本発明は、細菌およびウイルス抗原と共に腫瘍抗原および様々な自己抗原が含まれる広く多様な抗原に対するヒトモノクローナル抗体を産生する方法を提供する。同様に、抗体自身、そのような抗体をコードする核酸、そのような抗体を産生する細胞、ならびに感染症および癌などの疾患状態に対する診断アッセイおよび受動免疫のためにそのような抗体を用いる方法も提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、予め決定された抗原に特異的な抗体を分泌する不死化ヒトB細胞を産生する方法：
(a)IgM陽性ヒトB細胞集団を得る工程；
(b)該集団を、
(i)ヒトB細胞を不死化するために、エプスタイン-バーウイルス（EBV）と、および
(ii)免疫グロブリンアイソタイプのIgMからIgGへのクラススイッチを誘導するために、サイトカイン／増殖因子／シグナル伝達物質のカクテルと
接触させる工程；
(c)前記不死化および免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを支持する条件下で細胞を培養する工程。
【請求項２】
以下の工程をさらに含む、請求項1記載の方法：
(d)予め決定された抗原に対する抗体を発現する不死化ヒトB細胞を選択する工程。
【請求項３】
予め決定された抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原、毒素抗原、ウイルスの侵入に関する細胞受容体抗原、細菌の侵入に関する細胞受容体、真菌の侵入に関する細胞受容体、寄生虫の侵入を媒介する細胞受容体、毒素の侵入を媒介する細胞受容体、腫瘍抗原、サイトカイン／ケモカイン／増殖因子抗原、サイトカイン／ケモカイン／増殖因子受容体抗原、炎症を媒介する分子上の抗原、疼痛を媒介する分子上の抗原、組織損傷／障害を媒介する分子上の抗原、活性化分子／リガンド／受容体上の抗原、共刺激分子／リガンド／受容体上の抗原、先天免疫を媒介する分子上の抗原、細胞接着分子上の抗原、細胞接着分子受容体上の抗原、病状に関連する過剰発現した／不十分にグリコシル化された／酸化した／ミスフォールドした／変異した細胞タンパク質（「改変された自己」抗原）上の抗原、細胞アポトーシスを媒介する分子／リガンド／受容体上の抗原、増殖阻害分子上の抗原、H5N1血液凝集素（H5 HA）、癌血管新生分子である胎盤誘発増殖因子（PLGF）、癌および自己免疫関連因子であるインターロイキン-6（IL6）、ブドウ球菌エンテロトキシンB（SEB）、ブドウ球菌エンテロトキシンC2（SEC2）、またはリシンBサブユニットを含む、請求項1記載の方法。
【請求項４】
予め決定された抗原がH5 HA、PLGF、IL6、SEB、SEC2、またはリシンBサブユニットである、請求項3記載の方法。
【請求項５】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項2記載の方法。
【請求項６】
予め決定された抗原がH5 HAである、請求項4記載の方法。
【請求項７】
予め決定された抗原がPLGFである、請求項4記載の方法。
【請求項８】
予め決定された抗原がIL6である、請求項4記載の方法。
【請求項９】
予め決定された抗原がSEBである、請求項4記載の方法。
【請求項１０】
予め決定された抗原がSEC2である、請求項4記載の方法。
【請求項１１】
予め決定された抗原がリシンBサブユニットである、請求項4記載の方法。
【請求項１２】
選択する工程が、不死化B細胞培地の上清に対して実施されるイムノアッセイを含む、請求項2記載の方法。
【請求項１３】
サイトカインカクテルが、B細胞受容体とクロスリンクするもしくはB細胞受容体を活性化する抗IgM F(ab’)₂または他の物質、組換えヒトインターロイキン(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFα、BAFF、および／もしくはB細胞の分化を引き起こす他のサイトカイン、ならびに／または可溶性CD40L、ならびに／またはヒトB細胞に共刺激シグナルを供給する他の物質を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
集団が末梢血、扁桃、骨髄、脾臓、リンパ節、臍帯血、肝臓、アフェレーシス技法、および／またはバフィーコートから得られる、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
工程（d）の不死化ヒトB細胞から重鎖および／または軽鎖全体をコードする核酸を単離する工程をさらに含む、請求項2記載の方法。
【請求項１６】
工程（d）の不死化ヒトB細胞から重鎖および／または軽鎖の抗原結合領域をコードする核酸を単離する工程をさらに含む、請求項2記載の方法。
【請求項１７】
前記核酸を、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域をコードする核酸へとクローニングする工程をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
工程（b）が、EBVを濃縮する工程、感染の間に遠心分離する工程、または両方をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１９】
工程（c）の後に、ヒトB細胞集団を凍結する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２０】
工程（b）（ii）の後に、工程（b）（ii）を約0〜96時間実施する、請求項1記載の方法。
【請求項２１】
工程（b）（ii）の後に、工程（b）（ii）を約16〜20時間実施する、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
集団の約50%〜99%がEBV感染によって不死化される、請求項1記載の方法。
【請求項２３】
集団の約95%〜99%がEBV感染によって不死化される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
工程（d）が、感染の後1〜4週間行われる、請求項2記載の方法。
【請求項２５】
工程（d）が、感染の後2〜3週間行われる、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
工程（d）が、保存された凍結不死化B細胞を解凍した後、および／または不死化B細胞由来の保存された凍結培地上清を解凍した後に行われる、請求項2記載の方法。
【請求項２７】
B細胞が抗原で処理されていない、請求項1記載の方法。
【請求項２８】
B細胞が抗原で処理された、請求項1記載の方法。
【請求項２９】
炭疽菌毒素、エボラウイルス抗原、リシンA鎖、A鎖、ペスト菌（Yersinia pestis）抗原、マールブルグウイルス抗原、MDRブドウ球菌（Staphylococcus）抗原、およびコレラ毒素と免疫学的に結合するIgGを発現する、ハイブリドーマではない不死化ヒトB細胞。
【請求項３０】
EBVで不死化されている、請求項29記載の不死化ヒトB細胞。
【請求項３１】
請求項29記載の細胞によって作製された、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項３２】
H5N1血液凝集素（H5 HA）に対して特異性を有する、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項３３】
以下を含む、請求項32記載の単離された抗体：
（a）SEQ ID NO：22、25、または36に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および
（b）SEQ ID NO：16、19、または32に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
【請求項３４】
以下を含む、請求項32記載の単離された抗体：
（a）SEQ ID NO：23、26、または37の核酸配列によってコードされている重鎖可変領域；および
（b）SEQ ID NO：17、20、または33の核酸配列によってコードされている軽鎖可変領域。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３５Ｃ】

【図３５Ｄ】

【図３５Ｅ】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５Ａ】

【図５５Ｂ】

【図５５Ｃ】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９Ａ】

【図５９Ｂ】

【図５９Ｃ】

【図５９Ｄ】

【図５９Ｅ】

【図５９Ｆ】

【公表番号】特表２０１０−５３５４７４（Ｐ２０１０−５３５４７４Ａ）
【公表日】平成２２年１１月２５日（２０１０．１１．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１９２７３（Ｐ２０１０−５１９２７３）
【出願日】平成２０年８月４日（２００８．８．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７２１２４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２０９２３
【国際公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【出願人】（５０６２１７３２４）エムユーエスシー　ファウンデーション　フォー　リサーチ　ディベロップメント (3)
【Ｆターム（参考）】