨ、Ｚ−ＣＨ２Ｃ＝Ｏ（ここで、ＺがＣｌ、Ｂｒ又はＩである）から選択される官能基を含む基である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
成長ホルモンがヒト成長ホルモンである請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
補助タンパク質がトランスグルタミナーゼである請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
トランスグルタミナーゼがストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
トランスグルタミナーゼが、８０％以上の配列相同性を有するストレプトマイセス・モバレンス由来の微生物トランスグルタミナーゼ変異体である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
性質改変基が
から選択される請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
ヒト成長ホルモンがリジン残基で修飾される請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
ヒト成長ホルモンがリジン１４５で修飾される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ヒト成長ホルモンがリジン１４５で修飾され、ついでｈＧＨと比較してコンジュゲートのインビボ半減期を延長する延長基に結合させる請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
延長基が親水性ポリマーである請求項１５に記載の方法。
【請求項３３】
延長基がＰＥＧである請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
延長基がアルブミンに可逆的に結合する部分を含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
延長基は脂肪酸残基又は脂肪二酸残基を含む請求項３１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１０−５３６９２３（Ｐ２０１０−５３６９２３Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２２３３６（Ｐ２０１０−５２２３３６）
【出願日】平成２０年８月２５日（２００８．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６１０８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２７３６９
【国際公開日】平成２１年３月５日（２００９．３．５）
【出願人】（５９６１１３０９６）ノボ・ノルデイスク・エー／エス (241)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月２５日（２００８．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６１０８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２７３６９
【国際公開日】平成２１年３月５日（２００９．３．５）
【出願人】（５９６１１３０９６）ノボ・ノルデイスク・エー／エス (241)
【Ｆターム（参考）】
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